JP2608345B2 - ペプチドの溶解および反応媒質、これを使用するペプチドの合成方法 - Google Patents
ペプチドの溶解および反応媒質、これを使用するペプチドの合成方法Info
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
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Description
【０００１】本発明はペプチド合成に使用する溶解およ
び反応媒質、ならびに、この媒質中でのペプチド合成方
法に関する。ペプチドの液相合成方法は多数あるが、次
の点で共通している。ペプチド合成の終りに分離できる
保護基で、アミノ酸の側鎖の官能基を保護してもよく、
アミノ酸縮合の後に分離できる保護基で、アミノ酸の官
能性（Ｎα）アミノ基を保護し、その保護されたアミノ
酸のカルボキシル基を活性化し、それを、Ｃ−末端カル
ボキシル基が保護され、Ｎ−末端アミノ基が、遊離して
いるペプチドまたはアミノ酸と縮合させ、すべてのアミ
ノ酸を縮合させた後に、保護基をすべて分離してペプチ
ドを得る。
び反応媒質、ならびに、この媒質中でのペプチド合成方
法に関する。ペプチドの液相合成方法は多数あるが、次
の点で共通している。ペプチド合成の終りに分離できる
保護基で、アミノ酸の側鎖の官能基を保護してもよく、
アミノ酸縮合の後に分離できる保護基で、アミノ酸の官
能性（Ｎα）アミノ基を保護し、その保護されたアミノ
酸のカルボキシル基を活性化し、それを、Ｃ−末端カル
ボキシル基が保護され、Ｎ−末端アミノ基が、遊離して
いるペプチドまたはアミノ酸と縮合させ、すべてのアミ
ノ酸を縮合させた後に、保護基をすべて分離してペプチ
ドを得る。
【０００２】縮合反応は、たとえばMerrifield合成によ
って不均一相または均一液相において縮合させることが
できる。一般に、ペプチド合成には、アミノ酸のＣ−末
端カルボキシル基をエステルの形で保護することが必要
である。ペプチドの均一相合成の場合は、下記のエステ
ルを選ぶことができる。メチル、ベンジルまたはｔ−ブ
チルのエスル；有機溶媒に可溶なポリマーのエステル、
たとえばM.MutterらのJulius Liebigs Annolen der Che
mie 1975, pp.901〜915に記載のポリエーテルのエステ
ル；および本出願人のフランス特許出願89 06700に特許
請求したＧＰＣエステルはさらに良好である。
って不均一相または均一液相において縮合させることが
できる。一般に、ペプチド合成には、アミノ酸のＣ−末
端カルボキシル基をエステルの形で保護することが必要
である。ペプチドの均一相合成の場合は、下記のエステ
ルを選ぶことができる。メチル、ベンジルまたはｔ−ブ
チルのエスル；有機溶媒に可溶なポリマーのエステル、
たとえばM.MutterらのJulius Liebigs Annolen der Che
mie 1975, pp.901〜915に記載のポリエーテルのエステ
ル；および本出願人のフランス特許出願89 06700に特許
請求したＧＰＣエステルはさらに良好である。
【０００３】ペプチドの不均一相合成の場合は、有機溶
剤に不溶なポリマーのエステルが特に好ましい。たとえ
ば次のポリマーを挙げることができる。R.B.Merrifield
のJ.A.C.S. p.2149, 2154(1963) によって導入されたス
チレンジビニルベンゼンコポリマー；E.Atherton, R.C.
SheppardのJ.A.C.S, 97, p.6584, 6585(1975）のポリジ
メチルアクリルアミド−co−Boc −β−Ala −Ｎ′−ア
クロイリル−ヘキサメチレンジアミン；Tregear らの米
国特許3 700 609 およびChem.Abst.71p 508241(1969)；
およびセルロース。
剤に不溶なポリマーのエステルが特に好ましい。たとえ
ば次のポリマーを挙げることができる。R.B.Merrifield
のJ.A.C.S. p.2149, 2154(1963) によって導入されたス
チレンジビニルベンゼンコポリマー；E.Atherton, R.C.
SheppardのJ.A.C.S, 97, p.6584, 6585(1975）のポリジ
メチルアクリルアミド−co−Boc −β−Ala −Ｎ′−ア
クロイリル−ヘキサメチレンジアミン；Tregear らの米
国特許3 700 609 およびChem.Abst.71p 508241(1969)；
およびセルロース。
【０００４】ペプチドの不均一相合成は、撹拌機つき反
応器、反応カラム、または他の技術、たとえば膜の使用
によって実施することができる。最終生成物の収率およ
び純度は、各工程の収率に依存する。これは、一方にお
いて損失の相乗的増加、他方において副生物から所望の
生成物を分離する問題にもとづく。この問題はアミノ酸
の員数が増加すると、合成過程において大きな問題とな
る。
応器、反応カラム、または他の技術、たとえば膜の使用
によって実施することができる。最終生成物の収率およ
び純度は、各工程の収率に依存する。これは、一方にお
いて損失の相乗的増加、他方において副生物から所望の
生成物を分離する問題にもとづく。この問題はアミノ酸
の員数が増加すると、合成過程において大きな問題とな
る。
【０００５】その他、均一液相媒質において縮合を行う
特殊な場合に、これらすべての方法は、同一の欠点を伴
なう：中間的に保護されたアミノ酸またはペプチドの溶
解度は小さいので、体積的生産性が低い。この欠点は次
の多くの著者によって指摘されている、M.Narita, K.Is
hikawa, J.Y.Chenおよび Y.Kim. Int.J.Peptide Protei
n Ros,24 580(1984), E.Gross およびJ.Meienhofer, Th
e Peptides；Analysis, Synthesis, Biology, Academic
Press, 1, 45,(1979)。M.MutterおよびE.Bayer, The P
eptides ；Analysis, Synthesis, Biology, Academic P
ress, ２，288(1980）。Fuhrhop およびPenzcin, Organ
ic Synthesis, Verlag Chemie, 4.1.2. Peptides, 219
(1984ａ）体積単位についての生産性は、水不溶性溶剤
たとえばクロロホルムまたは酢酸エチルを使用するとき
に、特に低い。たとえばＮ−（２−ニトロ−フェニルス
ルフェニル）−αベンジル−フェニルアラニル−Ｎωニ
トロ−Ｌ−アルギニンの４−ニトロベンジルエステル
は、クロロホルムを溶剤として１ｌにつき 0.016モルを
合成する：E.Wunsch, Methoden der Organischem Chemi
e, XV-2, Synthese von Peptiden, Georg Chieme Verla
g,108(1974 ）。
特殊な場合に、これらすべての方法は、同一の欠点を伴
なう：中間的に保護されたアミノ酸またはペプチドの溶
解度は小さいので、体積的生産性が低い。この欠点は次
の多くの著者によって指摘されている、M.Narita, K.Is
hikawa, J.Y.Chenおよび Y.Kim. Int.J.Peptide Protei
n Ros,24 580(1984), E.Gross およびJ.Meienhofer, Th
e Peptides；Analysis, Synthesis, Biology, Academic
Press, 1, 45,(1979)。M.MutterおよびE.Bayer, The P
eptides ；Analysis, Synthesis, Biology, Academic P
ress, ２，288(1980）。Fuhrhop およびPenzcin, Organ
ic Synthesis, Verlag Chemie, 4.1.2. Peptides, 219
(1984ａ）体積単位についての生産性は、水不溶性溶剤
たとえばクロロホルムまたは酢酸エチルを使用するとき
に、特に低い。たとえばＮ−（２−ニトロ−フェニルス
ルフェニル）−αベンジル−フェニルアラニル−Ｎωニ
トロ−Ｌ−アルギニンの４−ニトロベンジルエステル
は、クロロホルムを溶剤として１ｌにつき 0.016モルを
合成する：E.Wunsch, Methoden der Organischem Chemi
e, XV-2, Synthese von Peptiden, Georg Chieme Verla
g,108(1974 ）。
【０００６】またベンジルオキシカルボニル−Ｌ−プロ
ピル−Ｌ−チロシンのメチルエステルは、酢酸エチルを
溶剤として１ｌにつき 0.050モルを合成する：M.Bodans
ky, A.Bodansky, The Practice of Peptide Synthesis,
Springer-Verlag, 140(1984）。水溶性溶剤は特に不便
であって、ほとんど利益がない。
ピル−Ｌ−チロシンのメチルエステルは、酢酸エチルを
溶剤として１ｌにつき 0.050モルを合成する：M.Bodans
ky, A.Bodansky, The Practice of Peptide Synthesis,
Springer-Verlag, 140(1984）。水溶性溶剤は特に不便
であって、ほとんど利益がない。
【０００７】実際、高濃度の媒質中でペプチド合成を行
うときには、水洗によって直接精製することができない
が、精製は導入された過剰の反応剤および副反応生成物
を除去するために必要である。そのため、水溶性溶剤を
通常蒸留し、次に水不溶性溶剤で置換えて洗浄する。こ
れは精製工程において大量の溶剤を必要とするので、さ
きの問題と同じことになる。しかも反応物質の処理は、
蒸留および再溶解という操作が加わるのでさらに複雑と
なる。
うときには、水洗によって直接精製することができない
が、精製は導入された過剰の反応剤および副反応生成物
を除去するために必要である。そのため、水溶性溶剤を
通常蒸留し、次に水不溶性溶剤で置換えて洗浄する。こ
れは精製工程において大量の溶剤を必要とするので、さ
きの問題と同じことになる。しかも反応物質の処理は、
蒸留および再溶解という操作が加わるのでさらに複雑と
なる。
【０００８】それ故テトラヒドロフラン中、２モル／ｌ
で調製したジペプチドZ-Cys(S-BZb)-Tyr OEtは、水洗前
に0.１モル／ｌとして酢酸エチル中に移す：M.Bodansk
y, The Practice of Peptide Synthesis,Springer-Verl
ag,129(1984)。保護されたジペプチドZ-Lys(Z)-Gly-OEt
は、アセトニトリル中、0.13／ｌで合成し、最初の溶剤
を酢酸エチル中、0.05モル／ｌに置換えた後精製した
（同上文献150, 1984)。同様にZ-Ala-Tyr-OCH3 3は、ジ
メチルホルムアミド中、0.３モル／ｌで合成し、水洗精
製の前に酢酸エチル中に0.１モル／ｌとして移した（同
上文献148, 1984)。
で調製したジペプチドZ-Cys(S-BZb)-Tyr OEtは、水洗前
に0.１モル／ｌとして酢酸エチル中に移す：M.Bodansk
y, The Practice of Peptide Synthesis,Springer-Verl
ag,129(1984)。保護されたジペプチドZ-Lys(Z)-Gly-OEt
は、アセトニトリル中、0.13／ｌで合成し、最初の溶剤
を酢酸エチル中、0.05モル／ｌに置換えた後精製した
（同上文献150, 1984)。同様にZ-Ala-Tyr-OCH3 3は、ジ
メチルホルムアミド中、0.３モル／ｌで合成し、水洗精
製の前に酢酸エチル中に0.１モル／ｌとして移した（同
上文献148, 1984)。
【０００９】一般に極性を有する水溶性溶剤の使用は、
産業衛生上の問題(DMSO, HMPT)および化学的選択計画の
問題で、さらに不利を伴なう。一般に、極性溶剤は、活
性Ｎを保護されているアミノ酸のラセミ化に実際に好都
合である：D.S.Kemp, Peptides, Analysis, Synthesis,
Biology；１，354-355, 1979 。それ故、水不溶性の有
機溶剤中でペプチド中間体の濃度が高く、かつ工業的生
産の要求を満たす溶液を得ることは、いまだ解決されて
いない。
産業衛生上の問題(DMSO, HMPT)および化学的選択計画の
問題で、さらに不利を伴なう。一般に、極性溶剤は、活
性Ｎを保護されているアミノ酸のラセミ化に実際に好都
合である：D.S.Kemp, Peptides, Analysis, Synthesis,
Biology；１，354-355, 1979 。それ故、水不溶性の有
機溶剤中でペプチド中間体の濃度が高く、かつ工業的生
産の要求を満たす溶液を得ることは、いまだ解決されて
いない。
【００１０】本発明の目的は、ペプチド縮合収率を向上
させる反応媒質を提供することである。また本発明の他
の目的は、ペプチド、一般に２〜50個のアミノ酸、特に
３〜20個のアミノ酸からなるペプチドの合成および精製
を容易に行う反応媒質を見出すことである。さらに他の
目的は、高い濃度、たとえば少なくとも0.１Ｍ、一般に
0.２Ｍで均一媒質中でペプチドを合成できる反応媒質を
提供することである。
させる反応媒質を提供することである。また本発明の他
の目的は、ペプチド、一般に２〜50個のアミノ酸、特に
３〜20個のアミノ酸からなるペプチドの合成および精製
を容易に行う反応媒質を見出すことである。さらに他の
目的は、高い濃度、たとえば少なくとも0.１Ｍ、一般に
0.２Ｍで均一媒質中でペプチドを合成できる反応媒質を
提供することである。
【００１１】これらの目的、および後に明かになる目的
は水不溶性溶剤の群から選ぶ希釈剤ＡとフェノールＢを
含む、ヘプチドの合成および精製に使用する溶解および
反応媒質によって達成することができる。フェノールＢ
の量は希釈剤Ａの少なくとも１／200 であることが好ま
しい。この上限は厳密なものではないので、希釈剤Ａな
しに、純粋または混合物のフェノールＢを使用すること
も、次の条件において、本発明の範囲に含まれる：フェ
ノールＢは、融点が高くとも50℃（本明細書において、
特記しない限りは数字のゼロは重要な意味を有しな
い）；フェノールＢは、減圧することもできる蒸留によ
って反応生成物から分離することがてきる；フェノール
Ｂは、いかなる割合でも水と混合しない。
は水不溶性溶剤の群から選ぶ希釈剤ＡとフェノールＢを
含む、ヘプチドの合成および精製に使用する溶解および
反応媒質によって達成することができる。フェノールＢ
の量は希釈剤Ａの少なくとも１／200 であることが好ま
しい。この上限は厳密なものではないので、希釈剤Ａな
しに、純粋または混合物のフェノールＢを使用すること
も、次の条件において、本発明の範囲に含まれる：フェ
ノールＢは、融点が高くとも50℃（本明細書において、
特記しない限りは数字のゼロは重要な意味を有しな
い）；フェノールＢは、減圧することもできる蒸留によ
って反応生成物から分離することがてきる；フェノール
Ｂは、いかなる割合でも水と混合しない。
【００１２】フェノールＢは、水洗によって副生物の除
去を妨げる安定な乳濁液を形成しない。ハロゲン化フェ
ノール、特にジクロロフェノールが有利であり、モノク
ロロフェノールが好ましく、なおたとえば低分子量のア
ルコイルフェノールも上記条件に適合する。
去を妨げる安定な乳濁液を形成しない。ハロゲン化フェ
ノール、特にジクロロフェノールが有利であり、モノク
ロロフェノールが好ましく、なおたとえば低分子量のア
ルコイルフェノールも上記条件に適合する。
【００１３】単独で使用することもできるが、上記条件
を満足するフェノールは、希釈剤Ａと混合して使用でき
る有用なフェノール類を含むことができる。しかし、１
つの希釈剤Ａと１つのフェノールＢを使用することが好
ましい。フェノールＢ対希釈剤Ａの重量比は、１／200
〜１、１／20〜１／２が好ましい。この重量比は、狭義
のフェノール(C6H5OH)、または分子量がこれと著しく相
違しないフェノール類にも適用される。
を満足するフェノールは、希釈剤Ａと混合して使用でき
る有用なフェノール類を含むことができる。しかし、１
つの希釈剤Ａと１つのフェノールＢを使用することが好
ましい。フェノールＢ対希釈剤Ａの重量比は、１／200
〜１、１／20〜１／２が好ましい。この重量比は、狭義
のフェノール(C6H5OH)、または分子量がこれと著しく相
違しないフェノール類にも適用される。
【００１４】高分子量のフェノール類には、モル／ｌの
濃度を少なくとも５・10− ２とし、0.１〜２Ｍが有利で
あり、0.５〜1.５Ｍが好ましい。希釈剤Ａおよびフェノ
ールＢは、すべての割合で混合しないときは、フェノー
ル類含量の上限は、２つの限度、すなわち上記限度およ
び溶解度の限度より低い。
濃度を少なくとも５・10− ２とし、0.１〜２Ｍが有利で
あり、0.５〜1.５Ｍが好ましい。希釈剤Ａおよびフェノ
ールＢは、すべての割合で混合しないときは、フェノー
ル類含量の上限は、２つの限度、すなわち上記限度およ
び溶解度の限度より低い。
【００１５】ここで、フェノールＢは、フェノール類お
よびその混合物を含むものとする。希釈剤Ａは、フェノ
ール(C6H5OH)の重量の少なくとも１％、好ましくは少な
くとも２％を溶解するのに十分な極性を有し、かつ水
と、すべての割合では混合しない十分な疎水性を有する
有機溶剤である。水は希釈剤Ａを多くとも10重量％、さ
らに多くとも１重量％を溶解しないことが好ましい。こ
れは第３の溶剤としてフェノールＢが存在するときも同
様である。
よびその混合物を含むものとする。希釈剤Ａは、フェノ
ール(C6H5OH)の重量の少なくとも１％、好ましくは少な
くとも２％を溶解するのに十分な極性を有し、かつ水
と、すべての割合では混合しない十分な疎水性を有する
有機溶剤である。水は希釈剤Ａを多くとも10重量％、さ
らに多くとも１重量％を溶解しないことが好ましい。こ
れは第３の溶剤としてフェノールＢが存在するときも同
様である。
【００１６】希釈剤Ａは石油留分を含む混合物でもよ
い。勿論、操作条件において、希釈剤Ａはフェノール類
およびペプチド合成に使用する反応剤に対して不活性で
あることが必要である。好ましい希釈剤は、芳香族誘導
体、エーテル、エステルおよびハロゲン化溶剤からなる
群から選ぶ。
い。勿論、操作条件において、希釈剤Ａはフェノール類
およびペプチド合成に使用する反応剤に対して不活性で
あることが必要である。好ましい希釈剤は、芳香族誘導
体、エーテル、エステルおよびハロゲン化溶剤からなる
群から選ぶ。
【００１７】これらの希釈剤としては、ハロゲン化脂肪
族誘導体としてジクロロメタン、１，２−ジクロロエタ
ン、１，１，１−トリクロロエタン；芳香族誘導体とし
てトルエン；ハロゲン化芳香族誘導体としてクロロベン
ゼン；エステルとして酢酸エチル、酢酸イソプロピル；
エーテルとしてｔ−ブチル−メチルエーテルおよびアニ
ソールを挙げることができる。
族誘導体としてジクロロメタン、１，２−ジクロロエタ
ン、１，１，１−トリクロロエタン；芳香族誘導体とし
てトルエン；ハロゲン化芳香族誘導体としてクロロベン
ゼン；エステルとして酢酸エチル、酢酸イソプロピル；
エーテルとしてｔ−ブチル−メチルエーテルおよびアニ
ソールを挙げることができる。
【００１８】工業的経済の理由から、希釈剤Ａは大気圧
で蒸留可能か、または一次または二次の真空で蒸留でき
ることが好ましい。一般にフェノールＢは次の一般式
（Ｉ）で示される化合物およびそれらの混合物の群から
選ぶ。 (R１)n -Ar-O-H （Ｉ） 式中、Ａr は単環もしくは多環の複素環または非複素環
の芳香族基を表し、置換基Ｒ1 は同一または相違してい
てもよく、次の原子または基を表す：ハロゲン、好まし
くはふっ素、塩素、臭素；基-Z-R2(Ｚは一重結合または
酸素を表し、Ｒ2 は水素、ヒドロキシ化またはモノもし
くはポリハロゲン化されていてもよい多くとも８個の炭
素原子を含むアリール基またはアルコイル基を表す）ｎ
は、ゼロまたは多くとも芳香族核の置換可能な位置の数
に等しい整数である。
で蒸留可能か、または一次または二次の真空で蒸留でき
ることが好ましい。一般にフェノールＢは次の一般式
（Ｉ）で示される化合物およびそれらの混合物の群から
選ぶ。 (R１)n -Ar-O-H （Ｉ） 式中、Ａr は単環もしくは多環の複素環または非複素環
の芳香族基を表し、置換基Ｒ1 は同一または相違してい
てもよく、次の原子または基を表す：ハロゲン、好まし
くはふっ素、塩素、臭素；基-Z-R2(Ｚは一重結合または
酸素を表し、Ｒ2 は水素、ヒドロキシ化またはモノもし
くはポリハロゲン化されていてもよい多くとも８個の炭
素原子を含むアリール基またはアルコイル基を表す）ｎ
は、ゼロまたは多くとも芳香族核の置換可能な位置の数
に等しい整数である。
【００１９】アルキル基は、le Dictionaire de la Chi
mie Duval Presses Scientifiques Internationale Par
is VIe, (1959)で定義されており、多くとも６個の炭素
原子を有する直鎖もしくは分枝鎖の脂肪族残基またはア
リール脂肪族残基であることができる。置換可能な位置
の数は、当業者によって周知の単純な方法によって容易
に知ることができる。 たとえば、Ａr ＝フェニル＜５、 Ａr ＝ピリジル＜４、 Ａr ＝ナフチル＜７、 Ａr ＝キノイル＜６。
mie Duval Presses Scientifiques Internationale Par
is VIe, (1959)で定義されており、多くとも６個の炭素
原子を有する直鎖もしくは分枝鎖の脂肪族残基またはア
リール脂肪族残基であることができる。置換可能な位置
の数は、当業者によって周知の単純な方法によって容易
に知ることができる。 たとえば、Ａr ＝フェニル＜５、 Ａr ＝ピリジル＜４、 Ａr ＝ナフチル＜７、 Ａr ＝キノイル＜６。
【００２０】フェノールＢの炭素原子は、多くとも30個
が有利であり、多くとも20個が好ましい。官能性フェノ
ールの隣接位置が置換されていないか、または障害を与
えない基で置換されていることが望ましい。障害を与え
ない基としては、三次または二次の炭素によって、隣接
位置の基に、結合されている基と考えることができる。
が有利であり、多くとも20個が好ましい。官能性フェノ
ールの隣接位置が置換されていないか、または障害を与
えない基で置換されていることが望ましい。障害を与え
ない基としては、三次または二次の炭素によって、隣接
位置の基に、結合されている基と考えることができる。
【００２１】単環式化合物は、効果および価格の点でも
っとも好ましい化合物であり、六員環（ピリミジルまた
はフェニル環）を有するものが好ましい。またZ-R2は、
水酸基を３回、好ましくは２回より多く表すことができ
ない。式（Ｉ）において基Ｒは、次の基または原子から
選ぶことが有利である。 メチル、エチル、プロピル、ブチル、 トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、 メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、 フェニル、ヒドロキシフェニルおよびArOH、 フェノキシ、ヒドロキシフェノキシ、 フッ素、塩素、臭素。
っとも好ましい化合物であり、六員環（ピリミジルまた
はフェニル環）を有するものが好ましい。またZ-R2は、
水酸基を３回、好ましくは２回より多く表すことができ
ない。式（Ｉ）において基Ｒは、次の基または原子から
選ぶことが有利である。 メチル、エチル、プロピル、ブチル、 トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、 メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、 フェニル、ヒドロキシフェニルおよびArOH、 フェノキシ、ヒドロキシフェノキシ、 フッ素、塩素、臭素。
【００２２】フェノールの分子量を高めないために、式
（Ｉ）のｎは、多くとも５とし、多くとも３とすること
が好ましい。良好な結果を与えるフェノールとして、次
のフェノール類を挙げることができる。 一置換されていてもよいヒドロキシピリジン、 一置換されていてもよいヒドロキシキノリン、 モノハロゲノフェノール、好ましくはモノロロフェノー
ル、ポリハロゲノフェノール、好ましくはポリフルオロ
フェノール、炭素原子１〜４個のアルキル基、炭素原子
１〜４個のアルコキシ基、炭素原子１〜２のペルフルオ
ロアルキル基、２，２，２−トリフルオロエチル基で一
置換または二置換されたフェノール、ジフェノール、 狭義のフェノール、 一置換または二置換されていてもよいナフトール。
（Ｉ）のｎは、多くとも５とし、多くとも３とすること
が好ましい。良好な結果を与えるフェノールとして、次
のフェノール類を挙げることができる。 一置換されていてもよいヒドロキシピリジン、 一置換されていてもよいヒドロキシキノリン、 モノハロゲノフェノール、好ましくはモノロロフェノー
ル、ポリハロゲノフェノール、好ましくはポリフルオロ
フェノール、炭素原子１〜４個のアルキル基、炭素原子
１〜４個のアルコキシ基、炭素原子１〜２のペルフルオ
ロアルキル基、２，２，２−トリフルオロエチル基で一
置換または二置換されたフェノール、ジフェノール、 狭義のフェノール、 一置換または二置換されていてもよいナフトール。
【００２３】本発明の媒質は、保護されていてもよいア
ミノ酸を少なくとも0.05Ｍ濃度で溶解することができ
る。アミノ酸はＣ−末端カルボキシル基又はＮ−末端ア
ミノ基上で保護されることができる。後者の場合、たと
えばアスパラギン酸の場合には、側鎖のＣ−末端カルボ
キシル基上で活性化することもできる。アミノ酸は天然
または合成であることができる。本発明の媒質は、保護
されているペプチドと同様に、保護されていないペプチ
ド（HCl, Pro-Gly-NH2；HCl, His-Trp；２HCl, Arg-Pr
o)も溶解して、合成を行うことができる。
ミノ酸を少なくとも0.05Ｍ濃度で溶解することができ
る。アミノ酸はＣ−末端カルボキシル基又はＮ−末端ア
ミノ基上で保護されることができる。後者の場合、たと
えばアスパラギン酸の場合には、側鎖のＣ−末端カルボ
キシル基上で活性化することもできる。アミノ酸は天然
または合成であることができる。本発明の媒質は、保護
されているペプチドと同様に、保護されていないペプチ
ド（HCl, Pro-Gly-NH2；HCl, His-Trp；２HCl, Arg-Pr
o)も溶解して、合成を行うことができる。
【００２４】本発明の媒質は、アミノ酸、ペプチド、お
よび保護化または活性化されている反応剤を同時に溶解
できることによって、その場でアミノ酸を保護化または
活性化することができる。そのように、本発明の媒質
は、フェノールＢおよび希釈剤Ａの他に、アミノ酸、ペ
プチド、および／または保護化および／もしくは活性化
する反応剤も、同時にまたは順次導入して含むときに、
反応剤の作用をすることができる。
よび保護化または活性化されている反応剤を同時に溶解
できることによって、その場でアミノ酸を保護化または
活性化することができる。そのように、本発明の媒質
は、フェノールＢおよび希釈剤Ａの他に、アミノ酸、ペ
プチド、および／または保護化および／もしくは活性化
する反応剤も、同時にまたは順次導入して含むときに、
反応剤の作用をすることができる。
【００２５】ペプチドは、単位のアミノ酸を含めて、Ｃ
−末端カルボキシル基又はＮ−末端アミノ基を保護され
ていてもよい。後者の場合は酸はＣ−末端カルボキシル
基上で活性化されていることができる。勿論、アミノ酸
の官能基は、合成において目的とする官能性のＣ−末端
カルボキシル基又はＮ−末端アミノ基の他でも、もし必
要であれば当業者に慣用の技術によって同様に保護する
ことができる。
−末端カルボキシル基又はＮ−末端アミノ基を保護され
ていてもよい。後者の場合は酸はＣ−末端カルボキシル
基上で活性化されていることができる。勿論、アミノ酸
の官能基は、合成において目的とする官能性のＣ−末端
カルボキシル基又はＮ−末端アミノ基の他でも、もし必
要であれば当業者に慣用の技術によって同様に保護する
ことができる。
【００２６】本発明の媒質は、有機相におけるペプチド
の溶解度を特に増加させることができる。一般に、フェ
ノール性添加剤の存在なしに有機希釈剤Ａ中のペプチド
の溶解度をベースとして、溶解度を良好に変えることが
できる。またこの媒質は、ペプチド合成の多様な工程に
おいて、良好な体積的収率を達成することができる。特
に縮合工程における生産性を向上させる。
の溶解度を特に増加させることができる。一般に、フェ
ノール性添加剤の存在なしに有機希釈剤Ａ中のペプチド
の溶解度をベースとして、溶解度を良好に変えることが
できる。またこの媒質は、ペプチド合成の多様な工程に
おいて、良好な体積的収率を達成することができる。特
に縮合工程における生産性を向上させる。
【００２７】本発明の媒質の多くの利点のうち、特にＮ
−末端アミノ基上で保護され、Ｃ−末端カルボキシル基
上で活性化されているアミノ酸またはペプチドと、Ｃ−
末端カルボキシル基上で保護されていないアミノ酸また
はペプチドとの縮合がこの媒質中で反応させるとき、極
めて容易であることに注意したい。これは、約20〜50ア
ミノ酸残基のオリゴペプチドの合成に極めて有用であ
る。これは本発明の媒質が同時または順次に導入する成
分として次のものを含み、反応剤の作用をするときに著
しい。
−末端アミノ基上で保護され、Ｃ−末端カルボキシル基
上で活性化されているアミノ酸またはペプチドと、Ｃ−
末端カルボキシル基上で保護されていないアミノ酸また
はペプチドとの縮合がこの媒質中で反応させるとき、極
めて容易であることに注意したい。これは、約20〜50ア
ミノ酸残基のオリゴペプチドの合成に極めて有用であ
る。これは本発明の媒質が同時または順次に導入する成
分として次のものを含み、反応剤の作用をするときに著
しい。
【００２８】ａ）水に混合しない溶剤の群から選ぶ希釈
剤Ａ； ｂ）フェノールＢ； ｃ）Ｎ−末端アミノ基及びＣ−末端カルボキシル基の両
方が保護されていないアミノ酸を１〜50個、好ましくは
１〜20個含むオリゴペプチド。 フェノールＢの量は、希釈剤Ａの少なくとも１／200 と
することが好ましい。
剤Ａ； ｂ）フェノールＢ； ｃ）Ｎ−末端アミノ基及びＣ−末端カルボキシル基の両
方が保護されていないアミノ酸を１〜50個、好ましくは
１〜20個含むオリゴペプチド。 フェノールＢの量は、希釈剤Ａの少なくとも１／200 と
することが好ましい。
【００２９】この上限は厳密なものではない。フェノー
ルＢ対希釈剤Ａの重量比は、１／200 〜１が有利であ
り、１／20〜１／２が好ましい。上記重量比は狭義のフ
ェノール自身にも、また分子量がC6H5OHと比べて大きく
は違わないフェノール類についても適用される。分子量
の大きいフェノールについて、モル／ｌで表す濃度は、
少なくとも５〜10-2Ｍとし、0.１〜２Ｍが有利であり、
0.５〜1.５Ｍが好ましい。
ルＢ対希釈剤Ａの重量比は、１／200 〜１が有利であ
り、１／20〜１／２が好ましい。上記重量比は狭義のフ
ェノール自身にも、また分子量がC6H5OHと比べて大きく
は違わないフェノール類についても適用される。分子量
の大きいフェノールについて、モル／ｌで表す濃度は、
少なくとも５〜10-2Ｍとし、0.１〜２Ｍが有利であり、
0.５〜1.５Ｍが好ましい。
【００３０】希釈剤ＡとフェノールＢとがすべての割合
では混合しないときフェノールの含量の上限は、上記の
限度および溶解限度より低い。オリゴペプチドの含量
は、ここでは縮合していないアミノ酸の場合を含み、そ
の含量は少なくとも10-2Ｍ、好ましくは0.１Ｍとする。
より高い濃度は溶解限度に対応する。当業者が媒質中の
溶解度を不十分と判断するならば、オリゴペプチドの懸
濁液を使用できることを理解されるであろう。
では混合しないときフェノールの含量の上限は、上記の
限度および溶解限度より低い。オリゴペプチドの含量
は、ここでは縮合していないアミノ酸の場合を含み、そ
の含量は少なくとも10-2Ｍ、好ましくは0.１Ｍとする。
より高い濃度は溶解限度に対応する。当業者が媒質中の
溶解度を不十分と判断するならば、オリゴペプチドの懸
濁液を使用できることを理解されるであろう。
【００３１】また本発明は、保護されていてもよいペプ
チドを液体媒質中で合成する方法に関し、Ｃ−末端カル
ボキシル基が保護されていてもよい最初のアミノ酸また
はペプチドを原料とし、これにＣ−末端カルボキシル基
が活性化され、Ｎ−末端アミノ基が保護されているアミ
ノ酸を加え、これらの反応剤を本発明の媒質に溶解す
る。
チドを液体媒質中で合成する方法に関し、Ｃ−末端カル
ボキシル基が保護されていてもよい最初のアミノ酸また
はペプチドを原料とし、これにＣ−末端カルボキシル基
が活性化され、Ｎ−末端アミノ基が保護されているアミ
ノ酸を加え、これらの反応剤を本発明の媒質に溶解す
る。
【００３２】同様に、本発明は保護されていてもよいペ
プチドを液体媒質中で合成する方法を目的とし、最初の
アミノ酸またはペプチドを原料として、本発明に係る媒
質中に溶解し、Ｃ−末端カルボキシル基上で活性化さ
れ、Ｎ−末端アミノ基上で保護されている他のペプチド
を、本発明に係る媒質中に溶解して縮合させる。たとえ
ば官能性アミン基は、カーバメート基によって、または
β−ジカルボニル化合物との反応によって、保護され
る。
プチドを液体媒質中で合成する方法を目的とし、最初の
アミノ酸またはペプチドを原料として、本発明に係る媒
質中に溶解し、Ｃ−末端カルボキシル基上で活性化さ
れ、Ｎ−末端アミノ基上で保護されている他のペプチド
を、本発明に係る媒質中に溶解して縮合させる。たとえ
ば官能性アミン基は、カーバメート基によって、または
β−ジカルボニル化合物との反応によって、保護され
る。
【００３３】Ｎ−末端アミノ基が保護された反応剤のＣ
−末端カルボキシル基は有機酸または無機酸の塩化物、
クロロぎ酸アルキル、カルボジイミド、またはこれらの
カボニルジイミダゾールによって活性化されたエステル
またはアシルイミダゾールによって活性化される。Ｎ−
末端アミノ基が保護されたアミノ酸またはペプチドを、
最初のアミノ酸またはペプチドと縮合させた後に、その
Ｎ−末端アミノ基は、どの方法でも遊離させることがで
きるが、加水分解、または酸もしくは塩基による分解、
または光分解によって行うことが有利である。
−末端カルボキシル基は有機酸または無機酸の塩化物、
クロロぎ酸アルキル、カルボジイミド、またはこれらの
カボニルジイミダゾールによって活性化されたエステル
またはアシルイミダゾールによって活性化される。Ｎ−
末端アミノ基が保護されたアミノ酸またはペプチドを、
最初のアミノ酸またはペプチドと縮合させた後に、その
Ｎ−末端アミノ基は、どの方法でも遊離させることがで
きるが、加水分解、または酸もしくは塩基による分解、
または光分解によって行うことが有利である。
【００３４】Ｃ−末端カルボキシル基が保護された最初
のアミノ酸またはペプチドは、エステル化またはアミド
化によって保護することが好ましい。一般にこれを反応
媒質中に導入し、次にＣ−末端カルボキシル基またはＮ
−末端アミノ基が保護されたアミノ酸またはペプチドを
加える。反応剤の添加順序は限定しない。反応が終る
と、酸性、塩基性または中性溶液で水洗して副生物およ
び過剰の反応剤を有機相から除去する。次にＮ−末端ア
ミノ基を遊離する。最後にＣ−末端カルボキシル基が活
性化され、Ｎ−末端アミノ基が保護された新しいアミノ
酸または新しいペプチドを導入する。
のアミノ酸またはペプチドは、エステル化またはアミド
化によって保護することが好ましい。一般にこれを反応
媒質中に導入し、次にＣ−末端カルボキシル基またはＮ
−末端アミノ基が保護されたアミノ酸またはペプチドを
加える。反応剤の添加順序は限定しない。反応が終る
と、酸性、塩基性または中性溶液で水洗して副生物およ
び過剰の反応剤を有機相から除去する。次にＮ−末端ア
ミノ基を遊離する。最後にＣ−末端カルボキシル基が活
性化され、Ｎ−末端アミノ基が保護された新しいアミノ
酸または新しいペプチドを導入する。
【００３５】驚くべきことに、この媒質は、アミノ酸と
ペプチドの反応性を向上させ、縮合反応速度を著しく改
良する。この方法の重要な利点は、濃厚な有機相から、
過剰の反応剤および縮合副生物を単なる水洗によって除
去できることであり、これはフェノールの乳濁化防止に
よって容易に行うことができ、これらは本発明の研究中
に達成することができた。過剰の反応剤は、たとえばＣ
−末端カルボキシル基上で活性化されＮ−末端アミノ基
上で保護されたアミノ酸またはペプチド、あるいはＣ−
末端カルボキシル基上で保護され、Ｎ−末端アミノ基上
で活性化されたアミノ酸またはペプチド、さらに縮合促
進触媒たとえばヒドロキシベンゾトリアゾール、イミダ
ゾール、Ｎ−ヒドロキシこはく酸アミドなどである。
ペプチドの反応性を向上させ、縮合反応速度を著しく改
良する。この方法の重要な利点は、濃厚な有機相から、
過剰の反応剤および縮合副生物を単なる水洗によって除
去できることであり、これはフェノールの乳濁化防止に
よって容易に行うことができ、これらは本発明の研究中
に達成することができた。過剰の反応剤は、たとえばＣ
−末端カルボキシル基上で活性化されＮ−末端アミノ基
上で保護されたアミノ酸またはペプチド、あるいはＣ−
末端カルボキシル基上で保護され、Ｎ−末端アミノ基上
で活性化されたアミノ酸またはペプチド、さらに縮合促
進触媒たとえばヒドロキシベンゾトリアゾール、イミダ
ゾール、Ｎ−ヒドロキシこはく酸アミドなどである。
【００３６】本発明の媒質は、保護基を分離する工程で
生産性を向上することができる。なおたとえばｔ−ブチ
ルオキシカルボニルのように酸に官能性を有する基を、
通常の反応剤、たとえばトリフルオロ酢酸または塩酸に
よって分離することができ、また加水分解ができる基、
たとえばベンジルオキシカルボニル、ベンジルのエーテ
ルもしくはエステル、またはアルギニンの側鎖のグアニ
ジソ官能基を保護するニトロ基を分離することができ
る。
生産性を向上することができる。なおたとえばｔ−ブチ
ルオキシカルボニルのように酸に官能性を有する基を、
通常の反応剤、たとえばトリフルオロ酢酸または塩酸に
よって分離することができ、また加水分解ができる基、
たとえばベンジルオキシカルボニル、ベンジルのエーテ
ルもしくはエステル、またはアルギニンの側鎖のグアニ
ジソ官能基を保護するニトロ基を分離することができ
る。
【００３７】この媒質は塩基遊離基、たとえばスルホフ
ルオレニル−メチル−オキシカルボニルを、通常使用さ
れる反応剤たとえばジエチルアミンまたはピペリジンに
よって分離することができる。また光分解可能な保護基
の分離もできる。さらに電気化学的還元によって保護基
を分離することもできる。この方法の重要な利点は、均
一相において、単純な操作で分離工程から触媒を除去で
きることである。カーボンに吸着されたパラジウムのよ
うな加水分解触媒は濾過によって除去されるが、酸性ま
たは塩基性の触媒は水洗によって除去できる。ペプチド
またはペプチド中間体は濃厚な有機溶液として残る。
ルオレニル−メチル−オキシカルボニルを、通常使用さ
れる反応剤たとえばジエチルアミンまたはピペリジンに
よって分離することができる。また光分解可能な保護基
の分離もできる。さらに電気化学的還元によって保護基
を分離することもできる。この方法の重要な利点は、均
一相において、単純な操作で分離工程から触媒を除去で
きることである。カーボンに吸着されたパラジウムのよ
うな加水分解触媒は濾過によって除去されるが、酸性ま
たは塩基性の触媒は水洗によって除去できる。ペプチド
またはペプチド中間体は濃厚な有機溶液として残る。
【００３８】この溶解方法の他の利点としては、ペプチ
ド合成に必要なすべての操作に適合しており、縮合の多
様な工程を直結連結することができ、またペプチドを分
離しないでも溶剤を変えずに水洗によって保護基の分離
および精製を行うことができる。本発明の方法は、合成
を反復して行うことができるので、自動化した形態で有
利に実施することができる。
ド合成に必要なすべての操作に適合しており、縮合の多
様な工程を直結連結することができ、またペプチドを分
離しないでも溶剤を変えずに水洗によって保護基の分離
および精製を行うことができる。本発明の方法は、合成
を反復して行うことができるので、自動化した形態で有
利に実施することができる。
【００３９】この方法は有機溶剤に余り溶解しないペプ
チド、たとえばグリシル、アルギニル、グルタミニル、
アスパラギニル、セリニル、トレオニルおよびプロリニ
ルの基を含むペプチドの合成に特に有利である。この明
細書で目的としないパラメータについても、本発明の方
法は、通常の条件で達成することができる。この合成に
よって生成したペプチドは医薬、ワクチン、農業用成長
剤または植物防疫剤の合成に使用することができる。次
に実施例によって本発明を説明するが、これは本発明を
限定するものではない。
チド、たとえばグリシル、アルギニル、グルタミニル、
アスパラギニル、セリニル、トレオニルおよびプロリニ
ルの基を含むペプチドの合成に特に有利である。この明
細書で目的としないパラメータについても、本発明の方
法は、通常の条件で達成することができる。この合成に
よって生成したペプチドは医薬、ワクチン、農業用成長
剤または植物防疫剤の合成に使用することができる。次
に実施例によって本発明を説明するが、これは本発明を
限定するものではない。
【００４０】溶解試験の原型 ペプチド中間体の25℃の溶解度を次のように測定した。
精確に評量したペプチド中間体をパイレックス管内に入
れた。試験すべき溶剤またはその混合物を精密にピペッ
トで導入し、ペプチド重量対溶剤体積の比を８ｇ／ 100
cm3 とした。管をスクリューストッパで閉じ、Heidolp
h, Top-Mix 型撹拌器に載せ、最高速度で６０秒間振動
させた。
精確に評量したペプチド中間体をパイレックス管内に入
れた。試験すべき溶剤またはその混合物を精密にピペッ
トで導入し、ペプチド重量対溶剤体積の比を８ｇ／ 100
cm3 とした。管をスクリューストッパで閉じ、Heidolp
h, Top-Mix 型撹拌器に載せ、最高速度で６０秒間振動
させた。
【００４１】固体が完全に溶解する場合は、溶解度が８
ｇ／ 100cm3 であり、溶解しない場合は、溶剤を２倍量
として上記操作を反復する。順次４回希釈しても、完全
に溶解しない場合は、固体の量を減らしてを測定を反復
する。与えられた溶剤中の溶解度が0.05ｇ／ 100cm3 よ
り小さい場合は、40℃に加熱し、かつ付加的な撹拌を４
分間行っても、結果が変らないことを確めた。 記；溶剤／添加剤の混合物の組成は重量比で表す。
ｇ／ 100cm3 であり、溶解しない場合は、溶剤を２倍量
として上記操作を反復する。順次４回希釈しても、完全
に溶解しない場合は、固体の量を減らしてを測定を反復
する。与えられた溶剤中の溶解度が0.05ｇ／ 100cm3 よ
り小さい場合は、40℃に加熱し、かつ付加的な撹拌を４
分間行っても、結果が変らないことを確めた。 記；溶剤／添加剤の混合物の組成は重量比で表す。
【００４２】多様なペプチドの溶解 例１ Ｌ−セリニル−Ｌ−チロシン、メチルエステル
塩酸塩(HCl, Ser-Tyr-OCH3） 次の溶剤中の溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：８＞ｓ＞
４ｇ＞ 100cm3
塩酸塩(HCl, Ser-Tyr-OCH3） 次の溶剤中の溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：８＞ｓ＞
４ｇ＞ 100cm3
【００４３】例２ Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−セリニ
ル−Ｌ−チロシン メチルエステル トリフルオロ酢酸
塩(CF3COOH, Trp-Ser-Try-OCH3） 例１と同様にして次の溶剤中の溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：８＞ｓ＞
４ｇ＞ 100cm3
ル−Ｌ−チロシン メチルエステル トリフルオロ酢酸
塩(CF3COOH, Trp-Ser-Try-OCH3） 例１と同様にして次の溶剤中の溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：８＞ｓ＞
４ｇ＞ 100cm3
【００４４】例３ Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−セリニ
ル−Ｌ−チロシン メチルエステル(Trp-Ser-Tyr-OCH3) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＞８ｇ
／ 100cm3 ジクロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混
合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジメトキシフェノールの４／
１混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジメチルフェノールの４／１
混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジクロロフェノールの４／１
混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２−メトキシフェノールの４／１混合
物：ｓ＞１６ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／３−トリフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２，３，４，５，６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 酢酸エチル：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 酢酸エチル：フェノールの９／１混合物：ｓ＝８ｇ／ 1
00cm3
ル−Ｌ−チロシン メチルエステル(Trp-Ser-Tyr-OCH3) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＞８ｇ
／ 100cm3 ジクロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混
合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジメトキシフェノールの４／
１混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジメチルフェノールの４／１
混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジクロロフェノールの４／１
混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２−メトキシフェノールの４／１混合
物：ｓ＞１６ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／３−トリフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２，３，４，５，６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物：ｓ＞８ｇ／ 100cm3 酢酸エチル：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 酢酸エチル：フェノールの９／１混合物：ｓ＝８ｇ／ 1
00cm3
【００４５】例４ Ｌ−ヒスチジニル−Ｌ−トリプトフ
ァン 塩酸塩(HCl, His Trp) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＝２ｇ
／ 100cm3
ァン 塩酸塩(HCl, His Trp) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＝２ｇ
／ 100cm3
【００４６】例５ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ
−ピログルタニル−Ｌ−ヒスチジン(Z-p Glu-His) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：８＞ｓ＞
４ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／１混合
物：２＞ｓ＞１ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物ｓ＝0.３ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／３−トリフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：８＞ｓ＞４ｇ／ 100cm3 ２−クロロフェノール：８＞ｓ＞４ｇ／ 100cm3 ペンタフルオロフェノール／ジクロロメタンの４／１混
合物：８＞ｓ＞４ｇ／ 100cm3
−ピログルタニル−Ｌ−ヒスチジン(Z-p Glu-His) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：８＞ｓ＞
４ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／１混合
物：２＞ｓ＞１ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物ｓ＝0.３ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／３−トリフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：８＞ｓ＞４ｇ／ 100cm3 ２−クロロフェノール：８＞ｓ＞４ｇ／ 100cm3 ペンタフルオロフェノール／ジクロロメタンの４／１混
合物：８＞ｓ＞４ｇ／ 100cm3
【００４７】例６ Ｌ−アルギニル−Ｌ−プロリン 二
塩酸塩（２HCl, Arg-Pro) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＝２ｇ
／ 100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの１／１混合
物：２＞ｓ＞１ｇ／ 100cm3
塩酸塩（２HCl, Arg-Pro) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＝２ｇ
／ 100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの１／１混合
物：２＞ｓ＞１ｇ／ 100cm3
【００４８】例７ Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ
−プロリル−グリシンアミド塩酸塩(HCl, Leu-Arg-Pro-
Gly-NH2) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／１混合
物：ｓ＝４ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＝４ｇ
／ 100cm3 ジクロロメタン／３−トリフルオロメチルフェノールの
４／１ 混合物：ｓ＝４ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの２／１混合
物： ２＞ｓ＞１ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，３，４，５，６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物：４＞ｓ＞２ｇ／100cm3 ２−クロロフェノール：４＞ｓ＞２ｇ／100cm3 ジクロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混
合物 ：１＞ｓ＞0.５／100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物 ：ｓ＝１ｇ／100cm3 比較のために、本発明でない添加剤のジメチルホルムア
ミドを試験した。 ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの４／１混合
物： ｓ＜0.５／100cm3
−プロリル−グリシンアミド塩酸塩(HCl, Leu-Arg-Pro-
Gly-NH2) 例１と同様にして溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／１混合
物：ｓ＝４ｇ／ 100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＝４ｇ
／ 100cm3 ジクロロメタン／３−トリフルオロメチルフェノールの
４／１ 混合物：ｓ＝４ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの２／１混合
物： ２＞ｓ＞１ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，３，４，５，６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物：４＞ｓ＞２ｇ／100cm3 ２−クロロフェノール：４＞ｓ＞２ｇ／100cm3 ジクロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混
合物 ：１＞ｓ＞0.５／100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物 ：ｓ＝１ｇ／100cm3 比較のために、本発明でない添加剤のジメチルホルムア
ミドを試験した。 ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの４／１混合
物： ｓ＜0.５／100cm3
【００４９】例８ Ｌ−プロリル−グリシンアミド塩酸
塩(HCl ,Pro-Gly-NH2) 例１と同様に溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＞16ｇ
／100cm3 ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／１混合
物： ８＞ｓ＞４ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの２／１混合
物： ２＞ｓ＞１ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：４＞ｓ＞２ｇ／100cm3 比較のために、本発明でない添加剤のジメチルホルムア
ミドを試験した。 ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの４／１混合
物： ｓ＜0.５ｇ／100cm3
塩(HCl ,Pro-Gly-NH2) 例１と同様に溶解度ｓを測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＞16ｇ
／100cm3 ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／１混合
物： ８＞ｓ＞４ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの２／１混合
物： ２＞ｓ＞１ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：４＞ｓ＞２ｇ／100cm3 比較のために、本発明でない添加剤のジメチルホルムア
ミドを試験した。 ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの４／１混合
物： ｓ＜0.５ｇ／100cm3
【００５０】例９ Ｎ−ε−トリフルオロアセチル−Ｌ
−リシル−Ｌ−プロリン(Lys(TFA)-Pro) 例１と同様にして溶解度を測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 酢酸エチル：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＞20ｇ
／100cm3 ジクロロメタン／４−ｔＰブチルフェノールの４／１混
合物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジメトキシフェノールの４／
１混合物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジメチルフェノールの４／１
混合物： ｓ＝８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジクロロフェノールの４／１
混合物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−メトキシフェノールの４／１混合
物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／３−トリフルオロメチルフェノールの
４／１混合物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの４／１混合
物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，３，４，５，６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物：ｓ＞８ｇ／100cm3 酢酸エチル／フェノールの９／１混合物ｓ＝８ｇ／100c
m3
−リシル−Ｌ−プロリン(Lys(TFA)-Pro) 例１と同様にして溶解度を測定した。 ジクロロメタン：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 酢酸エチル：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＞20ｇ
／100cm3 ジクロロメタン／４−ｔＰブチルフェノールの４／１混
合物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジメトキシフェノールの４／
１混合物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジメチルフェノールの４／１
混合物： ｓ＝８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，６−ジクロロフェノールの４／１
混合物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−メトキシフェノールの４／１混合
物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／３−トリフルオロメチルフェノールの
４／１混合物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの４／１混合
物： ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２，３，４，５，６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物：ｓ＞８ｇ／100cm3 酢酸エチル／フェノールの９／１混合物ｓ＝８ｇ／100c
m3
【００５１】例10 Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−
ペンタグリシンメチルエステル(Boc-Gly-Gly-Gly-Gly-G
ly-OCH3)：(Boc Gly5 OCH3) ジクロロメタン中の溶解度は、Boc-Gly5-OCH3 飽和溶液
として、外部標準を使用してHPLCにより測定した。
ペンタグリシンメチルエステル(Boc-Gly-Gly-Gly-Gly-G
ly-OCH3)：(Boc Gly5 OCH3) ジクロロメタン中の溶解度は、Boc-Gly5-OCH3 飽和溶液
として、外部標準を使用してHPLCにより測定した。
【００５２】他の溶解度は例１と同様にして測定した。 ジクロロメタン：ｓ＝0.33ｇ／100cm3 ジクロロメタン／フェノールの20／１混合物： ｓ＝0.５ｇ／100cm3 ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物： ｓ＝４ｇ／100cm3 アニソール：ｓ＜0.05ｇ／100cm3 アニソール／フェノールの４／１混合物： ｓ＝４ｇ／100cm3 ２−クロロフェノール：ｓ＞８ｇ／100cm3 ジクロロメタン／２−クロロフェノールの４／１混合物 ：２＞ｓ＞１ｇ／100cm3 ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／１混合
物：４＞ｓ＞２ｇ／100cm3
物：４＞ｓ＞２ｇ／100cm3
【００５３】例11 Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−
ペンタグリシン ベンジルエステル(Boc-Gly-Gly-Gly-G
ly-Gly-O-CH2-Ph) ジクロロメタン中の溶解度は、飽和溶液の上澄液にいき
外部標準を使用してHPLCにより測定した。他の溶解度は
例１と同様にして測定した。 ジクロロメタン：ｓ＝0.07ｇ／100cm3 ジクロロメタン／フェノールの９／１混合物： ｓ＞５ｇ／100cm3 比較のために、本発明でない添加剤を試験した。 ジクロロメタン／トリフルオロエタノールの９／１混合
物：ｓ＜２ｇ／100cm3* ジクロロメタン／２−オクタノールの９／１混合物： ｓ＜２ｇ／100cm3* ジクロロメタン／ピバル酸の９／１混合物： ｓ＜２ｇ／100cm3* ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの９／１混合
物：ｓ＜２ｇ／100cm3* LiCl飽和ジクロロメタン：ｓ＜２ｇ／100cm3* *２ｇ／100cm3以下の濃度は試験しなかった。
ペンタグリシン ベンジルエステル(Boc-Gly-Gly-Gly-G
ly-Gly-O-CH2-Ph) ジクロロメタン中の溶解度は、飽和溶液の上澄液にいき
外部標準を使用してHPLCにより測定した。他の溶解度は
例１と同様にして測定した。 ジクロロメタン：ｓ＝0.07ｇ／100cm3 ジクロロメタン／フェノールの９／１混合物： ｓ＞５ｇ／100cm3 比較のために、本発明でない添加剤を試験した。 ジクロロメタン／トリフルオロエタノールの９／１混合
物：ｓ＜２ｇ／100cm3* ジクロロメタン／２−オクタノールの９／１混合物： ｓ＜２ｇ／100cm3* ジクロロメタン／ピバル酸の９／１混合物： ｓ＜２ｇ／100cm3* ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの９／１混合
物：ｓ＜２ｇ／100cm3* LiCl飽和ジクロロメタン：ｓ＜２ｇ／100cm3* *２ｇ／100cm3以下の濃度は試験しなかった。
【００５４】例12 Ｎ−ベンジルオキシ−カルボニル−
β−ベンジル−Ｌ−アスパルチル−１−アミノシクロプ
ロパンカルボン酸 メチルエステル(Z-Asp-(OB2l)-Acc-
OCH3) 例１と同様にして溶解度を測定した。 ｔ−ブチルメチルエーテル：ｓ＜0.５ｇ／100cm3 ｔ−ブチルメチルエーテル／４−ｔ−ブチルフェノール
の６／１混合物：ｓ＞1.２ｇ／100cm3 クロロベンゼン：ｓ＜1.５ｇ／100cm3 クロロベンゼン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混
合物：ｓ＞20ｇ／100cm3 アニソール：ｓ＞2.５ｇ／100cm3 アニソール／４−ｔ−ブチルフェノールの４：１混合
物：ｓ＞25ｇ／100cm3 酢酸エチル：ｓ＝2.５ｇ／100cm3 酢酸エチル／２−ヒドロキシピリジン飽和溶液 ：10＞ｓ＞５ｇ／100cm3
β−ベンジル−Ｌ−アスパルチル−１−アミノシクロプ
ロパンカルボン酸 メチルエステル(Z-Asp-(OB2l)-Acc-
OCH3) 例１と同様にして溶解度を測定した。 ｔ−ブチルメチルエーテル：ｓ＜0.５ｇ／100cm3 ｔ−ブチルメチルエーテル／４−ｔ−ブチルフェノール
の６／１混合物：ｓ＞1.２ｇ／100cm3 クロロベンゼン：ｓ＜1.５ｇ／100cm3 クロロベンゼン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混
合物：ｓ＞20ｇ／100cm3 アニソール：ｓ＞2.５ｇ／100cm3 アニソール／４−ｔ−ブチルフェノールの４：１混合
物：ｓ＞25ｇ／100cm3 酢酸エチル：ｓ＝2.５ｇ／100cm3 酢酸エチル／２−ヒドロキシピリジン飽和溶液 ：10＞ｓ＞５ｇ／100cm3
【００５５】ペプチドの合成 例13 Ｌ−アスパルチル−１−アミノシクロプロパン−
カルボン酸プロピルエステル(Asp-Acc-Opr) 記：このジペプチドエステルは、C.Mapelli, M.Gray Ne
wton, C.E.Ringold およびC.H.Stammer のInt.G.Peptid
e Protein Res.30, 498-510(1987) によれば、蔗糖の 2
00倍の甘味を有する。
カルボン酸プロピルエステル(Asp-Acc-Opr) 記：このジペプチドエステルは、C.Mapelli, M.Gray Ne
wton, C.E.Ringold およびC.H.Stammer のInt.G.Peptid
e Protein Res.30, 498-510(1987) によれば、蔗糖の 2
00倍の甘味を有する。
【００５６】工程１ CH２Cl２(320ｇ）中濃度0.66モル
／ｌでの縮合100cm3の三口パイレックス反応器を乾燥窒
素流で不活性とし、17℃の水で冷却し、アニソール37.5
cm3 の撹拌床に、下記を順次導入した。 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−ベンジル−アスパ
ラギン酸（25ミリモル）、Ｎ−エチル−Ｎ′−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（30ミリ
モル）およびヒドロキシピリジン（42.5ミリモル）。
／ｌでの縮合100cm3の三口パイレックス反応器を乾燥窒
素流で不活性とし、17℃の水で冷却し、アニソール37.5
cm3 の撹拌床に、下記を順次導入した。 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−ベンジル−アスパ
ラギン酸（25ミリモル）、Ｎ−エチル−Ｎ′−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（30ミリ
モル）およびヒドロキシピリジン（42.5ミリモル）。
【００５７】懸濁液は急速に溶液となり、15分の終りに
交互に下記を溶液に加えた。 １−アミノシクロプロパンカルボン酸プロピルエステル
（30ミリモル）および４−ｔ−ブチルフェノール（５
ｇ） １夜撹拌した後30℃において反応混合物を２Ｎ塩酸25cm
3 で洗浄し、無機物を除去した水10cm3 およびNaCl飽和
塩水３cm3 からなる水溶液13cm3 で３回洗浄した。水相
は併せてアニソール2.5cm3で向流抽出した。
交互に下記を溶液に加えた。 １−アミノシクロプロパンカルボン酸プロピルエステル
（30ミリモル）および４−ｔ−ブチルフェノール（５
ｇ） １夜撹拌した後30℃において反応混合物を２Ｎ塩酸25cm
3 で洗浄し、無機物を除去した水10cm3 およびNaCl飽和
塩水３cm3 からなる水溶液13cm3 で３回洗浄した。水相
は併せてアニソール2.5cm3で向流抽出した。
【００５８】工程２ 縮合工程に連続して保護基の加水
分解 有機相40cm3 を、予め蒸留水100cm3、およびカーボンに
３％吸着させたパラジウム2.８ｇを入れ、窒素で不活性
とした200cm3の三口パイレックス反応器に移した。混合
物を55℃とし、常圧の水素気流を４時間通した。
分解 有機相40cm3 を、予め蒸留水100cm3、およびカーボンに
３％吸着させたパラジウム2.８ｇを入れ、窒素で不活性
とした200cm3の三口パイレックス反応器に移した。混合
物を55℃とし、常圧の水素気流を４時間通した。
【００５９】工程３ ペプチドの分離 反応混合物をミリポア５Ａのフィルタで濾過し、触媒は
フィルタ上で35℃の水10cm3 で２回洗浄した。有機相は
沈降分離して除去した。液相を酢酸エチル30cm3 で３回
洗浄した後、真空蒸留して、残渣60ｇを得た。これは自
然に結晶した。
フィルタ上で35℃の水10cm3 で２回洗浄した。有機相は
沈降分離して除去した。液相を酢酸エチル30cm3 で３回
洗浄した後、真空蒸留して、残渣60ｇを得た。これは自
然に結晶した。
【００６０】懸濁液にアセトン240cm3を加えて、多孔率
No.４のガラスフィルタで濾過した。固体はアセトンで
洗浄し、4.41ｇの定量になるまで乾燥した。濾液は乾燥
するまで濃縮し、水11cm3 に溶解した。アセトン66cm3
を加えて第２の固体を分離し、これは真空乾燥後1.52ｇ
であった。
No.４のガラスフィルタで濾過した。固体はアセトンで
洗浄し、4.41ｇの定量になるまで乾燥した。濾液は乾燥
するまで濃縮し、水11cm3 に溶解した。アセトン66cm3
を加えて第２の固体を分離し、これは真空乾燥後1.52ｇ
であった。
【００６１】結果 Ｌ−アスパルチル−１−アミノ−シクロプロパン−カル
ボン酸プロピルエステル−水和物を収率８６％で得、こ
れは融点 179℃の白色固体であった。
ボン酸プロピルエステル−水和物を収率８６％で得、こ
れは融点 179℃の白色固体であった。
【００６２】DMSO中の溶液として、RMN1H スペクトルは
360Mhzを示した。 元素分析：Ｃ11，Ｈ18，Ｎ2.05，1H2O 計算値：Ｃ47.83 ，Ｈ7.3 ，Ｎ10.14 ，Ｏ34.76 実験値：Ｃ47.69 ，Ｈ7.1 ，Ｎ10.01 ，Ｏ34.81 含水量(Karl Fischer)：6.48％ 電位差計測定 官能性アミン基： 102％ 官能性酸基：98％
360Mhzを示した。 元素分析：Ｃ11，Ｈ18，Ｎ2.05，1H2O 計算値：Ｃ47.83 ，Ｈ7.3 ，Ｎ10.14 ，Ｏ34.76 実験値：Ｃ47.69 ，Ｈ7.1 ，Ｎ10.01 ，Ｏ34.81 含水量(Karl Fischer)：6.48％ 電位差計測定 官能性アミン基： 102％ 官能性酸基：98％
【００６３】例14 比較のために例13の試験において、４−ｔ−ブチルフェ
ノールの添加および２−ヒドロキシピリジンの添加を省
いたが、急速に撹拌不能な反応混合物となった。
ノールの添加および２−ヒドロキシピリジンの添加を省
いたが、急速に撹拌不能な反応混合物となった。
【００６４】液−液抽出によるペプチドの精製 例15 グリシル−グリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ
−ロイシン ベンジルエステル（Gly-Gly-Phe-Leu-OB
2l) このテトラペプチドを合成した後に、水洗して精製する
ために、このテトラペプチドのジクロロメタンと水との
間の分配を次に試験した。
−ロイシン ベンジルエステル（Gly-Gly-Phe-Leu-OB
2l) このテトラペプチドを合成した後に、水洗して精製する
ために、このテトラペプチドのジクロロメタンと水との
間の分配を次に試験した。
【００６５】ジクロロメタン12cm3 中のGly-Gly-Phe-Le
u-OBzl塩酸塩0.９ミリモルの溶液を、２Ｎ KHCO3水溶液
３cm3 の存在で強く撹拌した。この混合物は乳濁液とな
り、多数日間安定であった。フェノールの存在で比較試
験を行った。
u-OBzl塩酸塩0.９ミリモルの溶液を、２Ｎ KHCO3水溶液
３cm3 の存在で強く撹拌した。この混合物は乳濁液とな
り、多数日間安定であった。フェノールの存在で比較試
験を行った。
【００６６】例16 フェノール3.９ｇを有機溶媒に加え
た後に、例15と同様に分配試験を行った。同様に撹拌し
た後に２つの脂質液相を得、少なくとも15分間これを沈
降分離した。HPLC分析の結果、水相は使用したテトラペ
プチドの僅か0.４％を含んだ。
た後に、例15と同様に分配試験を行った。同様に撹拌し
た後に２つの脂質液相を得、少なくとも15分間これを沈
降分離した。HPLC分析の結果、水相は使用したテトラペ
プチドの僅か0.４％を含んだ。
【００６７】例17 Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−
Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンベンジルエステル
（Boc-Phe-Val-OBzl） 50cm3 のパイレックス反応器に順次下記を常温で導入し
た。Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルア
ラニンの２−ヒドロキシピリジンエステル3.６ミリモ
ル、1.23ｇ、 バリン ベンジルエステル塩酸塩３ミリモル、0.73ｇ、 ジクロロメタン15cm3 、次に撹拌しながらＮ−メチルモ
ルホリン３ミリモル。 常温で68時間後に、反復混合物を、順次希H2SO4(95p PH
2)５cm3 、水５cm3 、次に２Ｎ KHCO3水溶液５cm3 を加
え、安定な乳濁液を形成した。これに対して、反応溶剤
としてジクロロメタン／フェノールの９／１混合物を使
用したときは、すべての洗浄は困難なく行われ、どの場
合も沈降分離は急速に行われた。
Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンベンジルエステル
（Boc-Phe-Val-OBzl） 50cm3 のパイレックス反応器に順次下記を常温で導入し
た。Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルア
ラニンの２−ヒドロキシピリジンエステル3.６ミリモ
ル、1.23ｇ、 バリン ベンジルエステル塩酸塩３ミリモル、0.73ｇ、 ジクロロメタン15cm3 、次に撹拌しながらＮ−メチルモ
ルホリン３ミリモル。 常温で68時間後に、反復混合物を、順次希H2SO4(95p PH
2)５cm3 、水５cm3 、次に２Ｎ KHCO3水溶液５cm3 を加
え、安定な乳濁液を形成した。これに対して、反応溶剤
としてジクロロメタン／フェノールの９／１混合物を使
用したときは、すべての洗浄は困難なく行われ、どの場
合も沈降分離は急速に行われた。
【００６８】例18 目的 ペプチド縮合工程におけるフェノールの影響を検
討する。 検討した縮合 Boc-Phe-O-Py+HCl,Val-OBzl+NMM CH2Cl2（フェノールありおよびなし） Boc-Phe-Val OBzl+HCl,NMM 操作 縮合は還流塩化メチレン中で、Ｎ−ｔ−ブチルオキシ−
Ｌ−フェニルアラニン−２−ヒドロキシピリジンエステ
ル（Boc-Phe-Opy)1.２当量と、バリンベンジルエステル
（Val OBzl）塩酸塩１当量とを、Ｎメチルモルホリン
（NMM)の存在で接触させた。
討する。 検討した縮合 Boc-Phe-O-Py+HCl,Val-OBzl+NMM CH2Cl2（フェノールありおよびなし） Boc-Phe-Val OBzl+HCl,NMM 操作 縮合は還流塩化メチレン中で、Ｎ−ｔ−ブチルオキシ−
Ｌ−フェニルアラニン−２−ヒドロキシピリジンエステ
ル（Boc-Phe-Opy)1.２当量と、バリンベンジルエステル
（Val OBzl）塩酸塩１当量とを、Ｎメチルモルホリン
（NMM)の存在で接触させた。
【００６９】Val OBzlの消失および上記ペプチドの出現
が認められた。相関関係は測定の正確の限度で完全であ
った。表１にペプチドの縮合収率を示す。これによれば
活性化および反応速度、Val OBzl残留率に対する溶剤の
顕著な影響がわかる。２つの試験は完全な均一相媒体で
行った。１つはフェノールC6H5OHの10重量％の塩化メチ
レン中で、他はフェノールなしの塩化メチレン中で縮合
させる。
が認められた。相関関係は測定の正確の限度で完全であ
った。表１にペプチドの縮合収率を示す。これによれば
活性化および反応速度、Val OBzl残留率に対する溶剤の
顕著な影響がわかる。２つの試験は完全な均一相媒体で
行った。１つはフェノールC6H5OHの10重量％の塩化メチ
レン中で、他はフェノールなしの塩化メチレン中で縮合
させる。
【００７０】特に反応速度に顕著な差があり、ペプチド
の収率90％は、塩化メチレン単独では２時間を要しフェ
ノール10重量％を含む塩化メチレン中では20分で達成し
た。
の収率90％は、塩化メチレン単独では２時間を要しフェ
ノール10重量％を含む塩化メチレン中では20分で達成し
た。
【００７１】
【表１】
【００７２】例19 ペプチド縮合速度に対するＯ−クレ
ゾールの影響 反応
ゾールの影響 反応
【００７３】
【表２】
【００７４】操作 塩化メチレン中で、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−
Ｌ−フェニルアラニンのヒドロキシこはく酸エステル
（Boc Phe OSu)1.２当量と、遊離のロイシン（Leu OH）
１当量とを、ジイソプロピルエチルアミン（DIPEA)１当
量の存在で常温で反応させた。
Ｌ−フェニルアラニンのヒドロキシこはく酸エステル
（Boc Phe OSu)1.２当量と、遊離のロイシン（Leu OH）
１当量とを、ジイソプロピルエチルアミン（DIPEA)１当
量の存在で常温で反応させた。
【００７５】ロイシンは不溶性であるので、不均一相媒
質で２つの試験を行った。１つはＯ−クレゾール7.２当
量を加え、他はこれを加えなかった。ジペプチドBoc Ph
e Leu OHのロイシンに対する収率を時間を変えて測定し
た。表２に示すように、Ｏ−クレゾールは縮合反応速度
に顕著な効果を与える。反応１時間で収率を比較する
と、Ｏ−クレゾールを加えた場合は、加えない場合の６
倍に達した。
質で２つの試験を行った。１つはＯ−クレゾール7.２当
量を加え、他はこれを加えなかった。ジペプチドBoc Ph
e Leu OHのロイシンに対する収率を時間を変えて測定し
た。表２に示すように、Ｏ−クレゾールは縮合反応速度
に顕著な効果を与える。反応１時間で収率を比較する
と、Ｏ−クレゾールを加えた場合は、加えない場合の６
倍に達した。
【００７６】
【表３】
Claims (25)
- 【請求項１】ペプチドの合成および／または精製に使用
する溶解および反応媒質であって、水と混合しない溶剤
の群から選ばれた希釈剤ＡとフェノールＢを含むことを
特徴とする媒質。 - 【請求項２】フェノールＢ対希釈剤Ａとの重量比は、１
／200 〜１である、請求項１記載の媒質。 - 【請求項３】希釈剤Ａが、芳香族化合物、エーテル、エ
ステルおよびハロゲン化された溶剤の群から選ばれてい
る、請求項１又は２に記載の媒質。 - 【請求項４】フェノールＢが次の一般式（Ｉ） （R １ )n-Ar-O-H （Ｉ） ｛式中、Ａr は単環もしくは多環の複素環または非複素
環の芳香族基を表し、置換基Ｒ1 は同一でも相違してい
てもよく、ハロゲン原子； 基−Ｚ−Ｒ2 （Ｚは一重結合または酸素原子であること
ができ、 Ｒ2 は水素原子；ヒドロキシ化またはモノもしくはポリ
ハロゲン化されていてもよい、多くとも８個の炭素原子
を含むアルキルまたはアリール基を表す。）を表し、そ
して ｎはゼロまたは多くとも芳香族核の置換可能な位置の数
に等しい整数である。｝ で示される化合物およびそれらの混合物の群から選ばれ
ている、請求項１〜３のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項５】フェノールＢが多くとも30個の炭素原子を
有する、請求項１〜４のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項６】フェノールＢの隣接位置の官能基が置換さ
れていないか、または障害とならない基で占められてい
る、請求項１〜５のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項７】Ａr 基が単環式芳香族である請求項４〜６
のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項８】式（Ｉ）中、Ｒ1 基が次の基または原子： メチル、エチル、プロピルおよびブチル； トリフルオロメチルおよびペンタフルオロメチル； メトキシ、エトキシ、プロポキシおよびブトキシ； フェニル、ヒドロキシフェニルおよびArOH； フェノキシおよびヒドロキシフェノキシ； フッ素、塩素および臭素 の群から選ばれている、請求項４〜７のいずれかに記載
の媒質。 - 【請求項９】式（Ｉ）において、ｎが多くとも５であ
る、請求項４〜８のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項１０】フェノールＢが、 一置換されていてもよいヒドロキシピリジン、 一置換されていてもよいヒドロキシキノリン、 モノハロゲン化フェノール、 ポリハロゲン化フェノール、 炭素原子１〜４個のアルキル基、炭素原子１〜４個のア
ルコキシ基、炭素原子１〜２個のペルフルオロアルキル
基または２，２，２−トリフルオロエチル基で一置換ま
たは二置換されたフェノール、 ジフェノール、 狭義のフェノール、 一置換または二置換されていてもよいナフトール、の
群、から選ばれている、請求項１〜６，８又は９のいず
れかに記載の媒質。 - 【請求項１１】１〜50アミノ酸残基をもつことができる
ペプチドをさらに含む、請求項１〜10のいずれかに記載
の媒質。 - 【請求項１２】ペプチドが、そのＣ−末端カルボキシル
基上で保護されている、請求項11記載の媒質。 - 【請求項１３】ペプチドが、そのＮ−末端アミノ基上で
保護されている、請求項11記載の媒質。 - 【請求項１４】ペプチドが、そのＣ−末端カルボキシル
基上で活性化されている、請求項13記載の媒質。 - 【請求項１５】Ｃ−末端カルボキシル基及びＮ−末端ア
ミノ基上のいずれにおいても保護されていないペプチド
をさらに含む、請求項１〜10のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項１６】ペプチドの濃度が少なくとも10-2Ｍであ
る、請求項15に記載の媒質。 - 【請求項１７】ペプチドがアミノ酸である、請求項15に
記載の媒質。 - 【請求項１８】そのＣ−末端カルボキシル基及びそのＮ
−末端アミノ基が保護されていない最初のアミノ酸また
はペプチドを原料とし、そのＣ−末端カルボキシル基上
で活性化され且つＮ−末端アミノ基上で保護されている
アミノ酸を加えて、保護されていてもよいペプチドを液
体媒質中で合成する方法であって、 反応剤を請求項１〜10のいずれかに記載の媒質に溶解す
ることを特徴とする方法。 - 【請求項１９】そのＣ−末端カルボキシル基上で保護さ
れている最初のアミノ酸またはペプチドを原料とし、そ
のＣ−末端カルボキシル基上で活性化され且つそのＮ−
末端アミノ基上で保護されているアミノ酸を加えて、保
護されていてもよいペプチドを液体媒質中で合成する方
法であって、 請求項１〜10のいずれかに記載の媒質中に反応剤を溶解
することを特徴とする方法。 - 【請求項２０】請求項１に記載の媒質中に溶解された最
初のアミノ酸またはペプチドを原料とし、そのＣ−末端
カルボキシル基が活性化され且つそのＮ−末端アミノ基
が保護されている他のペプチドを、液体媒質中で縮合さ
せて、保護されていてもよいペプチドを合成する方法で
あって、反応剤を請求項１〜10のいずれかに記載の媒質
に溶解することを特徴とする方法。 - 【請求項２１】そのＮ−末端アミノ基がカーバメート基
によって、またはβ−ジカルボニル化合物との反応によ
って保護されている、請求項18〜20のいずれかに記載の
方法。 - 【請求項２２】最初のアミノ酸またはペプチドのＣ−末
端カルボキシル基が、エステル化またはアミド化によっ
て保護されている、請求項19〜21のいずれかに記載の方
法。 - 【請求項２３】Ｎ−末端アミノ基上で保護されている反
応剤のＣ−末端カルボキシル基を、有機酸または無機酸
の塩化物、クロロぎ酸アルキル、カルボジイミド、活性
化されたエステル、またはアシルイミダゾールによって
活性化する、請求項18〜21のいずれかに記載の方法。 - 【請求項２４】そのＮ−末端アミノ基上で保護されてい
るアミノ酸またはペプチドを、最初のアミノ酸またはペ
プチドと縮合させた後に、そのＮ−末端アミノ基を加水
分解、酸性分解または塩基性分解によって遊離させる、
請求項18〜21のいずれかに記載の方法。 - 【請求項２５】そのＣ−末端カルボキシル基上で保護さ
れているか、もしくは保護されていないアミノ酸または
ペプチドを反応媒質に導入し、次にそのＣ−末端カルボ
キシル基上で活性化され且つそのＮ−末端アミノ基上で
保護されているペプチドまたはアミノ酸を加え、この導
入順はどちらでもよく、 反応終了後に、酸性、塩基性または中性の水溶液で有機
相を洗浄して、過剰の反応剤および副生物を除去し、次
にそのＮ−末端アミノ基を遊離させ、 最後に、Ｃ−末端カルボキシル基上で活性化され且つそ
のＮ−末端アミノ基上で保護されている新しいアミノ酸
または新しいペプチドを導入する、請求項18〜24のいず
れかに記載の方法。
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