JPH0372894A - 悪性腫瘍細胞の検出 - Google Patents

悪性腫瘍細胞の検出

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JPH0372894A
JPH0372894A JP1146551A JP14655189A JPH0372894A JP H0372894 A JPH0372894 A JP H0372894A JP 1146551 A JP1146551 A JP 1146551A JP 14655189 A JP14655189 A JP 14655189A JP H0372894 A JPH0372894 A JP H0372894A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、（１）異なる種類の抗マリグニン抗体であ
る２種の生産物の生産法、および（２）３種の人為的に
生産した細胞種であって、その各々は抗マリグニン抗体
の一方または両方を生産するという特徴的な特性を有し
、それによって、共にそれ自体が抗体である上記生産物
と、それらを生産する細胞を、診断、代謝および治療目
的上有用なものとしている細胞種に関するものである。
細胞雑種の融合方法は、今や当業界で日常的に使用され
かつ認容されている〔「モノクローナル、アンテイボデ
ーズ」、セザール・ミルスタイン著、サイエンティフィ
ック・アメリカン、１９８０年５月発行、第６６−７４
頁〕、動物に対する腫瘍細胞の注入による抗体の生産も
、当業界では長年来一般的な方法となっている。米国特
許（第４１７２１２４号、ヒラリー・コブロフスキーお
よびカル口・エム・クロース）は、総腫瘍細胞に対する
抗体の生産方法に関するものであるが、その重要な第１
工程は種々の腫瘍からの総細胞を動物に注入する工程で
あり、この点で、総細胞の注入によらず、本発明者の米
国特許第４１９５０１７号および第４１９６１８６号の
対象である特殊なポリペプチド組成物マリグニン（Ｍａ
ｌｉｇｎｉｎ）を用いて特殊な抗体、抗マリグニン抗体
の特別な種を生産するこの発明の方法とは異なっている
。
マリグニンは、以前に抗マリグニン抗体の生産に用いら
れているが、それは上記本発明者の特許の対象である。
しかし、これらの特許が哺乳類における多クローン性抗
マリグニン抗体の生産を記載しているのに対して、この
発明の抗マリグニン抗体は単クローン性であり、単一の
人工生産細胞の生産物である。生産方法の相違に加えて
、後述するように、この発明の単クローン性抗体は独特
な性質を備えており、したがって、多クローン性であり
、哺乳類により生産され、異なった性質を有する抗マリ
グニン抗体と区別するために、特別な名前で引用されな
ければならない。
この発明により生産され、単クローン性抗マリグニン抗
体生産能を有する人工生産細胞系それ自体が、特徴的な
新規特性、すなわち単一の（単クローン性）細胞系また
は細胞型が特許生産物であるマリグニンによって人工的
に産生され、試験管内で単クローン性抗マリグニン抗体
生産能を保持したまま生き続けるという特性を有するも
のである。さらに、この新規な細胞系は永遠に生きて任
意の量だけ単クローン性抗マリグニン抗体を生産できる
。したがって、この新規な人工細胞を、以下単クローン
性抗マリグニン抗体生産細胞と呼ぶことにする。この新
規細胞は、その生産物である抗体の用途に関連した直接
の用途として、診断および治療上の両用途を有する。す
なわち、上記特許の明細書殊に実施例中には、抗原マリ
グニンまたはマリグニン含有細胞の存在を確認するため
の上記抗体の診断的使用、または抗マリグニン抗体とそ
の特異抗原であるマリグニンとの特異反応に基づく上記
細胞すなわち悪性または癌細胞の治療的処理（すなわち
破壊）のための使用が、溶液中に存在するものまたは細
胞中に固定されているものについて明らかにされている
。（特に免疫蛍光法による癌細胞の染色に対する抗体の
使用については実施例１１、ＩＩＡ、１２参照。生体内
癌細胞の確認および位置づけ用信号放出体を含有する癌
細胞または癌細胞破壊のために癌細胞に濃縮されるべき
抗癌薬もしくは化学品を含有する癌細胞に対する確認ま
たは特異的結合のための抗体の使用については実施例１
３参照。また、抗体が単独で癌細胞の治療（破壊）に用
いられる場合については実施例１６．１７参照）。
本発明者により抗マリグニン抗体が最初に生産されたと
き（既発行の米国特許第４１９５０１７号および第４１
９６１８６号）から、抗体に２つの構成成分種が存在す
ることが認められていた。
すなわち（１）特異的固定化抗原マリグニンと試験管内
で００分間以内に急速に結合するターゲット連結合性グ
ロブリン（Ｆ　−Ｔ　Ａ　Ｇ　ＸＦ　ａｓｔ　Ｔ　ａｒ
ｇｅｔａｔｔａｃｈｉｇ　−ｇｌｏｂｕｌｉｎ）および
（２）特異的固定化抗原マリグニンと試験管内で２時間
以内に徐々に結合するターゲット遅結合性グロブリン（
Ｓ−ＴＡ　Ｇ　）（Ｓ　ｌｏｗ　Ｔ　ａｒｇｅｔ　−ａ
ｔｔａｃｈｉｇ　−ｇｌｏｂｕｌ　ｉｎ）である（実施
例１Ｏ１ＩＯＡ参照）。５−ＴＡＧおよびＦ’−ＴＡＧ
の両者共血清から生産され、個人の血清中におけるその
濃度の測定は癌の診断試験の基礎となるが、これは米国
特許第４１９６１８６号の対象である。しかし。各抗原
種の従来の生産方法では互いに相手を全く含まないもの
は得られなかった。この発明はこの点に著しい改善をな
すものであり、５−ＴＡＧ種のみを生産する独特な新規
細胞系、Ｆ−ＴＡＧ種のみを生産する一細胞系および上
記両種を生産する一細胞系に関するものである。
上に要約したように、両種を含有する公知の多クローン
性抗マリグニン抗体の特異的癌細胞破壊能力（細胞毒性
）は米国特許第４１９５０１７号に記載されている。本
発明者は、ここに始めて５−ＴＡＧすなわち単クローン
性抗マリグニン抗体遅型（Ｍ　Ａ　Ｍ　Ａ　−Ｓ　）（
Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａ　ｎｔｉ　−Ｍａｌ　１ｇｎ
１ｎ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　−Ｓ　ｌｏｗ）として生産さ
れた単クローン性生産物の単一種が、癌細胞に優先的に
結合するがそれを破壊しないことを発見した。また、こ
こに始めてＦ−ＴＡＧすなわち単クローン性抗マリグニ
ン抗体−速型（Ｍ　Ａ　Ｍ　Ａ　−Ｆ　）　（Ｍ　ｏｎ
ｏｃ　Ｉｏｎａｌ　Ａｎｔｉ−Ｍａｌｉｇｎｉｎ　Ａｎ
ｔｉｂｏｄｙ　−Ｆａｓｔ）として生産された単クロー
ン性生産物の単一種が、癌細胞に優先的に結合するがそ
れを破壊しないことを発見した。ここに始めて単クロー
ン性生産細胞により生産され、ＭＡＭＡ−ＦＳと称する
両抗体結合種は、ＭＡＭＡ−ＳとＭＡＭＡ−Ｆの２種の
抗体の人為的混合物と同様に、癌細胞に優先的に結合し
てこれを破壊する。この発明が明らかにする抗マリグニ
ン抗体種の結合機能と破壊機能の分離は、抗体を一方で
は診断に、他方では治療（癌細胞の破壊）に別々に用い
ることを可能にするという、重要な用途をもたらすもの
である。それぞれの新規生産細胞は、その特異的抗体生
産物によって独特の特徴を有するので、ＭＡＭＡ−Ｓプ
ロデューサー、ＭＡＭＡ−ＦプロデューサーおよびＭＡ
ＭＡ−ＦＳプロデューサーと称することにする。
各癌患者の血清中の抗マリグニン抗体濃度に関する過去
７年間にわたる慎重な研究の結果、長期すなわち１３な
いし４６箇月生存患者は１年以内に死亡した患者より抗
体レベルが高いという、この明細書（実施例１０Ａ）に
示す明確なデータが得られた。抗体レベルが低い患者（
８３，３％）は全部１年以内に死亡した（平均４．４±
３．５ケ月）。
この生存時間と抗マリグニン抗体の明白な関連性は、こ
の抗体の治療上の有用性に新たな意義を与えるものであ
る。一方では、抗マリグニン抗体の治療上の用途が先行
特許に明確に示されていたが（癌細胞に対する細胞毒性
）、余分の抗体の存在が癌細胞と正常細胞のバランスに
どれだけの違いをもたらすか、すなわちこの治療法が癌
患者の生存にどれだけ重要であるかについては、知られ
ていなかった。上記臨床研究は、存在し得る抗マリグニ
ン抗体のレベルが明らかに生存時間に関係すると思われ
ることを明らかにした。
この明細書は、特許生産物マリグニンを、永遠にしかも
実際上無限量の特異的選択的結合性かつ癌細胞破壊性の
抗マリグニン抗体を作る新規細胞の生産に用いることを
示し、したがって、そこに記憶する生産物は、新規な抗
癌性治療用生産物としての新たな重要性を得るものであ
る。
これらの新規な細胞は、特許生産物マリグニンとの接触
によってのみ人為的に作られたものであるが、その遺伝
装置内に特殊な抗体生産物を作るとの永久的な指令を漠
然と備えている。また、分裂し続けるとの指令を漠然と
備えている。これらの指令は、実施例中で実施されるの
が見られる。
当業者には、この遺伝情報を備えた特別な細胞構成成分
が単離され、試験管内での抗体生産という特殊な機能を
行なうように導かれ、それが極めて有用であることがわ
かる。例えば、そこに能率、コストその他の利益がある
なら、特別な細胞によって生産される特別な単クローン
性抗マリグニン抗体製造のための特殊な情報を有する生
産細胞の核酸を、他の細胞構成成分から分離して単離し
、他の型の細胞、例えばさらに早く分裂し、バルク生産
中汚染され難く、または実験室で継続培養する費用が安
価な細菌細胞中に導入することができる。
これは、特殊な生産物マリグニンにより生産される特殊
な細胞、ＭＡＭＡ−９，ＭＡＭＡ−ＦまたはＭＡＭＡ−
ＦＳが一旦生産され後述のように自己生存性であること
が明らかになれば使用され得る当技術の種々の応用方法
のほんの一例である。
抗マリグニン抗体は、抗原であるマリグニンと免疫学的
に特異的に反応するだけでなく、アストロシチン（Ａｓ
ｔｒｏｃｙｔｉｎ）、レコグニン（Ｒｅｃｏｇｎｉｎ）
し、およびレコグニンＲのような構造的に近縁関係にあ
る生産物とも反応する。したがって、この発明は、レコ
グニン類（Ｒｅｃｏｇｎｉｎｓ）と検する化合物の新規
な群をも対象とするものである。レコグニン類は、腫瘍
細胞または人工的癌細胞を処理し、目的とする生産物を
分離することにより作られる。
レコグニン類は、レコグニン類または担体つきレコグニ
ン類を体液と接触させることによりそのケモレシブロカ
ル類（Ｃｈｅｍｏｒｅｃｉｐｒｏｃａｌｓ）を製造する
ために用いられる。これらのケモレシブロカル類は、診
断および治療目的、すなわち癌の診断と治療に用いられ
る。
この発明のレコグニン類の１つはアストロシチンである
。アストロシチンは脳腫瘍組織、好ましくは脳神経膠原
組織から製造された、アストロシチン前駆体を含む蛋白
質フラクションはまず組織から抽出される。好ましい抽
出方法は、アストロシチン前駆体を含む蛋白質フラクシ
ョンを溶解可能とするために、ホモジエニゼーションま
たは他の細胞および組織粉砕技術の条件下に組織を中性
緩衝液と処理することである。
この時点では、アストロシチン前駆体は、まだ例えば蛋
白質、糖蛋白質、リボ蛋白質、核酸、核蛋白質等を含む
多数の高分子量物質と結合している。次いで、可溶化さ
れた蛋白質は得られた組織抽出物から分離される。組織
からの抽出溶液は清澄化により不溶性粒子か除去される
。低分子量の汚染物は、得られた溶液から蒸発濃縮技術
によって除去される。次いで得られた溶液は、他の汚染
物からアストロシチン前駆体を引離すために、ｐＫｌ〜
４を有する蛋白質成分が得られるように処理される。す
なわち、例えば溶液がクロマトグラフィカラムに通され
、酸性を増加して行く溶媒で溶離される。中性またはｐ
Ｋ４までの酸で溶離されるフラクションはすべて捨てら
れ、Ｉ）Ｋ範囲１〜４を有するフラクションは収集され
る。溶離液を処理すると分子量約８０００の物質が得ら
れる。
これは、例えば、材料をまず濾過して低分子量の物質す
なわち分子量１０００以下の物質を除き、再び濾過して
分子量約２５０００以上の物質を除くことにより達成さ
れる。１０００〜２５０００の範囲の分子量を有するフ
ラクションはその後さらに薄層ゲル（ＴＬＧ）クロマト
グラフィによって処理され、アストロシチンが得られる
。
このように、アストロシチンはホモジエニゼーションお
よび高速遠心分離をくり返すことによって脳神経膠原を
中性緩衝液で抽出し、得られた抽出物から約１〜４の範
囲のｐＫを有するフラクションを分離し、そのフラクシ
ョンから高分子量すなわち約２３０，０００以下の分子
量を有する物質を分離し、それから約８，０００の分子
量を有するアストロシチンを単離することによって、製
造することができる。
上記の方法によって製造されたアストロシチンは、定量
的沈降素試験およびラフタロニー寒天内拡散試験におい
て、特異的抗体と反応して単一系の沈殿を形成し、水お
よび酸性または中性ｐＨを有する水溶液に可溶であり、
アルカリ性ｐＨでは不溶であり、分光光度計による吸収
ピーク波長が２８０ｍμであり、約８，０００の分子量
を有していることを特徴としている。
アストロシチンの特徴は、また、グルタミン酸およびア
スパラギン酸の残基の割合かきわめて高く、ヒスチジン
に対するこれらの酸の割合かきわめて高いことである。
アストロシチンの分析はさらに後述する。
上記と同様にして、マリグニンと称せられる他のレコグ
ニンは、人為的な癌細胞すなわち試験管内で生育した癌
細胞から製造された。マリグニンは、約１０，０００の
分子量を有し、アストロシチンと類似しているか同じで
ないアミノ酸残基成分を有する。すなわちマリグニンは
、グルタミン酸およびアスパラギン酸の割合が高くかつ
ヒスチジンに対するこれらの酸の割合が高い。マリグニ
ンの分析はさらに後述する。
すなわち、マリグニンは、培地中で生育した人為的な癌
細胞をホモジエニゼーションおよび高速遠心分離をくり
返すことによって中性緩衝液で抽出し、得られた抽出物
から約１〜４の範囲のｐＫを有するフラクションを分離
し、そのフラクションから高分子量すなわち約２３０，
０００以下の分子量を有する物質を分離し、それから約
１０゜０００の分子量を有する物質を単離することによ
って、製造することができる。
この方法で製造されたマリグニンは、定量的沈降素試験
およびウフタロニー寒天内ゲル拡散試験において特異的
抗体と反応して単一系の沈殿を形成し、水および酸性ま
たは中性ｐｉ（を有する水溶液に可溶であり、アルカリ
性ＰＨでは不溶であり、分光光度計による吸収ピーク波
長が２８０ｍμであり、約１０，０００の分子量を有し
ていることを特徴としている。
レコグニンの特徴は、さらに、ブロモアセチルセルロー
スと複合してブロモアセチルセルロース−レコグニンを
形成することが可能であり、哺乳類に注射した際に特異
的抗レコグニン抗体を生じ、その抗レコグニンが試験管
内に脳腫瘍細胞に毒性を示し、後に詳述するように、フ
ルオレスセインと組あわせたとき神経膠腫細胞に蛍光を
発することである。
アストロシチン、マリグニンおよびそれらに類似した物
質の如きレコグニンは、例えば材料をレコグニンで被覆
する等の方法により生物学系に導入して異質な反応を減
少させ得る物質として有用である。別の例は、生物学系
にタモレシプロカル類を生成させるために、レコグニン
を導入することである。これらはまた、これらが−員を
なす特別な生物学系の生長を栄養的に促進するのに使用
されてもよい。レコグニンの有用性はまた、生物学系に
おける適応性を促進するために担体を有するレコグニン
の複合物からなるターゲット試薬（Ｔａｒｇｅｔ　ｒｅ
ａｇｅｎｔ）を製造できることにある。例えば、そのレ
コグニン複合物はレコグニン自体の物理的化学的特性を
有している。担体は、レコグニンと複合物を形成すると
ともに生物学的に実質上不活性である物質から選定され
るべきである。
ポリペプチドまたは蛋白質と安定な複合物を形成するい
かなる公知物質もレコグニンと複合するために有用であ
る。その−例として、ブロモアセチルセルロースの如き
セルロースを基礎とする材料がある。生物学的に不活性
であることに加えて、その担体は、この明細書で述べる
目的に有用なレコグニンの特有の物理的化学的性質を変
化させないものでなければならない。
レコグニンとその担体とから成る複合物は、これと接触
する任意の生物学系のタモレシプロカル類を製造し、分
離し、確認するのに有用である。
レコグニン−担体複合物はまた、導入される生物学系の
タモレシプロカル類前駆体の生産を促進するのに有用で
ある。
クモレシプロカル類の１つの類は、抗レコグニン類すな
わち抗アストロシチンおよび抗マリグニンである。これ
らの物質は生物学系にレコグニンを注射して製すること
ができる。レコグニンの免疫学的に有効な投与量は、抗
体製造における公知技術に従って抗体反応を誘発するよ
うに体内組織または休演と接触させる。抗レコグニンは
、下記薬剤を抗レコグニンとの複合物の形で生物学系に
導入することからなる。生物学系の特異細胞または部位
に診断剤、栄養剤および治療剤の如き物質の投与に使用
することができる。抗レコグニンはまた、着色または放
射性標識が腫瘍細胞にのみ生じるように、染料および放
射性物質の如き標識物質を配合した抗レコグニンを組織
学的区画に適用することによって、上記区画に腫瘍細胞
が存在するか否かを診断するのに有用である。さらに抗
レコグニンの用途としては、レコグニンの免疫的に有効
な投与量を哺乳類その他の生物学系に注射することによ
って、他の有用なクモレシプロカル類（例えば後述する
ＴＡＧ）の哺乳類での生産高を増加することもある。
クモレシプロカル類の別の類は、これらクモレシプロカ
ル類と複合したターゲット試薬である。
例えば、ブロモアセチルセルロースの如き担体と複合し
たアストロシチンのターゲット生産物は、抗アストロシ
チンとの接触に使用される。このタイプの化合物は、複
合されて、生物学系の特異細胞または部位に診断剤、栄
養剤および治療剤を投与するために使用することができ
る。これらの化合物はまた精製処理のためにも使用でき
る。例えば、抗アストロシチンは、プロモアセチルセル
ロースーアストロシチンー抗アストロシチンを酸または
ブロテイナーゼ酵素で加水分解して製造することができ
る。ターゲット試薬はまた、ターゲットの免疫学的に有
効な投与量を体内組織または体液に接触させるなどによ
って、生物学系内のＴＡＧ生産物（後述）の量を増加す
るのに役立つ。
クモレシプロカル類のさらに別の例は、ＴＡＧ試薬（タ
ーゲット結合性グロブリン）である。ＴＡＧ生産物は、
ターゲット試薬を種々の期間体液と接触させて複合物を
生成し、それからＴＡＧを弓き離すことによって製造さ
れる。２つの有用な実施態様は５−ＴＡＧおよびＦ−Ｔ
ＡＧである。
Ｓ−Ｔ　Ａ　Ｇ　（Ｓ　ｌｏｗ　−Ｔａｒｇｅｔ　−Ａ
ｔｔａｃｈｉｎｇ　−Ｇ　１ｏｂｕｌｉｎ）の製造方法
は、血清その他の体液をターゲット生産物（例えば、ブ
ロモアセチルセルロース−マリグニン）と約２時間また
はそれ以上、低温例えば４℃で反応させ、例えば約３７
℃の温度で約２時間希酸で処理することにより５−ＴＡ
Ｇを生成物から分離することからなっている。この方法
によって製造された製品５−ＴＡＧは水性緩衝液に可溶
であり、ラフタロニー寒天内ゲル拡散試験において対応
レコグニンとの単一系沈殿を生成し、セロファン膜で透
析不能であり、１０，０００以上の分子量を有する分子
を保持するミリボア・フィルターで留保され、薄層ゲル
クロマトグラフィーによって測定すると異なった凝集状
態において約５０．０００およびその倍数のマクログロ
ブリン域に入る分子量を有し、分光光度計吸収ピーク波
長２８０ｍμを有することを特徴とする。
Ｆ−ＴＡＧ（Ｆａｓｔ−Ｔａｒｇｅｔ−Ａｔｔａｃｈｉ
ｎｇ−Ｇｌｏｂｕ　ｌ　ｉｎ）を製造する方法は、血清
その他の体液をターゲット生産物（例えば、ブロモアセ
チルセルロース−マリグニン）と約１０分間低温例えば
４℃で反応させ、例えば約３７℃の温度で約２時間希酸
で処理することによりＦ’−ＴＡＧを生成物から分離す
ることからなっている。この方法によって製造された製
品Ｐ−ＴＡＧは水性緩衝液に可溶であり、ラフタロニー
寒天内ゲル拡散試験において対応レコグニンとの単一系
比殿を生成し、セロファン膜で透析不能であり、２５，
０００以上の分子量を有する分子を保持するミリボア・
フィルターで留保され、薄層ゲルクロマトグラフィーに
よって測定すると異なった凝集状態において約５ｏ、ｏ
　ｏ　ｏおよびその倍数のマクログロブリン域に入る分
子量を有し、分光光度系吸収ピーク波長２ＢＯｎ＋μを
有することを特徴とする。
ＴＡＧ製品は既知容量の哺乳類の血清その他の体液によ
って作られる５−ＴＡＧ及びＦ−ＴＡＧの濃度を測定し
、この濃度と癌を示すものとして定められた値とを相関
させることによって、生きた哺乳類の癌腫瘍を探知する
のに有用である。ＴＡＧ製品はまた組織学的部位の腫瘍
細胞の存在を診断するのに有用であるが、これは染料ま
たは放射性物質のような標識物質と組合わせたＴＡＧを
当該部位に適用し、それによって腫瘍細胞にのみ着色又
は放射性標識が生じることからなる方法である。さらに
ＴＡＧ製品は腫瘍細胞に対して細胞毒性があることが判
明した。ＴＡＧ製品はまた、診断、栄養、および治療用
薬剤をＴＡＧ製品と複合させたものを導入することによ
って、これらの薬剤を特定の細胞または部位に届かせる
のに有用である。
細胞が完全に特定の場所を占めるようになると、植物ま
たは動物における正常の細胞分裂は制限されるかまたは
抑止される。（ａ）正常の細胞が、自己の占め得る場所
を埋めたことを「認識する」機構および（ｂ）この認識
機構の作用が今度は細胞分裂を抑止する機構は共に知ら
れていない。この発明者は、先に正常の認識および感知
が生じたとき前駆体の濃度が増大し、粒子および細胞の
認識および感知に関係し、細胞相互の結合に関係するよ
うな一群の化合物を製造した。これらの化合物はレコグ
ニン類と呼ばれる。この発明者は、通常の癌細胞からこ
れらの化合物を製造しようと試みたところ、これらはそ
のままでは存在しないことがわかり、また、癌細胞が（
ａ）その正常な体積を占めたことを認識する能力および
／または（ｂ）その正常な体積を占めた際に分裂を止め
る能力を失うと同時にその分子構造に変化が生じたこと
がわかった。
レコグニン類は、細胞分裂を認識し、止めることができ
ないことと関係して癌細胞の立体配置特性を模倣する物
理化学的特性を有する化合物である。レコグニン類の使
用は癌の作用機構の洞察以上に重要なものである。何故
ならばこれによって癌の診断および治療ならびにその予
防について役立つ直接製品ならびに方法が提供されるか
らである。
この発明者は、レコグニン類特にマリグニン類を製造す
るのに人工的に培養した細胞を用いることができる方法
を発見した。ここに開示する方法の利点の一つは、レコ
グニン類およびそれから作る新製品が事実上無制限の量
で効率的に製造することができるということである。
この発見は癌研究の分野を超えるものであり、またすべ
ての生長および新陳代謝に影響を与えようと望む一切の
生物学系に直ちに適用できるものである。すなわち、特
定の化合物または人工的培養した適当な細胞型の化合物
を製造することにより、またこれらの物質から製品を更
に製造することにより、先ず最初に生体系における組織
、細胞、細胞器官、サブオーガネル分子あるいは分子集
合体に特定の影響を及ぼすことができる。こうして、発
育期の重要時期における特定の栄養効力、特定の診断上
、予防上および治療上の方法、並びに人工生物電気系の
構成（組織または臓器移植における如く）がすべて影響
を受けることができる。これらの人工生物電気系は、こ
れらに隣接する通常の組織または成分の特定のレコグニ
ンまたはレコグニンケモレシブロカルの特性を持つよう
にすることができるので、「異物」として「認識」され
ることを避け、また拒絶反応のような外来物に対する通
常の反応を避けるものである。
本発明の他の態様は、特性の脳生産物（アストロシチン
）に対する価値の高い特定の抗体状生産物（抗アストロ
シチン）を製造することであり、この抗体状生産物を種
々の種の神経系の特定の点に特に複合し、これに対する
特定の伝達担体として用いることができることである。
ターゲット結合性グロブリン（ＴＡＲＧＥＴＡＴＴＡＣ
ＨＩＮＧ−ＧＬＯＢＵＬＩＮＳ、ＴＡＧ）は２つの反応
によって生産されることから命名された。すなわち、第
１に、生物学的流体をマリグニン類を模倣する物理化学
的立体配置を含みターゲットと呼ばれる合成複合体と反
応させ、第２に、特定のＴＡＧを複合体から分離させ、
生成したＴＡＧを測定することにより、その生体に腫瘍
があるかどうかについて生きた生体の生物学的流体から
の定量的表示を得ること、すなわち腫瘍の診断試験であ
る。ＴＡＧ生産物および抗マリグニンは物理化学的にマ
リグニンを浦なうものであるため、これらはケモレシブ
ロカル類と命名される。
さらに、この発明者は、血清と使用する特定のターゲッ
ト試薬との反応に許される時間によって、また複合され
た生産物の分離に許される時間によって、二つの定量的
および定性的に明かに区別されるＴＡＧ生産物を製造す
ることができることを発見した。
脳腫瘍のある、および種々の他の医学的故障のある、な
らびに何ら明かな疾病の徴候がない多数の異った人々か
ら製造することができたこれらの生産物の量を検査した
後、一定の個人について生産することができたこれら２
つの新規生産物の量は、その個人に脳腫瘍があったかど
うかを示すものであることが明かとなった。それゆえ脳
腫瘍の新規血清診断試験法が発見されたのである。
これらの新規生成物の、血清その他の生物学的流体から
脳その他の腫瘍を診断する用途以外の効用は、ＴＡＧお
よび抗レコグニン化合物が脳腫瘍の外科手術で取除かれ
た脳腫瘍およびその周囲の組織の組織学的部位において
優先的に神経膠腫瘍細胞につくという証拠で説明される
。この腫瘍細胞のＴＡＧおよび抗レコグニン類による優
先的標識は標準的な免疫蛍光技術によって証明される。
こうして、確度が全く新規な組織学的検査によって、腫
瘍細胞が除去した組織の中にあるかどうか、および腫瘍
細胞が除去した組織の縁にまで浸透しているかどうかを
決定し、腫瘍が脳その他の器官にまだ残っている可能性
または腫瘍細胞が除去した組織の周辺からなくなってい
る可能性を示し、腫瘍のすべてが脳または他の器官から
取除かれた可能性を示す方法が得られる。さらに、上記
のように製造したＴ、ＡＣおよび抗マリグニン類は、試
験管内組織培養で生長した脳神経膠腫細胞に対して細胞
毒性があることがわかった。ここでは組織培養で生長し
たものであるが、他の媒体中の腫瘍細胞に対するこの高
い親和性は、新規生産物ＴＡＧの特異的結合能力をさら
に証明するものであり、合成生産物ターゲットおよび組
織学的部位における腫瘍細胞に関するＴＡＧの性質が表
わすようにＴＡＲＧＥＴ−ＡＴＴＡＣＨＩＮＧ−ＧＬＯ
ＢＵＬＩＮＧＳ（ＴＡＧ）の名称の妥当性を表わすもの
である。さらに、腫瘍細胞に対するＴＡＧおよび抗レコ
グニン類の細胞毒性は腫瘍にかかった疑いのある患者の
血清のさらに新しい診断試験法を提供する。すなわち、
例えば、これらの患者の血清または他の体液をターゲッ
ト試薬と反応させてＴＡＧを製造し、生産物ＴＡＧは組
織培養中で生長する腫瘍細胞に対する細胞毒性を検査す
る。一定の個人の血清から製造することができるＴＡＧ
によって表わされるＴＡＧの濃度および細胞毒仕度は、
単に診断上の利点があるばかりでなく、特定の患者につ
いての手術前および手術後の疾病の経過を追跡する上に
も価値があるものである。放射能および染料トレーサー
をＴＡＧと結合すれば、生体内の腫瘍の診断およびその
正確な部位の判定をする場合に有用な新規なＴＡＧ生産
物を作ることができる。すなわち、適当に標識したＴＡ
Ｇを動脈内、静脈内、脳を髄液内、直接脳組織またはそ
の窩内に注射すれば、ＴＡＧが特異的に結合するのは腫
瘍細胞のみであるから、放射能測定または結合した染料
の視覚化により、脳腫瘍の存在を示すことができる。ざ
らに、この方法によると、脳腫瘍の部位を正確に視覚化
することができる。
これは、脳腫瘍を標識するため兎の血液で作った抗アス
トロシチンを用いる生体内診断法の改良と見なすことが
できる。なぜならば、人間の血清から作ったＴＡＧ試薬
を用いれば異蛋白反応の可能性を避けられるからである
。ＴＡＧ試薬および抗レコグニン類は試験管内および生
体内の双方での腫瘍細胞を含むアストロシチン前駆体に
優先的に結合することができる化学的特性を持つので、
例えば放射性のプロトン捕獲剤または他の毒性のある物
理的または化学的試剤と組合わせて、これらの毒性のあ
る物質の結合特性により隣接する正常細胞と比較して腫
瘍細胞に優先的に局在化することができるように、診断
学的と同じく治療的にこれらの生産物を用いることがで
きる。この選択性は、腫瘍の効果的な化学的または物理
的治療を達成するための決定的なまたは少くとも一つの
決定的な要素として、またこれまで達成されなかった要
素として、普遍的に認められる。このように、ＴＡＧ生
産物は優先的に腫瘍細胞に結合する点で有効性を示し、
したがって治療剤であることを示したものである。
悪性の腫瘍を持った患者の血清においては、下記の実施
例に見られるように、ＦＡＳＴ−ＴＡＧ（Ｆ−ＴＡＧ）
と区別される一つの型のＴＡＧ、すなわち、５ＬＯＷ−
ＴＡＧ（Ｓ−ＴＡＧ）が、このような腫瘍のない患者に
おけるよりも、一定量の血清から比較的多量に製造する
ことができる。このことは、ＴＡＧの自然に発生する前
駆体（Ｐ−ＴＡＧ）のいずれか１つの濃度が増大するか
、またはＦ−ＴＡＧよりも５−ＴＡＧが比較的試験管内
でよく生産されるような他の要因があることを示唆する
ものである。
実際の合成生産物ターゲットおよびＴＡＧのその前駆体
に対する機能と、生体内に存在することがあり得るこれ
らに対する仮定されたが証明されていない細胞「抗原」
および循環「抗体」の機能との可能な関係は、まだ解明
されていない。例えば、抗体状の様式で、Ｆ−ＴＡＧお
よび５−ＴＡＧはラフタロニー寒天内ゲル拡散において
アストロシチンと単一の間欠系反応を生じ、兎にターゲ
ットを注射すれば、ターゲットと反応した後、兎の血清
から作るＴＡＧ生産物の収率増加を誘発する。
循環する抗体に似た前駆体が、分裂しない細胞に隠され
ている細胞抗原に対してもつ正常な水準があり得るとい
う発見は、一対のものの可能な作用についての問題を提
起する。ここで、細胞の増殖および細胞の死滅の制御に
関係して作用するＴＡＧ前駆体（Ｐ−ＴＡＧ）およびタ
ーゲット状物質が生体内に存在することを前提にする。
例えば、通常は直接は血清蛋白に曝されることのない細
胞構成物の露出が細胞分裂中に起ることがある。この細
胞構成物の露出の結果、構成物はターゲット状物質に変
換されるようになり、これに血清からＰＴＡＧ状分子の
結合が生じ、これが細胞分裂を刺激するかまたは抑止す
ることが考えられる。あるいは、傷害を受けたまたは作
用不良の不分裂細胞はＰ−ＴＡＧ状分子分子合が回復を
可能にするようなターゲット状物質を露出させることが
ある。
しかし、ある細胞条件の下ではＰ−ＴＡＧ状分子分子合
は細胞の破壊を招くことがある（例えば、ここに記載し
た合成で製造したＡＮＴＩＧＬＩＯＭＡ−ＴＡＧは組織
培養中で生長する神経膠腫細胞に著しく細胞毒性がある
）。このことは、細胞分裂の制御について、また生体の
生涯を通じて体内の個々の細胞の修復または除去につい
ての正常な機構の模範を示すものといえよう。脳神経膠
原のような急速に分裂する癌細胞に起るように、細胞構
成物の露出が異常に増大して異常に大量の細胞ターゲッ
ト状物質が形成される場合は、１つの型の血清Ｐ−ＴＡ
Ｇの濃度が他のものに比べて増大することが起ることが
ある。
前駆体の実際の作用がどのようなものであろうと、ここ
に記述した方法によって悪性の腫瘍のある患者の血清か
ら試験管内で製造することができるＴＡＧの主要な１つ
の型、５ＬＯＷ−ＴＡＧ（ＳＴＡＧ）の相対量の増加は
、下記の実施例に記載した血清診断試験の基礎となるも
のである。
この明細書に記載する新規な人工生産細胞により、この
発明にしたがって５−ＴＡＧおよびＦ−ＴＡＧの特殊な
単クローン性種を生産する能力が得られた結果、従来多
クローン性形式の生産のため分離できなかったＴＡＧ分
子のある種の機能が分離できることになった。すなわち
、従来のＴＡＧ生産物が悪性細胞に対する選択的結合性
と悪性細胞を破壊する細胞毒性の両性質を有していたの
に対して、この明細書に記載するＴＡＧの単クローン性
型すなわちＭＡＭＡ−ＡおよびＭＡＭＡ−Ｂは、選択的
結合性を示し悪性細胞に特異的蛍光を与えるが細胞毒性
を有しない。ところが、ＭＡＭＡ−ＡおよびＭＡＭＡ−
Ｈの混合物は蛍光と細胞毒性を示す。したがって、診断
上の使用と治療上の使用とがはじめて可能になった。
以下の実施例はこの発明を説明するものである。
実施例１ 粗アストロシチン先駆体含有分画の生産。
人間の脳神経原種腫瘍組織を切り取り、表面の血管と普
通の脳組織とを可能な限り分離させる。
分離した腫瘍組織の代表的な量１１ｇをとり、これを１
，５ｇの部分６個および１．０ｇの部分２個に分ける。
ついで各部分を次のように処理する。
各部分を中性緩衝溶液中、超音波または他の機械的手段
によりホモジエネート化する。たとえば、各部分をワー
ニング混合機中、０．００５Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７）の
１００　ｃｃ／ｇ組織中組織上ジェネート化する。蛋白
の変性を防ぐために、上記ホモジェネーション化処理は
冷条件下に行うべきである。たとえば、該混合機を０〜
５℃の冷室で予じめ冷やし、約３分間で操作すべきであ
る。
ついで、ホモジエネートを清澄化するために、たとえば
冷凍した超遠心分離で８０，０００倍重力を３０分間作
用させて遠心分離させる。可溶性上澄液を傾斜分離し、
冷却下に保つ。不溶性残渣は、さらに中性緩衝液１００
ｍ（２を用いて再びホモジエネート化し、上記と同様に
遠心分離処理し、得られる２番目の可溶性抽出物と上記
１番目のそれと合する。上澄液中、蛋白が５０マイクロ
グラム／１ｌＩＱ溶液以下となるまでホモジエネート化
と遠心分離をくりかえすとき、収率は非常に良好である
。このことは、はとんどの組織の場合、５回の抽出で達
成される。
このようにして得た溶液を合し、つづく透析の前に十分
に蒸発させることにより濃縮する。冷却下、０．００５
Ｍ燐酸緩衝液の透析により１５ｍ１２溶液を得る。この
溶液の量を記録し、一部を全蛋白の分析に用い、残部を
フラクション化してｐＫ１〜４の蛋白質フラクションを
得る。以下に述べるクロマトグラフィは好ましい分別法
である。
溶液を冷室（４℃）中、０．００５Ｍ燐酸ナトリウム緩
衝液で平衡させたＤ　Ｅ　Ａ、　Ｅセルロース（Ｃｅｆ
ｌｅｘ−Ｄ）カラム２．５　Ｘ　Ｉ　！　、０ｃｍ上で
フラクション化する。溶離溶媒は以下の溶媒（溶液）を
用いることにより段階的に変える。溶液（１）ＮａＨ，
ＰＯ４４，０４ｇおよびＮａｔＨＰ　Ｏ４６、５０ｇを
蒸留水＋５１２に溶解する（０．００５モル、ｐＨ７）
。溶１（２）ＮａＨｔＰｏ、　　８．５７ｇを蒸留水２
４８０ｍＱに溶解する（０．０５モル、ｐＨ，４，７）
。溶液（４）ＮａＨ，Ｐｏ、　　５９．６５ｇを蒸留水
２４７０ｍ１２に溶解する（０．１７５モル）。溶液（
５）ＮａＨｔＰＯ＋１０１．６ｇを蒸留水２４５５ｍ（
！に溶解する（０゜３モル、ｐＨ４，３）。溶液（６）
ＮａＨｙＰＯ−３４０，２ｇを蒸留水２４６５−に溶解
する（ｌ、０モル、ｐＨ４，１）。溶液（７）８０％燐
酸（Ｈ，ＰＯ，）２８３．６４ｇを蒸留水２４６０−に
加える（１．０モル、ｐＨ１，０）。
神経組織抽出物６〜１０ｄを加える。これをカラムに通
す。ついで溶液（１）を上に加え、溶液（１）３００ｍ
Ｑを受ける容器を取付けて重力でカラムに落下させる。
自動的なフラクション収集装置を用いて溶出液３ｍ１２
を集める。ついで、次の溶出背番号で、溶出溶液を変え
て用いる。溶液（２）：管８８で、カラム上溶液をレジ
ンの頂部に運び、ついで溶液（２）５０ｍ（を上から加
え容器を取付ける。
溶液（３）：管９８で、溶液をカラム上レジンの頂部に
運び、ついで、溶液（３）７５−を上から加え、容器を
取付ける。溶液（４）；管１１４で、溶液をカラム上レ
ジンの頂部に運び、ついで溶１（４）　１５０ｍ１２を
上から加え、容器を取付ける。溶液（５）：管１５５で
、溶液をカラム上、レジンの頂上にもっていき、ついで
溶液（５）１２５ｍ１２を上から加え、容器を取付ける
。溶液（６）：管１８７で、溶液をカラム上、レジンの
頂部にもっていき、ついで溶液（７）１７５ｍ１２を上
から加え、容器を取付ける。管２６０至るまで溶出を続
けて溶出を完了する。組織抽出物の各容量ごとに新たに
製したレジンを使用する。容管を蛋白の定量分析に付す
。管２１２〜２３０内の溶出液を合わせる。これは粗生
成物を含み、これからアストロシチンが得られる。
この過去においてフラクションＩＯＢと呼ばれる粗生成
物についてのデータは公表されているか〔プロティン・
メタボリズム・オブ・ザ・ナーバス・システム第５５５
〜６９頁（ブレナム・プレス、１９７０年）、ジャーナ
ル・オブ・ノイロサーンヤリー第３８巻、第２８１〜２
８６頁（１９７０年９月）参照〕、フラクションＩＯＢ
からはじめの新鮮な神経系組織１ｇにつき０．１−１０
ｉ９の量の生産物が分離される。これはアストロシチン
前駆体のほかに多数のヘキソース、すなわち、グルコー
ス、ガラクトース、マンノースなど、グルコサミン、ガ
ラクトサミンおよびマンノサミンなどを含むヘキソサミ
ンおよび時として、他の糖類、フコース、リボースおよ
び多分ラムノースなどを包含する共有結合した炭水化物
を種々の量含んでいる。また、高分子量の蛋白生産物、
いくつかの脂質および核酸を含んでいる。
実施例２ 粗アストロシチン前駆体含有フラクシタンからの精製ア
ストロシチンの生産。
アストロシチン前駆体含有フラクションをさらに汚染物
から分離する、好ましい具体例として、実施例１で得た
物質を代表的なカラム（４０ｃｍ（長）Ｘ２．５ｃｍ（
直径）、１９６−容）を用いてセファデックスＧ−５０
レジン上でクロマトグラフィに付す。
使用圧力は４０　ｍ１ＩＩＨＬ流量は３５−７時間、緩
衝液は０．０５モル燐酸緩衝溶液（ｐＨ７，２）を使用
する。最初のフロー・スルー（ｆｌｏｗ　ｔｈｒｏｕｇ
ｈ）のピークはアストロシチン前駆体と共に不純物を含
むが、つづくピークは不純物のみを含む。
好ましい具体例では、上記最初のフロー・スルー・ピー
ク中の生産物を、ついで、セファデックスＧ−１５上で
濃縮し、ついで実施例１と同じ溶液（１）〜（７）を用
い、実施例１と同じ溶出段階を用いてセレックスーＤの
カラムに通す。アストロシチン生産物は、上記と同じ管
（番号２１２〜２３０）内に、鋭いピークとして存在し
、セレックスーＤクロマトグラフィー上で多量の汚染物
質の存在を伴なわずに挙動する。
ついで低分子量汚染物をミリボアー・ディスク濾過など
の常套手段により除去する。好ましい方法として、アス
トロシチン生産物をミリボアー・ベリコン・ディスクＮ
ｏ、１０００．１３ｍｍ（このものは、１０００より大
きい分子量を有する物質をとらえ、１０００より小さい
分子量を有する物質を通過させる。）に通して濾過する
ことにより、塩および他の低分子量の汚染物質を分離す
る。アストロシチン生成物はベリコン・ディスク上に残
留し、実施例１の溶液（１）で洗浄することにより回収
される。
ついで、分子量約８０００の化合物を上記溶液から単離
することによってアストロシチンを得る。
その方法として、次の如き薄層ゲル（ＴＬＧ）クロマト
グラフィを用いるのが好ましい。装置としてボッホリン
ゲル・マンハイムＧｍｂＨ，ファルマシア・ファイン・
ケミカルズ・アンド・ＣＡＭＡＧ（スイス国）によって
設計された市販のものが使用される。セファデックスＧ
−２００のレジン（極微組品）２．５ｇを０．０２Ｍ　
　ＮａｔＨＰＯ，ＫＨｔＰＯ４中０．５Ｍ　　ＮａＣ１
の燐酸塩緩衝液ｐＨ６，８（６，６〜７．０）８５ｍ１
２内に準備する。室温で時々ゆるやかに混合しつつ２〜
３日間膨潤（Ｓｗｅｌｌ）させる。（マグネチツクスタ
ラーその他の撹拌手段を用いるべきでない。）膨潤した
ゲルを冷凍温度で３週間安定させる。しかし、細菌およ
び閑の増殖は膨潤ゲルを損なう。もし、ゲルをより長時
間保持するには、少量の静菌剤（ナトリウムアジド００
２％）を加えるべきである。２．５ｇの乾燥ゲルを用い
て、２０Ｘ２０ｃｍ、厚さ０　、５　ｎ＋ｍのガラス・
プレート２個を作る。このプレートは室温で１０分間乾
燥し、湿潤なチャンバー内で約２週間貯蔵することもで
きるし、また適当に予備平衡状態にした後直ちに使用す
ることもできる。（通常、平衡には夜間に、最低１２時
間要す。）。平衡の主要な機能は、静止相と移動相聞の
割合を正常化することである。水平位置で予備平衡状態
にしたプレートを用い、測定される物質をマイクロピペ
ットでスタートラインに点または線として付着させる。
０．２〜２％の蛋白溶液１０〜２０ｍ１２を顕微鏡カバ
ー・スライド（１Ｂ　Ｘ　ｌ　８ａｕｇ）の端に付着し
、ゲル表面に対置する。数秒後、溶液はゲルに浸潤する
全サンプルをまずカバー・スライド上に置き、ついです
ばやく適用する。もし使用する物質が十分でないと、分
離後に個々の斑点を位置づけることが困難である。もし
、余り多くの物質を適用すると、明確に分離することが
できない。操作を容易にするために緩衝液でサンプルを
希釈し、２２°の角度でプレートを傾斜させ上昇法でサ
ンプルの分離を行う。流量は１〜２　ｃｍ／時間が非常
に適している。標準物質（シトクロムＣ１ヘモグロビン
、ミオグロビンまたはブロモフェノールブルーで標識し
たアルブミン）はプレートを横切って異なる位置に適用
され、また未知物質の相対的距離（移動性）の計算のた
めの照合蛋白として機能する。
サンプルを適用した後、プレートを装置内に回置し、ペ
ーパーの芯をかるく下方におしてゲル層と十分に接触さ
せる。ペーパーの芯は浸漬させてはならない。過剰の水
分はぬぐい去る。容器内の液体溶媒は容器上端から１ｃ
ｍの所に一定に保つ。操作は、分離の進行に依存して通
常４〜７時間で完結する。有色物質により、直接分離を
行う。分離した蛋白の斑点は、クロマトグラフィの分離
を完了した後に、ＴＬＧプレートのペーパーシート・レ
プリカに移し、予じめ洗浄したメタノール＋Ｈ、Ｏ十酢
酸９０：５＋５で４８時間着色することにより、容易に
見えるようになる。ペーパーシートは３Ｉｌｌｆｆｌの
濾紙である。２０ＸＬＢｃｍのペーパー１枚をゲル層の
上に置き、ゲルとの丁度十分な接触を行なわせるために
おしつける（ロールする）。ペーパー（レプリカ）の下
に空気が捕われないように、かつ、ゲル層を乱さないよ
うに注意する。ゲル層から液層をペーパーに浸透し、約
１分後に除去し、直ちにオーブン中、６０℃で１５分間
乾燥し、通常の染色法で染色する。染色はｌＯ％炭酸ナ
トリウム中０．０３％ジアゾ化スルファニル酸（パウリ
−試薬）を用いてレプリカペーパーにスプレィすること
によって達成される。また、メタノール酢酸（９０：１
０ｖ／ｖ使用）中、アミドブラックの飽和溶液を用いて
染色を行うこともできる。染色時間は５〜１０分である
。脱色するには１容量の水と混合した２容量のメタノー
ルと酢酸（９０：１０）を用いて洗浄する。多量の洗浄
をせずにバックグランドの染色を低くするのは困難であ
る。もし、アストロシチンが染色されるのみなら、プレ
ート自体を約６０’Ｃ（空気循環手段を有するオーブン
中で）乾燥してもよい。単離のために、プレートを室温
で風乾する。過熱するとクラックが生ずるが、これは通
常、セフ入デックスＧ−２００プレートを１５〜３０分
で乾燥する温度、５０〜６０’Ｃを用いて回避すること
ができる。乾燥プレートはメタノール十ＨｔＯ＋酢酸（
７５：２０：５）の混合物中、１０分間膨潤させ、同じ
溶媒系中飽和アミドブラック中、５時間染色し、ついで
乾燥する前に、同じ溶媒中、２時間浸漬することによっ
て洗浄する。分子量を決定するために、直接プリント（
レプリカ）上またはデンジドグラム上、スターティング
ラインから各帯の中央までの距離を０゜０５ｍ＋ａの精
度で測定する。測定結果はシトクロムＣまたはミオグロ
ビン（対照蛋白として使用される）の移植距離（ｄｍ）
に対する試験蛋白の移動距離（ｄｐ）の比として定義さ
れるＲｍ値で表わされる。供試物質に対する標準物質の
移動距離の関係は式二（Ｒｍ＝−■−）で表わされる。
Ｒｍに対して、ｄｍ 使用された標準物質の分子量の対数をプロットすること
によって直線の検量線が得られる。この直線から未知の
蛋白の分子量が得られる。非常に正確な結果を得るには
、プレートに適用する前に、６個の等量蛋白サンプル溶
液を標準物質（この場合はシトクロムＣ）と混合すれば
よい。上記ＴＬＧ法により、アストロシチン生産物は、
標準シトクロムＣと対照して約０．８３±０．０２の距
離に個別の斑点として観察され、アストロシチンに対し
、分子量約８０００が得られる。この方法により、分子
量の若干の相違に基づいて、いくつかの個別の生産物が
アストロシチンから分離される。
すなわち、この点に汚染物質として選ばれる分子量約６
４０００，１４８０００および２３００００を有する３
つの生産物および時々分子量３２０００の生産物が見出
され、上記ＴＬＧ法で除去される。アストロシチン生産
物は、乾燥状態でゲルに吸われ、溶液（１）に溶解し、
遠心分離または他の類似の手段でレジンから分離される
。
この段階で製したアストロシチン生産物は蒸留水に可溶
であり、中性、酸性ｐ　Ｉ−１で可溶、アルカリｐＨで
不溶であり、分光光度計吸収ピーク波長２８０ｍμを有
する。これは、上記の如く約８０００の分子量を有する
ポリペプチドである。その共有結合したアミノ酸は、６
ＮＨＣ１での加水分解ついで自動的な定量測定により次
の如きアミノ酸の平均組成を有することが示される。
残基数（約） アスパラギン酸　　　　　　　　　　９スレオニン　　
　　　　　　　　　　　５セリン　　　　　　　　　　
　　　　　　　６グルタミン酸　　　　　　　　　　　
１３プロリン　　　　　　　　　　　　　　４グリシン
　　　　　　　　　　　　　６アラニン　　　　　　　
　　　　　　　９バリン　　　　　　　　　　　　４ １／２シスチン　　　　　　　　　　２メチオニン　　
　　　　　　　　　　Ｉイソロイシン ロイシン チロシン フェニルアラニン リジン ヒスチジン アルギニン 合計（約）８８ システィン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
ンモニア、イソデスモシン、デスモシン、ヒドロキシリ
ジン、リジンノルロスレオニン５セリン５グルタミン酸
はいずれも検出しうる量は存在せず、グルコサミンが痕
跡量存在する。
実施例１における出発脳腫瘍組織１１ｇから、上記方法
で精製アストロシチン約８！Ｉ９が得られる。
実施例３ 人工癌細胞培養におけるマリグニン前駆体の生産。
一般に、滅菌処理は注意深く行なわれる。
すべての溶液（たとえば、ハングの平衡塩（ＢＳＳ）、
Ｆ−１０栄養培地、子牛の胎児の血清、トリプシン溶液
）を、使用前に水浴中、約３５℃で約２０分もしくはそ
れ以上の時間インキスペードする。
細胞を腫瘍組織から分離し、下記の如き適当な培地を用
いることにより、多世代にわたって試験管内で増殖する
。滅菌溶液、たとえば、１２−プロパノールおよびアム
フイルまたはクレオリン溶液で予め洗浄したビー力を用
いる。
好ましい具体例として、人工癌細胞（すなわち、多世代
の間、試験管内で増殖した細胞）を２５０１Ｑ、容フラ
スコで生育する。細胞が増殖する液体培地を予め洗浄し
たビー力に入れる。ついで細胞をバンクのＢＳＳまたは
他の類似の溶液を用い、約３０秒間静かに洗浄する。撹
拌を避ける。すべての壁および表面を洗浄する。冷却下
で約１０分間、３０００　ｒｐＩｌｌの遠心分離により
溶液から細胞を除去する。培地を上記の如く、ビー力に
注ぐ。少量の緩衝したプロティナーゼ酵素溶液を加え、
細胞の消化を避けるためにすばやく洗浄する。好ましい
方法として、トリプシン溶液（ＥＤＴＡ）１〜２村を加
え、わずか１０秒間洗浄する。トリプシン溶液を流出さ
せる。
同じ量の新鮮なトリプシン溶液を加え、顕微鏡観察で細
胞がチャンバー壁から分離するのが見られるまでインキ
ュベートする。これには通常、５〜ｌＯ分間を要する。
適当な増殖培地、たとえばＦ−１０栄養培地１００ｍ１
２中、子牛の胎児の血清の７〜ｌＯ％溶液を５０ｚ（！
を加える。
細胞と共に新鮮な培地２５ｚＱを新しい増殖用チャンバ
ーに移して繁殖させる。両チャンバーをインキュベータ
ー中、３５℃で約７日間置く。本実施例におけるこれま
での操作により、人工筋培養細胞は約７日ごとに２つの
新しい培地に分割される。
各増殖チャンバーについて、この全操作を、はぼ７日の
間隔をおいて望ましい頻度だけ繰り返す。
このようにして、試験管内の生育細胞数はほぼ７日ごと
に２倍になる。
約７日間の増殖の後、マリグニンを製造するために細胞
を抽出する。たとえば、上記各２５０収増殖用チヤンバ
ー内の増殖細胞は以下の如く回収される。
培地を遠心分離管に移し、冷却下、３０００ｒｐ−で１
０分間遠心分離する。培地を捨てる。増殖用チャンバー
内に残っている細胞をチャンバー壁から剥離して、中性
緩衝溶液で遠心分離機内で洗い流し込む。細胞を中性緩
衝溶液で２回洗い、再び、冷却下、３０００　ｒｐｍで
遠心分離し、培地を捨てる。粗マリグニン前駆体含有フ
ラクションの抽出のための準備ができるまで中性燐酸塩
緩衝液！ｏｊｌＱ中に洗浄した細胞を懸濁させる。
実施ｆ１１４ 粗マリグニン前駆体含有フラクションの生産。
実施例３で製造した、中性緩衝液中に懸濁する洗浄した
細胞を、大部分の蛋白の変性を避は得る条件下に機械的
に粉砕する。好ましい方法として、洗浄した細胞を冷却
下、超音波で２０秒間処理する。超音波処理後、細胞残
渣を３０分間、３００００　ｒｐｍで遠心分離し、上澄
液を傾斜分離する。
緩衝溶液１０ｘ（部を用いて残留する細胞残渣を洗浄す
る。超音波処理および遠心分離処理を上記の如く行ない
、上澄液を合わす。この操作を再度繰り返す。
上澄液を合わせ、十分に蒸発させて容量を約３０ｘ１２
から約６〜７ｘ（ｌにする。標本を全蛋白分析に用い、
残部を、アストロシチン前駆体についての前記実施例１
に記載の方法に従ってフラクション化する。
実施例５ 粗マリグニン含有フラクションからの精製マリグニン生
産物の生産。
アストロシチンについての実施例２の方法ｊこよってマ
リグニン生成物をさらに汚染物質から分離する。
好ましい具体例のＴＬＧ段階では、マリグニン生産物は
標準シトクロムＣに対比して約０．９１±０．０２の距
離に個別の斑点として観察され、マリグニンに対し分子
量的ｔｏｏｏｏが与えられる。
この段階で製せられたマリグニン生産物は蒸留水に可溶
であり、中性または酸性ｐＨで可溶、アルカリｐＨで不
溶であり、分光光度計吸収ピーク２８０−μを有する。
これは分子量約ｔｏｏｏ。
を有するポリペプチドである。本島の共有結合アミノ酸
は６ＮＨＣＩ２で加水分解し、ついで定量測定によって
以下のアミノ酸の平均組成を有することが示される。
アスパラギン酸 スレオニン セリン グルタミン酸 プロリン グリシン アラニン バリン　　　　　　　　　　　　　　６１／２シスチン
　　　　　　　　　　　　１メチオニン　　　　　　　
　　　　　　　２イソロイシン　　　　　　　　　　　
　　４ロイシン　　　　　　　　　　　　　　　８チロ
シン　　　　　　　　　　　　　　　３フェニルアラニ
ン　　　　　　　　　　　３リジン　　　　　　　　　
　　　　　　　６ヒスヂジン　　　　　　　　　　　　
　　２アルギニン　　　　　　　　　　　　　　　５合
計（約）８９ アミノ酸、システィン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロ
イシン、アンモニア、イソデスモシン、デスモシン、ヒ
ドロキシリジン、リジンノルロスレオニン５セリン５グ
ルタミン酸は検出し得る量存在しない。
実施例３の１２個の２５０ｍＱ反応チャンバーから得ら
れる純マリグニンの収量は、マリグニン約ｌ朽である。
実施例６ レコグニンの加水分解的分裂。
レコグニンの溶液（この場合はアストロシチンかマリグ
ニン）をｐＨ１〜２で装置する。７〜に４日後に薄層ク
ロマトグラフィーでこの生産物は分子量が約２００減少
することを示す。この溶液を更に長く放置すると約２０
０減少量の単位が７〜ｌＯ日に分裂する。すなわち、ア
ストロシチンではｓ、ｏｏｏから分子量が減少し、マリ
グニンでは１０，０００から分子量が減少し、各場合連
続的に約２００の単位減少する。
アストロシチンの物理化学的異性は各生産物で４．００
０分子量まで維持される。マリグニンの物理化学的特異
性は各生産物で５，０００分子量まで維持される。これ
は抗アストロシチンおよび抗マリグニンのそれぞれに対
するラフタロニー寒天内ゲル拡散試験で示される。
この分裂はまた、トリプリンおよびその他のプロテアー
ゼの使用のように酵素的にも同じ結果で達成することが
できる。
レコグニンの加水分解的分裂によって製造されたこれら
の化合物の分子量は次式によってほぼ定義される。
アストロシチンの物理化学的特異性を有する生産物に対
しては：　４０００＋２００Ｘ＝Ｙマリグニンの物理化
学的特異性を有する生産物に対してｆｉ：　５０００＋
２ＱＱＸ＝ＹここにＹは生産物の分子量でＸは０〜１９
の整数である。
実施例７ レコグニンとの人工組織または器官の製造。
プラスチック、金属またはその他の適当な硬質材料の硬
質壁の管を、レコグニン（この場合、アストロシチンま
たはマリグニン）の高濃度（すなわち１０ｘｇ／＊Ｑ）
の粘稠溶液にすべての表面が被覆されるまで浸漬または
含浸させる。あるいはまた、レコグニン溶液を、すべて
の表面が十分に被覆されるまで加圧下に管の中お上び肩
囲に通す。次に管を風乾または減圧下に乾燥するか凍結
乾燥する。
被覆操作をレコグニンの多くの分子層の被覆ができるよ
うに数回繰り返す。
この管は生きている哺乳動物の隣接する組織または体液
中にアストロシチンまたはマリグニン様の前駆物質を含
有する空洞または組織中にいつでも置くことができる。
この人工組織または器官はレコグニン被覆のない異種物
質が起こす反応を最少にするか除くために用いられる。
その他の形状の人工組織または器官が同様にし製するこ
とができる。
実施例８ レコグニン類からターゲット試薬の製造。
前記実施例２で製造したアストロシチンまたは実施例５
で製造したマリグニンを担体と混合してターゲット試薬
を製造する。
好ましい実施態様において、アストロシチンまたはマリ
グニンを０　、１５　Ｍ　Ｎ　ａＨｔ　Ｐ　０４クエン
酸緩衝液（ｐＨ４，０）に溶解する。ブロモアセチル樹
脂、たとえば冷所に保存したセルロースＩｇ当たり臭素
ｌ、０〜１．５ミリモルを有するブロモアセチルセルロ
ース（ＢＡＣ）を０　、　ｌ　５　Ｍ　ＮａＨ＊ＰＯ１
４１衝液（ｐＨ７，２）中に準備する。ｐＨ７，２の緩
衝溶液を注ぎ出し、上記０　、１５　ＭＮａＨｔＰ　０
４クエン酸緩衝液（ｐＨ４，０）を加えることにより、
得られた緩衝液のｐＨを４に調節する。アストロシチン
またはマリグニン溶液とＢＡＣの溶液（ＢＡＣのレコグ
ニンに対する比１０：ｌ）を室温で３０時間撹拌した後
、遠心分離する。
レコグニンに結合させるために用いるＢＡＣ上のすべて
の部位は結合に関与していることが好ましい。これは次
のようにして達成される。上に記載した段階において得
られた上澄液を凍結乾燥し、ＢＡＣに結合していないア
ストロシチンまたはマリグニンの量を知るために蛋白含
量を測定する。
複合ＢＡＣ−アストロシチン（またはＢＡＣ−マリグニ
ン）を再び０．１Ｍ重炭酸塩緩衝液（ｐＨ８。
９）に懸濁し、４℃で２４時間撹拌してＢＡＣおよびア
ストロシチンまたはマリグニンの間の化学結合を形成さ
せる。２４時間後、この懸濁液を遠心分離し、上澄液の
蛋白を分析する。複合ＢＡＣ−アストロシチンまたはＢ
ＡＣ−マリグニンを０゜０５Ｍアミノエタノール−０，
１Ｍ重炭酸塩緩衝液（ｐＨ８，９）中に再懸濁して未反
応臭素を閉塞する。この懸濁液を遠心分離し、アミノエ
タノールが存在するからその上澄液はこれを分析に付す
ることなく、そのまま保持する。これを、分光光度計で
２６６ｍμに吸収が観測されなくなるまで、０．１５Ｍ
塩化ナトリウムで遠心分離と再懸濁により３回洗浄し、
未結合アストロシチンまたはマリグニンを除去する。Ｂ
ＡＣ−アストロシチンまたはＢＡＣ−マリグニン複合体
を８Ｍ尿素中、３８℃で２時間撹拌し、遠心分離後、洗
液中に、２６６ｍμの吸収が現れなくなるまで（通常３
回）、８Ｍ尿素で洗浄する。この複合体を０．１５Ｍ塩
化ナトリウムで２回洗浄して尿素を除去する。この複合
体を０．２５Ｍ酢酸中、３７℃で２時間撹拌し、その安
定性を確かめる。遠心分離し、得られた上澄液の２６６
ｍμにおける吸収を調べるとき、吸収が存在してはなら
ない。それ故、この化学的複合体：　ＢＡＣ−アストロ
シチンまたはＢＡＣ−マリグニンは安定であって、下記
のごとき方法における試薬として用いることができる。
この安定な試薬型は、合成法により得られた複合体であ
って、その物理的および化学的性質は、血清成分と反応
可能な状態にあるとき、安定な細胞結合アストロシチン
またはマリグニンの前駆体に似ているので、これをター
ゲット（トポグラフィツク・アンチゲン・ライク・リエ
ージエント・テンプレート）と呼ぶことにする。このタ
ーゲット試薬を保存するには、遠心分離し、Ｏ、ｌ　５
　Ｍ　ＮａＨｔＰＯ，！１衝液（ｐＨ７，２）で中性に
なるまで洗う。
ターゲット試薬はセルロース以外のブロモアセデル配位
子を有する担体、たとえばブロモアセチル化樹脂もしく
は濾紙を用いても製造することができる。
実施例９ アストロシチン、マリグニンおよびターゲットに対する
抗血清の製造。
アストロシチン、マリグニンまたはターゲット試薬に対
する抗血清は哺乳類におけるこれら試薬に対する抗体反
応を誘発することにより製せられる。この目的のために
満足な方法を以下に説明すレコグニン（アストロシチン
またはマリグニン）ｌＪＩ９の標準フロインドアジュバ
ントと共に白色雄家兎の足の内証に注射し、１週間後、
１０日後、要すればさらに３週間後腹腔内に同様の注射
を行なう。最初の注射から１週間ないし１０日後、これ
らの家兎の血清中に特異的抗体を検出することができる
。ターゲット抗原を得るため、アストロシチンまたはマ
リグニン１Ｒ９（フォリンーロウクイ蛋白検出法により
測定）を含有するターゲット同量を注射する操作を上記
同様の方法により行なう。
アストロシチンに対する特異的抗体を抗アストロシチン
（Ａｎｔｉ　−Ａｓｔｒｏｃｙｔｉｎ）と呼ぶ。マリグ
ニンに対する特異的抗体を抗マリグニン（Ａｎｔｉ−Ｍ
ａｌｉｇｎｉｎ）と呼ぶ。同様にターゲット試薬に対す
る特異的抗体を抗ターゲット（Ａｎｔｉ　−Ｔａｒｇｅ
ｔ）と呼ぶ。
これらの抗体は、抗原−抗体反応のための標準的ラフタ
ロニー寒天内ゲル拡散試験法において、その特異的抗原
との反応における単一鋭敏な直線関係を明確に示す。
血清中における特異的抗体の存在は抗原−抗体反応のた
めの沈降素標準定量試験法によっても試験することがで
きる。この試験により良好な沈降素定量曲線を得ること
ができる。これから特異的抗体のμ９数を計算すること
ができる。
さらに血清中における特異的抗体の存在は、特異的抗体
抗アストロシチンを上で製造したプロモアセチルセルロ
ースーアストロシチン（ＢＡＣアストロシチン）上に吸
収させることによりその証明することができる。すなわ
ち、特異的抗アストロシチンを含有する抗血清とＢＡＣ
−アストロシチンを反応させることができる。血清をＢ
ＡＣ−アストロシチン上に通すとき、アストロシチンに
対する特異的抗体のみがその特異的抗原アストロシチン
に結合する。アストロシチンはブロモアセチル−セルロ
ースと共有結合により結合しているので、特異的抗体抗
アストロシチンはＢＡＣアストロシチンと結合してＢＡ
Ｃ−アストロシチンー抗アストロシチン（ＢＡＣ１４ア
ストロシチン）を生成する。これはＢＡＣ−アストロシ
チンを洗い去った血清残留物を試験することにより証明
される。標準的ラフタロニー寒天内拡散試験法により、
血清中にアストロシチンと反応し得る抗体は残留してい
ないことが認められた。それ故、血清中に予めその存在
が示された特異的抗体（抗アストロシチン）はすべてＢ
ＡＣ−アストロシチンに吸収されたと結論される。さら
に、抗アストロシチンをＢＡＣ−アストロシチンとの結
合から開放するとき、これがすべての汚染抗体から分離
される。この抗体アストロシチンの開放は上で示したよ
うにＢＡＣ−アストロンチン結合を破壊しない０．２５
Ｍ酢酸でＢＡＣＡ−抗アストロシチン複合体を洗浄（４
０°Ｃで２時間）することにより行なうことができる。
また、血清中における特異的抗体の存在は特異的抗体流
マリグニンを前記のごときブロモアセチルセルロース−
マリグニン（ＢＡＣ−マリグニン）上に吸収させること
によりその証明を得ることができる。すなわち、特異的
抗マリグニンを含む抗血清とＢＡＣ−マリグニンを反応
させることができる。血清をＢＡＣ−マリグニン上に通
すとき、マリグニンに対する特異的抗体のみが特異的抗
原マリグニンに結合する。マリグニンはブロモアセチル
セルロースと共有結合により結合しているので、特異的
抗体流マリグニンはＢＡＣ−マリグニンと結合してＢＡ
Ｃ−マリグニン−抗マリグニン（ＢＡＣＭ−抗マリグニ
ン）を生成する。これは洗浄によりＢＡＣ−マリグニン
から分離さ詐た血清残留物を試験することにより証明さ
れる。標準的ラフタロニー寒天内拡散試験法により、血
清中にマリグニンと反応し得る抗体は残留していないこ
とが認められた。それ故、血清中に予めその存在が示さ
れた特異的抗体（抗マリグニン）はすべてＢＡＣ−マリ
グニンに吸収されたことが明らかである。さらに抗マリ
グニンをＢＡＣ−マリグニンとの結合から開放するとき
、これがすべての汚染抗体から分離される。この抗マリ
グニンの開放は上で示したようにＢＡＣ−マリグニン結
合を破壊しない０．２５Ｍ酢酸でＢＡＣＡ−抗マリグニ
ン複合体を洗浄（４℃で２時間）することにより行なう
ことができる。
これらのターゲット抗体は、抗原−抗体反応のための標
準的なラフタロニー寒天内ゲル拡散試験法において、前
記の抗アストロシチンまたは抗マリグニン抗血清（すな
わち、アストロシチンまたはマリグニン自体を注射して
得られる抗血清）の直線と同様、そのターゲットとの反
応における特殊な単一直線関係を明確に示す。注意すべ
きことは、家兎のあるものはターゲットを注射する前に
ある量の抗ターゲットを血液中に保持している。
これらの抗ターゲット物質は人血清のテストにおいて後
述するように、特異的にターゲット試薬と反応させると
き、はぼ当量の２種のＴＡＧ％５ＴＡＧおよびＰ−ＴＡ
Ｇを生成する（後記実施例参照）。
実施例！０ 生物学的流体からターゲット結合性グロブリン（ＴＡＧ
）を試験管内で定量的に生成させることにより悪性腫瘍
の検出。
実施例８で製造したターゲット試薬を、分解により存在
し得る未結合レコグニンを除去するために洗浄する。そ
の満足すべき方法は次の通りである。ターゲット試薬を
酢酸と共に３７℃に２時間撹拌し、遠心分離し、上澄液
を傾斜分離し、その上澄液の２６６ｍμにおける光学密
度を測定する。
もし、その波長における吸収が存在するならば、物質が
溶解しなくなるまで上記のごとき洗浄を反復実施する。
次いで、このターゲットを燐酸緩衝食塩溶液（ｐＨ７、
２）に再懸濁する（ターゲット試薬を試験するための参
照用標準品として、他のターゲット製剤により５−ＴＡ
ＧおよびＦ−ＴＡＧを含むことが試験により明らかとな
った家兎全血清が使用できるように、後記方法により人
血清の前記反応から精製した標準的５−ＴＡＧおよびＦ
−ＴＡＧがもし得られるなら使用することができる）。
次の方法によりスローバインデング（Ｓ−ＴＡＧ）を定
量する。数日間以上保存した凍結血清はこれを使用すべ
きでない。新しく得られた全血液もしくは他の体液から
注意しながら常法により血清をつくる。満足すべき方法
を述べれば次の通りである。採取した血液をガラス製試
験管中、室温で２時間放置し、凝血させる。凝血塊をガ
ラス製撹拌棒を用いて試験管壁から分離し、この血液を
４℃で最低２時間（もしくは−夜）放置する。４℃で４
５分間遠心分離（２０，０００ｒｐ１１）することによ
り凝血を血清から分離し、血清を遠心分離管中に傾斜分
離し、さらに４℃で４５分間遠心分離（２，００Ｏｒｐ
ｍ）する。この血清を傾斜し、メチオレート１％溶液（
水９５ａ＋（ｌおよび０．２Ｍ重炭酸塩緩衝液（ｐＨ１
０）５村中、１９）を血清に対して１％（容量）の限度
で加える。
上記方法または他の方法で得られた血清それぞれ０　、
２　ｙ（ｌを、ターゲット試薬０．２０ｘＱ当たりレコ
グニン１００〜２００μ？含有のターゲット懸濁液試薬
それぞれ０．２０ＦＩＱに加え、２個の検査試料とする
。ベレット生成が避けられるような方法により、上記懸
濁液を４℃で混合する。たとえば小ゴムキャップを用い
て１〜２秒間強く振りまぜた後、管をゆるやかに傾斜さ
せてこれをトーマスシェーカ中、約２時間またはそれ以
上振盪する。
ターゲット試薬とそれに結合した蛋白を血清から分離す
る。この発明で見出された満足すべき方法は次の通りで
ある。上記管を４℃で２０分間遠心分離（２００Ｏｒｐ
ｍ）Ｌ、上澄液を傾斜した後、遠心分離で生成したベレ
ットを、０゜１５Ｍ食塩水０．２〜０．３ｘＱと再混合
し、室温で振盪し、遠心分離して上澄液を分離する操作
を３回行うことにより洗浄する。
ターゲットに結合して残留する蛋白をそれから分離し、
この蛋白を定量する。たとえば０．２５Ｍ酢酸０．２　
ｘＱを加え、この懸濁液を１〜２秒間ゴムキャップ振盪
機で振盪し、３７℃のインキュベーター中トーマスシェ
ーカーで２時間振りまぜる。管を４℃で３０分間遠心分
離（２００Ｏｒｐｍ）する。粒状物が移行するのを避け
るように注意しながら上澄液を傾斜し、２８０ｍμにお
ける上澄液の光学密度を測定する。血清蛋白（Ｓ−ＴＡ
Ｇ）ａ当たりμ９の結果を得るため、上記光学密度の測
定値を１．４６の因子で割る。検査資料２個の間に５％
以上の差があってはならない。蛋白含量を測定するため
、他の方法たとえばフォリンーロウリイ測定法を用いる
ことができるが、対照範囲と（Ｓ−ＴＡＧ）（Ｆ　　Ｔ
ＡＣ）１度の腫瘍値を決定するための標準を定めておか
ねばならない。
ファストバインデング（Ｆ−ＴＡＧ）値は次のように定
量する。数日間環上凍結して保存した血清は使用すべき
ではない。新しく得られた全血液もしくはその他の体液
から注意して常法により血清を作成する。血清をつくる
方法はこの実施例の前部に記載した方法で充分である。
上記方法または他の方法で作成された血清サンプルは、
５−ＴＡＧ血清測定で上記のターゲット試薬と接触させ
られる全時間よりもＩＯ分間少ない時間の間、４℃で放
置する（たとえば「２時間」の５−ＴＡＧ測定をしたな
らば１時間５０分）。
この方法では５−ＴＡＧとＦ−ＴＡＧの測定の温度履歴
がつり合う。
温度平衡した血清サンプル０　、２　ｍＱを、二重測定
において、ターゲット試薬０．２０＋（７当たりレコグ
ニン１００〜２００μり含有のターゲット懸濁試薬０．
２０ｚ（のそれぞれに加える。懸濁液は、ベレット形成
を避けるようにして約１０分間４℃で混合する。たとえ
ば、小ゴムキャップラビッドシェーカーを１〜２秒間用
いた後、管を僅かに傾けてこれらをトーマスシェーカー
中、約１０分間振盪すればよい。結合しているターゲッ
ト試薬および蛋白は血清から分離される。満足であると
認められた方法の一つは次の通りである。管を２０００
ｒｐｍで２０分間４℃で遠心分離し、上澄液を傾斜し、
遠心分離で生成したベレットを、ｏ、１５Ｍ食塩水０．
２〜０　、３　ｘＱと再混合し、室温で振盪し、遠心分
離することによって３回洗浄し、上澄液を廃棄する。
ターゲットに結合したままになっている蛋白をそれから
分離し、定量的に測定する。５−ＴＡＧ濃度を測定する
ための本実施例における上記の方法は満足なものである
。フォリン・ロウリー測定法のような、蛋白含量を測定
するのに有効な他の方法を用いてもよいが、対照範囲と
５−ＴＡＧマイナスＰ−ＴＡＧ濃度の腫瘍値を決定する
ための標準を定めなければならない。
最終結果は血清１＋ＱにっきＴＡＧマイクログラムとし
て表わされ、これは５−ＴＡＧマイナスＦＴＡＧに等し
い。非脳腫瘍患者および他の対照におけるＴＡＧ値は現
在のところ血清１ｉ１７につきゼロ（または負数）から
１４０μ２までの範囲にわたる。最初に研究した脳腫瘍
患者のＴＡＧ値は血清１ｘ（ｌにつき１４１ないし５０
０μ釘こ及ぶ。アストロシチンおよびブロモアセチルセ
ルロースから製造したターゲット試薬を利用する本実施
例の方法に従って行った５０の血液サンプルについての
最初の「盲検」においては、１１の脳腫瘍のうち１１、
および３２の正常のもののうち２８が正確に判別された
。４例の正常と思われていたもの（すなわち、非脳腫瘍
対照）のうち１例は、明らかに何年か前に治療に成功し
た甲状腺癌のあることが判明した。残りの３例の正常者
は健康のすぐれない、多分診断のついていない癌を持っ
た、年令６０〜７０の個人であった。残りの７例のうち
、ホジキンス病の３例中の３例は正確に判別された。
腫瘍の範囲に入る１例（１４１〜５００μｆＴＡＧ／λ
１２）は診断は不明確ではあるが、腫瘍ではない頭蓋肉
塊、骨髄腫（非脳腫瘍）および黒色内ｌ１ｌ（非脳腫瘍
）を持った患者に相当した。
マリグニンおよびブロモアセチルセルロースから製造し
たターゲット試薬を利用し、本実施例の方法に従って行
なったその後の盲検の検討では、３例中３例の悪性脳腫
瘍と全正常者が正しく判別されたが、これを下記実施例
１０Ａに詳しく記載する。
実施例１０Ａ １０２６名の癌患者と対照における抗マリグニン抗体の
定量。セブン・イヤー・ナイン・ホスピタルでの盲検。
マリグニン抗体、すなわち、癌細胞由来の分子量１００
００ドルトンをもつ公知組成のポリペプチドを、１０２
６名の癌患者と対照から得た１０９４個の血清検体につ
いて特異的免疫吸着により盲定量した。試験管内で癌細
胞に細胞毒性を有することが知られている抗マリグニン
抗体の濃度は、臨床的および病理学的に活動期の癌を有
する患者の血清の９２．７％でその値（平均２７３．７
±１５６．５μ９／村）が健康な正常者（平均５９．１
±２７．０μ９／１１２）より高く、マリグニンが一般
的変換抗原であるとの仮説を支持して広範囲の悪性型で
高かった。抗体は、健康な正常者（第１対照群）の血清
の１００％で正常範囲（Ｏ〜！３４μ９／村）にあり、
癌治療非外来対照（第２対照群）の血清の９４，６％（
平均６４．３±４６．３μ９ＩＲＱ）および入院内科・
外科障害非癌患者（第３対照群）の血清の９１．２％（
平均８１，２±６７．３μｇ／ｌｌＩのでもそうであっ
た。活動期癌状態のみが高い抗体水準を示すことは、治
療が成功し定量時に臨床病理学上「疾病の証拠なし」で
あった癌患者（第４対照群）の血清の９４．２％（平均
７０．１±３６゜７μ９ＩＲＱ）で抗体水準が正常範囲
にあったとの知見により支持された。４つの対照群中に
は、他と統計学的有意に差があるものはなかったが、各
群とも活動期癌群とはｐ＜０．０００００１の水準で異
なっていた。抗体水準が１３５μ９／Ｒ（ｌである癌患
者１０９名中、９０名（８３，３％）は１年以内（平均
４．４±３．５力月）に死亡した。追跡可能で、抗体定
量後１年以上４６カ月まで経過し、なお生存する（平均
２２．０±８力月）７６名の活動癌患者中、６８名（８
９，５％）は１３５μ９／ｊ！１２以上の抗体水準をも
っていた。抗マリグニン抗体濃度と生存時間との間の上
記データから推定される関係および診断並びに治療上の
意味が注目される。
一般的変換抗原は、特別な細胞の型に関係するのではな
く、悪性変換過程一般に見られるものである。それ故、
−膜抗原は、膵臓または甲状腺新生物にそれぞれ見られ
るインシュリンまたは甲状腺ホルモン過程のように、特
別な型の細胞変換生産物に関係した細胞特異性腫瘍マー
カーとは異なる（７）。マリグニンは、悪性神経膠腫細
胞から得られる１００００ドルトンのポリペプチドで、
グルタミン酸とアスパラギン酸の割合が高く、またヒス
チジンに対するこれら両アミノ酸の比率が高く、１９７
５年に報告されたものであり（１−３）、それに構造的
に近い関連物質であるアストロシチン、レコグニンＬ（
リンパ腫）およびレコグニンＭ（＠乳類癌腫８２．４）
は一般変換抗体の中で最初に化学的および免疫学的に定
義されたと思われる一連のものに属する。これらの抗原
または互いに反応する抗マリグニン抗体は、種々の新生
物を有する患者の細胞および血清、動物において誘導さ
れた悪性変換物および組織培養で生育する悪性細胞の細
胞および上澄液中で定量された（５−７．１２）。他の
完全に一般的ではないが、広範囲に発現する変換抗原は
、他の研究室における化学的またはウィルス誘導実験的
細胞変換で同定されている（８．９）。
過去７年間にわたって、マリグニンおよび抗マリグニン
抗体と人の癌状態との関係を調べてきた。
筋原抗原（ｌＯ）のような人で研究された従来の腫瘍関
連抗原は、種々の型の癌に対して色々な証明を示し、臨
床的診断への調和性が少なかった。恐らく誰も一定の化
学的に定義された組成物またはその製造法をもたないと
いう事実のために、より一定した特異的抗体水準ではな
く一定せずに放出される抗原混合物を血清中で測定せね
ばならなかった。マリグニンは、悪性細胞の組織培養中
で一定して生産され、公知で再現可能な組成物であり、
その抗体は癌患者の血清中に存在することか証明され、
また単離されてもいる（６．７）。ここに記載する抗体
と抗原は、調査した全部の型の活動期癌において、悪性
抗原またはその近縁構造の関連物質の広範囲な分布を支
持するものである。
［方法］ 患者および対照 ａ）血清抗マリグニン抗体による実験 癌患者は、臨床研究者により、９つの病院において、母
集団中の発生頻度または研究者の興味に応じて種々の型
の癌から選択された（第１表参照）。
その中には非治療例も治療例も含まれた。５００例の癌
血清中、２４７例（４９，４％）は１５年以前までに臨
床的および病理学的に定義され、治療が成功し、抗体定
量時に臨床および病理学上疾病の証拠が存在しない患者
であった（後記第４対照群）。活動癌群中、７６例は追
跡可能で１年以上４６力月までなお生存した。４つの対
照群について研究した。（１）健康な正常者５９例（血
清６０例）、（２）若干の症状をもつが明確な臨床的診
断のない病院外来患者５６例（血清５６例）、（３）明
確な内科または外科診断のある病院入院患者２５８例（
血清２６１例）、（４）定量時に疾病の証拠がない上記
癌患者８６例である。第３対照群の内科・外科診断には
細菌感染症（血清２６例）、ウィルス感染症）血清２８
例）、外傷（血清８例）、心臓血管系疾患（血清３０例
）、胃腸およびヘマトボイエチン疾患（血清３９例）、
胸部疾患（血清６例）、産婦人科疾患（血清７例）、生
殖尿路疾患（血清１１例）、内分泌代謝疾患および関節
炎（血清２２例）、神経学的疾患（血清６２例）、精神
医学的疾患（血清６例）、および皮膚疾患（血清１６例
）が含まれていた。上記無作為抽出血清に加えて、数種
の特異な群すなわち多発性硬化症４５名（血清４９例）
および良性腫瘍５７例（血清７４例）並びに癌患者の血
縁者（「血縁者」と略称）３１名（血清３１例）、癌患
者接触者すなわち非血縁者と病院職員（「接触者」と略
称）５４名（血清６３例）について選択的盲検を始めた
が完了しなかった。血清の８４％はトレドのオハイオ医
科大学遅型生産細胞からなる。
ｂ）免疫化学的方法 血清抗マリグニン抗体は、公知の免疫吸着法により定量
した。すなわち、血清抗体を固定化マリグニン（ターゲ
ット試薬）上に２時間（遅）反応および１０分間（速）
反応で吸着させ、可溶形として放出し、２８０Ｌ１１μ
における光学密度を読んで抗体蛋白μ９を得た（１１）
。抗マリグニン抗体値は、２時間免疫吸着スロー（Ｓ　
）Ｔ　Ａ　Ｇマイナス１０分間免疫吸着ファスト（Ｆ）
ＴＡＧで計算される正味ターゲット結合グロブリン（「
正味ＴＡＧＪと略称）として表わした。全ての値は特に
断らない限り正味ＴＡＧを表わす。正味ＴＡＧは、Ｆ−
ＴＡＧが２７０ないしｌ！００μ９／ＭＱまで著しく増
加したときには、抗体の増加を適当に反映しない。この
ような例は、４つの対照群でまれにしか見られない（４
６４血清中２例、０．４％）が、活動期癌患者２４７例
では５８例（２３，５％）見られ、５ＴＡＧ値も約４０
０から１２００μ９／Ｒ（ｌまで増加した。添付図面に
は、このような両型抗体の異常な増加を区別するために
、両型の値を加えずに、５−ＴＡＧ値のみを中空円とし
て示した。これらの例は、統計学上２つの方法で凋べ、
また別に臨床的に定量した活動期癌群の一部として調べ
た。抗体定量は、検体を集めた場所と異なるセンター内
の実験者により、血清検体コードにより盲検した。
Ｃ）臨床データおよび実験室データの相互関係各患者に
ついて臨床データおよび実験室データを別々に記録した
後、相互関係を調べた。病理学的に確認した癌と抗体測
定日および死亡日の２っの信頼できる日付によっている
ので、末期の場合の相互関係における誤差は極めて少な
いと思われる。活動期癌の２４７例中２０６例について
は、死亡による腫瘍登録から名前を除くことに加えて、
患者またはその医師に接触することにより患者が１年後
もなお生存していることを証明することができた。４１
例については、接触による証明は不可能または１０力月
目までしか可能でなかった。
これら４１例の大部分は最初の２年間の研究に関するも
のであり、臨床的に末期の患者を積極的に除外したが、
これが目立った誤差を与えたとは思えない。せいぜい活
動期癌群の数が減少し、末期群が各４１増え、末期群の
抗体平均値が増えたことを除いて、結論に重要な影響は
与えなかった。
各群の統計的比較では、Ｐ＜０．０１の値は統計的有意
と考えられる。０．０５水準に近づいたか到達しなかっ
た尺度の下で有意でないことがわかったのは、最初の２
つの対照群の比較だけである（第１図参照）。
［結果］ 第１図は、４つの対照群および活動期癌群における各血
清中の抗マリグニン抗体濃度をμ９／ＲＱで表わしたも
ので、その群とは（１）健康な正常群、（２）治療成功
後疾病の証拠がない癌患者、（３）明確な疾患の診断か
ない内科、外科症状の（非癌）外来患者、（４）明確な
内科・外科疾患の（非癌）入院患者、および（５）１年
またはそれ以上生存する活動期癌患者である。４つの対
照群は統計的有意の水準では互いに差がなかったが、活
動期癌群とはＰ＜０．０００００１の水準で有意差があ
った。
第２Ａ図は、末期癌患者すなわち１年以内（平均４４±
３．５力月）に死亡した患者の個々の血清中の抗マリグ
ニン抗体濃度を示す。この群の抗体濃度は活動期癌群と
ｐ＜ｏ、ｏｏｏｏｏｔの水準で統計的に異なっている。
第１図のデータと共に見ると、１０８例の癌患者中９０
例（８３，３％）の抗体水準１３５μ９７ＩＲＱ以下の
ものは１年以内に死亡したことがわかる。これに対して
、長期生存で抗体定量後１３ないし４６力月（平均２２
，３±８力月）生存した７６例の活動期癌患者のうち、
６８例（８９，５％）は高い抗体水準をちっていた。
第２Ｂ図は、血清中の抗マリグニン抗体水準を連続的に
測定した患者のうち死亡の前にその値が減少した７つの
例を示す。
第１表は、研究した癌低者の型と癌の活動期、末期およ
び疾病の証拠なしの時期の間における分布を示す。この
痛撃の分布は、この研究の最初の焦点であった脳腫瘍が
過剰に含まれる点を除くと、かなり典型的なしのである
。
非不作為選択群の盲検の始めに、多発性硬化症患者の２
０，４％、良性腫瘍患者の３１．１％、活動期癌患者「
接触者」の３０．２％および活動期癌患者の血縁者の３
８．７％で抗体水準が増加した。
実施例＋ＯＡ第１表 悪性の形および臨床状態による血清抗マリグニン抗体定
量数の分布 総数　　　　　臨床状態 悪性の型（癌）　　　　活動期疾病証拠なし末期肺 喉頭 乳腺 子宮 頚部 卵巣 外陰部 結腸 直腸 胃 食道 胆汁管 前立腺 膀胱 ７ 尿道 腎臓 畢丸 甲状腺 膵臓 副腎 皮膚 未分化 ホジキンス氏病 リンパ腫 多発性骨髄腫 急性骨髄性 白血病 急性リンパ球性　１ 白血病 慢性骨髄性　　８ 白血病 慢性リンパ球性　８ 白血病 線維肉腫 ■ 黒色肉腫　　　＋５８４　　　　１ 骨肉腫　　　　　６　　１　　　１　　　４横絞筋肉腫
　　　４　　　　　　１　　　３脂肪肉腫　　　　１１ 血管芽細胞腫　　１１ 組織法増殖症　　１１ 筋痛　　　　　１３３　　８０　　　　２　　　　５１
網膜芽１１ｉ　　　　　１　　　　　　　１計　　５０
０　　２４７　　　　８６　　　　１６７第１図の説明 （実施例１０Ａ） ４つの対照群および活動期癌患者における抗マリグニン
抗体濃度。べたぬりの円は正味ＴＡＧ。
中空円は５−ＴＡＧ（Ｆ−ＴＡＧ過剰）を示す。詳細に
ついては方法の項を参照のこと。
第２図の説明 （実施例＋ＯＡ） 抗マリグニン抗体水準と末期癌状態の関係。べたぬりの
円は正味ＴＡＧ、中空円は５−ＴＡＧ（ＦＴＡＧ過剰）
を示す。詳細については方法の項を参照のこと。Ａは各
患者における単純盲定量、Ｂは最後に検体定量後ｌない
し４力月後に死亡（Ｄ）が起こった癌患者（ｌないし７
）７例の経時盲定量。
［検討］ この盲検で得られたデータは、マリグニンが一般的変換
抗原であるという先に得た証拠と一致する。すなわち、
抗マリグニン抗体は、特別な細胞型に限定されずに正常
水準以上に増加し、マリグニンは広範囲の活動期癌をも
つ患者（表および方法す参照）で視覚化される。治療が
成功し抗体定量時に疾病の証拠がなかった患者の９４，
２％で抗体が正常範囲にあるという事実は、活動期癌患
者が抗体を高水準に維持することを要求することを示唆
する。抗マリグニン抗体の定量による健康な正常者と活
動期癌患者の区別では、健康な正常者は全部１３５μ９
／村（平均５９、ｌ±２７．０）以下の値を示し、「誤
った陽性」の例が全くなかったのに対し、活動期癌群で
は９２，７％が抗体値の増加（平均２７８．７±１５゛
６．５　μ９／Ｍ（１）を示した。健康な正常者と活動
期癌患者は、全活動期癌患者群についても第１図に示す
下位群の各々についても、Ｐ＜０．０００００１水準の
差を示した。
内科的疾徹の患者を比較したところ（第１図）、抗体濃
度の平均水準は僅かに変わったが、有意には上昇しなか
った。非癌外来患者群では、９４゜６％が正常範囲にあ
り、５．４％が増加領域にあった。さらに明白に疾患に
かかっている診断つきの（但し、明らかに非癌の）内科
・外科入院患者では、９１．２％がなお正常範囲にあり
、８．８％が増加領域にあった。これらの２つの対照群
は健康な正常対照群と統計学的には異ならないが、活動
期癌患者群とはＰ＜０．０００００１の水準で異なって
いた。健康な正常群に較べて、内科患者では癌の頻度が
大きく、しかもその癌のうち幾つかはまだ臨床的に診断
されていないことが予期される。
これらの「誤った陽性」と推定されるものの中に実際に
隠れた癌であって臨床的に診断されないものがどれだけ
含まれるかは予言できないが、ｌないし１９力月後に６
例の「誤った陽性」例が実際に臨床的および病理学的に
癌であると証明されたことは、注目に値する。
第１図および第２図のように予め選択された群は、盲検
であるか無作為に抽出されたものではないので、これら
と−緒にされていない。これら選択された群は、小さす
ぎて、不均一性とデータ間の関係の錯綜により結論が得
られないと考えられるが、データを完全にするために予
備データに含めた。多発性硬化症の神経系における破壊
的および免疫的反応では、誤った陽性が高い頻度で起こ
るかも知れない。そのうちの幾つかは、中枢神経系悪性
疾患の誤診であり得る。良性腫瘍患者の血清は、良性と
悪性の臨床病理学的診断の境界領域の存在のため誤った
陽性の比率が高くなることか予期される。抗マリグニン
抗体水準および細胞内マリグニンの証明は、将来、この
ような群の明確化の助けになるかも知れない。活動期癌
患者に接触する者に抗マリグニン抗体の増加か高頻度に
見られること（健康な正常者に対しＰ＜０．００１）は
、他の腫瘍指数について従来発表された同様に奇妙な現
象と一致している（文献１４に引用されている１４の臨
床研究と１つの実験室的研究参照）。このことが伝達可
能な試剤に対する免疫化の一種を表わすか、またはマリ
グニン抗原それ自身または変換すなわち抗原の出現を誘
発する物質を表わすかについては、さらに研究して明ら
かにする必要がある。最後に、非癌群における最大の抗
体増加が活動期癌患者の血縁者に認められた。このこと
が実際の細胞変換に対する応答を示すか、免疫監視用抗
体について遺伝的に定まる高水準生産を示すか、「接触
者」群について見られたのと同じ現象を示すかについて
は、わかっていない。「血縁者」は健康的な正常者対照
群とｐ＜ｏ、ｏｏｏ。
０１水準で統計学的に異なるため、幾つかの説明が考え
られ、確かにさらに大きな群について研究されるべきで
ある。
住民の癌に対する一般スクリーニングにおいてマリグニ
ン抗原および抗体を使用することは、第１図に示すよう
に健康な正常者および外来患者対照群における誤った陽
性が少ないことから、示唆されるところである。この研
究の結果は、実験室的方法の枠内で、細胞中マリグニン
の定量および血清中抗体の定量が、癌の疑いのある個人
の悪性状態の存在を確認する助けになることを示してい
る。さらに、各患者の数カ月ないし数年にわたる臨床的
追跡により、盲コードを付した血清検体の抗体水準によ
る臨床結果の比較が可能となった。
観察された相互関係から、抗マリグニン抗体水準が活動
期疾患において高水準にあるときは生存時間が長く、活
動期疾患中低水準にあるときは死亡が早いという点で、
生存期間に関係していることを示唆している。治療成功
後、正常な（低い）抗体水準にあることは、活動期の癌
状態が「疾病の証拠なし」の状態に置き代わったかどう
かを決定する助けになる。ここでも、実験室的数値は臨
床的状態と関連して始めて意味をもつが、通常、異なる
理由から低抗体水準を示す臨床的健康者と臨床的末期患
者を区別するのは困難でない。
第２Ａ図および第２Ｂ図に示す抗マリグニン抗体の低水
準と末期疾患との相互関係の重要性は、従来知られてい
ない。第２Ｂ図に見られるように、抗体値の低下は死亡
の１力月前という短い期間に突然起こるので、第２Ａ図
に示す高水準値のうちどれだけが死亡の前に低下したか
はわからない。
それ故、低下は１つの定量例で見られるよりさらに一般
的にものかも知れない。この現象は、人および動物癌で
死亡の前兆であると見られる免疫能力の一般的低下につ
いての従来の証拠に一致している（１５）が、単に末期
状態の二次的結果を示すのかも知れない。じかし、抗マ
リグニン抗体は癌細胞抗原に特異的であり、試験管内お
よび生体内で悪性細胞に優先的に局在化し、試験管内悪
性細胞に細胞毒性を示すことがわかっている（７）ので
、抗体の低下は癌行程でより中心的であり、患者にとっ
て有害であるかも知れない。さらに、以前のデータ（６
）は人癌血清の抗マリグニン抗体がそのＦａｂフラグメ
ントから分離したＰｃ部により著しく「無力化」され、
細胞毒性の喪失を招くことを示した。この行程は、抗体
に対する癌細胞の防衛の一形態を反映するかも知れない
。死亡の前に見られる抗体の低水準化は、癌細胞の防衛
の第２の形態、すなわち腫瘍の増殖としての抗原過剰に
基づく抗体生産または放出の閉塞強化の結果である証拠
かも知れない。
マリグニンが「腫瘍−胎児ｊ性の抗原でないことは、胎
児組織中にマリグニンが存在しないことによって支持さ
れる。マリグニンは、胎児発育中の反復だと一般に考え
られている状態より系統発生的に古いと思われる。コン
ピューター調査（１６）によると、唯一の構造関連物質
はルカエナ・グラウカ（ｌｕｃａｅｎａ　ｇｌａｕｃａ
）およびアルファルファのごとき植物のフェレドキシン
（ｒｅｒｒｅｄｏｘｉｎ）、エシェリヒア・コリ（Ｅ、
　ｃｏｌｌｉ）のアシルキャリヤー蛋白およびヂトクロ
ームｂ、である。これらの４者は、何れも嫌気性酵素で
あり、フェレドキシンは天然に存在するものの中でも最
も電気陰性の酸化還元酵素である。ワールプルグは悪性
細胞の嫌気性が優勢なことを観察したが、この性質の公
知の嫌気性酵素の性質に結びつけることができなかった
（１７）。マリグニンがこのような酵素系の分解誘導体
であり、この系が細胞の型に関係なくすべての悪性細胞
に共通しており、この系か癌細胞に独特の嫌気性し好性
をもたらしている可能性は、マリグニン収量が細胞生長
の悪性度が増すと共に増加することの証明（１，２）、
抗原の分布の普遍性、抗体の細胞毒性および末期におけ
る抗体の欠如と一致する。入坑マリグニン抗体の精製品
が入手できるようになったこと（６，７）、および単ク
ローン性抗マリグニン抗体が人手できるようになったこ
とから、単独で作用するかまたは抗癌剤の担体としての
抗体の治療上の使用が、さらに組織的に研究可能となっ
た。
実施例１０Ａの文献 ｉ、ｓ、ボゴチ、脳グリコプロティンおよび認識機能、
「レコグニン・アンド・カンサー」５５５−５５６頁。
Ｂ、Ｗ、ボルダおよびり、シュネック、「カレント・ト
レンド・イン・スピンゴリピドース・アンド・アライド
・ディスオーダーズ」、プレナム・プレス、ニューヨー
ク、１９７６年。
２、Ｓ、ボゴチ、アストロシチンおよびマリグニン：脳
腫瘍に関係する２種のポリペプチドフラグメント（レコ
グニン類）、ｒ　Ｎ　ａｔ　、　ＣａｎｃｅｒＩ　ｎｓ
ｔ、　Ｍｏｎ、Ｊ４６巻１３３−１３７頁、１９７７年
。
３、Ｓ、ボゴチ、人血清ＴＡＧ（ターゲット結合性グロ
ブリン）の定量的生産による脳悪性神経膠原の検出。Ｓ
、ボゴチ「バイオロジカル・ディアグノシス・オブ・プ
レイン・デイスオーダーズ」、スペクトラム・ウィリー
・プレス、ニューヨーク、１９７４年。
４、Ｓ、ボゴチおよびＥ、Ｓ、ボゴチ、２種のマリグニ
ン関連レコグニンの生産：＠乳類ＭＣｌ−７癌細胞のレ
コグニンＭおよびＰ３Ｊリンパ細胞のレコグニンＬ、　
ｒＮｅｕｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＲｅｓ、　Ｊ４巻４６５
−４７２頁、１９７９年。
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ールデンゾーン、Ｊ、Ｈ，ハリス、Ｄ。
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実施例１１ 免疫蛍光法による腫瘍細胞の診断。
化合物抗アストロシチン、抗マリグニンおよび５−ＴＡ
Ｇは腫瘍細胞に優先的に結合することがわかっている。
この特異性は組織学の部門において染料または放射生物
質を抗アストロシチン、抗マリグニンまたは５−ＴＡＧ
に結合させてこれらの化合物を腫瘍細胞の診断に用いる
ことを可能にする。標準の標識技術が用いられる。５−
ＴＡＧを使用する方法は次のとおりである。
満足であると認められたｌっの方法は、セント・マリ−
（Ｓｔ、　Ｍａｒｉｅ）法の変形である。人間の脳腫瘍
検体を凍結し５ミクロンの厚さに切る。これらを湿容器
中に染色前に一７０℃に４〜８週間貯える。結合体は山
羊の杭先結合体のような標準の抗血清である。結合体は
フルオレスセインまたは他の標識物質でこの技術分野で
既知の技法によって標識される。市販のフルオレスセイ
ン標識山羊杭先結合体を用い得る。用いる蛍光法は標準
のものであって、ＴＡＧの１：２００〜ｌ：４００溶肢
を腫瘍切片上に３０分間またはそれ以上インキュベート
し、次に洗浄して結合しないＴＡＧを除く。
燐酸緩衝食塩水で３回洗浄するのがよい。フルオレスセ
イン標識結合体で結合インキュベーションし、洗浄した
後顕微鏡検査をする。正常細胞およびその処理物では腫
瘍切片および正常の非腫瘍脳の対照切片共に染色されな
い。蛍光は腫瘍神経膠細胞およびその処理物に明るく存
在する。
実施例１１Ａ ＴＡＧからの蛍光信号による非脳悪性細胞の検出。
癌細胞の検出に染料または放射性ラベルのような信号発
射剤をＴＡＧ生産物と組合わせて用いることは、例えば
この明細書１７−２８頁および実施例１■こ記載した。
この実施例１１Ａには非脳悪性細胞の検出を記載する。
ＴＡＧの定量における人血清の使用を実施例１Ｏに記載
したように、抗マリグニン抗体を固定化抗原に結合させ
、非結合血清蛋白を洗去した後、抗体を０．２５Ｍ酢酸
で３７℃に２時間処理して結合から解放し、ターゲット
試薬を遠心分離で除去する。ＴＡＧ抗体溶液を２８０ｍ
μの吸収値で定量する。ＴＡＧ溶液を一２０℃で貯蔵し
、解凍して合わせ、６Ｎ−ＮａＯＨで滴定してｐＨ７に
し、ｐＨ７の燐酸緩衝食塩水で透析し、濾過し、ミリボ
アー・ペリコン１０００膜上で濃縮し、遠心分離して透
明な不溶性蛋白および免疫グロブリン複合物を除き、濃
縮し、セレックスＤおよびブルー・セファロースＣＸ６
Ｂ（ファルマシア社）クロマトグラフィーで免疫学的不
活性物質を除く。この入坑マリグニン抗体はラフタロニ
ー寒天内二重拡散法で杭穴ガンマグロブリンと反応する
。ＴＡＧを杭穴ガンマグロブリンと組合わせたフルオレ
スセインと共に標準的二層クーマス免疫蛍光法で用いる
と、悪性神経膠原、乳癌、卵巣癌、結腸腺癌および他の
型の手術後およびバイオプシー組織片癌細胞、さらに人
喀痰、気管支洗液、胸膜浸出液、胃吸引液および膀胱尿
中癌細胞を染色する。対照か陰性のとき明瞭な蛍光を生
ずるＴＡＧ蛋白濃度は、切片当りｌないしｌＯμ９であ
る。
「精製ｊＴＡＧの生産は、種々の癌を有する患者の血清
を先に（実施例８）記載した方法でブロモアセチルセル
ロース−マリグニンと反応させることにより行なわれる
。この反応で結合した抗体を０゜２５Ｍ酢酸で分離し、
ガンマグロブリンに対する係数１．４６を用いて２８０
の光学密度により定量し、冷凍し、−２０℃で保存する
。この抗体は、ガンマチエイン（バイオラド・ラボラト
リーズ・インコーホレイティド）に特異的な抗人ガンマ
グロブリン抗血清および抗ＰＡＢおよび抗Ｐｃフラグメ
ント（マイルス・ラボラトリーズ）を用いて定量したと
ころ、免疫グロブリンを含むことがわかった。また本島
は、兎杭穴アルブミン（バイオラド・ラボラトリーズ）
とも反応する。
マリグニン含有細胞の特異的免疫蛍光染色にＩＯないし
５０μグの蛋白ＴＡＧを要するのに対して、この切片の
特異的染色においては、精製蛋白ＴＡＧを僅かｌないし
１０μ９しか必要とせず、しかも若干の例では１μ９以
下でも充分なことかわかった。
最も有効な精製ＴＡＧ製品は、最高イオン強度すなわち
０．１５Ｍないし１００Ｍで溶離したものであることが
明らかになった。この事実を利用する製造歩はすべて有
用であるが、そのうち好ましい３方法を以下に示す。
方法Ｉ。
ＤＥＡＥセルロース（セレツクスＤ１バイオラド・ラボ
ラトリーズ）によるＴＡＧクロマトグラフィーのフラク
ション化において、まず、次第にイオン強度を強めｐＨ
を減じる段階溶離法により、実施例１で粗製アストロシ
チン前駆体含有フラクションの製造に用いたのと同じ連
続溶離剤を用いて行なった。良好な分離により、蛋白バ
ルクが３つのフラクションすなわち溶液ｌ（実施例１参
照）で得られるビークＩ、溶液ｌ（実施例１参照）で得
られるビーク■、および溶液６と溶液７で得られるピー
クＨに分割された。ラフタロニー寒天内二重拡散法によ
ると、ビークＩのＴＡＧはなおアルブミン移動性の感知
可能な蛋白を含有し、ピーク■はアルブミンの大部分を
含み、感知可能なＩｇＧが検出された。ビークＩの再ク
ロマトグラフィーによるとまだ次第に高純度のＩｇＧを
含み、７回目のクロマトグラフィー後、兎杭穴アルブミ
ンで５−１０μ９の人アルブミンを検出できるラフタロ
ニー寒天内ゲル拡散法で、はとんどアルブミンが検出さ
れなかった（３％以下）。得られたＩｇＧは、０−５℃
で数日放置後変性しやすく免疫活性を喪失しやすかった
。
方法■ 第２のＴＡＧフラクション化は、セファロースＣルー６
Ｂ（ファルマシア・インコーホレイティド）上のクロマ
トグラフィーにおいて、低モル緩衝液（０，００５Ｍ燐
酸）で開始し、蛋白の残りを溶離するために０．１５Ｍ
および１．５Ｍの２段階を用いて行なった。セレヅクス
Ｄと同様、１回の通過だけでは分離に不充分であり、再
回転により生産物が次第に改善された。ここでも、抗マ
リグニン抗体に対し最も活性の大きなフラクションは１
．５Ｍフラクションであった。
方法■ 溶融ガラスディスクおよびセファロース上に重層したセ
レックスＤについでセファロースＣルー６Ｂを用いるク
ロマトグラフィーが最も満足できる方法であることがわ
かった。
第１図のグラフは、方法■によるＴＡＧのクロマトグラ
フィーで得たフラクションを示す。最初の２００ｘ（の
溶離液の後で、５０ｇ（またはそれ以下の小フラクショ
ンを集めた。各溶離液の蛋白含量は、回収量をμ９で計
算するガンマグロブリンに基づく均一係数１．４６を用
いて２８０ｍμにおける光学密度から求めた。アルブミ
ンの感知可能量を含むフラクションでは、蛋白の絶対量
を求めるために捕型を必要とした。段階溶離剤の変更点
は矢印で示した。サブフラクションはローマ数字Ｉない
し■で示した。
矢印位置の文字Ａ−Ｆにあたる溶媒は次の通りである。
Ａ−０，０１Ｍ）リス（ｐＨ７，２） Ｂ−０，０５Ｍトリス＋０　、１　Ｍ、ＮａＣＩ（ｐＨ
７。
Ｃ−ＰＢＳ、０．１１ＭＮａＣ１（ｐＨ７，２）Ｄ−Ｐ
ＢＳ、０．１６５ＭＮａＣ１（ｐＨ７，２）Ｅ−ＰＢＳ
、０．３３ＭＮａＣ１（ｐＨ７，２）Ｆ−０，０５Ｍト
リス、１．５ＭＮａＣ１（ｐＨ７２） 下記の表に、各フラクションからの回収量、ガンマグロ
ブリンおよびアルブミンの半定量的測定値、癌細胞の免
疫蛍光染色による各フラクションの活性（プラスは反応
あり、ゼロは反応なし、プラス／マイナスはある場合の
反応）を示した。
ガンマチエイン特異性抗人ガンマグロブリンと上記フラ
クションｌおよび■との反応線を示す写真を作った。
ＴＡＧ（上記フラクション■）の使用による非脳悪性細
胞の染色、すなわち患者の気管支洗液中気管支癌細胞の
染色および患者の胸膜夜中リンパ腫細胞の染色を示すた
めに写真を用いた。非癌細胞は蛍光を発しなかった。Ｔ
ＡＧ（燐酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）０．１ｙ（２中ないし
１０Ｉｚ９）をガラス・スライド上に包み込んだ細胞表
面に適用し、３０分間インキュベートし、ＰＢＳで３回
沈浄し、非悪性対照組織がほとんど蛍光を発しなくなる
まで希釈した蛍光結合抗人ＩｇＧを重層した。タングス
テン灯とＢＧ２３、ＢＣｌ２および５００フイルターを
用いツアイス蛍光顕微鏡で観察した。
実施例１２ 免疫蛍光法におけるＴＡＧ特異性の盲検。
癌患者および対照から集めた細胞中のマリグニンの存在
を探索した。検体は、肺、乳腺、前立腺、結腸および未
分化癌を有する患者の胸腔穿刺、体腔穿刺、気管および
気管支洗液、喀痰、心膜周囲浸出物、および気腫、重喫
煙およびてんかんを含む非癌対照、治療成功後２年間疾
病の証拠なしの前癌患者の喀痰から集められた。細胞は
遠心分離により濃縮した。
下表は抗マリグニン抗体（ＴＡＧ）染色免疫蛍光法の盲
検で調べた細胞内マリグニンの存否と臨床病理学的診断
の相互関係を示す。得られたＴＡＧ染色は２０／２２例
の検体（９１％）で正しかった。
他の病理学者がこれらの検体について二重盲検法で行な
った標準パパニコロー染色試験では、１７Ｉｚ２例の検
体（７７％）が正しかった。
細胞マリグニン ＴＡＧ免疫蛍光法による結果 癌　　　非癌　　　　合計 臨床病理　癌　　　１４　　　　２　　　　１６学的診
断　非癌　　　０　　　６　　　　６合計　　１４　　
　　８　　　　２２ 乳癌、卵巣癌および気管支筋並びに星状細胞腫の細胞中
のマリグニンの陽性染色に加えて、人外陰部扁平細胞癌
および人すンパ踵の５つの異なる型の組織培養物、並び
に急性および慢性白血病の白点細胞ら陽性染色を示した
。マリグニンは、種々の人癌細胞において抗マリグニン
抗体重層免疫蛍光法により呈色または写真撮影された。
第２層のフルオレスセイン標識アンチ抗体は、第１層の
抗マリグニン抗体が不存在のとき非特異性蛍光が全く除
かれるように１：１６００まで対照実験で希釈された。
この条件下では、Ａ：気管支洗液中の気管支癌細胞、Ｂ
：血液中のリンパ球性白血病細胞、Ｃ：外科手術の際の
卵巣癌細胞、Ｄ二組縁培養で生育した扁平細胞癌（２細
胞）、Ｅ；外科手術の際の退形性星状細胞腫において、
抗マリグニン抗体は癌細胞当り１ナノグラムの抗体蛋白
でも特異的免疫蛍光反応の生成に活性であり、写真撮影
された。
実施例１３ ＴＡＧからの放射性同位元素信号による癌細胞の検出。
この実施例では、ＴＡＧに対する放射性標識結合の便利
さを示す。第２に、この放射性標識ＴＡＧの動物への注
射が安全有効に達成される。第３に、放射性標識ＴＡＧ
が正常組織よりも癌組織に優先的に移行し、前に試験管
内実験において特異的抗マリグニンＴＡＧ生産物を用い
て行なわれた癌細胞への優先性が生体内で確認されるこ
とを示す。
＠９ｎテクネチウム（９９ｍＴｃ　）によるＴＡＧの標
識化。
標識手順 １、ＴＡＧの２製品すなわちＴＡＧ−１およびＴＡＧ−
２を使用した。ＴＡ（、−１およびＴＡＧ−２（各濃度
０，４朽１０，５籾）を別々に滅菌真空バイヤルに入れ
た。
２、各バイヤルに塩化錫溶液（（１，０１ＮＨＣＩ　　
１００ｘＱ中５ｎＣ１ｔ・２Ｈｔ０１０ｉ９）Ｏ，ｌｊ
＋（！を加えた。バイヤル内容物を３−４分間混合した
。
３．９ｆｌ（７１Ｔｃ−過テクネチウム酸（ナトリウム
塩）０　、　Ｉ　ｚ１２（６ｍＣｉ）を加え、２−３分
間混合する。
標識効率の測定手順 ｓ′′”　Ｔｃ−ＴＡＧ　−１オヨヒ”＋ｌ＋Ｔｃ−Ｔ
ＡＧ２の試料の標識効率を、ワットマンＮｏ、１濾紙と
溶媒として８５％メタノールを用いた下降法ベーパーク
ロマトグラフィーにより調べた。同様な実験を、対照と
して過テクネチウム酸ナトリウム””Ｔｃを用いて行な
った。
２時間後、濾紙をクロマトグラフィータンクから外し、
２片すなわち（１）原点の周りＩＣＪＩ、（２）溶媒前
線までの残り濾紙に分けた。各切片を井戸型ガンマ線シ
ンチレーションカウンターにかけ、放射能含量（ｃｐｍ
）を測定した。
各濾紙片に約５０ラブダ（ｌａｂｄａ）が付着していた
。
抗原−抗体反応の手順 標識溶液の一部をラフタロニーゲルプレート上に塗布し
、マリグニンと抗原抗体反応する能力を調べる。３時間
経過後、得られる鋭い反応線をゲルから外し、放射能を
測定する。反応していないゲルを同量外し、その放射能
をバックグラウンドとして測定する。
結果 結論 使用した品質管理試験に関して下記の結論が得られた。
１、　＠ａｌｌｌ　ＴＣ−過テクネチウム酸塩は塩化第
一錫で還元されて反応性の高い酸化状態になった（＋４
＋５）。
２、還元された過テクネチウム酸塩はＴＡＧ−１および
ＴＡＧ−２の両製品を標識した。
３、”’　Ｔｃ−ＴＡＧ−２の活性保有能を試験した結
果免疫的に反応する能力を保有することがわかった。
放射能標識ＴＡＧの生体内癌細胞検出への使用ウィスタ
ー系ラットに、予じめラットを経過し組織培養したＣ６
神経膠腫腫瘍細胞を脳内注射した。ラットを腫瘍生長の
最初のしるし、例えば衰弱、戦慄、動揺等が現れるまで
観察した。これらの症状は、注射後７ないし１０日で出
現し、多くの動物では最初に生長する腫瘍で３ないし４
日後に死亡し、１週間では全部死亡した。症状出現後直
ちに、動物の尾静脈に標識ＴＡＧを静脈注射し、次いで
種々の時間に麻酔して脳を摘去し、腫瘍を正常な脳から
切り取り、切取った標本の放射能を互いに比較した。
予１ａ的”ｍＴｃ−ＴＡＧ実験 屠殺　　　腫瘍重量　カウント／ｇｒａ１分動物（注射
後時間）（朽）　　　腫瘍　　正常脳Ａ　　　　１．２
５　　　　１．９　１４９．１００　１：（，４００Ｂ
　　　　５ＪＯ６，０１６，２００６，６００Ｃ７，２
１２３，０５３，００Ｇ　　　５，８００腫瘍と正常脳
を井戸式ガンマ線カウンターで一夜カウントした。全試
料および標品は、一連の最初の標本の中央カウントに合
わせて減衰補正した。
結論 上記の結果から、放射能が正常組織に較べて腫瘍中に優
先的に局在化することがわかった。
実施例１４ 骨髄腫細胞系（ＰａＸ６３−Ａｇ−８）を、うし胎児直
情ＬＯ％を補充したダルベコ最少必須培地（Ｄ、。）を
用いて、湿潤インキュベーター中、３７℃、炭酸ガス５
％の条件で培養した。
近交雌Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ／ＣＪマウス（８週令、ジャクス
ン・ラボラトリ−、バール・ハーバ−、メイン）を、Ｉ
ＪＩＳＪづつ１週間間隔で４回腹腔内注射により免疫し
た。マリグニンは、完全フロインドアジュバント（Ｄｉ
ｒｃｏ）中に乳化させた。免疫マウスの血清について抗
マリグニン抗体の存否を調べ、抗体陽性のマウスをさら
に細胞融合前４日間追加抗原刺激した。
免疫牌臓細胞（１０”）を、ガルファー等（ネイチュー
ア２６６巻５５０−５５２頁、１９７７年）の記載にし
たがってポリエチレングリコール（ＰＥｃ、ｔｏｏｏ、
Ｊ、Ｔ、バッカー）を融合誘発剤として骨髄腫細胞と融
合させた。ＰＥＧ処理細胞混合物を９６ウエルのマイク
ロタイタープレート（コスタ−３５９６）中のヒボキサ
ンチン、アミノプテリンおよびチミジン補充Ｄ　、、（
Ｄ　、。ＨＡＴＸＪ。
Ｗ、リトルフィールド、「サイエンス」１４５巻７０９
頁、１９６４年）に接種した。Ｄ　＋　ｏ　ＨＡ　Ｔの
約半分を毎週２週間にわたって交換した。牌臓細胞は試
験管内で生存せず、融合骨髄細胞はり、。ＨＡＴ中で死
滅した。雑種細胞のみが選択条件下で１０日後も生長し
続けた。Ｄｌ。ＨＡＴ培養２逓間後、雑種細胞をアミノ
プテリンを除いたり、。ＨＡＴ（Ｄ＋。ＨＴ　）で１週
間培養し、次いでＤＩｏで培養した。ウェルが雑種細胞
で約８０％覆われたときには、上澄液を吸い出して抗マ
リグニン抗体分析に供した。
抗体生産ウェルの細胞をコツトン等（ユーロピアン・ジ
ャーナル・才ブ・イムノロジ−３巻１３５−１４０頁、
１９７３年）の方法に変更法によりソフトアガロース中
に無性増殖（クローン）させた。等容量の塩０，８％ア
ガロース（シーブラック、マリン・コロイド・インコー
ボレーテイド）と２濃度度のり、。を手早く混合し、６
０ｍｍの皿に２村を塗布し、４℃に１５分間冷却して基
底層とした。
同−の培地中１０００個の細胞を基底層上に重層し、冷
却し、通常の細胞培養と同一条件下でインキュベートし
た。抗マリグニン抗体陽性クローンはさらにＢＡＬＢ／
ＣＪマウスの腹水腫瘍として生育した。
表（実施例１４） 各抗体生産クローンにおける抗体量（μ９／細胞外液体
村） （Ｆは１０分間の速反応性、Ｓは２時間の遅反応性、Ｆ
Ｓは両型のそれぞれ実施例１Ｏの方法で生産した抗体を
示す。） プロデユー 細胞外サー細胞製 液　体造後の月数 細胞上澄　　１月 ＭＡＭＡ ８３２ ７３２ ９４２ ７３０ ５２１ ６２９ ２２３ 細胞上澄 ３月 ＭＡＭＡ ２２２７２１ ３８３７２７ ２７５３２１ ５５６２２５ ２７３２２３ ３７２６４４ ２９３４　３３ ０ ＭＡＭＡ −Ｆ／Ｓ ２５／２１ ２１／２１ ２１／　１９ ２５／２３ ２９／２７ ４８／４５ ２／１８ ４１／３４４１／３９ ３６／３６２９／２３ ４７／４１３９／３７ ３９／３３３０／２７ ６２１５８２２／２２ １０１、／１１０１５／１８ ３０／２９１８／１８ 細胞上澄 ４月 ９３０ ２３０ ０２７ ７ １８　１８　３０／３４３２／２９ ２６　２３　１５／１６２１／２３ ２５　２７　２７／２６２３／２１ ９３０ ０２９ 細胞上澄 ５月 １２６１４０　３４　８８　４７／９７４９／８２１７
８３９３２４８　６９　２２／２７７４／１７８１６２
２９６　８９１１４　２８／３０８３／１４９９２１．
２３５６／１．２７９４／２３２３０８／８２１．１２
／７９ ６２／１０７５６／１６９ １６４／３９０１７ｇ／ｌ、６４ ２４９／３０１ マウス腹水 ８月 ６６０／１０７０ ７８０／６７０ 上記の表は、各抗体生産クローンによる単クローン性抗
マリグニン抗体の生産量をμ９蛋白／対細胞外液体とし
て示したものである。抗体の収量は、クローンの繁殖の
最初の４か月では良好で、繁殖５か月まで増加する。細
胞は８か月までよく生長を続け、マウスの腹腔内に移植
しても生長し、抗体収量は再び増加して、腹水１ｓｇ当
りＭＡＭＡ−・ＳＩｘｇが期待される程になる。細胞は
ソフト・アガー上でもよく生長し、冷凍して液体窒素中
に保存後、解凍すると再び生長する。各クローンの一定
量を永久保存および後日の再生長のために液体窒素中で
冷凍した。
それぞれの場合の単クローン性抗体は、２８０−μにお
ける光学密度により蛋白として定量したが、透析不能で
あり、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で主と
してガンマ鎖免疫グロブリンとして泳動する。
連続的再クローン化により、各特異釣車クローン性抗体
生産細胞を濃縮した。ずなわち、ＭＡＭＡ−Ｂプロデュ
ーサー細胞の再クローン化により６コロニ一中４個のＭ
ＡＭＩ−Ｂプロデューサーが得られ、ＭＡＭＡ−Ａプロ
デューサー細胞の再クローン化により４コロニ一中８個
のＭ　Ａ　Ｍ　ＡＡプロデューサーが得られた。
３つの型の抗体は、何れも精製ＴＡＧ生産物で以前に見
られたのとほぼ同一濃度範囲で免疫蛍光法により広範囲
の悪性細胞を染色した。すなわち、抗体蛋白１ナノグラ
ムが癌細胞１個を染色した。
急性および慢性人白血病、白血病細胞の６つの培養系（
ＪＹｌＫＡＲＰＡＳｌＣＥＭ、ＲＡＪ　Ｉ、ＨＬ６０お
よびに５６２）、および３つの人リンパ腫の特異的免疫
蛍光染色を写真撮影した。
フルオレスセインおよびローダミンの両者において、蛍
光標識による第２層染色が１：１６００の低濃度でも観
察され記録された。このような極めて低濃度における第
２層染色は、バックグラウンドの非特異的染色がなくな
るまで希釈することを可能にするものであり、このよう
な第２層濃度（ＦＩＴＣまたはローダミン）で、ＭＡＭ
Ａ−Ｆ。
ＭＡＭＡ−ＳおよびＭＡＭＡ−Ｆ’−３の高特異的染色
が得られた。
実施例１５ 単クローン性抗マリグニン抗体ＦおよびＳによる診断的
「マリグニン蛍光指数」のザイトフルオログラフィによ
る証明。
２種の単クローン性抗マリグニン抗体ＭＡＭＡＦおよび
ＭＡＭＡ−６を、種々の濃度、インキュベーション時間
、洗浄または非洗浄、フルオレスセイン・イソシアネー
ト・抗マウス抗体（Ｆ　Ｉ　ＴＣ）のインキュベーショ
ン濃度および時間の変化、およびその他の正常および癌
両血清（白血病、リンパ腫）における血液および／また
は白血球網製法についての項目等を変えて、これらの抗
体をフロー・サイトメトリー（血球計算）器と共に使用
する最良の方法を研究し、下記の結論および好適例で得
られた。
１、係数された１００細胞当りの実際の蛍光細胞数を定
量し、ＭＡＭＡによらずＦ’ＩＴＣ抗体のみによる蛍光
細胞数を補正することにより、ＭＡＭＡによる真の特異
性蛍光を表わす絶対数が得られる。すなわち、マリグニ
ン蛍光指数−（ＭＡＭＡプラスＦＩＴＣでの蛍光細胞数
）マイナス（ＦＩＴＣのみによる蛍光細胞数）２、マリ
グニン蛍光指数は、細胞の型に関係なく正常細胞と悪性
細胞を区別できる。液体懸濁液中にある悪性細胞の迅速
診断試験法である。
（マリグニンは、細胞の型ではなく悪性変換の過程に関
係する一般的変換抗原である。）３、得られたデータの
中から一例を示すと次の通りである。
実施例１６ 組織培養で増殖する腫瘍細胞に対して抗アストロシヂン
、抗マリグニンおよび５−ＴＡＧが細胞毒性を有するこ
との実験。
細胞毒性を測定する標準試験を用いる。一般に、固定し
た計算和牛の細胞の数、普通約１００の生きた細胞を含
有するように準備されるが、これを計算する。次にこれ
らの細胞を試験する試剤で処理し、なお生きている細胞
の数を計算する。
実施例９の方法で得られた５−ＴＡＧ溶液の、神経膠超
厚として十分に特徴づけられる神経膠芽細胞■〜■級の
患者からの組織培養細胞に対する細胞毒性の標準試験に
おいて、５−ＴＡＧは、溶液１１２当り５−ＴＡＧｏ、
２および０．０２μ９のような少量に相当する１：１０
０および１：１０００の高希釈度の場合でも、計算和牛
のすべての細胞を死滅させる。同様な結果が抗アストロ
シチンおよび抗マリグニンの高希釈液で得られる。
実施例１１、ＩＩＡ、１２．１３．１４．１５で示す特
異性およびこの実施例および実施例１７で示す細胞毒性
は共に人間の脳腫瘍に対する抗アストロシチン、抗マリ
グニンおよび５−ＴＡＧによる治療可能性に非常に関係
がある。これらの両方の現象を、手術で除去したが、な
お組織学的診断を要する腫瘍組織に対する実際の診断に
使用する可能性は、この明細書中に示した通りである。
実施例１７ 単クローン性抗マリグニン抗体ＭＡＭＡ−ＦおよびＭＡ
ＭＡ−９の混合物の細胞毒性の証明。
ＭＡＭＡ−ＦおよびＭＡＭＡ−８は何れも単独では悪性
細胞に感知し得る程の細胞毒性を示さないのに対して、
混合物は悪性細胞に対して細胞毒性活性を示す。さらに
、生産物としてのＭＡＭＡＦＳも細胞毒性を示す。これ
ら３種の製品は、何にも抗アストロシチン、抗マリグニ
ンおよび５−ＴＡＧ生産物（実施例１６）で前に見られ
たのとほぼ同一濃度で細胞毒性を有する。細胞当りほぼ
１ナノグラムで細胞毒性を示して細胞溶解を起す。
また、細胞毒性はクールター・サイトフルオログラフお
よびオルト・サイトフルオログラフの両者で観察記録さ
れたが、これらは何れも時間と共に生存する細胞の絶対
数の計算ができるものである。生存悪性細胞（膵臓癌、
白血病およびリンパ腫）の破壊は、１５ないし６０分間
にわたって観察された。光散乱および特に蛍光で同定し
た悪性細胞は、ＭＡＭＡ−Ｆ’とＭＡＭＡ−Ａ−９の混
合物またはＭＡＭＡ−ＦＳの何れによっても破壊された
。癌細胞の死滅は、定義によると治療的プロセスであり
、この死滅をもたらす生産物は、定義によると治療生産
物である。
上に示したように、種々のプロデューサー細胞が、マリ
グニンにより抗マリグニン抗体を生産するように特異的
にプログラムされたデスオキシリボ核酸を有している。
この中には、単クローン性抗マリグニン抗体速型プロデ
ューサー細胞、連盟ブロデスーサー細胞、並びに連架お
よび連撃プロデューサー細胞が含まれる。この発明は、
これらすべてのプロデューサー細胞のデスオキシリボ核
酸およびリボ核酸の両者を含むものであることが認識さ
れるべきである。
本発明は以下のことを可能にする。
ｌ、生物体に注入したとき、その生物体の細胞に特異的
抗レコグニンの生産を誘発または惹起する能力を有する
癌レコグニンまたはその精製フラクションによる単クロ
ーン性抗癌レコグニンの製造法であって、該癌レコグニ
ン定量的沈降素試験およびラフタロニー寒天内ゲル拡散
試験においてその特異的抗体で単一系沈澱を形成し、水
および水溶液に可溶で分光光度計による吸収ピーク波長
２８０ｍμを有し、分子量が３０００ないし２５０００
であり、アミノ酸残基組成ではグルタミン酸およびアス
パラギン酸の割合が高く、またヒスチジンに対するグル
タミン酸およびアスパラギン酸の比率が高いものである
製造法において、上記抗癌レコグニン生産細胞を次に自
己生存性であり抗癌レコグニンの生産によって同定され
るように処理し、上記癌レコグニンが癌腫瘍絹織または
細胞遅型生産細胞からなる生産物からなることを特徴と
する、単クローン性抗癌レコグニンの製造方法。
２、生物体がマウスまたは他の哺乳類である、第１項記
載の方法。
３、誘導細胞が婢臓細胞である、第１項記載の方法。
４、誘導細胞の処理が、誘導細胞を任意の自己生存性細
胞とハイブリッド化して独特のハイブリッド自己生存性
細胞を生成するハイブリッド形成である、第１項記載の
方法。
５、誘導細胞の処理が、骨髄腫細胞とのハイブリッド形
成を包含する、第１項記載の方法。
６、自己生存性細胞が、クローン化および生成クローン
の特異釣車クローン性抗癌レコグニン生産能の試験によ
って選択される、第１項記載の方法。
７、抗レコグニン抗体が抗マリグニン抗体であり、注入
レコグニンがマリグニンまたはその精製フラクシゴンま
たは抗マリグニン抗体を生産しもしくはこれと特異的に
反応するマリグニンの構造関連体であり、生産物または
その精製フラクシゴンが癌細胞と優先的に結合しかつ視
覚的または信号発射手段により検出されることができ、
マリグ二ンが脳腫瘍細胞遅型生産細胞からなる生産物か
らなり、定量的沈降素試験およびラフタロニー寒天内ゲ
ル拡散試験においてその特異的抗体で単一系沈澱を形成
し、水および酸性もしくは中性ｐＨを有する水溶液に可
溶でアルカリ性ｐＨでは不溶であり、分光光度計による
吸収ピーク波長２８０ｍμ有し、分子量が１００００で
あり、アミノ酸組成がほぼ下記の通りであり、 残基概略数 アスパラギン酸　　　　　　　　　９ スレオニン　　　　　　　　　　　５ セリン　　　　　　　　　　　　５ グルタミン酸　　　　　　　　　　　１３プロリン　　
　　　　　　　　　　　　４グリシン　　　　　　　　
　　　　６ アラニン　　　　　　　　　　　　　７バリン　　　　
　　　　　　　　６ １／２システイン　　　　　　　　　ｌメチオニン　　
　　　　　　　　　　２イソロイシン　　　　　　　　
　　４ 計８９ システィン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
ンモニア、イソロイシン、リジンノルロスレオニン５セ
リン５グルタミン酸を検出できる程合まないものである
、第１項記載の方法。
８、癌細胞と優先的に結合しかつ視覚的または信号発射
手段により検出されることができる特異釣車クローン性
抗癌レコグニンを細胞集団に適用することからなる、細
胞集団中の癌または悪性腫瘍細胞の存在検出方法におい
て、癌レコグニンが癌腫癌組織または細胞遅型生産細胞
からなる生産物からなり、定量的沈降素試験およびラフ
タロニー寒天内ゲル拡散試験においてその特異的抗体で
単一系沈澱を形成し、水および酸性もしくは中性ｐＨを
有ロイシン チロシン フェニルアラニン リジン ヒスチジン アルギニン する水溶液に可溶でアルカリ性ｐＨでは不溶であり、分
光光度計による吸収ピーク波長２８０Ｉ１１μを有し、
分子量が３０００ないし２５０００であることを特徴と
し、さらにアミノ酸残基組成ではグルタミン酸およびア
スパラギン酸の割合が高く、またヒスチジンに対するグ
ルタミン酸およびアスパラギン酸の比率が高いものであ
ることを特徴とする、癌または悪性細胞の存在検出方法
。
９、細胞集団が生体内にある、第８項記載の方法。
ＩＯ１細胞集団が試験管内にある、第８項記載の方法。
ｔｔ、癌レコグニンがマリグニンである、第８項記載の
方法。
１２、単クローン性抗マリグニン抗体−速型またはその
精製フラクションからなる生産物において、生産物また
はその精製フラクションが癌細胞と優先的に結合しかつ
視覚的または信号発射手段により検出されることができ
、マリグニンが脳腫瘍細胞遅型生産細胞からなる生産物
からなり、定量的沈降素試験およびラフタロニー寒天内
ゲル拡散試験においてその特異的抗体で単一系沈澱を形
成し、水および酸性もしくは中性ｐＨを有する水溶液に
可溶でアルカリ性ｐＨでは不溶であり、分光光度計によ
る吸収ピーク波長２８０ｍμを有し、分子量がｔｏｏｏ
ｏであり、アミノ酸残基組成がほぼ下記の通りであり、 アスパラギン酸 スレオニン セリン グルタミン酸 プロリン グリシン アラニン バリン １／２システイン メチオニン イソロイシン ロイシン ３ 計８９ システィン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
ンモニア、イソデスモシン、リジンノルロスレオニン５
セリン５グルタミン酸を検出できる程含まないものであ
る、生産物。
１３、単クローン性抗マリグニン抗体−遅型またはその
精製フラクションからなる生産物において、生産物また
はその精製フラクションが癌細胞と優先的に結合しかつ
視覚的または信号発射手段により検出されることができ
、マリグニンが脳腫瘍細胞遅型生産細胞からなる生産物
からなり、定量的沈降素試験およびラフタロニー寒天内
ゲル拡散試験においてその特異的抗体で単一系沈澱を形
成し、水および酸性もしくは中性ｐＨを有する水溶液に
可溶でアルカリ性１）Ｈでは不溶であり、分光光度計チ
ロシン フェニルアラニン リジン ヒスデシン アルギニン による吸収ピーク波長２８０ｍμを有し、分子量が１０
０００であり、アミノ酸残基組成がほぼ下記の通りであ
り、 アスパラギン酸 スレオニン セリン グルタミン酸 プロリン グリシン アラニン バリン １／２システイン メチオニン イソロイシン ロイシン チロシン フェニルアラニン リジン ヒスチジン アルギニン　　　　　　　　　　　　５計８９ システィン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
ンモニア、イソデスモシン、リジンノルロスレオニン５
セリン５グルタミン酸を検出できる程含まないものであ
る、生産物。
１４、単クローン性抗マリグニン抗体−速型および連盟
またはその精製フラクションからなる生産物において、
生産物は癌細胞に対して細胞毒性を有してこれを殺すも
のであり、生産物またはその精製フラクションが癌細胞
と優先的に結合しかつ視覚的または信号発射手段により
検出されることができ、マリグニンが脳腫瘍細胞遅型生
産細胞からなる生産物からなり、定量的沈降素試験およ
びウフタロニー寒天内ゲル拡散試験においてその特異的
抗体で単一系沈澱を形成し、水および酸性もしくは中性
ｐＨを有する水溶液に可溶でアルカリ性ｐＨでは不溶で
あり、分光光度計による吸収ピーク波長２８０ｍμを有
し、分子量がｔｏｏｏｏであり、アミノ酸残基組成がほ
ぼ下記の通りであり、アスパラギン酸 スレオニン セリン グルタミン酸 プロリン グリシン アラニン バリン １／２システイン メチオニン イソロイシン ロイシン チロシン フェニルアラニン リジン ヒスチジン アルギニン システィン酸、 ヒドロキシプロリン、 ン、アンモニア、イソロイシン、リジノノルロスレオニ
ン５セリン５グルタミン酸を検出できる程合まないもの
である、生産物。
１５、単クローン性抗マリグニン抗体−速型またはその
精製フラツジぢンが、特許請求の範囲第１３項記載の単
クローン性抗マリグニン抗体−遅型またはその精製フラ
クションと混合したとき、混合物が癌細胞に対して細胞
毒性を有してこれを殺すものである、第１２項記載の生
産物。
１６、単クローン性抗マリグニン抗体一連型が、癌細胞
に優先的に結合させることを意図する物質と複合したも
のである、第１２項記載の生産物。
１７、単クローン性抗マリグニン抗体−遅型が、癌細胞
に優先的に結合させることを意図する物質と複合したも
のである、第１３項記載の生産物。
１８、単クローン性抗マリグニン抗体一連型／遅型が、
癌細胞に優先的に結合させることを意図する物質と複合
したものである、第１４項記載の生産物。
１９、単クローン性抗癌レコグニンからなる生産物であ
って、抗癌レコグニンは癌レコグニンを生物体に注入す
ることによって生産され、癌レコグニンはその生物体の
細胞に特異的抗癌レコグニンの生産を誘発または惹起す
る能力を有し、抗癌レコグニン生産細胞は次に自己生存
性であり単クローン性抗癌レコグニンの生産によって同
定されるように処理され、上記癌レコグニンは癌腫癌組
織または細胞遅型生産細胞からなる生産物からなるもの
において、定量的沈降素試験およびラフタロニー寒天内
ゲル拡散試験においてその特異的抗体で単一系沈澱を形
威し、水および酸性もしくは中性ｐＨを有する水溶液に
可溶でアルカリ性１）Ｈでは不溶であり、分光光度計に
よる吸収ピーク波長２８０ｍμを有し、分子量が３００
０ないし２５０００であることを特徴とし、さらにアミ
ノ酸残基組成ではグルタミン酸およびアスパラギン酸の
割合が高く、またヒスチジンに対するグルタミン酸およ
びアスパラギン酸の比率が高いものであることを特徴と
する、生産物。
２０、単クローン性抗癌レコグニンまたはその精製フラ
クションか癌細胞と優先的に結合しかつ視覚的または信
号発射手段の結合により検出されるものである、第１９
項記載の生産物。
２１　単クローン性抗癌レコグニンまたはその精製フラ
クションが癌細胞に対して細胞毒性を有しこれを殺すも
のである、第１９項記載の生産物。
２２、単クローン性抗癌レコグニンまたはその精製フラ
クションが癌細胞に優先的に結合させることを意図する
物質と複合したものである、第１９項記載の生産物。
２３、永久的に自分自身を複製し単クローン性抗マリグ
ニン抗体−速型を生産する能力を有することを特徴とす
る単クローン性抗マリグニン抗体速型生産細胞からなる
生産物において、上記生産細胞は抗マリグニン抗体を生
産するようにマリグニンによって特異的にプログラムさ
れたデスオキシリボ核酸を有し、上記マリグニンは脳腫
瘍細胞遅型生産細胞からなる生産物からなり、定量的沈
降素試験およびラフタロニー寒天内ゲル拡散試験におい
てその特異的抗体で単一系沈澱を形成し、水お上び酸性
もしくは中性ｐＨを有する水溶液に可溶でアルカリ性ｐ
ｌ（では不溶であり、分光光度計による吸収ピーク波長
２８０ｍμを有し、分子量が１００００であり、アミノ
酸がほぼ下記の通りであり、 アスパラギン酸 スレオニン セリン グルタミン酸 プロリン グリシン アラニン バリン １／２システイン メチオニン イソロイシン ロイシン チロシン フェニルアラニン リジン　　　　　　　　　　　　　６ ヒスチジン　　　　　　　　　　　２ アルギニン　　　　　　　　　　　　５計８９ システィン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
ンモニア、イソデスモシン、リジンノルロスレオニン５
セリン５グルタミン酸を検出できる程含まないものであ
る、生産物。
２４　永久的に自分自身を複製し単クローン性抗マリグ
ニン抗体−遅型を生産する能力を有することを特徴とす
る単クローン性抗マリグニン抗体−遅型生産細胞からな
る生産物において、上記生産細胞は抗マリグニン抗体を
生産するようにマリグニンによって特異的にプログラム
されたデスオキシリボ核酸を有し、上記マリグニンは脳
腫瘍細胞遅型生産細胞からなる生産物からなり、定量的
沈降素試験およびラフタロニー寒天内ゲル拡散試験にお
いてその特異的抗体で単一系沈澱を形成し、水および酸
性もしくは中性ｐＨを有する水溶液に可溶でアルカリ性
ｐＨでは不溶であり、分光光度計による吸収ピーク波長
２８０ｍμを有し、分子量が１００００であり、アミノ
酸がほぼ下記の通りであり、 アスパラギン酸 スレオニン セリン グルタミン酸 プロリン グリシン アラニン バリン １／２システイン メチオニン イソロイシン ロイシン チロシン フェニルアラニン リジン ヒスチジン アルギニン　　　　　　　　　　　　５計８９ システィン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
ンモニア、イソデスモシン、リジンノルロスレオニン５
セリン５グルタミン酸を検出できる程含まないものであ
る、生産物。
２５、永久的に自分白身を複製し単クローン性抗マリグ
ニン抗体−速型および連撃を生産する能力を有すること
を特徴とする単クローン性抗マリグニン抗体−速型およ
び遅型生産細胞からなる生産物において、上記生産細胞
は抗マリグニン抗体を生産するようにマリグニンによっ
て特異的にプログラムされたデスオキシリボ核酸を有し
、上記マリグニンは脳腫瘍細胞遅型生産細胞からなる生
産物からなり、定量的沈降素試験およびラフタロニー寒
天内ゲル拡散試験においてその特異的抗体で単一系沈澱
を形威し、水および酸性もしくは中性ｐＨを有する水溶
液に可溶でアルカリ性ｐＨでは不溶であり、分光光度計
による吸収ピーク波長２８０ｍμを有し、分子量が１０
０００であり、アミノ酸がほぼ下記の通りであり、 アスパラギン酸 スレオニン セリン グルタミン酸 プロリン グリシン アラニン バリン ！／２システイン メチオニン イソロイシン ロイシン チロシン フェニルアラニン リジン ヒスチジン アルギニン システィン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
ンモニア、イソデスモシン、リジノノルロイシンおよび
ガンマアミノ醋酸を検出できる程合まないものである、
生産物。
２６、第２３項記載のデスオキシリボ核酸からなる、生
産物。
２７、第２４項記載のデスオキシリボ核酸からなる、生
産物。
２８、第２５項記載のデスオキシリボ核酸からなる、生
産物。
２９、第２３ないし２５項の何れか１つによるリボ核酸
からなる、生産物。
【図面の簡単な説明】
第１図は、実施例ｔＯＡにおいて、４つの対照群および
活動期癌患者における抗マグリニン抗体濃度を示すグラ
フである。 第２図Ａは、実施例１０Ａにおいて、各患者における単
純盲定量を示すグラフである。 第２図Ｂは、最後の検体定量後ｌないし４か月後に死亡
（Ｄ）が起こった癌患者（ｌないし７）７例の経時盲定
量を示すグラフである。

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）単クローン性抗マリグニン抗体−遅型またはその
    精製フラクションからなる生産物において、生産物また
    はその精製フラクションが癌細胞と優先的に結合しかつ
    視覚的または信号発射手段により検出されることができ
    、マリグニンが脳腫瘍細胞から得られた生産物からなり
    、定量的沈降素試験およびウフタロニー寒天内ゲル拡散
    試験においてその特異的抗体で単一線沈澱を形成し、水
    および酸性もしくは中性ｐＨを有する水溶液に可溶でア
    ルカリ性ｐＨでは不溶であり、分光光度計による吸収ピ
    ーク波長２８０ｍμを有し、分子量が１００００であり
    、アミノ酸残基組成がほぼ下記の通りであり、 残基概略数 アスパラギン酸９ スレオニン５ セリン５ グルタミン酸１３ プロリン４ グリシン６ アラニン７ バリン６ １／２システイン１ メチオニン２ イソロイシン４ ロイシン８ チロシン３ フェニルアラニン３ リジン６ ヒスチジン２ アルギニン５ 計８９ システイン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
    ンモニア、イソデスモシン、リジノノルロイシンおよび
    ガンマアミノ酪酸を検出できる程合まないものである、
    生産物。
  2. （２）単クローン性抗マリグニン抗体−速型および遅型
    またはその精製フラクションからなる生産物において、
    生産物は癌細胞に対して細胞毒性を有してこれを殺すも
    のであり、生産物またはその精製フラクションが癌細胞
    と優先的に結合しかつ視覚的または信号発射手段により
    検出されることができ、マリグニンが脳腫瘍細胞から得
    られた生産物からなり、定量的沈降素試験およびウフタ
    ロニー寒天内ゲル拡散試験においてその特異的抗体で単
    一線沈澱を形成し、水および酸性もしくは中性ｐＨを有
    する水溶液に可溶でアルカリ性ｐＨでは不溶であり、分
    光光度計による吸収ピーク波長２８０ｍμを有し、分子
    量が１００００であり、アミノ酸残基組成がほぼ下記の
    通りであり、 残基概略数 アスパラギン酸９ スレオニン５ セリン５ グルタミン酸１３ プロリン４ グリシン６ アラニン７ バリン６ １／２システイン１ メチオニン２ イソロイシン４ ロイシン８ チロシン３ フェニルアラニン３ リジン６ ヒスチジン２ アルギニン５ 計８９ システイン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
    ンモニア、イソデスモシン、リジノノルロイシンおよび
    ガンマアミノ酪酸を検出できる程含まないものである、
    生産物。
  3. （３）単クローン性抗マリグニン抗体−遅型が、癌細胞
    に優先的に結合させることを意図する物質と複合したも
    のである、特許請求の範囲第１項記載の生産物。
  4. （４）単クローン性抗マリグニン抗体−速型／遅型が、
    癌細胞に優先的に結合させることを意図する物質と複合
    したものである、特許請求の範囲第２項記載の生産物。
  5. （５）永久的に自分自身を複製し単クローン性抗マリグ
    ニン抗体−速型を生産する能力を有することを特徴とす
    る単クローン性抗マリグニン抗体−速型生産細胞からな
    る生産物において、上記生産細胞は抗マリグニン抗体を
    生産するようにマリグニンによって特異的にプログラム
    されたデスオキシリボ核酸を有し、上記マリグニンは脳
    腫瘍細胞から得られた生産物からなり、定量的沈降素試
    験およびウフタロニー寒天内ゲル拡散試験においてその
    特異的抗体で単一線沈澱を形成し、水および酸性もしく
    は中性ｐＨを有する水溶液に可溶でアルカリ性ｐＨでは
    不溶であり、分光光度計による吸収ピーク波長２８０ｍ
    μを有し、分子量が１００００であり、アミノ酸がほぼ
    下記の通りであり、残基概略数 アスパラギン酸９ スレオニン５ セリン５ グルタミン酸１３ プロリン４ グリシン６ アラニン７ バリン６ １／２システイン１ メチオニン２ イソロイシン４ ロイシン８ チロシン３ フェニルアラニン３ リジン６ ヒスチジン２ アルギニン５ 計８９ システイン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
    ンモニア、イソデスモシン、リジノノルロイシンおよび
    ガンマアミノ酪酸を検出できる程合まないものである、
    生産物。
  6. （６）永久的に自分自身を複製し単クローン性抗マリグ
    ニン抗体−遅型を生産する能力を有することを特徴とす
    る単クローン性抗マリグニン抗体−遅型生産細胞からな
    る生産物において、上記生産細胞は抗マリグニン抗体を
    生産するようにマリグニンによって特異的にプログラム
    されたデスオキシリボ核酸を有し、上記マリグニンは脳
    腫瘍細胞から得られた生産物からなり、定量的沈降素試
    験およびウフタロニー寒天内ゲル拡散試験においてその
    特異的抗体で単一線沈澱を形成し、水および酸性もしく
    は中性ｐＨを有する水溶液に可溶でアルカリ性ｐＨでは
    不溶であり、分光光度計による吸収ピーク波長２８０ｍ
    μを有し、分子量が１００００であり、アミノ酸がほぼ
    下記の通りであり、残基概略数 アスパラギン酸９ スレオニン５ セリン５ グルタミン酸１３ プロリン４ グリシン６ アラニン７ バリン６ １／２システイン１ メチオニン２ イソロイシン４ ロイシン８ チロシン３ フェニルアラニン３ リジン６ ヒスチジン２ アルギニン５ 計８９ システイン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
    ンモニア、イソデスモシン、リジノノルロイシンおよび
    ガンマアミノ酪酸を検出できる程含まないものである、
    生産物。
  7. （７）永久的に自分自身を複製し単クローン性抗マリグ
    ニン抗体−速型および遅型を生産する能力を有すること
    を特徴とする単クローン性抗マリグニン抗体−速型およ
    び遅型生産細胞からなる生産物において、上記生産細胞
    は抗マリグニン抗体を生産するようにマリグニンによっ
    て特異的にプログラムされたデスオキシリボ核酸を有し
    、上記マリグニンは脳腫瘍細胞から得られた生産物から
    なり、定量的沈降素試験およびウフタロニー寒天内ゲル
    拡散試験においてその特異的抗体で単一線沈澱を形成し
    、水および酸性もしくは中性ｐＨを有する水溶液に可溶
    でアルカリ性ｐＨでは不溶であり、分光光度計による吸
    収ピーク波長２８０ｍμを有し、分子量が１００００で
    あり、アミノ酸がほぼ下記の通りであり、 残基概略数 アスパラギン酸９ スレオニン５ セリン５ グルタミン酸１３ プロリン４ グリシン６ アラニン７ バリン６ １／２システイン１ メチオニン２ イソロイシン４ ロイシン８ チロシン３ フェニルアラニン３ リジン６ ヒスチジン２ アルギニン５ 計８９ システイン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ア
    ンモニア、イソデスモシン、リジノノルロイシンおよび
    ガンマアミノ酪酸を検出できる程含まないものである、
    生産物。
  8. （８）特許請求の範囲第５項記載のデスオキシリボ核酸
    からなる、生産物。
  9. （９）特許請求の範囲第６項記載のデスオキシリボ核酸
    からなる、生産物。
  10. （１０）特許請求の範囲第７項記載のデスオキシリボ核
    酸からなる、生産物。
  11. （１１）特許請求の範囲第５ないし７項の何れか１つに
    よるリボ核酸からなる、生産物。
JP1146551A 1981-06-08 1989-06-08 悪性腫瘍細胞の検出 Pending JPH0372894A (ja)

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