JPH038361B2

JPH038361B2 -

Info

Publication number: JPH038361B2
Application number: JP58135089A
Authority: JP
Inventors: Hiromichi Okuda; Hiroshi Masuno; Heihachiro Taguchi; Yukinobu Iketani; Yoshiko Takeuchi; Kazuaki Niitsu; Iwao Sakakibara; Masumi Shinho; Eikichi Hosoya; Shizuo Nakagami
Original assignee: Tsumura and Co
Current assignee: Tsumura and Co
Priority date: 1983-07-26
Filing date: 1983-07-26
Publication date: 1991-02-05
Also published as: JPS6028933A

Description

【発明の詳細な説明】本発明はセリ科アンジエリカ属植物の根より得
られる新規な多糖体、その製造方法、及び該多糖
体を有効成分とする癌症状改善剤、詳しくは脂肪
分解作用を有する癌毒素（トキソホルモンＬ）の
脂肪分解促進作用を阻害し、担癌患者の脂質代
謝、並びに食欲不振を改善する癌症状改善剤に関
する。

トキソホルモンＬは、ヒト肝癌腹水中より分離
された分子量70000前後の酸性蛋白質で、脂肪組
織に作用し、脂肪の分解を促進する因子であり、
ラツトの脳室内注入で食欲不振を引き起すなど、
癌悪液質における体内脂肪減少の要因と考えられ
る（CANCER RESEARCH41、284〜288、
JANUARY、1981）。

セリ科アンジエリカ属植物には、例えばヤマト
トウキ（Angelica acutiloba KITAGAWA）、
ホツカイトウキ（Angelica acutiloba
KITAGAWA var、sugiyamae HIKINO）、シ
シウド（Angelica Polyclada Franch.）等があ
り、一部の植物は古来より、薬用に供されてき
た。

本発明者らは、セリ科アンジエリカ属植物につ
いて種々の研究を行つてきた結果、その根の水性
溶媒抽出液が、トキソホルモンＬの脂肪分解作用
を阻害し、担癌ラツトの食欲不振を改善すること
を発見し、抽出液の成分研究を進めて行くうちに
抗トキソホルモンＬ活性を示す多糖体YT−ａ
の単離に成功し、それが、その作用の本体である
ことをつきとめ、本発明を完成した。

本発明の多糖体YT−ａの理化学的性質を示
すと次の如くである。

性状：白色粉末、構成糖：グルコース及び微量のガラクトー
ス、構成糖結合様式：α結合、旋光度：〔α〕²⁰ _D＝＋190±９（ｃ＝0.48、
H₂O）、分子量：8000±2000（ゲル過クロマトグラ
フイー）、5100±500（超遠心分離法）、溶解性：水、希無機塩水溶液に可溶、エーテ
ル、クロロホルム等の疎水性有機溶媒、メタノ
ール、エタノール等の親水性有機溶媒に不溶、赤外線吸収スペクトル：KBr錠の赤外線吸
収スペクトルは第２図に示すとおりで、852cm
^-1に糖のα結合による吸収が見られる、単一性：電気泳動、ゲル過クロマトグラフ
イー、及び超遠心分離法により単一性を示す、
ゲル過クロマトグラフイー〔カラーム：
Shodex OHpak Ｂ−803／Ｓ（８mmφ×500
mm）、溶媒：H₂O、流量：１ml／min.、検出
器：RI（×８）〕による分析パターンは第１図
に示すとおりである、元素分析値：C40±３％ H6±３％、Ｎは
認められない、核磁気共鳴スペクトル： ¹H−NMR（δ^TMS _D2O
ppm：270MHz、70℃）で5.22、5.20、5.19及び
4.81に４本のα結合した糖のアノメリツクプロ
トンに由来するシグナルが認められ、又 ¹³C−
NMR（δ^TMS _D2Oppm：50MHz、70℃）で100.53（
¹J_C-H＝171Hz）、100.39（ 1J_C-H＝171Hz）、100.22
（ ¹J_C-H＝171Hz）、99.20（ 1J_C-H＝171Hz）にα
結合した糖のアノメリツクカーボンに由来する
シグナルが認めれる。

従来、アンジエリカ属植物であるヤマトトウキ
（Angelica acutiloba KITAGAWA）からアン
ジエランという多糖体が得られている〔特願昭51
−106373号（特開昭53−32107号）〕。この物質は
分子量10万以上であり、また、構成糖としてウロ
ン酸を40％含有する。また、ヤマトトウキから
AIP（Angelica immunostimulating
polysaccharide）というウロン酸を57％及びタン
パク質を４％含有する多糖体が得られている（昭
和57年８月27日北里研究所附属東洋医学総合研究
所和漢薬シンポジウム発行「第16回和漢薬シンポ
ジウム＜東京＞講演要旨集」第12頁〜第13頁）。

しかしながら、本発明の多糖体YT−ａは分
子量が１万以下であること、及び構成糖としてウ
ロン酸を全く含まぬことから、多糖体YT−ａ
は、アンジエラン及びAIPとは全く異なる新規な
多糖体を認められる。

本発明の多糖体YT−ａを得るには、セリ科
アンジエリカ属植物の水性溶剤にて抽出し、抽出
液を過した後、透析することにより低分子物質
を除去する。得られた透析内液に等量の飽和硫安
水溶液を加えて、生成した沈殿を遠心分離、過
等の方法により除去した後、さらに、等量の飽和
硫安水溶液を加えて、生成した沈殿を得る。この
沈殿を脱塩後、水性溶剤に溶解し、限外過する
ことにより、分子量30万以下の分画を取り、これ
をゲル過クロマトグラフイーに付し、分子量範
囲が、6000〜10000である分画を精製することに
より本発明の多糖体YT−ａが得られる。

上記水性溶剤としては水が望ましいが、希薄な
酸（例えば隣酸、酢酸など）、希薄な塩基（例え
ばアンモニア水、炭酸ナトリウム水溶液など）、
希薄な塩溶液（例えば塩化ナトリウム水溶液、硫
安水溶液など）を使用することもできる。また、
抽出にあたつては、熱時行うことが望ましい。ゲ
ル過クロマトグラフイーを行う上で高速液体ク
ロマトグラフイーを用いることができる。脱塩に
は透析、イオン交換クロマトグラフイー、ゲル
過クロマトグラフイー等の方法が使用できる。

精製には種々の方法が挙げられるが、例えば、
吸着クロマトグラフイー、イオン交換クロマトグ
ラフイー、ゲル過クロマトグラフイー、あるい
は吸着クロマトグラフイー、イオン交換クロマト
グラフイーに使用される樹脂によるバツチ法によ
り、精製することができる。

次に本発明の多糖体YT−ａ（以下、YT−
ａという）のトキソホルモンＬ或いは副腎皮質刺
戟ホルモン（ACTH）による脂肪分解促進作用
に与える影響、癌による食欲の低下を軽減するこ
と、及びYT−ａの毒性について、実験例を示
して具体的に説明する。

実験例１脂肪分解促進作用に対するYT−ａの影響 Wistar系雄性ラツト（体重150〜180ｇ）の副
睾丸脂肪組織切片100mgをKrebs−Ringer重送酸
緩衝液（PH7.4）に浮遊させ、肝癌患者の腹水を
トキソホルモンＬ溶液として0.1ml（或いは
ACTH10μｇ／ml溶液0.1ml）各種濃度のYT−
ａ水溶液0.1ml、５％ウシ血清アルブミン溶液0.5
ml、0.1ｍＭ CaCl₂を加えて最終容量1.0mlとし、
37℃で２時間培養した後、遊離した脂肪酸を
Doleの方法で測定した。その結果を第３図に示
す。

第３図に示す如く、YT−ａは、トキソホル
モンＬの脂肪分解促進作用を明らかに阻害し、ま
たその作用は用量依存的であつた。また正常人の
脂肪分解作用に関与するACTHに対しては、影
響しないか、もしくはその作用を促進する傾向を
示した。

このことより、YT−ａは、トキソホルモン
Ｌの分泌が盛んな担癌患者に対してのみ脂肪分解
抑制作用を示し、正常人の脂肪代謝には悪影響を
及ぼさぬことが示唆された。

実験例２癌による食欲の低下に対するYT−ａの影響４週齢のドンリユウ系雄性ラツト１群10匹に
AH130腹水肝癌を移植し、３日目からYT−ａ
生理食塩水溶液を１日１回、腹腔内投与し始め、
その飼料摂取量を毎日測定した。その結果を第４
図に示す。なお、YT−ａ投与量は10mg／Kgお
よび50mg／Kgとし、その結果をAH130腹水肝癌
を移植せず、YT−ａも投与しない正常動物
群、AH130腹水肝癌を移植し、YT−ａを投与
しなかつたコントロール群の結果と比較した。

第４図に示す如く、YT−ａはAH130腹水肝
癌移植による食欲の低下を明らかに抑制すること
が認められた。

実験例３ YT−ａの急性毒性試験 ddY系雄性マウス及びWistar系雄性ラツトを
それぞれ１群20匹とし、YT−ａを各種用量で
１回、静脈内投与及び腹腔内投与し、その症状を
１週間観察した。

その結果、YT−ａは1000mg／Kgの静脈内投
与及び腹腔内投与においても死亡例を見ず、ま
た、明白な毒性症状を発現しなかつたことより、
YT−ａの毒性は、極めて少ないものと考えら
れる。

上記に示した実験例から考えて、本発明の薬剤
であるYT−ａの有効投与量は、患者の年令、
体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で１
回50〜100mg、１日３回までの静脈内投与、筋肉
内投与、あるいは点滴静注が適当と考えられる。

本発明の薬剤のYT−ａは、製剤に用いられ
る適当な溶剤、安定剤、補助剤などを使用して、
製剤製造の常法に従つて注射剤を作ることができ
る。

処方にあたつては、YT−ａを単独で用いる
ことができ、また他の医薬活性成分との配合剤と
してもよい。注射用溶媒としては、一般に注射用
蒸留水、生理食塩水、デキストロース水溶液等を
用いることができる。さらに必要に応じて、適宜
等張化剤、溶解補助剤、防腐剤、無痛化剤等を加
えてもよい。また、この種の剤型の場合、滅菌さ
れた注射用媒体に溶解するか、あるいは製剤化終
了後に滅菌しなければならない。

次に本発明の実施例を示して更に具体的に説明
するが、本発明はこれにより何等限定されるもの
ではない。

実施例１粗YT−ａの分離奈良県で栽培された大和当帰（Anglica
acutiloba KITAGAWA）の根の乾燥品2.4Kgを
10倍量の蒸留水で２時間熱水抽出し、抽出液を得
た。抽出残渣に再び10倍量の蒸留水を加え、２時
間熱水抽出し抽出液を取り、先の抽出液と合せて
凍結乾燥し、水エキス1207.25ｇ（収率50.3％）
を得た。

この水エキス688ｇを水４に溶解し、直径25
mmの透析チユーブ（30／32：Union Carbide
Corporation製）を用い、流水中で２昼夜透析し
た。透析内液をとり、これに等量の硫安飽和水溶
液を加えた後、遠心分離により、析出した沈殿を
除去した。これにさらに等量の硫安飽和水溶液を
加えた後、遠心分離により、析出した沈殿を得
た。この沈殿を水に溶解し、直径25mmの透析チユ
ーブ（24／32：Union Carbide Corporation製）
を用い、流水中で外液に硫安が認められなくなる
まで透析し、透析内液を凍結乾燥し、14.0ｇ（大
和当帰からの収率として1.02％）の粉末を得た。

この粉末を水に溶解し、アミコン社製ダイヤフ
ローセル8400型を用い、ダイヤフローメンブレン
XM300（直径76mm）で限外過を行い、分子量30
万を境に分画し、分子量30万以下の分画を減圧下
で濃縮した後、凍結乾燥し、2.6ｇ（大和当帰か
らの収率として0.19％）の粉末を得た。

この粉末を水に溶解し、高速液体クロマトグラ
フイー（Waters社製、ALC／GPC244型）を用
いた分取用ゲル過クロマトグラフイー（カラ
ム：昭和電工製、Shodex OHpak Ｂ−2004、
φ20×500mm、移動層水、流速３ml／min、検出：
示差屈折計）に付し、分子量6000〜10000の分画
を分取し、凍結乾燥して820mg（大和当帰からの
収率として0.06％）の粉末（粗YT−ａ）を得
た。

実施例１により得られた粗YT−ａは、この
ままでも医薬として使用しうるが、不純物を除去
し、投与量を低減するために、さらに精製するこ
とが望ましい。

実施例２ YT−ａの精製実施例１により得られた粗YT−a100mgを水
５mlに溶解した後、DEAE−Sephacel Cl^-型
（Pharmacia Fine Chemicals社製）を認めたカ
ラム（φ26×180）に付し、水で展開して溶出す
る分画を減圧下で濃縮後、凍結乾燥し、白色粉末
のYT−a75mg（大和当帰からの収率として
0.045％）得た。

実施例３実施例２により得られたYT−a10ｇを１
の注射用蒸留水に溶解し、塩化ナトリウムを加え
て等張化した後、注射剤製造の常法に従つて、ア
ンプル内に密封した。本注射剤は１ml中にYT−
a10mgを含有し、、症状に応じて１回５ml〜10
mlを静脈内注射或いは筋肉内注射するか、リンゲ
ル等の輸液と混合し点滴静注する。

【図面の簡単な説明】

第１図はゲル過クロマトグラフイーによる多
糖体YT−ａの分析パターンを示す図であり、
第２図は多糖体YT−ａの赤外線吸収スペクト
ルであり、第３図はトキソホルモンＬあるいは
ACTHによる脂肪分解促進作用に対する多糖体
YT−ａの影響を示す図であり、第４図は
AH130腹水癌移植ラツトの飼料摂取量に対する
多糖体YT−ａの影響を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】１セリ科アンジエリカ属植物の根より得られ、
下記の理化学的性質性状：白色粉末、構成糖：グルコース及び微量のガラクトー
ス、構成糖結合様式：α結合、旋光度：〔α〕²⁰ _D＝＋190±９（ｃ＝０、48、
H₂O）、分子量：8000±2000（ゲル過クロマトグラ
フイー）、5100±500（超遠心分離法）、溶解性：水、希無機塩水溶液に可溶、エーテ
ル、クロロホルム等の疎水性有機溶媒、メタノ
ール、エタノール等の親水性有機溶媒に不溶、赤外線吸収スペクトル：第２図に示すとおり
であり、852cm^-1に糖のα結合による吸収が見
られる、単一性：電気泳動、ゲル過クロマトグラフ
イー、及び超遠心分離法により単一性を示す、元素分析値：C40±３％ H6±３％、Ｎは
認められない、核磁気共鳴スペクトル： ¹H−NMR（δ^TMS _D2O
ppm：270MHz、70℃）で5.22、5.20、5.19及び
4.81に４本のα結合した糖のアノメリツクプロ
トンに由来するシグナルが認められ、又 ¹³C−
NMR（δ^TMS _D2Oppm：50MHz、70℃）で100.53（
¹J_C-H＝171Hz）、100.39（ 1J_C-H＝171Hz）、100.22
（ ¹J_C-H＝171Hz）、99.20（ 1J_C-H＝171Hz）にα
結合した糖のアノメリツクカーボンに由来する
シグナルが認められる、を有する多糖体YT−ａ。２セリ科アンジエリカ属植物の根の水性溶剤抽
出液を透析し、透析内液と等量の飽和硫安水溶液
を加えた後、沈殿を除去し、さらに等量の飽和硫
安水溶液を加えて得られる沈殿を脱塩後、限外
過することにより分子量30万以下の分画を取り、
これをゲル過クロマトグラフイーに付すことに
より得られる分子量範囲が6000〜10000である分
画をさらに精製することを特徴とする、下記の理
化学的性質性状：白色粉末、構成糖：グルコース及び微量のガラクトー
ス、構成糖結合様式：α結合、旋光度：〔α〕²⁰ _D＝＋190±９（ｃ＝0.48、
H₂O）、分子量：8000±2000（ゲル過クロマトグラ
フイー）、5100±500（超遠心分離法）、溶解性：水、希無機塩水溶液に可溶、エーテ
ル、クロロホルム等の疎水性有機溶媒、メタノ
ール、エタノール等の親水性有機溶媒に不溶、赤外線吸収スペクトル：第２図に示すとおり
であり、852cm^-1に糖のα結合による吸収が見
られる、単一性：電気泳動、ゲル過クロマトグラフ
イー、及び超遠心分離法により単一性を示す、元素分析値：C40±３％ H6±３％、Ｎは
認められない、核磁気共鳴スペクトル： ¹H−NMR（δ^TMS _D2O
ppm：270MHz、70℃）で5.22、5.20、5.19及び
4.81に４本のα結合した糖のアノメリツクプロ
トンに由来するシグナルが認められ、又 ¹³C−
NMR（δ^TMS _D2Oppm：50MHz、70℃）で100.53（
¹J_C-H＝171Hz）、100.39（ 1J_C-H＝171Hz）、100.22
（ ¹J_C-H＝171Hz）、99.20（ 1J_C-H＝171Hz）にα
結合した糖のアノメリツクカーボンに由来する
シグナルが認められる、を有する多糖体YT−ａの製造方法。３セリ科アンジエリカ属植物の根より得られ、
下記の理化学的性質性状：白色粉末、構成糖：グルコース及び微量のガラクトー
ス、構成糖結合様式：α結合、旋光度：〔α〕²⁰ _D＝＋190±９（ｃ＝0.48、
H₂O）、分子量：8000±2000（ゲル過クロマトグラ
フイー）、5100±500（超遠心分離法）、溶解性：水、希無機塩水溶液に可溶、エーテ
ル、クロロホルム等の疎水性有機溶媒、メタノ
ール、エタノール等の親水性有機溶媒に不溶、赤外線吸収スペクトル：第２図に示すとおり
であり、852cm^-1に糖のα結合による吸収が見
られる、単一性：電気泳動、ゲル過クロマトグラフ
イー、及び超遠心分離法により単一性を示す、元素分析値：C40±３％ H6±３％、Ｎは
認められない、核磁気共鳴スペクトル： ¹H−NMR（δ^TMS _D2O
ppm：270MHz、70℃）で5.22、5.20、5.19及び
4.81に４本のα結合した糖のアノメリツクプロ
トンに由来するシグナルが認められ、又 ¹³C−
NMR（δ^TMS _D2Oppm：50MHz、70℃）で100.53（
¹J_C-H＝171Hz）、100.39（ 1J_C-H＝171Hz）、100.22
（ ¹J_C-H＝171Hz）、99.20（ 1J_C-H＝171Hz）にα
結合した糖のアノメリツクカーボンに由来する
シグナルが認められる、を有する多糖体YT−ａを有効成分とする癌症
状改善剤。