JPS60214799A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体Info
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- JPS60214799A JPS60214799A JP59260984A JP26098484A JPS60214799A JP S60214799 A JPS60214799 A JP S60214799A JP 59260984 A JP59260984 A JP 59260984A JP 26098484 A JP26098484 A JP 26098484A JP S60214799 A JPS60214799 A JP S60214799A
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- JP
- Japan
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- cells
- antibody
- small cell
- cell carcinoma
- monoclonal antibody
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明はモノクローナル抗体に関するものである。
クチツタ等〔プルシーディング・ナショナル・アカデミ
−・サイエンス、第７８巻、第４５９１頁（１９８１）
）は、肺のヒト小細胞癌細胞（ＳＣＣ）、腺癌及び鱗細
胞癌並びにヒト神経芽細胞腫及び胸痛細胞と反応するモ
ノクローナル抗体を記載している。マザウリツク等〔カ
ンサー・リサーチ、第４２巻、第１５０頁（１９８２）
）は、幾種かの非ＳＣＣ肺癌細胞、直腸癌細胞、胸痛細
胞及び黒色腫細胞と反応するモノクローナル抗体を記載
している。
−・サイエンス、第７８巻、第４５９１頁（１９８１）
）は、肺のヒト小細胞癌細胞（ＳＣＣ）、腺癌及び鱗細
胞癌並びにヒト神経芽細胞腫及び胸痛細胞と反応するモ
ノクローナル抗体を記載している。マザウリツク等〔カ
ンサー・リサーチ、第４２巻、第１５０頁（１９８２）
）は、幾種かの非ＳＣＣ肺癌細胞、直腸癌細胞、胸痛細
胞及び黒色腫細胞と反応するモノクローナル抗体を記載
している。
発明の要約
一般に、本発明は−１においてＳＣＣ細胞と反応するが
ヒト神経芽細胞腫、ヒト鱗細胞癌細胞及ヒヒト大細胞未
分化肺癌細胞と反応しないモノクローナル抗体に関する
ものである。
ヒト神経芽細胞腫、ヒト鱗細胞癌細胞及ヒヒト大細胞未
分化肺癌細胞と反応しないモノクローナル抗体に関する
ものである。
好適具体例において、この抗体はＩｇＭ又はＩｇＧ２ア
イソタイプであり、ＳＣＣ細胞の表面における約５０．
０００ダルトンの抗原決定子、或いはＳＣＣ細胞の表面
における約２５．０００ダルトンの抗原決定子、或いは
その両者を識別する。
イソタイプであり、ＳＣＣ細胞の表面における約５０．
０００ダルトンの抗原決定子、或いはＳＣＣ細胞の表面
における約２５．０００ダルトンの抗原決定子、或いは
その両者を識別する。
好ましくは、この抗体は補体の存在下でＳＣＣ細胞を試
験管内にて溶解することができる。
験管内にて溶解することができる。
本発明の抗体は、たとえば放射性若しくは蛍光性の標識
でラベルすることができ、これを使用してＳＣＣ腫瘍細
胞を同定すると共にこれら細胞を非癌性細胞及び非ＳＣ
Ｃ肺腫瘍細胞がら識別することができる。さらに、本発
明の抗−８ｃｃを治療上使用してＳＣＣに罹患した患者
を治療するととができ、この抗体を単独で患者に投与し
たり或いは細胞毒性剤に結合して投与することもできる
。
でラベルすることができ、これを使用してＳＣＣ腫瘍細
胞を同定すると共にこれら細胞を非癌性細胞及び非ＳＣ
Ｃ肺腫瘍細胞がら識別することができる。さらに、本発
明の抗−８ｃｃを治療上使用してＳＣＣに罹患した患者
を治療するととができ、この抗体を単独で患者に投与し
たり或いは細胞毒性剤に結合して投与することもできる
。
さらに、この抗体を使用して転移ＳＣＣ細胞の臨床試料
、たとえば骨髄を浄化することもできる。
、たとえば骨髄を浄化することもできる。
上記特性を有しがっＳＣＣ細胞に対し特異性である全て
のモノクａ−ナル抗体が本発明に包含される。これらモ
ノクローナル抗体は、たとえばラインヘルツ等〔ジャー
ナル・イミュノロジー、第１２５号、第１３１２頁（１
９７？）ど〕及びリンツ等〔ネイチャー、第２８３巻、
第５８３頁（１９８０））に記載されたような慣用のハ
イブリッド化及びスクリーニング技術を用いて作成しタ
ハイフリッＦ Ｍ ＩＩＩにより産生される。モノクロ
ーナル抗体の分野で周知されているように、同一の特定
抗原決定子に対し特異性であるモノクローナル抗体を産
生ずるそれぞれ独立に生成されたハイブリッド細胞ツイ
ンは、このように産生されたモノクローナル抗体のそれ
ぞれと同様に互いに全く相違する。すなわち、下記方法
を反復すればＳＣＣ細胞に対し特異性である有用なモノ
クｏ −ナル抗体を産生ずるハイブリッド細胞ラインを
生成しうるが、下記するモノクリ−ナル抗体の化学的に
正確なコピーであるモノクローナル抗体を産生ずる細胞
ラインは生成しないと思われる。
のモノクａ−ナル抗体が本発明に包含される。これらモ
ノクローナル抗体は、たとえばラインヘルツ等〔ジャー
ナル・イミュノロジー、第１２５号、第１３１２頁（１
９７？）ど〕及びリンツ等〔ネイチャー、第２８３巻、
第５８３頁（１９８０））に記載されたような慣用のハ
イブリッド化及びスクリーニング技術を用いて作成しタ
ハイフリッＦ Ｍ ＩＩＩにより産生される。モノクロ
ーナル抗体の分野で周知されているように、同一の特定
抗原決定子に対し特異性であるモノクローナル抗体を産
生ずるそれぞれ独立に生成されたハイブリッド細胞ツイ
ンは、このように産生されたモノクローナル抗体のそれ
ぞれと同様に互いに全く相違する。すなわち、下記方法
を反復すればＳＣＣ細胞に対し特異性である有用なモノ
クｏ −ナル抗体を産生ずるハイブリッド細胞ラインを
生成しうるが、下記するモノクリ−ナル抗体の化学的に
正確なコピーであるモノクローナル抗体を産生ずる細胞
ラインは生成しないと思われる。
好適な実施態様の説明
以下、本発明を好適具体例につき説明する。
８Ｍ１ハイプリドーマの生成
り Ａ Ｌ Ｂ ／ ｅネズミを、７ランシス等〔カン
サー・リサーチ、第４３巻、第６３９−６４５頁（１９
１５））に記載された〇Ｈ−１と称するＳＣＣ細胞ライ
ンのような１０７個のＳＣＣ細胞を４週間にわたり腹腔
内注射して免疫化させた。４週間の休止期間の後、これ
らネズミには２日間間隔でＳＣＣ細胞を４回注射した。
サー・リサーチ、第４３巻、第６３９−６４５頁（１９
１５））に記載された〇Ｈ−１と称するＳＣＣ細胞ライ
ンのような１０７個のＳＣＣ細胞を４週間にわたり腹腔
内注射して免疫化させた。４週間の休止期間の後、これ
らネズミには２日間間隔でＳＣＣ細胞を４回注射した。
最後の注射をしてから３日後に牌臓を取り出し、牌細胞
を骨髄腫細胞、たとえばネズミ細胞ライン５Ｐ３−ＮＳ
Ｉ−ＡＧ−４−１と、牌細胞２個／骨髄腫細胞１個の割
合で５０％（ｕ／マ）ぎりエチレングリコール／−中に
て３７℃で１分間融合させる。次いで、細胞懸濁物を、
血清なしのＲＰＭＩ ８−で２分間希釈する。これら細
胞を遠心分離によりペレット化させ、かつ１０ｓ牛血清
を有するＲＰＭＩに再懸濁させる。これらの細胞を９６
穴のミクｐ測定板に１Ｘ１０Ｓの細胞／穴１個の割合で
分布させる。
を骨髄腫細胞、たとえばネズミ細胞ライン５Ｐ３−ＮＳ
Ｉ−ＡＧ−４−１と、牌細胞２個／骨髄腫細胞１個の割
合で５０％（ｕ／マ）ぎりエチレングリコール／−中に
て３７℃で１分間融合させる。次いで、細胞懸濁物を、
血清なしのＲＰＭＩ ８−で２分間希釈する。これら細
胞を遠心分離によりペレット化させ、かつ１０ｓ牛血清
を有するＲＰＭＩに再懸濁させる。これらの細胞を９６
穴のミクｐ測定板に１Ｘ１０Ｓの細胞／穴１個の割合で
分布させる。
細胞融合の２４時間後から出発し、これらプレートにＨ
ＡＴ培地を含有するＲＰＭＩを供給する。
ＡＴ培地を含有するＲＰＭＩを供給する。
融合の後３日目及び７日目に、さらにＨＡＴ媒地を加え
る。１００日目媒地を、ヒボキサンチンとチミジンとを
含有するがアミノプテリンを含有しないＲＰＭＩで交換
する。２週間後、これら穴の６０％は増殖ハイブリドー
マ細胞を含有することが判明した。これらの１種、すな
わちＳＭｌと命名したものは、ＳＣＣに対し高度に反応
性である。
る。１００日目媒地を、ヒボキサンチンとチミジンとを
含有するがアミノプテリンを含有しないＲＰＭＩで交換
する。２週間後、これら穴の６０％は増殖ハイブリドー
マ細胞を含有することが判明した。これらの１種、すな
わちＳＭｌと命名したものは、ＳＣＣに対し高度に反応
性である。
これら細胞をメト七ルにおいてサブク四−ン化させ、か
つＳＣＣに対する反応性につきスクリーニングする。抗
体の産生は凍結／解凍、培養フラスコにおける順次の通
過及びＢａ１ｂ／ｃネズミにおける腹水細胞としての繁
殖の後にも安定である。この８Ｍ１細胞を、メリーラン
ド州・ロックビル在・アメリカン・タイプ・カルチャー
・コレクシミンに寄託し、ＡＴＣＣＡＨＢ ８４６２が
付与された。
つＳＣＣに対する反応性につきスクリーニングする。抗
体の産生は凍結／解凍、培養フラスコにおける順次の通
過及びＢａ１ｂ／ｃネズミにおける腹水細胞としての繁
殖の後にも安定である。この８Ｍ１細胞を、メリーラン
ド州・ロックビル在・アメリカン・タイプ・カルチャー
・コレクシミンに寄託し、ＡＴＣＣＡＨＢ ８４６２が
付与された。
８Ｍ１抗体の特性化
ＳＭ１抗体のアイソタイプは、免疫拡散分析及び間接的
免疫蛍光分析により決定される。免疫拡散は、８Ｍ１ハ
イブリドーマ培養物からの上澄液及び８Ｍ１腹水液につ
き、ヤギ抗−ネズミＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＭ及びＩ
ｇＡを用いて行なわれる。
免疫蛍光分析により決定される。免疫拡散は、８Ｍ１ハ
イブリドーマ培養物からの上澄液及び８Ｍ１腹水液につ
き、ヤギ抗−ネズミＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＭ及びＩ
ｇＡを用いて行なわれる。
ＳＣＣ細胞を８Ｍ１腹水液と共に培養し、そしてフルオ
レセンイ結合したヤギ抗−ネズミＩｇＱ１、Ｉ ｇＧ２
及びＩｇＭ（ペンシルバニア州、ダウニントン在、カペ
ル・ラボラドリース社）に対する反応性につき間接免疫
蛍光分析により試験する。
レセンイ結合したヤギ抗−ネズミＩｇＱ１、Ｉ ｇＧ２
及びＩｇＭ（ペンシルバニア州、ダウニントン在、カペ
ル・ラボラドリース社）に対する反応性につき間接免疫
蛍光分析により試験する。
両技術は、ＳＭ１抗体がＩｇＭアイソタイプであること
を示す。
を示す。
８Ｍ１の反応性パターンは、間接的免疫蛍光分析及び放
射線免疫分析の両者によって決定する。
射線免疫分析の両者によって決定する。
懸濁細胞、カバーガラスに付着した細胞又は凍結部分を
、間接免疫蛍光分析用として、血清を含まないＲＰＭＩ
で３回洗浄して作成する。５０ｐｊのハイプリドーマ上
澄液又は１：１０００まで希釈された腹水液５０μｔの
いずれかを、試験細胞若しくは組織に加えて、５７℃で
３０分間培養する。これを試料をＰＢＳで６回洗浄し、
そしてフルオレ七イン結合したヤギ抗−ネズミＩｇＧ（
パージニヤ州・スプリングフィールド化、メ四イ・ラボ
ラドリース・インコーポレーション社）と共にＰＢＳで
１：５０希釈して５０分間培養する。
、間接免疫蛍光分析用として、血清を含まないＲＰＭＩ
で３回洗浄して作成する。５０ｐｊのハイプリドーマ上
澄液又は１：１０００まで希釈された腹水液５０μｔの
いずれかを、試験細胞若しくは組織に加えて、５７℃で
３０分間培養する。これを試料をＰＢＳで６回洗浄し、
そしてフルオレ七イン結合したヤギ抗−ネズミＩｇＧ（
パージニヤ州・スプリングフィールド化、メ四イ・ラボ
ラドリース・インコーポレーション社）と共にＰＢＳで
１：５０希釈して５０分間培養する。
ＰＢＳで３回洗浄した後、これら細胞を蛍光染色につき
ツアイス（Ｚ＠１ｍｓ ）蛍光（ｅｐｒｆｌｎｏｒ＠５
ｅｅｎｅｓ）顕微鏡を用いて観察する。ＭＰＲ−１（ダ
ナーファバー癌協会のイー・ユニス（Ｅ Ｙｕｎｉｇ
）博士寄贈）、すなわちネズミＩｇＭモノクローナル抗
体を陰性比較抗体として使用し、他のネズミモノクロー
ナル抗体（８Ｍ１５ ）を陽性比較抗体として使用する
。
ツアイス（Ｚ＠１ｍｓ ）蛍光（ｅｐｒｆｌｎｏｒ＠５
ｅｅｎｅｓ）顕微鏡を用いて観察する。ＭＰＲ−１（ダ
ナーファバー癌協会のイー・ユニス（Ｅ Ｙｕｎｉｇ
）博士寄贈）、すなわちネズミＩｇＭモノクローナル抗
体を陰性比較抗体として使用し、他のネズミモノクロー
ナル抗体（８Ｍ１５ ）を陽性比較抗体として使用する
。
放射線免疫分析用の試料を作成するため、懸濁細胞ライ
ンと組織培養皿から掻き取った細胞とを、血清を含まな
いＲＰＭＩにより３回洗浄する。腫瘍組織及び正常組織
を細い鋏で細片まで切断し、鉗子により引きちぎった。
ンと組織培養皿から掻き取った細胞とを、血清を含まな
いＲＰＭＩにより３回洗浄する。腫瘍組織及び正常組織
を細い鋏で細片まで切断し、鉗子により引きちぎった。
次いで、細胞懸濁物を遠心管に移す。数個の大きい組織
片をさらに２２番手の針に通して分散させた。これら細
胞懸濁物を他の遠心管にデカントし、かつ低速度で遠心
分離しそして細胞をＰＢＳで６回洗浄する。細胞数を各
調製物につき決定し、かつ細胞１０６個／−に調整する
。
片をさらに２２番手の針に通して分散させた。これら細
胞懸濁物を他の遠心管にデカントし、かつ低速度で遠心
分離しそして細胞をＰＢＳで６回洗浄する。細胞数を各
調製物につき決定し、かつ細胞１０６個／−に調整する
。
各試験において、１０５個の細胞を１０％ヤギ予備免疫
血清と共に１時間培養し、そして１％牛血清アルブミン
を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
血清と共に１時間培養し、そして１％牛血清アルブミン
を含有するＰＢＳで３回洗浄する。
これら細胞を、ハイブリドーマ培養物からの上澄液或い
はＰＢＳ中で１ ： ５０００に希釈された腹水液と共
に５７℃で３０分間培養する。比較細胞Ｇ；ｊ、ＭＰＲ
−Ｉ ＩｇＭモノクローナル抗体又はＮＳ１培養物から
の上澄液と共に培養する。ＰＢＳで３回洗浄した後、６
０．０００ ｃｐｍの１１２５−標識したヤギ抗−ネズ
ミ免疫グロブリン（二ニー・イングランド・ヌクレアｔ
ｉ］）を力Ｕえ、そして培養を６７℃で３０分間行なう
。未結合の沃素化した抗体を、ＰＢＳで６回細胞を洗浄
して除去する。細胞にシンチレーション液を加え、そし
て懸濁液を壜に移してパラカード型αカウンタで計数す
る。
はＰＢＳ中で１ ： ５０００に希釈された腹水液と共
に５７℃で３０分間培養する。比較細胞Ｇ；ｊ、ＭＰＲ
−Ｉ ＩｇＭモノクローナル抗体又はＮＳ１培養物から
の上澄液と共に培養する。ＰＢＳで３回洗浄した後、６
０．０００ ｃｐｍの１１２５−標識したヤギ抗−ネズ
ミ免疫グロブリン（二ニー・イングランド・ヌクレアｔ
ｉ］）を力Ｕえ、そして培養を６７℃で３０分間行なう
。未結合の沃素化した抗体を、ＰＢＳで６回細胞を洗浄
して除去する。細胞にシンチレーション液を加え、そし
て懸濁液を壜に移してパラカード型αカウンタで計数す
る。
ＳＭ１抗体はＳＣＣ細胞ライン及び新鮮なＳＣＣ腫瘍の
表面膜に対し強度に反応性である。ＳＭ１抗体はＳＣＣ
肺腫瘍及び肝臓に対するＳＣＣ転移に対し反応性である
が、気管支表皮細胞、肺実質組織、肝臓、腎臓及び脳を
含む正常組織に対し反応性でない。ヒト赤血球及び骨髄
細胞も非反応性である。ＳＭ１抗体は非ＳＣＣ肺腫瘍、
たとえば癌性腫瘍、神経芽細胞腫、腺癌、黒色腫又は気
管支癌に対して反応しない。
表面膜に対し強度に反応性である。ＳＭ１抗体はＳＣＣ
肺腫瘍及び肝臓に対するＳＣＣ転移に対し反応性である
が、気管支表皮細胞、肺実質組織、肝臓、腎臓及び脳を
含む正常組織に対し反応性でない。ヒト赤血球及び骨髄
細胞も非反応性である。ＳＭ１抗体は非ＳＣＣ肺腫瘍、
たとえば癌性腫瘍、神経芽細胞腫、腺癌、黒色腫又は気
管支癌に対して反応しない。
ＳＭ１抗体により識別される抗原は、ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動及び免疫ブ四ツ）（ｔＪ：、！：り分析
される。対数増殖する０Ｈ−１細胞を冷ＰＢＳで３回洗
浄し、そして弗化フェニルメチルスルホニルの１ミリモ
ルを含むＰＢＳに再懸濁させる。これら細胞を、水中に
？ツターエルペハイム（Ｐｏｔｔｓｒ −Ｅｌｖｓｈｌ
ｅｍ ）のホモゲナイザで溶解する。懸濁物を６００×
ｆにて遠心分離することにより核をペレット化させ、そ
して細胞物質を凝固させる。上澄液を１００，０００Ｘ
ｆにて２０分間遠心分離して膜をペレット化させる。こ
のペレットを１００μｔの洗浄ｋＭ衝液及び５０μｔの
０．０６２５モル トリス−ＨＣＩ（ｐＨ８，６）と１
０％グリセリンと５％２−ＭＥと３％ドデシル硫酸ナト
リウムと０．０００１％ブロムフェノールブルーとを含
有する緩衝液に再懸濁する。この試料を一次元ポリアク
リルアミドゲル電気泳動により分析する。ｆ白質を、フ
エーファ（Ｈｕｅｆｅｒ ）・インストルメンツ社のト
ランスプロット装置を用いてニトロセルロース紙に移す
。トランスプロット緩衝液は２５ミリモルのトリス−Ｍ
ＣＩ（ｐＨ８３）と１９２ミリモルのグリシンと２０％
のメタノールとを含有する。α２５了ンペアかつ１０ボ
ルトの電流を１晩流す。蛋白質の移動が完了した後、こ
のニトロセルソースシートを帯片に切断して風乾する。
ドゲル電気泳動及び免疫ブ四ツ）（ｔＪ：、！：り分析
される。対数増殖する０Ｈ−１細胞を冷ＰＢＳで３回洗
浄し、そして弗化フェニルメチルスルホニルの１ミリモ
ルを含むＰＢＳに再懸濁させる。これら細胞を、水中に
？ツターエルペハイム（Ｐｏｔｔｓｒ −Ｅｌｖｓｈｌ
ｅｍ ）のホモゲナイザで溶解する。懸濁物を６００×
ｆにて遠心分離することにより核をペレット化させ、そ
して細胞物質を凝固させる。上澄液を１００，０００Ｘ
ｆにて２０分間遠心分離して膜をペレット化させる。こ
のペレットを１００μｔの洗浄ｋＭ衝液及び５０μｔの
０．０６２５モル トリス−ＨＣＩ（ｐＨ８，６）と１
０％グリセリンと５％２−ＭＥと３％ドデシル硫酸ナト
リウムと０．０００１％ブロムフェノールブルーとを含
有する緩衝液に再懸濁する。この試料を一次元ポリアク
リルアミドゲル電気泳動により分析する。ｆ白質を、フ
エーファ（Ｈｕｅｆｅｒ ）・インストルメンツ社のト
ランスプロット装置を用いてニトロセルロース紙に移す
。トランスプロット緩衝液は２５ミリモルのトリス−Ｍ
ＣＩ（ｐＨ８３）と１９２ミリモルのグリシンと２０％
のメタノールとを含有する。α２５了ンペアかつ１０ボ
ルトの電流を１晩流す。蛋白質の移動が完了した後、こ
のニトロセルソースシートを帯片に切断して風乾する。
これら帯片を１％の正常ヤギ血清と共に３７℃で１時間
予備培養する。帯片を次いで０．９％ＮａＣ１溶液で１
０分間にわたり洗浄する。
予備培養する。帯片を次いで０．９％ＮａＣ１溶液で１
０分間にわたり洗浄する。
ＰＢＳ及び５％牛血清アルブミンにおける１：１０００
の福釈にてＳＭｌの抗体と帯片と共に４℃で２時間培養
する。比較は、ＯＥＭ白血病細胞蛋白質及びＮＳ１骨髄
腫培養培地を含有するニトロセルロース帯片と共に培養
したＳＭ１抗体、或いはＳＣＣ細胞蛋白質を含有するニ
トロセルロース帯片と共に培養したＭＰＲ−１抗体を包
含する。
の福釈にてＳＭｌの抗体と帯片と共に４℃で２時間培養
する。比較は、ＯＥＭ白血病細胞蛋白質及びＮＳ１骨髄
腫培養培地を含有するニトロセルロース帯片と共に培養
したＳＭ１抗体、或いはＳＣＣ細胞蛋白質を含有するニ
トロセルロース帯片と共に培養したＭＰＲ−１抗体を包
含する。
抗体と共に培養した後、帯片を静かに攪拌しながら０９
％Ｎ ａ ＣＩ溶液にて５回変えながら室温にて２時間
洗浄する。０．９％ＮａＣ１溶液及び１％牛血清アルブ
ミンにおいて１：５００まで希釈されたペルオキシダー
ゼ結合したヤギ抗−ネズミ抗体をこれら帯片に加え、そ
して室温にて培養を２時間続ける。反応を停止させるた
め、これら帯片を２回蒸留した水で洗浄する。乾燥後、
これら帯片を写真用の厚紙に載置する。
％Ｎ ａ ＣＩ溶液にて５回変えながら室温にて２時間
洗浄する。０．９％ＮａＣ１溶液及び１％牛血清アルブ
ミンにおいて１：５００まで希釈されたペルオキシダー
ゼ結合したヤギ抗−ネズミ抗体をこれら帯片に加え、そ
して室温にて培養を２時間続ける。反応を停止させるた
め、これら帯片を２回蒸留した水で洗浄する。乾燥後、
これら帯片を写真用の厚紙に載置する。
ＳＭ１抗体は、８ＣＣ＠胞の表面における２Ｗｉの異な
る抗原決定子を識別する。これら決定子は、免疫プロッ
トにおけるＳＣＣ細胞の膜抽出物に対するＳＭｉ抗体の
反応性パターンを観察することにより決定して、それぞ
れ約２５．０００ダルトン及びｓ ｏ、 ｏ ｏ ｏダ
ルトンの分子量を有する。これに対し、ＳＭＩ抗体はＯ
ＥＭ！ｊンパ芽白血病細胞の膜抽出物における抗原決定
子のいずれとも反応しない。
る抗原決定子を識別する。これら決定子は、免疫プロッ
トにおけるＳＣＣ細胞の膜抽出物に対するＳＭｉ抗体の
反応性パターンを観察することにより決定して、それぞ
れ約２５．０００ダルトン及びｓ ｏ、 ｏ ｏ ｏダ
ルトンの分子量を有する。これに対し、ＳＭＩ抗体はＯ
ＥＭ！ｊンパ芽白血病細胞の膜抽出物における抗原決定
子のいずれとも反応しない。
８Ｍ１抗体に対する完全ＳＣＣ細胞の免疫蛍光染色は、
Ｓ Ｍｌ 猷別される抗原決定子が培養物におけるＳＣ
Ｃ細胞の１００％に近い細胞欣を包囲してリングパター
ンで均一分布することを示す。
Ｓ Ｍｌ 猷別される抗原決定子が培養物におけるＳＣ
Ｃ細胞の１００％に近い細胞欣を包囲してリングパター
ンで均一分布することを示す。
ＳＣＣ細胞に対する免疫蛍光分析の検剖は、８Ｍ１抗原
がトリプシン又はメイラミニダーゼ処理に対して感受性
でないことを示す。
がトリプシン又はメイラミニダーゼ処理に対して感受性
でないことを示す。
用途
ＳＣＣ細胞の同宇
本発明のモノクローナル抗体は、以１の手順により肺癌
を組織学的に分類するのに使用することができる。ＳＣ
Ｃ細胞を有すると疑われる。ｆｉｌｌｌ胞試料を抗体と
接触させ、そして免疫複合体をＳＣＣ細胞の存在の指標
として検出する。ＳＭ１抗体と反応しかつフルメレジン
結合したヤギ抗−ネズミ抗体を用いる間接免疫蛍光性に
より染色した新鮮な８ＣＣ腫瘍細胞は、細胞限界部にお
いてリング模様で蛍光を示す。同じ患者からの気管支表
皮細胞及び気管支繊維芽細胞は抗体と反応しない。
を組織学的に分類するのに使用することができる。ＳＣ
Ｃ細胞を有すると疑われる。ｆｉｌｌｌ胞試料を抗体と
接触させ、そして免疫複合体をＳＣＣ細胞の存在の指標
として検出する。ＳＭ１抗体と反応しかつフルメレジン
結合したヤギ抗−ネズミ抗体を用いる間接免疫蛍光性に
より染色した新鮮な８ＣＣ腫瘍細胞は、細胞限界部にお
いてリング模様で蛍光を示す。同じ患者からの気管支表
皮細胞及び気管支繊維芽細胞は抗体と反応しない。
ＳＭ１抗体は、非ＳＣＣ腫瘍がこの抗体に対し非反応性
であるため、ＳＣＣを非ＳＣＣ肺腫瘍から区別するのに
有用である。
であるため、ＳＣＣを非ＳＣＣ肺腫瘍から区別するのに
有用である。
ＳＣＣ肺腫瘍と非ＳＣＣ肺腫瘍とを区別するＳＭｌの能
力は、治療の点で極めて重要である。
力は、治療の点で極めて重要である。
成る種の癌性肺腫瘍は慣用の組織学的方法を用いてＳＣ
Ｃから区別するのが極めて困難であり、ＳＣＣ及び癌腫
瘍の治療は根本的に異なるため誤診は重大な結果を引き
起こす。ＳＭｌは、必要とされる正確な診断を与え、し
たがって正確な治療が行なわれるよう確保する。
Ｃから区別するのが極めて困難であり、ＳＣＣ及び癌腫
瘍の治療は根本的に異なるため誤診は重大な結果を引き
起こす。ＳＭｌは、必要とされる正確な診断を与え、し
たがって正確な治療が行なわれるよう確保する。
転移性ＳＣＣ細胞は、ＳＭｌを用いて正常骨髄細胞から
次のようにして容易に検出される。骨髄（ｓ−１ｏｃｔ
、）を、５ｃｃ０単位の保存料を含まないヘパリンを含
有する注射器に吸入する。この骨髄を２倍容量の血清を
含まない媒体で希釈し、８００ ｒｐｒｎにて１０分間
遠心分離して単一核細胞と肺癌細胞とを分離する。ペレ
ットを塩化アンモニウム（すなわち４．１４５ ｆのＮ
Ｈ４Ｃｌ と０．５ｆのＫＩ（ＣＯ３と０．０１８６ｒ
ＥＤＴＡとを５００ｄとなしｐ Ｈ７、２７を有する水
溶液）５ｃｃに再懸濁し、そして４℃に６分間保つ。１
０ＣＣの血清を含まない媒体を加え、そして細胞懸濁物
をｓ ｏ Ｏｒｐｍにて５分間遠心分離する。ペレット
が赤血球を含有する場合には、Ｎｕ、Ｃ１における再懸
濁及び遠心分離を反復する。ＮＨ４Ｃｌは腫瘍細胞に対
し形性となりうるため、このＮＨ４Ｃｌ処理を最高３回
まで行なう。次いで、ペレットを血清を含まない媒体中
で２回洗浄し、そして細胞濃度を免疫蛍光分析（細胞１
０５個／試料）及び流動細胞分析（１０６個／試１）に
調整する。ＳＭ１抗体の１＝１０００希釈物１００μｔ
を各試料に加え、そして細胞を３７℃で１５分鋤に回動
しながら１時間培養する。細胞を血清を含まない媒体で
２回洗浄し、そして蛍光処理したヤギ抗−ネズミＩｇＭ
の１；２０希釈物３０μＬでｓ緘する。これら細胞を１
時間培養し、血清を含まない媒体で２回洗浄する。フロ
ーシトメトリーにより分析する試料を４μｍの布メツシ
ュに通して濾過することにより全ての凝集蛋白質を除去
し、免疫蛍光分析により分析する細胞は湿式装着技術に
よりスライド上に載置する。ＳＭ１抗体に対し高度に反
応性である細胞を細胞選別により集め、そして細胞検査
及びメトセル中での増殖によりＳＣＣ細胞であることを
確認する。
次のようにして容易に検出される。骨髄（ｓ−１ｏｃｔ
、）を、５ｃｃ０単位の保存料を含まないヘパリンを含
有する注射器に吸入する。この骨髄を２倍容量の血清を
含まない媒体で希釈し、８００ ｒｐｒｎにて１０分間
遠心分離して単一核細胞と肺癌細胞とを分離する。ペレ
ットを塩化アンモニウム（すなわち４．１４５ ｆのＮ
Ｈ４Ｃｌ と０．５ｆのＫＩ（ＣＯ３と０．０１８６ｒ
ＥＤＴＡとを５００ｄとなしｐ Ｈ７、２７を有する水
溶液）５ｃｃに再懸濁し、そして４℃に６分間保つ。１
０ＣＣの血清を含まない媒体を加え、そして細胞懸濁物
をｓ ｏ Ｏｒｐｍにて５分間遠心分離する。ペレット
が赤血球を含有する場合には、Ｎｕ、Ｃ１における再懸
濁及び遠心分離を反復する。ＮＨ４Ｃｌは腫瘍細胞に対
し形性となりうるため、このＮＨ４Ｃｌ処理を最高３回
まで行なう。次いで、ペレットを血清を含まない媒体中
で２回洗浄し、そして細胞濃度を免疫蛍光分析（細胞１
０５個／試料）及び流動細胞分析（１０６個／試１）に
調整する。ＳＭ１抗体の１＝１０００希釈物１００μｔ
を各試料に加え、そして細胞を３７℃で１５分鋤に回動
しながら１時間培養する。細胞を血清を含まない媒体で
２回洗浄し、そして蛍光処理したヤギ抗−ネズミＩｇＭ
の１；２０希釈物３０μＬでｓ緘する。これら細胞を１
時間培養し、血清を含まない媒体で２回洗浄する。フロ
ーシトメトリーにより分析する試料を４μｍの布メツシ
ュに通して濾過することにより全ての凝集蛋白質を除去
し、免疫蛍光分析により分析する細胞は湿式装着技術に
よりスライド上に載置する。ＳＭ１抗体に対し高度に反
応性である細胞を細胞選別により集め、そして細胞検査
及びメトセル中での増殖によりＳＣＣ細胞であることを
確認する。
さらに、ＳＭ１抗体を使用して、血漿などの体液におけ
るＳＣＣ細胞、すなわち無細胞抗原を生体内及び試験管
内の両者で検出することができる。
るＳＣＣ細胞、すなわち無細胞抗原を生体内及び試験管
内の両者で検出することができる。
ＳＣＣ細胞の生体内検出については、ＳＭ１抗体を慣用
技術により放射線標識し、かつ慣用の生体内映像化技術
と組み合せて標識免疫複合体を検出することができ、標
識抗体を患者に投与してこの患者における腫瘍部位を確
認するのに使用することができる。さらに、この抗体を
使用して臨床試料における無細胞抗原の量を測定し、病
気を早期発見したり或いは腫瘍を監視したりすることが
できる。
技術により放射線標識し、かつ慣用の生体内映像化技術
と組み合せて標識免疫複合体を検出することができ、標
識抗体を患者に投与してこの患者における腫瘍部位を確
認するのに使用することができる。さらに、この抗体を
使用して臨床試料における無細胞抗原の量を測定し、病
気を早期発見したり或いは腫瘍を監視したりすることが
できる。
治療
８Ｍ１抗体を治療上で使用して、ＳＣＣに罹患した患者
のＳＣＣ細胞を一次細胞であっても転移細胞であっても
死滅させることができる。ＳＭｌを補体と共に使用して
、試験管内で腫瘍細胞を溶解することができ、或いは生
体内にて単独で又は植物毒性剤と結合して使用すること
により患者における腫瘍細胞を溶解させることができる
。補体の存在下で細胞を溶解するＳＭｉの能力は、Ｉｇ
Ｍアイソタイプとしての機能である。プ般に、ＩｇＭ及
びＩｇＧ２抗体はこの性質をより多く有すると思われる
。したがって、８Ｍ１のＳＣＣ％異性を有するこの種の
溶解性抗体は、細胞毒性剤の不存在下で治捩に使用する
こともできる。
のＳＣＣ細胞を一次細胞であっても転移細胞であっても
死滅させることができる。ＳＭｌを補体と共に使用して
、試験管内で腫瘍細胞を溶解することができ、或いは生
体内にて単独で又は植物毒性剤と結合して使用すること
により患者における腫瘍細胞を溶解させることができる
。補体の存在下で細胞を溶解するＳＭｉの能力は、Ｉｇ
Ｍアイソタイプとしての機能である。プ般に、ＩｇＭ及
びＩｇＧ２抗体はこの性質をより多く有すると思われる
。したがって、８Ｍ１のＳＣＣ％異性を有するこの種の
溶解性抗体は、細胞毒性剤の不存在下で治捩に使用する
こともできる。
抗体＋補体を使用して、患者から取り出された骨髄を処
置し、浄化した骨髄を患者に再潅流させるＭＩＪに転移
ＳＣＣ細胞を骨髄から除去する。骨髄のこのような処置
は、転移性ＳＣＣ細胞の９９％以上の溶解をもたらす。
置し、浄化した骨髄を患者に再潅流させるＭＩＪに転移
ＳＣＣ細胞を骨髄から除去する。骨髄のこのような処置
は、転移性ＳＣＣ細胞の９９％以上の溶解をもたらす。
慣用技術を用いて、だとえばりシン又はアジアマイシン
のような細胞毒性剤を結合させた抗体を用いることによ
り、死滅割合をずっと増大させることもできる。
のような細胞毒性剤を結合させた抗体を用いることによ
り、死滅割合をずっと増大させることもできる。
さらに、この抗体を一次細胞であっても転移細胞であっ
てもＳＣＣの生体内治療に使用することができる。試験
管内処置の場合と同様に、この抗体を単独で（ヒトはそ
れ自身の補体を有する）或いは細胞毒性剤に結合して投
与することができる。
てもＳＣＣの生体内治療に使用することができる。試験
管内処置の場合と同様に、この抗体を単独で（ヒトはそ
れ自身の補体を有する）或いは細胞毒性剤に結合して投
与することができる。
有効量の抗体を、慣用の医薬上許容しうるキャリヤ物質
と組み合せて注射により投与する。
と組み合せて注射により投与する。
生体内使用については多くの場合、全抗体ではなく細胞
毒性剤に結合した抗体のＦａｂ部分のみを使用して腫瘍
を浸透させるのが好ましい。Ｆａｂは細胞毒性剤なしに
単独で使用することができない。
毒性剤に結合した抗体のＦａｂ部分のみを使用して腫瘍
を浸透させるのが好ましい。Ｆａｂは細胞毒性剤なしに
単独で使用することができない。
何故なら、これはＳＣＣ特異性を保持しているがＳＣＣ
細胞を溶解する能力がＦｅ部分なしには喪失されるから
である。
細胞を溶解する能力がＦｅ部分なしには喪失されるから
である。
ＳＣＣ腫瘍細胞に対する８Ｍ１抗体の細胞毒性は、クロ
ム放出分析により示される。ＳＣＣ細胞を血清を含まな
い媒体で５回洗浄し、そして２００ｐｃｉ／ｌｄのＮａ
３”Ｃｒで６７℃にて４５分間標識する。これら細胞を
洗浄緩衝液（ＲＰＭＩ １．６４０゜１ミリモルのグル
タミン、４ミリモルのＨＥＰＥＳ及び５％の熱失活した
ヒト血清）で洗浄し、そして氷上に３０分間静置させて
非吸収り四ムを細胞膜から拡散させる。細胞を洗浄緩衝
液で２回洗浄し、細胞濃度を１Ｘ１０”個／−に調整す
る。各試験試料は４５０ｐｔの細胞ａ濁物を含有する。
ム放出分析により示される。ＳＣＣ細胞を血清を含まな
い媒体で５回洗浄し、そして２００ｐｃｉ／ｌｄのＮａ
３”Ｃｒで６７℃にて４５分間標識する。これら細胞を
洗浄緩衝液（ＲＰＭＩ １．６４０゜１ミリモルのグル
タミン、４ミリモルのＨＥＰＥＳ及び５％の熱失活した
ヒト血清）で洗浄し、そして氷上に３０分間静置させて
非吸収り四ムを細胞膜から拡散させる。細胞を洗浄緩衝
液で２回洗浄し、細胞濃度を１Ｘ１０”個／−に調整す
る。各試験試料は４５０ｐｔの細胞ａ濁物を含有する。
媒体におけるＳＭ１抗体の・１：１ｏ希釈物５０ｐｔを
各試験試料に加え、そしてＭＩＪ胞を３７℃にて３０分
間培養する。１：１５の最終６度におけるウサギ補体を
各試験試料に加え、さらに３０分間培養し、そして細胞
を洗浄緩衝液で２回洗浄する。
各試験試料に加え、そしてＭＩＪ胞を３７℃にて３０分
間培養する。１：１５の最終６度におけるウサギ補体を
各試験試料に加え、さらに３０分間培養し、そして細胞
を洗浄緩衝液で２回洗浄する。
複数回の抗体処理については、５Ｍ１−補体−洗浄過程
を反復することができる。最終処理の後、細胞を洗浄緩
衝液で３回洗浄し、そして放射線標識され各ペレットと
結合したクロムの量をｒカウンタにより測定し、補体の
存在下におけるＳＭ１抗体は１：１０，００口若しくは
それ以上の希釈率における腫瘍細胞の９５％以上を溶解
する。１：１００の濃度におけるＳＭ１抗体は、１：１
ｏの濃度における補体の存在下で正常な骨髄細胞の僅か
約１０％しか溶解しないが、ｓｃｃ＃瘍細胞の９８％以
上を溶解する。
を反復することができる。最終処理の後、細胞を洗浄緩
衝液で３回洗浄し、そして放射線標識され各ペレットと
結合したクロムの量をｒカウンタにより測定し、補体の
存在下におけるＳＭ１抗体は１：１０，００口若しくは
それ以上の希釈率における腫瘍細胞の９５％以上を溶解
する。１：１００の濃度におけるＳＭ１抗体は、１：１
ｏの濃度における補体の存在下で正常な骨髄細胞の僅か
約１０％しか溶解しないが、ｓｃｃ＃瘍細胞の９８％以
上を溶解する。
本発明はその範囲内で種々の変更が可能であり、たとえ
ば抗体は種々の方法で、たとえば弗素含有リガンド、重
金属又は０１３−含有化合物で標識することもできる。
ば抗体は種々の方法で、たとえば弗素含有リガンド、重
金属又は０１３−含有化合物で標識することもできる。
代理人の氏名 倉 内 基 弘 −７７２−べ、
ｌＯＩ 風間弘志１ 、）
＋／
−１２８５−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）小細胞癌細胞には結合するが、ヒト神経芽細胞腫
細胞、ヒト鱗細胞癌細胞及びヒト大細胞未分化肺癌細胞
には結合しないモノクローナル抗体。 （２） 抗体がＩｇＭ又はＩｇＧ２アイソタイプである
特許請求の範囲第１項記載の抗体。 （３）小細胞癌細胞の表面における約５ ｏ、 ｏ ｏ
ｏダルトンの抗原決定子を識別する特Ｉｔ′ｆ晶求の
範囲第１項記載の抗体。 （４）小細胞癌細胞の表面における約２５．０００ダル
トンの抗原決定子を職別する特許請求の範囲第１項記載
の抗体。 （５）細胞毒性剤に結合した特許請求の範囲第１項記載
の抗体。 （６） 検出しうる標識をラベルした特許請求の範囲第
１項記載の抗体。 （７）放射１１λされている特許請求の範囲第６項記載
の抗体。 （８）蛍光標識されている特許請求の範囲第６項記載の
抗体。 （９）補体の存在下で小細胞癌細胞を試験管内にて溶解
しうる特許請求の範囲第１項記載の抗体。 （１０）ハイブリドーマ細胞ＡＴＣＣ煮ＨＢＢ４６２に
より産生されるモノクローナル抗体。 （１１）ハイブリドーマ細胞ラインＡ Ｔ ＣＣＡＨＢ
８４６２により産生されるモノクレーナル抗体の免役学
的同定特性を有するモノクローナル抗体を産生ずるハイ
ブリドーマ細胞。 （１２）ＡＴＣＣＡＨＢ８４６２のハイブリドーマ細胞
。 （１５）臨床試料における小細胞癌腫７５細胞を溶解す
るに際し、前記試料を特許請求の範囲第１項記載の抗体
と共に補体の存在下で培養することを特徴とする小細胞
癌腫瘍細胞の溶解方法。 （１４）患者からの臨床試料における小細胞癌腫瘍細胞
を溶解するに際し、前記試料を特許請求の範開鎖５項記
載の細胞毒性剤に結合した抗体と接触させることを特徴
とする小細胞癌腫瘍細胞の溶解方法。 （１５）ヒト患者における小細胞癌細胞の存在を検出す
るに際し、ヒト患者からの細胞含有臨床試料を特許請求
の範囲第１２項記載のハイブリドーマ細胞ラインにより
産生されるモノクシ−ナル抗体の免疫学的同定特性を有
する七ツクシーナル抗体と共に、免疫複合体を生成する
のに充分な条件下で培養し、かつ前記免疫複合体を小細
胞癌細胞の存在の指標として検出することを特徴とする
小細胞癌細胞の存在の検出方法。 （１６）臨床試料における小細胞癌細胞を溶解するに際
し、前記試料を特許請求の範囲第１２項記載のハイブリ
ドーマ細胞ラインにより産生されるモノクローナル抗体
の免疫学的同定特性を有するモノクローナル抗体と共に
補体の存在下で、溶解を生じうる条件の下で培養するこ
とを特徴とする小細胞癌細胞の溶解方法。 （１７）患者からの臨床試料における小細胞癌細胞を溶
解するに際し、前記試料を（１）特許請求の範囲第１２
項記載のハイブリドーマ細紐ラインにより産生されるモ
ノクローナル抗体の免疫学的同定特性を有するモノクシ
−ナル抗体と（２）これに共有結合された細胞毒素とか
らなる免疫毒素と共に、分解を生じうる条件の下で培養
することを特徴とする小細胞癌細胞の溶解方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US561196 | 1983-12-14 | ||
| US06/561,196 US4585742A (en) | 1983-12-14 | 1983-12-14 | Monoclonal antibody with specificity to human small cell carcinoma and use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60214799A true JPS60214799A (ja) | 1985-10-28 |
Family
ID=24241033
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59260984A Pending JPS60214799A (ja) | 1983-12-14 | 1984-12-12 | モノクロ−ナル抗体 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4585742A (ja) |
| EP (1) | EP0147118B1 (ja) |
| JP (1) | JPS60214799A (ja) |
| AT (1) | ATE40216T1 (ja) |
| CA (1) | CA1233774A (ja) |
| DE (1) | DE3476275D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6480299A (en) * | 1986-06-13 | 1989-03-27 | Oncogen | Ligand and method for enhancing propagation of b-cells |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3531301A1 (de) * | 1985-09-02 | 1987-03-05 | Behringwerke Ag | Monoklonale antikoerper gegen tumorassoziierte glykoproteine, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung |
| US6294172B1 (en) | 1983-08-12 | 2001-09-25 | Dade Behring Marburg Gmbh | Monoclonal antibodies with specificity for membrane-associated antigens |
| US4737580A (en) * | 1985-03-15 | 1988-04-12 | Oncogen | Platelet related growth regulator |
| DE3909799A1 (de) * | 1989-03-24 | 1990-09-27 | Behringwerke Ag | Monoklonale antikoerper (mak) gegen tumorassoziierte antigene, ihre herstellung und verwendung |
| GB9415492D0 (en) * | 1994-08-01 | 1994-09-21 | Celltech Ltd | Biological products |
| US5744585A (en) * | 1995-03-16 | 1998-04-28 | Medenica; Rajko D. | Human monoclonal antibody against lung carcinoma |
| JP4287147B2 (ja) * | 2000-11-02 | 2009-07-01 | イミュノセルラー・セラピューティクス・リミテッド | 小細胞肺癌（ｓｃｌｃ）の検出および治療のためのモノクローナル抗体および細胞表面抗原 |
| US6892140B1 (en) | 2000-11-27 | 2005-05-10 | Enteron, Inc. | Immunogenic cancer peptides and uses thereof |
| WO2008134538A2 (en) * | 2007-04-25 | 2008-11-06 | Verto Institute | Antibodies to human somatostatin receptor and methods of use |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6058926A (ja) * | 1983-09-09 | 1985-04-05 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | 肺小細胞癌細胞と反応するモノクロ−ナル抗体 |
-
1983
- 1983-12-14 US US06/561,196 patent/US4585742A/en not_active Expired - Fee Related
-
1984
- 1984-12-07 DE DE8484308556T patent/DE3476275D1/de not_active Expired
- 1984-12-07 AT AT84308556T patent/ATE40216T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-12-07 EP EP84308556A patent/EP0147118B1/en not_active Expired
- 1984-12-10 CA CA000469678A patent/CA1233774A/en not_active Expired
- 1984-12-12 JP JP59260984A patent/JPS60214799A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6058926A (ja) * | 1983-09-09 | 1985-04-05 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | 肺小細胞癌細胞と反応するモノクロ−ナル抗体 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6480299A (en) * | 1986-06-13 | 1989-03-27 | Oncogen | Ligand and method for enhancing propagation of b-cells |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4585742A (en) | 1986-04-29 |
| DE3476275D1 (en) | 1989-02-23 |
| ATE40216T1 (de) | 1989-02-15 |
| CA1233774A (en) | 1988-03-08 |
| EP0147118B1 (en) | 1989-01-18 |
| EP0147118A1 (en) | 1985-07-03 |
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