JPH0358797A - 活性化小膠細胞に対するモノクローナル抗体、該モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ、該モノクローナル抗体により識別される抗原及びこれらの製造方法 - Google Patents
活性化小膠細胞に対するモノクローナル抗体、該モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ、該モノクローナル抗体により識別される抗原及びこれらの製造方法Info
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- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアルツハイマー病に含まれる新規モノクローナ
ル抗体及びこのようなモノクローナル抗体を分泌するハ
イブリドーマに関する。本発明は更に該モノクローナル
抗体の１つと免疫複合物を形成する抗原に関する。本発
明は更に活性化小膠細胞を含む脳疾患又は脳感染のｉｎ
ｖｉｔｒｏ診断方法に関する。
ル抗体及びこのようなモノクローナル抗体を分泌するハ
イブリドーマに関する。本発明は更に該モノクローナル
抗体の１つと免疫複合物を形成する抗原に関する。本発
明は更に活性化小膠細胞を含む脳疾患又は脳感染のｉｎ
ｖｉｔｒｏ診断方法に関する。
小膠細胞は正常な病理学的神経系に含まれているが、こ
の細胞の同定及ひ役割についてはまた知られていない。
の細胞の同定及ひ役割についてはまた知られていない。
事実小膠細胞についてはほとんと知られていない。Ｄｅ
ｌ Ｒｉｏ ｔｌｏｒｔ．ｅｇａによる゛’Ｂｏｌ Ｓ
ｏｃ Ｅｓｐ Ｂｉｏ（９． ６９−１２０）への小膠
細胞についての発表以来、この細胞の単なる存在か論議
を醸した。小膠細胞は脳細胞内に存在する特殊細胞系で
あり、適切な１２ 刺激を与えるとマクロファージに分化すると主張する著
者もいる。これに関する更に詳細な説明については特に
、 Ｂｏｙａ Ｊ．Ｊ．Ｃａｌｖｏ 八． Ｃａｒｂ
ｏｎｅｌｌ， Ｅ．ＧａｒｃｉａＭａｕｒｉｎｏ（１
９８６） Ｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ
ｓ ＋ｎ ｒａｔｂｒａｉｎ Ａｃｔａ Ａｎａ
ｔ １２７ １４２−］４５、ロｏｙａ Ｊ．
，．Ｊ． Ｃａｌｖｏ， Ａ．ｌ．． Ｃｎｒｂ
ｏｎｅｌｌ（１９８７）八ｐｐｅａｒａｎｃｅ ｏｆ
ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ
ｔｈｅｐｏｓｔｎａｔａｌ ｒａｔ ｒｅｔｉｎａ
． 八ｒｃｈ． Ｈｉｓｔｏｌ Ｊａｐ ５０
２２３−２２８ Ｆｕ ｊｉ＋ｎｏｔｏ Ｅ．， 八 Ｍｉｋｉ，
Ｈ． Ｍｉｚｏ ｇｕｔｉ（１９８７）Ｈｉｓｔ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｒ ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆ ｍｉｃｒｏｇｌ
ｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｂｅ ｃｅｒｅｂｒａｈ
ｅｍｉｓｐｂｅｒｃｓ ｏｆ ｃｂｉｃｋ ｅｍｂｒｙ
ｏｓ ａｎｄ ｃｈｉｃｋｓ．１１ｉｓｔｏｃｈｃｍ
８７：２０９−２１６Ｆｕｊｉｔａ Ｓ． （＋９８０
） ＣｙｔｏＨｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏ
ｇｙｏｆ ｎｅｕｒｏ）（ｌｉａ ａｎｄ ｍｉｃｒｏ
Ｂｌｉａ． Ｐａｔｈｏｌ Ｒｅｓ Ｐｒａｃｔ１６８
・２７１−２７８ を参照することができる。
ｌ Ｒｉｏ ｔｌｏｒｔ．ｅｇａによる゛’Ｂｏｌ Ｓ
ｏｃ Ｅｓｐ Ｂｉｏ（９． ６９−１２０）への小膠
細胞についての発表以来、この細胞の単なる存在か論議
を醸した。小膠細胞は脳細胞内に存在する特殊細胞系で
あり、適切な１２ 刺激を与えるとマクロファージに分化すると主張する著
者もいる。これに関する更に詳細な説明については特に
、 Ｂｏｙａ Ｊ．Ｊ．Ｃａｌｖｏ 八． Ｃａｒｂ
ｏｎｅｌｌ， Ｅ．ＧａｒｃｉａＭａｕｒｉｎｏ（１
９８６） Ｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ
ｓ ＋ｎ ｒａｔｂｒａｉｎ Ａｃｔａ Ａｎａ
ｔ １２７ １４２−］４５、ロｏｙａ Ｊ．
，．Ｊ． Ｃａｌｖｏ， Ａ．ｌ．． Ｃｎｒｂ
ｏｎｅｌｌ（１９８７）八ｐｐｅａｒａｎｃｅ ｏｆ
ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ
ｔｈｅｐｏｓｔｎａｔａｌ ｒａｔ ｒｅｔｉｎａ
． 八ｒｃｈ． Ｈｉｓｔｏｌ Ｊａｐ ５０
２２３−２２８ Ｆｕ ｊｉ＋ｎｏｔｏ Ｅ．， 八 Ｍｉｋｉ，
Ｈ． Ｍｉｚｏ ｇｕｔｉ（１９８７）Ｈｉｓｔ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｒ ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆ ｍｉｃｒｏｇｌ
ｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｂｅ ｃｅｒｅｂｒａｈ
ｅｍｉｓｐｂｅｒｃｓ ｏｆ ｃｂｉｃｋ ｅｍｂｒｙ
ｏｓ ａｎｄ ｃｈｉｃｋｓ．１１ｉｓｔｏｃｈｃｍ
８７：２０９−２１６Ｆｕｊｉｔａ Ｓ． （＋９８０
） ＣｙｔｏＨｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏ
ｇｙｏｆ ｎｅｕｒｏ）（ｌｉａ ａｎｄ ｍｉｃｒｏ
Ｂｌｉａ． Ｐａｔｈｏｌ Ｒｅｓ Ｐｒａｃｔ１６８
・２７１−２７８ を参照することができる。
脳損傷部の総てのマクロファージは血液原性であると主
張する著者もいる（ｌｌｉｃｋｅｙ Ｗ．Ｆ． ，Ｉｆ
Ｋｉ＋ｎｕｒａ（１９８８） Ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａ
ｒ ｍｉｃｒｏＨｌｉａ ｃｅｌｌｓ ｏｆｔｈｅ Ｃ
ＮＳ ａｒｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅ
ｄ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｎｊａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｖ
ｉｖｏ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９， ２９０−２９２
）。従来小膠細胞はほぼ直角に細かく分岐する小細胞と
して説明されている（Ｄｏｌ＋ｎａｎ Ｃ．， ｉｎ
Ｄａｖｉｓ ａｎｄＲｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｔｅｘｂｏｏ
ｋ ｏｆ ＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏＢｙ）。疾病によ
っては小膠細胞は伸張して桿状体細胞を生じる。
張する著者もいる（ｌｌｉｃｋｅｙ Ｗ．Ｆ． ，Ｉｆ
Ｋｉ＋ｎｕｒａ（１９８８） Ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａ
ｒ ｍｉｃｒｏＨｌｉａ ｃｅｌｌｓ ｏｆｔｈｅ Ｃ
ＮＳ ａｒｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅ
ｄ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｎｊａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｖ
ｉｖｏ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９， ２９０−２９２
）。従来小膠細胞はほぼ直角に細かく分岐する小細胞と
して説明されている（Ｄｏｌ＋ｎａｎ Ｃ．， ｉｎ
Ｄａｖｉｓ ａｎｄＲｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｔｅｘｂｏｏ
ｋ ｏｆ ＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏＢｙ）。疾病によ
っては小膠細胞は伸張して桿状体細胞を生じる。
脳炎の場合には、この桿状体細胞はリンパ細胞と共に小
膠細胞小結節を構或する。アルツハイマー病では老人斑
内及びその周囲に小膠細胞の顕著な増殖か認められてい
た（Ｔｅｒｒｙ Ｒ．Ｄ．（１．９８５）八Ｉｚｈｅｉ
ｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ：Ｒ．Ｌ
． Ｄａｖｉｓ ａｎｄ Ｄ．ＭＲｏｂｅｒｔｓ
ｏｎ， Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ
ｏｌｏｇｙＷｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ
，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ ｐｐ．８２４−８４１Ｔｅｒｒ
ｙ Ｒ．Ｄ． Ｗｉｓｎｅｉｕ＋ｓｋｉ Ｈ．Ｈ
．（＋９７０） Ｔｈｅｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａ
ｒｙ ｔａｎｇｌｅａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｎｉｌ
ｅ ｐｌａｑｕｅ．Ｉｎ：Ｗｏｌｓｔｅｎｈｏｌｍｅ
Ｇ．ａｎｄ Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ Ｈ．（ｅｄｓ
）Ｃｉｂａ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＳｙｍｐｏｓｉｕ
＋ｎ ｏｎ 八ｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅ
ａｓｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏ
ｎｓ）。
膠細胞小結節を構或する。アルツハイマー病では老人斑
内及びその周囲に小膠細胞の顕著な増殖か認められてい
た（Ｔｅｒｒｙ Ｒ．Ｄ．（１．９８５）八Ｉｚｈｅｉ
ｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ：Ｒ．Ｌ
． Ｄａｖｉｓ ａｎｄ Ｄ．ＭＲｏｂｅｒｔｓ
ｏｎ， Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ
ｏｌｏｇｙＷｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ
，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ ｐｐ．８２４−８４１Ｔｅｒｒ
ｙ Ｒ．Ｄ． Ｗｉｓｎｅｉｕ＋ｓｋｉ Ｈ．Ｈ
．（＋９７０） Ｔｈｅｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａ
ｒｙ ｔａｎｇｌｅａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｎｉｌ
ｅ ｐｌａｑｕｅ．Ｉｎ：Ｗｏｌｓｔｅｎｈｏｌｍｅ
Ｇ．ａｎｄ Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ Ｈ．（ｅｄｓ
）Ｃｉｂａ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＳｙｍｐｏｓｉｕ
＋ｎ ｏｎ 八ｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅ
ａｓｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏ
ｎｓ）。
小膠細胞の同定及び正常な病理学的神経系での小膠細胞
の役割の評価は特異的な染色技術の低迷か足かせとなっ
ていた。Ｄｅｌ Ｒｉｏ Ｉｌｏｒｔｅ）（ａの説明し
た銀含浸（ｓｉｌｖｅｒ ｉｍｐｒｅｇｎａｔｉｏｎ）
技術は小膠細胞たけてなく、寡突起神経膠細胞及ひある
神経膠星状細胞をも染色ずる（Ｇａｎｔｅｒ ｅｔ Ｊ
Ｊｏｌｌａｓ（１９６９）Ｈｉｓｔｏｃｈｉｍｉｅ．
Ｇａｕｔｈｉｅｒ Ｖｉｌｌａｒｓ， Ｐａｒｉｓ，
ｐｐ．１４６３−１４６６）。小膠細胞は種々の抗体
で免疫標識することかでき、ある抗体は更に循環するマ
クロファージと反応する（Ｅｓｉｒｉ Ｈ． Ｈ．，
Ｊ． Ｂｏｓｓ（１９８４）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏ
ｆ ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ＋ｎｉ
ｃｒｏｇｌｉａｌｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈ
ａｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｅｎｔｒａｌ
ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ． Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｐａ
ｔｈｏｌ ３７， １５０４５゜Ｉ５ Ｖａｚｅｕｘ Ｒ．，Ｎ．Ｂｒｏｕｓｓｅ， 八．
Ｊａｒｒｙ，Ｄ．ＨｅｎｉｎＣ．Ｍａｒｃｈｅ，Ｃ．Ｖ
ｅｄｒｅｎｎｅ，Ｊ．Ｍｉｋｏｌ，Ｈ．Ｗｏｌｆｆ，Ｃ
．Ｍｉｃｈｏｎ Ｗ．Ｒｏｚｅｎｂａｕｍ Ｊ．
Ｆ．Ｂｕｒｅａｕ ＬＭｏｎｔａｇｎｉｅｒ，
Ｈ．Ｂｒａｈｉｃ，（１９８７） 八ＩＤＳ ｓｕ
ｂａｃｕＬｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ．Ｉｄｅｎｔｉ
ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＩＩＶ−ｉｎｆｅｃｔ
ｅｄｃｅｌｌｓ．八ｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １２６，
４０３−４１．０）。しかしなからこれらの抗体は小膠
細胞に特異的ではなく、単にクリオセクション（ｃｒｙ
ｏｓｅｃｔｉｏｎ）に適用され得る。但しある抗１１Ｌ
Ａ−ＤＲ抗体はパラフィン包埋した材料て使用され得る
（Ｖａｚｅｕｘ ，前述した参考資料を参照）。小膠細
胞及びマクロファージはまたα抗キモトリプシン、リソ
チーム及ひαビ抗トリプシンに対する抗体で染色されて
いる（Ｅｓｉｒｉ、前述した参考資料を参照）。小膠細
胞起源のある反応細胞を、酸性ホスファターゼ及び非特
異的エステラーゼ用組織化学的染色により中枢神経系に
おいて示すことができる（Ｂａｎｃｒｏｆｔ Ｊ．Ｄ．
（１９７５）１１ｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｅｃｈ
ｎｉｑｕｅｓ． ２ｎｃｌ ｅｄ Ｌｏｎｄｏｎ１６ Ｂｕｔｔｅｒ＋ｕｏｒｔｂ， ｐ．２５４）。最近では
小膠細胞の形態を有する細胞の染色にＲｉｃｉｎｕｓ
ｃｏｍｍｕｎｉｓ凝集素、型−１（ＲＣ八−１）が使用
されている（Ｍａｎｎｏｊｉ Ｉｔ．， ＩｔＹｅｇｅ
ｒ， Ｌ．Ｅ． Ｂｅｃｋｅｒ（１９８６） 八
ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍａ
ｒｋｅｒ （ｌｅｃｔｉｎ ＲｉｃｉｎｕｓｃｏＬＬｌ
ｒｎｕｎｉｓ ａＨＩｕｔｉｎｉｎ−１） ｆｏｒ ｎ
ｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎｍｉｃｒｏｇＩｉａ ａｎｄ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｒｏｕｔｉｎｅｂｉｓ
ｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ． 八ｃｔａ Ｎｅｕｒｏ
ｐａｔｈｏｌ （Ｂｅｒｌ）７１，３４１−３４３）
。ラクトース部分に特有のこのレクチンを、パラフィン
包埋したホルマリンで固定した材料上で使用することが
できる。しがしなからＲＣ八｛染色は内皮細胞も染色す
るために小膠細胞に特有ではない。
の役割の評価は特異的な染色技術の低迷か足かせとなっ
ていた。Ｄｅｌ Ｒｉｏ Ｉｌｏｒｔｅ）（ａの説明し
た銀含浸（ｓｉｌｖｅｒ ｉｍｐｒｅｇｎａｔｉｏｎ）
技術は小膠細胞たけてなく、寡突起神経膠細胞及ひある
神経膠星状細胞をも染色ずる（Ｇａｎｔｅｒ ｅｔ Ｊ
Ｊｏｌｌａｓ（１９６９）Ｈｉｓｔｏｃｈｉｍｉｅ．
Ｇａｕｔｈｉｅｒ Ｖｉｌｌａｒｓ， Ｐａｒｉｓ，
ｐｐ．１４６３−１４６６）。小膠細胞は種々の抗体
で免疫標識することかでき、ある抗体は更に循環するマ
クロファージと反応する（Ｅｓｉｒｉ Ｈ． Ｈ．，
Ｊ． Ｂｏｓｓ（１９８４）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏ
ｆ ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ＋ｎｉ
ｃｒｏｇｌｉａｌｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈ
ａｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｅｎｔｒａｌ
ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ． Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｐａ
ｔｈｏｌ ３７， １５０４５゜Ｉ５ Ｖａｚｅｕｘ Ｒ．，Ｎ．Ｂｒｏｕｓｓｅ， 八．
Ｊａｒｒｙ，Ｄ．ＨｅｎｉｎＣ．Ｍａｒｃｈｅ，Ｃ．Ｖ
ｅｄｒｅｎｎｅ，Ｊ．Ｍｉｋｏｌ，Ｈ．Ｗｏｌｆｆ，Ｃ
．Ｍｉｃｈｏｎ Ｗ．Ｒｏｚｅｎｂａｕｍ Ｊ．
Ｆ．Ｂｕｒｅａｕ ＬＭｏｎｔａｇｎｉｅｒ，
Ｈ．Ｂｒａｈｉｃ，（１９８７） 八ＩＤＳ ｓｕ
ｂａｃｕＬｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ．Ｉｄｅｎｔｉ
ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＩＩＶ−ｉｎｆｅｃｔ
ｅｄｃｅｌｌｓ．八ｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １２６，
４０３−４１．０）。しかしなからこれらの抗体は小膠
細胞に特異的ではなく、単にクリオセクション（ｃｒｙ
ｏｓｅｃｔｉｏｎ）に適用され得る。但しある抗１１Ｌ
Ａ−ＤＲ抗体はパラフィン包埋した材料て使用され得る
（Ｖａｚｅｕｘ ，前述した参考資料を参照）。小膠細
胞及びマクロファージはまたα抗キモトリプシン、リソ
チーム及ひαビ抗トリプシンに対する抗体で染色されて
いる（Ｅｓｉｒｉ、前述した参考資料を参照）。小膠細
胞起源のある反応細胞を、酸性ホスファターゼ及び非特
異的エステラーゼ用組織化学的染色により中枢神経系に
おいて示すことができる（Ｂａｎｃｒｏｆｔ Ｊ．Ｄ．
（１９７５）１１ｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｅｃｈ
ｎｉｑｕｅｓ． ２ｎｃｌ ｅｄ Ｌｏｎｄｏｎ１６ Ｂｕｔｔｅｒ＋ｕｏｒｔｂ， ｐ．２５４）。最近では
小膠細胞の形態を有する細胞の染色にＲｉｃｉｎｕｓ
ｃｏｍｍｕｎｉｓ凝集素、型−１（ＲＣ八−１）が使用
されている（Ｍａｎｎｏｊｉ Ｉｔ．， ＩｔＹｅｇｅ
ｒ， Ｌ．Ｅ． Ｂｅｃｋｅｒ（１９８６） 八
ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍａ
ｒｋｅｒ （ｌｅｃｔｉｎ ＲｉｃｉｎｕｓｃｏＬＬｌ
ｒｎｕｎｉｓ ａＨＩｕｔｉｎｉｎ−１） ｆｏｒ ｎ
ｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎｍｉｃｒｏｇＩｉａ ａｎｄ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｒｏｕｔｉｎｅｂｉｓ
ｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ． 八ｃｔａ Ｎｅｕｒｏ
ｐａｔｈｏｌ （Ｂｅｒｌ）７１，３４１−３４３）
。ラクトース部分に特有のこのレクチンを、パラフィン
包埋したホルマリンで固定した材料上で使用することが
できる。しがしなからＲＣ八｛染色は内皮細胞も染色す
るために小膠細胞に特有ではない。
今日まで、小膠細胞を特異的に検出する方法、特に寡突
起神経膠細胞、神経膠星状細胞及び内皮細胞のような他
の細胞と小膠細胞とを区別する方法はなかった。
起神経膠細胞、神経膠星状細胞及び内皮細胞のような他
の細胞と小膠細胞とを区別する方法はなかった。
本発明の目的は、活性化小膠細胞の特異的な検出を可能
とするモノクローナル抗体を提供することである。
とするモノクローナル抗体を提供することである。
本発明は更に、前記モノクローナル抗体を分泌するハイ
ブリドーマを提供する。
ブリドーマを提供する。
本発明は種々の病理状態に反応する小膠細胞の亜集団（
ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）で表現される抗原を提供
する。
ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）で表現される抗原を提供
する。
本発明は活性化小膠細胞を含む脳疾患、例えば脳腫瘍、
脳感染、エイズ、アルツハイマー病のｉｎｖｉｔｒｏ検
出又は診断方法を提供する。
脳感染、エイズ、アルツハイマー病のｉｎｖｉｔｒｏ検
出又は診断方法を提供する。
本発明のモノクローナル抗体は、該モノクローナル抗体
が１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託された
ハイブリド−７ｎ°Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）
又は１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託され
たハイブリドーマｎ’１８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）
により分泌されるモノクローナル抗体に対して生じた同
遺伝子型ポリクローナル抗イディオタイプ血清と免疫複
合物を形成することを特徴とずる。
が１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託された
ハイブリド−７ｎ°Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）
又は１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託され
たハイブリドーマｎ’１８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）
により分泌されるモノクローナル抗体に対して生じた同
遺伝子型ポリクローナル抗イディオタイプ血清と免疫複
合物を形成することを特徴とずる。
本発明のモノクローナル抗体ζよ、言亥モノクローナノ
レ抗休が１９８９年７月５口にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．Ｃこ１
ｆｆ言毛さｈたハイブリドーマｎ’！−８８１．（ＡＭ
Ｃ３０ ＩｇＭ）又（よ＋９ｓ９ｔｌ三７月５「１にＣ
．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたノ＼イフ１）１・−マｎ゜
Ｉ−８８２＜ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌されるモ
ノクローナル抗体に対して生じたモノクローナノレ抗イ
テイオタイプ抗体と免疫複合物を形ｌｔ−１−ることを
１寺徴とずる。
レ抗休が１９８９年７月５口にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．Ｃこ１
ｆｆ言毛さｈたハイブリドーマｎ’！−８８１．（ＡＭ
Ｃ３０ ＩｇＭ）又（よ＋９ｓ９ｔｌ三７月５「１にＣ
．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたノ＼イフ１）１・−マｎ゜
Ｉ−８８２＜ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌されるモ
ノクローナル抗体に対して生じたモノクローナノレ抗イ
テイオタイプ抗体と免疫複合物を形ｌｔ−１−ることを
１寺徴とずる。
本発明のモノクローナル抗体（よそのイテイオタイプで
限定される。イテイオタイフ゜（．ｌｔイデイオトープ
の集合、即ち（アロタイフ゜及ひグイソタイフ゜とは対
照的に）免疫グロフリンの個１寺異ｈ勺抗原？火定基の
集合てあり、従って抗体の′゛フインカーフ゜ＩＪント
”′と見なされ得る。イデイオタイフ゜及ひ゛抗イティ
オタイフニ関しては、（！ＡＪえ（よｄｅ Ｐｒ６ｖａ
ｌ ＣＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ， ｐ．１４４
−２１９ ｉｎ Ｂａｃｈ ．Ｉ．ＦＩｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ， Ｐｕｂｌ ． レｌｉｌｅｙ ａ
ｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｕｒ Ｙｏｒｋ１９７８
ｏｒ Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ Ｊ．ＩＩ．， Ｄａ
ｖｉｃ Ｊ．ＭＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ：
ａｌｌｏｔｙｐｃｓ ａｎｄ ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ
．ｐｐ．２０５−２２０ ｉｎ Ｐａｕｌ Ｗ．
Ｅ．：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ＩｍｍｕｎｏｌｏＨ
ｙ，Ｐｕｂｌ． Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ Ｎｅｕ＋
Ｙｏｒｋ，１．９８４を参照のこと７本発明のモノク
ローナル抗体は、同遺伝子型状態のＢΔＬ Ｂ ／ ｃ
マウスにおいて、１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃｈに
寄託されたハイブリドーマｎ゜Ｉ−８８１．（ＡＭＣ３
０Ｉ．Ｍ）又は｛９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．
に寄託されたハイブリ１〜−マｎ゜Ｉ−８８２（ＡＭＣ
３０ ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナル抗体に
対して生じた抗イデイオタイプ血清と特異的に反応する
。クラス、サブクラス又はタイプの如何を問わず、他の
Ｂ八Ｌ Ｂ／ ｃモノクローナル抗体は、■９８９年７
月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマ
ｎ’１８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）又は１９８９年７
月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマ
ｎ゜Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌され
るモノクローナル抗体に対する同遺伝子型血清と反応し
得す、従って同遺伝子型抗血清のイデイオタイプ特異性
を示している。
限定される。イテイオタイフ゜（．ｌｔイデイオトープ
の集合、即ち（アロタイフ゜及ひグイソタイフ゜とは対
照的に）免疫グロフリンの個１寺異ｈ勺抗原？火定基の
集合てあり、従って抗体の′゛フインカーフ゜ＩＪント
”′と見なされ得る。イデイオタイフ゜及ひ゛抗イティ
オタイフニ関しては、（！ＡＪえ（よｄｅ Ｐｒ６ｖａ
ｌ ＣＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ， ｐ．１４４
−２１９ ｉｎ Ｂａｃｈ ．Ｉ．ＦＩｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ， Ｐｕｂｌ ． レｌｉｌｅｙ ａ
ｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｕｒ Ｙｏｒｋ１９７８
ｏｒ Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ Ｊ．ＩＩ．， Ｄａ
ｖｉｃ Ｊ．ＭＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ：
ａｌｌｏｔｙｐｃｓ ａｎｄ ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ
．ｐｐ．２０５−２２０ ｉｎ Ｐａｕｌ Ｗ．
Ｅ．：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ＩｍｍｕｎｏｌｏＨ
ｙ，Ｐｕｂｌ． Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ Ｎｅｕ＋
Ｙｏｒｋ，１．９８４を参照のこと７本発明のモノク
ローナル抗体は、同遺伝子型状態のＢΔＬ Ｂ ／ ｃ
マウスにおいて、１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃｈに
寄託されたハイブリドーマｎ゜Ｉ−８８１．（ＡＭＣ３
０Ｉ．Ｍ）又は｛９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．
に寄託されたハイブリ１〜−マｎ゜Ｉ−８８２（ＡＭＣ
３０ ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナル抗体に
対して生じた抗イデイオタイプ血清と特異的に反応する
。クラス、サブクラス又はタイプの如何を問わず、他の
Ｂ八Ｌ Ｂ／ ｃモノクローナル抗体は、■９８９年７
月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマ
ｎ’１８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）又は１９８９年７
月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマ
ｎ゜Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌され
るモノクローナル抗体に対する同遺伝子型血清と反応し
得す、従って同遺伝子型抗血清のイデイオタイプ特異性
を示している。
１９
本発明のモノク口ーナル抗体に対して生した同遺伝子型
ポリクローナル抗イテイオタイプ血清は、同遺伝子型の
、即ち遺伝学的に同一の動物で生しる本発明のモノクロ
ーナル抗体を有する動物を免疫感作ずることによＹ）得
られる。本発明のモノクローナル抗体に対して生した同
遺伝子型ポリクローナル血清（』抗イテイオタイプ抗体
以外の抗免疫クロフリン抗体を含んでいない。
ポリクローナル抗イテイオタイプ血清は、同遺伝子型の
、即ち遺伝学的に同一の動物で生しる本発明のモノクロ
ーナル抗体を有する動物を免疫感作ずることによＹ）得
られる。本発明のモノクローナル抗体に対して生した同
遺伝子型ポリクローナル血清（』抗イテイオタイプ抗体
以外の抗免疫クロフリン抗体を含んでいない。
本発明のモノクローナル抗体に対して生した同遺伝子型
ポリクローナル抗イデイオタイプ血清によりモノクロー
ナル抗体を認識することができる。
ポリクローナル抗イデイオタイプ血清によりモノクロー
ナル抗体を認識することができる。
何故ならば、特に該間遠伝子型ポリクローナル抗イティ
オタイフ゜血清はパフリックイテイオトーフ゜を選択せ
ず、またモノクローナル抗体のイテイオトープをプライ
ヘートずる（ｐｒｉｖａｔｅ）ために抗体価の高い抗イ
ディオタイプ抗体を含んでいるからてあり、また特に該
同遺伝子型ポリクローナル抗イディオタイプ血清かイテ
イオ｝ヘープ全体を含み佳つそれを規定しているからで
ある。
オタイフ゜血清はパフリックイテイオトーフ゜を選択せ
ず、またモノクローナル抗体のイテイオトープをプライ
ヘートずる（ｐｒｉｖａｔｅ）ために抗体価の高い抗イ
ディオタイプ抗体を含んでいるからてあり、また特に該
同遺伝子型ポリクローナル抗イディオタイプ血清かイテ
イオ｝ヘープ全体を含み佳つそれを規定しているからで
ある。
モノクローナル抗体への同遺伝子型抗イテイオタイプ血
清の製造方法については今までに説明されている（Ｇｈ
ｅｕｅｎｓ Ｊ．， ＭｃＦａｒｌｉｎ Ｄ．Ｅ．，
ＲａｍｍｏｈａｎＫ．Ｗ． Ｂｅｌｌｉｎｉ ＷＪ．
：Ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔ ｊ．
ｈｅ ｈｅｍａ８Ｈｌｕｔｉｎｉｎ ｏｆ ｍｅａｓｌ
ｅｓ ｖ＋ｒｕｓＩｎｆ． Ｉｍｍｕｎ． ３４：Ｚ（
ＩＱ−２０７，１９８１； Ｂｏｎａ Ｃ．， ｌｌｏ
ｏＢｈｅＲ． Ｃａｚｅｎａｖｅ Ｐ．Ａ．，
Ｌｅ８ｕｅｒｎ Ｃ．， Ｐａｕｌ Ｗ．Ｅ．
：Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｒ＋４ｕｌａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓ＋ｏｎｏｆ ｉｄｉｏ
Ｌｙｐｅ ＩＩ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ａｎｔｉ
−ＭＯＰＣ４６０ｉｄｉｏｔｙｐｅ ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ｉｎｃｒＣａｓｅｓ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ
ａｎｔｉ−ｔｒｉｎｉｔｒｏ−ｐｂｅｎｙｌ−ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ ｂｅａｒｉｎｇ ｔｈｅ４６０ ｉｄｉ
ｏｔｙｐｅｓ． Ｊ．Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １４９：８
１５−８２３．１９７９）．モノクローナル抗イデイオ
タイプ抗体の製造方法については十分に説明されている
（Ｇｈｅｕｅｎｓ Ｊ．ＭａｃＦａｒｌｉｎ Ｄ．Ｅ．
： Ｕｓｅ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔ＋ｉ
ｄｉｏｔｙｐｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ Ｐ
３−Ｘ６３八ｇＢ ＋ｎｙｅｌｏｍａｐｒｏｔｅｉｎ
ｆｏｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｈｙｂｒｉ
ｄｏ＋ｎａ ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｅｕｒ． Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：７０１−７０３ １９８２）
。
清の製造方法については今までに説明されている（Ｇｈ
ｅｕｅｎｓ Ｊ．， ＭｃＦａｒｌｉｎ Ｄ．Ｅ．，
ＲａｍｍｏｈａｎＫ．Ｗ． Ｂｅｌｌｉｎｉ ＷＪ．
：Ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔ ｊ．
ｈｅ ｈｅｍａ８Ｈｌｕｔｉｎｉｎ ｏｆ ｍｅａｓｌ
ｅｓ ｖ＋ｒｕｓＩｎｆ． Ｉｍｍｕｎ． ３４：Ｚ（
ＩＱ−２０７，１９８１； Ｂｏｎａ Ｃ．， ｌｌｏ
ｏＢｈｅＲ． Ｃａｚｅｎａｖｅ Ｐ．Ａ．，
Ｌｅ８ｕｅｒｎ Ｃ．， Ｐａｕｌ Ｗ．Ｅ．
：Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｒ＋４ｕｌａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓ＋ｏｎｏｆ ｉｄｉｏ
Ｌｙｐｅ ＩＩ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ａｎｔｉ
−ＭＯＰＣ４６０ｉｄｉｏｔｙｐｅ ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ｉｎｃｒＣａｓｅｓ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ
ａｎｔｉ−ｔｒｉｎｉｔｒｏ−ｐｂｅｎｙｌ−ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ ｂｅａｒｉｎｇ ｔｈｅ４６０ ｉｄｉ
ｏｔｙｐｅｓ． Ｊ．Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １４９：８
１５−８２３．１９７９）．モノクローナル抗イデイオ
タイプ抗体の製造方法については十分に説明されている
（Ｇｈｅｕｅｎｓ Ｊ．ＭａｃＦａｒｌｉｎ Ｄ．Ｅ．
： Ｕｓｅ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔ＋ｉ
ｄｉｏｔｙｐｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ Ｐ
３−Ｘ６３八ｇＢ ＋ｎｙｅｌｏｍａｐｒｏｔｅｉｎ
ｆｏｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｈｙｂｒｉ
ｄｏ＋ｎａ ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｅｕｒ． Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：７０１−７０３ １９８２）
。
本発明のモノクローナル抗体を以下の特徴を組み合わせ
て定義する。
て定義する。
モノクローナル抗体は中枢神経系の活性化小膠細胞に属
し且つ超音波処理したＮＦＴ調製物から解離した（ｒｅ
ｌｅａｓｅｄ＞抗原の非リン酸化構造エピトープと免疫
複合物を形成する。ＮＦＴ調製物自体はアルツハイマー
病患者から得た大脳皮質から分離したち・のである。
し且つ超音波処理したＮＦＴ調製物から解離した（ｒｅ
ｌｅａｓｅｄ＞抗原の非リン酸化構造エピトープと免疫
複合物を形成する。ＮＦＴ調製物自体はアルツハイマー
病患者から得た大脳皮質から分離したち・のである。
モノクローナル抗体は中枢神経系の壊死区域付近の組織
球及びマクロファージと免疫複合物を形成する。
球及びマクロファージと免疫複合物を形成する。
゛構造エピトープ″という用語は抗原のコンホーメーシ
ョンではなく、一次構造により限定されるエピトープを
意味する。換言するならばホルマリン、グルタルアルデ
ヒド又はバラホルムアルデヒ２３ ドによる抗原の固定のような抗原のコンホーメーション
を変える方法で抗原を処理した後、またイオン系及び非
イオン系洗剤により抗原調製物を変質させた後もこのエ
ピトープは保持される。
ョンではなく、一次構造により限定されるエピトープを
意味する。換言するならばホルマリン、グルタルアルデ
ヒド又はバラホルムアルデヒ２３ ドによる抗原の固定のような抗原のコンホーメーション
を変える方法で抗原を処理した後、またイオン系及び非
イオン系洗剤により抗原調製物を変質させた後もこのエ
ピトープは保持される。
゛非リン酸化エピトープ″という用話は、本発明のモノ
クローナル抗体が結合する抗原のエピトープが以下に示
す試験により測定したときにリン酸化されていないこと
を意味する。該方法は（Ｉｑｂａｌ Ｋ，Ｚａｉｃｌ
ｉ Ｔ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｃｌ等、八ｌｚｈｅｉ
ｍｅｒｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａ＋ｎｅ
ｎｔｓ： ｂｕｌｋ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｏｌｕｂ
ｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐ
ｏｓｉｔｉｏｎ． 八ｅｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈ．
１９８４； ６２：１６７−１７７）に記載の如く調製
したＮＦＴに富む両分を出発材料とし、前述した如くニ
トロセルロースにイムノプロットし（ｉｍｍｕｎｏｂｌ
ｏｔｔｅｄ）、０．ＯＩＭフエニル−メチルースルホニ
ルーフルオリドを含む１００ｍ１０．１Ｍ トリス緩衝
液（ｐｌ＋８．０）中てＩ ＩＵのタイプＩＩＩ Ｅ．
Ｃｏｌｉアルカリ性ホスファターゼを使用して一晩中３
７℃で処理し、２４ 本発明のモノクローナル抗体の１つをＮＦＴに適用して
、ＮＦＴとモノクローナル抗体との免疫複合物を形成す
ることからなる。
クローナル抗体が結合する抗原のエピトープが以下に示
す試験により測定したときにリン酸化されていないこと
を意味する。該方法は（Ｉｑｂａｌ Ｋ，Ｚａｉｃｌ
ｉ Ｔ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｃｌ等、八ｌｚｈｅｉ
ｍｅｒｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａ＋ｎｅ
ｎｔｓ： ｂｕｌｋ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｏｌｕｂ
ｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐ
ｏｓｉｔｉｏｎ． 八ｅｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈ．
１９８４； ６２：１６７−１７７）に記載の如く調製
したＮＦＴに富む両分を出発材料とし、前述した如くニ
トロセルロースにイムノプロットし（ｉｍｍｕｎｏｂｌ
ｏｔｔｅｄ）、０．ＯＩＭフエニル−メチルースルホニ
ルーフルオリドを含む１００ｍ１０．１Ｍ トリス緩衝
液（ｐｌ＋８．０）中てＩ ＩＵのタイプＩＩＩ Ｅ．
Ｃｏｌｉアルカリ性ホスファターゼを使用して一晩中３
７℃で処理し、２４ 本発明のモノクローナル抗体の１つをＮＦＴに適用して
、ＮＦＴとモノクローナル抗体との免疫複合物を形成す
ることからなる。
′゛活性化小膠細胞′゛という用語は、その周辺におい
て病理学的プロセスの影響下で゛静止”状態から゛活性
″状態に分化した小膠細胞を意味する。この′゛静止″
状態から゛活性”′状態へのトランジションを含む細胞
生物学的プロセスの正確な特徴についてはまだ明確にさ
れていないので、現時点では“活性化小膠細胞”′とい
う用語は純粋に取り扱い上の（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ
）定義である。
て病理学的プロセスの影響下で゛静止”状態から゛活性
″状態に分化した小膠細胞を意味する。この′゛静止″
状態から゛活性”′状態へのトランジションを含む細胞
生物学的プロセスの正確な特徴についてはまだ明確にさ
れていないので、現時点では“活性化小膠細胞”′とい
う用語は純粋に取り扱い上の（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ
）定義である。
゛′活性化小膠細胞に属する抗原″という用語は、中枢
神経系の病理学的プロセスに関連する小膠細胞又は全身
性病理学的プロセスに関係する小膠細胞で表現されるが
、正常な中枢神経系の小膠細胞では表現されない抗原を
意味する。
神経系の病理学的プロセスに関連する小膠細胞又は全身
性病理学的プロセスに関係する小膠細胞で表現されるが
、正常な中枢神経系の小膠細胞では表現されない抗原を
意味する。
“免疫複合物を形成する″′という用語は、本発明のモ
ノクローナル抗体が以下の技術を使用して以下に記載す
るいずれかの条件下で前述した抗原と結合することを意
味する。
ノクローナル抗体が以下の技術を使用して以下に記載す
るいずれかの条件下で前述した抗原と結合することを意
味する。
゛′″″′ ” 査：
手術又は死体解剖で得た脳組織試料を４％のホルマリン
又はブアン固定液に浸漬して固定し、ノ＜ラフィンに包
埋した。４ｌ厚さの切片を調製した。
又はブアン固定液に浸漬して固定し、ノ＜ラフィンに包
埋した。４ｌ厚さの切片を調製した。
アビジンビオチニル化ベルオキシダーゼ複合物技術（ｔ
ｌｓｕ ＳＭ， Ｒａｉｎｅ Ｌ， Ｆａｎｇｅｒ １
１． Ｕｓｅ ｏｆａｖｉｄｉｎｂｉｏｔｉｎ ｃｏ
ｍｐｌｅｘ （ＡＢＣ） ｉｎｉｍｍｕｎｏｐｅｒ
ｏｘｙｄａｓｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． Ｊ． Ｉｌ
ｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ． １９８１；
２９：５７７−５８０）又は可溶性ベルオキシダーゼ抗
ベルオキシダーゼ複合物技術（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ
Ｌ八， Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ （３ｒｄｅｄ．）． Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ， １９８６）で本発明のモノクローナル抗体を使
用した。
ｌｓｕ ＳＭ， Ｒａｉｎｅ Ｌ， Ｆａｎｇｅｒ １
１． Ｕｓｅ ｏｆａｖｉｄｉｎｂｉｏｔｉｎ ｃｏ
ｍｐｌｅｘ （ＡＢＣ） ｉｎｉｍｍｕｎｏｐｅｒ
ｏｘｙｄａｓｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． Ｊ． Ｉｌ
ｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ． １９８１；
２９：５７７−５８０）又は可溶性ベルオキシダーゼ抗
ベルオキシダーゼ複合物技術（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ
Ｌ八， Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ （３ｒｄｅｄ．）． Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ， １９８６）で本発明のモノクローナル抗体を使
用した。
ジアミノベンジジンをクロモゲンとして使用した。
の 査：
？術又は死体解剖で得た脳組織試料を、包埋せずに６０
ｍｍの厚さに切り収る前にブアン固定液又は１０％緩衝
ホルマリンで固定した（Ｖｉｂｒａｔｏｍｅ）。
ｍｍの厚さに切り収る前にブアン固定液又は１０％緩衝
ホルマリンで固定した（Ｖｉｂｒａｔｏｍｅ）。
（Ｐｅｒｒｙ Ｇ， Ｍｕｌｖｉｈｉｌｌ Ｐ． Ｍａ
ｎｅｔｔｏ Ｖ等、Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ 八ｌｚｈｅ
ｉｍｃｒｓｔｒａｉ）（ｈｔ ｆｉｌａ＋ｎｅｎｔｓ．
Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． １９８７７：３７３６：
３７３８）に記載し／こ如く、この切片を間接免疫金法
（ｉｍｍｕｎｏＨｏｌｄ ｌＩｌｅｔｈｏｄ）て免疫染
色し、固定し、包埋し、電子顕微鏡検査用に切り取った
。
ｎｅｔｔｏ Ｖ等、Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ 八ｌｚｈｅ
ｉｍｃｒｓｔｒａｉ）（ｈｔ ｆｉｌａ＋ｎｅｎｔｓ．
Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． １９８７７：３７３６：
３７３８）に記載し／こ如く、この切片を間接免疫金法
（ｉｍｍｕｎｏＨｏｌｄ ｌＩｌｅｔｈｏｄ）て免疫染
色し、固定し、包埋し、電子顕微鏡検査用に切り取った
。
ＬＺさ Ｚ−ｚ不■−ｐ−−ツ−／ｔン−イ−−冫′
＆’ ｕ辷−．（Ｉｑｂａｌ Ｋ，Ｚａｉｄｉ １’
， Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＣＨ等、八ｌｚｈｅｉｍｅｒ
ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａ＋ｎｃ
ｎｔｓ： ｂｕｌｋｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｓｏｌｕ
ｌ＋ｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｏｓ
ｉｌ．ｉｏｎ八ｃｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈ．１９８４；
６２：１６７１７７）に記載の如く調製したＰ ＩＩ
Ｐに富む両分を超音波処理し、ＳＤＳ−ポリアクリルア
ミＩ〜電気泳動及ひイｊ＼ノフＩコッ１〜の３式料とし
てｆ吏用した。１２％のゲル＋．において還元条件１゛
てＳＤＳ−ポリアクリルアミ２７ ド電気液動を実施し／コ（１、ａｅｍｍｌｉ ＵＫ．
Ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ ｄｕｒｉＢ ｔｈｅ ａｓｓｅｍ
ｂｌｙ ｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａＢｅ Ｔ４．
Ｎａｔｕｒｅ １９７０；２２７：６８０−６８５）
。
＆’ ｕ辷−．（Ｉｑｂａｌ Ｋ，Ｚａｉｄｉ １’
， Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＣＨ等、八ｌｚｈｅｉｍｅｒ
ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａ＋ｎｃ
ｎｔｓ： ｂｕｌｋｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｓｏｌｕ
ｌ＋ｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｏｓ
ｉｌ．ｉｏｎ八ｃｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈ．１９８４；
６２：１６７１７７）に記載の如く調製したＰ ＩＩ
Ｐに富む両分を超音波処理し、ＳＤＳ−ポリアクリルア
ミＩ〜電気泳動及ひイｊ＼ノフＩコッ１〜の３式料とし
てｆ吏用した。１２％のゲル＋．において還元条件１゛
てＳＤＳ−ポリアクリルアミ２７ ド電気液動を実施し／コ（１、ａｅｍｍｌｉ ＵＫ．
Ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ ｄｕｒｉＢ ｔｈｅ ａｓｓｅｍ
ｂｌｙ ｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａＢｅ Ｔ４．
Ｎａｔｕｒｅ １９７０；２２７：６８０−６８５）
。
電気泳動後にタンパク質を固定して、クーマシーブリリ
アンＩ・フルーで染色するか又は二Ｉ〜ロセルロース（
Ｉｌｙｂｏｎｄ−Ｃ，八ｍ ｅ ｒ ｓ ｈ ａｍ）若
しくはＩｍｍｏｂｉｌｏｎフィルター（Ｍｉ Ｉ ｌ
ｉｐｏｒｃ）に移した（Ｔｏｕ＋ｂｉｎ ＩＩＳｔａｅ
ｈｅｌｉｎ Ｔ， Ｇｏｒｄｏｎ Ｊ． Ｅｌｅｃｔｒ
ｏｐｈｏｒｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｐｒｏｔ
．ｅｉｎｓ ｆｒｏ１ｎｐｏｌｙａｃｒｙｌａｔｎｉｄ
ｅｇｅｌｓ ｔｏ ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｓ
ｈｅｅｔｓ： ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ａｎｄｓｏ１ｎｅ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ． Ｐｒｏｃ． Ｎ
ａｉｌ． 八ｃａｄ． Ｓｃｉ．ＬＩＳ八１９７９
；７６：４３５０−４３５４）。移した後に０．０５％
（ｖ／ｖ）のＴｕ＋ｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ（Ｔｕｅ
ｅｎ−ＰＩＩＳ）にフィルターをあらかしめ浸漬し、次
いで５％（ｕ＋／ｖ）のスキｌ＼ミルクと５％（ｖ／ｖ
）の正常なヤキの血清とを含むＴｕｅｃｎＰＢＳ（フロ
ッキンクＭＷｆ液〉で１時間インキュへーＩ・した。次
いて、ブロッキング緩衝液で適切に希釈した−次抗体て
フィルターを−晩中４℃で処理し２８ た。次にフィルターをＴｕ＋ｅｅｎ−ＰＢＳて３度洗浄
し、フロッＡ−ンク緩街液て１／２５０に希釈したヒオ
チニル化したヤキの抗マウスＩｇＭ（Ａｍｅｒｓｈａｍ
）て１時間半室温で処理した。Ｔｕ＋ｅｅｎ−ＰＢＳて
３度洗浄した後に、フロッキンク緩衝液でｌ．／２５０
に希釈したス１・レプ１〜アヒジン−ヒオチニル化した
ワザヒタイコンのベルオキシクーセ複合物くΔｍ ｅ
ｒ ｓ ｈ ａ ｍ ）を使用して室温で｛時間半処理
した。その後フィルターをＴｗｅｅｎｒ’ｒ＋ｓて３度
、ＰＩＩＳて］−度洗浄した。次いてバッククラウン１
〜染色か生じるまで、０．０５％（＋１／ｖ）のジア、
ミノヘンジシンとＯ．Ｏ］．９≦（ｖ／ｖ）の過酸化水
素とを含むＰＢＳでフィルターをインキュへ−１・シた
。
アンＩ・フルーで染色するか又は二Ｉ〜ロセルロース（
Ｉｌｙｂｏｎｄ−Ｃ，八ｍ ｅ ｒ ｓ ｈ ａｍ）若
しくはＩｍｍｏｂｉｌｏｎフィルター（Ｍｉ Ｉ ｌ
ｉｐｏｒｃ）に移した（Ｔｏｕ＋ｂｉｎ ＩＩＳｔａｅ
ｈｅｌｉｎ Ｔ， Ｇｏｒｄｏｎ Ｊ． Ｅｌｅｃｔｒ
ｏｐｈｏｒｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｐｒｏｔ
．ｅｉｎｓ ｆｒｏ１ｎｐｏｌｙａｃｒｙｌａｔｎｉｄ
ｅｇｅｌｓ ｔｏ ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｓ
ｈｅｅｔｓ： ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ａｎｄｓｏ１ｎｅ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ． Ｐｒｏｃ． Ｎ
ａｉｌ． 八ｃａｄ． Ｓｃｉ．ＬＩＳ八１９７９
；７６：４３５０−４３５４）。移した後に０．０５％
（ｖ／ｖ）のＴｕ＋ｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ（Ｔｕｅ
ｅｎ−ＰＩＩＳ）にフィルターをあらかしめ浸漬し、次
いで５％（ｕ＋／ｖ）のスキｌ＼ミルクと５％（ｖ／ｖ
）の正常なヤキの血清とを含むＴｕｅｃｎＰＢＳ（フロ
ッキンクＭＷｆ液〉で１時間インキュへーＩ・した。次
いて、ブロッキング緩衝液で適切に希釈した−次抗体て
フィルターを−晩中４℃で処理し２８ た。次にフィルターをＴｕ＋ｅｅｎ−ＰＢＳて３度洗浄
し、フロッＡ−ンク緩街液て１／２５０に希釈したヒオ
チニル化したヤキの抗マウスＩｇＭ（Ａｍｅｒｓｈａｍ
）て１時間半室温で処理した。Ｔｕ＋ｅｅｎ−ＰＢＳて
３度洗浄した後に、フロッキンク緩衝液でｌ．／２５０
に希釈したス１・レプ１〜アヒジン−ヒオチニル化した
ワザヒタイコンのベルオキシクーセ複合物くΔｍ ｅ
ｒ ｓ ｈ ａ ｍ ）を使用して室温で｛時間半処理
した。その後フィルターをＴｗｅｅｎｒ’ｒ＋ｓて３度
、ＰＩＩＳて］−度洗浄した。次いてバッククラウン１
〜染色か生じるまで、０．０５％（＋１／ｖ）のジア、
ミノヘンジシンとＯ．Ｏ］．９≦（ｖ／ｖ）の過酸化水
素とを含むＰＢＳでフィルターをインキュへ−１・シた
。
モノクローナル抗体と抗原との免疫複合物の形成か上で
詳述した条件に限定されず、抗体抗原結合の免疫化学的
特性を守る総ての技術により同様に免疫複合物か形成さ
れることは明白である。
詳述した条件に限定されず、抗体抗原結合の免疫化学的
特性を守る総ての技術により同様に免疫複合物か形成さ
れることは明白である。
″組織球″′及ひ“中枢神経系のマクロファージ゛はＧ
ｒｃｅｎｆｉｅｌｄの神経病理学及ひ神経病理学に関す
る従来の他の成書で定義されている。
ｒｃｅｎｆｉｅｌｄの神経病理学及ひ神経病理学に関す
る従来の他の成書で定義されている。
本発明のモノクローナル抗体は、該モノク口ーナル抗体
が１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託された
ハイブリドーマｎ゜Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ＞
又は１９８９年７月５口にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託され
たハイフリ１〜−マｎ’１８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ
）により分泌されるモノクローナル抗体に対して生じた
同遺伝子型ポリクローナル抗イディオタイプ血清、特に
モノクローナル抗イディオタイプ抗体と免疫複合物を形
成し、且つ以下の特徴を兼備することを特徴とする。
が１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託された
ハイブリドーマｎ゜Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ＞
又は１９８９年７月５口にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託され
たハイフリ１〜−マｎ’１８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ
）により分泌されるモノクローナル抗体に対して生じた
同遺伝子型ポリクローナル抗イディオタイプ血清、特に
モノクローナル抗イディオタイプ抗体と免疫複合物を形
成し、且つ以下の特徴を兼備することを特徴とする。
モノクローナル抗体は、中枢神経系の活性化小膠細胞に
属し且つ超音波処理したＮＦＴ調製物から解離した抗原
の非リン酸化構造エピ１ヘープと免疫複合物を形成する
。ＮＦＴｍ製物自体はアルツハイマー病患者から得た大
脳皮質から分離したものである。
属し且つ超音波処理したＮＦＴ調製物から解離した抗原
の非リン酸化構造エピ１ヘープと免疫複合物を形成する
。ＮＦＴｍ製物自体はアルツハイマー病患者から得た大
脳皮質から分離したものである。
モノクローナル抗体は中枢神経系の壊死区域イ＼１近の
組織球及びマクロファージと免疫複合物を形成ずる。
組織球及びマクロファージと免疫複合物を形成ずる。
特に好ましいモノクローナル抗体はＩｇＭクラスのＫａ
ｐｐａタイプであるか又はＩｇＧクラスのＫａｐｐａタ
イプである。
ｐｐａタイプであるか又はＩｇＧクラスのＫａｐｐａタ
イプである。
本発明のモノクローナル抗体は以下の特性を有すること
が好ましい。
が好ましい。
モノクローナル抗体は病理学的状態の中枢神経系の静止
小膠細胞と免疫学的に結合しない。
小膠細胞と免疫学的に結合しない。
モノクローナル抗体は中枢神経系以外の器官の静止マク
ロファージと免疫学的に結合しない。
ロファージと免疫学的に結合しない。
モノクローナル抗体は神経原線維のからまり部分（ｎｅ
ｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ｔａｂｌｅｓ）又はアミ
ロイドと免疫学的に結合しない。
ｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ｔａｂｌｅｓ）又はアミ
ロイドと免疫学的に結合しない。
モノクローナル抗体は内皮細胞又は神経膠星状細胞と免
疫学的に結合しないが、ＲＣ＾−１は同一条件下で該神
経膠星状細胞と免疫複合物を形成する。
疫学的に結合しないが、ＲＣ＾−１は同一条件下で該神
経膠星状細胞と免疫複合物を形成する。
モノクローナル抗体は前述した実験条件下では、健康な
中枢神経系の小膠細胞と免疫学的に結合し３１ ない。
中枢神経系の小膠細胞と免疫学的に結合し３１ ない。
゛′中枢神経系の静止小膠細胞゛及び″神経膠星状細胞
′゜という用語は例えばＧｒｅｅｎｆ ｉｅｌｄの神経
病理学又は神経病理学及び神経学に関する他の従来の戒
書で定義されている。“病理学的状態″という用語は中
枢神経系を冒してその代謝及び／又は構造を変化させる
疾患を意味する。″神経原線維のからまり部分″及び′
゛アミロイド“′という用語は、Ｓｅｌｋｏｅ ＤＪ
． 八Ｉｔｅｒｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐ
ｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎｐｌａｑｕｅｓ ａｎｄ ｔａ
ｎｇｌｅｓ： ｕ＋ｈａｔ ｄｏ ｔｈｅｙ ｔｅｌｌ
ｕｓａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏ
ｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅＮ
ｅｕｒｏｂｉｏｌ． Ａｇｉｎｇ １９８６；７：４２
５−４３２で定義されている。ＲＣ八Ｉは内皮細胞を識
別するレクチンである（Ｍａｎｎｏｊｉ，Ｈ．， Ｈ．
Ｙ＋４ｅｒ． Ｌ．Ｅ． Ｂｅｃｋｅｒ （１９８６
）Ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｉｓｔｏｃｈｅ＃ｌｉｃａ
ｌ ｍａｒｋｅｒ （ＩｅｃｔｉｎＲｉｃｉｎｕｓ ｃ
ｏｍｍｕｎｉｓ ａＢｌｕｔｉｎｉｎ−１） ｆｏｒ
ｎｏｒｍａｌｈｕｍａｎ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ａｎｄ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｒｏｕｔｉｎｅｈｉ
ｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、 八ｃｔａ Ｎｅｕｒｏ
ｐａｔｈｏｌ （Ｂｅｒｌ） ７１，３２ ３４１−３４３＞。
′゜という用語は例えばＧｒｅｅｎｆ ｉｅｌｄの神経
病理学又は神経病理学及び神経学に関する他の従来の戒
書で定義されている。“病理学的状態″という用語は中
枢神経系を冒してその代謝及び／又は構造を変化させる
疾患を意味する。″神経原線維のからまり部分″及び′
゛アミロイド“′という用語は、Ｓｅｌｋｏｅ ＤＪ
． 八Ｉｔｅｒｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐ
ｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎｐｌａｑｕｅｓ ａｎｄ ｔａ
ｎｇｌｅｓ： ｕ＋ｈａｔ ｄｏ ｔｈｅｙ ｔｅｌｌ
ｕｓａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏ
ｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅＮ
ｅｕｒｏｂｉｏｌ． Ａｇｉｎｇ １９８６；７：４２
５−４３２で定義されている。ＲＣ八Ｉは内皮細胞を識
別するレクチンである（Ｍａｎｎｏｊｉ，Ｈ．， Ｈ．
Ｙ＋４ｅｒ． Ｌ．Ｅ． Ｂｅｃｋｅｒ （１９８６
）Ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｉｓｔｏｃｈｅ＃ｌｉｃａ
ｌ ｍａｒｋｅｒ （ＩｅｃｔｉｎＲｉｃｉｎｕｓ ｃ
ｏｍｍｕｎｉｓ ａＢｌｕｔｉｎｉｎ−１） ｆｏｒ
ｎｏｒｍａｌｈｕｍａｎ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ａｎｄ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｒｏｕｔｉｎｅｈｉ
ｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、 八ｃｔａ Ｎｅｕｒｏ
ｐａｔｈｏｌ （Ｂｅｒｌ） ７１，３２ ３４１−３４３＞。
本発明のモノクローナル抗体は正常な脳の小膠細胞と免
疫学的に結合しないことが好ましい。モノクローナル抗
体は疾病下の脳の正常部分の正常な小膠細胞と免疫学的
に結合しない。モノクローナル抗体は疾病下の脳の異常
部分の′゛活性化した″小膠細胞と免疫学的に結合する
。
疫学的に結合しないことが好ましい。モノクローナル抗
体は疾病下の脳の正常部分の正常な小膠細胞と免疫学的
に結合しない。モノクローナル抗体は疾病下の脳の異常
部分の′゛活性化した″小膠細胞と免疫学的に結合する
。
本発明の好ましいモノクローナル抗体は更に以下の特徴
を有する。
を有する。
モノクローナル抗体はエイズの特徴である多核巨大細胞
と免疫学的に結合する。
と免疫学的に結合する。
モノクローナル抗体は神経梅毒患者の脳から採取した桿
状体細胞と免疫学的に結合する。
状体細胞と免疫学的に結合する。
モノクローナル抗体はピック病、筋萎縮性側索硬化症又
はグアムのパーキンソン痴呆症候群の患者の脳から採取
した細胞と免疫学的に結合する。
はグアムのパーキンソン痴呆症候群の患者の脳から採取
した細胞と免疫学的に結合する。
モノクローナル抗体は悪性大脳組織球症の場合の組織球
と免疫学的に結合する。
と免疫学的に結合する。
゛結合する″という用語は、抗体が前述した条件下て前
記抗原と免疫学的に複合物を形成することを意味してい
る。
記抗原と免疫学的に複合物を形成することを意味してい
る。
″多核巨大″細胞はＶａｚｅｕｘ Ｒ．， Ｎ． Ｂｒ
ｏｕｓｓｅ，八Ｊａｒｒｙ， Ｄ． Ｈｅｎｉｎ， Ｃ
． Ｍａｒｃｈｅ， Ｃ． Ｖｅｄｒｅｎｎｅ， Ｊ．
Ｍｉｋｏｌ， Ｈ． Ｗｏｌｆｆ， Ｃ． Ｍｉｃｈｏ
ｎ， Ｗ． Ｒｏｚｅｎｂａｕｍ， Ｊ．Ｆ． Ｂｕｒ
ｅａｕ， Ｌ． Ｍｏｎｔａ８ｎｉｅｒ， Ｈ． Ｂｒ
ａｈｉｃ，（１９８７）八ＩＤＳ ｓｕｂａｃｕｔｅ
ｅｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ｏｆ｝ＩＩＶ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃ
ｅｌｌｓ． 八ｍ Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ １２
６ ４０３４１０．に定義されている。′゛神経梅
毒患者の脳から採取した桿状体細胞′”、“ピック病患
者の脳から採取した細胞゜′、゛′筋萎縮症患者の脳か
ら採取した細胞′゛、″グアムのパーキンソン痴呆症候
群に冒された患者から採取した細胞″及び′゛悪性大脳
組織球症の場合の組織球″はＣｒｅｅｎｆ ｉｅｌｄの
神経病理学テキスト、Ｄａｖｉｓ及びＲｏｂｅｒｔｓｏ
ｎの神経病理学テキスト並びに神経病理学及び神経学に
関ずる他の従来の成書て定義されている。
ｏｕｓｓｅ，八Ｊａｒｒｙ， Ｄ． Ｈｅｎｉｎ， Ｃ
． Ｍａｒｃｈｅ， Ｃ． Ｖｅｄｒｅｎｎｅ， Ｊ．
Ｍｉｋｏｌ， Ｈ． Ｗｏｌｆｆ， Ｃ． Ｍｉｃｈｏ
ｎ， Ｗ． Ｒｏｚｅｎｂａｕｍ， Ｊ．Ｆ． Ｂｕｒ
ｅａｕ， Ｌ． Ｍｏｎｔａ８ｎｉｅｒ， Ｈ． Ｂｒ
ａｈｉｃ，（１９８７）八ＩＤＳ ｓｕｂａｃｕｔｅ
ｅｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ｏｆ｝ＩＩＶ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃ
ｅｌｌｓ． 八ｍ Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ １２
６ ４０３４１０．に定義されている。′゛神経梅
毒患者の脳から採取した桿状体細胞′”、“ピック病患
者の脳から採取した細胞゜′、゛′筋萎縮症患者の脳か
ら採取した細胞′゛、″グアムのパーキンソン痴呆症候
群に冒された患者から採取した細胞″及び′゛悪性大脳
組織球症の場合の組織球″はＣｒｅｅｎｆ ｉｅｌｄの
神経病理学テキスト、Ｄａｖｉｓ及びＲｏｂｅｒｔｓｏ
ｎの神経病理学テキスト並びに神経病理学及び神経学に
関ずる他の従来の成書て定義されている。
本発明の好ましいモノクローナル抗体は１９８９年７月
５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマＩ
〕ｒ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）ニより分泌サれる
。
５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマＩ
〕ｒ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）ニより分泌サれる
。
本発明の好ましいモノクローナル抗体は■９８９年７月
５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハ７イフリドーマ
ｎＩ−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌される
。
５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハ７イフリドーマ
ｎＩ−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌される
。
本発明は更に、超音波処理したＮＦＴ調製物から解離し
た抗原と免疫複合物を形成ずるモノクローナル抗体に関
する。該ＮＦＴ調製物はアルツハイマー病患者の大脳皮
質から分離したものである。該抗原自体は更に１９８９
年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託され／こハイブリ
１・−マｎ゜Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）又は１
９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイ
フ゛リドーマｎ″Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）に
より分泌されるモノクローナル抗体と免疫複合物を形成
する。
た抗原と免疫複合物を形成ずるモノクローナル抗体に関
する。該ＮＦＴ調製物はアルツハイマー病患者の大脳皮
質から分離したものである。該抗原自体は更に１９８９
年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託され／こハイブリ
１・−マｎ゜Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）又は１
９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイ
フ゛リドーマｎ″Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）に
より分泌されるモノクローナル抗体と免疫複合物を形成
する。
本発明のモノクローナル抗体は、中枢神経系とは異なる
器官の正常なマクロファージ、神経原線維のからまり部
分若しくはアミ口イド、内皮細胞又は神経膠星状細胞（
但しＲＣ＾−■は同一条件下て該細胞と免疫複合物を形
成する）及ひ正常な中枢神経系の小膠細胞と免疫学的に
結合しないことが好ましい。
器官の正常なマクロファージ、神経原線維のからまり部
分若しくはアミ口イド、内皮細胞又は神経膠星状細胞（
但しＲＣ＾−■は同一条件下て該細胞と免疫複合物を形
成する）及ひ正常な中枢神経系の小膠細胞と免疫学的に
結合しないことが好ましい。
本発明のモノクローナル抗体が前述した要素と免疫学的
に結合しない条件は前述しノコ光学免疫顕微鏡検査及ひ
電子免疫顕微鏡検査の条件と同一てある。
に結合しない条件は前述しノコ光学免疫顕微鏡検査及ひ
電子免疫顕微鏡検査の条件と同一てある。
本発明は更にｌｉｉ＋述したモノクローナル抗体を分泌
するハイブリドーマに関する。
するハイブリドーマに関する。
前述したモノクローナル抗体はモノクローナル抗体を分
泌するハイブリドーマの製造及び単離からなるプ四セス
により得られる。
泌するハイブリドーマの製造及び単離からなるプ四セス
により得られる。
（以下糸口）
ハイブリｌ−’−マの製造方法を以下に示す。
あらかじめｉｎ ｖｉｖｏ免疫感作した動物、例えばマ
ウス若しくはラッ１・の脾臓細胞、又は１９８９年７月
５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイブリドーマｎ
°Ｉ８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）若しくは１９８９年
７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイフリ１〜
−マｎ゜丁−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌
されるモノクローナル抗体により識別される抗原とあら
かしめｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫感作した前記のような動物
の脾臓細胞を出発材料とする。
ウス若しくはラッ１・の脾臓細胞、又は１９８９年７月
５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイブリドーマｎ
°Ｉ８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）若しくは１９８９年
７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイフリ１〜
−マｎ゜丁−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌
されるモノクローナル抗体により識別される抗原とあら
かしめｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫感作した前記のような動物
の脾臓細胞を出発材料とする。
ハイブリドーマ形成条件下で免疫感作した細胞を骨髄腫
細胞と融合する。
細胞と融合する。
前述した抗原の非リン酸化構造エビトープを特異的に識
別し且つ病理学的条件下で中枢神経系の組織球及びマク
ロファージと免疫複合物を形成するモノクローナル抗体
を分泌するハイブリドーマを選択ずる。
別し且つ病理学的条件下で中枢神経系の組織球及びマク
ロファージと免疫複合物を形成するモノクローナル抗体
を分泌するハイブリドーマを選択ずる。
対応ずるモノクローナル抗体の製造方法を以下に示す。
前述した如き選択したハイブリドーマを適切な培地で培
養する。
養する。
選択したハイブリドーマにより排出されるモノクローナ
ル抗体を回収する。又は別法としてマウスの腹膜に選択
したハイブリｌ・−マを移植する。
ル抗体を回収する。又は別法としてマウスの腹膜に選択
したハイブリｌ・−マを移植する。
マウスに腹水か生しると、腹水から形成されたモノクロ
ーナル抗体を回収する。
ーナル抗体を回収する。
例えば中空繊維又はマイクロカプセルを使用しての固定
化細胞の培養、又は例えばエアーリフ１・リアクターを
使用しての均質懸濁液での培養のような従来のｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ技術により、本発明のモノクローナル抗体を産
生し得る。
化細胞の培養、又は例えばエアーリフ１・リアクターを
使用しての均質懸濁液での培養のような従来のｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ技術により、本発明のモノクローナル抗体を産
生し得る。
モノクローナル抗体の産土が速いので、脾臓細胞のｉｎ
ｖｉｔｒｏ免疫感作が有利である。本発明は更に本発
明のモノクローナル抗体と免疫複合物を形成する］ノ″
１４原に関する。
ｖｉｔｒｏ免疫感作が有利である。本発明は更に本発
明のモノクローナル抗体と免疫複合物を形成する］ノ″
１４原に関する。
アルツハイマー病患者から得た大脳皮質から分離したＮ
ＦＴ調製物から得ることができ、また超音波処理により
ＮＦＴ調製物から解離し得る本発明の抗原は、前述した
如きモノクローナル抗体と、有利には１９８９年７月５
日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマｎ゜
Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）若しくは１９８９年
７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイフ゛リド
ーマｎ°Ｉ８８２（ＡＭＣ３０ Ｉ８Ｇ）により分泌さ
れるモノクローナル抗体と免疫複合物を形威し得ること
を特徴とする。
ＦＴ調製物から得ることができ、また超音波処理により
ＮＦＴ調製物から解離し得る本発明の抗原は、前述した
如きモノクローナル抗体と、有利には１９８９年７月５
日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマｎ゜
Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）若しくは１９８９年
７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイフ゛リド
ーマｎ°Ｉ８８２（ＡＭＣ３０ Ｉ８Ｇ）により分泌さ
れるモノクローナル抗体と免疫複合物を形威し得ること
を特徴とする。
本発明の有利な抗原は、正常な骨髄、リンパ節、肺若し
くは脾臓の単核細胞又はマクロファージで表現されない
ことを特徴とする。
くは脾臓の単核細胞又はマクロファージで表現されない
ことを特徴とする。
有利には、本発明の抗原は、活性化小膠細胞を含むアル
ツハイマー病、エイズ、任意の脳感染又は脳腫瘍の患者
の脳の脳を髄液又は血清に含まれており、本発明の任意
のモノクローナル抗体と免疫反応を生じる。
ツハイマー病、エイズ、任意の脳感染又は脳腫瘍の患者
の脳の脳を髄液又は血清に含まれており、本発明の任意
のモノクローナル抗体と免疫反応を生じる。
以下に示す方法により本発明の抗原を産生じ得３９
る。
本発明のモノクローナル抗体の１つを、アルツハイマー
病患者から又はむしろアルツハイマー病を患っていた患
者から分離した超音波処理ＮＦＴ調製物と、抗原抗体複
合物製造に適した条件下で接触させる。
病患者から又はむしろアルツハイマー病を患っていた患
者から分離した超音波処理ＮＦＴ調製物と、抗原抗体複
合物製造に適した条件下で接触させる。
抗原を該複合物から分離して、所望の抗原を精製形態で
回収する。
回収する。
有利には使用するモノクローナル抗体は、樹脂ＳＥＰ｝
ＩＡＲＯｓＥ（登録商標）のような適切な支持体上に固
定された状態のものである。次いで以下の作業を実施す
ることにより抗原が得られ得る。
ＩＡＲＯｓＥ（登録商標）のような適切な支持体上に固
定された状態のものである。次いで以下の作業を実施す
ることにより抗原が得られ得る。
ＲＩＰＡｉ衝液による超音波処理ＮＦＴ調製物からの抽
出操作により得られるようなタンパク質及びポリペプチ
ドを含む上澄み液を前記モノクローナル抗体と接触させ
る。
出操作により得られるようなタンパク質及びポリペプチ
ドを含む上澄み液を前記モノクローナル抗体と接触させ
る。
形成された固定化抗体抗原複合物を洗浄する。
抗体抗原複合物の解離を生じ得る溶液（例えば３４０
Ｈチオシアン酸カリウム、２．５Ｍ塩化マグネシウム、
０．２Ｍクエン酸塩−クエン酸、ｐ｝１３．５又は０．
１Ｍ酢酸）で前記複合物を処理する。
０．２Ｍクエン酸塩−クエン酸、ｐ｝１３．５又は０．
１Ｍ酢酸）で前記複合物を処理する。
抗原を精製形態で回収する。
ＲＩＰ八緩衝液は、０．ＯＩＭ ｝−リス−１１ＣＩ、
ｐｌ＋７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１％デスオキシ
コール酸ナＩ・リウム、１％トリ１〜ンＸＩＯ０．０．
１％ １〜デシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳＬ１ｍＭフェ
ニルーメチルースルホニル−フルオリＦ （Ｉ’ＭＳＦ
）（−２００ｍＭ ＰＭＳＦの０，５％エタノール溶液
）及ひ５００ｋａｐｐａ Ｉ．Ｕアプロチニン／ｍｆｌ
である。
ｐｌ＋７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１％デスオキシ
コール酸ナＩ・リウム、１％トリ１〜ンＸＩＯ０．０．
１％ １〜デシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳＬ１ｍＭフェ
ニルーメチルースルホニル−フルオリＦ （Ｉ’ＭＳＦ
）（−２００ｍＭ ＰＭＳＦの０，５％エタノール溶液
）及ひ５００ｋａｐｐａ Ｉ．Ｕアプロチニン／ｍｆｌ
である。
本発明は更に、本発明のモノクローナル抗体に対して生
しる同遺伝子型ポリクローナル抗イデイオタイプ血清及
び抗イディオタイプモノクローナル抗体に関する。
しる同遺伝子型ポリクローナル抗イデイオタイプ血清及
び抗イディオタイプモノクローナル抗体に関する。
中ても特に、本発明は■９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ
．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８１（Ａ
ＭＣ３０ ＩｇＭ）若しくは１９８９年７月５日にＣ．
Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイフ゛りＦ−マｎ゜丁−８
８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌されるモノクロ
ーナル抗体に対して生じる同遺伝子型ポリクローナル抗
イデイオタイプ血清、及び抗イディオタイプモノクロー
ナル抗体に関する。
．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８１（Ａ
ＭＣ３０ ＩｇＭ）若しくは１９８９年７月５日にＣ．
Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイフ゛りＦ−マｎ゜丁−８
８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ）により分泌されるモノクロ
ーナル抗体に対して生じる同遺伝子型ポリクローナル抗
イデイオタイプ血清、及び抗イディオタイプモノクロー
ナル抗体に関する。
本発明のモノクローナル抗体に対して生じたモノクロー
ナル抗イデイオタイプ抗体が本発明の抗原の内部像（ｉ
ｎｔｅｒｎａｌ ｉｍａｇｅ）に対応するときには、該
抗体を使用して該抗原を置換することかてきる。
ナル抗イデイオタイプ抗体が本発明の抗原の内部像（ｉ
ｎｔｅｒｎａｌ ｉｍａｇｅ）に対応するときには、該
抗体を使用して該抗原を置換することかてきる。
′゛内部像゛′に関しては、例えばｄｅ Ｆｒ（＝ｖａ
ｌ Ｃ．Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，ｐｐ． １
４４−２１９ ｉｎ Ｂａｃｈ．Ｊ．Ｆ．；Ｔｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ， Ｐｕｂｌ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏ
ｎｓ， Ｎｅｕ＋ Ｙｏｒｋ１９７８ ｏｒ Ｆｌ
ｅｉｓｃｈｍａｎｎ Ｊ．ロ．， Ｄａｖｉｅ
Ｊ．Ｈ．；ＩｍｍｕｎｏＨｌｏｂｕｌｉｎｓ； ａｌｌ
ｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ， ｐｌ）
．２０５−２２０ ｉｎ Ｐａｕｌ Ｗ．Ｅ．； Ｆｕ
ｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐｕｂｌ
． Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， ＮｅｕｌＹｏｒｋ，
１９８４； ａｎｄＪｅｒｎｅ Ｎ．Ｋ．： Ｔｏｕ
＋ａｒｄｓ ａ ｎｅｉｏｒｋ ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ
ｔｈｅｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ 八ｎｎ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ． （Ｉｎｓｔ． Ｐａｓｔｅｕｒ
）１２５Ｃ：３７３−３８９（１９７４）を参照のこと
。
ｌ Ｃ．Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，ｐｐ． １
４４−２１９ ｉｎ Ｂａｃｈ．Ｊ．Ｆ．；Ｔｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ， Ｐｕｂｌ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏ
ｎｓ， Ｎｅｕ＋ Ｙｏｒｋ１９７８ ｏｒ Ｆｌ
ｅｉｓｃｈｍａｎｎ Ｊ．ロ．， Ｄａｖｉｅ
Ｊ．Ｈ．；ＩｍｍｕｎｏＨｌｏｂｕｌｉｎｓ； ａｌｌ
ｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｉｄｉｏｔｙｐｅｓ， ｐｌ）
．２０５−２２０ ｉｎ Ｐａｕｌ Ｗ．Ｅ．； Ｆｕ
ｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐｕｂｌ
． Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， ＮｅｕｌＹｏｒｋ，
１９８４； ａｎｄＪｅｒｎｅ Ｎ．Ｋ．： Ｔｏｕ
＋ａｒｄｓ ａ ｎｅｉｏｒｋ ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ
ｔｈｅｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ 八ｎｎ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ． （Ｉｎｓｔ． Ｐａｓｔｅｕｒ
）１２５Ｃ：３７３−３８９（１９７４）を参照のこと
。
活性化小膠細胞を含む脳疾患又は脳感染、例えばアルツ
ハイマー病のｉｎ ｖｉｔｒｏ検出又は診断のための本
発明方法を以下に示す。
ハイマー病のｉｎ ｖｉｔｒｏ検出又は診断のための本
発明方法を以下に示す。
活性化小膠細胞を含む脳疾患又は脳感染、中でも特にア
ルツハイマー病にかかつていると思われる患者から得た
細胞調製物を、抗原抗体複合物形成に適した条件下で本
発明のモノクローナル抗体とｉｎ ｖｉｔｒｏ接触させ
る。
ルツハイマー病にかかつていると思われる患者から得た
細胞調製物を、抗原抗体複合物形成に適した条件下で本
発明のモノクローナル抗体とｉｎ ｖｉｔｒｏ接触させ
る。
前記抗体と前記細胞調製物との免疫結合を検出ずる。
細胞調製物は任意の適切な方法で、例えば患者で行っだ
生検から、特に超音波処理を行って、適時に適切な培地
、例え（Ｊ４％のホルマリンて固定した後に得られ得る
。
生検から、特に超音波処理を行って、適時に適切な培地
、例え（Ｊ４％のホルマリンて固定した後に得られ得る
。
免疫結合したモノクローナル抗体は従来技術により検出
することがてきる。本発明のモノクローナル抗体自体か
マーカー又は後述する如きマーカーとの直接又は間接結
合（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）用の基を有ずるのが有利てある
。
することがてきる。本発明のモノクローナル抗体自体か
マーカー又は後述する如きマーカーとの直接又は間接結
合（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）用の基を有ずるのが有利てある
。
本発明方法の特に有利な例は診断ずべき患者から得ｆＳ
（対応する抗原を含む）血清調製物を、本発明のモノク
ローナル抗体と接触させることからなる。
（対応する抗原を含む）血清調製物を、本発明のモノク
ローナル抗体と接触させることからなる。
本発明は更に、以下のアルツハイマー病、エイズウイル
スにより誘発される脳炎、及び中枢神経系の小膠細胞の
顕著な活性化か見られる他の疾病のいずれかの疾病のｉ
ｎ．ｖｉｔｒｏ診断用Ａ・ツ１・に関し、該キットが、
ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断すべき生物学的試料をイ］着させ
るための少なくとも１枚のマイク口プレートと、本発明
のモノクローナル抗体のいずれかを含む調製物と、該モ
ノクローナル抗体との特異的標識（ｔａｇｇｉｎｇ）又
は結合用マーカーと、一方ては試験試料得たモノクロー
ナル抗体との免疫反応を、他方では結合したモノクロー
ナル抗体とマーカーとの免疫反応を実施するための適切
な緩衝溶液とを含んでいることを特徴とする。
スにより誘発される脳炎、及び中枢神経系の小膠細胞の
顕著な活性化か見られる他の疾病のいずれかの疾病のｉ
ｎ．ｖｉｔｒｏ診断用Ａ・ツ１・に関し、該キットが、
ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断すべき生物学的試料をイ］着させ
るための少なくとも１枚のマイク口プレートと、本発明
のモノクローナル抗体のいずれかを含む調製物と、該モ
ノクローナル抗体との特異的標識（ｔａｇｇｉｎｇ）又
は結合用マーカーと、一方ては試験試料得たモノクロー
ナル抗体との免疫反応を、他方では結合したモノクロー
ナル抗体とマーカーとの免疫反応を実施するための適切
な緩衝溶液とを含んでいることを特徴とする。
本発明は更に、本発明の抗原の調製物をも含ん４Ａ
でいる前述しノコ如きキッ１〜に関する。本発明の該抗
原は（探索される抗原の定量測定用の）標準てあるか又
は競合投与法で使用ずへきキッ１へ用の、探索される抗
原に対するコンペティターである。
原は（探索される抗原の定量測定用の）標準てあるか又
は競合投与法で使用ずへきキッ１へ用の、探索される抗
原に対するコンペティターである。
本発明は更に、木発明のモノクローナル抗イディオタイ
プ抗体、特に本発明の抗原の内部像に幻応ずる抗体をも
含んでいる前述した如きキッ１〜に関する。木発明のモ
ノクローナル抗イディオタイプ抗体は、（所望される抗
原の定量測定用）標準であるか又は競合用量決定法で使
用すべきキット用の、所望される抗原に対ずる二７ンペ
ティターである。
プ抗体、特に本発明の抗原の内部像に幻応ずる抗体をも
含んでいる前述した如きキッ１〜に関する。木発明のモ
ノクローナル抗イディオタイプ抗体は、（所望される抗
原の定量測定用）標準であるか又は競合用量決定法で使
用すべきキット用の、所望される抗原に対ずる二７ンペ
ティターである。
本発明は更に、本発明の抗原、特に１９８９年７月５日
にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイフ゛り１・−マｎ
゜■８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）若しくは１９８９年
７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイフ゛り１
・−マｎ°Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ＞により分
泌される抗体により識別される抗原をコー１〜ずる対応
ずる核酸に関する。
にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイフ゛り１・−マｎ
゜■８８１（ＡＭＣ３０ ＩｇＭ）若しくは１９８９年
７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイフ゛り１
・−マｎ°Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ ＩｇＧ＞により分
泌される抗体により識別される抗原をコー１〜ずる対応
ずる核酸に関する。
特に（但し必ずしちそうとは限らないが）本発明の抗原
のアミノ酸配列か従来のペプチトシーケンシンク方法に
より少なくとも部分的に利用可能となるときには、当然
当業者はこのような核酸を製造又は分離するために種々
の方法を利用できる。
のアミノ酸配列か従来のペプチトシーケンシンク方法に
より少なくとも部分的に利用可能となるときには、当然
当業者はこのような核酸を製造又は分離するために種々
の方法を利用できる。
このような方法の１つを以下に示す。
ＮＦＴ細胞から得た断片ＤＮＡ組或物を、本発明の抗原
の選択したアミノ酸配列に幻応ずる核酸配列からなるプ
ローブとハイブリタイゼーション条件下で接触させる。
の選択したアミノ酸配列に幻応ずる核酸配列からなるプ
ローブとハイブリタイゼーション条件下で接触させる。
形成したハイフリッドを回収する。
次いてＤＮ八スＩ〜ランドを出発プ胃一フから適切な変
性条件下で離隔すると、該ＤＮＡス１〜ランドは前記抗
原をコー１〜する核酸配列の少なくとも一部を含んでい
る。
性条件下で離隔すると、該ＤＮＡス１〜ランドは前記抗
原をコー１〜する核酸配列の少なくとも一部を含んでい
る。
該方法は更に、このようなスＩ−ランドをシーケンシン
グし、また本発明の抗原の所定のアミノ酸配列と対応ず
ると考えられる可能な理論的ヌクレオチト配列と比較し
た後に、核酸の関係部分を同定することからなり得る。
グし、また本発明の抗原の所定のアミノ酸配列と対応ず
ると考えられる可能な理論的ヌクレオチト配列と比較し
た後に、核酸の関係部分を同定することからなり得る。
抗原のアミノ酸配列の少なくとも一部をあらかしめシー
ケンシングせずとも、核酸をより入手し易くするより実
際的な他の好ましい方法を以下に示す。
ケンシングせずとも、核酸をより入手し易くするより実
際的な他の好ましい方法を以下に示す。
アルツハイマー病にかかつていた患者の大脳皮質の細胞
からメッセンシャーＲＮ八を回収する。
からメッセンシャーＲＮ八を回収する。
該ｍＲＮ八の逆転写によりライフラリーｃＤＮ八を形成
する。
する。
場合によっては、例えばＳａｕｌＩＩ八制限酵素を使用
して前記ｃＤＮ＾を断片化する。
して前記ｃＤＮ＾を断片化する。
適切なプロモーターの制御下で適切なクローニングベク
ターにｃＤＮＡを挿入して、このようなベクター内に含
まれるインサートに含まれる読み取り枠のコンビテント
細胞宿主てのその後の発現を認める要素を調整する。
ターにｃＤＮＡを挿入して、このようなベクター内に含
まれるインサートに含まれる読み取り枠のコンビテント
細胞宿主てのその後の発現を認める要素を調整する。
このようなｃＤＮＡ又はｃＤＮＡ断片を含む修飾ベクタ
ーで適切なコンビテント細胞宿主を形質転換して、４７ 形質転換細胞コロニーを回収する。
ーで適切なコンビテント細胞宿主を形質転換して、４７ 形質転換細胞コロニーを回収する。
抗体と対応する抗原との免疫複合物の製造を可能とする
条件下で、必要であれば細胞の溶菌後に、前記の形質転
換した細胞コロニーの発現生成物を本発明のモノクロー
ナル抗体と接触させる。
条件下で、必要であれば細胞の溶菌後に、前記の形質転
換した細胞コロニーの発現生成物を本発明のモノクロー
ナル抗体と接触させる。
本発明のモノクローナル抗体により識別されるタンパク
質を生成するこれらの細胞をスクリーニングする。
質を生成するこれらの細胞をスクリーニングする。
モノクローナル抗体により識別された発現生戒物に関与
する外来ＤＮＡ断片を、選択した細胞から回収する。
する外来ＤＮＡ断片を、選択した細胞から回収する。
場合によっては、その核酸をシーケンシングして同定す
る。
る。
最後に、モノクローナル抗体により識別される抗原の産
生に関与した読み取り枠を同定した後に、該読み取り枠
を含んでいた核酸断片を回収する。
生に関与した読み取り枠を同定した後に、該読み取り枠
を含んでいた核酸断片を回収する。
この方法により更に、本発明の抗原の基本的なポリペプ
チド構造の少なくとも一部のアミノ酸配４８ 列を決定できることは言うまでもない。
チド構造の少なくとも一部のアミノ酸配４８ 列を決定できることは言うまでもない。
得られた核酸又は核酸の断片を引き続き、例えば対象の
抗原を生成するために、該核酸又は核酸の断片を適切な
ベクターに挿入して、コンビテント生物体を修飾ヘクタ
ーて形質転換した後に、原料のモノクローナル抗体によ
り特異的に識別される部位を含んでいる本発明の抗原の
産生に使用することができる。このような状況ではコン
ビテント宿主て前記抗原を産生ずるためには、適切なプ
ロモーター及びその後の適切な終結コドンの制御下で特
定核酸断片を再度そのベクターに挿入せねばならないこ
とは言うまでもない。
抗原を生成するために、該核酸又は核酸の断片を適切な
ベクターに挿入して、コンビテント生物体を修飾ヘクタ
ーて形質転換した後に、原料のモノクローナル抗体によ
り特異的に識別される部位を含んでいる本発明の抗原の
産生に使用することができる。このような状況ではコン
ビテント宿主て前記抗原を産生ずるためには、適切なプ
ロモーター及びその後の適切な終結コドンの制御下で特
定核酸断片を再度そのベクターに挿入せねばならないこ
とは言うまでもない。
得られた核酸又は核酸の断片は更に、適切なマーカーに
よるその後の検出を可能とするために、特に慣用の方法
による放射性標識又は修飾の後に、プローブの製造に使
用できる。本発明の有利なプローブは、前述した核酸又
は対応する相補的核酸に属する配列を含み、且つそれ自
体が該核酸の１０個〜最大数のヌクレオチドを含んでい
る前述した抗原の存在を検出する。次いで、本明細書で
引用したアルツハイマー病又は他の疾患に関与する抗原
をコードする核酸配列を検出するためにこれらのプロー
ブを使用することができる。これらのプローブは核酸又
は単離形態の核酸の一部分からなり得る。これらのプロ
ーブは更に、前記核酸又はその一部を含む組替え体ＤＮ
Ａからなり得る。しかしなから、このような組替え体Ｄ
ＮＡプローブの他の部分が診断すべき患者の細胞調製物
から得られる核酸組成物とハイブリダイズしそうにない
ことに注意すべきであると考えられる。
よるその後の検出を可能とするために、特に慣用の方法
による放射性標識又は修飾の後に、プローブの製造に使
用できる。本発明の有利なプローブは、前述した核酸又
は対応する相補的核酸に属する配列を含み、且つそれ自
体が該核酸の１０個〜最大数のヌクレオチドを含んでい
る前述した抗原の存在を検出する。次いで、本明細書で
引用したアルツハイマー病又は他の疾患に関与する抗原
をコードする核酸配列を検出するためにこれらのプロー
ブを使用することができる。これらのプローブは核酸又
は単離形態の核酸の一部分からなり得る。これらのプロ
ーブは更に、前記核酸又はその一部を含む組替え体ＤＮ
Ａからなり得る。しかしなから、このような組替え体Ｄ
ＮＡプローブの他の部分が診断すべき患者の細胞調製物
から得られる核酸組成物とハイブリダイズしそうにない
ことに注意すべきであると考えられる。
他のこのようなｉｎ ｖｉｔｒｏ診断法を以下に示す。
活性化小膠細胞を含む脳疾患又は脳感染、例えばアルツ
ハイマー病にかかつていると考えられる患者の大脳皮質
から得られ、またその核酸が必要時に他の核酸とハイブ
リダイゼーションしやすくなっている細胞調製物を出発
材料とする。
ハイマー病にかかつていると考えられる患者の大脳皮質
から得られ、またその核酸が必要時に他の核酸とハイブ
リダイゼーションしやすくなっている細胞調製物を出発
材料とする。
細胞調製物又は該細胞調製物がちあらかじめ抽出Ｉ７た
核酸を、適切なハイブリダイゼーション条件Ｆで前述し
たプローブと接触させると、恐らく該１ローフと前記抗
原をコー１〜する配列との間にハイフリッｌ・が生じる
。
核酸を、適切なハイブリダイゼーション条件Ｆで前述し
たプローブと接触させると、恐らく該１ローフと前記抗
原をコー１〜する配列との間にハイフリッｌ・が生じる
。
形成され／Ｓハイブリットがある場合にはそれを検出し
て、ハイブリタイセーションが生起したが否かに基づい
て患者の神経原繊維のこのような変性の有無を評価する
。
て、ハイブリタイセーションが生起したが否かに基づい
て患者の神経原繊維のこのような変性の有無を評価する
。
本発明のハイブリドーマと対応するモノクローナル抗体
とが得られる好ましい条件を以下に記載する。これを読
めは、本発明の他の好ましい特徴か明白となろう。該抗
体は、総て当業者が実行し得る手順に基づいて、前述し
た他の総てのコンボーネンＩ〜へのアクセスを提供し得
る。
とが得られる好ましい条件を以下に記載する。これを読
めは、本発明の他の好ましい特徴か明白となろう。該抗
体は、総て当業者が実行し得る手順に基づいて、前述し
た他の総てのコンボーネンＩ〜へのアクセスを提供し得
る。
実施例］． ： モ／ ’７ ｏ − −Ｊ− ル抗休
ＡＭＣ３０（Ｉ）ＢＭ，ｋａｐｐａタイプ〉の製造： 免疫感作用ＮＦＴの分離 ５１ 一見散在性であるか、神経病理学的にはアルツハイ゛？
一病と確認された患者を死体解剖して得られた大脳皮質
からＮＦＴを長期（Ｉｑｂａｌ Ｋ．， Ｚａｌｄｉ
１゜Ｔ ｂ ｏ ｍ ｐ ｓ ｏ ｎ Ｃ ｔ１等、
八ｌｚｈｅｉｍｅｒ ｐａｉｒｅｄ ｈｃｌｉｃａ
ｌｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｂｕｌｋ： ｉｓｏｌａｔｉｏ
ｎ ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄｐｒｏｔ．ｅｉｎ
ｃｏ＋ｎｐｏｓｉｔ．ｉｏｎ．Δｃｔａ Ｎｅｕｒｏ
ｐａｔｈ． （Ｂｅｒｌ．）１９８４． ６２： １６
７−１７７）方法て分離した。Ｃａｎｇｏ Ｒｅｄ染色
後に偏光顕微鏡検査によりＮＦＴ調製物をヂエックした
。これは炎形の親コンゴ性（ｃｏｎｇｏｐｈｉｌｉｃ）
ＮＦＴ、他の親コンゴ性材利、細胞核、毛細血管及び無
定形破片を示していた。免疫感作の前にＮＦＴ調製物を
超音波処理した。
ＡＭＣ３０（Ｉ）ＢＭ，ｋａｐｐａタイプ〉の製造： 免疫感作用ＮＦＴの分離 ５１ 一見散在性であるか、神経病理学的にはアルツハイ゛？
一病と確認された患者を死体解剖して得られた大脳皮質
からＮＦＴを長期（Ｉｑｂａｌ Ｋ．， Ｚａｌｄｉ
１゜Ｔ ｂ ｏ ｍ ｐ ｓ ｏ ｎ Ｃ ｔ１等、
八ｌｚｈｅｉｍｅｒ ｐａｉｒｅｄ ｈｃｌｉｃａ
ｌｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｂｕｌｋ： ｉｓｏｌａｔｉｏ
ｎ ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄｐｒｏｔ．ｅｉｎ
ｃｏ＋ｎｐｏｓｉｔ．ｉｏｎ．Δｃｔａ Ｎｅｕｒｏ
ｐａｔｈ． （Ｂｅｒｌ．）１９８４． ６２： １６
７−１７７）方法て分離した。Ｃａｎｇｏ Ｒｅｄ染色
後に偏光顕微鏡検査によりＮＦＴ調製物をヂエックした
。これは炎形の親コンゴ性（ｃｏｎｇｏｐｈｉｌｉｃ）
ＮＦＴ、他の親コンゴ性材利、細胞核、毛細血管及び無
定形破片を示していた。免疫感作の前にＮＦＴ調製物を
超音波処理した。
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫感作及び融合方法免疫感作してい
ないＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞を、４０μｇ／ｍｅ
の超音波処理したＮＦＴ調製物の存在下で、２０％のウ
シ胎児血清を含む５０％の胸腺細胞でコンテイションし
たＨＢ １．０１培地（ｌｌａｎａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃ
ａｌｓ）て培養した。３日目、４日目及び５日目に１０
Ｂ個のＩＩＩ！！臓５２ 細胞を２ｘ１０７個のＰ３／ＮＳ−１／１八ｇ４−１骨
髄腫細胞と混合して、（ＫｏｐｒｏＩＩｌｓｋｉ ｔｌ
， Ｇｅ．ｒｈａｒｄ Ｗ， ＣＭＰｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｉ
ｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ ｂｙ ｓｏｍａｔｉｃ
ｃｃｌｌ ｂｙ ｓｏｍａｔｉｃ ｃｅｈｙｂｒｉｄｓ
ｂｃｔｕ＋ｅｃｎ ｍｏｕＳｅ ｍｙｃｌｏｍａ ａ
ｎｄ ｐｒｉｍｅｄｓｐｌｅｅｎ ｃｅｌｌｓ．
Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．
ＵＳ八＋９７７； ７４：２９８５−２９８８）に
記載した如く２５％のポリエチレンクリコール中で８分
間融合した。各３回の融合の後に、各々が融合混合物か
らの５ｘｌＯ’個の細胞と、１０５個の免疫感作してい
ないＢＡＬＢ／ｃ脾臓細胞とを０．２１１１＋！中に含
んでいる一連の１４４０個の培養株を完全なＨ Ａ Ｔ
選択培地の９６ウェルブレーｌ・（Ｎｕｎｃ）に置いた
。ＩＩＡＴ選択培地はヒボキザンチン、アミノブテリン
及ひヂミシンを含み、また１５％熱失活ウシ胎児血清を
加えた１１ ８ １０ ］培地であった。
ないＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞を、４０μｇ／ｍｅ
の超音波処理したＮＦＴ調製物の存在下で、２０％のウ
シ胎児血清を含む５０％の胸腺細胞でコンテイションし
たＨＢ １．０１培地（ｌｌａｎａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃ
ａｌｓ）て培養した。３日目、４日目及び５日目に１０
Ｂ個のＩＩＩ！！臓５２ 細胞を２ｘ１０７個のＰ３／ＮＳ−１／１八ｇ４−１骨
髄腫細胞と混合して、（ＫｏｐｒｏＩＩｌｓｋｉ ｔｌ
， Ｇｅ．ｒｈａｒｄ Ｗ， ＣＭＰｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｉ
ｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ ｂｙ ｓｏｍａｔｉｃ
ｃｃｌｌ ｂｙ ｓｏｍａｔｉｃ ｃｅｈｙｂｒｉｄｓ
ｂｃｔｕ＋ｅｃｎ ｍｏｕＳｅ ｍｙｃｌｏｍａ ａ
ｎｄ ｐｒｉｍｅｄｓｐｌｅｅｎ ｃｅｌｌｓ．
Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．
ＵＳ八＋９７７； ７４：２９８５−２９８８）に
記載した如く２５％のポリエチレンクリコール中で８分
間融合した。各３回の融合の後に、各々が融合混合物か
らの５ｘｌＯ’個の細胞と、１０５個の免疫感作してい
ないＢＡＬＢ／ｃ脾臓細胞とを０．２１１１＋！中に含
んでいる一連の１４４０個の培養株を完全なＨ Ａ Ｔ
選択培地の９６ウェルブレーｌ・（Ｎｕｎｃ）に置いた
。ＩＩＡＴ選択培地はヒボキザンチン、アミノブテリン
及ひヂミシンを含み、また１５％熱失活ウシ胎児血清を
加えた１１ ８ １０ ］培地であった。
特異抗体を分泌する培養株を２．５ｍＲに膨張させて、
限界希釈法によりクローニングした。
限界希釈法によりクローニングした。
特異抗体のスクリーニンク：
ａ）材料及び方法：
抗体産生田のハイブリ）くーマ上澄み液をスクリニング
するための固相ラジオイムノアッセイを以下に示す。長
期Ｉｑｂａｌ法の最終ペレッ１・からなる半精製ＮＦＴ
調製物を超音波処理して、０．１Ｍ重炭酸ナトリウムを
加えて１ ｍ ｅ当たり約１０ＪＪ．ｇのタンパク質か
含まれるように希釈した。この抗原を前述した如く塩化
ポリビニルの平底９６ウェルプレ−１・（Ｆａｌｃｏｎ
）に吸着させた。５０μｌのハイブリ１ヘーマ上澄み液
を各ウェルに加えた。４゜Ｃて４時間置いた後にウェル
を０１５Ｍ塩化ナトリウム（ＰＢＳ）と２％ウシ胎児血
清とを含む０．１Ｍ リン酸ナ１・リウム緩衝液（ｐ１
７．４）テ’３度洗浄し、５０７．ｚｆ（７）Ｍ２５標
識した抗マウス免疫グロブリン（２５．０００ ｃｐｍ
）（＾ｍｅｒｓｈａｍ）でインキユベートした。２時間
後にウェルを３度洗浄し、熱線でプレートから切断し、
カンマカウンターて］分間カウン１〜した。試料のｃｐ
ｍが完全な＋１ＡＴ培地のｃｐｍの平均プラス２の標準
偏差を」二回るときに、この試料は陽性であると考えら
れた。
するための固相ラジオイムノアッセイを以下に示す。長
期Ｉｑｂａｌ法の最終ペレッ１・からなる半精製ＮＦＴ
調製物を超音波処理して、０．１Ｍ重炭酸ナトリウムを
加えて１ ｍ ｅ当たり約１０ＪＪ．ｇのタンパク質か
含まれるように希釈した。この抗原を前述した如く塩化
ポリビニルの平底９６ウェルプレ−１・（Ｆａｌｃｏｎ
）に吸着させた。５０μｌのハイブリ１ヘーマ上澄み液
を各ウェルに加えた。４゜Ｃて４時間置いた後にウェル
を０１５Ｍ塩化ナトリウム（ＰＢＳ）と２％ウシ胎児血
清とを含む０．１Ｍ リン酸ナ１・リウム緩衝液（ｐ１
７．４）テ’３度洗浄し、５０７．ｚｆ（７）Ｍ２５標
識した抗マウス免疫グロブリン（２５．０００ ｃｐｍ
）（＾ｍｅｒｓｈａｍ）でインキユベートした。２時間
後にウェルを３度洗浄し、熱線でプレートから切断し、
カンマカウンターて］分間カウン１〜した。試料のｃｐ
ｍが完全な＋１ＡＴ培地のｃｐｍの平均プラス２の標準
偏差を」二回るときに、この試料は陽性であると考えら
れた。
ｂ）結果：
４３２０個の培養株の内８２９個の培養株でハイブリド
ーマ細胞が成長した。安定した抗体を分泌する２３種の
ハイフリ１〜−マをスクリーニンクアッセイで同定した
。特異的ハイブリドーマの収率はｉｎｖｉｔｒｏ抗原プ
ライミングの時間に関係なく各融合について同一であっ
た。ＡＭＣ３０と称するこれらのモノクローナル抗体の
１つは前述した特徴を有する。この抗体は確がにＩｇＭ
クラスのｋａｐｐａタイプである。
ーマ細胞が成長した。安定した抗体を分泌する２３種の
ハイフリ１〜−マをスクリーニンクアッセイで同定した
。特異的ハイブリドーマの収率はｉｎｖｉｔｒｏ抗原プ
ライミングの時間に関係なく各融合について同一であっ
た。ＡＭＣ３０と称するこれらのモノクローナル抗体の
１つは前述した特徴を有する。この抗体は確がにＩｇＭ
クラスのｋａｐｐａタイプである。
光学免疫顕微鏡検査：
ａ）材料及び方法：
一見散在性（Ｎ・４）及び老人性（Ｎ・４）のアルツハ
イマー病、２種の大きなベルギー科（Ｎ・１４）での常
染色体の優性遺伝したアルツハイマー病（ＶａｎＢｒｏ
ｅｃｋｈｏｖｅｎ Ｃ．，＾．Ｈ． Ｇｅｎｔｈｅ，＾
． ＶａｎｄｅｎｂｅｒｇｈｅＢ． Ｈｏｒｓｔｈｅｍ
ｋｅ， Ｈ． Ｂａｃｋｈｏｖｅｎｓ Ｐ．５５ Ｒａｅｙｍａｅｋｅｒｓ，Ｗ．Ｖａｎ Ｈｕｌ，
Δ ｌｌｌｅｈｎｅｒｔ，Ｊ．Ｇｈｅｕｅｎｓ，Ｐ．Ｃ
ｒａｓ，Ｈ．Ｂｒｕｙｌａｎｄ，Ｊｊ．ＭａｒｔｉｎＨ
．Ｓａｌｂａｕｍ，Ｇ．Ｍｕｌｔｈａｕｐ，Ｃ．Ｌ．Ｍ
ａｓｔｅｒｓ，ＫＢｅｙｒｅｕｔｈｅｒ，Ｈ．Ｈ．Ｄ．
Ｇｕｒｌｉｎｇ，Ｈ．Ｊ．Ｍｕｌｌａｎ， 八，Ｈｏ
ｌｌａｎｄ，Ａ．Ｂａｒｔｏｎ，Ｎ． Ｉｒｖｉｎｇ
，Ｒ．ＷｉｌｌｉａｍｓｏｎＳ．Ｊ． Ｒｉｃｈａｒ
ｄｓ， Ｊ．八． Ｈａｒｄｙ （１９８７）
Ｆａｉｌｕｒｅ ｏｆｆａｍｉｌｉａｌ 八ｌｚ
ｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｏ ｓｅｇｒ
ｅｇａｔｅｗｉｔｈ ｔｈｅ ＾４−ａｍｙｌｏｉ
ｄ ｇｅｎｅ ｉｎ ｓｅｖｅｒａｌ Ｅｕｒ
ｏｐｅａｎｆａｍｉｌｉｅｓ． Ｎａｔｕｒｅ ３２９
， １５３−１５５）、ＮＦＴを有するが神経症にかか
っていないグアム人のパーキンソン痴呆症候群（Ｎ・３
）及び筋萎縮性側索硬化症（Ｎ・２）、ピック病（Ｎ・
３）、脳炎後（Ｎ・１）及び特発性（Ｎ・１）パーキン
ソン症候群、進行性核上麻痺（Ｎ・３）、亜急性硬化性
汎脳炎（Ｎ・１）、ローゼンタール線維を有する小脳星
状膠腫（Ｎ・１）、神経節腫（Ｎ・２）、小児突然死症
候群（Ｎ・２）の脳組織を死体解剖で採取した。
イマー病、２種の大きなベルギー科（Ｎ・１４）での常
染色体の優性遺伝したアルツハイマー病（ＶａｎＢｒｏ
ｅｃｋｈｏｖｅｎ Ｃ．，＾．Ｈ． Ｇｅｎｔｈｅ，＾
． ＶａｎｄｅｎｂｅｒｇｈｅＢ． Ｈｏｒｓｔｈｅｍ
ｋｅ， Ｈ． Ｂａｃｋｈｏｖｅｎｓ Ｐ．５５ Ｒａｅｙｍａｅｋｅｒｓ，Ｗ．Ｖａｎ Ｈｕｌ，
Δ ｌｌｌｅｈｎｅｒｔ，Ｊ．Ｇｈｅｕｅｎｓ，Ｐ．Ｃ
ｒａｓ，Ｈ．Ｂｒｕｙｌａｎｄ，Ｊｊ．ＭａｒｔｉｎＨ
．Ｓａｌｂａｕｍ，Ｇ．Ｍｕｌｔｈａｕｐ，Ｃ．Ｌ．Ｍ
ａｓｔｅｒｓ，ＫＢｅｙｒｅｕｔｈｅｒ，Ｈ．Ｈ．Ｄ．
Ｇｕｒｌｉｎｇ，Ｈ．Ｊ．Ｍｕｌｌａｎ， 八，Ｈｏ
ｌｌａｎｄ，Ａ．Ｂａｒｔｏｎ，Ｎ． Ｉｒｖｉｎｇ
，Ｒ．ＷｉｌｌｉａｍｓｏｎＳ．Ｊ． Ｒｉｃｈａｒ
ｄｓ， Ｊ．八． Ｈａｒｄｙ （１９８７）
Ｆａｉｌｕｒｅ ｏｆｆａｍｉｌｉａｌ 八ｌｚ
ｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｏ ｓｅｇｒ
ｅｇａｔｅｗｉｔｈ ｔｈｅ ＾４−ａｍｙｌｏｉ
ｄ ｇｅｎｅ ｉｎ ｓｅｖｅｒａｌ Ｅｕｒ
ｏｐｅａｎｆａｍｉｌｉｅｓ． Ｎａｔｕｒｅ ３２９
， １５３−１５５）、ＮＦＴを有するが神経症にかか
っていないグアム人のパーキンソン痴呆症候群（Ｎ・３
）及び筋萎縮性側索硬化症（Ｎ・２）、ピック病（Ｎ・
３）、脳炎後（Ｎ・１）及び特発性（Ｎ・１）パーキン
ソン症候群、進行性核上麻痺（Ｎ・３）、亜急性硬化性
汎脳炎（Ｎ・１）、ローゼンタール線維を有する小脳星
状膠腫（Ｎ・１）、神経節腫（Ｎ・２）、小児突然死症
候群（Ｎ・２）の脳組織を死体解剖で採取した。
脳腫瘍（Ｎ・５）手術で得た患者の大脳皮質と正常な年
令適合対照（Ｎ・３）とを対照として使用した。対５６ 照用のヒトの脊髄及び末梢神経、ラットの坐骨神経並ひ
に他のヒトの組織（副腎、肺臓、肝臓、骨格筋、腎臓、
卵巣、膵臓、脾臓〉を更に調べた。
令適合対照（Ｎ・３）とを対照として使用した。対５６ 照用のヒトの脊髄及び末梢神経、ラットの坐骨神経並ひ
に他のヒトの組織（副腎、肺臓、肝臓、骨格筋、腎臓、
卵巣、膵臓、脾臓〉を更に調べた。
各組織試料を４％のホルマリンに浸漬して固定し、パラ
フィンに包埋した。４μｍの厚さの切片を調製した。
フィンに包埋した。４μｍの厚さの切片を調製した。
アビシンビオチニル化ベルオキシダーゼ複合物技術（Ｉ
ｌｓｕ ＳＭ， Ｒａｉｎｅ Ｌ， Ｆａｎｇｅｒ Ｈ
． Ｕｓｅ ｏｆａｖｉｄｉｎ−ｂｉｏｔｉｎ ｃｏ
ｍｐｌｅｘ （八ＢＣ） ｉｎｉｍｍｕｎｏｐｅｒ
ｏｘｙｄａｓｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． Ｊ． Ｈｉ
ｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ． １９８１；２９
：５７７−５８０）又は可溶性ベルオキシダーゼ抗ベル
オキシダーゼ複合物技術（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ
Ｌ八． Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
（３ｒｄｅｄ．） Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
， １９８６）により、本発明のＡＭＣ３０モノクロー
ナル抗体（１：１０．０００〜１：２０．ＯＯＯに希釈
したハイブリドーマ腹水）又は精製したＡＭＣ３０Ｉｇ
Ｍ（０．０１ｍｇ／ｍｆ）を使用した。非特異的染色を
最低限にするために、前記切片を最初（Ｐｅｒｅｎｔｅ
ｓａｎｄ Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ−ｐｒｅｉｎｃｕｂａ
ｔｉｏｎ，ｕ＋ｉｔｈ ＮＨＳ ｔｏｐｒｅｖｅｎ
ｔ ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｔａｉｎｉＢ ｏｆ
ａｓｔｒｏｅｙｔｅｓ）に記載した如く、１：１００
に希釈した正常なヒトの血清で処理した。ジアミノベン
ジジンをクロモゲンとして使用した。骨髄腫タンパク質
ＭＯＰＣ１０４Ｅ（ＩｇＭ）（Ｌｉｔｔｏｎ Ｂｉｏｎ
ｅｔｉｃｓ）及び対の螺旋状フィラメント（ｐａｉｒｅ
ｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ）に対するＮ
ＦＴ２００モノクローナル抗体（ＩｇＭ） （Ｇｈｅｕ
ｅｎｓ等、提出済み）を対照として使用した。モノクロ
ーナル抗ＣＦ八Ｐ （抗神経膠原線維酸性タンパク質）
抗体（Ｇｈｅｕｅｎｓ等、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｆｏｒｍｓｏｆ ｔｈｅ
ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ， ｏｒα−ａｌｂｕｍｉｎ， ｂｙ ａ
ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂ
ｏｄｙ， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． １９８４；
９６４−９７０）を使用して、神経膠星状細胞を同定し
た。従来のクレジルバイオレット、ＨｏｌｚｅｒＳＳｐ
ｉｅｌｍｅｙｅｒ＋Ｂｏｄｉａｎ，Ｖｏｎ Ｂｒａｕｎ
ｍｕｈｌ、ＰＡＳ及びＣｏｎＨｏ Ｒｅｄ染色も行った
。
ｌｓｕ ＳＭ， Ｒａｉｎｅ Ｌ， Ｆａｎｇｅｒ Ｈ
． Ｕｓｅ ｏｆａｖｉｄｉｎ−ｂｉｏｔｉｎ ｃｏ
ｍｐｌｅｘ （八ＢＣ） ｉｎｉｍｍｕｎｏｐｅｒ
ｏｘｙｄａｓｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． Ｊ． Ｈｉ
ｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ． １９８１；２９
：５７７−５８０）又は可溶性ベルオキシダーゼ抗ベル
オキシダーゼ複合物技術（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ
Ｌ八． Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
（３ｒｄｅｄ．） Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
， １９８６）により、本発明のＡＭＣ３０モノクロー
ナル抗体（１：１０．０００〜１：２０．ＯＯＯに希釈
したハイブリドーマ腹水）又は精製したＡＭＣ３０Ｉｇ
Ｍ（０．０１ｍｇ／ｍｆ）を使用した。非特異的染色を
最低限にするために、前記切片を最初（Ｐｅｒｅｎｔｅ
ｓａｎｄ Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ−ｐｒｅｉｎｃｕｂａ
ｔｉｏｎ，ｕ＋ｉｔｈ ＮＨＳ ｔｏｐｒｅｖｅｎ
ｔ ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｔａｉｎｉＢ ｏｆ
ａｓｔｒｏｅｙｔｅｓ）に記載した如く、１：１００
に希釈した正常なヒトの血清で処理した。ジアミノベン
ジジンをクロモゲンとして使用した。骨髄腫タンパク質
ＭＯＰＣ１０４Ｅ（ＩｇＭ）（Ｌｉｔｔｏｎ Ｂｉｏｎ
ｅｔｉｃｓ）及び対の螺旋状フィラメント（ｐａｉｒｅ
ｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ）に対するＮ
ＦＴ２００モノクローナル抗体（ＩｇＭ） （Ｇｈｅｕ
ｅｎｓ等、提出済み）を対照として使用した。モノクロ
ーナル抗ＣＦ八Ｐ （抗神経膠原線維酸性タンパク質）
抗体（Ｇｈｅｕｅｎｓ等、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｆｏｒｍｓｏｆ ｔｈｅ
ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ， ｏｒα−ａｌｂｕｍｉｎ， ｂｙ ａ
ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂ
ｏｄｙ， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． １９８４；
９６４−９７０）を使用して、神経膠星状細胞を同定し
た。従来のクレジルバイオレット、ＨｏｌｚｅｒＳＳｐ
ｉｅｌｍｅｙｅｒ＋Ｂｏｄｉａｎ，Ｖｏｎ Ｂｒａｕｎ
ｍｕｈｌ、ＰＡＳ及びＣｏｎＨｏ Ｒｅｄ染色も行った
。
Ｃｏｎｇｏ Ｒｅｄ切片は偏光で検査した。
１））結果
アルツハイマー病
初老性及び老人性、散在性及ひ家族性のアルツハイマー
病患者総ての大脳皮質の老人斑に、免疫標識し′／：：
細胞か局在し，ていた。これらの免疫標識した細胞の形
態は小膠ＲＪＨ胞にー）いての従来の記述に適合してい
る。該細胞は細長く、時には不規則な核を有し，、数多
く細かに分校していた。
病患者総ての大脳皮質の老人斑に、免疫標識し′／：：
細胞か局在し，ていた。これらの免疫標識した細胞の形
態は小膠ＲＪＨ胞にー）いての従来の記述に適合してい
る。該細胞は細長く、時には不規則な核を有し，、数多
く細かに分校していた。
皮質全体に、好ましくは抽管の周囲に同様の細胞か分散
していた。血管周囲紺織球も僅かに染色されていた。皮
質下向質には免疫標識し六二細胞かこぐ僅かに検出され
たが、深在白質はまったく標識されなかー）た。時には
かすかな核染色が観察されノご。神経原線維のからまり
部分と血管アミｌｉＴ７イド沈着物とは陰性のままてあ
っｔ：。抗ＧＦＡＰモノクローナル抗体と同定した神経
膠星状細胞も内皮細胞も標識されなかった。
していた。血管周囲紺織球も僅かに染色されていた。皮
質下向質には免疫標識し六二細胞かこぐ僅かに検出され
たが、深在白質はまったく標識されなかー）た。時には
かすかな核染色が観察されノご。神経原線維のからまり
部分と血管アミｌｉＴ７イド沈着物とは陰性のままてあ
っｔ：。抗ＧＦＡＰモノクローナル抗体と同定した神経
膠星状細胞も内皮細胞も標識されなかった。
エイス
５９
周辺組織の小膠細胞よりも弱いか、エイズ脳炎の特徴で
ある多核巨人細胞は標識された。壊死部分の近くでは、
多数のマクロファージと泡沫細胞とが染色されていた。
ある多核巨人細胞は標識された。壊死部分の近くでは、
多数のマクロファージと泡沫細胞とが染色されていた。
神経梅毒
ＭＲＴでの多病巣性異常信号によりｎｏ清学的に神経梅
毒であると確認された患者の立体空間的脳生検ては、モ
ノクローナル抗体ＡＭＣ３０により多数の桿状体細胞が
染色された。これらの細胞は好ましくは皮質に位置して
いた。小膠細胞小結節は存在しなかった。
毒であると確認された患者の立体空間的脳生検ては、モ
ノクローナル抗体ＡＭＣ３０により多数の桿状体細胞が
染色された。これらの細胞は好ましくは皮質に位置して
いた。小膠細胞小結節は存在しなかった。
ピック病、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン
痴呆症候群： これらずへての状態で主に血液周囲の円形細胞か標識し
た。伸張した細胞は極めて稀であった。
痴呆症候群： これらずへての状態で主に血液周囲の円形細胞か標識し
た。伸張した細胞は極めて稀であった。
脳腫瘍生検
低度又は高度の星状膠腫、神経節膠腫又は神経膠芽腫で
は細胞は識別されなかった。寡突起膠腫６０ では異常な寡突起神経膠細胞はほとんと標識されなかっ
た、，浸潤性腫瘍に隣接する実質では細胞は染色されな
かった。悪性大脳組織球症の場合には、多数の邑常組織
球は標識された．，染色は細胞質状てあり＋１．つ粒状
てあ１た。
は細胞は識別されなかった。寡突起膠腫６０ では異常な寡突起神経膠細胞はほとんと標識されなかっ
た、，浸潤性腫瘍に隣接する実質では細胞は染色されな
かった。悪性大脳組織球症の場合には、多数の邑常組織
球は標識された．，染色は細胞質状てあり＋１．つ粒状
てあ１た。
制御中枢神経系
事故又は短期の非神経疾患で死亡した成人、少年又は新
生児患者の脳では、小膠細胞は標識されないままてあー
）た。
生児患者の脳では、小膠細胞は標識されないままてあー
）た。
他の正常な器宜
肝臓のｊ（ｕｐｆｆｅｒ細胞、皮膚のＬ ａ ｎ ｇｅ
ｒ ｈ ａ．ｎ ｓ細胞、肺臓、骨髄及ひ胛臓又はリ
ンパ節の細胞球又は単核細胞の胞状マク）コファーシは
染色されなかった。
ｒ ｈ ａ．ｎ ｓ細胞、肺臓、骨髄及ひ胛臓又はリ
ンパ節の細胞球又は単核細胞の胞状マク）コファーシは
染色されなかった。
神経系以外の器官の損傷：
悪性線維性組織球腫では、生検を繰り返すと、マクロフ
ァージ及ひ異常紡錘細胞が、本発明のモノクローナル抗
体の（χ１−抗キモ１・リプシン及ひＲＣ八−］て標識
されることが判明した。肉芽性炎、結核及びザルコイド
ーシスでは、あるマクロファージ及ひ類上皮細胞が３つ
総てのプローブにより染色された。ＲＣＡ＋よ最大量の
マクロファージを示していノコ。Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ
型巨大細胞はモノクローナル抗体及びＲＣＡで標識され
たか、α１−抗キモ１・リブシンでは陰性のままであっ
た。皮膚組織球腫ては、線維芽細胞及び組織球はα１−
抗キモ１−リプシンて標識されたか、モノクローナル抗
体又はＲＣ八とは免疫反応しなかった。
ァージ及ひ異常紡錘細胞が、本発明のモノクローナル抗
体の（χ１−抗キモ１・リプシン及ひＲＣ八−］て標識
されることが判明した。肉芽性炎、結核及びザルコイド
ーシスでは、あるマクロファージ及ひ類上皮細胞が３つ
総てのプローブにより染色された。ＲＣＡ＋よ最大量の
マクロファージを示していノコ。Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ
型巨大細胞はモノクローナル抗体及びＲＣＡで標識され
たか、α１−抗キモ１・リブシンでは陰性のままであっ
た。皮膚組織球腫ては、線維芽細胞及び組織球はα１−
抗キモ１−リプシンて標識されたか、モノクローナル抗
体又はＲＣ八とは免疫反応しなかった。
表皮の幾つかの１、ａｎｇｅｒｈａｎｓ細胞はＲＣ八で
染色された。若年性黄色肉芽腫ては、マクロファージ及
ひ紡錘細胞はＲＣへてのみ標識された。門領域及び転移
部を包囲する肝臓の実質でのマクロファージを３つのす
へてのプローブでテコレー１−した。場合によってモノ
クローナル抗体により核か僅かに染色された。
染色された。若年性黄色肉芽腫ては、マクロファージ及
ひ紡錘細胞はＲＣへてのみ標識された。門領域及び転移
部を包囲する肝臓の実質でのマクロファージを３つのす
へてのプローブでテコレー１−した。場合によってモノ
クローナル抗体により核か僅かに染色された。
Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓレクチン染色ａ）材
料及び方法： レクヂンで染色するために、前記と同様の手法を使用す
ることがてきる（Ｍａｎｎｏｊｉ Ｈ．， Ｈ． Ｙｇ
ｅｒＬ．Ｅ． ＢｅＣｋｅｒ （１９８６）Δｓｐｅｃ
ｉｆｉｃ ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｍａｒｋｅｒ
（ｌｅｃｔｉｎ Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ
ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ−１）ｆｏｒ ｎｏｒｍａｌ ｈ
ｕｍａｎ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃ
ａｔｉｏｎｔｏ ｒｏｕｔｉｎｅ ｈｉｓｔｏｐａ
ｔｈｏｌｏｇｙ 八ｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ
ｏｌ（Ｂｅｒｌ） ７］．， ３４１−３４３）。内在
性ベルオキシダーゼと非特異的タンパク質の結合部位を
脱パラフィン化（ｄｅｐａｒａｆ ｆ ｉｎａｔ ｉｏ
ｎ） Ｌて、阻害した後に、ビオチニル化したＲｉｃｉ
ｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ凝集素（ＲＣ八−１＞（Ｓｉ
ｇｍａ）を当該切片に適用した。適切に洗浄した後に、
スＩ〜レプトアビジンヒオチニル化したワサビダイコン
のベルオキシダーゼ複合物と共にインキユベートした。
料及び方法： レクヂンで染色するために、前記と同様の手法を使用す
ることがてきる（Ｍａｎｎｏｊｉ Ｈ．， Ｈ． Ｙｇ
ｅｒＬ．Ｅ． ＢｅＣｋｅｒ （１９８６）Δｓｐｅｃ
ｉｆｉｃ ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｍａｒｋｅｒ
（ｌｅｃｔｉｎ Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ
ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ−１）ｆｏｒ ｎｏｒｍａｌ ｈ
ｕｍａｎ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃ
ａｔｉｏｎｔｏ ｒｏｕｔｉｎｅ ｈｉｓｔｏｐａ
ｔｈｏｌｏｇｙ 八ｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ
ｏｌ（Ｂｅｒｌ） ７］．， ３４１−３４３）。内在
性ベルオキシダーゼと非特異的タンパク質の結合部位を
脱パラフィン化（ｄｅｐａｒａｆ ｆ ｉｎａｔ ｉｏ
ｎ） Ｌて、阻害した後に、ビオチニル化したＲｉｃｉ
ｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ凝集素（ＲＣ八−１＞（Ｓｉ
ｇｍａ）を当該切片に適用した。適切に洗浄した後に、
スＩ〜レプトアビジンヒオチニル化したワサビダイコン
のベルオキシダーゼ複合物と共にインキユベートした。
ジアミノベンジジンを使用して最終的にインキユヘート
した。あらかじめラクトースでインキユヘートすると、
小膠細胞の総ての標識がなくなる。
した。あらかじめラクトースでインキユヘートすると、
小膠細胞の総ての標識がなくなる。
ｂ）結果
６３
確かに、総ての実施例においてＲＣ＾−１標識細胞は、
ＡＭＣ３０モノクローナル抗体で標識した細胞に匹敵し
、また小膠細胞についての従来の形態基準に適合してい
た。しかしなから、ＲＣＡ−１は更に、ＡＭＣ３０モノ
クローナル抗体に対しては陰性のままであった内皮細胞
及びある種の神経膠星状細胞を染色した。
ＡＭＣ３０モノクローナル抗体で標識した細胞に匹敵し
、また小膠細胞についての従来の形態基準に適合してい
た。しかしなから、ＲＣＡ−１は更に、ＡＭＣ３０モノ
クローナル抗体に対しては陰性のままであった内皮細胞
及びある種の神経膠星状細胞を染色した。
脱リン酸化実験：
ａ）材料及び方法：
ＡＭＣ３０モノクローナル抗体がリン酸化エピトープに
対するものであるかどうかを評価するために、半精製し
たＮＦＴをＰＶＣプレートに被覆し、次いで０．０ＩＭ
フェニルーメチル−スルホニルーフルオリドを含む１０
０ｍＮ ０．１Ｍ ｝リス緩衝液（ｐＨ８．０）中のＩ
ＩＵのタイプｍ Ｅ．ｃｏｌｉアルカリ性ホスファター
ゼで一晩３７℃で処理した。次いで、ＡＭＣ３０モノク
ローナル抗体を適用し、３．３’ ，５．５’−テトラ
メチルベンジジン（ＴＭＢ） （Ｂｏｅｈｒ ｉｎｇｅ
ｒ）を基質として使用して、６４ アビジン〜ヒオチニル化ベルオキシダーゼ複合物（八ｍ
ｅｒｓｈａ＋ｎ）のＥＬＩＳＡ法を実施した。ＧＦＡＰ
（抗神経膠原線維酸性タンパク質）及びモノクローナ
ル抗ＧＦ八Ｐ並びにニューロフィラメントタンパク質及
びモノクローナル抗ニューロフィラメント抗体を対照と
して使用した。モノクローナル抗ＧＦ八Ｐは非リン酸化
エピトープに対するものてあり、モノクローナル抗ニュ
ーロフイラメンｌ・抗体はリン酸化エピトープに対する
ものであった（Ｇｂｅｕｅｎｓ等、未発表テータ）。
対するものであるかどうかを評価するために、半精製し
たＮＦＴをＰＶＣプレートに被覆し、次いで０．０ＩＭ
フェニルーメチル−スルホニルーフルオリドを含む１０
０ｍＮ ０．１Ｍ ｝リス緩衝液（ｐＨ８．０）中のＩ
ＩＵのタイプｍ Ｅ．ｃｏｌｉアルカリ性ホスファター
ゼで一晩３７℃で処理した。次いで、ＡＭＣ３０モノク
ローナル抗体を適用し、３．３’ ，５．５’−テトラ
メチルベンジジン（ＴＭＢ） （Ｂｏｅｈｒ ｉｎｇｅ
ｒ）を基質として使用して、６４ アビジン〜ヒオチニル化ベルオキシダーゼ複合物（八ｍ
ｅｒｓｈａ＋ｎ）のＥＬＩＳＡ法を実施した。ＧＦＡＰ
（抗神経膠原線維酸性タンパク質）及びモノクローナ
ル抗ＧＦ八Ｐ並びにニューロフィラメントタンパク質及
びモノクローナル抗ニューロフィラメント抗体を対照と
して使用した。モノクローナル抗ＧＦ八Ｐは非リン酸化
エピトープに対するものてあり、モノクローナル抗ニュ
ーロフイラメンｌ・抗体はリン酸化エピトープに対する
ものであった（Ｇｂｅｕｅｎｓ等、未発表テータ）。
ｂ）結果．
アルカリ性ホスンアターゼで処理した半精製ＮＦＴは、
ＡＭＣ３０モノクローナル抗体との反応性を維持してい
た。このことは八ＭＣ３０がリン酸化エピトープに対ず
るものではないことを示していた。
ＡＭＣ３０モノクローナル抗体との反応性を維持してい
た。このことは八ＭＣ３０がリン酸化エピトープに対ず
るものではないことを示していた。
他の方法
Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ二重免疫拡散実験て、クラス及
びタイプ特異的な抗マウス免疫グロブリン試薬（Ｌｉｔ
ｔｏｎ Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ）を使用して、モノクロー
ナル抗体のクラス及びタイプを決定した。Ｓ ｅ ｐ
ｈ ａ ｃ ｒ ｙＳ３００（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ゲ
ル枦過クロマトグラフィーを使用して、ＡＭＣ３０モノ
クローナル抗体を精製した。
びタイプ特異的な抗マウス免疫グロブリン試薬（Ｌｉｔ
ｔｏｎ Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ）を使用して、モノクロー
ナル抗体のクラス及びタイプを決定した。Ｓ ｅ ｐ
ｈ ａ ｃ ｒ ｙＳ３００（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ゲ
ル枦過クロマトグラフィーを使用して、ＡＭＣ３０モノ
クローナル抗体を精製した。
実施例［ ： ＡＭＣ３０ハイブリドーマ培養株からス
イッチバリアント（Ｓ切ｉｔｃｂ ｖａｒｉａｎｔ）モ
ノクローナル抗体（ＴｇＧクラス、ｋａｐｐａタイプ）
の製造１ ） ＡＭＣ３０ハイブリドーマ培養株から
ｒｇｃ，，ｋａｐｐａタイプの抗体を分泌するスイッチ
バリアントの選択 八ＭＣ３０ハイブリドーマはＩｇＭクラスでｋａｐｐａ
タイプのモノクローナル抗体を分泌する。しかしなから
、ＩＢＭモノクローナル抗体は免疫化学的適用において
、ＩｇＧモノクローナル抗体に比べて技術的な欠点を有
し得る。従って本発明者等は、ＡＭＣ３０ハイブリドー
マ培養株からＩｇＭクラスでｋａｐｐａタイプのＡＭＣ
３０モノクローナル抗体と匪二ｍ注を有する■ｇＧ１ク
ラスのｋａｐｐａタイプの抗体を分泌するハリアン１〜
を選択してクローニングすることのできる方法を発案し
た。異なるクラスの抗体を分泌するこのようないわゆる
゛ス，イッチバリアント”は、ＩＢＭを分泌するハイブ
リドーマで特発的に生しることが知られている。しかし
なからこのような事象は稀であり、僅かに１０−５〜１
０−８の頻度で生しると推定される。従って、過剰成長
か発生ずる前に所望のスイッチバリアントをＩＢＭ産土
ハイブリドーマから速やかに識別、選択及びクローニン
クしな（つれはならない。
イッチバリアント（Ｓ切ｉｔｃｂ ｖａｒｉａｎｔ）モ
ノクローナル抗体（ＴｇＧクラス、ｋａｐｐａタイプ）
の製造１ ） ＡＭＣ３０ハイブリドーマ培養株から
ｒｇｃ，，ｋａｐｐａタイプの抗体を分泌するスイッチ
バリアントの選択 八ＭＣ３０ハイブリドーマはＩｇＭクラスでｋａｐｐａ
タイプのモノクローナル抗体を分泌する。しかしなから
、ＩＢＭモノクローナル抗体は免疫化学的適用において
、ＩｇＧモノクローナル抗体に比べて技術的な欠点を有
し得る。従って本発明者等は、ＡＭＣ３０ハイブリドー
マ培養株からＩｇＭクラスでｋａｐｐａタイプのＡＭＣ
３０モノクローナル抗体と匪二ｍ注を有する■ｇＧ１ク
ラスのｋａｐｐａタイプの抗体を分泌するハリアン１〜
を選択してクローニングすることのできる方法を発案し
た。異なるクラスの抗体を分泌するこのようないわゆる
゛ス，イッチバリアント”は、ＩＢＭを分泌するハイブ
リドーマで特発的に生しることが知られている。しかし
なからこのような事象は稀であり、僅かに１０−５〜１
０−８の頻度で生しると推定される。従って、過剰成長
か発生ずる前に所望のスイッチバリアントをＩＢＭ産土
ハイブリドーマから速やかに識別、選択及びクローニン
クしな（つれはならない。
我々の使用した方法は以下の通りてある。各々か０．１
５＋ｎＮの完全培地に１０３個のＡＭＣ３０ハイブリド
ーマ細胞を含んでいる一連の４８０個の培養株を５枚の
９６ウェルプレートに置いた。完全な培地は、多量のグ
ルコース（４ ，５００ｍｇ／Ｌ）を含み且つ１．２ｍ
Ｍのピルビン酸ナ１・リウムと、２ｍＭのグルタミンと
、１，００１．Ｕ．／ｍ１のペニシリンと、１００ Ｉ
．Ｕ．／ｍｆのス１・レプ１〜マイシンと、１０％の熱
失活ク５６゜Ｃて３０分）ウシＧ７ 胎児血清を加えたＤｕｌｂｃｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉ
ｅｄ Ｅａｇｌｅ培地てあった。５％のＣ０２雰囲気下
において３７℃で５日間インキ．７−へ−１〜した後に
、（後述する如く）各培養株をＴｇＧｌの産生について
スクリーニングした。
５＋ｎＮの完全培地に１０３個のＡＭＣ３０ハイブリド
ーマ細胞を含んでいる一連の４８０個の培養株を５枚の
９６ウェルプレートに置いた。完全な培地は、多量のグ
ルコース（４ ，５００ｍｇ／Ｌ）を含み且つ１．２ｍ
Ｍのピルビン酸ナ１・リウムと、２ｍＭのグルタミンと
、１，００１．Ｕ．／ｍ１のペニシリンと、１００ Ｉ
．Ｕ．／ｍｆのス１・レプ１〜マイシンと、１０％の熱
失活ク５６゜Ｃて３０分）ウシＧ７ 胎児血清を加えたＤｕｌｂｃｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉ
ｅｄ Ｅａｇｌｅ培地てあった。５％のＣ０２雰囲気下
において３７℃で５日間インキ．７−へ−１〜した後に
、（後述する如く）各培養株をＴｇＧｌの産生について
スクリーニングした。
反応した培養株の２００個の細胞を、Ｏ．］．５ｍｆの
完全培地の９６ウェルプレ−１〜て平板培養して、５口
後にＩ．Ｇ．の産生についてスクリーニンクした。次い
てＩｇＧ１を分泌した培養株を、それぞれかウェル１個
に対して１．００個、１０個及び０．５個の細胞と、１
０５個のＢＡＬＢ／ｃ胸腺リンパ球のフィーター細胞（
ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ ｆｅｅｄｅｒ ｃｅｌｌｓ）とを
含んでいる３組の０．１ｍＮの培養株でクローニングし
た。６日後に、細胞成長したウェルをＩｇＧ．の産生物
の存在と、ＩｇＭ産生物の不在についてスクリーニング
した。次いでウェル１個に対して０．３個の細胞を含ん
ている、ＩｇＧ，が陽性て、ＩｇＭか陰性の培養株を前
述した如く再度クローニングして、７日後に再度試験し
た。
完全培地の９６ウェルプレ−１〜て平板培養して、５口
後にＩ．Ｇ．の産生についてスクリーニンクした。次い
てＩｇＧ１を分泌した培養株を、それぞれかウェル１個
に対して１．００個、１０個及び０．５個の細胞と、１
０５個のＢＡＬＢ／ｃ胸腺リンパ球のフィーター細胞（
ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ ｆｅｅｄｅｒ ｃｅｌｌｓ）とを
含んでいる３組の０．１ｍＮの培養株でクローニングし
た。６日後に、細胞成長したウェルをＩｇＧ．の産生物
の存在と、ＩｇＭ産生物の不在についてスクリーニング
した。次いでウェル１個に対して０．３個の細胞を含ん
ている、ＩｇＧ，が陽性て、ＩｇＭか陰性の培養株を前
述した如く再度クローニングして、７日後に再度試験し
た。
このようにしてＩｇＧ．を分泌ずる八ＭＣ３０ハイブリ
ド一６只 ーマのスイ・ンチハリアン１〜を分離した。八ＭＣ３０
モノクローナル抗体について説明した如く抗原特異性に
ついて抗体を試験した。結果は、ＩｇＧｌスイッチバリ
アン１〜モノクローナル抗体がＩ８Ｍ ＡＭＣ３０と同
一の抗原特異性を有することを示していた。（後述する
如く）■ｇＧ１スイッチハリアン１・モノクローナル抗
体がＡＨＣ３０ ＩｇＭモノクローナル抗体と同一のイ
ディオタイプを発現するこども判明した。
ド一６只 ーマのスイ・ンチハリアン１〜を分離した。八ＭＣ３０
モノクローナル抗体について説明した如く抗原特異性に
ついて抗体を試験した。結果は、ＩｇＧｌスイッチバリ
アン１〜モノクローナル抗体がＩ８Ｍ ＡＭＣ３０と同
一の抗原特異性を有することを示していた。（後述する
如く）■ｇＧ１スイッチハリアン１・モノクローナル抗
体がＡＨＣ３０ ＩｇＭモノクローナル抗体と同一のイ
ディオタイプを発現するこども判明した。
２）ハイフリ１ヘーマ培養株によるＩ．Ｇ，分泌の検出
用スクリーニンクアッセイ ポリ塩化ヒニルの平底９６ウェルプレー１〜（Ｎｕｎｃ
Ｆ１６ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）を、００１Ｍの塩化ナｌ・
リウムと、０．ＯＩＭのアシ化ナ１・リウムと、０．０
ＩＭの１〜リス緩衝液（ｐＨ８．５）とて１：１０００
に希釈した１００μｌのボリクローナルラヒッＩ−抗マ
ウスＩＥＧ，血清（Ｏｒｇａｎｏｎ）を使用して４゜Ｃ
で一晩中被覆した。以後、総て３７゜Ｃでインキュへ−
１〜した。００５％のＴｗｅｅｎ ８０を含むＰＢＳ（
Ｔｗｅｅｎ−ＰＢＳ）て２度洗浄した後に、１０％のカ
ゼインを含む１５０μｌのＰＢＳ（カゼイン−ＰＢＳ）
で１時間プレー１・を飽和した。次いて、プレー１〜を
Ｔｕ＋ｅｅｎ−ＰＢＳで３度洗浄し、１００ｔｉ（！の
試験すべき」二澄み液を加えた。１時間後にプレー１〜
を再度洗浄し、カゼインーＰＢＳで１：２０００に希釈
した］−００μｌのピオチニル化したヤギの抗マウスｒ
ｇｃ ．血清（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を各ウェルに加えた
。１時間後にプレー１へを３度洗浄し、カゼイン−ＰＢ
Ｓで３０分間１：］．ＯＯＯに希釈した１００μｌのス
トレプトアビジンービオチニル化ベルオキシターゼ複合
物（八ｍｅｒｓｈａｍ ＲＰＮ １０５１）と共にイン
キヱベ−１〜した。次いて、プレートをＴ ｕ＋ ｃ
ｅ ｎＰＢＳで４度洗浄し、０００４％の過酸化水素を
含む０．０００４Ｍ ３．３′，５．５’−テトラメチ
ルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢｏｅｈｒｉＢｅｒ ７８４
９７４）の０．１Ｍホスフェートーシｌ−レーｌ−緩衝
液１００μ１（ｐＨ４．３）を各ウェルに加えた。
用スクリーニンクアッセイ ポリ塩化ヒニルの平底９６ウェルプレー１〜（Ｎｕｎｃ
Ｆ１６ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）を、００１Ｍの塩化ナｌ・
リウムと、０．ＯＩＭのアシ化ナ１・リウムと、０．０
ＩＭの１〜リス緩衝液（ｐＨ８．５）とて１：１０００
に希釈した１００μｌのボリクローナルラヒッＩ−抗マ
ウスＩＥＧ，血清（Ｏｒｇａｎｏｎ）を使用して４゜Ｃ
で一晩中被覆した。以後、総て３７゜Ｃでインキュへ−
１〜した。００５％のＴｗｅｅｎ ８０を含むＰＢＳ（
Ｔｗｅｅｎ−ＰＢＳ）て２度洗浄した後に、１０％のカ
ゼインを含む１５０μｌのＰＢＳ（カゼイン−ＰＢＳ）
で１時間プレー１・を飽和した。次いて、プレー１〜を
Ｔｕ＋ｅｅｎ−ＰＢＳで３度洗浄し、１００ｔｉ（！の
試験すべき」二澄み液を加えた。１時間後にプレー１〜
を再度洗浄し、カゼインーＰＢＳで１：２０００に希釈
した］−００μｌのピオチニル化したヤギの抗マウスｒ
ｇｃ ．血清（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を各ウェルに加えた
。１時間後にプレー１へを３度洗浄し、カゼイン−ＰＢ
Ｓで３０分間１：］．ＯＯＯに希釈した１００μｌのス
トレプトアビジンービオチニル化ベルオキシターゼ複合
物（八ｍｅｒｓｈａｍ ＲＰＮ １０５１）と共にイン
キヱベ−１〜した。次いて、プレートをＴ ｕ＋ ｃ
ｅ ｎＰＢＳで４度洗浄し、０００４％の過酸化水素を
含む０．０００４Ｍ ３．３′，５．５’−テトラメチ
ルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢｏｅｈｒｉＢｅｒ ７８４
９７４）の０．１Ｍホスフェートーシｌ−レーｌ−緩衝
液１００μ１（ｐＨ４．３）を各ウェルに加えた。
３７℃て３０分置いた後に各ウェルに５０μｌの２Ｍ硫
酸を加えて反応を停止さぜた。４ ５ ０ ｎ ｍで吸
収を読み取った。
酸を加えて反応を停止さぜた。４ ５ ０ ｎ ｍで吸
収を読み取った。
ハイブリ１ヘーマによるＩｇＭ分泌を検出するために、
プレー１〜をポリクローナルラヒット抗マウスＩｇＭ血
清で被覆して、ヒオチレニル化したヤギの抗マウスＩｇ
Ｍ血清を第２試薬として使用した。他の点では、スクリ
ーニングアッセイは前述した内容と同一であった。
プレー１〜をポリクローナルラヒット抗マウスＩｇＭ血
清で被覆して、ヒオチレニル化したヤギの抗マウスＩｇ
Ｍ血清を第２試薬として使用した。他の点では、スクリ
ーニングアッセイは前述した内容と同一であった。
実施例Ｉ ： ＡＭＣ３０に対ずる同遺伝子型モノクロ
ーナル抗イディオタイプ抗体の製造： 八ＭＣ３０ ＩｇＭクラスてｋａｐｐａタイフ゜のモノ
クローナル抗体、更にはＡＭＣ３０ハイブリドーマの■
ｇＧ１クラスでｋａｐｐａタイプのスイッチバリアント
（前記項参照）により分泌されるＩｇＧ．クラスでｋａ
ｐｐａタイプのモノクローナル抗体を、前述した如くそ
のイディオタイプで規定する。
ーナル抗イディオタイプ抗体の製造： 八ＭＣ３０ ＩｇＭクラスてｋａｐｐａタイフ゜のモノ
クローナル抗体、更にはＡＭＣ３０ハイブリドーマの■
ｇＧ１クラスでｋａｐｐａタイプのスイッチバリアント
（前記項参照）により分泌されるＩｇＧ．クラスでｋａ
ｐｐａタイプのモノクローナル抗体を、前述した如くそ
のイディオタイプで規定する。
１）モノクローナル抗体＾ＭＣ３０に対する同遺伝子型
抗イディオタイプ血清の製造 ＡＭＣ３０モノクローナル抗体をＳｅｐｈａｃｒｙｌ
Ｓ−３００のゲル枦過ＦＰＬＣ （カラムＣ２６，Ｌ：
８６ｃｍ）により、八ＭＣ３０７１ ハイブリドーマ腹水から精製した。試料は０．０７７Ｍ
の塩化ナトリウムを含む０．０８ＭホスフエートＭ＠液
で１：２に希釈した１０ｎ＋４のＡＭＣ３０ハイブリド
ーマ腹水であった。流量は１０ｍＲ／時であった。ＡＭ
Ｃ３０モノクローナル抗体はそのボイド容量（ｖｏｉｄ
ｖｏｌｕｍｅ）で表われた。次いで精製八ＭＣ３０を
生理食塩水中ｌｍｇ／ｍＮに濃縮した。生後ｌＯ〜１２
週のＢＡＬＢ／ｃマウスを以下の如く免疫感作した。Ｂ
ｏｎａ等の論文に記載されている如く精製ＡＭＣ３０を
グルタルアルデヒドでアオガイヘモシアニン（Ｋｌｊｌ
）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ） （＋．ｍｇ／生理食塩水
１ｍｌ）に抱合した。得られたＡＭＣ３０−ＫＬＩ｛抱
合体（ｃｏｎ ｊｕＦｉａｔｅ）を完全なＦｒｅｕｎｄ
アジュバンｌ・で乳化すると、７５μｇのＡＭＣ３０−
ＫＬ｝ｌ抱合体と、１００μｇのマイコバクテリウムツ
ベルクローシス（ヒト型結核菌）Ｈ３７ Ｒａ（Ｄｉｆ
ｃｏ）とを含む１００μｌのエマルションが得られた。
抗イディオタイプ血清の製造 ＡＭＣ３０モノクローナル抗体をＳｅｐｈａｃｒｙｌ
Ｓ−３００のゲル枦過ＦＰＬＣ （カラムＣ２６，Ｌ：
８６ｃｍ）により、八ＭＣ３０７１ ハイブリドーマ腹水から精製した。試料は０．０７７Ｍ
の塩化ナトリウムを含む０．０８ＭホスフエートＭ＠液
で１：２に希釈した１０ｎ＋４のＡＭＣ３０ハイブリド
ーマ腹水であった。流量は１０ｍＲ／時であった。ＡＭ
Ｃ３０モノクローナル抗体はそのボイド容量（ｖｏｉｄ
ｖｏｌｕｍｅ）で表われた。次いで精製八ＭＣ３０を
生理食塩水中ｌｍｇ／ｍＮに濃縮した。生後ｌＯ〜１２
週のＢＡＬＢ／ｃマウスを以下の如く免疫感作した。Ｂ
ｏｎａ等の論文に記載されている如く精製ＡＭＣ３０を
グルタルアルデヒドでアオガイヘモシアニン（Ｋｌｊｌ
）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ） （＋．ｍｇ／生理食塩水
１ｍｌ）に抱合した。得られたＡＭＣ３０−ＫＬＩ｛抱
合体（ｃｏｎ ｊｕＦｉａｔｅ）を完全なＦｒｅｕｎｄ
アジュバンｌ・で乳化すると、７５μｇのＡＭＣ３０−
ＫＬ｝ｌ抱合体と、１００μｇのマイコバクテリウムツ
ベルクローシス（ヒト型結核菌）Ｈ３７ Ｒａ（Ｄｉｆ
ｃｏ）とを含む１００μｌのエマルションが得られた。
各マウスの腹膜組織内にこのエマルション５０μｌを投
与し、他の５０μｌを後ろ脚の肉証と凧径部及び腋窩部
との間に配分した。１７２ 回目の免疫感作から５日目に、７５μｇのＡＭＣ３０−
ＫＬＨ抱合体を含む１００μｌの不完全なＦｒｅｕｎｄ
アジュバンｌ・を腋窩部と凧径部とに注射した。腋窩部
と単径部とに７５μｇの抱合体を含む生理食塩水を１週
間に１度投与してマウスをブーストした。マウスは最初
注射から６日目に、それ以後は２週間に一度採血した。
与し、他の５０μｌを後ろ脚の肉証と凧径部及び腋窩部
との間に配分した。１７２ 回目の免疫感作から５日目に、７５μｇのＡＭＣ３０−
ＫＬＨ抱合体を含む１００μｌの不完全なＦｒｅｕｎｄ
アジュバンｌ・を腋窩部と凧径部とに注射した。腋窩部
と単径部とに７５μｇの抱合体を含む生理食塩水を１週
間に１度投与してマウスをブーストした。マウスは最初
注射から６日目に、それ以後は２週間に一度採血した。
同遺伝子型抗血清の抗イディオタイプの種類は、ＩｇＭ
クラスでｋａｐｐａタイプの他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グロ
ブリン又は他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グロブリンではな＜
、八ＭＣ３０及ひＡＭＣ３０から得られる産生物に対す
る抗血清の免疫特異性と相関関係にある。文献に記載の
如く、適切なＥＬＩＳＡ法、又は免疫グロブリンを被覆
したヒツジの赤血球による凝集検定を使用してこれを実
施した。
クラスでｋａｐｐａタイプの他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グロ
ブリン又は他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グロブリンではな＜
、八ＭＣ３０及ひＡＭＣ３０から得られる産生物に対す
る抗血清の免疫特異性と相関関係にある。文献に記載の
如く、適切なＥＬＩＳＡ法、又は免疫グロブリンを被覆
したヒツジの赤血球による凝集検定を使用してこれを実
施した。
２ ） ＡＭＣ３０に対する同遺伝子型モノクローナ
ル抗イディオタイプ抗体の製造 前項に記載した如＜ ＡＭＣ３０−ＫＬＨ抱合体て免疫
感作したマウスから採取した脾臓細胞を本明細書に別に
記載した方法でＢＡＬＢ／ｃ骨髄腫細胞と融合して、ハ
イブリドーマ細胞培養株を形成することができる。前述
した多価の抗体ラジオイムノアツセイ（Ｇｈｅｕｅｎｓ
Ｊ．， ＭｃＦａｒｌｉｎ Ｄ．Ｅ．： Ｍｕｌｔｉ
ｖａｌｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ ｒａｄｉｏｉｍｍｕ
ｎｏａｓｓａｙ （Ｍ八ＲＴ八） ｆｏｒｓｃｒｅ
ｅｎｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓ
ｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙＩｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｈｙｂ
ｒｉｄｏｍａ ｃｕｌｔｕｒｅｓ． Ｍｅｔｈ． Ｅｎ
ｚｙｍｏｌ．１２１： ４２５−４３３， １９８６）
を使用して、ＡＭＣ３０モノクローナル抗体に対する抗
体産生について、ハイブリドーマ培養株をスクリーニン
グすることができる。八ＭＣ３０に対するこのようなモ
ノクローナル抗体の抗イディオタイプの種類を文献に記
載の如く評価することができた。抗体の抗イデイオタイ
プの種類は、ＩｇＭクラスでｋａｐｐａタイプの他のＢ
ＡＬＢ／ｃ免疫グロブリン又は他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グ
ロブリンではな＜ 、ＡＭＣ３０及びＡＭＣ３０から得
られる産生物に対するこのような抗体の免疫特異性と相
関関係にある。
ル抗イディオタイプ抗体の製造 前項に記載した如＜ ＡＭＣ３０−ＫＬＨ抱合体て免疫
感作したマウスから採取した脾臓細胞を本明細書に別に
記載した方法でＢＡＬＢ／ｃ骨髄腫細胞と融合して、ハ
イブリドーマ細胞培養株を形成することができる。前述
した多価の抗体ラジオイムノアツセイ（Ｇｈｅｕｅｎｓ
Ｊ．， ＭｃＦａｒｌｉｎ Ｄ．Ｅ．： Ｍｕｌｔｉ
ｖａｌｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ ｒａｄｉｏｉｍｍｕ
ｎｏａｓｓａｙ （Ｍ八ＲＴ八） ｆｏｒｓｃｒｅ
ｅｎｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓ
ｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙＩｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｈｙｂ
ｒｉｄｏｍａ ｃｕｌｔｕｒｅｓ． Ｍｅｔｈ． Ｅｎ
ｚｙｍｏｌ．１２１： ４２５−４３３， １９８６）
を使用して、ＡＭＣ３０モノクローナル抗体に対する抗
体産生について、ハイブリドーマ培養株をスクリーニン
グすることができる。八ＭＣ３０に対するこのようなモ
ノクローナル抗体の抗イディオタイプの種類を文献に記
載の如く評価することができた。抗体の抗イデイオタイ
プの種類は、ＩｇＭクラスでｋａｐｐａタイプの他のＢ
ＡＬＢ／ｃ免疫グロブリン又は他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グ
ロブリンではな＜ 、ＡＭＣ３０及びＡＭＣ３０から得
られる産生物に対するこのような抗体の免疫特異性と相
関関係にある。
Claims (25)
- （１）中枢神経系の活性化小膠細胞に属し且つアルツハ
イマー病患者から得た大脳皮質から分離した超音波処理
ＮＦＴ調製物から解離した抗原の非リン酸化エピトープ
と免疫複合物を形成し、また中枢神経系の組織球及びマ
クロファージと免疫複合物を形成することを特徴とする
モノクローナル抗体。 - （２）１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託さ
れたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ＩｇＭ
）又は１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託さ
れたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ＩｇＧ
）により分泌されるモノクローナル抗体に対して生じた
同遺伝子型ポリクローナル抗イディオタイプ血清、特に
モノクローナル抗イディオタイプ抗体と免疫複合物を形
成することを特徴とするモノクローナル抗体。 - （３）中枢神経系の活性化小膠細胞に属し且つアルツハ
イマー病患者から得た大脳皮質から分離した超音波処理
ＮＦＴ調製物から解離した抗原の非リン酸化エピトープ
と免疫複合物を形成し、また中枢神経系の組織球及びマ
クロファージと免疫複合物を形成し、且つ１９８９年７
月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイブリドーマ
ｎ°Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ＩｇＭ）又は１９８９年７
月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｈ．に寄託されたハイブリドーマ
ｎ゜Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ＩｇＧ）により分泌される
モノクローナル抗体に対して生じた同遺伝子型ポリクロ
ーナル抗イディオタイプ血清、特にモノクローナル抗イ
ディオタイプ抗体と免疫複合物を形成することを特徴と
するモノクローナル抗体。 - （４）ＩｇＭクラスのｋａｐｐａタイプであるか又はＩ
ｇＧクラスのｋａｐｐａタイプであることを特徴とする
請求項１から３のいずれか一項に記載のモノクローナル
抗体。 - （５）病理学的状態の中枢神経系の静止小膠細胞と免疫
学的に結合しないこと、中枢神経系とは異なる器官のマ
クロファージと免疫学的に結合しないこと、神経原繊維
のからまり部分又はアミロイドと免疫学的に結合しない
こと、内皮細胞又は神経膠星状細胞と免疫学的に結合し
ない（但しＲＣＡ−１は同一条件下で該細胞と免疫複合
物を形成する）こと、健康な中枢神経系の小膠細胞と免
疫学的に結合しないことを特徴とする請求項１から４の
いずれか一項に記載のモノクローナル抗体。 - （６）エイズの特徴である多核巨大細胞と免疫学的に結
合すること、神経梅毒患者の脳から採取した桿状体細胞
と免疫学的に結合すること、ピック病、筋萎縮性側索硬
化症又はグアムのパーキンソン痴呆症候群の患者の脳か
ら採取した細胞と免疫学的に結合すること、悪性大脳組
織球症の場合の組織球と免疫学的に結合することを特徴
とする請求項１から５のいずれか一項に記載のモノクロ
ーナル抗体。 - （７）１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託さ
れたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ＩｇＭ
）又は１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託さ
れたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ＩｇＧ
）により分泌されるモノクローナル抗体。 - （８）アルツハイマー病患者の大脳皮質から分離した超
音波処理ＮＦＴ調製物から解離した抗原と免疫複合物を
形成し、抗原自体が１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．
Ｍ．に寄託されたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８１（ＡＭ
Ｃ３０ＩｇＭ）又は１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．
Ｍ．に寄託されたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８２（ＡＭ
Ｃ３０ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナル抗体と
免疫複合物を形成することを特徴とするモノクローナル
抗体。 - （９）中枢神経系以外の器官のマクロファージ、神経原
線維のからまり部分又はアミロイド、内皮細胞又は神経
膠星状細胞（但しＲＣＡ−１は同一条件下で該細胞と免
疫複合物を形成する）、正常な中枢神経系の小膠細胞と
免疫学的に結合しない ことを特徴とする請求項８に記載のモノクローナル抗体
。 - （１０）請求項１から９のいずれか一項に記載のモノク
ローナル抗体を分泌するハイブリドーマ。 - （１１）アルツハイマー病患者から得た大脳皮質から分
離した超音波処理ＮＦＴ調製物により解離し得、且つ請
求項１から９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗
体と免疫複合物を形成することを特徴とする抗原。 - （１２）正常な骨髄、リンパ節、肺若しくは脾臓の単核
細胞又はマクロファージで表現されないことを特徴とす
る請求項１１に記載の抗原。 - （１３）活性化小膠細胞を含むアルツハイマー病、エイ
ズ、任意の脳感染又は脳腫瘍の患者の脳、脳を髄液又は
血清に含まれ、且つ請求項１から９のいずれか一項に記
載のモノクローナル抗体と免疫複合物を形成することを
特徴とする抗原。 - （１４）１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託
されたハイブリドーマｎ゜Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０Ｉｇ
Ｍ）又は１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託
されたハイブリドーマｎ゜Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０Ｉｇ
Ｇ）により分泌されるモノクローナル抗体と免疫複合物
を形成することを特徴とする抗原。 - （１５）請求項１から９のいずれか一項に記載のモノク
ローナル抗体と免疫複合物を形成することを特徴とする
モノクローナル抗イディオタイプ抗体。 - （１６）１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託
されたハイブリドーマｎ°Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０Ｉｇ
Ｍ）又は１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託
されたハイブリドーマｎ°−８８２（ＡＭＣ３０ＩｇＧ
）により分泌されるモノクローナル抗体と免疫複合物を
形成することを特徴とするモノクローナル抗イディオタ
イプ抗体。 - （１７）請求項１から９のいずれか一項に記載のモノク
ローナル抗体を分泌するハイブリドーマの製造・分離方
法であって、あらかじめ￥ｉｎｖｉｖｏ￥免疫感作した
動物、例えばマウス若しくはラットの脾臓細胞、又は１
９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたハイ
ブリドーマｎ°Ｉ−８８１（ＡＭＣ３０ＩｇＭ）若しく
は１９８９年７月５日にＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託された
ハイブリドーマｎ°Ｉ−８８２（ＡＭＣ３０ＩｇＧ）に
より分泌されるモノクローナル抗体により認識される抗
原とあらかじめ￥ｉｎｖｉｔｒｏ￥免疫感作した前記の
ような動物の脾臓細胞を出発材料とし、免疫感作した細
胞をハイブリドーマ形成条件下で骨髄腫細胞と融合し、
請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の抗原の非リン
酸化構造エピトープを特異的に識別し且つ中枢神経系の
組織球及びマクロファージと免疫複合物を形成するモノ
クローナル抗体を分泌するハイブリドーマを選択するこ
とからなることを特徴とする方法。 - （１８）請求項１から９のいずれか一項に記載のモノク
ローナル抗体の製造方法であって、請求項８に記載の選
択したハイブリドーマを適切な培地で培養し、選択した
ハイブリドーマにより排出されるモノクローナル抗体を
回収するか又は、マウスの腹膜に選択したハイブリドー
マを移植し、マウスに腹水が生じると、形成されたモノ
クローナル抗体を腹水から回収することからなることを
特徴とする方法。 - （１９）請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の抗原
の製造方法であって、請求項１１〜１４のいずれか一項
に記載の抗原をコードする核酸又は核酸の断片を出発材
料とし、該核酸又は該核酸の断片を、適切なプロモータ
ー及びその後の適切な終結コドンの制御下で適切なベク
ターに挿入し、該抗原を産生するためにコンピテント生
物体を修飾ベクターで形質転換することを含んでなるこ
とを特徴とする方法。 - （２０）活性化小膠細胞を含む脳疾患又は脳感染、例え
ばアルツハイマー病の￥ｉｎｖｉｔｒｏ￥検出又は診断
方法であって、請求項１から９のいずれか一項に記載の
モノクローナル抗体を、アルツハイマー病を患っていた
患者から分離した超音波処理ＮＦＴ調製物と、抗原抗体
複合物製造に適した条件下で接触させ、次いで抗原を該
複合物から分離して、所望の抗原を精製形態で回収する
ことを含んでなることを特徴とする方法。 - （２１）活性化小膠細胞を含む脳疾患又は脳感染、例え
ばアルツハイマー病の￥ｉｎｖｉｔｒｏ￥検出又は診断
方法であって、神経原線維変性、中でも特にアルツハイ
マー病にかかっていると思われる患者から得た細胞調製
物を、抗原抗体複合物形成に適した条件下で請求項１か
ら９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体と￥ｉ
ｎｖｉｔｒｏ￥接触させ、次いで該抗体と該細胞調製物
との免疫結合を検出することからなることを特徴とする
方法。 - （２２）アルツハイマー病、エイズウィルスにより誘発
される脳炎、及び中枢神経系の小膠細胞の顕著な活性化
が見られる他の疾病のいずれかの￥ｉｎｖｉｔｒｏ￥診
断用キットであって、￥ｉｎｖｉｔｒｏ￥診断すべき生
物学的試料を付着させるための少なくとも１枚のマイク
ロプレートと、請求項１から９のいずれか一項に記載の
モノクローナル抗体を含む調製物と、該モノクローナル
抗体との特異標識又は結合用の標識したマーカーと、一
方では試験試料と該モノクローナル抗体との免疫反応を
、他方では結合したモノクローナル抗体とマーカーとの
免疫反応を実施するための適切な緩衝溶液と、場合によ
っては、探索される抗原に対して競合目的用又は標準目
的用に請求項１５若しくは１６に記載のモノクローナル
抗イディオタイプ抗体又は請求項１１〜１４のいずれか
一項に記載の抗原を含んでいることを特徴とするキット
。 - （２３）請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の抗原
をコードする核酸配列。 - （２４）請求項２３に記載の核酸又は請求項２３に記載
の相補的核酸に属する配列を含み、且つそれ自体が請求
項２３に記載の核酸の１０個〜最大数のヌクレオチドを
含むことを特徴とする請求項１１〜１４のいずれか一項
に記載の抗原の存在を検出するためのプローブ。 - （２５）活性化小膠細胞を含む脳疾患又は脳感染、例え
ばアルツハイマー病の￥ｉｎｖｉｔｒｏ￥検出又は診断
方法であって、神経原線維変性、例えばアルツハイマー
病にかかっていると思われる患者の大脳皮質から得られ
且つその核酸が必要時に他の核酸とハイブリダイゼーシ
ョンしやすくなっている細胞調製物、特にＮＦＴを出発
材料とし、細胞調製物又は該細胞調製物からあらかじめ
抽出した核酸を適切なハイブリダイゼーション条件下で
前述したプローブと接触させて該プローブと前記抗 原をコードする配列との間に生じ得るハイブリッドを生
じさせ、生じたハイブリッドが存在するならばそれを検
出し、ハイブリダイゼーションが生起したか否かに基づ
いて該患者における神経原線維変性の有無を評価するこ
とを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP89401932.2 | 1989-07-05 | ||
| EP89401932 | 1989-07-05 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0358797A true JPH0358797A (ja) | 1991-03-13 |
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ID=8202970
Family Applications (1)
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| JP2178472A Pending JPH0358797A (ja) | 1989-07-05 | 1990-07-05 | 活性化小膠細胞に対するモノクローナル抗体、該モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ、該モノクローナル抗体により識別される抗原及びこれらの製造方法 |
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| JP (1) | JPH0358797A (ja) |
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-
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- 1990-07-05 JP JP2178472A patent/JPH0358797A/ja active Pending
Non-Patent Citations (3)
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|---|
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|---|---|
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| CA2020543A1 (en) | 1991-01-06 |
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