JPH036456A

JPH036456A - 歯周疾患検査方法

Info

Publication number: JPH036456A
Application number: JP14231689A
Authority: JP
Inventors: Yoji Yamazaki; 洋治山崎
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 1989-06-01
Filing date: 1989-06-01
Publication date: 1991-01-11

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産栗↓勿程朋分界本発明は、歯周疾患の検査方法に関する。

従来の技術従来より、歯周炎などの歯周疾患の検査方法としては、
歯垢中の歯周病原性細菌を直接あるいは間接的に検出す
る方法、歯肉溝浸出液などから炎症性酵素を検出する方
法が知られている。

例えば、モノクローナル抗体を用いる方法としては、バ
クテロイデス・ジンジバリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ
　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）に対するモノクローナル抗体
を用いて、歯周病の病巣におけるＢ、ｇｉｎｇｉｖａｌ
ｉｓの動態を調べることによる歯周病の診断法（特開昭
６０−７３４６３号公報）；アクチノバチルス・アクチ
ノミセテムコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃ
ｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）に特異的なモノクローナル
抗体を用いる検査方法（特開昭６２−２１１５５８号公
報）が報告されている。

しかし、これらのモノクローナル抗体法は、高度の技術
を必要とし、判定までに時間を要するという問題があっ
た。

また、特開昭６１−２５７２００号公報には、プローブ
ＲＮＡまたはＤＮＡと接触させ、歯周疾患に伴う微生物
細胞またはヒト細胞を検出する方法が提案されている。

しかし、このＤＮＡプローブ法は、感度は高いが、アイ
ソトープを使うなど操作性において問題があった。

さらに、ある種の基質を用いることにより、細菌が産生
するアミノペプチターゼ様酵素活性を特異的に、かつ簡
便、迅速に検出する試みも為されている（特開昭６３−
３６８００号公報、同６３８７９９９号公報）。しかし
、この方法は良好な操作性が期待されるものの、臨床で
の対応が明確でない。

一方、炎症症状が存在するときに酵素活性が増加するこ
とから、コラゲナーゼ酵素活性（特開昭６１−７１００
０号公報）、ペルオキシダーゼ酵素活性（特開昭６０−
２２２７６８号公報、同６１−２５４８５４号公報）を
呈色により検出することが報告されている。

発明が解決しようとする課題本発明は、歯周疾患を迅速、簡便、かつ正確に、しかも
視覚によって容易に判定できる検査方法を提供するもの
である。

溌１譚城ヨ本発明の歯周疾患検査方法は、インドールと反応して発
色する発色成分を含むインドール発色試薬に、検体を接
触させ、その際のインドール発色試薬の発色程度によっ
て、歯周疾患の程度の診断あるいは進行の予測を行うこ
とを特徴とする。

以下、本発明についてさらに詳細に説明する。

本発明において用いられる発色成分としては、例えば、
ｐ−ジメチルアミノケイ皮アルデヒド、ｐ−ジメチルア
ミノベンズアルテヒド、ピリジルピリジニウム、１，２
−ナフトキノン−４スルホン酸ナトリウム、キサントヒ
トロール、シュウ酸、ニトロプルジッドナトリウム、亜
硝酸ナトリウム等が例示され、これらは一種で、または
２種以上組み合わせて用いられる。

インドール発色試薬は、これら発色成分を適当な溶媒に
溶解して液状発色試薬としたり、あるいは適当な基体に
担持させるなど、適宜の方法によって調製される。

担持型の発色試薬は、発色成分を酸、水、有機溶媒など
に溶解して基体に含浸したり、塗布することなどにより
調製され、さらにこれを乾燥させてもよい。この場合、
発色成分は、乾燥時に基体重量の０．００００１〜」−
％となるように担持させることが好ましい。なお、上記
基体の材質は特に制限されないが、毛細管現象等による
吸水性を有するものであることが好ましく、例えば「新
包装技術便覧Ｊ　（１９７１年日本包装技術協会編、日
本生産性本部発行）第２０２〜２５１頁及び第４４７〜
４８６頁に記載された紙、織布、不織布、フェルト、焼
成されたシリカ等の無機多孔質体、発泡ウレタン等の有
機スポンジ体、ガラス管、プラスチック管等のキャピラ
リ管、水溶性もしくは水膨潤性高分子物質からなる乾膠
体、こう膠体などが好適に用いられる。なお、基体はフ
ィルム状等の適宜な形状に形成することができ、さらに
必要により基体を水不溶性の保持体に保持させるように
してもよい。

インドール発色試薬と検体とを接触させることにより、
検体中に含まれるインドール量を化学的な発色反応で測
定でき、発色程度を視覚で判定することができる。発色
成分の量にもよるが、検体中のインドールの量に応じて
発色試薬が強く発色し、例えば、発色成分としてｐ−ジ
メチルアミノケイ皮アルデヒドを用いた場合は、黄色の
発色試薬が、黄緑色→緑色→濃緑色の順に強く発色する
。発色の度合いを判断することにより、歯周疾患の程度
が診断でき、あるいは、連続して検査を繰り返すことに
より、歯周疾患の進行状態の診断、予測を行うこともで
きる。

検体としては、歯垢、歯肉溝浸出液、唾液などを用いる
ことができる。

見更勿羞来本発明によれば、インドール発色試薬と検体とを接触さ
せ、インドール発色試薬の発色程度によって歯周疾患を
検査することにより、簡便、迅速かつ正確に、しかも視
覚によって容易に、歯周疾患の程度を診断したり、歯周
疾患の進行状況を予測したりすることができる。

実施例１各種口腔細菌のインドール産生量を、下記に示すように
評価した。

使用した細菌は、パイテロイデス・ジンジバリス３株、
バクテロイデス・インターメディアス２株、フシバクテ
リウム・ヌクレイタム３株、アクチノバチラス・アクチ
ノミセテムコミタンス３株、バイロネラ・アルカレンセ
ンス３株、アクチノマイセス・ビスコサス２株、ストレ
プトコッカス・サンイス２株およびストレプトコッカス
・ミュータンス２株を用いた。

バクテロイデス属およびフシバクテリウム属の細菌は、
ヘミン（３μｇ／ｍ　Ｑ　）、メナジオン（０，５μｇ
／ｍ　Ｑ　）を含むトッド・ヘイット・ブロス培地を用
いた。

バイロネラ属の細菌はロゴサ培地を用いた。

他の細菌は、トッド・ヘイット・ブロス培地を用いた。

培養は、いずれも３７℃で、２４〜７２時間行った。

培養液中のインドールの測定は、次のように行った。培
養液２ｍｆｌにトルエン３ｍｕを加え、１分間撹拌後、
遠心してトルエン層２ｍρを採取した。これに、０．５
％Ｐ−ジメチルアミノケイ皮アルデヒド溶液を０．５ｍ
ｌ１添加し、３７℃で１０分間反応させた。続いて、８
％硫酸溶液を０．２５ｍｆｌ添加し、３７℃で１０分反
応させて発色の程度を肉眼で判定した。

判定基準は下記に示した通りである。

：黄色＋：黄緑色＋＋：緑色十十十二濃緑色結果は表−１に示すごとく、歯周病原細菌の一つとして
考えられているバクテロイデス・ジンジバリス、バクテ
ロイデス・インターメディアスおよびフシバクテリウム
・ヌクレイタムは強いインドール産生能を有していた。

バクテロイデス・ジンジバリスバクテロイデス・インターメディアスフゾバクテリウム・ヌクレイタムアクチノバチラス・アクチノミセテムコミタンスバイロネラ・アルカレッセンスアクチノマイセス・ビスコサスストレプトコッカス・サンギスストレプトコッカス・ミュータンス十十＋＋＋＋千十＋７実施例２下記方法により、本発明の歯周疾患検査方法の有効性を
確認した。

臨床所見上、健常であると認められた者５名および歯周
炎患者５名から、各々、スケーラ−により歯肉溝内プラ
ークを採取し、トルエン１００μＱを加えて１分間撹拌
した後、０．５％Ｐ−ジメチルアミノケイ皮アルデヒド
溶液（ｎ−プロパツール中）２５μ℃を加えて３７℃で
１０分間反応させ、さらに８％硫酸溶液（９５％エタノ
ール中）　１２．５μＱを加えて３７℃で１０分間放置
し、色の変化を以下の判定基準に従い肉眼で判定した。

インドールを測定することにより、歯周疾患の診断を客
観的に行うことができる。

Claims

【特許請求の範囲】

１、インドールと反応して発色する発色成分を含むイン
ドール発色試薬に、検体を接触させ、その際のインドー
ル発色試薬の発色程度によって、歯周疾患の程度の診断
あるいは進行の予測を行うことを特徴とする歯周疾患検
査方法。