JPH0372490A - 硫酸化タンニン及びその塩 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の技術分野） 本発明は、新規な硫酸化タンニン及びその塩。

並びにそれを有効成分とする抗ウィルス剤、特に抗レト
ロウィルス剤、及び逆転写酵素阻害剤に関する。

（従来の技術） ウィルス感染症は、その原因療法としての抗ウィルス剤
の開発が望まれているが、臨床的に有効なものが登場せ
ず、一般には対症療法に頼らざるをえない。近年、抗ヘ
ルペスウィルス剤。

抗エイズウィルス剤等の開発研究が活発にたってきた。

そこで１本発明者らは、エイズウィルス、ヘルペスウィ
ルスはもちろん他のウィルスにも有効な抗ウィルス剤の
開発研究を進めている。

エイズ（ａｃｑｕｉｒｅｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｄｅｆｉｃ
ｉｅｎｃｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　：ＡＩＤＳ　）は、　
　１９８１年アメリカで初めて報告された［ゴツトリー
プ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ　）　、　Ｍ、　Ｓ、等（Ｎ。

Ｅｎｇｌ、　Ｊ、Ｍｅｄ、　３０５．１４２５（１９８
１）及び、シーガル（Ｓｉｅｇａｌ　）、　Ｆ、　Ｐ等
（Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　３０５゜１４３
９（１９８１）］。その後、　　１９８３年フランスの
モンタニｚ　（Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ　）　［バレーシ
ヌシ（ＢａｒｒｅＳｉｎｏｕｓｓｉ　）、　Ｆ、　’４
　（サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ　）、　２２０゜８６
８（１９８３））］、　　次いでアメリカのギヤ口（Ｇ
ａｌｌｏ）［ボポビノク（Ｐｏｐｏｖｉｃ　）、　Ｍ、
等（サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、　２２４．４９７
（１９８４））］によってＡＩＤＳの原因ウィルスであ
るＨ　Ｉ　Ｖ　（ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃ
ｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ　）が発見された。

ＨＩＶの感染阻止効果を示す物質の探索の結果。

核酸アナログであるアジドチミジン（ＡｚＴ）（７Ｒ屋
裕明等、　　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓ
ｅｔ、　ＵＳＡ、　８２．７０９６（１９８５）、中島
秀喜等、　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃ
ｈｅ−ｍｏｔｈｅｒ、、　３０．９３３　（１９８６）
　］や各種のジデオキシヌクレオンド［満屋裕明等、　
　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８３．１９１１（１９８６）、濱
本（Ｈｉｍａｍｏｔｏ　）。

Ｙｌ等、　　ＡｎＬｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇｅｎｔｓ、
　　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、、　３１．９０７（１９８７
）コが、インビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）での研究から延命
効果があることが見出され、エイズの治療薬として認司
されるに至っている。

しかしながらＡＺＴは長期服用の必要があり。

副作用等の点で問題が多く残されている。

また最近山水等は、ＭＯＬＴ−４・ＭＯＬＴ−４／ＨＩ
Ｖ細胞混合培養による巨細胞形成抑制試験に３いて、Ａ
ＺＴのみでは、この形成を抑制できないと報告している
［中島秀喜等、　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、　１５９゜１６９
（１９８７）］。巨細胞形成はＡＩＤＳ発病に重要た役
割をはたしていると考えられている。

一方、中島、山本らは、海藻に含まれる硫酸多糖体など
天然型多糖体及びレンチナンをはじめ、その他事糖体の
硫酸化誘導体（合成硫酸多糖体）に抗ＨＩＶ作用がある
ことを発見した（中島秀喜（Ｎａｋａｓｈｉｍａ　）、
　Ｈ，等、　Ｇａｎｎ、　　７８．１１６４（１９８７
）　］。

筐た。硫酸エステル化していないポリフェノール体のあ
る種のものには、抗ヘルペスウィルス、抗ＨＩＶ作用が
知られている（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＮａｔｕｒａｌ　
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、　ｖｏｌ　５２．　Ｎ１１４．７６
２−７６８（１９８９）　）。

例えば縮合型タンニンに属する（−）−エピガロカテキ
ン、プロ７アニジン８２３，３−０−ガレート、ラタメ
ニンの抗ヘルペスウイルス作用（野中源一部等、第３４
回　日本ウィルス学会総会要旨集、２１４頁、　　１９
８６年１０月）、加水分解型、タンニンに属するアグリ
モニイン（Ａｇｒ　ｉｍｏｎｉ　ｉｎ　）＋コリアリイ
ンＡ　（ＣｏｒｉａｒｉｊｎＡ）、オエノテインＢ（Ｏ
ａｎｏＬｈｅｉｎ　Ｂ　）の抗ＨＩＶ作用（浅中美幸等
、エイズ研究会　第１回学術集会要旨集、　　６１頁。

１９８７年１２月）等が知られている。また、最近ゴヨ
ウマツのマツカサを熱湯で抽出し、得た多糖類を含むポ
リフェノール系化合物にインフルエンザ、ヘルペス、ａ
ｍ肝炎ｔ　エイズウィルスに効果が認められることが、
報告された（読売新聞、　　１９８８年１２月１８日、
朝刊）。

（発明が解決しようとする課題） したがって本発明の目的は、抗ウィルス作用を有する新
規化合物を提供することである。

本発明の他の目的は、逆転写酵素阻害作用を有する新規
化合物を提供することである。。

本発明のさらに他の目的は、上記新規化合物を有効成分
として含有する抗ウィルス剤、及び逆転写酵素阻害剤を
提供することである。

本発明者らは、タンニンの硫酸エステル化物及びその塩
について抗ＨＩＶ作用を検討した。

その結果、これらの化合物が強い抗ＨＩＶ作用を有する
ことを見出し９本発明を完成するに至った。

本発明は、新規た硫酸化タンニン及びそれらの塩を提供
するものである。

本発明はさらに、硫酸化タンニン及びそれらの塩からな
る群から選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分と
して含有する抗ウィルス剤及び逆転写酵素阻害剤を提供
するものである。

タンニンは水にとけ９強い渋味をもち、皮革をなめす力
を持つ物質の総称であって、多価フェノールを基本とし
た複雑な構造を有し、植物界に広く存在する。化学構造
上から、加水分解性タンニンと非加水分解性タンニンと
に大別される。加水分解性タンニンは希酸と加熱すると
。

または酵素タンナーゼで加水分解されて、没食子酸、エ
ラグ酸あるいは更に複雑起ポリフェノールカルボン酸と
糖や多価アルコールを生ずるものである。非加水分解性
タンニンは希酸と加熱するとフェノール性の分解産物が
得られずに不溶性のカッ色のフロパフエンと称する物質
になるもので縮合タンニンあるいはフロパフンニンとい
われている。

本願明細書において「タンニン」という用語子酸、エラ
グ酸、複雑なポリフェノールカルボン酸等］及び非加水
分解性タンニンを意味するものとする。

本発明に釦ける加水分解性タンニン及び加水分解性タン
ニンを加水分解して得られる多価フェノールとしては、
ジ没食子酸、ルテオ酸、エラグ酸、クロゲン酸、グルコ
ガリン、テトラリン。

ハマメリタンニン、没食子タンニン、タンニン酸、ゲラ
ニイン、没食子酸、ガロイル没食子酸。

ｘ５ｐｆタンニン、ヘキサガロイルグルコース。

ヘプタガロイルグルコース、テトラガロイルグルコース
、トリカロイルグルコース、ペンタガロイルグルコース
、シカロイルキニン酸、トリガロイルキニン酸、その他
構造未知の加水分解性タンニン等を挙げることができる
。

本発明に於て好筐しいものとしては、タンニン酸、エラ
グ酸、タンニン酸の成分の一つであるペンタガロイルグ
ルコースであり、特に好ましいのはタンニン酸、ペンタ
ガロイルグルコース、シカロイルキニン酸が挙げられる
。

タンニン酸は、植物起源のタンニンであり。

通例５倍子又は没食子などから製造されたものであり、
インキ、染料、酸化防止剤などとして利用されるほか、
薬用には局所収れん、止血薬として用いられ２日本薬局
方、米国薬局方に収載されている。タンニン酸について
は、古くから知られているにも拘らず現在迄明確な構造
が定められていない為９文献により種々の記載がある。

例えば「植物薬品化学」友田正司、９３頁（１９８２年
）床用書店には、タンニン酸の主成分の構造式は以下の
通りであると記載されている。

日本薬局方（ＸＩ）にはタンニン酸は通例５倍子又は没
食子から得たタンニンであり、来歴、製法、構造につい
て以下の如く記載されている。

［ＥＩＥＥｌ　　１７９３年Ｄｅｙｅｕｘ、　１７９５
年５ｃｑｕｉｎが没食子中の固有成分としてｔａｎｎｉ
ｎを発見分離命名した。後Ｂｅｒｚｅｌｉｕｓがほぼ純
品に近いものを製し。

１８３４年Ｐｅ１ｏｕｚｃが酸であることを認めた。そ
の構造はＮ１ｃｒｅｎｓｔｅｉｎ、　Ｆｅ１ｓｔにつづ
き１９１２年Ｅ。

Ｆｉｓｃｈｅｒ及びその門下が研究したが、現在明確な
構造は定められていない０ ［ＸＥ］　　五倍子、又は没食子を粉砕し、エーテル・
エタノール混液（４：１）で抽出し、浸出液に１／３量
の水を加えて振や混ぜ、タンニン酸を水に移し、エーテ
ル層に樹脂１色素などを移行させ、この操作を繰り返し
て水層を合わせ、これを減圧蒸発して残分を８倍の水に
溶かして。

脱色炭で脱色、ろ過、エーテルで更に不純分を除き、減
圧濃縮しシロノブ状になったものにエタノール、エーテ
ルを加えて泡沫状とすれば軽質のものが得られ、小孔か
ら圧出乾燥すれば針状のものが得られる。本品の製造に
は高熱、アルカリ、鉄を避ける。中国五倍子は６５〜７
５％。

日本産五倍子は６０〜６８％、没食子は５５〜６５％の
タンニン酸を含む。

■１ｊ］　本品の組成は現在も未解決であるが。

Ｆｉｓｃｈｅｒ　Ｆｒｅｕｄｅｎｂｅｒｇによるとブド
ウ糖の五つの水酸基とガロイル没食子酸の遊離カルボキ
シル基がエステル結合しているという。

米国薬局方にもタンニン酸は収載されているが、その構
造については記載されていない。

そして２日本でタンニン酸として市販されているものと
しては種々のものがあるが、和光紬薬製及び局方品（岩
城製薬社製、大日本製薬社製）タンニン酸の高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の溶出パターンはほぼ一
致したので。

組成もほぼ同一と考えられるが、米国局方品のタンニン
酸のそれは一致しなかったので２組成が異なっているも
のと考えられる。

本発明における非加水分解性タンニンとしては、カテキ
ン、エビカテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキ
ン−３−没食子酸、ガロカテキン、カキタンニン、テア
フラビン、フラバ／３，４−ジオール、プロアントシア
ン、その他構造未知の非加水分解性タンニン等を挙げる
ことができる。本発明に於て好ましいものとしてはエビ
カテキン、エピガロカテキンガレートが挙げられる。

次に、タンニンの硫酸エステル化法について説明する。

タンニンは、硫酸エステル化することによジ高い抗ウィ
ルス活性を有する物質となり、水に対する溶解性が増加
し、水゛溶液が安定なものとたる。またタンニンの水溶
液は、長時間放置すると不溶物が析出し、褐変するが、
硫酸エステル化物の場合そのようなことはない。

本発明において、硫酸エステル化物のイオウ含量は、０
，１〜３０重量％であることが好咬しく。

５〜２０重量％であることがさらに好ましい。

硫酸エステル化に用いる試薬としては、公知のスルホン
化剤ならどれでもよいが２反応性。

扱い易さからいえば、クロルスルホン酸、三酸化イオウ
、トリメチルシリルスルホン酸クロリド等が適当である
。

反応は塩基性条件下で行なうことが好ましいが、溶媒は
特に限定されず、有機アミン、ジメチルスルホキシド、
ジオキサン等が使用できる。

しかし、溶媒自身で塩基性条件となるピリジン。

トリエチルアミン、トリメチルアミン等の有機アミンが
好ましく、特に無水ピリジンが好筐しい。

反応温度は、室温下で差し支えないが、有機化学的には
、水冷下硫酸エステル化試薬を加え。

後に室温でまたは加熱して反応させるのが−、般的であ
る。

硫酸エステル化試薬例えば、クロルスルホン酸の添加量
は、得られる硫酸エステル化度にいちじるしく影響する
。しかし本誘導体の目的である抗ウィルス活性、検体の
安定性、溶解性は。

硫酸エステル化度の低いものでも、十分達成させること
ができる。ただし工業上２種々の硫酸エステル化度のも
のをつ〈υ２分離・精製することは不可能なため、大過
剰の硫酸エステル化試薬を用い、可能なかぎり硫酸エス
テル化することが好ましい。

このように大過剰の硫酸エステル化試薬な用いて１１、
）だ硫酸エステル化物のイオウ（Ｓ）含量は５〜２０　
＠ｆ’ｌｉ二％で、容易に再現性良くイオウ含有量がほ
ぼ同一の硫酸エステル化物を得ることができる。

反応は、硫酸エステル化試薬滴下とほぼ同時に進行する
が、室温下しばらく攪拌するほうが好ましい。反応時間
については１時間、２４時間。

４８時間のものでイオウ含量はほとんど変化がなかった
。

反応後、硫酸エステル化物を単離する方法としては２種
々考えられるが２例えば反応液をその壕ま脱塩し、硫酸
エステル化物を単離する方法１反応液を中和し、アルカ
リ塩として単離する方法等がある。どちらも有効である
が１例えばナトリウム塩やカリウム塩などの塩の形で。

硫酸エステル化物を得る方法が好ましい。また悪臭を放
つピリジンを、非親水性溶媒９例えばクロロホルム、酢
酸エチル等で除去することも好ましい。

更に以上の硫酸エステル化広を何回か繰り返し実施し、
より硫酸化度の高いものを得ることもできる。

本発明の好ましい実施態様によれば、下記の一役式（Ｉ
）により示される硫酸化ペンタガロイルグルコースまた
はその塩が提供される。

す、Ｒは−Ｈまたは一８ｏ、Ｈであり、その際少むくと
も１つは一８ｏ、）［である。） ｎ目 （式中、Ｒは−Ｈまたは一８ｏ、Ｈであり、その際少く
とも一つは一８ｏ、Ｈである。）更に本発明の別の好ま
しい実施態様によれば、下記、−紋穴（Ｉｆ）により示
される硫酸化ジガロイルキニノ酸若しくはトリガロイル
キニン酸また＆まそれらの塩が提供される。

４．５−　）リヒドロキシベンゾイル基であり、上記硫
酸化ペンタガロイルグルコース、硫酸化シカロイルキニ
ン酸または硫酸化トリガロイルキニン酸はその硫酸化の
度合により種々の硫酸化物が存在する。上記−紋穴（Ｉ
）の化合物は、ガロイル基における水酸基が１個乃至１
５個硫酸化されたものである。また、−紋穴（Ｉ）又は
（１１）における硫酸化ガロイル基は、同一であっても
よく、相互に異なったものであってもよい。

紋穴（Ｉ）の化合物の好適なものは、平均硫酸化率が１
０〜７０％のものである。−紋穴（Ｉ）の化合物は塩を
形成する。塩としては、ナトリウム塩。

カリウム塩などの無機塩を挙げることができる。

本発明つ一般式（【）または（１■）の化合物は。

ペンタガロイルグルコース、ジガロイルキニン酸または
トリガロイルキニン酸を硫酸エステル化することにより
製造できる。硫酸エステル化は、前述のとおり、フェノ
ール性水酸基を硫酸エステル化する際に用いられる方法
が採用できる。すなわち、硫酸エステル化は、ペンタガ
ロイルグルコース、ジガロイルキニン酸マタハ）リガロ
イルキニン酸とクロルスルポン酸、三酸化硫黄、トリメ
チルシリルスルボン酸クロリド等のスルホン化剤とを冷
却下乃至加温下で、適当な有機溶媒中で反応させること
により行われる。反応は、塩基性条件下が好ましい。反
応溶媒の好適なものは、ピリジン、トリエチルアミン、
トリメチルアミン、ジメチルスルボキサイド、ジオキサ
ン等である。これらの硫酸エステル化の条件、殊にスル
ホン化剤の添加量を適宜調節することにより、硫酸化割
合を任意に調節することができる。たとえば、ピリジン
中、氷冷下でペンタガロイルグルコースに対シ、クロル
スルホン酸を３００当量、　　２０当量および１０当量
反応させるときは、夫々およそ６０％、４７％および４
０％の割合でスルホン化された目的化合物が得られる。

さらに硫酸化割合の高い目的化合物を得ようとするとき
は、目的化合物をさらに硫酸化してもよい。

反応後、目的化合物を単離するには１反応液を中和後、
目的化合物を抽出する。さらに精製するには、こうして
得られた目的化合物をメンブランフィルタ−で透析して
もよい。

本発明の抗ウィルス剤及び抗レトロウィルス剤は、上記
硫酸化タンニン及びそれらの塩からなる群から選ばれた
少なくとも１種の化合物を有効成分とするものである。

（−）　　投与方法 本発明の抗ウィルス剤は、経口及び非経口投与のいずれ
も使用可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセ
ル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与され、
非経口投与する場合は、注射剤９点滴剤及び固体状又は
懸濁粘稠液状として持続的な粘膜吸収が維持できるよう
に生薬のような剤型で投与され得るが９局所組織内投与
、皮内、皮下、筋肉内、静脈内注射９局所への塗布、噴
霧、坐剤。

膀胱内注射などの外用的投与法等も用いることができる
。

（ｂ）　　投与量 投与量は、投与法と病気の悪性度、　、ｌｉ、者の年令
、病状や一般状態、病気の進行度等によって一定したも
のではないが、大人では通常。

■日当り有効成分として０．５〜５，０００”［、小人
では通常、０．５〜３，０００ｆｆ１ｇである。

（Ｃ）　　製剤化の方法 本発明の抗ウィルス剤の有効成分の配合割合は、剤型に
よって変更し得るが１通常経口又は粘膜吸収により投与
されるとき、はぼ０．３〜１５．０重量％が適当であり
、非経口投与されるときは、はぼ００１〜１０重量％が
適当である。

また、有効成分に長時間の保存に耐える安定性及び耐酸
性を付与して薬効を完全に持続させるために、更に医薬
的に許容し得る皮膜を施して製剤化すれば、すぐれた安
定性を有する抗ウィルス剤とすることができる。

本発明の有効成分の製剤化に用いられる界面活性剤、賦
形剤、滑沢剤、佐剤及び医薬的に許容し得る皮膜形成物
質等を挙げれば９次のとおりである。

本発明の抗ウィルス剤の崩壊、溶出を良好ならしめるた
めに、界面活性剤９例えばアルコール、エステル類、ホ
＋）エチレンｆ　ＩＪ　コール誘導体、ノルビタンの脂
肪酸エステル類。

硫酸化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加す
ることができる。

また、賦形剤として９例えばｍ　［、乳糖。

デングン、　結晶セルロース、マンニｙト、軽質無水珪
酸、アルミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグ
ネシウム、合成珪酸アルミニウム、炭酸力ルンウム、炭
酸水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルポキン
メチルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組
合せて添加することができる。

滑沢剤としては９例えばステアリン酸マグネシウム、タ
ルク、硬化油等を１種又は２種以上添加することができ
、また矯味剤及び矯臭剤として１食塩、サノカリン　ｇ
、マンニント、オレンジ油、カンゾウエキス、クエン酸
、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘
味剤、香料１着色剤、保存料等を含有させてもよい。

懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては２例えばココナノツ
油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また皮膜形成物質としては、セルロース・糖類等の炭水
化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、
　　またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル
類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸メチル・メタ
アクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアク
リル酸共重合体が挙げられる。

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し１通
常使用されるコーティング助剤。

例えば可堅剤の他、コーティング操作時の薬剤相互の付
着防止のための各種添加剤を添加することによって皮膜
形成剤の性質を改良したり、コーティング操作をより容
易ならしめことができる。

本発明の化合物は逆転写酵素阻害活性を有しているので
エイズウィルス、成人白血病ウィルス（ＨＴＬＶ−１）
に代表されるレトロウィルス感染の治療または予防のた
めの抗ウィルス剤、特に抗レトロウィルス剤として有用
である。ウィルスととして、エイズウィルスに代表され
るレトロウィルスに限らず、その他通常のウィルス例エ
バヘルペスウィルス、インフルエンサウイルス、ライノ
ウィルス等があげられる。更に。

本発明の化合物は、エイズウィルス感染伝搬の原因と考
えられる巨大細胞形成阻害作用を有しているので感染症
、カボシ肉腫、ニューモニスカリー二肺炎といった後天
性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ　）の治療薬として有用で
ある。

即ち、一般にＲＮＡウィルスでは自分を任う遺伝物とし
て一本鎖又は二本鎖のＲＮＡが使われて（・る。このＲ
ＮＡウィルス群の中にはＲＴａｓｅによりＲＮＡからそ
れと相補的なりＮＡを合成することがそのライフサイク
ルに必須な一群のウィルスがいる。これらのウィルスは
、またＤＮＡの状態で動物細胞の遺伝子の中に組込まれ
ることが判明している。この動物細胞の遺伝子に挿入さ
れたＲＮＡは、宿主（動物細胞）の遺伝子の欠損や、挿
入された強力な制御遺伝子によりその近傍遺伝子を高発
現させることも考えられている。

本発明の化合物）ま、これらのウィルスの遺伝子内に共
通して存在するＲ　Ｔａ５ｅを特異的に阻害することに
よりウィルス増殖、即ち宿主（動物細胞）遺伝子へのウ
ィルス遺伝子の挿入を抑制することができるものと考え
られる。

（実施例） 以下、実施例、参考例、製剤例及び試験例により９本発
明を更に詳細に説明する。

実施例　１ タンニン酸（和光紬薬工業（株）製）３００ｒｎｇを。

無水ピリジン４５ｍＺに懸濁させ、水冷下、クロルスル
ホン酸（ナカライテスク（株）製）１１．４ｇを少量づ
つ滴下し、室温で２日間攪拌した。

次いで、これに氷冷下、水８０ｍｔを加え、飽和炭酸水
素ナトリウムで中和した後１等量の酢酸エチルにてピリ
ジンを除去した。この反応液を１分画分子量１，０００
のメンブランフィルタ−（スペクトラ／ボア６；スペク
トラムメディカルインダストリー社製）に入れ、水にて
７日間透析し、内容液を凍結乾燥して、タンニン酸の硫
酸エステル化物のナトリウム塩（タンニン酸−３）を、
　　３２３．４ｍｇ得た。以下、化合物Ａの硫酸エステ
ル化物のす）　ＩＪウム塩をｒＡ　−Ｓ　Ｊの如く表示
する。

次にタンニン酸−５の理化学的性質を示す。

（タンニン酸−５） 印　形状：淡黄？する色粉末 （１１）融点：明瞭な融点１分解点を示さむい。

ｆｉｉｉｌ　　元素分析値：５　　１３．０％■　赤外
線吸収スペクトル（第１図）：ｖＫ８’ｃｍ−’　；　
３４４８，１？３１，１６３４，１５０５，１４２８゜
１３２９、１２６６、１１９７．１０５４．１０２１゜
９５４、８９７．８４５．７２６．６７３．５８０（■
）安定性：粉末状態及び水溶液中で安定。

実施例　２ 局方タンニン酸（居城製薬（株）製）　３００ｍｇ、無
水ピリジン６０ｍ１の混合物に、水冷攪拌下、クロロス
ルホン酸１１．４ｇをゆっくり滴加した。滴加終了後、
室温に戻し、２４時間攪拌した。反応液に水冷下、水８
０ｍ１を加え１次いで、飽和重曹水で中和後、酢酸エチ
ル（×２）で洗浄した。水層を濃縮後１分画分子ｔｌ、
０００のメンブランフィルタ−（スペクトラ／ボア６）
：メディカルインダストリー社製に入れ。

７日間水にて透析した。内液を再度上記メンブランフィ
ルタ−に入れ、水にて１日透析した。内液を凍結乾燥し
て１局方タンニン酸の硫酸エステル化物のナトリウム塩
（タンニン酸−５）　２２６■を得た。

元素分析値：　Ｃ２３，８６Ｈ１，９４Ｓ　１３．９５
ＩＲ（ＫＢｒ）　（第２図）：３４２０，１７２０，１
６２５，１６００゜１４３０、１３２０．１２４０．１
０５５゜０１０ ＵＶ　（ｎｍ）　Ｈ，Ｏ：　２０７　、　２５６実施例
　３ 米国薬局方タンニン酸１．５ｇに無水ピリジン２５０ｍ
ｔを加え、水冷下よく攪拌した。そこへクロルスルホン
酸５７ｇをゆっくりと滴下し、その後室温にて２日間攪
拌した。水冷下、水２５０ｍ１を加えた後、飽和炭酸水
素ナトリウム水溶液で中和した。この溶液を酢酸エチル
で２回抽出しピリジンを除いた。水層は９分画分子量１
，０００のメンブランフィルタ−（スペクトラ／ボア６
；メディカルインダストリー社製）に入れ、水にて７日
間透析した。

内容液を凍結乾燥して米国薬局方タンニン酸の硫酸エス
テル化物のす）　ＩＪウム塩を１．３７７２ｇ得た。

元素分析値：　Ｓ　＝　１３．３９％ ＩＲ（第３図）　：　ｖｍａｘ、　ｃｍ−’　（ＫＢｒ
）　３４６２．１７３１゜１６３３．１５０７，１４３
１．　１３２９，１２６０゜１０５５、　１０２］、９
６４，９００，８４５゜７７８．７２９，６７３ ＵＶ：　λｍａｘ　　ｎｍ（Ｈ２Ｏ）　二　　２０８．
　２５７実施例　４ エラグ酸（東京化成工業（株））２００ｍｇを用いて実
施例１と同様の方法で硫酸エステル化し、エラグ酸の硫
酸エステル化物のナトリウム塩（エラグ酸−５’）　７
６ｍｇを得た。イオウ含有量は、　　１２．０％（理論
上Ｍａｘ　＝　１９．−１％） 次にこのエラグ酸−５の理化学的性質を示す。

（エラグ酸−５） （１）形状：淡黄褐色粉末 （１１）　　元素分析値：（：　　　２８．２９％８　
　１．５０％ ５　　１２．０　％ ＋ｎｌｌ　　赤外線吸収スペクトル（第４図）シＫＢ’
ｃｍ−’　；　３４５０．１７１８．１６１７．１５７
６、１４８９゜１３４８、１２８０．１１？２．１１１
３．１０３４゜９２１．８２４　７９３，７５３，７１
５，５９８０ψ　安定性：粉末状態及び水溶液中で安定
。

実施例　５ （−）−エビカテキン（シグマ社製）２００ｍｇを用い
て実施例１と同様の方法で硫酸エステル化し、硫酸エス
テル化物のナトリウム塩（エビカテキン−８）　６２ｍ
ｇを得た。イオウ含有量は、　　１６．８％（理論上Ｍ
ａｘ　＝　２０．０％）であった。

次にこのエビカテキン−５の理化学的性質を示す。

（エビカテキン−５） （１）　　形状：淡黄褐色粉末 （１（）元素分析値：Ｃ２０，０５％ Ｈ２，９８％ Ｓ　　　１６．８　％ （１１１１赤外線吸収スペクトル（第５図）ｖＫ８’ｃ
ｍ−’　；　３４７６、１６２３．１５０５．１４８５
．１４３６゜ａｘ １２５７、１１３２．１０６２．１０４５．１０３１゜
１００６、９８６．９２０．８７８．８２１６Ｖ１　　
安定性：粉末状態及び水溶液中で安定。

実施例　６ （−）−エピガロカテキン−３−ガレート（和光紬薬（
株）製）１００■を用いて実施例１と同様の方法で硫酸
エステル化し、硫酸エステル化物のナトリウム塩（エピ
ガロカテキンガレート−５）１１３■を得た。イオウ含
有量は、１５３％（理論上Ｍａｘ＝２０．１％）であっ
た。

次にこのエピガロカテキンガレート−５の理化学的性質
を示す。

（エピガロカテキンガレート−５） （１）形状：淡黄１Ｆ６色粉末 （１１）元素分析値：　Ｃ２１，０８％Ｈ２４５％ ５　１５３　％ （１１０赤外線吸収スペクトル（第６図）：ｖＫ８’ｃ
ｍ−’　；　３４７０．１７１５．１６２１．１５０６
．１４８８゜１４３６、１３６２．１２６５．１１４１
．１０５９゜１００６、８５８．７８０．７６５．７３
０．６７４゜８０ （ＩＶＩ　　安定性：粉末状態及び水溶液中で安定参考
例　１ 日本薬局方タンニン酸（居城製薬（株）製）１ｇにメタ
ノール５０ＩＴｌｔ及びアセテートバッファ（ｐＨ５，
５＞　２５ｍ１を加え５０℃で１８ｈｒ攪袢、メタノー
ルを減圧留去したのち酢酸エチルで３回抽出後溶媒を減
圧留去した。この粗生成物をＨＰ　Ｌ　Ｃ（ＹＭ（、−
ＰＡＣＫ　。

Ｄ−〇ＤＳ−５，２０Ｘ２５０ｍｍ、メタノール：テト
ラヒドロフラン＝７オスフエートバノフアー（ｐＨ４，
５）３：１：７）により分取し２８２ｍｇの１．２．３
．４．６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース
ヲ得た。

４．６１．　５．６７、　５．７２．　６．０６．　６
．３９．　７．０４７．０８．　７．１２．　７．１７
．　７．２４”ＣＮＭＲ：δｐｐｍ　（１２５ＭＨｚ　
、　ＣＯＭ　、、アセト７ｄ、）６３．４３．　６９．
９２．　７２．３５．　７３．９１．　７４，５２゜９
３．９４，１１０．７８，１１０．８１，１１０．９２
゜１１１．０３，１２０．５０，１２１．１１，１２１
．１２゜１２１．２１，１２１．９８，１３９．６１，
１３９．７４゜１３９．８９，１３９．９４，１４０．
３９，１４６．４０゜！、１６．４８，１４６．５１，
１４６．５６．Ｉ４６．６７゜１６５．６０，１６６．
２５．１６６．２９，１６６．５３゜１６７．０７ ｆＲ（第７図）　：　νｍａｘ、　ｃｍ−’　（ＫＢｒ
）　３３８０．１７００゜＋６１０．１５３０，１４５
０，１３１０，１２００゜１０９０．１０２０．８７０
，７６０ ＵＶ　　：　λｍａｘ、ｎｍ（Ｈ２Ｏ）　　２１２，２
７７ｍ、ｐ、　　：　１９０℃（分解） 実施例　７ １、２．３．４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−り別 グルコース１０７ｍｇに無水ピリジン２１　ｍｌを尋え
。

窒素雰囲気下、氷冷し、よく攪拌した。そこへクロルス
ルホン酸４．１ｇをゆっくりと滴下し、その後室温にて
１２時間攪拌した。水冷下水５ｍｌを加え飽和炭酸水素
ナトリウムで中和後酢酸エチルで２回抽出しピリジンを
除いた。水層な濃縮後１分画分子［１，０００のメンブ
ランフィルタ−（スペクトラ／ボア６；スペクトラムメ
ディカルインダストリー社製）に入れ、水にて７日間透
析した。内容液を凍結乾燥して！、　２．３．４．６−
ベンター０−ガロイルβ−Ｄ−グルコースの硫酸エステ
ル化物のナトリウム塩（ＰＧＧ−Ｓ　）を１３１ｍｇ得
た。

元素分析値：　Ｃ；２２．５２．　Ｈ；１．８８．　Ｓ
；１１．５６　（％）ＩＲ（第８図）　：　ｖｒｎ、、
、　ｃｍ−’　（ＫＢｒ）　３４２０．　ｌ　７２０゜
１５９０、１５１０．１４３０．１３１０．１２６０゜
１２００、１０５０．１０１０．７２０．６７０．５９
０Ｕｖ：λｍｍ、ｎｍ（Ｈ２Ｏ）　　２０７．２５５実
施例８ １、２．３．４．６−ベンターＯ−ガロイルーβ−り一
グルコース２０ｍ１に無水ピリジン１　ｍｌを加え、窒
素雰囲気下氷冷し、よく攪拌した。そこへクロルスルホ
ン酸５４ｍｇをゆっくりと滴下し、その後室温にて１２
時間攪拌した。水冷下水０．３ｍｌを加え飽和炭酸水素
す）　ＩＪウムで中和後酢酸エチルで２回抽出しピリジ
ンを除いた。水層を分画分子量１，０００のメンブラン
フィルタ−（スペクトラ／ボア６；スペクトラムメディ
カルインダストリー社製）に入れ。

水にて７日間透析した。内容液を凍結乾燥して１゜２、
３．４．６−ベンターＯ−ガロイルーβ−Ｄ−グルコー
スの硫酸エステル化物のナトリウム塩（ＰＧＧ−５）を
３１ｒｒ＠得た。

元素分析値：　Ｃ；２４．４０．　Ｈ；３．１７．　Ｓ
：９．０３（％）ＩＲ（第９図）ニジｍａ、ｃｍ−’　
（ＫＢｒ）　　３３５０．１７００゜１６２０．１５４
０　１４５０，１３５０，１２１０゜１０６０．１０３
０，８８０，７６０，５９０ＵＶ　：　λｍａｘ、　ｎ
ｍ（Ｈ，Ｏ）　　２１３．２７７実施例　９ １、２．３．４．６−ベンター０−ガロイル−β−Ｄ−
グルコース２Ｏｆｆｔｇに無水ピリジン１ｍｌを加え、
窒素雰囲気下氷冷し、よく攪拌する。そこへクロルスル
ホン酸２７ｒｒｒｇをゆっくりと滴下し、その後室温に
て１２時間攪拌した。水冷下水０．３ｍｌを加え飽和炭
酸水素す）　ＩＪウムで中和後酢酸エチルで２回抽出し
ピリジンを除いた。水層を分画分子量１，０００のメン
ブランフィルタ−（スペクトラ／ボア６：スペクトラム
メディカルインダストリー社製）に入れ。

水にて７日間透析した。内容液を凍結乾燥してｌ。

２、３．４．６−ペンタ−０−ガロイル−β−Ｄ−グル
コースの硫酸エステル化物のナトリウム塩（ＰＧＧＳ）
を２０ｍｇ得た。

元素分析値：　Ｃ；２９．６９．　Ｈ；　２．７８．　
Ｓ；７．８５　（％）ＩＲ（第１０図）ニジｍａ、、　
ｃｍ−’　（ＫＢｒ）　３４００．１７２０゜１６１０
．１５４０，１４６０．　１３５０，１２２０゜１０２
０．８７０，７７０，５９０ ＵＶ：　λｍａｘ、　ｎｍ（Ｈ２Ｏ）　　２１２．　２
７２実施例　１０ １、２．３．４．６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄグ
ルコース５００　ｍｇに無水ピリジン８５ｍ１を加え。

水冷下よく攪拌した。そこへクロルスルホン酸１９ｇを
ゆっくりと滴下し、その後室温にて２日間攪拌した。氷
冷下、水５０ＬＩｌｌを加えた後、飽和炭酸水素す）　
ＩＪウム水溶液で中和した。この溶液を酢酸エチルで２
回抽出しピリジンを除いた。水層は９分に入れ、水にて
７日間透析した。内容液を凍結乾燥して１．２．３．４
．６−ベンターＯ−ガロイルーβ−Ｄ−グルコースの硫
酸エステル化物のナトリウム塩（ＰＧＧ−５）を６４８
ｍｇ得た。

元素分析値：　Ｃ；２６．３．　Ｈ：２．２．　Ｓ；１
３．３　（％）ＩＲ（第１１図）ニジｍａｘ、　ｃｍ−
’　（ＫＢｒ）　３＋１６６、１７３３゜１６４９．１
６３８，１６３３，１６１４，１５０９゜１４３４．１
３３１，１２６９，１２０２，１０５８゜１０１０．８
９８，８５１，７２２，６７３，５８４Ｕｖ　：　λｍ
ａｘ、ｎｍ（Ｈ２Ｏ）　　２０９，２５８参考例　２ ３、４−　Ｄｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉ
ｄ　（ジガロイルキニン酸）及び３．４．５−　Ｔｒｉ
ｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄの単離（取得
）米国薬局方タンニン酸２００　ｍｇ、　　０．０５　
Ｍ酢酸緩衝ｌＦｉ、　（ｐＨ５，５）　４０　ｍｌ及び
メタノール８０ｍ１の混合物を５０℃２１１１１’ｆＪ
］反応させる。反応物を減圧下約２０ｍ７ＫＩ！Ｉ縮後
、残渣にエーテル２０ｆｆＩｌを加え１分液する。水層
な更に酢酸エチル２０ｍ１で洗浄し、水層をｎ−ブタノ
ール２０ｍｔで抽出する。ブタノール層を減圧下濃縮乾
固して、７０１１Ｗを得た。本物質なＨＰＬＣ（条件：
　ＲＥ　５／Ｊ　Ｃ１８−１０ＯＡ’）　：　３．９ｍ
ｍ　ｘ　１５　ｃｍ　：■０．１モルリン酸緩衝液ＰＨ
４，５■０．１モル　リン酸：メタノール：テトラハイ
ドロフラン（１３：　７：　３　）　Ｌｉｎｅａｒ　ｇ
ｒａｄｉｅｉｅｎｔ　、流速０．６　ｍ１７Ｍ　）分取
を行いＰｅａｋ■（３，４−Ｄｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕ
ｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　）及びＰｅａｋ■（３゜４、５−
　Ｔｒｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　）
を含む分画を得る。

各分画を減圧下濃縮し、ｎ−ブタノールを加え。

抽出する。ブタノール層を減圧下濃縮乾固し、その残渣
をメタノールで抽出する。メタノール可溶部を濃縮し、
その残渣に水を加え溶解し、マイクロアルライザー（旭
化戒：　ＡＣ−１１０−１０膜）で脱塩する。脱塩した
浴液を凍縮乾燥し各々、３．４Ｄｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑ
ｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄおよび３．４．５−　Ｔｒｉｇａ
ｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃａｃｉｄの白粉末１９．７ｆ
ｆ１ｇおよび１９．３ｍｇを得る。

０３４−　Ｄｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉ
ｄの理化学的性状ＦＡＢＭＳ　（Ｎｅｇ）　：　ｍ／ｚ
　４９５　（Ｍ−Ｈ）’Ｈ−ＮＭＲδｐｐｍ　（５００
ＭＨｚ、　ＣＤ、０Ｄ）７．０９．７．００．５．６８
．５．２１．４．４３．２゜３８．２．３０．２．１２
ＩＲ（ＫＢｒ）　ｃｍ ３４００、１７００．１６−２０．１４５０．１２２０
．１０４０ＵＶ　λｍａｘ、ｎｍ　（ＭｅＯＨ）、　２
１５＋　２７６ｏ３．４．５−　Ｔｒｉｇａｌｌｏｙｌ
　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄの理化学的性状ＦＡＢＭＳ　
（Ｎｅｇ）　：　ｍ／ｚ　６４７　（Ｍ−Ｈ）Ｈ−ＮＭ
Ｒδｐｐｍ　（５００ＭＨｚ、　ＣＤ、０Ｄ）７．１０
．７．０３．７．００．５．８０．５．７５．５．４６
．２．５５゜２．４６．２．３２．２．２５ ＩＲ（ＫＢｒ）　Ｃｍ ３４００、１７０３．１６２０．１４５０．１２１８．
１０４０ＵＶ　　λｍａｘ、　ｎｍ　（ＭｅＯＨ）　、
　２１５．２７６実施例　１１゜ ３、４−　Ｄｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉ
ｄ　１２５　ｍｇ＋無水ピリジン２１ｍ１の混合物に、
水冷攪拌下、クロールスルホン酸４７５ｇを滴下する。

ついで室温にて、２４時間攪拌した。水冷下水６ｍｇを
加え、飽和重炭酸ナトリウムで中和後、酢酸エチルで２
回抽出し、ピリジンを除いた。水層な濃縮後９分画分子
量１０００のメンブランフィルタ−（スペクトラ／ボア
６：スベクトラムメデイカルイ／ゲストリー社）に入れ
。

水にて７日間透析した。内容物を凍結乾燥して３゜４−
Ｄｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｌ、ｃ　ａｃｉｄの硫酸
エステル化合物のナトリウム塩１１０ｍｇを得た。

元素分析値：　Ｓ　；　１１．１８％、　Ｃ；　２０．
５３％、Ｈ；２．１４％。

ＩＲｖｍａｘ、　ｃｍ　　（ＫＢｒ）　；第１２図３４
６０、１７３０．１６３５．１２６０．１０６０．１０
２５ＵＶ　　λｍａｘ、　ｎｍ　（Ｈ２Ｏ）　：　２０
８．２５５実施例　１２゜ ３、４．５−　Ｔｒｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　
ａｃｉｄ　１２５　ｍｇ＋無水ピリジン２１ｍ１の混合
物に水冷攪拌下、クロールスルホン酸・４６７５■を滴
下する。以下実施例１と同様に処理して、　　３．　ｉ
！、　５−Ｔｒｉｇａｌｌｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃ
ｉｄの硫酸エステル化物のカリウム塩１４９ｍｇを得た
。

元素分析値：　Ｓ　；　１０．４８％、　Ｃ；　２２．
３３％、　Ｈ；　２．０７％ＩＲｖｒｒ＋ａｘ、　ｃｍ
−（ＫＢｒ）　：第１３図３４７０、１７２０．１６３
５．１２６０．１０６０．１０２０ＵＶ　　２ｎ＋ａｘ
、　ｎｍ　（Ｈ２Ｏ）　：　２０９．２５５製剤例１　
（注射・点滴剤） 有効成分である酢酸エステル化物又はその塩５００　ｍ
ｇを含有するように粉末ぶどう糖５ｇを加えてバイアル
に無菌的に分配し、密封した上、窒素。

ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所に保存する。

使用前に０．８５％生理的食塩水５００ｍ１を添加して
静脈内注射剤として、１日１０〜５００ｍ７を症状に応
じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例２　（注射・点滴剤） 有効成分である硫酸エステル化物又はその塩。

５０ｍｇを用いた他は、製剤例１と同様の方法により軽
症用静脈内注射剤とし、１日、１０〜５００ｍｔを症状
に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例３　（注射剤、カプセル剤） 有効成分である硫酸エステル化物又はその塩３０ｍｇを
精製ゴマ油１ｇ及びステアリ／酸アルミニウムゲルｉｏ
ｏｍｇに溶解し密封した上、窒素、ヘリウム等の不活性
ガスを封入して冷暗所に保存し。

皮下注射用製剤とする。症状に応じて１日に、１回、ｌ
〜１０ｍｔを皮下注射で投与する。

また、前記製剤を０．５　ｍｌずつカプセルに分注して
経口用カプセル剤とし、１日、１〜１０カプセルを症状
に応じて経口投与する。

製剤例４　（腸溶性錠剤） 以下の成分組成で腸溶性錠剤大人用（イ）及び小人用（
ロ）各々１，０００個を製造した。

［Ａコ （イ）　　　　　　（ロ） 主剤（硫酸エステル化物　　　　、。Ｏ（ｇ）　　　　
５０　（ｇ）またはその塩） 乳　　　　　　　　糖　　　　　　　　９９．４　　　
　４９．７ヒドロキシグロ ビｉ、（！　／ｌ／　０−　、、Ｃ１６０・３ステアリ
ン酸　　　　　２．０　　１．０マグネシウム 酢酸フタル酸セルロース　　　　　６．０　（ｇ）　　
　　４．０　（ｇ）ヒドロキシプロピルメチル　　　　
６．０　　　　　４．０セルロースフタレート ［Ａ］の成分を各々とり、よく混合し、このものを直接
に加圧するか、またはよく練合した後、押し出し型製粒
機のスクリーンを通して顆粒成形を行い、十分によく乾
燥したものを加圧して錠剤を製造した。

次に、成形された錠剤によく溶解させた［Ｂ］の。

基材を被覆して腸溶性の錠剤とする。

この錠剤について日本薬局方（以下、「日局」という。

）崩壊試験法、腸溶性製剤の人工胃液（ｐＨ１，２）試
験を行ったところ、１時間振盪しても崩壊せず２人工腸
Ｗ　（ｐＨ７，５）試験においては５〜６分で崩壊した
。

以下の成分で腸溶性顆粒剤１，０００ｇを製造した。

［Ａ］ 主剤（硫酸エステル化物またはその塩）　　　　　１０
１００ｆ乳　　　　　　　　糖　　　　　　　　　　　
　　　　７３７ヒトロキシプロビルセルロース　　　　
　　　　　３［Ｂコ 酢酸フタル酸セルロース ｓｏ　（ｇ） ［Ａ］の成分を各々とり、よく混合した後、常法に従っ
て粒状に成形し、それをよく乾燥して篩別し、ビン、ヒ
ートシール包装などに適した顆粒剤を製造した。次に、
この顆粒を浮遊流動させながら溶解した［Ｂ］の基材を
被覆し、腸溶性の顆粒剤とする。この顆粒剤は９日局の
崩壊試験器を用いて崩壊試験を行ったところ、　　ｐＨ
１，２の人工胃液に１時間振盪しても崩壊しない。ｐＨ
７，５の人工腸液では５分で崩壊した。

製剤例６　（腸溶性カプセル剤） 以下の成分で腸溶性カプセル剤１，０００個を製造した
。

主剤（硫酸エステル化物　　　１００　（ｇ）　　　　
５０　（ｇ）またはその塩） 乳　　　　　　糖　　　　　　　　　　２４，６　　　
　７４．４ヒドロキシプロ ピルセルロース　　　　　　　　　０．４　　　　０．
４［Ｂ］ （イ）　　　　　　（ロ） 酢酸フタル酸セルロール　　　　１０　（ｇ）　　　　
１０　（ｇ）ヒドロキシプロピルメチル　　　　１０　
　　　　１０セルロースフタレート 上記の成分で製剤例５に記載したのと同様の方法でカプ
セルに適した腸溶性の顆粒剤を製造し、その組成物をカ
プセルに充填して腸溶性カプセルとした。

このカプセルは９日局の崩壊試験器を用いて崩壊試験を
行ったところ、　　ｐＨ１，２の人工胃液に１時間振盪
しても崩壊または溶出を認めず、　　ｐＨ７，５の人工
腸液に５分で崩壊または全量が溶出した。

試験例　Ｉ ＨＩ　Ｖ感染による細胞傷害に対する薬剤の抑制作用 本試験には、成人Ｔ細胞の白血病の原因ウィルスＨＴＬ
Ｖ−１によりトランスフオームされたヒトＴ細胞株ＭＴ
−４細胞（Ｇａｎｎ　ｍｏｎｏｇｒ、、　Ｖｏｌ、　２
８＋　ｐｐ２１９〜２２８（１９８２））とＨＩＶ４）
一種であるＨＴＬＶ−ｍＢを使用した。

ＨＴＬＶ−１［１３感染ＭＴ−４細胞を、各種濃度のタ
ンニン酸−８を添加した補体除去牛胎児血清１０％。

ペニシリン１００ＩＵ／ｍｔおヨヒストレフトマイシン
１００　ｔｔｇ／ｒｎｌを含むＲＰＭＩ　１６４０培地
中に、３０万個／　ｍｌ播き、３７°Ｃで炭酸ガスイン
キュベーター内で培養した。３日後に培養物半分を分取
し。

それぞれの生細胞数（Ｘ　１０’／　ｍｌ　）および生
存率（％）をトリバンプルー染色法によって測定した。

残余の培養細胞にそれぞれ同濃度の薬剤を含むＲＰＭＩ
　１６４０培地を等量添加し、さらに３日間培養を続け
、同様に生細胞数と生存率を測定した。

その結果を表１に示す。

乙ｖ（を 表 の後、りん酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１５分間洗浄
し、フルオレセイン−イソチオシアネートの結合した抗
ヒトＩｇＧで３７°Ｃ２３０分間処理した。

再びＰＢＳで洗浄後、蛍光顕微鏡で蛍光を発する。

すなわちＨＩＶ特異的ウィルス抗原タンパク質を発現し
ている細胞数を測定した。

結果を表２に示す。

表　　　２ 試験例　２ ＨＩＶ抗原発現に対する薬剤の抑制作用試験例１で測定
された細胞を、スライドガラス上で乾燥後、冷メタノー
ルで３分間固定し、１／＋０００に希釈しタヒト抗ＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩ陽性血清（ＩＦ抗体価Ｘ　４０９６）で３
７℃、　　３０分間処理した。そ試験例３ 試験例１と同様にしてエラグ酸の硫酸エステル化物を試
験した。結果を表３に示す。

試験例　５ 試験例１と同様にしてエビカテキンの硫酸エステル化物
を試験した。結果を表５に示す。

試験例　４ 試験例２と同様にしてエラグ酸の硫酸エステル化物を試
験した。結果を表４に示す。

試験例　６ 試験例２と同様にしてエビカテキンの硫チル化物を試験
した。結果を表６に示す。

試験例　７ 試験例Ｉと同様にしてエピガロカテキンガレートの硫酸
エステル化物を試験した。結果を表７に示す。

試験例　８ 試験例２と同様にしてエピガロカテキンガレートの硫酸
エステル化物を試験した。結果を表８に示す。

試験例　９ ＭｏＬＴ−４・ＭＯＬＴ−４／ＨＩｖＨＴＬｖＩ［ＩＢ
細胞混合培養による巨細胞形成抑制試験 最近報告された山車等の方法によった。［山車等、　Ｖ
ｉｒｏｌｏｇｙ、　１６４．５４２（１９８８）、　　
Ｊ、ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒＣ１１ｎｉｃａ１．２６
．１２２９（１９８８）］ＨＴＬＶ−Ｉ陰性のヒトＴ細
胞株であるＭＯＬＴ−４細胞とＨＩＶＩ続感染細胞であ
るＭＯＬＴ−４／ＨＩｖＨＴＬｖＩＩＩＢ細胞をｌＯ％
牛脂児血清添加ＲＰＭＩ／６４０培地でおのおの５Ｘｌ
Ｏ’細胞／　ｍｌに調製し、ｌ：１の割合で混合し、薬
剤を添加した。

これを３７°Ｃ９２４時間炭酸ガスインキ−ベーターで
培養した後、セルマルチサイザー　（ＣｅｌｌＭｕｌｔ
ｉｓｉｚｅｒ）　［コールタ−・エレクトロニクス社製
（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ　Ｌｔｄ、
、　Ｌｕｔｏｎ＋　Ｅｎｇｌａｎｄ）　］にて細胞サイ
ズの分布を測定した。その結果を表９に示す。

表には、細胞サイズ２０μｍ以上の割合を％で示した。

ＭＯＬＴ−４，ＭＯＬＴ−４／ＨＩＶ単独培養では。

それぞれ４．５．３．３％であるが、混合して培養する
と、１８．５％に増加する。タンニン酸−８はμｇ／ｍ
ｌで８．２％と、明らかな巨細胞形成抑制効果が認めら
れた。エピカテキン−８は２００μｇ／ｍｔで１３９％
、エラグ酸−３２００μｇ／ｍｔで９．５％、エピガロ
カテキンガレート−８１００μｇ／ｍｌで５．６％であ
った。

表　　　９ 試験例　１０ 逆転酵素（ＲＴａｓｅ）阻害活性の測定ＲＴａｓｅ阻害
活性はＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。

２６２、２１８７（１９８７）に記載の方法に準じ以下
の方法で測定した。

即ち８０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８）、　６ｍＭ塩化マ
グネシウム、　８０ｍＭ塩化カリウム、　　ｌｏｒｎＭ
　ジチオスレイトール、２０μｇ　／ｒｎｌポリアデニ
ル酸、０．０２ｕ／ｍｔオリゴデオキシチミジン、２０
μＭトリチウム標識デオキシチミジン−トリフオスフェ
ートとトリ骨髄芽球症つィルスＲＴａｓｅから成る反応
液に。

本発明化合物を各種濃度で加え全容量を１００μｌとし
た。この反応液を３７℃４０分間インキーベーションし
た後、氷冷した１０％トリクロロ酢酸を１００μｌ加え
９反応を停止した。

この反応液をガラスフィルター（ワノトマンＧ　Ｆ／Ｃ
）で濾過し、　　１０．％トリクロロ酢酸、エタノール
で洗浄した。その後、ガラスフィルターを乾燥し液体シ
ンチレーションカウンターで測定した。

上記方法により測定した本発明の有効成分のＲＴａｓｅ
明害活性の Ｉ　Ｃ，ｏを表 表 ０ １０に示す。

毒性試験 Ａ）　　Ｔ細胞増殖に対する影響 試験例１と同様にしてＨＴＬＶ−１１１Ｂ非感染ＭＴ−
４細胞の増殖に及ぼす薬剤の影響を観察した。その結果
を表１１〜１４に示す。表中の数値は生細胞数（Ｘ　１
０’／ｍｌ　）を示す。

表１１ 対照（１１岩城製薬■製日局タンニン酸対照（２）ヘン
タガロイルグルコース 対照（３１３，４，５−トリガロイルキニン酸表 ２ 表１４ 表 ３ 上記の表から明らかなように、Ｔ細胞の増殖に対する影
響は、非常に弱いものであった。またイオウ含量の高い
方が増殖に影響を与えないことが認められた。

一方、ＡＺＴは５　μＭ　（１，３ｐｇ／ｍｔ　）で、
コントロールに比べ２５〜５０％程度の増殖抑制が認め
られることが、すでに報告されている（中島秀喜。

Ｇａｎｎ、　７８．５８３（１９８７）］。

筺た。これらの薬剤はエーリノヒーレトレ　アサイテス
　カルシノー７Ｅ株（Ｅｈｒｌｉｃｈ−ＬｅｔｔｒｅＡ
ｓｃｉｔｅｓ　Ｃａｒｃｉｎｏｍａ　５ｔｒａｉｎ　Ｅ
　）細胞、マウス白血病細胞Ｌ　１２１０等の培養細胞
に対しても１００μｇ／ｍｔ使えないものもあることが
知られている（日本経済新聞、６３年１２月６日、朝刊
）。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１で得られたタンニン酸−８の赤外線
吸収スペクトルである。 第２図は、実施例２で得られた日本薬局方タンニン９−
３の赤外線吸収スペクトルである。 第３図は、実施例３で得られた米国薬局方タンニン［−
８の赤外線吸収スペクトルである。 第４図は、実施例４で得られたエラグ酸−８の赤外線吸
収スペクトルである。 第５図は、実施例５で得られたエビカテキンＳの赤外線
教収スペクトルである。 第６図は、実施例６で得られたエピガロカテキンガレー
ト−ｓの赤外線吸収スペクトルである。 第７図は、参考例で得られた１、　２．３．４．６−ペ
ンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースの赤外線吸収
スペクトルである。 第８図は、実施例７で得られた化合物の赤外線吸収スペ
クトルである。 第９図は、実施例８で得られた化合物の赤外線吸収スペ
クトルである。 第１０図は、実施例９で得られた化合物の赤外線吸収ス
ペクトルである。 第１１図は、実施例１０で得られた化合物の赤外線吸収
スペクトルである。 第１２図は、実施例１１で得られた化合物の赤外線吸収
スペクトルである。 第１３図は、実施例１２で得られた化合物の赤外線吸収
スペクトルである。 優先権主張 Ｏ平１（１９８９）　５月１６日［相］日本ＵＰ）［相
］特願平１−１２１７００

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、タンニンの硫酸エステル化物またはその塩。 ２、硫酸エステル化物のイオウ含量が０．１〜３０重量
   ％である請求項１の化合物又はその塩。 ３、タンニンが加水分解性タンニン又は、それを加水分
   解して得られた多価フェノールである請求項１の化合物
   又はその塩。 ４、タンニンがタンニン酸、エラグ酸、エピカテキン、
   エピガロカテキンガレート、ペンタガロイルグルコース
   、ジガロイルキニン酸およびトリガロイルキニン酸から
   成る群から選ばれた一員である請求項１の化合物又はそ
   の塩。 ５、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ または式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ′は、−Ｈ、−ＳＯ＿３Ｈまたは▲数式、化学
   式、表等があります▼で示される基であり、Ｒは、−Ｈ
   または −ＳＯ＿３Ｈであり、その際Ｒの少くとも一つは−ＳＯ
   ＿３Ｈである）で示される硫酸化ペンタガロイルグルコ
   ース、硫酸化ジガロイ ルキニン酸若しくは硫酸化トリガロイル キニン酸又はそれらの塩。 ６、平均硫酸化率が１０〜７０％である請求項５の化合
   物又はその塩。 ７、ナトリウム塩又はカリウム塩である請求項１の化合
   物の塩。 ８、ナトリウム塩又はカリウム塩である請求項４の化合
   物の塩。 ９、タンニンの硫酸エステル化物又はその塩を有効成分
   として含有する抗ウィルス剤。 １０、ウィルスがレトロウイルスである請求項９の抗ウ
   ィルス剤。 １１、硫酸エステル化物のイオウ含量が０．１〜３０重
   量％である請求項１０の抗ウィルス剤。 １２、タンニンがタンニン酸、エラグ酸、エピカテキン
   、エピガロカテキンガレート、ペンタガロイルグルコー
   ス、ジガロイルキニン酸およびトリガロイルキニン酸か
   ら成る群から選ばれた一員である請求項１０の抗ウィル
   ス剤。 １３、硫酸エステル化物またはその塩が、 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ または ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ′は、−Ｈ、−ＳＯ＿３Ｈまたは▲数式、化学
   式、表等があります▼で示される基であり、Ｒは−Ｈま
   たは −ＳＯ＿３Ｈであり、その際Ｒの少くとも一つは−ＳＯ
   ＿３Ｈである。） で示される硫酸化ペンタガロイルグルコース、硫酸化ジ
   ガロイルキニン酸若しくは硫酸化トリガロイルキニン酸
   又はその塩である請求項１０の抗ウィルス剤。 １４、硫酸エステル化物またはその塩の平均硫酸化率が
   １０〜７０％である請求項１３の抗ウィルス剤。 １５、タンニンの硫酸エステル化物またはその塩を有効
   成分として含有する逆転写酵素阻害剤。 １６、硫酸エステル化物のイオウ含量が０．１〜３０重
   量％である請求項１５の逆転写酵素阻害剤。 １７、タンニンがタンニン酸、エラグ酸、エピカテキン
   、エピガロカテキンガレート、ペンタガロイルグルコー
   ス、ジガロイルキニンおよびトリガロイルキニン酸から
   成る群から選ばれた一員である請求項１５の逆転写酵素
   阻害剤。 １８、硫酸エステル化物またはその塩が、 式▲数式、化学式、表等があります▼ または ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ′は、−Ｈ、−ＳＯ＿３Ｈまたは▲数式、化学
   式、表等があります▼で示される基であり、Ｒは−Ｈま
   たは−ＳＯ＿３Ｈであり、その際Ｒの少くとも一つは−
   ＳＯ＿３Ｈである。） で示される硫酸化ペンタガロイルグルコース、リガロイ
   ルキニン酸又はその塩である請求項１５の逆転写酵素阻
   害剤。 １９、硫酸エステル化物またはその塩の平均硫酸化率が
   １０〜７０％である請求項１８の逆転酵素阻害剤。 ２０、タンニンを塩基性条件下でスルホン化剤を反応さ
   せることを特徴とするタンニンの硫酸エステル化物又は
   その塩の製造法。 ２１、タンニンが、加水分解性タンニンまたはそれを加
   水分解して得られた多価フェノールである請求項２０の
   製造法。 ２２、タンニンがタンニン酸、エラグ酸、エピカテキン
   、エピガロカテキンガレート、ペンタガロイルグルコー
   ス、ジガロイルキニンおよびトリガロイルキニン酸から
   成る群から選ばれた一員である請求項２０の製造法。