JPH037231A - 副甲状腺機能亢進症治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、高カルシウム血症を誘発せずに、副甲状腺機
能亢進症、特に続発性副甲状腺機能光道症を治療するた
めの薬剤組成物に関する。

（従来の技術） ビタミンＤ、（コレカルシフェロール）の活性型代謝物
は１．２５−’；ヒドロキンコレ力ルンフェロール（１
，２５（ＯＨ）２Ｄ３）である。副甲状腺ホルモン（Ｐ
ＴＨ）は副甲状腺から生産される。ＰＴＨの放出は、血
中Ｃａ”“濃度が正常値以下に低下すると活性化される
。腎臓での１．２５（ＯＨ）２ＤＪの生成には１−水酸
化酵素の存在が必要であり、この酵素の生成はＰＴＨに
より誘導される。ＰＴＨは腎臓に作用して１．２５−（
０Ｈ）２Ｄ＋の生成を増加させるので、ＰＴＨ分泌を調
節するための負のフィードパ／り系が作動していると考
えられる。腸から血液へのカルシウム吸収には輸送用の
カルシウム結合タンパクＬｃｃａＢＰ）が必要である。

ＣａＢＰの合成は１．２５−　（ＯＨ）２Ｄｓによって
活性化される。ＰＴＩ（および１．２５　　　（ＯＨ）
２Ｄ３は両方とも、骨からのカル／ラム吸収を促進する
ことによって、血中Ｃａ２″″濃度を上昇させる。血中
Ｃａ　”濃度、ＰＴＨレベル、および１　、２５−　（
ＯＨ）　！Ｄ３レベルの相互関係は、Ｒｏｌｌｉｎｓｏ
ｎ　ｅｔ　！ｌ　”ＭｉｎｅｒｚｌＮｕｔｒｉｅｎｔｓ
”、Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ　Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅ＋ｌ
ｉａ　ｏｆＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、
３ｒｄ　ｅｄｉｌｏｎｌＪｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆５ｏ
ｎｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ｖｏｌ、ｌｓ、ｐ、ｓ８５，
１９８１に掲載された第１図に示されている。この図面
において、ｃｃはコレカルシフェロール（ビタミンＤａ
）、ＨＣＣはヒドロキンコレ力ルシフエコール、ＤＨＣ
Ｃは１．２５−　（ＯＨ）２Ｉ）ｌ、ＮＡＤＰＨは還元
型ニコチンアミド−アデニンジヌクレオチドリン酸を表
す。

続発性副甲状腺機能亢進症は慢性腎不全の一般的な合併
症である（Ｒｅｉｓｓ　ｅｒ　ａｍ、Ｔｒａｎｓ、　Ａ
ｓ５ｏｃ。

Ａｍ−Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ、　ｇｌ：ｌｌ）４−１１
５．１９０；　Ａｒｎａｕｄ。

Ｋｉｄｎｅｙ　ｒ＋＋ｔ、、イ：８９−９５．１９７３
を参照されたい）。

重症の腎不全では、１　、２５−　（ＯＨ）　ｚＤ３ノ
欠乏がＰＴＨの分泌過多を持続させる要因になっている
。

ＰＴＨ分泌に対する１　、　２５　　（ＯＨ）　２Ｄ３
の抑制作用は、続発性副甲状腺機能亢進症の治療へのそ
の使用可能性へと導いた。１．２５−　（ＯＨ）、Ｄ、
を投与すると、カルシウムの投与と比較して、たとえ両
物質が同程度にイオン化カルシウムを上昇させた場合で
さえも、より効果的に血液透析患者のＰＴＨレベルが低
下することが分かった（Ｓｌａ＋ｏｐｏｌｓｋｙ　　ｅ
ｔａｌ、、Ｊ、Ｃｌ１ｏ、Ｉｎｖｅｓｔ、、　　フィ：
２１３６−３１１３、１９８４）。続発性副甲状腺機能
亢進症の患者から採取した副甲状腺細胞は、カルシウム
の抑制作用に対してあまり感受性ではない（Ｂｒｏｖ＋
＋　ｅｔａｌ、、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
、ＭｅＬａｂ、、　Ｓ４：ｌ７２−１７９．１９８２）
。さらに、腎不全患者における１、２５−（０Ｈ）２Ｄ
１静脈内治療は、カルシウムレベルヲヨリ正常な値の方
ヘシフトさせると考えられる（Ｄｅ　ｌ−ｍｅｚ　ｅｔ
　ａｌ、、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、１ｎｖｅｓｔ、、　１９Ｎ、
印刷中）。

現在、１　、２５−　（ＯＨ）　２Ｄ３は腎不全に関連
した副甲状腺機能亢進症（特に腎透析を受けている患者
）を治療するために一般的に用いられているが、その長
期使用は往々にして高カルシウム血症により中断される
。これは、炭酸カルシウムが目下のところ、腸リンの結
合（尿毒症患者へビタミンＤを投与する前に必ず行う必
要がある）のために好適な化合物であるという事実によ
りさらに妨げられる。炭酸カルシウムは、アルミニウム
含有リン酸結合剤がしばしばアルミニウム蓄積（よく知
られた有害な作用を及ぼす）を引き起こすので、最も有
利なリン酸結合剤である。都合の悪いことに、大量の炭
酸カルシウムと１．２５−（０Ｈ）２Ｄ３の同時投与は
しばしば重症の高カルシウム血症を引き起こし、その結
果、治療量の１．２５−　（ＯＨ）　２Ｄ　３を投与で
きなくなる。

近年、副甲状腺ホルモンに対する１、２５−（０Ｈ）２
Ｄ３の抑制作用はより明確なものになってきた。１．２
５　　　（ＯＨ）２Ｄ３はカルシウムとは無関係に、直
接ＰＴＨを抑制できることが示唆されｆ：　　　（Ｃｈ
ｅｒＬｏｖ　　　ｅｔ　　　ａｌ、　　　Ｊ、Ｃｌ１ｎ
、Ｉｎｖｅｓｉ　　　　　７２：１８ＳＩ−１８５５、
Ｉｎｔ３）。ウシ副甲状腺細胞の一次培養物を用いるこ
とにより、１．２５−　（ＯＨ）２Ｄ、はＰＴＨ放出を
妨げ（ＣａｎＬＩｅｙ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｅｎｄｏｃｒ
ｉｎｏｌｏｇｙ。

１１７：２１１４−２１１９．１９Ｒ５；　Ｃｈａｎ　
ｅ［ａｌ、　　Ｃａ１ｃｉｉＴｉｓｓｕｅ　Ｉｎｔ、、
　３８：２７−３２．１９８６）、プレプロＰＴＨｍ　
ＲＮ　Ａレベルを低下させ（Ｓｉｌｖｅｒ　ｅｌ　ａｌ
、。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、　８
２：４２７０−４２７３．１９８５）、ＰＴＨ遺伝子の
転写を阻止することが証明された（Ｒｕｓｓｅｌｌ　　
ｅｔ　　ａｌ、、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、　　１
１９：２Ｒ６４−２８６６、１９８６）。この　ｉｎ　
ｖｉｖｏ転写抑制は血清カルシウム上昇のための二次的
要因ではないだろう（Ｓｉｌｖｅｒ　ｅｊ　ａｔ、、　
Ｊ、Ｃｌ１ｎ−１ｎｖｅｓｔ、、　Ｈ：１２９６−１３
０、１９８６）。ＰＴＨ放出とブレプ０ＰＴＨｍＲＮＡ
低下との密接な相関関係、および１．２５−（０Ｈ）２
Ｄ３の急性作用の欠如は、１．２５−　（ＯＨ）２Ｄ、
が転写レベルで作用することを示している。

さらに、培地に含まれる生理学的濃度（ＩＱ　−ＩＩＭ
）の１　、２５−　（ＯＨ）　ｚＤｓはＰＴＨの合成・
放出を抑制するので、ｉ　、２５−　（ＯＨ）２Ｄ３レ
ベルが異常に低い状態（例、Ｕ不全）は血清ＦＴＨの上
昇へ導くと思われる。

血中カルシウム濃度上昇作用（ｃａｌｃｅｍｉｃ　１ｃ
Ｌｉｖ１１ｙ）をほとんど示さずに、骨髄性白血病細胞
の分化誘導能を有する１　、　２５　　（ＯＨ）　２Ｄ
３類似体が数多く合成されている。２４−ホモ−１，２
５（ＯＨ）ｚＤｓは、ビタミンＤ欠乏ラットに投与した
場合、血清カルシウムを上昇させずにＨＬ−６０細胞を
分化し得る（Ｏｓ（ｒｅｍ　ｅｊ　ａｔ、、　Ｐｒｏｃ
、Ｎａｊｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、　Ｒ４：２６
１（１−２６Ｎ、　１９８７）。側鎖末端にンクロプロ
ビル基を有する１、２５−（０Ｈ）２Ｄ３類似体のＭＣ
９０３の場合も同様の特異作用か見られる（Ｂｉｎｄｅ
ｒｕｐ　ｅｔ　ａｌ、、　ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈ
ａｒｍａｃｏｌｏｇＹ、　３？：８８９−８９５．１９
８８）。さらに、２２オキサ−１２５−（ＯＨ）　２Ｄ
、（２２−オキサ−カルシトロールまたはＯＣＴとも呼
ばれる）は、極めて低い骨カルシウム溶出活性を示しつ
つｉｎ　　ｖｉｔｒｏでＨＬ−６０を分化させることが
見いだされた（Ａｂｅ　ｅｔ　ａｌ、、ＦＥＢＳ　Ｌｏ
ｔ、、　２２６：５ｇ−６２，１９８７）、、この化合
物はさらにｉｎ　　ｖｉｖ。

で血中カルシウム濃度上昇作用を示さないことも分かっ
た（Ｍｕｒａｙａｍａ　ｅｔ　ａｔ、、　Ｃｈｅｍ、Ｐ
ｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ、。

３１：４４１０−４４Ｎ、　１９８７）。ＯＣＴを含む
類似体は欧州特許第０１８４１１２号に開示されている
。副甲状腺機能充進症の調節において１，２５７　（Ｏ
Ｈ）２Ｄ、の活性に匹敵するが、血中カルシウム濃度上
昇作用を示さない１　、２５　　（ＯＨ）　！Ｄ３類似
体の能力に関して、今まで何の報告もなされていない。

血清Ｃａ”　　ＰＴＨ，および１．２５−　（ＯＨ）２
Ｄ！レベル間の相互関係が知られているために、１　、
　２５−　（ＯＨ）　ｘＤｓ分子の構造を変えることに
よるＰＴＨ生成に対する作用が未知であるために、そし
て１．２５−　（ＯＨ）２Ｄユ類似体の骨髄性白血病細
胞の分化誘導能とＰＴＨ転写に対するそれらの作用とを
相関させる証拠が無いために、ＰＴＨの分泌過多に影響
を及ぼす１．２５−（０Ｈ）２Ｄ）類似体の能力につい
ての予測可能性はないと言える。さらに、１．２５−　
（ＯＨ）ｘＤｓの作用は細胞レセプター（全組織におい
て同一であると考えられる）により仲介され、しかもＯ
ＣＴはトリ腸レセプターに１．２５−（０Ｈ）２Ｄ３よ
りも１４＠弱く結合しくＭｕｒａｙａｍａ　ｅｔ　ａｌ
、、１９８７゜同上）かつ比較的弱い血清カルシウム上
昇作用を宵するので、副甲状腺におけるＯＣＴと１，２
５’−（ＯＨ）２Ｄ３の同等な活性は驚くべきことであ
り、予測できなかったことであるだろう。

（発明が解決しようとする課題） 本発明の目的は、従来技術の前記難点を解決することで
ある。

本発明の他の目的は、ＰＴＨの合成・分泌を抑制する薬
剤組成物を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、高カルンウム血症を誘発せ
ずに、続発性副甲状腺機能亢進症を治療する薬剤組成物
を提供することである。

（課題を解決するだめの手段） 本発明によれば、ＰＴＴ（の合成および分泌は式（） （式中、Ｒ６、Ｒ２およびＲ１は、同一であっても異な
っていてもよく、それぞれ水素原子または水酸基を表し
；Ｒ１は水素原子または水酸基で置換されていてもよい
Ｃ，−。アルキル基である）で表されるビタミンＤ誘導
体を投与することによって抑制される。従って、この種
の誘導体は続発性副甲状腺機能亢進症の治療に有用であ
る。好適な誘導体は２２−オキサ−１，２５−（ＯＨ）
　２Ｄ。

すなわちＯＣＴである。ＯＣＴは、この治療のために現
在使われている鋭化合物の１．２５−（ＯＨ）！Ｄ１よ
りも、ＰＴＨ抑制の点でやや優れた活性をもつことが見
いだされた。他の密接に関連した式（Ｉ）の誘導体もす
べて、有意なＰＴＨ放出抑制作用を有すると期待できる
。しかしながら、これらの誘導体はすべて、鋭化合物と
違って、はんのわずかなカルシウム放出活性をもつにす
ぎず、高カルシウム血症へ導くことがない。　従って、
式（１）の誘導体、特にＯＣＴは続発性副甲状腺機能亢
進症治療剤の有効成分として価値ある化合物である。

本発明は、ＯＣＴが、血中カルシウム濃度上昇作用を示
さないにもかかわらず、また１、２５−（ＯＨ）ｚＤｓ
と比べて実質的にトリ腸レセプターへの結合能をもたな
いにもかかわらず、ＰＴＨの合成・分泌を抑制するのに
効果的であり、それ故に副甲状腺機能先進症、とりわけ
腎不全と関連した続発性副甲状腺機能亢進症の治療に利
用しうるという発見に基づいている。さらに、本発明は
、密接に関連した式（Ｉ）の誘導体がすべて、この事に
関してＯＣＴと実質的に同じ性質をもつであろうという
認識に基づいている。

血中カルシウム濃度上昇反応： ＯＣＴが血中カルシウム濃度上昇作用をもたないことは
、正常ラットにＯＣＴを短期および長期にわたって投与
することにより確かめた。プロピレングリコールビヒク
ル、ＯＣＴ、または１．２５−　（ＯＨ）　２Ｄ　ｓを
ｉ、ｏμｇ／ラットの量で腹腔内に１回投与すると、カ
ルシウムがそれぞれ０゜３２．０．３０、および１．４
０ｍｇ／ｄｉ上昇した。プロピレングリコールビヒクル ５μｇの１　、　２　５　　（ＯＨ）　２Ｄ３もしくは
ＯＣＴを４日間毎日ラットに投与すると、ビヒクルまた
はＯＣＴを受は取ったラットではカルシウム量に変化が
なかったが、１　、　２　５　−　（Ｏ　Ｈ）　２Ｄ３
で処置したラットではカルシウム量が８．４ｍｇ／ｄ１
から１１．４ｍｇ／ｄｉへ上昇した。

ラン副甲状腺細胞の一次培養物において、１ＯＮＭ　　
ＯＣＴは１　、　２　５　−　（ＯＨ）　！Ｄ３と同様
の活性を示し、ＰＴＨ放出を３３％抑制した。この抑制
は、少なくとも幾分かは、ＰＴＨ遺伝子の転写がブロッ
クされたことによっている。

ＯＣＴおよび１．２５−　（ＯＨ）ｆＤ３に対する急性
カルシウム濃度上昇反応は、１．０％カルシウムおよび
０．４％リンを含む標準飼料を与えたＳｐｒａｇｕｅ−
Ｄａｖｌｅｙ系の正常な雄ラット（２５０−２７５ｇ）
を使って調べた。２５０μｍのプロピレングリコールビ
ヒクル、または０．２、０．５、１、０μｇの１　、　
２　５　−　（ＯＨ）　ｚＤｓもしくはＯＣＴを腹腔内
に１回投与し、２４時間経過後に血液を採取し、カルシ
ウムレベルを測定した。血清カルシウムの上昇（投与２
４時間後のカルシウム値から投与前のカルシウム値を減
じることにより各ラットについて計算した）は、１．２
５−　（ＯＨ）、Ｄ！またはＯＣＴのそれぞれの用量に
おいて調　べ　ｔこ　。

これらの用量に対するカルシウム濃度上昇反応を第２図
に示す。デルタ血清カルシウム値は上記のように求めた
。すべての値は平均上標準誤差、ｎ＝４として表した。

長期にわたる実験では、正常雄ラント（３００ｇ、標準
飼料で飼育）に２５０μｌのプロピレングリコールビヒ
クルまたは０．５μｇの１，２５−　（ＯＨ）！Ｄ！も
しくはＯＣＴを毎日腹腔内注射した。毎朝５時間の絶食
後に、ラットの体重を量り、血液を尾静脈から採取して
カルシウムを測定し、次いで注射した。これらの結果を
第３図に示す。すべての値は平均上標準誤差、ｎ＝６と
して表した。対照と処置サンプルとの統計学的差は両側
Ｌテストを用いて評価した。

ウシ副甲状腺細胞培　物におけるＰＴＨ分泌：ウシ副甲
状腺細胞の一次培養物はＢｒｏｗｎ　ｅｔ　ａｌ。

Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ（ｙ，　９９：ｌＳＮ−１５８
８．　１９７２に記載されるように、ただしＭｏｒｒｉ
ｓｓｅｙ　ｅｔ　ｓｌ，Ｅａｄｏｃｒｉｎｏｌｏ！ｙ。

１０３：２ＯＮ−２０９０．　１９７８に記載の通りに
変更して調製した。培養５日後に、細胞をいろいろな濃
度の１．２５−　（ＯＨ）！Ｄ３またはＯＣＴで処理し
た。

両方の化合物はエタノール溶液としてアリコートを調製
しく対照はエタノールのみ）、窒素下で乾燥し、その後
培地にポルテックス混合した。細胞は１．２５−　（Ｏ
Ｈ）２ＤＳまたはＯＣＴを含む培地と共に４８時間イン
キュベートした（ただし、２４時間後に培地を変えた）
。

ＰＴＨの分泌速度を調べるために、細胞は２回洗浄した
後新鮮な培地中、３７°Ｃで３時間インキュベートした
。培地は、遠心後、ウシＰＴＨの全領域、中間領域、お
よびＣ末端領域を認識する抗体（ＣＲ２）を用いてラジ
オイムノアッセイによりＰＴＨについて検定した（ｌＩ
ｒｕｓｋ＊　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、、　５６：３９−４８．１９）５を参照
）。各サンプル中のタンパク質は、細胞を１Ｍ水酸化ナ
トリウム中で超音波処理し、Ｂｒｘｄｆｏｒｄ、　Ａ＋
＋＊１．１ｌｉｏｅｈｅ＊、、　７２：２４８−２５４
．１９７６に記載の方法によりアリコートを検定して調
べた。これらの結果を第４図に示す。

培地サンプルは遠心後ラジオイムノアッセイでＰＴＨを
検定した。すべてのＰＴＨ値は細胞タンパク質について
補正し、平均士漂準誤差、ｎ＝４として表した。

ラット副甲状腺におけるプレプロＰＴＨｍＲＮＡレベル
： 標準飼料を与えた正常ラットに、２５０μｌのプロピレ
ングリコールビヒクルまたは１００１００ｐの１　、２
５−　（ＯＨ）　ｚＤｓもしくはＯＣＴを１回腹腔内注
射した。４０時間後、ラットを抱水クロラールで麻酔し
、大動脈から血液を取り出し、副甲状腺を摘出して直ち
に液体窒素中に入れた。

プラスミドＰＴＨｍ１２２の８００ｂｐＭｓｐＩ断片は
、ランダムプライムキットを用いて約ｔｏ’ｃｍｐ／μ
ｇの比活性へ標識した。ラット細胞質β−アクチンに対
する合成オリゴヌクレオチドプローブは、Ｔ４キナーゼ
を用いて５′末端標識キツトにより約１０’ｃｍｐ／μ
ｇの比活性へ標識した。

プレプロＰＴＨｍＲＮＡレベルを測定するために、１６
匹のラットの副甲状腺のプールから細胞質ＲＮＡの抽出
物を調製した。前に凍結しておいた副甲状腺は１０　ｍ
　Ｍ　トリス−ＨＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ８中でホ
モジナイズし、５μｍの５％ＮＰ４０を加えた。氷上で
５分後、このホモジネートを微量遠心機で４℃、５分間
遠心した。

上清を分離し、３０ＪＩの２０ＸＳＳＣ（ＩＸＳＳＣは
０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０１Ｍクエン酸ナトリ
ウム、ｐＨ７）および２０７１１の３７％ホルムアルデ
ヒドと混合し、６０℃で１５分間インキュベートした。

この抽出物の希釈物をスロットプロット装置でニトロセ
ルロースへ移し、このフィルターを真空下８０℃で２時
間焼き付けた。その後、フィルターは５０％ホルムアミ
ド中の５　Ｘ　Ｓ　Ｓ　Ｃ，５Ｘ　Ｄｅｎｈ＠ｒｄＬ溶
液、１１００ｊ１／ｍｌサケ精子ＤＮＡ中で４２℃、３
時間プレハイブリタイゼーションを行わせた。次に、こ
のフィルターを１０’ｃ　ｐｍ／ｍ　］のＰＴＨｍ１２
２プローブまたはβ−アクチンオリゴヌクレオチドグロ
ーブを含む５０％ホルムアミド中の５ｘＳＳＣ。

１　ｘ　Ｄｅｎｈａｒａｔ溶液、１００μｇ／ｍ＋サケ
精子ＤＮＡの適当なハイブリダイゼーション溶液に入れ
た。ハイブリダイゼーションは、ヒトＰＴＨｃＤＮＡグ
ローブとラットプレグ口ＰＴＨＲＮＡ間でＤＮＡ配列に
差があるので、あまりストリンジェント（厳格）でない
室温において一晩行った。

翌日、フィルターは室温で４ＸＳＳＣ，０，１％ドデシ
ル硫酸ナトリウムにて１回、ｌＸ５ＳＣ。

０．１％ドデシル硫酸ナトリウムにて３回洗い、乾燥後
オートラジオグラフィーにかけた。再度、ｃＤＮＡプロ
ーブと目的とするｍＲＮＡ間の種差を保つように、それ
ほどストリンジェントでない洗浄を行った。対照として
、上記のように調製した１　０ｍｇのラット肝臓由来の
細胞質ＲＮＡ抽出物を同一方法で検定した。

第５図は、肝臓（ＡおよびＥ）、対照ラットの副甲状腺
（ＢおよびＦ）　、１．２５−　（ＯＨ）２Ｄ、処置ラ
ットの副甲状腺（ＣおよびＧ）、並びにＯＣＴ処置ラッ
トの副甲状腺ＣＤ８よびＨ）から抽出された細胞質ＲＮ
Ａのスロット−プロット分析を示す。スロットＡ−Ｄは
ＰＴＨｍ１２２ｃＤＮＡとハイブリダイズさせ、一方ス
ロットＥ−Ｈはラットに５　　ｂｋｌ−アクチンオリゴ
ヌクレオチドｃＤＮＡとハイブリダイズさせた。左側は
右側の２倍のＲＮＡ抽出物を表す。

ノザンプロット分析を行うために、ラット副甲状腺から
抽出した細胞質ＲＮＡグールの一部を７エノールで処理
し、キャリアーｔ　ＲＮＡと共にエタノール沈澱させ、
ホルムアルデヒドを含む１．２％アガロースゲル上で電
気泳動じた。ＲＮＡを毛管作用によりニトロセルロース
に移し、そのニトロセルロースを焼き付け、プレｌ＼イ
ブリダイゼーソヨンを行い、そして上記のようにＰＴＨ
ｍ１２２　　ｃＤＮＡとハイブリダイゼーションを行わ
せた。リポソームＲＮＡの泳動は、肝臓ＲＮＡ抽出物を
含むアガロースゲルの隣接レーンをエチジウムプロミド
で染色することにより調べた。このノザンプロット分析
の結果を第６図に示す。

上記のことから、ＯＣＴはｉｎ　ｖｉマ０で活性であり
、１　、２５−　（ＯＨ）　！Ｄ３と同様に、プレプロ
ＰＴＨｍＲＮＡレベルを低下させることが分かる。従っ
て、カルシウム濃度上昇作用の欠如は０ＣＴの速やかな
代謝またはクリアランスの結果ではない。

前記の特定例はすべて本発明の好適な実施態様、すなわ
ちＯＣＴの使用に関するものであるが、本発明はこのよ
うな好適な化合物の使用はかりでなく、式（１）の他の
ビタミンＤ３誘導体（２２オキサ−ビタミンＤ、誘導体
であるから、すべてＯＣＴと構造的に密接な関係がある
）の使用をも意図するものである。式（Ｉ）の化合物お
よびそれらの合成法は、欧州特許第０１８４１１２号お
よびそれに対応する米国特許出願第０７／２１１０９６
号に記載されており、両特許の技術内容は本明細書の一
部としてここに引用するものとする。

当分野で通常の知識を有する者は、これらの密接に関連
した２２−オキサ−ビタミンＤ、誘導体のすべてがＯＣ
Ｔと類似した優れた性質をもち、本発明の方法および組
成物において同様の有利な結果をもたらしうろことを理
解し、また期待するであろう。　本発明に従って続発性
副甲状腺機能亢進症の患者を治療する際に、式（丁）の
化合物、好ましくはＯＣＴは経口的にまたは非経口的に
投与される。しかしながら、腸以外の宋梢探的組織への
化合物の移行をより多くするために、静脈内投与が好適
である。さらに、腎透析の場合は、静脈内に針がすでに
配置されているので、その間に化合物を静脈内投与する
ことが有利である。

式（Ｉ）の化合物の静脈内投与量は各回の透析処置あた
り約１〜１０μｇの範囲である。一般に、透析処置は１
週間に３回行われる。毎日投与する場合、化合物の経口
または非経口投与量は０．５〜５μｇ７日の範囲であり
うる。治療期間中に症状の好転が見られる場合は、１日
の投与量を初めに指示した量の１０分の１程度に減らす
ことができる。このような場合、１日の投与量はＯ，Ｏ
Ｓμｇ／日と同じくらいに少なくてよい。それぞれの患
者に対する有効量は、化合物のＰＴＨ分泌に対する影響
および正常な血中カルシウム濃度の維持を観察すること
により、それぞれの式（Ｉ）の化合物について経験的に
容易に決定することができる。従って、各化合物の有効
量の決定は当分野の技術の範囲内である。

副甲状腺機能亢進症、特に続発性副甲状腺機能亢進症を
治療するための本発明薬剤組成物には、その目的を達成
するのに十分な量の式（Ｉ）の化合物を含有する組成物
が含まれる。十分な量の決定は当分野の技術の範囲内で
ある。

式（Ｉ）の化合物のほかに、これらの薬剤組成物は活性
化合物の製剤化を容易にする賦形剤および補助剤から成
る製剤学的に許容しうる担体を含むであろう。好ましく
は、製剤、特に錠剤、糖衣錠、カプセル剤のような経口
投与が可能なもの、原剤のような直腸投与が可能なもの
、および注射ノ や経口投与が可能な溶液剤は、賦形剤と共に、約０．１
〜９９％、好ましくは約２５〜８５％の活性化合物を含
有する。

本発明の薬学的製剤はそれ自体既知の方法で、例えば慣
例的な混合、顆粒化、糖衣錠の形成、または溶解プロセ
スにより製造される。こうして、経口投与用の製剤は、
活性化合物を固体賦形剤と混合し、場合により、得られ
た混合物を粉砕し、所望によりまたは必要に応じて、適
当な補助剤を添加した後、顆粒混合物を成形して錠剤や
糖衣錠のコアをつくることにより得られる。

適当な賦形剤は、とりわけ、糖（例、乳糖、ショ糖、マ
ンニトール、ソルビトール）、セルロース製品、および
／またはリン酸力ルンウム（例、リン酸三カルシウム、
リン酸水素カルシウム）のような充填剤である。本発明
組成物で用いる結合剤には、デンプンペースト（例えば
、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、
ジャガイモデンプンを使用）、ゼラチン、トラガカント
ゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、お
よび／またはポリビニルピロリドンが含まれる。所望に
より、前記デンプン、カルボキンメチルデンプン、架橋
ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしく
はその塩（例、アルギン酸ナトリウム）のような崩壊剤
を添加することもできる。補助剤には流動調節剤および
滑沢剤が含まれ、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸
またはその塩（ｆｆ１ｌ　、ステアリン酸マグネシウム
、ステアリン酸カルンウム）、および／またはポリエチ
レングリコールが含まれる。糖衣錠コアはその表面を適
当な剤皮（例えば、胃液に不溶なもの）で被包される。

この目的のために、濃厚な糖溶液が使用され、糖溶液は
アラビヤゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエ
チレングリコール、二酸化チタン、ラッカー液、および
適当な有機溶媒または溶媒混合物を含んでいてもよい。

胃液に不溶な剤皮を施すためには、アセチルセルロース
フタレートまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース
７タレートのような適当なセルロース製品の溶液が用い
られる。着色剤または顔料は、例えば識別のために、あ
るいは異なる活性化合物用量の組合せを特徴づけるため
に、錠剤や糖衣錠の剤皮に添加される。

経口的に用いられる他の薬学的製剤には、ゼラチンから
作られたブツシュ−フィツトカプセル（ｐｕｓｈ−１ｉ
ｔ　ｃａｐｓｕｌｅ）　、およびゼラチンと可塑剤（例
　グリセロール、ソルビトール）から作られた軟質の密
封カプセルが含まれる。ブツシュ−フィツトカプセルは
顆粒状の活性化合物を含み、そのほかに充填剤（例、乳
糖）、結合剤（例４デンプン）、および／または滑沢剤
（例、タルク、ステアリン酸マグネシウム）、場合によ
り、安定化剤を含んでいてもよい。軟質カプセルの場合
は、脂肪油、流動パラフィン、液状ポリエチレングリコ
ールのような適当な液体に活性化合物を溶解または懸濁
させるのが好ましい。そのほかに安定化剤を加えてもよ
い。

非経口投与用の適当な製剤には水溶性活性化合物の水溶
液剤が含まれる。さらに、活性化合物の懸濁剤（例えば
、注射用の油性懸濁剤）も使用される。適当な親油性溶
媒またはビヒクルには、脂肪油（例、ゴマ油）、または
合成脂肪酸エステル（例、オレイン酸エチルまたはトリ
グリセリド）が含まれる。注射用の水性懸濁剤はナトリ
ウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、およ
び／またはデキストランのような懸濁剤の粘度を高める
物質を含むことができる。場合により、懸濁剤は安定化
剤を含んでいてもよい。

当分骨で習熟した者は、本発明の範囲を逸脱することな
くいろいろな変更が可能であり、本発明が図面および詳
細な説明に記載したものに限定されないことを理解する
であろう。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ｉｎ　ｖｉｖｏでの血清Ｃａ２＋　ＰＴＨお
よび１　、２５−　（ＯＨ）　２Ｄ３の相互関係を示す
。 第２図は、いろいろな用量のＯＣＴおよび１゜２５−　
（ＯＨ）２Ｄ３に対する血中カルシウム濃度上昇反応を
示す。 第３図は、ＯＣＴおよび１．２５−　（ＯＨ）２Ｄ、の
長期投与に対する血中カルシウム濃度上昇反応を示す。 第４図は、ラン副甲状腺細胞の一次培養物からのＰＴＨ
分泌に対するＯＣＴおよび１．２５−（ＯＨ）　２　Ｄ
３の影響を示す。 第５図は、肝臓および副甲状腺から抽出された細胞質Ｒ
ＮＡのスロット−プロット分析を示す。 第６図は、 副甲状腺から抽出された細胞質ＲＮ Ａのノザンブロ、ノ ド分析を示す。 第 凹 第 ３ 凹 −１−醋 第 国 ｆ、２ｆ−ωＨル９Ｊノｔこｌ！　ＯＣＴ　（ｌａ／Ｍ
）４７８０ ｏｃ川用常 ７、２ｆ（ＤＨ）、　ＤＪ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびＲ＿３は、同一であつて
   も異なっていてもよく、それぞれ水素原子または水酸基
   を表し；Ｒ＿４は水素原子または水酸基で置換されてい
   てもよいＣ＿４＿−＿６アルキル基である）のビタミン
   Ｄ＿３誘導体を有効成分として含有する副甲状腺機能亢
   進症治療剤。 ２、式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびＲ＿３は、同一であって
   も異なっていてもよく、それぞれ水素原子または水酸基
   を表し；Ｒ＿４は水素原子または水酸基で置換されてい
   てもよいＣ＿４＿−＿６アルキル基である）のビタミン
   Ｄ＿３誘導体を有効成分として含有する続発性副甲状腺
   機能亢進症治療剤。