CN1961911A - 一种含丹参和降香挥发油的冻干粉针及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种含有2－6份丹参水溶性成分提取物和4－8份降香挥发油的羟丙基－β－环糊精包合物的冻干粉针及其制备方法；其中羟丙基－β－环糊精与降香挥发油的比例为10－45∶1。本发明的含丹参和降香挥发油的冻干粉针以丹参素、丹酚酸B和反式－橙花叔醇为主要有效成分，有效成分明确，便于质量控制；对急性心肌缺血具有较好的保护作用，起效快，作用强，生物利用度高，更适合用于治疗心血管系统疾病。

Description

一种含丹参和降香挥发油的冻干粉针及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂及其制备方法。具体的说是一种含有丹参水溶性成分提取物和降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物的冻干粉针及其制备方法。

背景技术

丹香冠心注射液、香丹注射液、复方丹参注射液是治疗心绞痛、心肌梗塞的注射液，具有活血化淤、理气开窍、扩张血管、增进冠状动脉血流量、降低心肌耗氧量的作用。其处方均为降香和丹参以不同配比构成。

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎；丹参有祛瘀生新，消肿止痛，活血通经，清心除烦之功能。

降香为豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T.Chen树干和根的干燥心材。别名绛香、降真香等。具有行气活血，止痛，止血的功能。主治脘腹疼痛，肝郁胁痛，胸痹刺痛，跌扑损伤，外伤出血等。

两药合用具有扩张血管、增加冠状动脉血流量、保护缺血缺氧的心肌、清除自由基、改善血液流变性、改善微循环、抗血小板聚集、防止血栓形成、降低血粘度、降血压、降血脂、抗动脉粥样硬化等多种作用，为治疗心脑血管疾病的药物，在临床上具有广泛的应用。

丹参中主要有效成分有水溶性成分和脂溶性成分两大类：脂溶性成分为二萜醌类化合物，主要是丹参酮、丹参酮II_A、隐丹参酮等；水溶性成分为酚酸类化合物，是丹参心血管系统药理活性的主要物质基础，主要有丹参酚酸、丹参素、原儿茶醛等。药理研究表明丹参酚酸类成分具有抗血小板聚集作用，抗血栓形成作用，改善微循环作用，抗氧化损伤作用和多途径发挥心肌保护作用。丹参酚酸B有抗心肌缺血，抗血小板聚集，提高心脏微血管内皮细胞、心肌细胞耐缺氧能力，减轻炎性因子对内皮、心肌细胞的损害的作用。丹参素有缩小心肌梗塞范围和减轻病变程度的作用，还具有保护超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶的作用。

降香的主要化学成分为挥发油，挥发油中主要成分为反式-橙花叔醇，反式-β-金合欢烯、β-没药烯等。降香对心脑血管系统发挥作用的主要成分是挥发油，有实验表明降香挥发油及芳香水可明显抑制大鼠实验性血栓形成，提高孵育兔血小板cAMP的水平，促进兔血浆纤溶酶活性，具有抗血栓形成的作用。

众所周知，由于降香挥发油是脂溶性成分，在水中溶解度较小，几乎不溶于水，且稳定性较差；而目前现有的制备工艺均为将降香刨成薄片，加水浸润后，水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，冷藏，分去油层。只采用降香挥发油的水饱和溶液，油层部分被弃之，造成药材资源的极大浪费。

而丹参中含有丹参素、原儿茶醛等多种水溶性酚类化合物，性质不稳定，在水溶液中易被氧化，在制成注射液，尤其是水针时，由于长时间存在于水溶液中易发生变化，从而导致成品色泽加深；有的还含有丹参酮等脂溶性成分，在水溶液中易发生水解、氧化、聚合等理化变化，使活性物质含量下降，毒性增加。因此，该方制成水针存在一定弊端。

发明内容

为突破目前丹参、降香方制成注射用粉针存在的瓶颈，本发明提供一种质量稳定、有效成分含量高的含丹参和降香挥发油的冻干粉针及其制备方法。

本发明所采用的技术方案是：一种含丹参和降香挥发油的冻干粉针，它是由丹参的水溶性成分提取物与降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物组成。其中丹参水溶性成分提取物2～6份；降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物4～8份，其中降香挥发油与羟丙基-β-环糊精的体积重量比为1∶1～150。较好为1∶5～70，最佳为1∶10～45。

本发明所述的丹参的水溶性成分提取物，是采用水或任意比例的乙醇，优选30-95％乙醇提取，经大孔吸附树脂分离纯化制成。具体步骤包括：取丹参药材粉碎成粗粒；分别用水或任意比例的乙醇提取，提取方法包括反复煎煮、热回流、渗漉、超声、微波；提取液经减压(60～70℃)浓缩或不经浓缩；提取液除尽乙醇后用2M盐酸调pH值至1～4，优选调至2～3，静置，滤过，滤液经HPD-100、D101、AB-8或者LSA-30大孔树脂柱吸附，水洗脱杂质，用30％～70％的乙醇洗脱；收集洗脱液，除尽乙醇，制得含丹参素、丹酚酸B含量为20～95％的丹参水溶性成分提取物。优选制得的提取物中含丹参素、丹酚酸B、为60～95％。

本发明所述的羟丙基-β-环糊精包合降香挥发油，制备方法为包括下列步骤：

1.按体积重量比(ml/g)1∶1～150称取降香挥发油和羟丙基-β-环糊精。将羟丙基-β-环糊精溶于水中，比例为1∶1～200(重量体积比)。

2.将含羟丙基-β-环糊精的水溶液在水浴中高速搅拌，缓慢滴加降香挥发油，全部滴加完毕后，密闭容器，继续高速搅拌0.5～16小时，其中高速搅拌包括电力搅拌器搅拌、胶体磨研磨、高压/低压均浆机均浆。室温静置或冰箱中冷藏1～36小时；

3.用0.22μm或0.45μm微孔滤膜过滤，滤液经灌装，冷冻干燥。得疏松白色粉末，即为降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物。

复方丹参冻干粉针的制备包括下列方法：

1.丹参水溶性成分提取物溶液加入羟丙基-β-环糊精搅拌溶解，在30～70℃水浴中，将降香挥发油缓慢滴加到剧烈搅拌的上述溶液中，滴加完毕后继续剧烈搅拌30～300分钟，静置，用2M氢氧化钠溶液调pH至偏酸性，优选调至pH5～6，得降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物药液；或

2.用注射用水溶解羟丙基-β-环糊精，照上述方法包合降香挥发油后再与丹参水溶性成分提取物混合，用2M氢氧化钠溶液调pH值至偏酸性，优选调至pH5～6。

3.上述两种方法制得的溶液，经超滤膜滤过，微孔滤膜滤过，分装，冷冻干燥，制得含丹参和降香挥发油的冻干粉针。

丹参水溶性成分提取物以丹参素、丹参酚酸B为含量测定指标，采用高效液相色谱法测定含量，色谱条件：C₁₈柱(200×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-乙腈-水-冰醋酸(33∶9∶56∶2)，流速1.0ml/min，检测波长280nmm。

降香挥发油以反式-橙花叔醇为含量测定指标，采用高效液相色谱法测定含量，色谱条件：C₁₈柱(250×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-水(85∶15)，流速1.0ml/min，检测波长210nm。

经初步试验，丹参水溶性成分冻干粉针稳定性好，药理作用强；降香挥发油与羟丙基-β-环糊精按一定比例包合后，降香挥发油的溶解度极大地提高，稳定性也有较大提高。

为了进一步说明本发明的积极效果，采用本发明制得的含有丹参酚酸B、丹参素的丹参水溶性成分提取物进行部分药理实验观察结果表明：

1、对心肌的作用

(1)具有缩小心肌梗死范围和减轻病情的作用。观察结扎兔心左前降支1/2处所造成的小范围心肌梗死，丹参水溶性成分提取物治疗组与生理盐水对照组有明显的差异；对于结扎兔心左前支上1/3处所造成的较大范围的心肌梗死，丹参水溶性成分提取物治疗组明显小于对照组。提示提取物具有明显缩小心肌梗死范围和减轻病变程度的作用。

(2)具有对在鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。采用Langendorff灌注模型，对心肌缺血再灌注损伤中氧自由基清除酶系统超氧化歧化酶(SDD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和超微结构的变化及丹参素的抗氧化效应进行了观察，证实其具有保护心肌缺血的作用，提取物的保护作用明显优于公认的具有抗氧化作用的亚硒酸钠。

2、改善微循环及抗凝作用

(1)具有改善微循环障碍及降低血浆乳酸含量的作用。对静脉注射高分子右旋糖苷造成家兔微循环障碍，给予丹参水溶性成分提取物可明显增加兔眼球结膜毛细血管数并降低兔血浆乳酸含量。这表明提取物具有改善微循环障碍作用，从而改善细胞缺血缺氧所导致的代谢障碍。

(2)具有提高机体抗凝和纤溶活性作用。用放免法测定6-Keto-PGF，用发色底物测定纤溶活性(PA)以及它的抑制物(PAI)，用发色底物间接测定血栓调理蛋白的活性，证明丹参水溶性成分提取物能促进牛皮细胞PA，提高PGI的产量，降低PAI的活性。

(3)具有明显的抗凝血及抑制体外血栓形成的作用。采用大白鼠静脉注射前后自身对照的方法，间歇不同时间从心脏抽血，测定各种指标，结果显示注射含丹参和降香挥发油的冻干粉针后体外血栓形成时间延长，血栓长度缩短，重量减轻。显示冻干粉针有抑制体外血栓形成的作用。

3、对血管的作用

(1)对冠脉的影响。采用改良的Ogltee离体冠脉恒速灌流装置，以灌流压变化反映冠脉的舒缩活动，证明丹参水溶性成分提取物在1.0mg/L时，能显著舒张离体猪冠状动脉，降低灌注压。而丹参的其他成分DS-201，DS-781或原儿茶醛都显著收缩猪的冠脉。吗啡能引起清醒狗的冠脉收缩，但给予丹参水溶性成分提取物后可使收缩的冠脉舒张，表明在急性心肌梗死时如用吗啡镇痛的同时给予提取物以拮抗其潜在的收缩冠脉效应可能会是有益的。

(2)拮抗低氧性肺血管收缩作用。将离体豚鼠肺动脉诱发低氧性肺血管收缩(HPV)。丹参水溶性成分提取物浓度在1.25-5g/L时均能抑制HPV。剂量越大，抑制作用越强，最后达到完全抑制。

4、对血细胞的作用

(1)对血小板聚集性及血小板膜流动性的影响。丹参水溶性成分提取物能明显抑制血小板的聚集性，而且在抑制血小板聚集剂量的丹参素作用下，血小板膜流动性明显增加，表明丹参水溶性成分提取物治疗冠心病有效，可能与纠正冠心病患者血小板膜的分子缺陷，增加血小板膜的流动性有关。

(2)对体外循环中血细胞的影响。实验表明，丹参水溶性成分提取物可减少红细胞的破坏，其作用途径是提高红细胞的负电荷，使彼此不易聚集，激活纤溶酶系统；增加红细胞膜的机械强度。

为进一步证明本发明冻干粉针的稳定性及实用性，分别进行了加速稳定性实验、安全性试验，结果表明：本发明的冻干粉针质量稳定，安全性符合注射剂质量要求，可满足临床用药需要。现分述如下：

1、含丹参和降香挥发油的冻干粉针加速稳定性实验：

材料与方法

样品：含丹参和降香挥发油的冻干粉针样品批号：实施例2冻干粉针。

试验条件：37～40℃，相对湿度75％。

考察时间：0月、1个月、2个月、3个月。

考察项目：性状、pH值、水分、热原、无菌、丹酚酸B含量测定；

表1样品加速稳定性试验报告

放置时间	0个月	1个月	2个月	3个月
					性状pH水分(％)热原无菌丹酚酸B(％)	棕褐色疏松固体5.450.2符合规定符合规定5.07	棕褐色疏松固体5.490.2符合规定符合规定5.05	棕褐色疏松固体5.500.2符合规定符合规定5.03	棕褐色疏松固体5.430.2符合规定符合规定5.07

试验结果：含丹参和降香挥发油的冻干粉针在本试验条件下很稳定。

2、安全性试验

(1)溶血性试验

试验目的：观察含丹参和降香挥发油的冻干粉针对红细胞状态的影响

药物：含丹参和降香挥发油的冻干粉针，每支加5％的葡萄糖溶液200ml供试验用。

动物：家兔：大耳白种，体重2-2.5kg，雌雄兼用，由天津药物研究院动物室提供。

仪器：TU-1800/1800S紫外-可见分光光度计。

试验方法与结果：

选用健康大耳白家兔，颈动脉取血约20ml，用玻璃棒搅拌除去纤维蛋白后，用约10倍量的生理盐水混匀、离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水如上洗涤3-4次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞按其体积，用生理盐水稀释成2％的红细胞悬液进行试验。取试管7支，编号排列于试管架上，按下表配比量依次加入2％红细胞悬液、生理盐水及不同量的含丹参和降香挥发油的冻干粉针溶液，第6管不加含丹参和降香挥发油的冻干粉针溶液，作为空白对照管，第7管不加含丹参和降香挥发油的冻干粉针溶液，并用蒸馏水代替生理盐水，作为阳性对照管，各管摇匀后，置37℃恒温水浴中温育。开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，连续3小时，结果见表1。

结果判断：

溶液呈透明红色，即表示溶血；溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝集作用。一般以0.3ml含丹参和降香挥发油的冻干粉针(第3管)，在2小时内不产生溶血反应，认为可供注射用。

表1含丹参和降香挥发油的冻干粉针对红细胞的影响(肉眼观察法)

管号	1	2	3	4	5	6	7
								2％红细胞混悬液(ml)生理盐水(ml)蒸馏水(ml)供试品(ml)0.5小时1小时2小时3小时	2.52.40.1----	2.52.30.2----	2.52.20.3----	2.52.10.4----	2.52.00.5----	2.52.5-----	2.52.5-++++

注：“+”表示溶血“-”表示不溶血

表1结果显示，肉眼观察，在3小时内含丹参和降香挥发油的冻干粉针各试验管均不产生溶血和红细胞凝集。

观察完毕，将各管溶液2500转/分离心10分钟，取上清液在紫外分光光度计545nm处，以蒸馏水作为空白对照读取各管OD值，结果见表2。

结果判断：用下式计算各试验管的溶血率(％)。

溶血率(％)＝(OD_t-OD_nc)/(OD_pc-OD_nc))×100％

式中OD_t：试验管吸光度 OD_nc：阴性对照管吸光度 OD_pc：阳性对照管吸光度

溶血率＞5％表明出现溶血，不宜注射使用。

表2含丹参和降香挥发油的冻干粉针对溶血的影响(分光光度法)

管号	1	2	3	4	5	6	7
								OD值溶血百分率(％)	0.062-0.36	0.065-1.79	0.0680	0.0690.60	0.0770.54	0.068	1.748

表2结果显示，含丹参和降香挥发油的冻干粉针各试验管溶血百分率均小于5％。表明含丹参和降香挥发油的冻干粉针符合注射剂使用规定。

试验结论：含丹参和降香挥发油的冻干粉针溶血性试验符合注射剂使用规定，可供注射用。

(2)血管和股四头肌刺激试验

试验目的：观察含丹参和降香挥发油的冻干粉针连续3次静脉注射给药，对血管及其周围组织所产生的刺激反应；观察含丹参和降香挥发油的冻干粉针一次股四头肌注射给药，对股四头肌及其周围组织所产生的刺激反应。

药物：含丹参和降香挥发油的冻干粉针

动物：家兔：大耳白种，体重2～2.5kg，雌雄兼用。

试验方法与结果

①含丹参和降香挥发油的冻干粉针静脉注射给药对家兔血管刺激的影响

选用上述健康成年家兔12只，体重2～2.5kg，雌雄兼用(雌者无孕)。按性别、体重分为3组，含丹参和降香挥发油的冻干粉针两个给药浓度组(0.22、0.44g生药/ml)及一个5％葡萄糖注射液对照组，每组均为4只，按无菌操作的方法进行耳静脉注射给药，给药体积均为5ml/kg，对照组给予等容量葡萄糖注射液，每天1次，连续3天，每次给药后肉眼观察注射部位有无红肿、充血等刺激反应，3天后处死动物，剪下兔耳做病理组织学检查。

结果显示，含丹参和降香挥发油的冻干粉针给兔耳静脉连续注射给药3天，肉眼观察，血管清晰可见，未见红肿、充血等刺激反应。病理组织学检查显示，家兔血管内皮光滑完整，内皮细胞未见水肿、变性、脱落，血管腔内未见血栓形成，管壁及其周围未见明显炎症反应。

以上结果表明：含丹参和降香挥发油的冻干粉针对血管无明显刺激反应。

②含丹参和降香挥发油的冻干粉针肌肉注射给药对家兔股四头肌刺激的影响

选用上述健康成年家兔12只，体重2～2.5kg，雌雄兼用(雌者无孕)。按性别、体重分为3组，含丹参和降香挥发油的冻干粉针两个浓度组及一个5％葡萄糖注射液对照组，每组均为4只，按无菌操作的方法进行肌肉注射给药，给药体积均为1ml/只，对照组给予等容量葡萄糖注射液。48小时后，对注射部位进行肉眼观察。然后，处死家兔，取注射部位进行病理组织学检查。按表3换算成相应的反应级数。

表3注射剂刺激反应评分标准

反应级数	刺激反应
		012345	给药部位无明显反应给药部位轻度充血，其范围在0.5×1.0cm以下给药部位中度充血，其范围在0.5×1.0cm以上给药部位重度充血，红肿，伴有肌肉变性出现坏死，有褐色变性出现广泛性坏死

结果判断标准；家兔平均反应级数小于2，认为刺激反应合格。

结果显示，肉眼观察，各组的4只家兔活动正常，注射部位无红肿、充血等刺激反应；病理组织学检查显示，含丹参和降香挥发油的冻干粉针两个浓度组与对照组的每只动物骨骼肌纤维排列整齐，横纹清晰，肌纤维结构、形态及间质未见明显异常。

按照注射剂刺激反应的评分方法，各组家兔平均反应级数均小于2，表明含丹参和降香挥发油的冻干粉针对股四头肌无明显刺激反应。

试验结论：含丹参和降香挥发油的冻干粉针对家兔耳静脉血管、股四头肌刺激性试验结果表明，对家兔耳静脉血管、股四头肌均无明显刺激作用。符合注射剂刺激性试验规定，可供注射用。

(3)过敏性试验

试验目的：观察含丹参和降香挥发油的冻干粉针对豚鼠的全身主动过敏反应；观察含丹参和降香挥发油的冻干粉针对大鼠的皮肤被动过敏反应。

药物：含丹参和降香挥发油的冻干粉针

山联泰：吸附无细胞百日咳、白喉、破伤风联合疫苗，批号20041123-1，成都生物制品研究所产品。

卵白蛋白：Sigma公司产品。

动物：大鼠：体重160～200g，雌雄兼用。豚鼠：体重300～400g，雌雄各半。

试验方法与结果

①含丹参和降香挥发油的冻干粉针对豚鼠全身主动过敏试验的影响选取健康豚鼠20只，体重300～400g，按性别、体重随机分组，含丹参和降香挥发油的冻干粉针两个不同浓度给药组(0.55、1.1g生药/ml)及阳性药4％卵白蛋白各6只，空白对照组2只，均雌雄各半。按无菌操作，给药组隔日腹腔注射含丹参和降香挥发油的冻干粉针1ml/只，阳性药组腹腔注射4％卵白蛋白0.5ml/只，共5次。然后将各组动物均分为2组，第一组于首次注射后的第14天，第二组于首次注射后的第21天，给药组静脉注射与致敏浓度相同的含丹参和降香挥发油的冻干粉针2ml/只，阳性药组腹腔注射4％卵白蛋白2ml/只进行攻击，按下列项目观察注射后即刻至30分种每只动物的反应症状，并按表4、表5进行过敏反应评价。

过敏反应症状：0：正常 1：不安宁 3：发抖 4：搔鼻 5：喷嚏 6：咳嗽7：呼吸急促 8：排尿 9：排便 10：流泪 11：呼吸困难 12：罗音13：紫癜 14：步态不稳 15：跳跃 16：喘息 17：痉孪 18：横转19；潮式呼吸 20死亡

表4全身致敏性评价标准

反应症状	反应强度	评价
			01-41-101-1920	-++++++++++	过敏反应阴性过敏反应弱阳性过敏反应阳性过敏反应强阳性过敏反应极强阳性

表5豚鼠过敏反应级数

反应级数	反应症状
		01234	无明显反应只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛有几次咳嗽、抓鼻、颤抖或竖毛多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐等痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡

注：反应级数达2级以上(包括2级)时，该供试品可认为过敏试验不合格。攻击注射后，如发现有过敏反应时，应取健康未致敏豚鼠2只，静脉注射供试品2ml，排除由于药物作用引起的类似过敏反应症状，供作结果判断的参考。

试验结果显示：致敏第14天，含丹参和降香挥发油的冻干粉针1.1g生药/ml浓度组2只豚鼠出现抓鼻，1只出现发抖；0.55g生药/ml浓度组1只出现抓鼻，2只无反应；阳性药组2只死亡，1只出现呼吸困难、步态不稳、跳跃等；正常对照无反应。

致敏第21天，含丹参和降香挥发油的冻干粉针1.1g生药/ml浓度组1只出现抓鼻，2只无反应；0.55g生药/ml浓度组3只均无反应；阳性药组1只死亡，2只呼吸困难、步态不稳、痉挛、大小便失禁等；正常对照无反应。

以上结果表明，含丹参和降香挥发油的冻干粉针全身主动过敏反应级数小于2，认为过敏试验合格。

②含丹参和降香挥发油的冻干粉针对皮肤被动过敏试验的影响

致敏：选用健康雌性大鼠4只，体重160～200g，随机分为4组，正常对照组、含丹参和降香挥发油的冻干粉针两个不同浓度给药组(0.55、1.1g生药/ml)及阳性药4％卵白蛋白对照组。各给药组均隔日腹腔注射0.5ml/只，正常对照组给予等容量5％葡萄糖注射液。在肌肉注射的同时，均腹腔注射百日咳、白喉、破伤风联合疫苗0.25ml/只，连续2次。首次致敏后14天，眼眶取血约2.5ml，2000转/分离心10分钟，制备抗血清，置-20℃冰箱保存备用。

激发：另选健康大鼠16只，体重160～180g，雌雄兼用。随机分为正常对照组、含丹参和降香挥发油的冻干粉针两个不同浓度给药组(0.55、1.1g生药/ml)及阳性药4％卵白蛋白对照组，每组均为4只。各组大鼠均在背部中线两侧距脊柱1.5cm处脱毛3×5cm²，在脱毛部位皮内注射各组抗血清0.1ml，每只动物均从高到低(从尾部至头部)注射同一药物的3个不同浓度的抗血清稀释液(分别为1∶2，1∶8，1∶32)，48小时后，再静脉注射与致敏浓度相同的激发抗原和0.8％的伊文思蓝各0.5ml。30分钟后处死动物，用千分卡尺测量各注射点蓝班的直径，直径大于5mm判定为阳性。将各呈阳性反应的斑点皮肤剪碎，放入丙酮-生理盐水(7∶3)混合溶液5ml中浸泡24小时，3000转/分离心10分钟，在紫外可见分光光度计610nm处测定光密度(OD值)，见表6。

表6阳性斑点光密度(λ＝610nm)

组别	阳性斑点数	抗血清稀释倍数	蓝班光密度
				4％卵白蛋白4％卵白蛋白4％卵白蛋白	886	1∶21∶81∶32	0.097±0.0210.084±0.0210.070±0.018

结果显示：生理盐水各测量点均无蓝班出现；阳性药除抗血清稀释液1∶32出现2个直径小于5mm的蓝班外，其余测量点蓝班直径均大于5mm，表明有明显过敏反应。含丹参和降香挥发油的冻干粉针3个不同比例抗血清溶液各8个测量点均无蓝班出现，表明含丹参和降香挥发油的冻干粉针无明显被动过敏反应。

试验结论：根据过敏反应评价要求，含丹参和降香挥发油的冻干粉针无全身过敏反应，也无皮肤被动过敏反应，符合注射剂过敏反应规定，表明过敏反应试验合格。

综上所述，本发明的优点在于：

1.有效成分明确，便于质量控制：丹参素、丹酚酸B和反式-橙花叔醇为主要有效成分，成分清楚，含量高，质量控制准确，提高了产品质量。

2.粉针剂稳定性好，由于已除去水分，能有效地防止有效成分在水中的氧化、水解、失活、聚合、沉淀，可以更好地保证制剂的质量和疗效。

3.本发明的含丹参和降香挥发油的冻干粉针对急性心肌缺血具有较好的保护作用，克服了口服制剂有效成分的胃内分解，肝首过效应等缺点。起效快，作用强，生物利用度高，更适合用于治疗心血管系统疾病。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。

实施例1

取丹参药材适量，粉碎，过10目筛。称取100g，混合后加入浓度60％乙醇浸泡24小时，移至渗漉筒中，以0.6mL/min的速度渗漉，收集900ml渗漉液，减压浓缩至无醇味(0.1MP，60℃)。以2M盐酸调pH2.0，静置，滤过，滤液通过HPD-100型大孔吸附树脂柱(400ml)纯化，先用4BV蒸馏水洗脱，再用60％乙醇6BV洗脱，收集60％乙醇洗脱液，并减压浓缩(0.1MP，60℃)至100ml，(丹酚酸B45mg/ml)，测定含量为85％。再向浓缩液中加入8g羟丙基-β-环糊精，待羟丙基-β-环糊精溶解后，置于40℃水浴中，将0.17ml降香挥发油缓慢滴加于上述溶液中，同时剧烈磁力搅拌60分钟。静置24小时后，以2M NaOH调节pH5.0，0.22μm微孔滤膜过滤，每只西林瓶2ml灌装，冷冻干燥，得含丹参和降香挥发油的冻干粉针。

实施例2

取丹参药材适量，粉碎，称取粗粉1000g，以30％乙醇30L渗漉，渗漉液减压浓缩至0.5g/ml(按药材量计)，以2M盐酸调节PH 2.5，静置，滤过，滤液过HPD400树脂，水洗部分弃去，收集40％乙醇洗脱部分，减压浓缩至无醇味，加注射用水至450ml，(丹酚酸B90mg/ml)，测定含量为90％。另称取羟丙基-β-环糊精75g，溶解于约450ml注射用水中，在30℃水浴中，剧烈电力搅拌的条件下逐滴缓慢的加入降香挥发油1.7ml，密闭容器，继续搅拌2小时，室温静置过夜。得降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物水溶液，将上述两种溶液混合均匀，加入2M NaOH调节pH5.5，加注射用水至1000ml，0.22μm微孔滤膜微滤，无菌条件下分装(每瓶2ml)，冷冻干燥，压盖，即得含丹参和降香挥发油的冻干粉针。

实施例3

取丹参药材适量，粉碎，过10目筛，称取粗粉800g，加入浓度50％乙醇加热回流1小时，滤出药液，药渣同上再提取一次，合并药液，减压浓缩至无醇味(0.1MP，60℃)。以2M盐酸调pH2.8，静置，滤过，滤液通过D101型大孔吸附树脂柱(200ml)纯化，先用4BV蒸馏水洗脱，再用30％乙醇6BV洗脱，收集30％乙醇洗脱液，并减压浓缩(0.1MP，60℃)至800ml(丹酚酸B31mg/ml)，测定含量为55％。将150g羟丙基-β-环糊精溶于1200ml注射用水中，置于50℃水浴，电力剧烈搅拌下，缓慢滴加3.5ml降香挥发油，继续搅拌180分钟，静置12小时，得降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物水溶液，将上述两种溶液混合均匀，以2M NaOH调节pH6.0，超滤膜滤过(6000分子量)，每只西林瓶2ml灌装，冷冻干燥，得含丹参和降香挥发油的冻干粉针。

Claims (7)

1、一种含丹参和降香挥发油的冻干粉针，它是由丹参的水溶性成分提取物与降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物组成。

2、如权利要求1所述的冻干粉针，其特征在于它是由下述重量份数的原料组成：丹参水溶性成分提取物2～6份；降香挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物4～8份；其中降香挥发油与羟丙基-β-环糊精的体积重量比为1∶1～150。

3、如权利要求2所述的冻干粉针，其中，所述的降香挥发油与羟丙基-β-环糊精的体积重量比为1∶10～45。

4、如权利要求1或2所述的冻干粉针，其中，所述丹参水溶性成分提取物中含丹参酚酸B、丹参素在20～95％。

5、如权利要求1或2所述的冻干粉针，其特征在于所述的丹参的水溶性成分提取物，是以水或任意比例乙醇为溶剂将丹参药材提取，浓缩后，调pH值至酸性，经大孔吸附树脂分离纯化，浓缩，即得。

6、如权利要求1～3所述的冻干粉针，其特征在于所述的羟丙基-β-环糊精包合物，是将降香挥发油缓慢滴加到羟丙基-β-环糊精水溶液中，剧烈搅拌、超声振荡或研磨制成；其中剧烈搅拌包括电力搅拌器搅拌、胶体磨研磨、高压/低压均浆机均浆。

7、权利要求1所述含丹参和降香挥发油的冻干粉针的制备方法：

(1)取丹参水溶性成分提取物溶液加入羟丙基-β-环糊精搅拌溶解，在30～70℃水浴中，将降香挥发油缓慢滴加到剧烈搅拌的上述溶液中，滴加完毕后继续剧烈搅拌30～300分钟，静置，调pH值至偏酸性，滤过，分装，冷冻干燥；或

(2)采用注射用水首先溶解羟丙基-β-环糊精，然后将降香挥发油缓慢滴加到此溶液中，剧烈搅拌30～300分钟，静置，再与丹参水溶性成分提取物混合，调pH值至偏酸性，滤过，分装，冷冻干燥。