JPH03151893A - アルツハイマー病に関与するモノクローナル抗体、これらのモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ、これらの抗体により認識される抗原、及びそれらの適用 - Google Patents
アルツハイマー病に関与するモノクローナル抗体、これらのモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ、これらの抗体により認識される抗原、及びそれらの適用Info
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアルツハイマー病に関与する新規モノクローナ
ル抗体、及びこのようなモノクローナル抗体を分泌する
ハイブリドーマに係る。本発明は更に、該モノクローナ
ル抗体の１つとの間で免疫学的複合体を形成する抗原に
係る。
ル抗体、及びこのようなモノクローナル抗体を分泌する
ハイブリドーマに係る。本発明は更に、該モノクローナ
ル抗体の１つとの間で免疫学的複合体を形成する抗原に
係る。
本発明は更に、アルツハイマー病のｉｎ ｖｉｔｒｏ診
断方法にも係る。
断方法にも係る。
アルツハイマー病（八〇Ｓ）に現れる最も閉著な脳の神
経病理学的異常は、皮質萎縮、ニューロン損失、老年斑
、神経原線維錯綜（ＮＦＴ）及び可変量の血管アミロイ
ド沈着物を含む（Ｓｅｌｋｏｅ ＤＪ、＾１ｔｅｒｅｄ
ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｐｌ
ａｑｕｅｓ ａｎｃｌ ｔａｎｇｌｅｓ：ｗｈｓｔ ｄ
ｏ ｔｈｅｙ ｔｅｌｌ ｕｓ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ
ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉ
ｓｅａｓｅ、 Ｎｅｕｒｏｂｉｏ！、 ＾ｇｉｎｇ
１９８８；７： ４２５−４３２）、このようなＮ
ＦＴは知力の正常な老人にも掻く僅かに検出され得るが
、多数のＨＦＴの混在はアルツハイマー病に典型的な現
象である。超ｌｌ＃構造学的にみると、ＮＦＴ及び老年
斑の異栄養神経突起は対合螺旋状フィラメント（ＰＦＩ
Ｆ）と呼称される直径１０ｎｍの螺旋状フィラメントと
、１２〜１５ｎｍの直線状フィラメント及び無定形エレ
メントを含む（Ｈｉｒａｎｏ ＾、 Ｚｉｍｍｅｒ
ｍａｎ ＯＨ，＾ｌｚｈｅｉｍｅｒｎｅｕｒｏｆｉｂ
ｒｉｌｌａｒｙ ｃｈａｎｇｅｓ、＾ｔｏｐｏｇｒａｐ
ｈ ｉｃａ １ｓｔｕｄｙ、 ＾ｒｃｈ、 Ｎｅｕ
ｒｏｌ、 １９６２； ７： ２２フー２４２−
Ｐｒｉｃｅ ＤＬ、 Ｗｈｉｔｅｂｏｕｓｅ ＰＪ、
５ｔｒｕｂｌｅ ＲＧ。
経病理学的異常は、皮質萎縮、ニューロン損失、老年斑
、神経原線維錯綜（ＮＦＴ）及び可変量の血管アミロイ
ド沈着物を含む（Ｓｅｌｋｏｅ ＤＪ、＾１ｔｅｒｅｄ
ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｐｌ
ａｑｕｅｓ ａｎｃｌ ｔａｎｇｌｅｓ：ｗｈｓｔ ｄ
ｏ ｔｈｅｙ ｔｅｌｌ ｕｓ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ
ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉ
ｓｅａｓｅ、 Ｎｅｕｒｏｂｉｏ！、 ＾ｇｉｎｇ
１９８８；７： ４２５−４３２）、このようなＮ
ＦＴは知力の正常な老人にも掻く僅かに検出され得るが
、多数のＨＦＴの混在はアルツハイマー病に典型的な現
象である。超ｌｌ＃構造学的にみると、ＮＦＴ及び老年
斑の異栄養神経突起は対合螺旋状フィラメント（ＰＦＩ
Ｆ）と呼称される直径１０ｎｍの螺旋状フィラメントと
、１２〜１５ｎｍの直線状フィラメント及び無定形エレ
メントを含む（Ｈｉｒａｎｏ ＾、 Ｚｉｍｍｅｒ
ｍａｎ ＯＨ，＾ｌｚｈｅｉｍｅｒｎｅｕｒｏｆｉｂ
ｒｉｌｌａｒｙ ｃｈａｎｇｅｓ、＾ｔｏｐｏｇｒａｐ
ｈ ｉｃａ １ｓｔｕｄｙ、 ＾ｒｃｈ、 Ｎｅｕ
ｒｏｌ、 １９６２； ７： ２２フー２４２−
Ｐｒｉｃｅ ＤＬ、 Ｗｈｉｔｅｂｏｕｓｅ ＰＪ、
５ｔｒｕｂｌｅ ＲＧ。
Ｃｅ１ｌｕｌａｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ＾ｌｚｈ
ｅｉｍｅｒ ｓ ａｎｄＰａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉ
ｓｅａｓｅ、 Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、 １
９８６；：２９−３３＞、一方、老年斑の中心アミロイ
ド核及び血管アミロイド沈着物は幅４〜８ｎｍの直線状
フィラメントから構成される。アルツハイマー病に認め
られる他の異常ニューロン特徴は顆粒空胞変性及びヒラ
ノ体である（Ｐｒｉｃｅ ＤＬ、前出文献参照）。
ｅｉｍｅｒ ｓ ａｎｄＰａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉ
ｓｅａｓｅ、 Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、 １
９８６；：２９−３３＞、一方、老年斑の中心アミロイ
ド核及び血管アミロイド沈着物は幅４〜８ｎｍの直線状
フィラメントから構成される。アルツハイマー病に認め
られる他の異常ニューロン特徴は顆粒空胞変性及びヒラ
ノ体である（Ｐｒｉｃｅ ＤＬ、前出文献参照）。
ＨＦＴは種々の他の状態、例えば脳炎後パーキンソン症
候群、グアムパーキンソン痴呆複合病及び亜急性硬化性
汎脳炎にも認められる（Ｉｑｂａｌ Ｋ。
候群、グアムパーキンソン痴呆複合病及び亜急性硬化性
汎脳炎にも認められる（Ｉｑｂａｌ Ｋ。
Ｇｒｕｎｄｋｅ−１ｑｂａｌ Ｉ、 Ｗｉｓｎｉｅｗｓ
ｋｉ ＨＭ、＾Ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓｏｆ ｔｈｅ
ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｉ
ｎ ＾Ｉｚｈｅｉｍｅｒ ５ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ
ｒｅｌａｔｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ、 Ｉｎ：
Ｐｅｒｒｙ Ｇ（εｄ）＾Ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉ
ｎ ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔ
ｏｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅ
ａｓｅ、 ＰＩｅｎｕｗ＋ Ｐｒｅｓｓ。
ｋｉ ＨＭ、＾Ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓｏｆ ｔｈｅ
ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｉ
ｎ ＾Ｉｚｈｅｉｍｅｒ ５ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ
ｒｅｌａｔｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ、 Ｉｎ：
Ｐｅｒｒｙ Ｇ（εｄ）＾Ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉ
ｎ ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔ
ｏｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅ
ａｓｅ、 ＰＩｅｎｕｗ＋ Ｐｒｅｓｓ。
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 １９８７； ｐｐ、 １０９−１
３６）、主に直線状フィラメントから構成される別の型
のＮＦＴは進行性核上性麻痺（ステイールーリチャード
ソンーオルゼウスキー症候群に同じ）に認められる（７
６１１ｅｚ−Ｎａｇｅｌｌ、 Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ
８Ｍ、 ＩＪｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏ
ｒｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｙ ｔａｎｇｌｅｓ ｉ
ｎ Ｓｔｅｅｌ−Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ−０１ｓｚｅｗ
ｓｋｉ ５ｙｎｄｒｏｓ＋ｅ、 ＾ｒｃｈ、 Ｎ
ｅｕｒｏｌ、 １９７３； ２９：３２４−３２７
） 、直線状フィラメントはピック体の主要な超微細構
造エレメントでもある（Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ ＨＭ。
３６）、主に直線状フィラメントから構成される別の型
のＮＦＴは進行性核上性麻痺（ステイールーリチャード
ソンーオルゼウスキー症候群に同じ）に認められる（７
６１１ｅｚ−Ｎａｇｅｌｌ、 Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ
８Ｍ、 ＩＪｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏ
ｒｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｙ ｔａｎｇｌｅｓ ｉ
ｎ Ｓｔｅｅｌ−Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ−０１ｓｚｅｗ
ｓｋｉ ５ｙｎｄｒｏｓ＋ｅ、 ＾ｒｃｈ、 Ｎ
ｅｕｒｏｌ、 １９７３； ２９：３２４−３２７
） 、直線状フィラメントはピック体の主要な超微細構
造エレメントでもある（Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ ＨＭ。
Ｃｏｂｌｅｎｔｚ ＪＭ、 Ｔｅｒｒｙ ｉｎ、 Ｐｉ
ｃｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ： ａｃｌｉｎｉｃａｌ ａ
ｎｄ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ５ｔｕｄｙ、
＾ｒｃｈ。
ｃｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ： ａｃｌｉｎｉｃａｌ ａ
ｎｄ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ５ｔｕｄｙ、
＾ｒｃｈ。
Ｎｅｕｒｏｌ、 １９７２； ２６：９フー１０８）
、ピック体は、痴呆をもたらすあまり一般的でない症状
であるピック病に認められる円形親銀性神経含有分であ
る。
、ピック体は、痴呆をもたらすあまり一般的でない症状
であるピック病に認められる円形親銀性神経含有分であ
る。
老年斑核に含まれるアミロイド線維及び血管アミロイド
沈着物の主要なタンパク質構成成分が＾４−ベプチド即
ち不溶性で高凝集性の小ポリペプチド（β−アミロイド
タンパク質に同じ）であることは知られている（Ｍａｓ
ｔｅｒｓ ＣＬ、 ５１ｍ５＋ｓ Ｇ、 Ｗｅｉｎｍａ
ｎＮ＾、 ｅｔ ａｌ、＾ｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ＾１ｚｈｅｉｍｅｒ ｓ
ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｄｏｗｎ ｓ ｓｙ
ｎｄｒｏｍｅ。
沈着物の主要なタンパク質構成成分が＾４−ベプチド即
ち不溶性で高凝集性の小ポリペプチド（β−アミロイド
タンパク質に同じ）であることは知られている（Ｍａｓ
ｔｅｒｓ ＣＬ、 ５１ｍ５＋ｓ Ｇ、 Ｗｅｉｎｍａ
ｎＮ＾、 ｅｔ ａｌ、＾ｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ＾１ｚｈｅｉｍｅｒ ｓ
ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｄｏｗｎ ｓ ｓｙ
ｎｄｒｏｍｅ。
Ｐｒｏｃ、 Ｈａｔｌ、 八ｃａｄ、 Ｓｃｉ、
υＳ八 １９Ｂ５． ８２：４２４５−４２４９
− Ｇｌｅｎｎｅｒ ＧＧ、 Ｈｏｎｇ ＣＨ
，＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ’ ５ｄｉｓｅａｓｅ ： １ｎ
ｉｔｉａｌ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉ
ｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓ−
ｃｕｌａｒ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏ−ｐｈｙｓ。
υＳ八 １９Ｂ５． ８２：４２４５−４２４９
− Ｇｌｅｎｎｅｒ ＧＧ、 Ｈｏｎｇ ＣＨ
，＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ’ ５ｄｉｓｅａｓｅ ： １ｎ
ｉｔｉａｌ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉ
ｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓ−
ｃｕｌａｒ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏ−ｐｈｙｓ。
Ｒｅｓ、 Ｃｏｍｍｕｎ、 １９８４； １２０： ８
８５−８９０）、該タンパク質はグリコジル化細胞表面
レセプターの特徴を表すより大きい前駆物質分子の切断
産物である（ＫａｎＨＪ、ｅｔ ａｔ、、 Ｔｈｅ ｐ
ｒｅｃｕｒｓｏｒ ｏｆ＾Ｉｚｈｅｉｍｅｒ’ ５ｄｉ
ｓｅａｓｅ ａｍｙｌｏｉｄ ＾４ ｐｒｏｔｅ
ｉｎ ｒｅｓｅｅｉｂｌｅｓ ａ ｃｅｌｌ−ｓ
ｕｒｆａｃｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、 Ｎａｔｕｒｅ １
９８７ ； ３２５ ： ７３３−７３Ｂ） 、最近、
このアミロイド前駆物質タンパク質のいくつかの形でセ
リンプロテアーゼインヒビター配列が同定された（Ｔａ
ｎｚｉ ＲＥ、 ＨｃＣｌａｔｃｈｅｙ ＡＩ。
８５−８９０）、該タンパク質はグリコジル化細胞表面
レセプターの特徴を表すより大きい前駆物質分子の切断
産物である（ＫａｎＨＪ、ｅｔ ａｔ、、 Ｔｈｅ ｐ
ｒｅｃｕｒｓｏｒ ｏｆ＾Ｉｚｈｅｉｍｅｒ’ ５ｄｉ
ｓｅａｓｅ ａｍｙｌｏｉｄ ＾４ ｐｒｏｔｅ
ｉｎ ｒｅｓｅｅｉｂｌｅｓ ａ ｃｅｌｌ−ｓ
ｕｒｆａｃｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、 Ｎａｔｕｒｅ １
９８７ ； ３２５ ： ７３３−７３Ｂ） 、最近、
このアミロイド前駆物質タンパク質のいくつかの形でセ
リンプロテアーゼインヒビター配列が同定された（Ｔａ
ｎｚｉ ＲＥ、 ＨｃＣｌａｔｃｈｅｙ ＡＩ。
Ｌａｍｐｅｒｔｉ ＥＤ、ｅｔ ａｌ、 Ｐｒｏｔｅａ
ｓｅ １ｎｈｉｂｉｔｏｒ ｄｏｍａｉｎｅｎｃｏｄｅ
ｄ ｂｙ ａｎ ａＢｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒ
ｅｃｕｒｓｏｒｍＲＮＡ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｗｉｔｈ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａ
ｓｅ。
ｓｅ １ｎｈｉｂｉｔｏｒ ｄｏｍａｉｎｅｎｃｏｄｅ
ｄ ｂｙ ａｎ ａＢｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒ
ｅｃｕｒｓｏｒｍＲＮＡ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｗｉｔｈ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａ
ｓｅ。
Ｎａｔｕｒｅ １９８８；３３１：５２８−５３０；
Ｐｏｎｔｅ Ｐ、 Ｇｏｎｚａｌｅｓ−Ｄｅｌｌｌｈｉ
ｔｔ、 Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ、 ｅｔ ａｌ、
＾ ｎｅｗ 八４ ａ−ｙｌｏｉｄｍＲＮＡ
ｃｏｎｔａｉｎｓ ａ ｄｏｍａｉｎ ｈｏｍｏ
ｌｏｇｏｕｓ ｔｏ ５ｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓ
ｅ １ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、 Ｎａｔｕｒｅ １９８８
； ３３４：５２５−５２７） 、＾４アミロイドタン
パク質をコードする遺伝子は、染色体２１上で常染色体
優性アルツハイマー病の遺伝的欠陥の遺伝子座と異なる
遺伝子座に位置する（Ｓｔ、 Ｇｅｏｒｇｅ−■ｙｓｌ
ｏｐ Ｐｔｌ ｅｔ ａｌ、、 Ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｅｆｅｃｔ ｃａｕｓｉｎｇ ｆａｓ＋１ｌｉａｌ
＾Ｉｚｈｅｉｍｅｒ ５ｄｉｓｅａｓｅ ｍａｐｓ
ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ２１． ５ｃｉｅ
ｎｃｅ １９８７；２３５ ： ８８５−８９０ ；
Ｖａｎ Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ Ｃ，ｅｔ ａｌ、
。
Ｐｏｎｔｅ Ｐ、 Ｇｏｎｚａｌｅｓ−Ｄｅｌｌｌｈｉ
ｔｔ、 Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ、 ｅｔ ａｌ、
＾ ｎｅｗ 八４ ａ−ｙｌｏｉｄｍＲＮＡ
ｃｏｎｔａｉｎｓ ａ ｄｏｍａｉｎ ｈｏｍｏ
ｌｏｇｏｕｓ ｔｏ ５ｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓ
ｅ １ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、 Ｎａｔｕｒｅ １９８８
； ３３４：５２５−５２７） 、＾４アミロイドタン
パク質をコードする遺伝子は、染色体２１上で常染色体
優性アルツハイマー病の遺伝的欠陥の遺伝子座と異なる
遺伝子座に位置する（Ｓｔ、 Ｇｅｏｒｇｅ−■ｙｓｌ
ｏｐ Ｐｔｌ ｅｔ ａｌ、、 Ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｅｆｅｃｔ ｃａｕｓｉｎｇ ｆａｓ＋１ｌｉａｌ
＾Ｉｚｈｅｉｍｅｒ ５ｄｉｓｅａｓｅ ｍａｐｓ
ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ２１． ５ｃｉｅ
ｎｃｅ １９８７；２３５ ： ８８５−８９０ ；
Ｖａｎ Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ Ｃ，ｅｔ ａｌ、
。
Ｆａｉｌｕｒｅ ｏｆ ｆａｍｉｌｉａｌ ＾Ｉ
ｚｈｅｉｓｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｔ。
ｚｈｅｉｓｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｔ。
ｓｅｇｒｅｇａｔｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＾４−
ａＢＩｏｉｄ ｇｅｎｅ １ｎｓｅｖｅｒａｌ
Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｆａｍｉｌｉｅｓ、 Ｎａｔｕ
ｒｅ １９８７； ３２９： １５３−１５５）、
更に、七リンプロテアーゼインヒビター＆、−抗キモト
リプシンが最近アルツハイマー病のアミロイド沈着物中
で同定された（＾ｂｒａｈａｅｅＣＲｅｔ ａｌ、、
Ｉ＋＊ｍｕｎｏｅｈｅｍｉｃａｌ １ｄｅｎｔｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ｏｒｔｈｅ ５ｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔ
ｅａｓｅ １ｎｈｉｂｉｔｏｒ ａ−ａｎｔｉｃｈ
ｙｍｏｔｒ−ｙｐｓｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａ
ｉｎ ａｅ＋ｙｌｏｉｄ ｄｅｐｏｓｉｔｓ ｏ
ｒ＾１ｚｈｅｉｓｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ、 Ｃｅ１
ｌ １９８８ ； ５２ ： ４８７−５ＱＬ）。
ａＢＩｏｉｄ ｇｅｎｅ １ｎｓｅｖｅｒａｌ
Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｆａｍｉｌｉｅｓ、 Ｎａｔｕ
ｒｅ １９８７； ３２９： １５３−１５５）、
更に、七リンプロテアーゼインヒビター＆、−抗キモト
リプシンが最近アルツハイマー病のアミロイド沈着物中
で同定された（＾ｂｒａｈａｅｅＣＲｅｔ ａｌ、、
Ｉ＋＊ｍｕｎｏｅｈｅｍｉｃａｌ １ｄｅｎｔｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ｏｒｔｈｅ ５ｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔ
ｅａｓｅ １ｎｈｉｂｉｔｏｒ ａ−ａｎｔｉｃｈ
ｙｍｏｔｒ−ｙｐｓｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａ
ｉｎ ａｅ＋ｙｌｏｉｄ ｄｅｐｏｓｉｔｓ ｏ
ｒ＾１ｚｈｅｉｓｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ、 Ｃｅ１
ｌ １９８８ ； ５２ ： ４８７−５ＱＬ）。
アミロイドとは対照的に、アルツハイマー病のＰＨＦは
まだ完全には同定されていない（Ｐｅｒｒｙ Ｇ、。
まだ完全には同定されていない（Ｐｅｒｒｙ Ｇ、。
Ｍａｎｅｔｔｏ Ｖ、 ０ｎｏｒａｔｏ Ｍ、 ｅＬ
ａｌ、＾Ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆｔｈｅ ｎｅｕｒ
ｏｆｉｌａｍｅｎｔ−ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｎｅｔ
ｗｏｒｋ ｉｎ八へｚｈｅｉｍｅｒ ａｎｄ ｏｔ
ｈｅｒ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓ
ｏｒｄｅｒｓ、 Ｉｎ： Ｐｅｒｒｙ Ｇ （Ｅｄ）＾
Ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓ １ｎｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｎａｌ
ＣｙＬｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｉｎ＾１ｚｈｅｉ＋＊ｅ
ｒ ５ｃｌｉｓｅａｓｅ、 Ｐｌｅｎｕｍ ｐｒｅ
ｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 １９８７； ｐ
ｐ。
ａｌ、＾Ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆｔｈｅ ｎｅｕｒ
ｏｆｉｌａｍｅｎｔ−ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｎｅｔ
ｗｏｒｋ ｉｎ八へｚｈｅｉｍｅｒ ａｎｄ ｏｔ
ｈｅｒ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓ
ｏｒｄｅｒｓ、 Ｉｎ： Ｐｅｒｒｙ Ｇ （Ｅｄ）＾
Ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓ １ｎｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｎａｌ
ＣｙＬｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｉｎ＾１ｚｈｅｉ＋＊ｅ
ｒ ５ｃｌｉｓｅａｓｅ、 Ｐｌｅｎｕｍ ｐｒｅ
ｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 １９８７； ｐ
ｐ。
１３７−１４９） 、ポリクローナル抗体及びモノクロ
ーナル抗体と生物学的方法とを用いて得られた何紙かの
実験結果によると、ニューロフィラメントタンパク質、
ＭＡＰ−２及びτのような微小管に会合するタンパク質
、並びにユビキチンはＰｆｌＦに会合しないことが判明
した。前記タンパク質及びペプチドのより詳細な説明に
ついては、特に以下の文献を参照されたい。
ーナル抗体と生物学的方法とを用いて得られた何紙かの
実験結果によると、ニューロフィラメントタンパク質、
ＭＡＰ−２及びτのような微小管に会合するタンパク質
、並びにユビキチンはＰｆｌＦに会合しないことが判明
した。前記タンパク質及びペプチドのより詳細な説明に
ついては、特に以下の文献を参照されたい。
−Ｐｅｒｒｙ Ｇ、 ＲｉｚｚｕＬｏ Ｎ、
＾ｕｔｉｌｉｏ−ＧａｍｂｅｔＬｉ Ｌ。
＾ｕｔｉｌｉｏ−ＧａｍｂｅｔＬｉ Ｌ。
Ｇａｍｔｅｔｔｉ Ｐ、 Ｐａ１ｒｅｄ ｈｅｌ
ｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｆｒｏｍ＾Ｉｚｈ
ｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｃｏｎｔａｉｎ ｃｙｔｏ−ｓｋｅｌｅｔａｌ ｃｏｍ
ｐｏｎｅｎｔｓ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、
Ｓｃｉ。
ｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｆｒｏｍ＾Ｉｚｈ
ｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｃｏｎｔａｉｎ ｃｙｔｏ−ｓｋｅｌｅｔａｌ ｃｏｍ
ｐｏｎｅｎｔｓ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、
Ｓｃｉ。
ｔｌｓＡ １９８５．８２：３９１６−３９２０゜−＾
ｎｄｅｒｔｏｎ ＢＨ，Ｂｒｅｉｎｂｕｒｇ Ｄ、 Ｄ
ｏｗｎｅｓ ＭＪ、 ｅｔ ａｔ。
ｎｄｅｒｔｏｎ ＢＨ，Ｂｒｅｉｎｂｕｒｇ Ｄ、 Ｄ
ｏｗｎｅｓ ＭＪ、 ｅｔ ａｔ。
Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｈｏ
ｗ ｔｈａｔ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉ−１１ａｒｙ ｔ
ａｎｇｌｅｓ ａｎｄ ｎｅｕｒｏ（ｉｌａｅｌｅｎｔ
ｓ ｓｈａｒｅａｎＬｉｇｅｎｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎ
ａｎｔｓ、 Ｎａｔｕｒｅ １９８２； ２９８： ８
４−８６゜ −Ｍｉｌｌｅｒ ＣＪ、 ０ｒｉｏｎ ＪＰ、 Ｃａ
１ｖｅｒｔ Ｒ，ｅｔ ｍｌ。
ｗ ｔｈａｔ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉ−１１ａｒｙ ｔ
ａｎｇｌｅｓ ａｎｄ ｎｅｕｒｏ（ｉｌａｅｌｅｎｔ
ｓ ｓｈａｒｅａｎＬｉｇｅｎｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎ
ａｎｔｓ、 Ｎａｔｕｒｅ １９８２； ２９８： ８
４−８６゜ −Ｍｉｌｌｅｒ ＣＪ、 ０ｒｉｏｎ ＪＰ、 Ｃａ
１ｖｅｒｔ Ｒ，ｅｔ ｍｌ。
Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｅａ
ｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ ５ｈａｒｅｅｐｉｔｏｐｅ
ｓ ｗｉｔｈ ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ ５ｉｄｅ
ａｒｓ＋ｓ、 ＥＨＢＯＪ、１９Ｂ６．５： ２６
９−２７６゜−Ｂｒ１ｏｎ ＪＰ、 Ｃｏｕｃｋ
Ａｍ、 Ｆｌａｍｅｎｔ−Ｄｕｒａｎｄ、 Ｊ。
ｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ ５ｈａｒｅｅｐｉｔｏｐｅ
ｓ ｗｉｔｈ ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ ５ｉｄｅ
ａｒｓ＋ｓ、 ＥＨＢＯＪ、１９Ｂ６．５： ２６
９−２７６゜−Ｂｒ１ｏｎ ＪＰ、 Ｃｏｕｃｋ
Ａｍ、 Ｆｌａｍｅｎｔ−Ｄｕｒａｎｄ、 Ｊ。
Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ｔａｎｇｌｅｓ
ｏｆ ＾１ｚｈｅｉｓｉｅｒ ５ｄｉｓｅａｓｅ；
ａｎ ｉｍ＋＊ｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｅ＋１ｃａｌ
５ｔｕｄｙ、 Ｊ。
ｏｆ ＾１ｚｈｅｉｓｉｅｒ ５ｄｉｓｅａｓｅ；
ａｎ ｉｍ＋＊ｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｅ＋１ｃａｌ
５ｔｕｄｙ、 Ｊ。
Ｓｕｂｍｉｃｒｏｓｃ Ｃｙｔｏｌ、 １９８５；
１７： ８９−９６゜−Ｋｏｓｉｋ ＫＳ、 Ｄ
ｕｆｆｙ Ｌに、 Ｄｏｗｌｉｎｇ ８Ｍ、 ｅｔ
ａｌ。
１７： ８９−９６゜−Ｋｏｓｉｋ ＫＳ、 Ｄ
ｕｆｆｙ Ｌに、 Ｄｏｗｌｉｎｇ ８Ｍ、 ｅｔ
ａｌ。
Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ ２： ｍｏｎｏｅｌｏｎａｌａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｔｌｌＩｅ
５ｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ｃｅｒｔａｉｎ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｉｎｔ。
ｒｏｔｅｉｎ ２： ｍｏｎｏｅｌｏｎａｌａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｔｌｌＩｅ
５ｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ｃｅｒｔａｉｎ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｉｎｔ。
＾１ｚｈｅｉｍｅｒ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒ
ｙ ｔａｎｇｌｅｓ、Ｐｒｏｃ。
ｙ ｔａｎｇｌｅｓ、Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、 ＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｌ！Ｓ＾ １９Ｂ４
．８１： ７９４１−７９４５゜−Ｍｏｒｉ ＩＩ
、Ｋｏｎｄｏ Ｊ、Ｉｈａｒａ Ｙ、Ｕｂｉｑｕｉ
ｔｉｎ ｉｓ ａｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ
ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔ
ｓ ｉｎ＾１ｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ
、 ５ｃｉｅｎｃｅ １９８７； ２３５：１６
４１−１６４４゜ −Ｐｅｒｒｙ Ｇ、 Ｆｒ１ｅｄ請ａｎ Ｒ，Ｓｈａ
ｍ Ｇ、 Ｃｈａｕ Ｖ。
．８１： ７９４１−７９４５゜−Ｍｏｒｉ ＩＩ
、Ｋｏｎｄｏ Ｊ、Ｉｈａｒａ Ｙ、Ｕｂｉｑｕｉ
ｔｉｎ ｉｓ ａｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ
ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔ
ｓ ｉｎ＾１ｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ
、 ５ｃｉｅｎｃｅ １９８７； ２３５：１６
４１−１６４４゜ −Ｐｅｒｒｙ Ｇ、 Ｆｒ１ｅｄ請ａｎ Ｒ，Ｓｈａ
ｍ Ｇ、 Ｃｈａｕ Ｖ。
Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｉｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉ
ｎ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙｔａｎｇｌｅｓ
ａｎｄ ５ｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅ ｎｅｕｒｉｔ
ｅｓ ｏｆ＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ
ｂｒａｉｎｓ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
ｎ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙｔａｎｇｌｅｓ
ａｎｄ ５ｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅ ｎｅｕｒｉｔ
ｅｓ ｏｆ＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ
ｂｒａｉｎｓ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳ＾ １９８７．８４： ３０
３３−３０３６゜これらの化合物のいくつかはピック体
を含む１２〜１５ｎＩｌの直線状フィラメント（Ｐｅｒ
ｒｙ Ｇ、 ＳｔｅｗａｒｔＤ、 Ｆｒｉｅｄｍａｎ
Ｒ，ｅｔ ａｔ、 Ｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｐｉｃ
ｋ’５ｂｏｄｉｅｓ ｃｏｎｔａｉｎ ａｌｔｅｒｅｄ
ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｅｌｅａ＋ｅｎｔｓ。
３３−３０３６゜これらの化合物のいくつかはピック体
を含む１２〜１５ｎＩｌの直線状フィラメント（Ｐｅｒ
ｒｙ Ｇ、 ＳｔｅｗａｒｔＤ、 Ｆｒｉｅｄｍａｎ
Ｒ，ｅｔ ａｔ、 Ｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｐｉｃ
ｋ’５ｂｏｄｉｅｓ ｃｏｎｔａｉｎ ａｌｔｅｒｅｄ
ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｅｌｅａ＋ｅｎｔｓ。
＾ｍｅｒ、 Ｊ、 Ｐａｔｈｏｌ、 １９８７； １２
）：５５９−５６８）及び進行性核上性麻痺のＮＦＴ（
Ｔａｂａｔｏｎ Ｍ、Ｐｅｒｒｙ Ｇ、 Ｍａｎｅｔｔ
。
）：５５９−５６８）及び進行性核上性麻痺のＮＦＴ（
Ｔａｂａｔｏｎ Ｍ、Ｐｅｒｒｙ Ｇ、 Ｍａｎｅｔｔ
。
Ｖ、 ｅｔ ａｌ、 Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｎｅ
ｕｒｏｎａｌ １ｏｃａｔｉｏｎ ｏｎ＾ｎｔｉｇｅｎ
ｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｆｉｂ
ｒｉｌｌａｒｙｔａｎｇｌｅｓ、＾ｎｎ、 Ｎｅｕｒｏ
ｌ、 １９８８； ２３：６０４−６１０）でも同定さ
れている。しかしなから、最近の文献は神経原線維変性
、特にアルツハイマー病のｉｎ ｖｉｔｒ。
ｕｒｏｎａｌ １ｏｃａｔｉｏｎ ｏｎ＾ｎｔｉｇｅｎ
ｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｆｉｂ
ｒｉｌｌａｒｙｔａｎｇｌｅｓ、＾ｎｎ、 Ｎｅｕｒｏ
ｌ、 １９８８； ２３：６０４−６１０）でも同定さ
れている。しかしなから、最近の文献は神経原線維変性
、特にアルツハイマー病のｉｎ ｖｉｔｒ。
診断のための確実な手段について何ら提示していない。
本発明は穫々の神経原線維変性に関与するタンパク質、
特にアルツハイマー病の錯綜に属するタンパク質の特異
的エピトープに対するモノクローナル抗体を提供する。
特にアルツハイマー病の錯綜に属するタンパク質の特異
的エピトープに対するモノクローナル抗体を提供する。
本発明はまた、該モノクローナル抗体を分泌するハイブ
リドーマを提供する。
リドーマを提供する。
本発明は更に、変性ニューロンの異常原線ｌ！構造に関
与する抗原も提供する。
与する抗原も提供する。
本発明は更に神経原線維変性を含む脳疾患、特にアルツ
ハイマー病のｉｎ ｖｉｔｒｏ診断方法も提供する。
ハイマー病のｉｎ ｖｉｔｒｏ診断方法も提供する。
本発明のモノクローナル抗体は、１９８９年７月５日付
けでＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託され
たハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）及び１９８９
年７月５日付けでＣ，Ｎ、Ｃ，Ｈ，に寄託番号１−８８
４で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）
により分泌されるモノクローナル抗体に対して増悪され
た同系ポリクローナル抗イディオタイプ血清との間に免
疫学的複合体を形成することを特徴とする。
けでＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託され
たハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）及び１９８９
年７月５日付けでＣ，Ｎ、Ｃ，Ｈ，に寄託番号１−８８
４で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）
により分泌されるモノクローナル抗体に対して増悪され
た同系ポリクローナル抗イディオタイプ血清との間に免
疫学的複合体を形成することを特徴とする。
本発明のモノクローナル抗体は、１９８９年７月５日付
けでＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託され
たハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）又は１９８９
年７月５日付けでＣ，Ｎ、Ｃ．Ｍ．に寄託番号１−８８
４で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）
により分泌されるモノクローナル抗体に対して増悪され
たモノクローナル抗イディオタイプ抗体との間に免疫学
的複合体を形成することを特徴とする。
けでＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託され
たハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）又は１９８９
年７月５日付けでＣ，Ｎ、Ｃ．Ｍ．に寄託番号１−８８
４で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）
により分泌されるモノクローナル抗体に対して増悪され
たモノクローナル抗イディオタイプ抗体との間に免疫学
的複合体を形成することを特徴とする。
本発明のモノクローナル抗体はそのイディオタイプによ
り規定される。イディオタイプはイディオトープ組、即
ち（アロタイプ及びイソタイプとは対照的に）イムノグ
ロブリンの個特異的抗原決定基の集合であり、従って抗
体の「フィンガープリント」であるとみなすことができ
る、イディオタイプ及び抗イディオタイプのより詳細な
説明については、例えばｄｅ Ｐｒ！ｖａｌ Ｃ： Ｉ
ｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ。
り規定される。イディオタイプはイディオトープ組、即
ち（アロタイプ及びイソタイプとは対照的に）イムノグ
ロブリンの個特異的抗原決定基の集合であり、従って抗
体の「フィンガープリント」であるとみなすことができ
る、イディオタイプ及び抗イディオタイプのより詳細な
説明については、例えばｄｅ Ｐｒ！ｖａｌ Ｃ： Ｉ
ｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ。
ｐ、 １４４−２１０ ｉｎ Ｂａｃｈ Ｊ、Ｆ、：
Ｉ＋ｓ＋＊ｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｐｕｂｌ。
Ｉ＋ｓ＋＊ｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｐｕｂｌ。
１１ｉｌｅｙ ａｎｄ ５ｏｎｓ、 ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
、１９７８又はＦｌｅｉｓａｈｍａｎｎＪ、Ｂ、、Ｄａ
ｖｉｅ Ｊ、Ｍ、： Ｉｎ＋ｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ
ｓ： ａｌ（ｏｔｙｐｅｓａｎｄ １ｄｉｏｔｙｐ
ｅｓ、 ｐｐ、 ２０５−２２０ ｉｎ Ｐａ
ｕｌ Ｗ、Ｅ、：Ｆｕｎｄａｓ＋ｅｎｔａｌ Ｉｍ
ｎ＋ｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｐｕｂｌ、 Ｒａｖｅｎ
Ｐｒｅｓｓ。
、１９７８又はＦｌｅｉｓａｈｍａｎｎＪ、Ｂ、、Ｄａ
ｖｉｅ Ｊ、Ｍ、： Ｉｎ＋ｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ
ｓ： ａｌ（ｏｔｙｐｅｓａｎｄ １ｄｉｏｔｙｐ
ｅｓ、 ｐｐ、 ２０５−２２０ ｉｎ Ｐａ
ｕｌ Ｗ、Ｅ、：Ｆｕｎｄａｓ＋ｅｎｔａｌ Ｉｍ
ｎ＋ｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｐｕｂｌ、 Ｒａｖｅｎ
Ｐｒｅｓｓ。
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 １９８４を参照されたい０本発明
のモノクローナル抗体はＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて同
系条件下に、１９８９年７月５日付けでＣ，Ｎ、Ｃ．Ｍ
．に寄託番号夏一８８３で寄託されたハイブリドーマ（
ＮＦＴ２００ＩｇＭ＞又は１９８９年７月５日付けでＣ
，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１−８８４で寄託されたハイ
ブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモ
ノクローナル抗体に対して増感された抗イディオタイプ
血清と特異的に反応する。クラス、サブクラス又はタイ
プを問わず他のＢＡＬＢ／ｃモノクローナル抗体は、１
９８９年７月５日付けでＣ，Ｎ。
のモノクローナル抗体はＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて同
系条件下に、１９８９年７月５日付けでＣ，Ｎ、Ｃ．Ｍ
．に寄託番号夏一８８３で寄託されたハイブリドーマ（
ＮＦＴ２００ＩｇＭ＞又は１９８９年７月５日付けでＣ
，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１−８８４で寄託されたハイ
ブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモ
ノクローナル抗体に対して増感された抗イディオタイプ
血清と特異的に反応する。クラス、サブクラス又はタイ
プを問わず他のＢＡＬＢ／ｃモノクローナル抗体は、１
９８９年７月５日付けでＣ，Ｎ。
Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託されたハイブリド
ーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ＞又は１９８９年７月５日付
けでＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ。
ーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ＞又は１９８９年７月５日付
けでＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ。
に寄託番号１−８８４で寄託されたハイブリドーマ（Ｎ
ＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナル抗
体に対する該同系血清と反応することができず、従って
同系抗血清がイディオタイプ特異性的であることか立証
された。
ＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナル抗
体に対する該同系血清と反応することができず、従って
同系抗血清がイディオタイプ特異性的であることか立証
された。
本発明のモノクローナル抗体に対して増感される同系ポ
リクローナル抗イディオタイプ血清は、同系即ち遺伝子
的に同一の動物で増感した本発明のモノクローナル抗体
で動物を免疫することにより得られ、本発明のモノクロ
ーナル抗体に対して増感された該同系ポリクローナル血
清は抗イディオタイプ抗体以外に他の抗体イムノグロブ
リンを含まない。
リクローナル抗イディオタイプ血清は、同系即ち遺伝子
的に同一の動物で増感した本発明のモノクローナル抗体
で動物を免疫することにより得られ、本発明のモノクロ
ーナル抗体に対して増感された該同系ポリクローナル血
清は抗イディオタイプ抗体以外に他の抗体イムノグロブ
リンを含まない。
本発明のモノクローナル抗体に対して増感された同系ポ
リクローナル抗イディオタイプ血清は、該モノクローナ
ル抗体を認識することができるが、これは特に、該同系
ポリクローナル抗イディオタイプ血清が共通のイディオ
トープを選択せず且つモノクローナル抗体の個別のイデ
ィオトープに対する抗イディオタイプ抗体を高力価で含
むという理由、及び特に該同系ポリクローナル抗イディ
オタイプ血清がイディオトーブ組の全体を含み且つ規定
するという理由による。
リクローナル抗イディオタイプ血清は、該モノクローナ
ル抗体を認識することができるが、これは特に、該同系
ポリクローナル抗イディオタイプ血清が共通のイディオ
トープを選択せず且つモノクローナル抗体の個別のイデ
ィオトープに対する抗イディオタイプ抗体を高力価で含
むという理由、及び特に該同系ポリクローナル抗イディ
オタイプ血清がイディオトーブ組の全体を含み且つ規定
するという理由による。
モノクローナル抗体に対する同系抗イディオタイプ血清
の生産に使用される方法は従来記載されている（Ｇｈｅ
ｕｅｎｓ Ｊ、、 ＭｃＦａｒｌｉｎ Ｄ、Ｅ、、 Ｒ
ａｍｍｏｈａｎ Ｋ。
の生産に使用される方法は従来記載されている（Ｇｈｅ
ｕｅｎｓ Ｊ、、 ＭｃＦａｒｌｉｎ Ｄ、Ｅ、、 Ｒ
ａｍｍｏｈａｎ Ｋ。
ＩｔＪ、、 Ｂｅ１ｌｉｎｉ ’Ｉ／４．Ｊ、： Ｉｄ
ｉｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔ
ｉｖｉｔｙ ｏｆ ｏ＋ｕｒｉｎｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎ
ａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓ ｔｈｅ
ｈｅｍａｇｇｌｕＬｉｎｉｎ ｏｆ ｍｅａｓｌ
ｅｓ ｖｉｒｕｓ。
ｉｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔ
ｉｖｉｔｙ ｏｆ ｏ＋ｕｒｉｎｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎ
ａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓ ｔｈｅ
ｈｅｍａｇｇｌｕＬｉｎｉｎ ｏｆ ｍｅａｓｌ
ｅｓ ｖｉｒｕｓ。
Ｉｎｆ、 Ｉｍｍｕｎ、 ３４： ２００−２０７．１
９８１； Ｂｏｎａ Ｃ，。
９８１； Ｂｏｎａ Ｃ，。
１１ｏｏｇｈｅ Ｒ，、Ｃａｚｅｎａｖｅ Ｐ、＾、、
Ｌｅｇｕｅｒｎ Ｃ，、Ｐａｕｌ ＬＥ、： Ｃｅ１
ｌｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ １ｄｉｏｔｙｐｅ。
Ｌｅｇｕｅｒｎ Ｃ，、Ｐａｕｌ ＬＥ、： Ｃｅ１
ｌｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ １ｄｉｏｔｙｐｅ。
［［、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ａｎｔｉ−ＭＯＰＣ４
６０１ｄｉｏｔｙｐｅ ａｎｔｉ−ｂｏｄｉｅｓ １ｎ
ｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ １ｅｖｅｌ ｏｆ ａｎｔｉ
−ｔｒｉｎｉｔｒｏ−ｐｈｅｎｙｌ−ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ｂｅａｒｉｎｇ ｔｈｅ ４６０１ｄｉｏｔｙｐ
ｅｓ。
６０１ｄｉｏｔｙｐｅ ａｎｔｉ−ｂｏｄｉｅｓ １ｎ
ｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ １ｅｖｅｌ ｏｆ ａｎｔｉ
−ｔｒｉｎｉｔｒｏ−ｐｈｅｎｙｌ−ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ｂｅａｒｉｎｇ ｔｈｅ ４６０１ｄｉｏｔｙｐ
ｅｓ。
Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｗｅｄ、 １４９： ８１５−８２３
．１９７９）。
．１９７９）。
モノクローナル抗イディオタイプ抗体の生産方法は詳細
に記載されている（Ｇｈｅｕｅｎｓ Ｊ、、ＭｃＦａｒ
ｌｉｎＤ、Ｅ、： Ｕｓｅ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌ ａｎｔｉ−ｉｄｉｏｔｙｐｉｃａｎｔｉｂ
ｏｄｙ ｔｏ Ｐ３−Ｘ６３＾ｇ８ Ｂｅｌｏｍ
ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒａｎａｌｙｓｉｓ
ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｐｒｏ
ｄｕｃｔｓ、 Ｅｕｒ、 Ｊ、 ｆｍｕｎｏｌ、
１２ニア０１−７０３． １９８２）。
に記載されている（Ｇｈｅｕｅｎｓ Ｊ、、ＭｃＦａｒ
ｌｉｎＤ、Ｅ、： Ｕｓｅ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌ ａｎｔｉ−ｉｄｉｏｔｙｐｉｃａｎｔｉｂ
ｏｄｙ ｔｏ Ｐ３−Ｘ６３＾ｇ８ Ｂｅｌｏｍ
ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒａｎａｌｙｓｉｓ
ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｐｒｏ
ｄｕｃｔｓ、 Ｅｕｒ、 Ｊ、 ｆｍｕｎｏｌ、
１２ニア０１−７０３． １９８２）。
本発明のモノクローナル抗体は次の特性の組み合わせに
より規定される。
より規定される。
一該モツクローナル抗体は、アルツハイマー病患者から
得られる大脳皮質からそれ自体単離される音波処理ＮＦ
Ｔ調製物から放出される抗原の非ボスホリル化構造エピ
トープとの間で免疫学的複合体を形成する。
得られる大脳皮質からそれ自体単離される音波処理ＮＦ
Ｔ調製物から放出される抗原の非ボスホリル化構造エピ
トープとの間で免疫学的複合体を形成する。
一該モツクローナル抗体は次のタンパク質及びペプチド
、即ちニューロフィラメントタンパク質、ユビキチン、
τタンパク質、４−アミロイドペプチド、ＭＡＰ−２タ
ンパク質のいずれがとの間で免疫学的複合体を形成しな
い。
、即ちニューロフィラメントタンパク質、ユビキチン、
τタンパク質、４−アミロイドペプチド、ＭＡＰ−２タ
ンパク質のいずれがとの間で免疫学的複合体を形成しな
い。
「本発明のモノクローナル抗体は抗原との間で免疫学的
複合体を形成する」なる表現は、本発明のモノクローナ
ル抗体が次の方法の次の条件の１つで上記抗原に結合す
ることを意味する。
複合体を形成する」なる表現は、本発明のモノクローナ
ル抗体が次の方法の次の条件の１つで上記抗原に結合す
ることを意味する。
−免疫光学顕微鏡検査：
外科的手術又は死体解剖で得た脳組織サンプルを４％ホ
ルマリン又はブアン固定液に浸漬することにより固定し
、パラフィンで包埋する。厚さ４Ｉの切片を調製する０
本発明のモノクローナル抗体は、アビジン−ビオチニル
化ペルオキシダーゼ複合法（Ｈｓｕ ＳＭ、 Ｒａ１ｎ
ｅ Ｌ、 Ｆａｎｇｅｒ Ｈ，■ｓｅ ｏｆａｖｉｄｉ
ｎ−ｂｉｏｔｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ （ＡＢＣ）
ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉ−ｄａｓｅ ｔ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、 Ｊ、 Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ
、 Ｃｙｔｏｃｈｅｍ。
ルマリン又はブアン固定液に浸漬することにより固定し
、パラフィンで包埋する。厚さ４Ｉの切片を調製する０
本発明のモノクローナル抗体は、アビジン−ビオチニル
化ペルオキシダーゼ複合法（Ｈｓｕ ＳＭ、 Ｒａ１ｎ
ｅ Ｌ、 Ｆａｎｇｅｒ Ｈ，■ｓｅ ｏｆａｖｉｄｉ
ｎ−ｂｉｏｔｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ （ＡＢＣ）
ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉ−ｄａｓｅ ｔ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、 Ｊ、 Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ
、 Ｃｙｔｏｃｈｅｍ。
１９８１、２９：５７７−５８０）、又は可溶性ペルオ
キシダーゼ−抗ペルオキシダーゼ複合法（Ｓｔｅｒｎｂ
ｅｒｇｅｒ Ｌ＾。
キシダーゼ−抗ペルオキシダーゼ複合法（Ｓｔｅｒｎｂ
ｅｒｇｅｒ Ｌ＾。
ｌｍ５ｕｎｏｃｙｔｏａｈｅａｉｓｔｒｙ （３ｒｄ
ｅｄ、）、 Ｈｉｌｅｙ、 ＮｅｗＹｏｒｋ、
１９８６）で適用される。ジアミノベンジジンを色原
体として使用する。
ｅｄ、）、 Ｈｉｌｅｙ、 ＮｅｗＹｏｒｋ、
１９８６）で適用される。ジアミノベンジジンを色原
体として使用する。
脳組織切片の免疫電子顕微鏡検査：
外科的手術又は死体解剖で得た脳組織サンプルを厚さ６
０ｐ１に薄切する前に包埋せずにブアン固定液又は１０
％＃Ｉ衝ホルマリンに固定する（Ｖｉｂｒａｔｏｍｅ）
。
０ｐ１に薄切する前に包埋せずにブアン固定液又は１０
％＃Ｉ衝ホルマリンに固定する（Ｖｉｂｒａｔｏｍｅ）
。
切片を間接イムノゴールド法により免疫染色し、固定し
、包埋し、薄切し、文献に記載されているように電子項
微鏡で検査する（Ｐｅｒｒｙ Ｇ、Ｍｕｌｖｉｈｉｌｌ
Ｐ、 Ｈａｎｅｔｔｏ Ｖ、 ｅｔ ａｌ、
ｆ−ｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔ
ｉｅｓ ｏｒ＾１ｚｈｅｉｎｅｒ ｓｔｒａｉｇｈｔ
ｆｉｌａｍｅｎｔｓ。
、包埋し、薄切し、文献に記載されているように電子項
微鏡で検査する（Ｐｅｒｒｙ Ｇ、Ｍｕｌｖｉｈｉｌｌ
Ｐ、 Ｈａｎｅｔｔｏ Ｖ、 ｅｔ ａｌ、
ｆ−ｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔ
ｉｅｓ ｏｒ＾１ｚｈｅｉｎｅｒ ｓｔｒａｉｇｈｔ
ｆｉｌａｍｅｎｔｓ。
Ｊ、 Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、 １９８７； ７：３７３６
−３７３８）。
−３７３８）。
−分離したＮＦＴの免疫電子顕微鏡検査：（Ｉｑｂａｌ
に、 Ｚａｉｄｉ Ｔ、 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ
ＣＨ等、＾Ｉｚｈｅｉｓｅｒ ｐａｉｒｅｄ
ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ： ｂｕｌｋ
ｉｓｏｌａｔｉｏｎ、 ５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ
ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ、 ＾ｅｔ
ａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ、 １９８４；６２：１）
６−１７７）に記載した如く製造したＰＨＴに富む両分
を炭素被覆したニッケルグリッドに適用し、前述した如
き間接イムノゴールド法（Ｐｅｒｒｙ Ｇ、 Ｍｕｌｖ
ｉｈｉｌｌ Ｐ。
に、 Ｚａｉｄｉ Ｔ、 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ
ＣＨ等、＾Ｉｚｈｅｉｓｅｒ ｐａｉｒｅｄ
ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ： ｂｕｌｋ
ｉｓｏｌａｔｉｏｎ、 ５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ
ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ、 ＾ｅｔ
ａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ、 １９８４；６２：１）
６−１７７）に記載した如く製造したＰＨＴに富む両分
を炭素被覆したニッケルグリッドに適用し、前述した如
き間接イムノゴールド法（Ｐｅｒｒｙ Ｇ、 Ｍｕｌｖ
ｉｈｉｌｌ Ｐ。
Ｈａｎｅｔｔｏ Ｖ等、 Ｉｍｍｕｎｏｅｙｔｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ ＾ｌｚ
ｈｅｉｍｅｒ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｆｉｌａｍｅｎ
ｔｓ、 Ｊ、 Ｎｅｕｒｏｓｃｉ。
ｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ ＾ｌｚ
ｈｅｉｍｅｒ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｆｉｌａｍｅｎ
ｔｓ、 Ｊ、 Ｎｅｕｒｏｓｃｉ。
１９８）；フ：３７３８：３７３８）によりイムノデコ
レートする。
レートする。
一イムノブロッティング法：
（Ｉｑｂａ！ に、 Ｚａｉｄｉ Ｔ、 Ｔｈ
ｏｍｐｓｏｎ ＣＨ等、＾１ｚｈｅｉｍｅｒ ｐａｉ
ｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ： ｂｕ
ｌｋｉｓｏｌａｔｉｏｎ、 ５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａ
ｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ、 ＾
ｅｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ、 １９８４； ６
２：１６７−１フフ）に記載の如く製造したＰＩＦに富
む両分を音波処理し、５Ｏ５−ポリアクリルアミド電気
泳動及びイムノプロットの試料として使用する。１２％
のゲル上において還元条件下で５ＯＳ−ポリアクリルア
ミド電気液動を実施する（Ｌａｅｍｍｌｉ ＵＫ、 Ｃ
ｌｅａｖａｇｅ ｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ａｓｓｅｍ
ｂｌｙ ｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ Ｔ４．
Ｎａｔｕｒｅ １９７０；２２）、６８０−６８
５）。
ｏｍｐｓｏｎ ＣＨ等、＾１ｚｈｅｉｍｅｒ ｐａｉ
ｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ： ｂｕ
ｌｋｉｓｏｌａｔｉｏｎ、 ５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａ
ｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ、 ＾
ｅｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ、 １９８４； ６
２：１６７−１フフ）に記載の如く製造したＰＩＦに富
む両分を音波処理し、５Ｏ５−ポリアクリルアミド電気
泳動及びイムノプロットの試料として使用する。１２％
のゲル上において還元条件下で５ＯＳ−ポリアクリルア
ミド電気液動を実施する（Ｌａｅｍｍｌｉ ＵＫ、 Ｃ
ｌｅａｖａｇｅ ｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ａｓｓｅｍ
ｂｌｙ ｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ Ｔ４．
Ｎａｔｕｒｅ １９７０；２２）、６８０−６８
５）。
電気泳動後にタンパク質を固定して、クーマシーブリリ
アントブルーで染色するか又はニトロセルロース（Ｈｙ
ｂｏｎｄ−Ｃ，＾ｍｅｒｓｈａｍ）のようなタンパク質
結合膜若しくはＩｍｍｏｂｉｌｏｎ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒ
ｅ＞）商品名で市販されているフィルターに転移する（
Ｔｏｗｂｉｎ Ｈ。
アントブルーで染色するか又はニトロセルロース（Ｈｙ
ｂｏｎｄ−Ｃ，＾ｍｅｒｓｈａｍ）のようなタンパク質
結合膜若しくはＩｍｍｏｂｉｌｏｎ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒ
ｅ＞）商品名で市販されているフィルターに転移する（
Ｔｏｗｂｉｎ Ｈ。
５ｔａｅｈｅｌｉｎ Ｔ、 Ｇｏｒｄｏｎ Ｊ、 Ｅｌ
ｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｔｈ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａ
＊ｉｄｅｇｅｌｓ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉ
ｎｇ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ５ｕｃｈ ａｓｎｉｔｒｏ
ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５ｈｅｅｔｓ： ｐｒｏｃｅｄｕ
ｒｅ ａｎｄ ｓｏ輸ｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ、υＳ＾１
９７９、７６：４３５０−４３５４）、転移後に、０．
０５％（Ｖ／Ｖ）のＴｗｅｅｎ ２Ｇを含むＰＢＳ（Ｔ
ｗｅｅｎ−ＰＢＳ）にフィルターをあらかしめ浸漬し、
次いで５％（ｗ／ｖ）のスキムミルクと５％（Ｖ／Ｖ）
の正常なりギ血清とを含むＴｗｅｅｎ−ＰＢＳ（ブロッ
キングＭｆｌｉ液）で１時間インキュベートする。
ｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｔｈ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａ
＊ｉｄｅｇｅｌｓ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｉ
ｎｇ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ５ｕｃｈ ａｓｎｉｔｒｏ
ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５ｈｅｅｔｓ： ｐｒｏｃｅｄｕ
ｒｅ ａｎｄ ｓｏ輸ｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ、υＳ＾１
９７９、７６：４３５０−４３５４）、転移後に、０．
０５％（Ｖ／Ｖ）のＴｗｅｅｎ ２Ｇを含むＰＢＳ（Ｔ
ｗｅｅｎ−ＰＢＳ）にフィルターをあらかしめ浸漬し、
次いで５％（ｗ／ｖ）のスキムミルクと５％（Ｖ／Ｖ）
の正常なりギ血清とを含むＴｗｅｅｎ−ＰＢＳ（ブロッ
キングＭｆｌｉ液）で１時間インキュベートする。
次いで、ブロッキングＭＷＩ液で適切に希釈した一次抗
体でフィルターを一晩中４℃で処理する０次にフィルタ
ーをＴｗｅｅｎ−ＰＢＳで３度洗浄し、プロ・ノキング
ｌ１ｌｉｌ液で１７２５０に希釈したビオチニル化ヤギ
抗マウスＩｇＭ（八−ｅｒｓｈａｍ）で１時間半室温で
処理する。Ｔｗｅｅｎ−ＰＢＳで３度洗浄した後に、プ
ロ・７キングＩＩ衝液で１／２５０に希釈したストレプ
トアビジン−ビオチニル化ホースラデイツシュペルオキ
シダーゼ複合物（＾ｓｅｒｓｈａｍ）を使用して室温で
１時間半処理する。その後フィルターをＴｗｅｅローＰ
ＢＳで３度、ＰＢＳで１度洗浄する０次いでバックグラ
ウンド染色が生じるまで、０．０５％（ｗ／ｖ）のジア
ミノベンジジンと０．０１％（ｖ／ｖ）の過酸化水素と
を含むＰＢＳでフィルターをインキュベートする。
体でフィルターを一晩中４℃で処理する０次にフィルタ
ーをＴｗｅｅｎ−ＰＢＳで３度洗浄し、プロ・ノキング
ｌ１ｌｉｌ液で１７２５０に希釈したビオチニル化ヤギ
抗マウスＩｇＭ（八−ｅｒｓｈａｍ）で１時間半室温で
処理する。Ｔｗｅｅｎ−ＰＢＳで３度洗浄した後に、プ
ロ・７キングＩＩ衝液で１／２５０に希釈したストレプ
トアビジン−ビオチニル化ホースラデイツシュペルオキ
シダーゼ複合物（＾ｓｅｒｓｈａｍ）を使用して室温で
１時間半処理する。その後フィルターをＴｗｅｅローＰ
ＢＳで３度、ＰＢＳで１度洗浄する０次いでバックグラ
ウンド染色が生じるまで、０．０５％（ｗ／ｖ）のジア
ミノベンジジンと０．０１％（ｖ／ｖ）の過酸化水素と
を含むＰＢＳでフィルターをインキュベートする。
モノクローナル抗体と抗原との免疫複合物（体）の形成
が前述した明確な条件に限定されず、抗体抗原結合の免
疫化学的特性に関する総ての技術により同様に免疫複合
物が形成されることは明白である。
が前述した明確な条件に限定されず、抗体抗原結合の免
疫化学的特性に関する総ての技術により同様に免疫複合
物が形成されることは明白である。
“構造エピトープ”という用語は抗原のコンホメーショ
ンではなく、構造により限定されるエピトープを意味す
る。換言するならば、ホルマリン、グルタルアルデヒド
又はバラホルムアルデヒドによる抗原の固定のような抗
原のコンホメーションを変える方法で抗原を処理した後
、またイオン系及び非イオン系洗剤により抗原調製物を
変質させた後もこのエピトープは保持される。
ンではなく、構造により限定されるエピトープを意味す
る。換言するならば、ホルマリン、グルタルアルデヒド
又はバラホルムアルデヒドによる抗原の固定のような抗
原のコンホメーションを変える方法で抗原を処理した後
、またイオン系及び非イオン系洗剤により抗原調製物を
変質させた後もこのエピトープは保持される。
“本発明のモノクローナル抗体はペプチド又はタンパク
質と免疫複合物を形成しない”という用語は、本発明の
モノクローナル抗体が、前述した光学＊ｍｍ検査、電子
顕微鏡検査及びイムノブロッティング技術の条件下では
前述したペプチド又はタンパク質と結合しないことを意
味している。
質と免疫複合物を形成しない”という用語は、本発明の
モノクローナル抗体が、前述した光学＊ｍｍ検査、電子
顕微鏡検査及びイムノブロッティング技術の条件下では
前述したペプチド又はタンパク質と結合しないことを意
味している。
“非リン酸化（ホスホリル化）エピトープ”は、本発明
のモノクローナル抗体が結合する抗原のエピトープが以
下に示す試験により測定されたときにリン酸化されてい
ないことを意味する。該試験の方法は、（Ｉｑｂａｌ
Ｋ、 Ｚａｉｄｉ Ｔ、 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＣＨ等、
＾１ｚｈｅｉｍｅｒ ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ
ｆｉｌａｍｅｎｔｓ： ｂｕｌｋｉｓｏｌａｔｉｏｎ、
５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏ
＋＊ｐｏｓｉｔｉｏｎ、 ＾ｅｔａ Ｎｅｕｒｏｐ
ａｔｈ、 １９８４； ６２：Ｌ６）−１フフ）に
記載の如く製造して、アルカリ性ホスファターゼで処理
したＮＦＴに富む両分を出発材料とし、本発明のモノク
ローナル抗体の１つをＮＦＴに適用して、ＮＦＴとモノ
クローナル抗体との免疫複合物を形成することからなる
。
のモノクローナル抗体が結合する抗原のエピトープが以
下に示す試験により測定されたときにリン酸化されてい
ないことを意味する。該試験の方法は、（Ｉｑｂａｌ
Ｋ、 Ｚａｉｄｉ Ｔ、 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＣＨ等、
＾１ｚｈｅｉｍｅｒ ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ
ｆｉｌａｍｅｎｔｓ： ｂｕｌｋｉｓｏｌａｔｉｏｎ、
５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏ
＋＊ｐｏｓｉｔｉｏｎ、 ＾ｅｔａ Ｎｅｕｒｏｐ
ａｔｈ、 １９８４； ６２：Ｌ６）−１フフ）に
記載の如く製造して、アルカリ性ホスファターゼで処理
したＮＦＴに富む両分を出発材料とし、本発明のモノク
ローナル抗体の１つをＮＦＴに適用して、ＮＦＴとモノ
クローナル抗体との免疫複合物を形成することからなる
。
ＮＦＴに富む両分を前述した如くニトロセルロースにイ
ムノブロッティングして、０．０ＩＭフェニルーメチル
ースルホニルーフルオリドを含む０．１ＭトリスＭｗ液
（ｐＨ８，０）１００ｍｌ中のｌＩ’Ｕのタイ７’１ｌ
ＩＥ。
ムノブロッティングして、０．０ＩＭフェニルーメチル
ースルホニルーフルオリドを含む０．１ＭトリスＭｗ液
（ｐＨ８，０）１００ｍｌ中のｌＩ’Ｕのタイ７’１ｌ
ＩＥ。
ｃｏｌｉアルカリ性ホスファターゼで一晩中３７℃で処
理する０次に本発明のモノクローナル抗体を適用して、
前述したイムノブロッティング法を実施する。
理する０次に本発明のモノクローナル抗体を適用して、
前述したイムノブロッティング法を実施する。
本発明のモノクローナル抗体は、１９８９年７月５日に
Ｃ，Ｎ、ＣＪ、に寄託番号１一８８３で寄託されたハイ
ブリドーマ（ＨＦ７２００ＩｇＭ）及び１９８９年７月
５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｉ４．に寄託番号１−８８４で寄託
されたハイブリドーマ（ＨＦ７２００ＩｇＧ）により分
泌されるモノクローナル抗体に対する同ポリクローナル
抗イディオタイプ血清、特にモノクローナル抗イディオ
タイプ抗体と免疫複合物を形成し、且つ以下の特徴を兼
ね備えることを特徴とする。
Ｃ，Ｎ、ＣＪ、に寄託番号１一８８３で寄託されたハイ
ブリドーマ（ＨＦ７２００ＩｇＭ）及び１９８９年７月
５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｉ４．に寄託番号１−８８４で寄託
されたハイブリドーマ（ＨＦ７２００ＩｇＧ）により分
泌されるモノクローナル抗体に対する同ポリクローナル
抗イディオタイプ血清、特にモノクローナル抗イディオ
タイプ抗体と免疫複合物を形成し、且つ以下の特徴を兼
ね備えることを特徴とする。
一モノクローナル抗体は、音波処理したＨＦＴ調製物か
ら放出される抗原の非リン酸化構造エピトープと免疫複
合物を形成する。 ＮＦＴｍ製物自体物自体ツハイマー
病患者から得た大脳皮質から分離したものである。
ら放出される抗原の非リン酸化構造エピトープと免疫複
合物を形成する。 ＮＦＴｍ製物自体物自体ツハイマー
病患者から得た大脳皮質から分離したものである。
一モノクローナル抗体は以下のタンパク質及びぺプチド
（ニューロフィラメントタンパク質、τタンパク質、Ｍ
ＡＰ−２タンパク質、ユビキチン、４−アミロイドペプ
チド）と免疫複合物を形成しない。
（ニューロフィラメントタンパク質、τタンパク質、Ｍ
ＡＰ−２タンパク質、ユビキチン、４−アミロイドペプ
チド）と免疫複合物を形成しない。
特に好ましいモノクローナル抗体はＩｇＭクラスのにタ
イプであるか又はＩｇＧクラスのにタイプである。
イプであるか又はＩｇＧクラスのにタイプである。
前述した実験条件下では、本発明の好ましいモノクロー
ナル抗体は音波処理していないＮＦＴ調製物とは結合し
ない。
ナル抗体は音波処理していないＮＦＴ調製物とは結合し
ない。
“モノクローナル抗体は結合しない”という用語は、前
述した条件下において、モノクローナル抗体が、ホスフ
ァターゼＭ衝溶液（ＰＢＳ）若しくはＰＢＳを含むドデ
シル硫酸ナトリウムを用いてアルツハイマー病患者又は
対照の皮質若しくは白質の抽出物から抽出したタンパク
質又はペプチドと免疫複合物を形成しないこと、及びモ
ノクローナル抗体が、（Ｉｑｂａｌ Ｋ、 Ｚａｉｄｉ
Ｔ、 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｃｌ等、＾１ｚｈｅｉｍｅ
ｒ ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａ＋５ｅｎ
ｔｓ： ｂｕｌｋｉｓｏｌａｔｉｏｎ、５ｏｌｕｂｉｌ
ｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏａ＋ｐｏｓｉ
ｔｉｏｎ、 ＾ｅｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ、１９
８４； ６２：工６７−１７７）に記載の如く製造さ
れ、あらかじめアルカリ性ホスファターゼで処理した音
波処理ＮＦＴ調製物と免疫複合物を形成しないことを意
味している。
述した条件下において、モノクローナル抗体が、ホスフ
ァターゼＭ衝溶液（ＰＢＳ）若しくはＰＢＳを含むドデ
シル硫酸ナトリウムを用いてアルツハイマー病患者又は
対照の皮質若しくは白質の抽出物から抽出したタンパク
質又はペプチドと免疫複合物を形成しないこと、及びモ
ノクローナル抗体が、（Ｉｑｂａｌ Ｋ、 Ｚａｉｄｉ
Ｔ、 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｃｌ等、＾１ｚｈｅｉｍｅ
ｒ ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａ＋５ｅｎ
ｔｓ： ｂｕｌｋｉｓｏｌａｔｉｏｎ、５ｏｌｕｂｉｌ
ｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏａ＋ｐｏｓｉ
ｔｉｏｎ、 ＾ｅｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ、１９
８４； ６２：工６７−１７７）に記載の如く製造さ
れ、あらかじめアルカリ性ホスファターゼで処理した音
波処理ＮＦＴ調製物と免疫複合物を形成しないことを意
味している。
Ｉｑｂａｌ等の説明する方法に基づきアルカリ性ホスフ
ァターゼであらかじめ処理した音波処理ＮＦＴ調製物の
製造方法を、以下”Ｉｑｂａｌ法”と称する。
ァターゼであらかじめ処理した音波処理ＮＦＴ調製物の
製造方法を、以下”Ｉｑｂａｌ法”と称する。
本発明の好ましいモノクローナル抗体は、音波処理ＮＦ
丁調製物から得た、分子量が約２００ 、０ＯＯｄの抗
原の非リン酸化エピトープと免疫複合物を形成すると判
明した。
丁調製物から得た、分子量が約２００ 、０ＯＯｄの抗
原の非リン酸化エピトープと免疫複合物を形成すると判
明した。
本発明のモノクローナル抗体の他の特徴を以下に示す。
一モノクローナル抗体は老人斑の神経突起に免疫学的に
結合する。
結合する。
−モノクローナル抗体は顆粒空胞変性組織（顆粒空胞変
性はアルツハイマー病患者の脳で認められる特異的神経
病理学的異常である０例えばＰｒ１ｃｅＤＬ、 Ｗｈｉ
ｔｅｈｏｕｓｅ ＰＪ、 ５ｔｒｕｂｌｅ ＲＧ、 Ｃ
ｅｌｌｕｌａｒｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ ＾Ｉｚ
ｈｅｉｍｅｒ ｓ ａｎｄ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ
５ｄｉｓｅａｓｅｓ、 Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏ
ｓｃｉ、 １９８６； ９：２９−３３；Ｋｈａｔａｔ
ｕｒｉａｎ ＺＳ、 Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｒ Ａｌ
ｚｈｅｉｍｅｒ’５ｄｉｓｅａｓｅ、 ＾ｒｃｈ、
Ｎｅｕｒｏｌ、 １９８５； ４２ 二１０９７
−１１０５ 参照、）に免疫学的に結合する。
性はアルツハイマー病患者の脳で認められる特異的神経
病理学的異常である０例えばＰｒ１ｃｅＤＬ、 Ｗｈｉ
ｔｅｈｏｕｓｅ ＰＪ、 ５ｔｒｕｂｌｅ ＲＧ、 Ｃ
ｅｌｌｕｌａｒｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ ＾Ｉｚ
ｈｅｉｍｅｒ ｓ ａｎｄ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ
５ｄｉｓｅａｓｅｓ、 Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏ
ｓｃｉ、 １９８６； ９：２９−３３；Ｋｈａｔａｔ
ｕｒｉａｎ ＺＳ、 Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｒ Ａｌ
ｚｈｅｉｍｅｒ’５ｄｉｓｅａｓｅ、 ＾ｒｃｈ、
Ｎｅｕｒｏｌ、 １９８５； ４２ 二１０９７
−１１０５ 参照、）に免疫学的に結合する。
一モノクローナル抗体は核上麻痺の神経原線維錯綜（ｔ
ａｎｇｌｅｓ）に免疫学的に結合する。
ａｎｇｌｅｓ）に免疫学的に結合する。
−モノクローナル抗体は末梢神経及びを髄の正常軸索に
免疫学的に結合する。
免疫学的に結合する。
一モノクローナル抗体は脳炎後パーキンソン症候群患者
の脳幹から得たＮＦＴに免疫学的に結合する。
の脳幹から得たＮＦＴに免疫学的に結合する。
−モノクローナル抗体はグアムのパーキンソン痴呆症候
群の神経原線維変性組織に免疫学的に結合する。
群の神経原線維変性組織に免疫学的に結合する。
一モノクローナル抗体はピック小体（Ｐｉｃｋ ｂｏｄ
ｉｅｓ）に免疫学的に結合する。
ｉｅｓ）に免疫学的に結合する。
−モノクローナル抗体は正常な対照の大脳白質の軸索に
免疫学的に結合しない。
免疫学的に結合しない。
一モノクローナル抗体はアルツハイマー病のヒラノ小体
に免疫学的に結合しない、（ヒラノ小体はアルツハイマ
ー病患者の脳で認められる特異的神経病理学的異常であ
る０例えばＰｒ１ｃｅ ＤＬ。
に免疫学的に結合しない、（ヒラノ小体はアルツハイマ
ー病患者の脳で認められる特異的神経病理学的異常であ
る０例えばＰｒ１ｃｅ ＤＬ。
１１ｈｉｔｅｈｏｕｓｅ ＰＪ、 ５ｔｒｕｂｌｅ Ｒ
［；、 Ｃｅｌｌｕｌａｒｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ
Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ａｎｄ Ｐａｒｋｉ
ｎｓｏｎ ５ｄｉｓｅａｓｅｓ、 Ｔｒｅｎｄｓ Ｎ
ｅｕｒｏｓｃｉ、 １９８６； ９：２９−３３を参
照のこと、） 一モノクローナル抗体は特発性パーキンソン症候群のリ
ューイ小体に免疫学的に結合しない。
［；、 Ｃｅｌｌｕｌａｒｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ
Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ａｎｄ Ｐａｒｋｉ
ｎｓｏｎ ５ｄｉｓｅａｓｅｓ、 Ｔｒｅｎｄｓ Ｎ
ｅｕｒｏｓｃｉ、 １９８６； ９：２９−３３を参
照のこと、） 一モノクローナル抗体は特発性パーキンソン症候群のリ
ューイ小体に免疫学的に結合しない。
−モノクローナル抗体は小脳の星状細胞腫のローゼンタ
ール線維に免疫学的に結合しない。
ール線維に免疫学的に結合しない。
−モノクローナル抗体は正常な絡まっていないニューロ
ンに免疫学的に結合しない。
ンに免疫学的に結合しない。
前項の“免疫学的に結合する”という耶語は、前述した
光学顕微鏡検査及び電子顕微鏡検査の条件に基づく。
光学顕微鏡検査及び電子顕微鏡検査の条件に基づく。
本発明の好ましいモノクローナル抗体は１９８９年７月
５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託さ
れたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）により分泌
される。
５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託さ
れたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）により分泌
される。
本発明の好ましいモノクローナル抗体は１９８９年７月
５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｈ，に寄託番号１−８８４で寄託さ
れたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌
される。
５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｈ，に寄託番号１−８８４で寄託さ
れたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌
される。
本発明は更に、アルツハイマー病患者の大脳皮質から分
離した音波処理ＮＦＴ調製物から放出される抗原と免疫
複合物を形成するモノクローナル抗体に関する。該抗原
自体は１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番
号！一８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２０
０ＩｇＭ）又は１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ。
離した音波処理ＮＦＴ調製物から放出される抗原と免疫
複合物を形成するモノクローナル抗体に関する。該抗原
自体は１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番
号！一８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２０
０ＩｇＭ）又は１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ。
に寄託番号１−８８４で寄託されたハイブリドーマ（Ｎ
ＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナル抗
体と免疫複合物を形成する。
ＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナル抗
体と免疫複合物を形成する。
本発明のモノクローナル抗体は、ニューロフィラメント
タンパク質、τタンパク質、ＭＡＰ−２タンパク質、ユ
ビキチン、４−アミロイドペプチドと免疫複合物を形成
しないと理解されたい。
タンパク質、τタンパク質、ＭＡＰ−２タンパク質、ユ
ビキチン、４−アミロイドペプチドと免疫複合物を形成
しないと理解されたい。
本発明は更に前述したモノクローナル抗体を分泌するハ
イブリドーマに関する。
イブリドーマに関する。
（以Ｆ余白）
前述したモノクローナル抗体はモノクローナル抗体を分
泌するハイブリドーマの取得及び分離を含むプロセスに
より得られる。ハイブリドーマの取得方法を以下に示す
。
泌するハイブリドーマの取得及び分離を含むプロセスに
より得られる。ハイブリドーマの取得方法を以下に示す
。
−あらかじめｉｎ ｖｉｖｏ免疫感作した動物、例えば
マウス若しくはラットの膵臓細胞、又は１９８９年７月
５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託さ
れたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）若しくは１
９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｈ，に寄託番号１−８
８４で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ
）により分泌されるモノクローナル抗体により認識され
る抗原とあらかじめ酋ｖｉｔｒｏ免疫感作した前記のよ
うな動物の膵臓細胞を出発材料とする。
マウス若しくはラットの膵臓細胞、又は１９８９年７月
５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１一８８３で寄託さ
れたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）若しくは１
９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｈ，に寄託番号１−８
８４で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ
）により分泌されるモノクローナル抗体により認識され
る抗原とあらかじめ酋ｖｉｔｒｏ免疫感作した前記のよ
うな動物の膵臓細胞を出発材料とする。
一免疫惑作した細胞をハイブリドーマ形成条件下で骨髄
腫細胞と融合する０次いで 一前述した抗原の非リン酸化構造エピトープを特異的に
認識し且つニューロフィラメントタンパク質、τタンパ
ク質、ＭＡＰ−２タンパク質、ユビキチン及び４−アミ
ロイドペプチドを免疫学的に認識しないモノクローナル
抗体を分泌するハイブリドーマを選択する。
腫細胞と融合する０次いで 一前述した抗原の非リン酸化構造エピトープを特異的に
認識し且つニューロフィラメントタンパク質、τタンパ
ク質、ＭＡＰ−２タンパク質、ユビキチン及び４−アミ
ロイドペプチドを免疫学的に認識しないモノクローナル
抗体を分泌するハイブリドーマを選択する。
対応するモノクローナル抗体の産生方法を以下に示す。
一前述した如き選択したハイブリドーマを適切な培地で
培養する。
培養する。
一選択したハイブリドーマにより排出されるモノクロー
ナル抗体を回収する。又は 一選択したハイブリドーマをマウスの腹膜に移植する。
ナル抗体を回収する。又は 一選択したハイブリドーマをマウスの腹膜に移植する。
一動物に腹水が生じたら、こうして形成されたモノクロ
ーナル抗体を腹水から回収する。
ーナル抗体を腹水から回収する。
本発明のモノクローナル抗体は、例えば中空繊維又はマ
イクロカプセルを使用しての固定化細胞の培養、又は例
えばエアーリフト反応器を使用しての均質懸濁液での培
養のような従来のｉｎ ｖｉｔｒ。
イクロカプセルを使用しての固定化細胞の培養、又は例
えばエアーリフト反応器を使用しての均質懸濁液での培
養のような従来のｉｎ ｖｉｔｒ。
技術により産生じ得る。
モノクローナル抗体が速く産生されるので、胛臓細胞の
ｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫感作が有利である６本発明は更に
本発明のモノクローナル抗体と免疫複合物を形成する抗
原に関する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫感作が有利である６本発明は更に
本発明のモノクローナル抗体と免疫複合物を形成する抗
原に関する。
アルツハイマー病患者を生検又は死体解剖して得られる
大脳皮質から分離したＮＦＴ調製物から得ることができ
、また音波処理によりＮＦＴ調製物から放出され得る本
発明の抗原は、前述した如きモノクローナル抗体と、有
利には１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番
号１一８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２０
０ＩｇＭ）若しくは１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，
Ｍ、に寄託番号１−８８４で寄託されたハイブリドーマ
（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナ
ル抗体と免疫複合物を形成し得ることを特徴とする。
大脳皮質から分離したＮＦＴ調製物から得ることができ
、また音波処理によりＮＦＴ調製物から放出され得る本
発明の抗原は、前述した如きモノクローナル抗体と、有
利には１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番
号１一８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２０
０ＩｇＭ）若しくは１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，
Ｍ、に寄託番号１−８８４で寄託されたハイブリドーマ
（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナ
ル抗体と免疫複合物を形成し得ることを特徴とする。
以下に示す方法により本発明の抗原を産生じ得る。
一本発明のモノクローナル抗体の１つを、アルツハイマ
ー病患者から分離したＮＦＴの音波処理調製物と、抗原
抗体複合物生産に適した条件下で接触させる。
ー病患者から分離したＮＦＴの音波処理調製物と、抗原
抗体複合物生産に適した条件下で接触させる。
一抗原を該複合物から分離して、所望の抗原を精製形態
で回収する。
で回収する。
有利には、使用するモノクローナル抗体は、樹脂、例え
ば５ＥＰｎ＾ＲＯＳＥ（登録商標）のような適切な支持
体上で固定化状態にある０次いで以下の作業を実施する
ことにより抗原が得られ得る。
ば５ＥＰｎ＾ＲＯＳＥ（登録商標）のような適切な支持
体上で固定化状態にある０次いで以下の作業を実施する
ことにより抗原が得られ得る。
−ＲＩＰＡＩ衝液又はそれに匹敵する物理化学的特性を
有する溶液を用いて音波処理ＮＦＴ調製物から抽出して
得られたようなタンパク質とポリペプチドとを含む上澄
み液を前記モノクローナル抗体と接触させる。
有する溶液を用いて音波処理ＮＦＴ調製物から抽出して
得られたようなタンパク質とポリペプチドとを含む上澄
み液を前記モノクローナル抗体と接触させる。
こうして形成された固定化抗体抗原複合物を洗浄する。
一抗体抗原複合物の解離を生じ得る溶液（例えば３Ｎイ
ソチオシアン酸カリウム、又は同様のカオトロピック試
薬）で前記複合物を処理する。
ソチオシアン酸カリウム、又は同様のカオトロピック試
薬）で前記複合物を処理する。
−抗原を精製形態で回収する。
ＲＩＰＡ緩衝液は、０．０ＩＭ ） ！Ｊ ス−ＨＣＩ
（ｐＨ７，４）、０．１５８ ＮａＣ１，１％デスオキ
シコリン酸ナトリウム、１％トリトンＸ１００．０．１
％ ドデシル［１１ナトリウム（ＳＤＳ）、１−Ｈフエ
ニル−メチル−スルホニル−フルオリド（ＰＭＳＦ）
（＝ ２００輪Ｍ ＰＭＳＦを含む０．５％エタノール
溶液）及び５００に １．Ｕ、アプロチニン／ｂｌであ
る。
（ｐＨ７，４）、０．１５８ ＮａＣ１，１％デスオキ
シコリン酸ナトリウム、１％トリトンＸ１００．０．１
％ ドデシル［１１ナトリウム（ＳＤＳ）、１−Ｈフエ
ニル−メチル−スルホニル−フルオリド（ＰＭＳＦ）
（＝ ２００輪Ｍ ＰＭＳＦを含む０．５％エタノール
溶液）及び５００に １．Ｕ、アプロチニン／ｂｌであ
る。
本発明は更に、本発明のモノクローナル抗体に対して増
感される同系ポリクローナル抗イディオタイプ血清及び
モノクローナル抗イディオタイプ抗体に関する。
感される同系ポリクローナル抗イディオタイプ血清及び
モノクローナル抗イディオタイプ抗体に関する。
中でも特に、本発明は１９８９年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ
，Ｍ。
，Ｍ。
に寄託番号１一８８３で寄託されたハイブリドーマ（Ｎ
ＦＴ２００ＩｇＭ）若しくは１９８９年７月５日にＣ，
Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１−８８４で寄託されたハイブ
リドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ＞により分泌されるモノ
クローナル抗体に対する同系ポリクローナル抗イディオ
タイプ血清、及びモノクローナル抗イディオタイプ抗体
に間する。
ＦＴ２００ＩｇＭ）若しくは１９８９年７月５日にＣ，
Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１−８８４で寄託されたハイブ
リドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ＞により分泌されるモノ
クローナル抗体に対する同系ポリクローナル抗イディオ
タイプ血清、及びモノクローナル抗イディオタイプ抗体
に間する。
本発明のモノクローナル抗体に対するモノクローナル抗
イディオタイプ抗体が本発明の抗原の内部像（ｉｎｔｅ
ｒｎａｌ ｉｍａｇｅ）に対応するときには、該抗体を
使用して該抗原を置換することができる。
イディオタイプ抗体が本発明の抗原の内部像（ｉｎｔｅ
ｒｎａｌ ｉｍａｇｅ）に対応するときには、該抗体を
使用して該抗原を置換することができる。
“内部像”に関しては、例えばｄｅ Ｐｒ６ｖａｌ Ｃ
。
。
璽ｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ、ｐｐ、 １４４−
２１９ ｉｎ ＢａｃｈＪ、Ｆ、；Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ、 Ｐｕｂｌ、 Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ
５ｏｎｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
２１９ ｉｎ ＢａｃｈＪ、Ｆ、；Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ、 Ｐｕｂｌ、 Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ
５ｏｎｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
１９７８又はＦＩｅｉｓａｈｍａｎｎ Ｊ、Ｂ、、 Ｄ
ａｖｉｅ Ｊ、Ｎ、：Ｉｍｓｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ
； ａｌｌｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ １ｄｉｏｔｙ
ｐｅｓ、 ｐｐ。
ａｖｉｅ Ｊ、Ｎ、：Ｉｍｓｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ
； ａｌｌｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ １ｄｉｏｔｙ
ｐｅｓ、 ｐｐ。
２０５−２２０ ｉｎ Ｐａｕｌ １１．Ｅ、；
Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
。
Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
。
Ｐｕｂｌ、 Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ、 １９８４； ａｎｄＪｅｒｎｅ、 Ｎ、に、：
Ｔｏｗａｒｄｓ ａ ｎｅｔｗｏｒｋ ｔｈｅｏｒｙ
ｏｆ ｔｈｅｉｍｍｕｎｅ ５ｙｓｔｅ−＾ｎｎ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 （Ｉｎｓｔ、 Ｐａ５ｔｅ
ｕｒ）１２５Ｃ：３７３−３８９（１９７４）を参照の
こと。
ｒｋ、 １９８４； ａｎｄＪｅｒｎｅ、 Ｎ、に、：
Ｔｏｗａｒｄｓ ａ ｎｅｔｗｏｒｋ ｔｈｅｏｒｙ
ｏｆ ｔｈｅｉｍｍｕｎｅ ５ｙｓｔｅ−＾ｎｎ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 （Ｉｎｓｔ、 Ｐａ５ｔｅ
ｕｒ）１２５Ｃ：３７３−３８９（１９７４）を参照の
こと。
本発明の神経原線維変性、例えばアルッハイマ一部のｉ
ｎ ｖｉｔｒｏ検出又は診断方法を以下に示す。
ｎ ｖｉｔｒｏ検出又は診断方法を以下に示す。
−神経製線維変性、中でも特にアルツハイマー病にかか
っていると思われる患者から得た細胞調製物を、抗原抗
体捏合物生産に適した条件下で本発明のモノクローナル
抗体とｉｎ ｖｉｔｒｏ接触させる。
っていると思われる患者から得た細胞調製物を、抗原抗
体捏合物生産に適した条件下で本発明のモノクローナル
抗体とｉｎ ｖｉｔｒｏ接触させる。
−前記抗体と前記細胞調製物との免疫結合を検出する。
細胞調製物は任意の適切な方法で、例えば患者で行った
生検から、特に音波処理を行って、適時に適切な培地、
例えば４％のホルマリンで固定した後に得られ得る。
生検から、特に音波処理を行って、適時に適切な培地、
例えば４％のホルマリンで固定した後に得られ得る。
免疫結合したモノクローナル抗体は従来技術により検出
することができる０本発明のモノクローナル抗体自体が
マーカー又は後述する如きマーカーとの直接又は間接結
合用基を有するのが有利である。
することができる０本発明のモノクローナル抗体自体が
マーカー又は後述する如きマーカーとの直接又は間接結
合用基を有するのが有利である。
本発明方法の特に有利な実施例は診断すべき患者から得
た血清調製物又は脳を髄液体調製物を、本発明のモノク
ローナル抗体と接触させることからなる。
た血清調製物又は脳を髄液体調製物を、本発明のモノク
ローナル抗体と接触させることからなる。
本発明は更に、以下の疾病（アルツハイマー病、進行性
核上麻痺、ピック病及び顕著な神経製線維変性の見られ
る他のあらゆる疾病）のいずれかのｉｎ ｖｉＬｒｏ診
断用キットに関し、該キットが、少なくともｉｎ ｖｉ
ｔｒｏ診断すべき生物学的試料を付着させるための適切
な固相システム、例えば微量滴定プレートと、本発明の
モノクローナル抗体の一つを含む調製物と、該モノクロ
ーナル抗体用特異的検出システムと、試験試料と該モノ
クローナル抗体との免疫反応及び結合したモノクローナ
ル抗体と検出システムとの免疫反応を実施するための適
切なＭ！温溶液を含んでいることを特徴とする。
核上麻痺、ピック病及び顕著な神経製線維変性の見られ
る他のあらゆる疾病）のいずれかのｉｎ ｖｉＬｒｏ診
断用キットに関し、該キットが、少なくともｉｎ ｖｉ
ｔｒｏ診断すべき生物学的試料を付着させるための適切
な固相システム、例えば微量滴定プレートと、本発明の
モノクローナル抗体の一つを含む調製物と、該モノクロ
ーナル抗体用特異的検出システムと、試験試料と該モノ
クローナル抗体との免疫反応及び結合したモノクローナ
ル抗体と検出システムとの免疫反応を実施するための適
切なＭ！温溶液を含んでいることを特徴とする。
本発明は更に、本発明の抗原の調製物をも含んでいる前
述した如きキットに関する０本発明の該抗原は（探索さ
れる抗原の定量測定用）標準であるか、又は競合用量（
ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ｄｏｓａｇｅ）法で使用すべ
きキットの場合には探索される抗原に対するコンペティ
ターである。
述した如きキットに関する０本発明の該抗原は（探索さ
れる抗原の定量測定用）標準であるか、又は競合用量（
ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ｄｏｓａｇｅ）法で使用すべ
きキットの場合には探索される抗原に対するコンペティ
ターである。
本発明は更に、本発明のモノクローナル抗イディオタイ
プ抗体の調製物、特に本発明の抗原の内部像に対応する
調製物をも含んでいる前述した如きキットに関する。本
発明のモノクローナル抗イディオタイプ抗体はく探索さ
れる抗原の定量測定用）標準であるか、又は競合用量法
で使用される場合には探索される抗原に対するコンペテ
ィターである。
プ抗体の調製物、特に本発明の抗原の内部像に対応する
調製物をも含んでいる前述した如きキットに関する。本
発明のモノクローナル抗イディオタイプ抗体はく探索さ
れる抗原の定量測定用）標準であるか、又は競合用量法
で使用される場合には探索される抗原に対するコンペテ
ィターである。
本発明は更に、本発明の抗原、特に１９８９年７月５日
にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１８８３で寄託されたハ
イブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）若しくは１９８９
年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１−８８４で
寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）によ
り分泌される抗体により認識される抗原をコードする対
応の核酸に関する。
にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１８８３で寄託されたハ
イブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＭ）若しくは１９８９
年７月５日にＣ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、に寄託番号１−８８４で
寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）によ
り分泌される抗体により認識される抗原をコードする対
応の核酸に関する。
特に（但し必ずしもそうとは限らないが）本発明の抗原
のアミノ酸配列が従来のペプチド配列決定方法により少
なくとも部分的に利用可能となるときには、当然当業者
はこのような核酸を製造又は分離するために種々の方法
を利用できる。
のアミノ酸配列が従来のペプチド配列決定方法により少
なくとも部分的に利用可能となるときには、当然当業者
はこのような核酸を製造又は分離するために種々の方法
を利用できる。
このような方法の１つを以下に示す。
−ＮＦＴ細胞から得た断片ＤＮＡ組成物を、本発明の抗
原の選択したアミノ酸配列に対応する核酸配列からなる
プローブとハイブリダイゼーション条件下で接触させる
。
原の選択したアミノ酸配列に対応する核酸配列からなる
プローブとハイブリダイゼーション条件下で接触させる
。
一形成したハイブリッドを回収する。
−次いでＤＮＡストランドを出発プローブから適切な変
性条件下で離隔する。該ＤＮＡストランドは前記抗原を
コードする核酸配列の少なくとも一部を含んでいる。
性条件下で離隔する。該ＤＮＡストランドは前記抗原を
コードする核酸配列の少なくとも一部を含んでいる。
該方法は更に、このようなストランドを配列し、本発明
の抗原の所定のアミノ酸配列と対応するらしい可能な理
論的ヌクレオチド配列と比較した後に、核酸の関係部分
を認識することを含み得る。
の抗原の所定のアミノ酸配列と対応するらしい可能な理
論的ヌクレオチド配列と比較した後に、核酸の関係部分
を認識することを含み得る。
抗原のアミノ酸配列の少なくとも一部をあらかじめ配列
決定させずとも、核酸をより入手し易くするより実践的
な他の好ましい方法を以下に示す。
決定させずとも、核酸をより入手し易くするより実践的
な他の好ましい方法を以下に示す。
−アルツハイマー病にかかつていた患者の大脳皮質の細
胞からメツセンジャーＲＮ＾を回収する。
胞からメツセンジャーＲＮ＾を回収する。
−該ｍＲＮ＾の逆転写によりライブラリーｃＤＮへを形
成する。
成する。
一場合によっては、例えば５ａｕｌｌＩ八制限酵素を使
用して前記ｃＤＮ＾を断片化する。
用して前記ｃＤＮ＾を断片化する。
−適切なプロモーターの制御下で適切なりローニングベ
クターにｃＤＮ＾を挿入して、このようなベクター内に
含まれる挿入断片に含まれる読み取り枠の競合細胞宿主
でのその後の発現を認める要素を調整する。
クターにｃＤＮ＾を挿入して、このようなベクター内に
含まれる挿入断片に含まれる読み取り枠の競合細胞宿主
でのその後の発現を認める要素を調整する。
このようなｃＤＮ＾ＤＮＡ含む改変したベクターで適切
なコンピテント細胞宿主を形質転換して、形質転換した
細胞コロニーを回収する。
なコンピテント細胞宿主を形質転換して、形質転換した
細胞コロニーを回収する。
−必要とあれば細胞の溶菌後に、抗体と対応する抗原と
の免疫複合物の生産を可能とする条件下で、前記の形質
転換した細胞コロニーの発現生成物を本発明のモノクロ
ーナル抗体と接触させる。
の免疫複合物の生産を可能とする条件下で、前記の形質
転換した細胞コロニーの発現生成物を本発明のモノクロ
ーナル抗体と接触させる。
−本発明のモノクローナル抗体により認識されるタンパ
ク質を生じる細胞をスクリーニングする。
ク質を生じる細胞をスクリーニングする。
−モノクローナル抗体により認識された発現生成物に関
与する異質ＤＮＡ断片を、選択した細胞から回収する。
与する異質ＤＮＡ断片を、選択した細胞から回収する。
一場合によっては、特定核酸を配列決定して認識する。
一最後に、モノクローナル抗体により認識される抗原の
産生に関与した読み取り枠を識別した後に、該読み取り
枠を含んでいた核酸断片を回収する。
産生に関与した読み取り枠を識別した後に、該読み取り
枠を含んでいた核酸断片を回収する。
この方法が、本発明の抗原の基本的なポリペプチド構造
の少なくとも一部のアミノ酸配列の決定を可能とする方
法も提供することは言うまでもない 得られた核酸又は核酸の断片を引き続き、例えば考慮し
た抗原を産生ずるために該核酸又は核酸の断片を適切な
ベクターに挿入して、コンピテント有機体を改変したベ
クターで形質転換した後に、出発モノクローナル抗体に
より特異的に認識される部位を含んでいる本発明の抗原
の産生に使用することができる。このような状況ではコ
ンピテント宿主で前記抗原を産生するために、適切なプ
ロモーター及びその後の適切な終結コドンの制御下で特
定核酸断片を再度ベクターに挿入せねばならないことは
言うまでもない。
の少なくとも一部のアミノ酸配列の決定を可能とする方
法も提供することは言うまでもない 得られた核酸又は核酸の断片を引き続き、例えば考慮し
た抗原を産生ずるために該核酸又は核酸の断片を適切な
ベクターに挿入して、コンピテント有機体を改変したベ
クターで形質転換した後に、出発モノクローナル抗体に
より特異的に認識される部位を含んでいる本発明の抗原
の産生に使用することができる。このような状況ではコ
ンピテント宿主で前記抗原を産生するために、適切なプ
ロモーター及びその後の適切な終結コドンの制御下で特
定核酸断片を再度ベクターに挿入せねばならないことは
言うまでもない。
得られた核酸又は核酸の一部は更に、適切なマーカーに
よるその後の検出を可能とするために、特に従来の手順
による放射性標識又は変更の後に、プローブの製造に使
用できる。これらのプローブは、本明細書で引用したア
ルツハイマー病又は他の疾患に関与する抗原をコードす
る核酸配列を検出するために使用することができる。こ
れらのプローブは単離形態の核酸又はその一部分から構
成され得る。これらのプローブは更に、前記核酸又はそ
の一部を含む組換えＤＮＡから構成され得る。
よるその後の検出を可能とするために、特に従来の手順
による放射性標識又は変更の後に、プローブの製造に使
用できる。これらのプローブは、本明細書で引用したア
ルツハイマー病又は他の疾患に関与する抗原をコードす
る核酸配列を検出するために使用することができる。こ
れらのプローブは単離形態の核酸又はその一部分から構
成され得る。これらのプローブは更に、前記核酸又はそ
の一部を含む組換えＤＮＡから構成され得る。
しかしなから、このような組換えＤＮＡプローブの他の
部分が診断すべき患者の細胞調製物から得られる核酸組
成物とハイブリダイズしそうにないことに法官ずべきで
あると考えられる。
部分が診断すべき患者の細胞調製物から得られる核酸組
成物とハイブリダイズしそうにないことに法官ずべきで
あると考えられる。
本発明の前述した抗原の存在を検出するためのプローブ
は、有利には前述した核酸又は対応する相補核酸に属す
る配列を含み、且つそれ自体が該核酸の１０個〜最大数
のヌクレオチドを含んでいる。
は、有利には前述した核酸又は対応する相補核酸に属す
る配列を含み、且つそれ自体が該核酸の１０個〜最大数
のヌクレオチドを含んでいる。
他のこのようなｉｎ ｖｉｔｒｏ診断法を以下に示す。
−神経原線維変性、例えばアルツハイマー病にかかって
いると考えられる患者の大脳皮質から得られ、またその
核酸が必要時に他の核酸とハイブリダイズしやすくなっ
ている細胞調製物、特にＮＦＴを出発材料とする。
いると考えられる患者の大脳皮質から得られ、またその
核酸が必要時に他の核酸とハイブリダイズしやすくなっ
ている細胞調製物、特にＮＦＴを出発材料とする。
一細胞調製物又は該細胞調製物からあらかじめ抽出した
核酸を適切なハイブリダイゼーション条件下で前述した
プローブと接触させると、恐らく該プローブと前記抗原
をコードする配列との間にハイブリッドが生じる。
核酸を適切なハイブリダイゼーション条件下で前述した
プローブと接触させると、恐らく該プローブと前記抗原
をコードする配列との間にハイブリッドが生じる。
−もしあれば形成されたハイブリッドを検出して、ハイ
ブリダイゼーションの発生如何による患者の神経原線維
変性の有無を評価する。
ブリダイゼーションの発生如何による患者の神経原線維
変性の有無を評価する。
本発明のハイブリドーマと対応するモノクローナル抗体
とが得られ得る好ましい条件を以下に記載する。これか
ら、本発明の他の好ましい特徴が明白となろう。該抗体
は、総て当業者が実行できる手順に基づき前述した他の
総ての成分と反応し得る。
とが得られ得る好ましい条件を以下に記載する。これか
ら、本発明の他の好ましい特徴が明白となろう。該抗体
は、総て当業者が実行できる手順に基づき前述した他の
総ての成分と反応し得る。
実施例１：モノクローナル抗体ＮＦＴ２００（ＩｇＭ。
にタイプ）の生産：
１ＮＦＴの ：
ＮＦＴを、−見散発性のアルツハイマー病の患者を死体
解剖して得られた大脳皮質から長期Ｉｑｂａｌ法（Ｉｑ
ｂａｌ Ｋ、 Ｚａｉｄｉ Ｔ、 Ｔｈｏｍｐｓ６ｎ
ＣＨ等、＾１ｚｈｅｉｓｅｒ ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉ
ｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ： ｂｕｌｋｉｓｏｌａｔ
ｉｏｎ、 ５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅ
ｉｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ、 ＾ｃｔａ Ｎｅｕ
ｒｏｐａｔｈ、 （Ｂｅｒｌ、） １９８４；８２
： １６７−１７７）で分離した０診断を神経病理学的
に確認した（にａｔｈａｔｕｒｉａｎ ＺＳ、 Ｄｉａ
ｇｎｏｓｉｓ ｏｆ＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅ
ａｓｅ、＾ｒｃｈ、 Ｎｅｕｒｏｌ、 １９８５； ４
２：１０９７−１１０５）、コンゴーレッド染色後に偏
光詔微鏡検査によりＮＦＴ調製物の種類を調べた。これ
は炎形親コンゴー性（ｃｏｎｇｏｐｈｉｌｉｃ）ＮＦＴ
、他の親コンゴー性材料、細胞核、毛細血管及び無定形
破片を示していた。免疫感作の前にＮＦＴ調製物を音波
処理した。
解剖して得られた大脳皮質から長期Ｉｑｂａｌ法（Ｉｑ
ｂａｌ Ｋ、 Ｚａｉｄｉ Ｔ、 Ｔｈｏｍｐｓ６ｎ
ＣＨ等、＾１ｚｈｅｉｓｅｒ ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉ
ｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ： ｂｕｌｋｉｓｏｌａｔ
ｉｏｎ、 ５ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｔｅ
ｉｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ、 ＾ｃｔａ Ｎｅｕ
ｒｏｐａｔｈ、 （Ｂｅｒｌ、） １９８４；８２
： １６７−１７７）で分離した０診断を神経病理学的
に確認した（にａｔｈａｔｕｒｉａｎ ＺＳ、 Ｄｉａ
ｇｎｏｓｉｓ ｏｆ＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅ
ａｓｅ、＾ｒｃｈ、 Ｎｅｕｒｏｌ、 １９８５； ４
２：１０９７−１１０５）、コンゴーレッド染色後に偏
光詔微鏡検査によりＮＦＴ調製物の種類を調べた。これ
は炎形親コンゴー性（ｃｏｎｇｏｐｈｉｌｉｃ）ＮＦＴ
、他の親コンゴー性材料、細胞核、毛細血管及び無定形
破片を示していた。免疫感作の前にＮＦＴ調製物を音波
処理した。
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ａ免疫感作してい
ないＢＡＬＢ／ｃマウスの膵臓細胞を、４０ｎｇ／ｍｌ
の音波処理したＮＦＴ調製物の存在下で、２０％のウシ
胎児血清を含む５０％の胸腺細胞でコンデイションした
ＨＢ １０１培地（Ｈａｎａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ
）中で培養した。（にｏｐｒｏｗｓｋｉ Ｈ，Ｇｅｒｈ
ａｒｄ Ｊ Ｃｒｏｃｅ ＣＭＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ １ｎｆ
ｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ ｂｙ ｓｏ＋５ａｔｉｃ ｃ
ｅｌｌ ｈｙｂｒｉｄｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｏｕｓｅ
ｍｙｅｌｏｍａ ａｎｄ ｐｒｉｍｅｄ ５ｐｌ
ｅｅｎ ｃｅｌｌｓ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
ないＢＡＬＢ／ｃマウスの膵臓細胞を、４０ｎｇ／ｍｌ
の音波処理したＮＦＴ調製物の存在下で、２０％のウシ
胎児血清を含む５０％の胸腺細胞でコンデイションした
ＨＢ １０１培地（Ｈａｎａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ
）中で培養した。（にｏｐｒｏｗｓｋｉ Ｈ，Ｇｅｒｈ
ａｒｄ Ｊ Ｃｒｏｃｅ ＣＭＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ １ｎｆ
ｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ ｂｙ ｓｏ＋５ａｔｉｃ ｃ
ｅｌｌ ｈｙｂｒｉｄｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｏｕｓｅ
ｍｙｅｌｏｍａ ａｎｄ ｐｒｉｍｅｄ ５ｐｌ
ｅｅｎ ｃｅｌｌｓ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
＾ｃａｃ１． Ｓｃｉ、 ＵＳ＾１９８７．７４：２９
８５−２９８８）に記載の如く、３日目、４日目及び５
日目に１０１個の膵臓線取を２×１０フ個のＰ３／Ｎ５
−１／１＾ｇ４−１骨髄腫細胞と混合し、２５％ポリエ
チレングリコール中で８分間融合した。
８５−２９８８）に記載の如く、３日目、４日目及び５
日目に１０１個の膵臓線取を２×１０フ個のＰ３／Ｎ５
−１／１＾ｇ４−１骨髄腫細胞と混合し、２５％ポリエ
チレングリコール中で８分間融合した。
各３回の融合の後に、各々が融合混合物からの５×１０
４個の細胞と、１０５個の免疫感作していないＢＡＬＢ
／ｃＩ！！！臓細胞とを０．２ｍｆ中に含んでいる一連
の１４４０個の培養物を完全なＨＡＴ（ヒボキサンチン
アミノプテリン ピリジン）選択的培地の９６ウエル
プレー ７− （Ｎｕｎｅ）に置いた。該培地はヒボキ
サンチン、アミノプテリン及びチミジンを含み、また１
５％熱失活ウシつシ血清を加えたＨＢＩＯＩ培地であっ
た。
４個の細胞と、１０５個の免疫感作していないＢＡＬＢ
／ｃＩ！！！臓細胞とを０．２ｍｆ中に含んでいる一連
の１４４０個の培養物を完全なＨＡＴ（ヒボキサンチン
アミノプテリン ピリジン）選択的培地の９６ウエル
プレー ７− （Ｎｕｎｅ）に置いた。該培地はヒボキ
サンチン、アミノプテリン及びチミジンを含み、また１
５％熱失活ウシつシ血清を加えたＨＢＩＯＩ培地であっ
た。
特異的抗体を分泌する培養物を２．５ｍｔ’に膨張させ
て、限界希釈によりクローニングしな。
て、限界希釈によりクローニングしな。
のス Ｉ−ニン ：
ａ） 扛ｆｌＡ！友広：
抗体産生用のハイブリドーマ上澄み液をスクリーニング
するための固相放射標識免疫定量法を以下に示す、長期
Ｉｑｂａｌ法の最終ペレットからなる半精■ＮＦＴ調製
物を音波処理して、０．１８重炭酸ナトリウムで１鍮ｌ
当たり約１０μｇのタンパク質が含まれるように希釈し
た。この抗原を前述した如くポリ塩化ビニルの平底９６
ウエルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）に吸着させた。５０μ
ｌのハイブリドーマ上澄み液を各ウェルに加えた。４℃
で４時間開いた後にウェルを０．１５Ｍ塩化ナトリウム
（ＰＢＳ）と２％ウウシ児血清とを含む０．１Ｍリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，４）で３度洗浄し、５０μ
ｌの１１２５標識した抗マウス免疫グロブリン（２５，
０００ｃｐｓ）（＾−ｅｒｓｈａｍ）でインキユベート
シた。２時間後にウェルを３度洗浄し、熱線でプレート
から切断し、ガンマカウンターで１分間カウントした。
するための固相放射標識免疫定量法を以下に示す、長期
Ｉｑｂａｌ法の最終ペレットからなる半精■ＮＦＴ調製
物を音波処理して、０．１８重炭酸ナトリウムで１鍮ｌ
当たり約１０μｇのタンパク質が含まれるように希釈し
た。この抗原を前述した如くポリ塩化ビニルの平底９６
ウエルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）に吸着させた。５０μ
ｌのハイブリドーマ上澄み液を各ウェルに加えた。４℃
で４時間開いた後にウェルを０．１５Ｍ塩化ナトリウム
（ＰＢＳ）と２％ウウシ児血清とを含む０．１Ｍリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，４）で３度洗浄し、５０μ
ｌの１１２５標識した抗マウス免疫グロブリン（２５，
０００ｃｐｓ）（＾−ｅｒｓｈａｍ）でインキユベート
シた。２時間後にウェルを３度洗浄し、熱線でプレート
から切断し、ガンマカウンターで１分間カウントした。
試料により拘束されるｅｐｌｍが完全ＨＡＴ培地により
拘束されるｃｐｓの平均＋２の標準偏差より大きいとき
に、試料は陽性であると考えられた。
拘束されるｃｐｓの平均＋２の標準偏差より大きいとき
に、試料は陽性であると考えられた。
ｂ） ｉｉＪ：
４３２０個の培養物の内８２９個の培養物でハイブリド
ーマ細胞が成長した。安定した抗体を分泌する２３種の
ハイブリドーマをスクリーニングアッセイで識別した。
ーマ細胞が成長した。安定した抗体を分泌する２３種の
ハイブリドーマをスクリーニングアッセイで識別した。
特異的ハイブリドーマの収率は１ｖｉｔｒｏ抗原プライ
ミングの時間に関係なく各融合について同一であった。
ミングの時間に関係なく各融合について同一であった。
ＮＦ７２０Ｇと称するこれらのモノクローナル抗体の
１つについて更に説明する。
１つについて更に説明する。
この抗体は確かにＩｇＭクラスでにタイプであった。
１ ：ａ）礼且及証去
羞； 一見散発性（Ｎ・４）及び老人性（Ｎ・４）のアルツハ
イマー病、２種の大きなベルギー民族の常染色体の優性
遺伝したアルツハイマー病（Ｎ＝１４）（ＶａｎＢｒｏ
ｅｃｋｈｏｖｅｎ Ｃ等、１９８７． Ｆａｉｌｕｒｅ
ｏｆ ｆａ１１ｉ１ｉａｌ＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄ
ｉｓｅａｓｅ ｔｏ ｓｅｇｒｅｇａｔｅ ｗｉ
ｔｈ ｔｈｅ ＾４−ａｍｙｌｏｉｄ ｇｅｎｅ
ｉｎ ５ｅｖｅｒａｌ ＥｕｒＯｐｅａｎ
ｆａ輸１ｌｉｅｓ。
羞； 一見散発性（Ｎ・４）及び老人性（Ｎ・４）のアルツハ
イマー病、２種の大きなベルギー民族の常染色体の優性
遺伝したアルツハイマー病（Ｎ＝１４）（ＶａｎＢｒｏ
ｅｃｋｈｏｖｅｎ Ｃ等、１９８７． Ｆａｉｌｕｒｅ
ｏｆ ｆａ１１ｉ１ｉａｌ＾ｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄ
ｉｓｅａｓｅ ｔｏ ｓｅｇｒｅｇａｔｅ ｗｉ
ｔｈ ｔｈｅ ＾４−ａｍｙｌｏｉｄ ｇｅｎｅ
ｉｎ ５ｅｖｅｒａｌ ＥｕｒＯｐｅａｎ
ｆａ輸１ｌｉｅｓ。
Ｎａｔｕｒｅ ３２９，１５３−１５５）、ＮＦＴを有
するが神経症にかかっていないグアム人のパーキンソン
痴呆症候群（Ｎ・３）及び筋萎縮性側索硬化症（Ｎ＝２
）、ピック病（Ｎ＝３）、脳炎後（Ｎ・１）及び特発性
（Ｎ＝１）パーキンソン症候群、進行性核上麻痺（Ｎ・
３）、亜急性硬化作況脳炎（Ｎ・１）、ローゼンタール
線維を有する小脳星状膠層（Ｎ・１）、神経節１（Ｎ・
２）、小児突然死症候群（ト２）の脳組織を死体解剖で
採取した。脳腫瘍手術で得た患者（Ｎ・５）と正常な年
令適合対照（Ｎ・３）の大脳皮質を対照として使用した
。対照のヒトのを髄及び末梢神経、ラットの坐骨神経並
びに他のヒトの組織（副腎、肺臓、肝臓、骨格筋、腎臓
、卵巣、膵臓、肺臓）を更に調べた。各組織試料を４％
のホルマリンに浸漬して固定し、パラフィンに包埋した
。４ＩＩＩｍの厚さの切片を調製した。
するが神経症にかかっていないグアム人のパーキンソン
痴呆症候群（Ｎ・３）及び筋萎縮性側索硬化症（Ｎ＝２
）、ピック病（Ｎ＝３）、脳炎後（Ｎ・１）及び特発性
（Ｎ＝１）パーキンソン症候群、進行性核上麻痺（Ｎ・
３）、亜急性硬化作況脳炎（Ｎ・１）、ローゼンタール
線維を有する小脳星状膠層（Ｎ・１）、神経節１（Ｎ・
２）、小児突然死症候群（ト２）の脳組織を死体解剖で
採取した。脳腫瘍手術で得た患者（Ｎ・５）と正常な年
令適合対照（Ｎ・３）の大脳皮質を対照として使用した
。対照のヒトのを髄及び末梢神経、ラットの坐骨神経並
びに他のヒトの組織（副腎、肺臓、肝臓、骨格筋、腎臓
、卵巣、膵臓、肺臓）を更に調べた。各組織試料を４％
のホルマリンに浸漬して固定し、パラフィンに包埋した
。４ＩＩＩｍの厚さの切片を調製した。
アビジンビオチニル化ペルオキシダーゼ複合物技術（Ｈ
ｓｕ ＳＭ、 Ｒａ１ｎｅ Ｌ、 Ｆａｎｇｅｒ Ｈ，
Ｕｓｅ ｏｒａｖｉｄｉｎ−ｂｉｏｔｉｎ ｃｏｍｐ
ｌｅｘ （ＡＢＣ） ｉｎｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘ
ｉｄａｓｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、 Ｊ、 旧
ｓｔｏｃｈｅｍ。
ｓｕ ＳＭ、 Ｒａ１ｎｅ Ｌ、 Ｆａｎｇｅｒ Ｈ，
Ｕｓｅ ｏｒａｖｉｄｉｎ−ｂｉｏｔｉｎ ｃｏｍｐ
ｌｅｘ （ＡＢＣ） ｉｎｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘ
ｉｄａｓｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、 Ｊ、 旧
ｓｔｏｃｈｅｍ。
Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、 １９８１；２９：５７フー５８０
）又は可溶性ペルオキシダーゼ抗ペルオキシダーゼ複合
物技術（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ Ｌ＾、 Ｉｍ働
ｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （３ｒｄ、）Ｈ
ｉｌｅｙ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 １９８６）により、
本発明のモノクローナル抗体を使用した。
）又は可溶性ペルオキシダーゼ抗ペルオキシダーゼ複合
物技術（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ Ｌ＾、 Ｉｍ働
ｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （３ｒｄ、）Ｈ
ｉｌｅｙ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 １９８６）により、
本発明のモノクローナル抗体を使用した。
ジアミノベンジジンをクロモゲンとして使用した。モノ
クローナル抗神経膠原線維酸性タンパク質（抗ＧＦＡＰ
）（Ｇｈｅｕｅｎｓ Ｊ、 Ｄｅ ５ｃｈｕｔｔｅｒ
Ｅ、 Ｎｏｐｐｅ Ｍ。
クローナル抗神経膠原線維酸性タンパク質（抗ＧＦＡＰ
）（Ｇｈｅｕｅｎｓ Ｊ、 Ｄｅ ５ｃｈｕｔｔｅｒ
Ｅ、 Ｎｏｐｐｅ Ｍ。
Ｌｏｗｅｎｔｈａｌ＾、 Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌｆｏｒｍｓ ｏｒ ｔｈｅ
ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ。
ｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌｆｏｒｍｓ ｏｒ ｔｈｅ
ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ。
ｏｒ ａ−ａｌｂｕｍｉｎ、 ｂｙ ａ ５ｐ
ｅｃｉｆｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄ
ｙ Ｊ、 Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、 １９８４； ４３：
９６４−９７０）及び骨髄腫タンパク質ＭＯＰＣ２１
（ＩｇＧ１）、ＭＯＰＣ１０４Ｅ（ＩｇＭ）（Ｌｉｔｔ
ｏｎ Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ）を対照として使用した。更
には、可溶性ペルオキシダーゼ抗ペルオキシダーゼ複合
物技術を使用して、ＧＦＡＰ、対の螺旋状フィラメント
及びニューロフィラメントに対するポリクローナルラビ
ット抗血清を調べた。ここではラビットの前免疫（ｐｒ
ｅｉｍｅ＋ｕｎｅ）血清を対照として使用した。それぞ
れの場合で更に、従来のクレジルバイオレット、Ｈｏ１
ｚｅｒ、 Ｓｐｉｅｌｍｅｙｅｒ、 Ｂｏｄｉａｎ、Ｗ
ｏｎＢｒａｕｎｍｕｈｌ、 ＰＡＳ及びコンゴーレッド
染色を行った。
ｅｃｉｆｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄ
ｙ Ｊ、 Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、 １９８４； ４３：
９６４−９７０）及び骨髄腫タンパク質ＭＯＰＣ２１
（ＩｇＧ１）、ＭＯＰＣ１０４Ｅ（ＩｇＭ）（Ｌｉｔｔ
ｏｎ Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ）を対照として使用した。更
には、可溶性ペルオキシダーゼ抗ペルオキシダーゼ複合
物技術を使用して、ＧＦＡＰ、対の螺旋状フィラメント
及びニューロフィラメントに対するポリクローナルラビ
ット抗血清を調べた。ここではラビットの前免疫（ｐｒ
ｅｉｍｅ＋ｕｎｅ）血清を対照として使用した。それぞ
れの場合で更に、従来のクレジルバイオレット、Ｈｏ１
ｚｅｒ、 Ｓｐｉｅｌｍｅｙｅｒ、 Ｂｏｄｉａｎ、Ｗ
ｏｎＢｒａｕｎｍｕｈｌ、 ＰＡＳ及びコンゴーレッド
染色を行った。
コンゴーレッド部分を偏光検査した。
ｂ）ＳＬＪＬ：
散発性又は家族性の初老性及び老人性アルツハイマー病
では、ＮＦ７２００は大脳及び脳幹の異なる区域の核周
囲細胞体（ｐｅｒｉｋａｒｙａ）で強＜ ＮＦＴを標識
した。これらのＮＦＴの大半は親コンゴー性であり、緑
色の複屈折を示していた。老人斑の神経突起及び老人斑
と核周囲細胞体とからある程度能れた所にある神経突起
も、顆粒空胞変性するだけでなく標識した。総ての場合
において、老人斑中核と血管壁とを含むアミロイドは陰
性のままであった。
では、ＮＦ７２００は大脳及び脳幹の異なる区域の核周
囲細胞体（ｐｅｒｉｋａｒｙａ）で強＜ ＮＦＴを標識
した。これらのＮＦＴの大半は親コンゴー性であり、緑
色の複屈折を示していた。老人斑の神経突起及び老人斑
と核周囲細胞体とからある程度能れた所にある神経突起
も、顆粒空胞変性するだけでなく標識した。総ての場合
において、老人斑中核と血管壁とを含むアミロイドは陰
性のままであった。
ＮＦ７２００は更に、脳炎後のパーキンソン症候群にか
かっている患者の脳幹でＮＦＴを標識した。この場合、
ＮＦＴはしばしば“グロボイド“タイプであった、ここ
では、ＮＦＴはほとんど核周囲細胞体に局在していた。
かっている患者の脳幹でＮＦＴを標識した。この場合、
ＮＦＴはしばしば“グロボイド“タイプであった、ここ
では、ＮＦＴはほとんど核周囲細胞体に局在していた。
細胞体から離れた所では神経突起はめったに染色してい
なかった。亜急性硬化作況脳炎患者の大脳皮質を生検し
て、その後死体解剖したところ、ＨＦ７２００は僅かな
錐体細胞でＮＦＴを示していた。これらの炎形ＮＦＴを
アルツハイマー病で生じるＮＦＴと区別することはでき
なかった。この患者の場合、神経突起は染色しなかった
。グアムのパーキンソン痴呆症候群の神経原線維変性も
強く標識した。
なかった。亜急性硬化作況脳炎患者の大脳皮質を生検し
て、その後死体解剖したところ、ＨＦ７２００は僅かな
錐体細胞でＮＦＴを示していた。これらの炎形ＮＦＴを
アルツハイマー病で生じるＮＦＴと区別することはでき
なかった。この患者の場合、神経突起は染色しなかった
。グアムのパーキンソン痴呆症候群の神経原線維変性も
強く標識した。
進行性核上麻痺のＮＦＴ ｔ、 ＮＦＴ２００で標識し
た。ピック病の場合、皮膚層■及び■にピック体が多数
あり、ＮＦ７２０Ｇで強く標識した。ピック体は不規則
に配置された円形の筋原線維を示していた。中心性色素
融解した気球型ニューロンでは、核周囲細胞体の末梢縁
部で小さなＮＦＴ２００免疫活性顆粒を検出した。
た。ピック病の場合、皮膚層■及び■にピック体が多数
あり、ＮＦ７２０Ｇで強く標識した。ピック体は不規則
に配置された円形の筋原線維を示していた。中心性色素
融解した気球型ニューロンでは、核周囲細胞体の末梢縁
部で小さなＮＦＴ２００免疫活性顆粒を検出した。
Ｌ１女几皿ヱぶ、ＮＦＴ２００は大脳白質ではなく、末
梢神経及びを髄の軸索を標識した。場合によっては、視
神経の軸索の弱い標識が観察された。樹状突起は幼児の
脳細胞と同様に陰性のままであった６年令適合対照で散
在的に生じるＮＦＴも染色した。検査した他の総ての組
織は陰性であった。
梢神経及びを髄の軸索を標識した。場合によっては、視
神経の軸索の弱い標識が観察された。樹状突起は幼児の
脳細胞と同様に陰性のままであった６年令適合対照で散
在的に生じるＮＦＴも染色した。検査した他の総ての組
織は陰性であった。
ＮＦＴ２００はラットの坐骨神経の軸索も標識した。
ＨＦ７２００はアルツハイマー病のヒラノ小体も特発性
パーキンソン症候群のりューイ小体も免疫染色しなかっ
たが、リューイ小体の周辺はポリクローナル抗ニューロ
フィラメント血清で標識した。小脳の星状細胞腫のロー
ゼンタール線維も陰性のままであった。
パーキンソン症候群のりューイ小体も免疫染色しなかっ
たが、リューイ小体の周辺はポリクローナル抗ニューロ
フィラメント血清で標識した。小脳の星状細胞腫のロー
ゼンタール線維も陰性のままであった。
の
ａ〉 材１叉でＥ１法二
散発性及び家族性のアルツハイマー病症例の海馬組織、
ピック症例の前頭及び側頭皮質、進行性核上麻痺症例の
脳幹、並びに末梢神経を、包埋せずに６０μ箇の厚さに
切片化する前にブアン固定液又は１０％の緩衝ホルマリ
ンで固定した（Ｖｉｂｒａｔｏａｚｅ） ｅその切片を
前述した如く間接免疫合法で免疫染色し、固定し、包埋
し、電子頴微鏡検査用に切り取った（Ｐｅｒｒｙ Ｇ、
、 Ｎｕｌｖｉｈｉｌｌ Ｐ。
ピック症例の前頭及び側頭皮質、進行性核上麻痺症例の
脳幹、並びに末梢神経を、包埋せずに６０μ箇の厚さに
切片化する前にブアン固定液又は１０％の緩衝ホルマリ
ンで固定した（Ｖｉｂｒａｔｏａｚｅ） ｅその切片を
前述した如く間接免疫合法で免疫染色し、固定し、包埋
し、電子頴微鏡検査用に切り取った（Ｐｅｒｒｙ Ｇ、
、 Ｎｕｌｖｉｈｉｌｌ Ｐ。
Ｍａｎｅｔｔｏ Ｖ等、 Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅ
ｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ Ａｌｚｈｅｉ
ｍｅｒ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ、 Ｊ
、 Ｎｅｕｒｏｓｃｉ。
ｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ Ａｌｚｈｅｉ
ｍｅｒ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ、 Ｊ
、 Ｎｅｕｒｏｓｃｉ。
１９８７、 ７：３）３６−３７３８）。
ｂ）ＭＪ。
超微細構造的には、ＮＦＴ２００はアルツハイマー病の
対の螺旋状フィラメントと顆粒空胞変性を標識した。老
人斑中核及び血管壁のアミロイドフィラメント、即ちア
ミロイド沈着物は標識しなかった。
対の螺旋状フィラメントと顆粒空胞変性を標識した。老
人斑中核及び血管壁のアミロイドフィラメント、即ちア
ミロイド沈着物は標識しなかった。
ピック病及び進行性核上麻痺では、１１２−１５ｎの直
線状フィラメントが標識された。末梢神経では、細胞骨
格構造に限定されない軸索の特異的細胞質染色がＨＦ７
２００で観察された。
線状フィラメントが標識された。末梢神経では、細胞骨
格構造に限定されない軸索の特異的細胞質染色がＨＦ７
２００で観察された。
ｔ−ＮＦＴの
ａ）彬粍瓦Ｕ方韮：
音波処理前の免疫感作用に使用する免疫原として製造し
たＰＩＦに富む両分を炭素被覆したニッケルグリッドに
適用し、“組織部分の免疫電子票微鏡検査”の項で前述
した如く間接免疫合法によりイムノデコレートした（Ｐ
ｅｒｒｙ Ｇ、、 Ｈｕｌｖｉｈｉｌｌ Ｐ。
たＰＩＦに富む両分を炭素被覆したニッケルグリッドに
適用し、“組織部分の免疫電子票微鏡検査”の項で前述
した如く間接免疫合法によりイムノデコレートした（Ｐ
ｅｒｒｙ Ｇ、、 Ｈｕｌｖｉｈｉｌｌ Ｐ。
Ｍａｎｅｔｔｏ Ｖ等、Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍ
ｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ Ａｌｚｈｅｉ
ｍｅｒ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ、
Ｊ、 Ｎｅｕｒｏｓｃｉ。
ｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ Ａｌｚｈｅｉ
ｍｅｒ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ、
Ｊ、 Ｎｅｕｒｏｓｃｉ。
１９８７、 ）：３７３６−３７３８）。
ｂ） ！ＬＪ！：
ｉｎ ５ｉｔｕでのＮＦＴ２００のＰＨＦとの反応性を
、アルツハイマー病患者からの免疫陰性染色した単離Ｐ
ＨＦで確かめた。
、アルツハイマー病患者からの免疫陰性染色した単離Ｐ
ＨＦで確かめた。
免疫感作用に使用する免疫原として製造したＰＩＦに富
む両分を音波処理し、５ＤＳ−ポリアクリルアミド電気
泳動及びイムノプロットに試料として使用した。更には
、散発性アルツハイマー病の症例、家族性アルツハイマ
ー病の症例、及びアドレノロイコジストロフィーの症例
の大脳皮質のＰＢＳ、ＳＯＳ抽出物を（Ｇｈｅｕｅｎｓ
Ｊ、前記参照）に記載の如く製造して、試料として使
用した。同一症例の半球白質から同様の抽出物を製造し
た。対照のヒトのを髄から精製したニューロフィラメン
トタンパク質（Ｋｏｏｎ−Ｓｅａ Ｈｕｉ、 Ｍａｒｉ
ａ Ｈｕｉ、 Ｆｕｎｇ−ＣｈｏｗＣｈｉｕ、 Ｍｉｒ
ｉａｍ Ｉｌｌａｎａｙ−Ｓｃｈａｗａｒｔｚ、 Ｔｅ
ｒｅｓｉｔａＤｅｇｕｚｍａｎ、 Ｒｏｂｅｒｔ Ｓ、
５ａｃｃｈｉ、 Ａｂｅｌ Ｌａｊｔｈａ：５ｅｐａ
ｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕｉａｌｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎ
ｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ−
ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ １
ｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、＾ｎａｌ
。
む両分を音波処理し、５ＤＳ−ポリアクリルアミド電気
泳動及びイムノプロットに試料として使用した。更には
、散発性アルツハイマー病の症例、家族性アルツハイマ
ー病の症例、及びアドレノロイコジストロフィーの症例
の大脳皮質のＰＢＳ、ＳＯＳ抽出物を（Ｇｈｅｕｅｎｓ
Ｊ、前記参照）に記載の如く製造して、試料として使
用した。同一症例の半球白質から同様の抽出物を製造し
た。対照のヒトのを髄から精製したニューロフィラメン
トタンパク質（Ｋｏｏｎ−Ｓｅａ Ｈｕｉ、 Ｍａｒｉ
ａ Ｈｕｉ、 Ｆｕｎｇ−ＣｈｏｗＣｈｉｕ、 Ｍｉｒ
ｉａｍ Ｉｌｌａｎａｙ−Ｓｃｈａｗａｒｔｚ、 Ｔｅ
ｒｅｓｉｔａＤｅｇｕｚｍａｎ、 Ｒｏｂｅｒｔ Ｓ、
５ａｃｃｈｉ、 Ａｂｅｌ Ｌａｊｔｈａ：５ｅｐａ
ｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕｉａｌｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎ
ｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ−
ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ １
ｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、＾ｎａｌ
。
Ｂｉｏｃｈｅａｅ、 １５３： ２３０：２３４ （１
９８６））、熱安定微小管会合タンパク質（Ｊ、 Ａｖ
ｉｌｌａより入手）、ユビキチン（ＳｉＨ＋ａ）、及び
合成＾４−アミロイドペプチド（Ｋ。
９８６））、熱安定微小管会合タンパク質（Ｊ、 Ａｖ
ｉｌｌａより入手）、ユビキチン（ＳｉＨ＋ａ）、及び
合成＾４−アミロイドペプチド（Ｋ。
９６ｙｒｅｕｔｈｅｒより入手）も分析した。
１２％ゲル上で５ＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動を
還元条件下で実施した（Ｌａｅｍｍｌｉ ＵＫ、 Ｃｌ
ｅａｖａｇｅｏｒ ５ｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ａｓｓｅｍ
ｂｌｙｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ Ｔ４．Ｎ
ａｔｕｒｅ １９７０； ２２７： ６８０８８
５） 、電気泳動後に、タンパク質を固定して、クーマ
シーブリリアントブルーで染色するか、又はニトロセル
ドース（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｃ、＾ｍｅｒｓｈａｍ）若しく
はＰＶＤ ＦＩＬＴＥＲ３（Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ、Ｍｉ
ｌｌｉｐｏｒｅ）に移した（Ｔｏｗｂｉｎ Ｈ，５ｔａ
ｅｈｅｌｉｎ Ｔ、 Ｇｏｒｄｏｎ Ｊ。
還元条件下で実施した（Ｌａｅｍｍｌｉ ＵＫ、 Ｃｌ
ｅａｖａｇｅｏｒ ５ｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ａｓｓｅｍ
ｂｌｙｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ Ｔ４．Ｎ
ａｔｕｒｅ １９７０； ２２７： ６８０８８
５） 、電気泳動後に、タンパク質を固定して、クーマ
シーブリリアントブルーで染色するか、又はニトロセル
ドース（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｃ、＾ｍｅｒｓｈａｍ）若しく
はＰＶＤ ＦＩＬＴＥＲ３（Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ、Ｍｉ
ｌｌｉｐｏｒｅ）に移した（Ｔｏｗｂｉｎ Ｈ，５ｔａ
ｅｈｅｌｉｎ Ｔ、 Ｇｏｒｄｏｎ Ｊ。
Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｅｒ
ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍｐｏｌｙａｅｒｙｌ
ａｍｉｃｌｅ ｇｅｌｓ ｔｏ ｎ１ｔｒｏｃｅ
ｌｌｕｌｏｓｅ ５ｈｅｅｔｓ： ｐｒｏｃｅｄｕｒ
ｅ ａｎｄ ｓｏｍｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、
Ｐｒｏｃ。
ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍｐｏｌｙａｅｒｙｌ
ａｍｉｃｌｅ ｇｅｌｓ ｔｏ ｎ１ｔｒｏｃｅ
ｌｌｕｌｏｓｅ ５ｈｅｅｔｓ： ｐｒｏｃｅｄｕｒ
ｅ ａｎｄ ｓｏｍｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、
Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、＾ｃａ、 Ｓｃｉ、 ＵＳ＾１９７９．７６
：４３５０−４３５４＞。移した後に、フィルターを０
．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰｕｓ（Ｔ
ｗｅｅｎ−ＰＢＳ）にあらかじめ浸漬し、次いで５％（
ｗ／ｖ）のスキムミルクと５％（ν／ｖ）の正常なりギ
の血清とを含んでいるＴｗｅｅｎ−ＰＢＳ（ブロッキン
グ緩衝液）で１時間インキュベートした０次に、フィル
ターをブロッキング緩衝液で適切に希釈した一次抗体で
一晩４℃で処理した０次いでフィルターをＴｗｅｅｎ−
ＰＢＳで３度洗浄し、プロ・ソキング緩衝液で１７２５
０に希釈したビオチニル化→ヤギｌ抗マウスエｇＭ（＾
ｍｅｒｓｈａｍ）で１時間半室温で処理した。 Ｔ＋ｗ
ｅｅｎ−ＰＢＳで３度洗浄した後に、ブロッキングＭ街
液で１７２５０に希釈したストレプトアビジン−ビオチ
ニル化ホースラデイツシュペルオキシダーゼ複合物（Ａ
−ｅｒｓｈａｍ）を使用して室温で１時間半処理した。
：４３５０−４３５４＞。移した後に、フィルターを０
．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰｕｓ（Ｔ
ｗｅｅｎ−ＰＢＳ）にあらかじめ浸漬し、次いで５％（
ｗ／ｖ）のスキムミルクと５％（ν／ｖ）の正常なりギ
の血清とを含んでいるＴｗｅｅｎ−ＰＢＳ（ブロッキン
グ緩衝液）で１時間インキュベートした０次に、フィル
ターをブロッキング緩衝液で適切に希釈した一次抗体で
一晩４℃で処理した０次いでフィルターをＴｗｅｅｎ−
ＰＢＳで３度洗浄し、プロ・ソキング緩衝液で１７２５
０に希釈したビオチニル化→ヤギｌ抗マウスエｇＭ（＾
ｍｅｒｓｈａｍ）で１時間半室温で処理した。 Ｔ＋ｗ
ｅｅｎ−ＰＢＳで３度洗浄した後に、ブロッキングＭ街
液で１７２５０に希釈したストレプトアビジン−ビオチ
ニル化ホースラデイツシュペルオキシダーゼ複合物（Ａ
−ｅｒｓｈａｍ）を使用して室温で１時間半処理した。
その後、フィルターをＴｗｅｅｎ−ＰＢＳで３度、ＰＢ
Ｓで１度洗浄した６次いで、バックグラウンド染色が生
じるまで、０．０５％（ｗ／ｖ）のジアミノベンジジン
と０．０１％（Ｖ／Ｖ）の過酸化水素とを含むＰＢＳ中
でインキュベートした。陰性対照としてＭＯＰＣ２１、
ＭＯＰＣ１０４Ｅ骨髄腫タンパク質を使用した。抗ニュ
ーロフィラメントモノクローナル抗体並びに抗τ、抗Ｍ
ＡＰ２及び抗アミロイド抗体を対照として対応する抗原
のイムノプロットに使用した。
Ｓで１度洗浄した６次いで、バックグラウンド染色が生
じるまで、０．０５％（ｗ／ｖ）のジアミノベンジジン
と０．０１％（Ｖ／Ｖ）の過酸化水素とを含むＰＢＳ中
でインキュベートした。陰性対照としてＭＯＰＣ２１、
ＭＯＰＣ１０４Ｅ骨髄腫タンパク質を使用した。抗ニュ
ーロフィラメントモノクローナル抗体並びに抗τ、抗Ｍ
ＡＰ２及び抗アミロイド抗体を対照として対応する抗原
のイムノプロットに使用した。
ｂ）ＩｉＪ＝
ＮＦＴ２００は分離したニューロフィラメントタンパク
質、τタンパク質、ＭＡＰ２タンパク質、ユビキチン又
は＾４−アミロイドペプチドと交差反応しなかった。抗
体はアルツハイマー病又は対照から得られる皮質若しく
は白質抽出物からの水性及びＳＯＳ抽出物のいかなるペ
プチドとも反応しなかった。しかしなから、音波処理し
たＰＩＦに富む両分でのイムノプロットは、ＮＦＴ２０
０抗体が２００ＫＤタンパク質バンドを識別することを
示していたく第１図）。更に正確に言えば、第１図はＮ
Ｆ丁２００がイムノプロットではニューロフィラメント
タンパク質（レーン１）（レーン２：モノクローナル抗
ニューロフィラメント抗体）、τタンパク質（レーン３
）（レーン４：抗τ抗体）、ＭＡＰ−２（レーン５）（
レーン６：抗ＭＡＰ−２抗体）、ユビキチン（レーン７
）（レーン８：抗ユビキチン抗体）又は＾４−アミロイ
ドペプチド（レーン９）（レーン１０：゛抗＾４抗体）
と反応しないことを示している。
質、τタンパク質、ＭＡＰ２タンパク質、ユビキチン又
は＾４−アミロイドペプチドと交差反応しなかった。抗
体はアルツハイマー病又は対照から得られる皮質若しく
は白質抽出物からの水性及びＳＯＳ抽出物のいかなるペ
プチドとも反応しなかった。しかしなから、音波処理し
たＰＩＦに富む両分でのイムノプロットは、ＮＦＴ２０
０抗体が２００ＫＤタンパク質バンドを識別することを
示していたく第１図）。更に正確に言えば、第１図はＮ
Ｆ丁２００がイムノプロットではニューロフィラメント
タンパク質（レーン１）（レーン２：モノクローナル抗
ニューロフィラメント抗体）、τタンパク質（レーン３
）（レーン４：抗τ抗体）、ＭＡＰ−２（レーン５）（
レーン６：抗ＭＡＰ−２抗体）、ユビキチン（レーン７
）（レーン８：抗ユビキチン抗体）又は＾４−アミロイ
ドペプチド（レーン９）（レーン１０：゛抗＾４抗体）
と反応しないことを示している。
ＮＦＴ２００は分子量が２００．０００のタンパク質バ
ンドを、アルツハイマー病患者の皮質の水性抽出物（レ
ーン１２）ではなく、音波処理したＰＩＦに富む画分（
レーン１１）で識別する。
ンドを、アルツハイマー病患者の皮質の水性抽出物（レ
ーン１２）ではなく、音波処理したＰＩＦに富む画分（
レーン１１）で識別する。
説リン酸化実験：
ａ）１扛及話方ユニ
本発明の抗体がリン酸化エピトープに対するものである
かどうかを評価するために、前述した如くニトロセルロ
ースにイムノブロッティングした手積製ＮＦＴを、０．
０１Ｍフェニル−メチル−スルホニル＝フルオリドを含
むＩＩＵのタイプｍ Ｅ、ｃｏｌｉアルカリ性ホスファ
ターゼの１００μｍ ０．ＩＭ ）リス！！！街液（ｐ
Ｈ８，０）で−晩３７℃で処理した０次いで、本発明の
モノクローナル抗体を適用して、前述したイムノブロッ
ティング方法を実行した。 ＧＦＡＰ及びモノクローナ
ル抗ＧＦＡＰ、並びにニューロフィラメントタンパク質
及びモノクローナル抗ニューロフィラメント抗体を対照
として使用した。モノクローナル抗ＧＦＡＰは非リン酸
化エピトープに対するものであり、モノクローナル抗ニ
ューロフィラメント抗体はリン酸化エピトープに対する
ものであった（Ｇｈｅｕｅｎｓ等、結果は未発表）。
かどうかを評価するために、前述した如くニトロセルロ
ースにイムノブロッティングした手積製ＮＦＴを、０．
０１Ｍフェニル−メチル−スルホニル＝フルオリドを含
むＩＩＵのタイプｍ Ｅ、ｃｏｌｉアルカリ性ホスファ
ターゼの１００μｍ ０．ＩＭ ）リス！！！街液（ｐ
Ｈ８，０）で−晩３７℃で処理した０次いで、本発明の
モノクローナル抗体を適用して、前述したイムノブロッ
ティング方法を実行した。 ＧＦＡＰ及びモノクローナ
ル抗ＧＦＡＰ、並びにニューロフィラメントタンパク質
及びモノクローナル抗ニューロフィラメント抗体を対照
として使用した。モノクローナル抗ＧＦＡＰは非リン酸
化エピトープに対するものであり、モノクローナル抗ニ
ューロフィラメント抗体はリン酸化エピトープに対する
ものであった（Ｇｈｅｕｅｎｓ等、結果は未発表）。
ｂ）ｔＬＩ：
アルカリ性ホスファターゼで処理した手積製ＮＦＴは、
ＮＦＴ２００との反応性を維持していた。このことはＮ
ＦＴ２００がリン酸化エピトープに対するものではない
ことを示していた。
ＮＦＴ２００との反応性を維持していた。このことはＮ
ＦＴ２００がリン酸化エピトープに対するものではない
ことを示していた。
ｌへ左羞：
オフテルロ二−二重免疫拡散実験で、クラスタイブ特異
的抗マウス免疫グロブリン試薬（Ｌｉｔｔｏｎ Ｂｉｏ
ｎｅｔｉｃｓ）を使用して、モノクローナル抗体のクラ
ス及びタイプを決定した。 ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３０
０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ゲルｒ過クロマトグラフィー
を使用して、ハイブリドーマ腹水からＮＦＴ２００モノ
クローナル抗体を精製した。
的抗マウス免疫グロブリン試薬（Ｌｉｔｔｏｎ Ｂｉｏ
ｎｅｔｉｃｓ）を使用して、モノクローナル抗体のクラ
ス及びタイプを決定した。 ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３０
０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ゲルｒ過クロマトグラフィー
を使用して、ハイブリドーマ腹水からＮＦＴ２００モノ
クローナル抗体を精製した。
実施例■： ＮＦＴ２００ハイブリドーマ培養物からス
イッチ変異体（ｓｗｉｔｃｈ ｖａｒｉａｎｔ）モノク
ローナル抗体（１ｇＣクラス、にタイプ）の製造 １ ） ＮＦＴ２００ハイブリドーマ培養物からＩｇ
Ｇ、クラスでにタイプの抗体を分泌するスイッチ変異体
の選択： ＮＦＴ２００ハイブリドーマは１６Ｍクラスでにタイプ
のモノクローナル抗体を分泌する。しかしなから、ＩＢ
Ｍ−モノクローナル抗体は免疫化学に適用するとＩｇＧ
−モノクローナル抗体に比べて技術的な欠点を有し得る
。従って本発明者等は、ＮＦＴ２００ハイブリドーマ培
養物からＩｇＨクラスでにタイプのＮＦＴ２００モノク
ローナル抗体とｌ二（７）、１１を有するｒｇｃ、クラ
スでにタイプの抗体を分泌する変異体を選択してクロー
ニングすることのできる方法を発案した。異なるクラス
の抗体を分泌するこのようないわゆる“スイッチ変異体
”は、ＩｇＮ分泌ハイブリドーマで特発的に生じること
が知られている。
イッチ変異体（ｓｗｉｔｃｈ ｖａｒｉａｎｔ）モノク
ローナル抗体（１ｇＣクラス、にタイプ）の製造 １ ） ＮＦＴ２００ハイブリドーマ培養物からＩｇ
Ｇ、クラスでにタイプの抗体を分泌するスイッチ変異体
の選択： ＮＦＴ２００ハイブリドーマは１６Ｍクラスでにタイプ
のモノクローナル抗体を分泌する。しかしなから、ＩＢ
Ｍ−モノクローナル抗体は免疫化学に適用するとＩｇＧ
−モノクローナル抗体に比べて技術的な欠点を有し得る
。従って本発明者等は、ＮＦＴ２００ハイブリドーマ培
養物からＩｇＨクラスでにタイプのＮＦＴ２００モノク
ローナル抗体とｌ二（７）、１１を有するｒｇｃ、クラ
スでにタイプの抗体を分泌する変異体を選択してクロー
ニングすることのできる方法を発案した。異なるクラス
の抗体を分泌するこのようないわゆる“スイッチ変異体
”は、ＩｇＮ分泌ハイブリドーマで特発的に生じること
が知られている。
しかしなからこのような事象は稀であり、僅かに１０４
〜１０”の周期で生じると推定される。従って、過剰成
長が発生する前に所望のスイッチ変異体をＩＢＭ産生ハ
イブリドーマから速やかに識別、選択及びクローニング
せねばならない。
〜１０”の周期で生じると推定される。従って、過剰成
長が発生する前に所望のスイッチ変異体をＩＢＭ産生ハ
イブリドーマから速やかに識別、選択及びクローニング
せねばならない。
我々の使用した方法は以下の通りである。各々が０．１
５ｍＮの完全培地に１０コ個のＮＦＴ２００ハイブリド
ーマ細胞を含んでいる一連の４８０個の培養物を５枚の
９６ウエルプレートに置いた。完全培地は、多量のグル
コース＜４，５００ｍｇ／Ｌ）を含み且つ１．２ｍＮの
ピルビン酸ナトリウムと、２ｗ＋Ｈのグルタミンと、１
００Ｌυ、７ｍｌのペニシリンと、１００１．Ｕ、／ｓ
ｌのストレプトマイシンと、１０％の熱失活（５６℃で
３０分）ウシ胎児血清とを加えたＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ
Ｍｏｄｉｆｉｅｄイーグル培地であった。５％のＣ０
２雰囲気下において３７℃で５日間インキュベートした
後に、（後述する如く）各培養物をＩｇＧ、の産生につ
いてスクリーニングした。陽性培養物を、９６ウエルプ
レートの０．１５ｍｆの完全培地中の２００個の細胞に
塗布して、５日後にＩｇＧ、の産生についてスクリーニ
ングした０次いでＩｇＧ、を分泌した培養物を、それぞ
れがウェル１個に対して１００個、１０個及び０．５個
の細胞と、１０’個のＢＡＬＢ／ｃ胸腺リンパ球のフィ
ーダー細胞（ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ ｆｅｅｄｅｒ ｃｅ
ｌｌｓ）とを含んでいる３組の０．１ｍＡ’の培養物で
クローニングした。６日後に、細胞成長したウェルをＩ
ｇＧＨの産生物の存在と、ＩｇＭ産生物の不在について
スクリーニングした０次いでウェル１個に対して０．３
個の細胞について、ＩｇＧ。
５ｍＮの完全培地に１０コ個のＮＦＴ２００ハイブリド
ーマ細胞を含んでいる一連の４８０個の培養物を５枚の
９６ウエルプレートに置いた。完全培地は、多量のグル
コース＜４，５００ｍｇ／Ｌ）を含み且つ１．２ｍＮの
ピルビン酸ナトリウムと、２ｗ＋Ｈのグルタミンと、１
００Ｌυ、７ｍｌのペニシリンと、１００１．Ｕ、／ｓ
ｌのストレプトマイシンと、１０％の熱失活（５６℃で
３０分）ウシ胎児血清とを加えたＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ
Ｍｏｄｉｆｉｅｄイーグル培地であった。５％のＣ０
２雰囲気下において３７℃で５日間インキュベートした
後に、（後述する如く）各培養物をＩｇＧ、の産生につ
いてスクリーニングした。陽性培養物を、９６ウエルプ
レートの０．１５ｍｆの完全培地中の２００個の細胞に
塗布して、５日後にＩｇＧ、の産生についてスクリーニ
ングした０次いでＩｇＧ、を分泌した培養物を、それぞ
れがウェル１個に対して１００個、１０個及び０．５個
の細胞と、１０’個のＢＡＬＢ／ｃ胸腺リンパ球のフィ
ーダー細胞（ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ ｆｅｅｄｅｒ ｃｅ
ｌｌｓ）とを含んでいる３組の０．１ｍＡ’の培養物で
クローニングした。６日後に、細胞成長したウェルをＩ
ｇＧＨの産生物の存在と、ＩｇＭ産生物の不在について
スクリーニングした０次いでウェル１個に対して０．３
個の細胞について、ＩｇＧ。
が陽性で、ＩｇＭが陰性の培養物を前述した如く再度ク
ローニングして、７日後に再度試験した。このようにし
てＮＦＴ２００ハイブリドーマＩｇＧ、を分泌するスイ
ッチ変異体を分離した。 ＮＦＴ２００モノクローナル
抗体について説明した如く抗原特異性について抗体を試
験した。結果は、ＩｇＧ、スイッチ変異体モノクローナ
ル抗体がｒｇＭ ＮＦＴ２００と同一の抗原特異性を有
すると示していた。（後述する如＜）ＩｇＧ＋スイッチ
変異体モノクローナル抗体がＮＦＴ２００ＩｇＭモノク
ローナル抗体と同一のイディオタイプを発現することも
判明した。
ローニングして、７日後に再度試験した。このようにし
てＮＦＴ２００ハイブリドーマＩｇＧ、を分泌するスイ
ッチ変異体を分離した。 ＮＦＴ２００モノクローナル
抗体について説明した如く抗原特異性について抗体を試
験した。結果は、ＩｇＧ、スイッチ変異体モノクローナ
ル抗体がｒｇＭ ＮＦＴ２００と同一の抗原特異性を有
すると示していた。（後述する如＜）ＩｇＧ＋スイッチ
変異体モノクローナル抗体がＮＦＴ２００ＩｇＭモノク
ローナル抗体と同一のイディオタイプを発現することも
判明した。
２）ハイブリドーマ培養物によるＩｇＧ、分泌の検出用
スクリーニングアッセイ ポリ塩化ビニルの平底９６ウエルプレート（ＮｕｎｃＦ
１６ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）を、０．０ＩＭの塩化ナトリ
ウム−０，０ＩＭのアジ化ナトリウム−０，０ＩＭのト
リスＭ街液（ｐＨ８，５）でｌ：１０００に希釈した１
００μｌのポリクローナルラビット抗マウスＩｇＧ１血
清（Ｏｒｇａｎｏｎ）を使用して４℃で一晩被覆した。
スクリーニングアッセイ ポリ塩化ビニルの平底９６ウエルプレート（ＮｕｎｃＦ
１６ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）を、０．０ＩＭの塩化ナトリ
ウム−０，０ＩＭのアジ化ナトリウム−０，０ＩＭのト
リスＭ街液（ｐＨ８，５）でｌ：１０００に希釈した１
００μｌのポリクローナルラビット抗マウスＩｇＧ１血
清（Ｏｒｇａｎｏｎ）を使用して４℃で一晩被覆した。
それ以後総て３７℃でインキュベートした。 ０．０５
％のＴｗｅｅｎ ８０を含むＰＢＳ（Ｔｗｅｅｎ−ＰＢ
Ｓ）で２度洗浄した後に、１０％のカゼインを含む１５
０μＩのＰＢＳ（カゼイン−ＰＢＳ）で１時間プレート
を飽和した０次いで、プレートをＴｗｅｅｎ−ＰＢＳで
３度洗浄し、試験すべき１００μｌの上澄み液を加えた
。１時間後にプレートを再度洗浄し、カゼイン−ＰＢＳ
で１：２０００に希釈した１００μｌのビオチニル化ヤ
ギ抗マウスＩｇＧ ｌ血清（八−ｅｒｓｈａｍ）を各ウ
ェルに加えた。１時間後にプレートを３度洗浄し、カゼ
イン−ＰＢＳで１：１０００に希釈した１００ＡＬ！ｌ
のストレプトアビジン−ビオチニル化ペルオキシダーゼ
複合物（＾＋＊ｅｒｓｈａｍ ＲＰＮ １０５１）で３
０分間インキュベートした０次いで、プレートをＴｗｅ
ｅｎ−ＰＢＳで４度洗浄し、０．００４％の過酸化水素
を含む０．０００４Ｍの３．３°、５，５°−テトラメ
チルベンジジン（ＴＭＢ） （Ｉｌｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
７８４９７４）の０．１Ｍホスフェート−シトレートＩ
！衝液１００μｍ（ｐＨ４，３）を各ウェルニ加えり、
３７℃テ３０分１いた後に各ウェルに５０μｌの２Ｍ硫
酸を加えて反応を停止させた。 ４５０ｎｍで吸収を読
み取った。
％のＴｗｅｅｎ ８０を含むＰＢＳ（Ｔｗｅｅｎ−ＰＢ
Ｓ）で２度洗浄した後に、１０％のカゼインを含む１５
０μＩのＰＢＳ（カゼイン−ＰＢＳ）で１時間プレート
を飽和した０次いで、プレートをＴｗｅｅｎ−ＰＢＳで
３度洗浄し、試験すべき１００μｌの上澄み液を加えた
。１時間後にプレートを再度洗浄し、カゼイン−ＰＢＳ
で１：２０００に希釈した１００μｌのビオチニル化ヤ
ギ抗マウスＩｇＧ ｌ血清（八−ｅｒｓｈａｍ）を各ウ
ェルに加えた。１時間後にプレートを３度洗浄し、カゼ
イン−ＰＢＳで１：１０００に希釈した１００ＡＬ！ｌ
のストレプトアビジン−ビオチニル化ペルオキシダーゼ
複合物（＾＋＊ｅｒｓｈａｍ ＲＰＮ １０５１）で３
０分間インキュベートした０次いで、プレートをＴｗｅ
ｅｎ−ＰＢＳで４度洗浄し、０．００４％の過酸化水素
を含む０．０００４Ｍの３．３°、５，５°−テトラメ
チルベンジジン（ＴＭＢ） （Ｉｌｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
７８４９７４）の０．１Ｍホスフェート−シトレートＩ
！衝液１００μｍ（ｐＨ４，３）を各ウェルニ加えり、
３７℃テ３０分１いた後に各ウェルに５０μｌの２Ｍ硫
酸を加えて反応を停止させた。 ４５０ｎｍで吸収を読
み取った。
ハイブリドーマによるＩｇＭ分泌を検出するために、プ
レートをポリクローナルラビット抗マウスＩＢＭ血清で
被覆し、ビオチレニル化ヤギ抗マウスＩｇＮ血清を第２
試薬として使用した。他の点では、スクリーニングアッ
セイは前述した内容と同一であった。
レートをポリクローナルラビット抗マウスＩＢＭ血清で
被覆し、ビオチレニル化ヤギ抗マウスＩｇＮ血清を第２
試薬として使用した。他の点では、スクリーニングアッ
セイは前述した内容と同一であった。
実施例１［１： ＮＦＴ２００に対する同系モノクロー
ナル抗イディオタイプ抗体の製造 ＮＦＴ２００ＩｇＭクラスでにタイプのモノクローナル
抗体、更にはＮＦＴ２００ハイブリドーマのＩｇＧ１ク
ラスでにタイプのスイッチ変異体により分泌されるＩｇ
Ｇ、クラスでにタイプのモノクローナル抗体（前項参照
）を、前述した如くそのイディオタイプで規定する。
ナル抗イディオタイプ抗体の製造 ＮＦＴ２００ＩｇＭクラスでにタイプのモノクローナル
抗体、更にはＮＦＴ２００ハイブリドーマのＩｇＧ１ク
ラスでにタイプのスイッチ変異体により分泌されるＩｇ
Ｇ、クラスでにタイプのモノクローナル抗体（前項参照
）を、前述した如くそのイディオタイプで規定する。
１） モノクローナル抗体ＮＦＴ２００に対する同系抗
イディオタイプ血清の製造 ＮＦＴ２００モノクローナル抗体を、５ｅｐｈａｃｒｙ
ｌＳ−３００のゲルｒ過ＦＰＬＣ（カラムＣ２６，Ｌ：
８６ｃｍ）により、ＮＦＴ２００ハイブリドーマ腹水か
ら精製した。試料は０．０７７Ｍの塩化ナトリウムを含
む０．０８Ｍリン酸Ｍ街液で１＝２に希釈した１０ｍ１
のＮＦＴ２００ハイブリドーマ腹水であった。流量は１
０ｍ１１時であった。 ＮＦＴ２００モノクローナル抗
体は空隙容量（ｖｏｉｄ ｖｏｌｕｍｅ）に生じた１次
いで精製ＮＦＴ２００を生理食塩水でｌｌｌ１ｇ／１１
１に濃縮した。生ｆ＆１０〜１２週間のＢＡＬＢ／ｃマ
ウスを以下の如く免疫感作した。Ｂｏｎａ等の論文に記
載されている如く精製ＮＦ７２００をグルタルアルデヒ
ドでアオガイヘモシアニン（ＫＬＨ）（Ｃａｌｂｉｏｃ
ｈｅｍ）（１ｍｇ／生理食塩水１ｍｊりに抱合した。得
られたＮＦＴ２００−ＫＬＨ抱合体を完全Ｆｒｅｕｎｄ
アジュバントで乳化すると、７５μｇ）ＮＦＴ２００−
ＫＬＩＩ抱合体と、１００．ｃｚ ｇ（７）血行性播種
型結核Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｒｃｏ）とを含む１００．ｕＮ
のエマルションが得られた。各マウスの腹膜組織内にこ
のエマルション５０μｌを投与し、他の５０μｒを後ろ
脚の内証と凧径部及び腋窩部との間に配分した。１日目
の免疫感作から５日目に、７５μｇのＮＦＴ２００−Ｋ
ＬＨ抱合体を含む１００μｌの不完全Ｆｒｅｕｎｄアジ
ュバントを腋窩部と爪径部とに注射した。腋窩部と爪径
部とに投与した７５μｇの抱合体を含む生理食塩水で１
週間に一度マウスをブーストした。マウスは最初注射か
ら６日目に、それ以後は２週毎に採血した。
イディオタイプ血清の製造 ＮＦＴ２００モノクローナル抗体を、５ｅｐｈａｃｒｙ
ｌＳ−３００のゲルｒ過ＦＰＬＣ（カラムＣ２６，Ｌ：
８６ｃｍ）により、ＮＦＴ２００ハイブリドーマ腹水か
ら精製した。試料は０．０７７Ｍの塩化ナトリウムを含
む０．０８Ｍリン酸Ｍ街液で１＝２に希釈した１０ｍ１
のＮＦＴ２００ハイブリドーマ腹水であった。流量は１
０ｍ１１時であった。 ＮＦＴ２００モノクローナル抗
体は空隙容量（ｖｏｉｄ ｖｏｌｕｍｅ）に生じた１次
いで精製ＮＦＴ２００を生理食塩水でｌｌｌ１ｇ／１１
１に濃縮した。生ｆ＆１０〜１２週間のＢＡＬＢ／ｃマ
ウスを以下の如く免疫感作した。Ｂｏｎａ等の論文に記
載されている如く精製ＮＦ７２００をグルタルアルデヒ
ドでアオガイヘモシアニン（ＫＬＨ）（Ｃａｌｂｉｏｃ
ｈｅｍ）（１ｍｇ／生理食塩水１ｍｊりに抱合した。得
られたＮＦＴ２００−ＫＬＨ抱合体を完全Ｆｒｅｕｎｄ
アジュバントで乳化すると、７５μｇ）ＮＦＴ２００−
ＫＬＩＩ抱合体と、１００．ｃｚ ｇ（７）血行性播種
型結核Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｒｃｏ）とを含む１００．ｕＮ
のエマルションが得られた。各マウスの腹膜組織内にこ
のエマルション５０μｌを投与し、他の５０μｒを後ろ
脚の内証と凧径部及び腋窩部との間に配分した。１日目
の免疫感作から５日目に、７５μｇのＮＦＴ２００−Ｋ
ＬＨ抱合体を含む１００μｌの不完全Ｆｒｅｕｎｄアジ
ュバントを腋窩部と爪径部とに注射した。腋窩部と爪径
部とに投与した７５μｇの抱合体を含む生理食塩水で１
週間に一度マウスをブーストした。マウスは最初注射か
ら６日目に、それ以後は２週毎に採血した。
同系抗血清の抗イディオタイプの種類は、ＩｇＭクラス
でにタイプの他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グロブリン又は他の
ＢＡＬＢ／ｃ免疫グロブリンではなく 、ＮＦＴ２００
及びＮＦＴ２００から得られる産生物の抗血清の免疫特
異性と相関関係にある。参考文献に記載の如く、適切な
ＥＬＩＳＡ法、又は免疫グロブリンを被覆したヒツジの
赤血球による凝集検定を使用してこれを実施した。
でにタイプの他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グロブリン又は他の
ＢＡＬＢ／ｃ免疫グロブリンではなく 、ＮＦＴ２００
及びＮＦＴ２００から得られる産生物の抗血清の免疫特
異性と相関関係にある。参考文献に記載の如く、適切な
ＥＬＩＳＡ法、又は免疫グロブリンを被覆したヒツジの
赤血球による凝集検定を使用してこれを実施した。
２ ） ＮＦＴ２００に対する同系モノクローナル抗
イディオタイプ抗体の製造 前項に記載した如（ＮＦＴ２００−ＫＬＨ抱合体で免疫
感作したマウスから採取した膵臓細胞を本明細書に別に
記載した方法でＢＡＬＢ／ｃ骨髄腫細胞と融合して、ハ
イブリドーマ細胞培養物を形成することができる。前述
した多価の抗体放射標識免疫定量法（Ｇｈｅｕｅｎｓ
Ｊ、、ＭｃＦａｒｌｉｎ Ｄ、Ｅ、： Ｍｕｌｔ
ｉｖａｌｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ ｒａｄｉｏｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ （Ｍ＾Ｒ１＾） ｆｏｒｓｃｒ
ｅｅｎｉｎｇ ５ｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ
５ｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙｌｙ＋＊ｐｈｏｃｙｔ
ｅ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｕｌｔｕｒｅｓ、 Ｍｅ
ｔｈ、 Ｅｎｚｙｍｏｌ。
イディオタイプ抗体の製造 前項に記載した如（ＮＦＴ２００−ＫＬＨ抱合体で免疫
感作したマウスから採取した膵臓細胞を本明細書に別に
記載した方法でＢＡＬＢ／ｃ骨髄腫細胞と融合して、ハ
イブリドーマ細胞培養物を形成することができる。前述
した多価の抗体放射標識免疫定量法（Ｇｈｅｕｅｎｓ
Ｊ、、ＭｃＦａｒｌｉｎ Ｄ、Ｅ、： Ｍｕｌｔ
ｉｖａｌｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ ｒａｄｉｏｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ （Ｍ＾Ｒ１＾） ｆｏｒｓｃｒ
ｅｅｎｉｎｇ ５ｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ
５ｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙｌｙ＋＊ｐｈｏｃｙｔ
ｅ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｕｌｔｕｒｅｓ、 Ｍｅ
ｔｈ、 Ｅｎｚｙｍｏｌ。
１２１： ４２５−４３３．１９８６）を使用してＮＦ
Ｔ２００モノクローナル抗体に対する抗体を産生ずるた
めに、ハイブリドーマ培養物をスクリーニングすること
ができる。 ＮＦ７２０Ｇに対するこのようなモノクロ
ーナル抗体の抗イディオタイプの種類を参考文献に記載
の如く評価することができた。抗体の抗イディオタイプ
の種類は、ＩｇＭクラスでにタイプの他のＢＡＬＢ／ｃ
免疫グロブリン又は他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グロブリンで
はな（、ＮＦＴ２００及びＮＦＴ２００から得られる産
生物に対するこのような抗体の免疫特異性と相関関係に
ある。
Ｔ２００モノクローナル抗体に対する抗体を産生ずるた
めに、ハイブリドーマ培養物をスクリーニングすること
ができる。 ＮＦ７２０Ｇに対するこのようなモノクロ
ーナル抗体の抗イディオタイプの種類を参考文献に記載
の如く評価することができた。抗体の抗イディオタイプ
の種類は、ＩｇＭクラスでにタイプの他のＢＡＬＢ／ｃ
免疫グロブリン又は他のＢＡＬＢ／ｃ免疫グロブリンで
はな（、ＮＦＴ２００及びＮＦＴ２００から得られる産
生物に対するこのような抗体の免疫特異性と相関関係に
ある。
第１図は実施例のイムノブロッティング法の結果を示す
。 図面の浄書ａす劃にｆｌなり ４ −１ ±１１Ａ エヌ・へ−−イノへＩｆイクス・Ｘス・？
−第１図
。 図面の浄書ａす劃にｆｌなり ４ −１ ±１１Ａ エヌ・へ−−イノへＩｆイクス・Ｘス・？
−第１図
Claims (24)
- （１）アルツハイマー病患者から得られる大脳皮質から
それ自体単離される音波処理ＮＦＴ調製物から放出され
る抗原の非ホスホリル化構造エピトープとの間に免疫学
的複合体を形成し、且つニューロフィラメントタンパク
質、τタンパク質、ＭＡＰ２タンパク質、ユビキチン及
び４−アミロイドペプチドとの間に免疫学的複合体を形
成しないことを特徴とするモノクローナル抗体。 - （２）１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄
託番号１８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２
００ＩｇＭ）又は１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ
．Ｍ．に寄託番号Ｉ−８８４で寄託されたハイブリドー
マ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクロー
ナル抗体に対する同系ポリクローナル抗イディオタイプ
血清、特にモノクローナル抗イディオタイプ抗体との間
に免疫学的複合体を形成することを特徴とするモノクロ
ーナル抗体。 - （３）アルツハイマー病患者から得られる大脳皮質から
それ自体単離される音波処理ＮＦＴ調製物から放出され
る抗原の非ホスホリル化構造エピトープとの間に免疫学
的複合体を形成し、且つニューロフィラメントタンパク
質、τタンパク質、ＭＡＰ２タンパク質、ユビキチン及
び４−アミロイドペプチドとの間に免疫学的複合体を形
成せず、１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に
寄託番号Ｉ−８８３で寄託されたハイブリドーマ〈ＨＦ
Ｔ２００ＩｇＭ〉又は１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ
．Ｃ．Ｍ．に寄託番号Ｉ−８８４で寄託されたハイブリ
ドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノク
ローナル抗体に対する同系ポリクローナル抗イディオタ
イプ血清、特にモノクローナル抗イディオタイプ抗体と
の間に免疫学的複合体を形成することを特徴とするモノ
クローナル抗体。 - （４）ＩｇＭクラス、κタイプ又はＩｇＧ、κタイプで
あることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に
記載のモノクローナル抗体。 - （５）非音波処理ＮＦＴ調製物に結合しないことを特徴
とする請求項１から４のいずれか一項に記載のモノクロ
ーナル抗体。 - （６）水又はドデシル硫酸ナトリウム溶液又はリン酸緩
衝溶液の存在下で、アルツハイマー病患者又は対照の皮
質又は白質抽出物から抽出したタンパク質又はペプチド
との間に免疫学的複合体を形成せず、Ｉｑｂａｌ手順に
したがって得られるアルカリホスファターゼで予め処理
した音波処理ＮＦＴ調製物との間に免疫学的複合体を形
成しないことを特徴とする請求項１から５のいずれか一
項に記載のモノクローナル抗体。 - （７）音波処理ＮＦＴ調製物から得られる約２００ｋｄ
の分子量の抗原の非ホスホリル化エピトープとの間に免
疫学的複合体を形成することを特徴とする請求項１から
６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。 - （８）老年斑の神経突起に免疫学的に結合し、顆粒空胞
変性に免疫学的に結合し、核上性麻痺の神経原線維錯綜
に免疫学的に結合し、末梢神経及びを髄の正常軸索に免
疫学的結合し、脳炎後パーキンソン症候群患者の脳幹か
らのＮＦＴに免疫学的に結合し、グアムパーキンソン痴
呆の神経原線維変性組織に免疫学的に結合し、ピック体
に免疫学的に結合し、正常対照の大脳白質の軸索に免疫
学的に結合せず、アルツハイマー病のヒラノ体に免疫学
的に結合せず、特発性パーキンソン症候群のリューイ体
に免疫学的に結合せず、小脳星状細胞腫のローゼンター
ル線維に免疫学的に結合しないことを特徴とする請求項
１から７のいずれか一項に記載のモ抗体。 - （９）１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄
託番号Ｉ−８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ
２００ＩｇＭ）及び１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．
Ｃ．Ｍ．に寄託番号Ｉ−８８４で寄託されたハイブリド
ーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクロ
ーナル抗体。 - （１０）アルツハイマー病患者の大脳皮質から単離され
た音波処理ＮＦＴ調製物から放出され且つそれ自体１９
８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託番号Ｉ−
８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２００Ｉｇ
Ｍ）及び１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に
寄託番号Ｉ−８８４で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦ
Ｔ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクローナル抗体
との間に免疫学的複合体を形成する抗原との間に免疫学
的複合体を形成するモノクローナル抗体。 - （１１）ニューロフィラメントタンパク質、τタンパク
質、ＭＡＰ−２タンパク質、ユビキチン及び４−アミロ
イドペプチドとの間に免疫学的複合体を形成しない請求
項１０に記載のモノクローナル抗体。 - （１２）請求項１から１１のいずれか一項に記載のモノ
クローナル抗体を分泌するハイブリドーマ。 - （１３）アルツハイマー病患者からの大脳皮質から単離
された音波処理ＮＦＴ調製物により放出可能であり且つ
請求項１から１１のいずれか一項に記載のモノクローナ
ル抗体との間に免疫学的複合体を形成する抗原。 - （１４）１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に
寄託番号Ｉ一８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦ
Ｔ２００ＩｇＭ）又は１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ
．Ｃ．Ｍ．に寄託番号Ｉ−８８４で寄託されたハイブリ
ドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノク
ローナル抗体との間に免疫学的複合体を形成する抗原。 - （１５）請求項１から１１のいずれか一項に記載のモノ
クローナル抗体との間に免疫学的複合体を形成すること
を特徴とするモノクローナル抗イディオタイプ抗体。 - （１６）１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に
寄託番号Ｉ−８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦ
Ｔ２００ＩｇＭ）又は１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ
．Ｃ．Ｍ．に寄託番号Ｉ−８８４で寄託されたハイブリ
ドーマ（ＮＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノク
ローナル抗体との間に免疫学的複合体を形成することを
特徴とするモノクローナル抗イディオタイプ抗体。 - （１７）請求項１から１１のいずれか一項に記載のモノ
クローナル抗体を分泌するハイブリドーマを取得及び単
離するための方法であって、予め￥ｉｎｖｉｖｏ￥で免
疫した動物、例えばマウスもしくはラットの脾細胞、又
は１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託番
号Ｉ−８８３で寄託されたハイブリドーマ（ＮＦＴ２０
０ＩｇＭ）もしくは１９８９年７月５日付けでＣ．Ｎ．
Ｃ．Ｍ．に寄託番号Ｉ−８８４で寄託されたハイブリド
ーマ（ＨＦＴ２００ＩｇＧ）により分泌されるモノクロ
ーナル抗体により認識される抗原で予め￥ｉｎｖｉｔｒ
ｏ￥で免疫されたこのような細胞の脾細胞から出発する
段階と、該免疫細胞をハイブリドーマ形成条件下でミエ
ローマ細胞と融合する段階と、請求項１３又は１４に記
載の抗原の非ホスホリル化構造エピトープを特異的に認
識し且つニューロフィラメントタンパク質、τタンパク
質、ＭＡＰ−２タンパク質、ユビキチン及び４−アミロ
イドペプチドを免疫学的に認識しないモノクローナル抗
体を分泌するハイブリドーマを選択する段階とを含む方
法。 - （１８）請求項１から１１のいずれか一項に記載のモノ
クローナル抗体の生産方法であって、請求項１２に記載
の選択されたハイブリドーマを適当な培地で培養する段
階と、該選択されたハイブリドーマにより排泄されるモ
ノクローナル抗体を回収する段階、又は選択されたハイ
ブリドーマをマウスの腹膜に移植し、動物に腹水が生産
されたら、こうして形成されたモノクローナル抗体を該
腹水から回収する段階とを含む方法。 - （１９）請求項１３又は１４に記載の抗原の生産方法で
あって、請求項１１又は１２に記載の抗原をコードする
核酸又はそのフラグメントから出発し、適当なプロモー
ターとそれに続く適当な終結信号の制御下に、該核酸又
はフラグメントを適当なベクターに挿入する段階と、改
変したベクターでコンピテント生物を形質転換させ、該
抗原を産生させる段階とを含む方法。 - （２０）例えばアルツハイマー病、進行性核上性麻痺、
ピック病及び顕著な神経原線維変性を伴う他の全疾患に
おける神経原線維変性の￥ｉｎｖｉｔｒｏ￥検出又は診
断方法であって、神経原線維変性、より特定的にはアル
ツハイマー病の被疑患者からの細胞調製物を、抗原−抗
体複合体を生産するのに適した条件下で請求項１から１
１のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体と￥ｉｎ
ｖｉｔｒｏ￥で接触させる段階と、該抗体と該細胞調製
物との免疫学的結合を検出する段階とを含む方法。 - （２１）アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、ピック
病及び顕著な神経原線維変性を伴う他の全疾患の￥ｉｎ
ｖｉｔｒｏ￥診断用キットであって、￥ｉｎｖｉｔｒｏ
￥で診断すべき生物学的サンプルを載置する堆積するた
めの少なくとも１つの適当な固相システム、例えば微量
滴定プレートと、請求項１から１１のいずれか一項に記
載のモノクローナル抗体を含む調製物と、該モノクロー
ナル抗体の特異的検出システムと、試験サンプルと該モ
ノクローナル抗体との間、及び結合したモノクローナル
抗体と検出システムとの間で免疫学的反応を生じるため
の適当な緩衝溶液と、場合により、標準目的又は所望の
抗原に対する競合目的のために請求項１３もしくは１４
に記載の抗原又は請求項１５もしくは１６に記載のモノ
クローナル抗イディオタイプ抗体とを含むキット。 - （２２）請求項１３又は１４に記載の抗原をコードする
核酸配列。 - （２３）請求項１３又は１４に記載の抗原の存在を検出
するためのプローブであって、請求項２２に記載の核酸
又は請求項２２に記載の相補的核酸に属し且つそれ自体
請求項２２に記載の核酸を１０から最大ヌクレオチド数
まで含む配列を含むプローブ。 - （２４）アルツハイマー病のような神経原線維変性の￥
ｉｎｖｉｔｒｏ￥検出又は診断方法であって、神経原線
維変性、例えばアルツハイマー病の被疑患者の大脳皮質
から得、必要に応じて核酸を他の核酸とハイブリダイゼ
ーションできるようにした特にＮＦＴの細胞調製物から
出発する段階と、該細胞調製物又は該細胞調製物から予
め抽出した核酸を、場合により該プローブと該抗原をコ
ードする配列との間でハイブリッドを生産するための適
当なハイブリダイゼーション条件下で上記プローブと接
触させる段階と、ハイブリッドが形成された場合にこの
ハイブリッドを検出し、ハイブリダイゼーションの有無
に応じて該患者におけるこのような神経原線維変性の有
無を決定する段階とを含む方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP89401931 | 1989-07-05 | ||
| EP89401931.4 | 1989-07-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03151893A true JPH03151893A (ja) | 1991-06-28 |
Family
ID=8202969
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2178473A Pending JPH03151893A (ja) | 1989-07-05 | 1990-07-05 | アルツハイマー病に関与するモノクローナル抗体、これらのモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ、これらの抗体により認識される抗原、及びそれらの適用 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0411974A1 (ja) |
| JP (1) | JPH03151893A (ja) |
| AU (1) | AU5809290A (ja) |
| CA (1) | CA2020544A1 (ja) |
| IL (1) | IL94912A0 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006046644A1 (ja) * | 2004-10-28 | 2006-05-04 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | アルツハイマー病の検定方法及び診断試薬 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU7121191A (en) * | 1990-02-26 | 1991-10-10 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Diagnostic assay for alzheimer's disease |
| DE10303974A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
| KR101667623B1 (ko) | 2005-11-30 | 2016-10-19 | 애브비 인코포레이티드 | 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도 |
| PL1954718T3 (pl) | 2005-11-30 | 2015-04-30 | Abbvie Inc | Przeciwciała skierowane przeciwko A globulomerowi, ich reszty wiążące antygeny, odpowiednie hybrydomy, kwasy nukleinowe, wektory, komórki gospodarze, sposoby wytwarzania tych przeciwciał, kompozycje zawierające te przeciwciała, zastosowania tych przeciwciał i sposoby stosowania tych przeciwciał |
| US8455626B2 (en) | 2006-11-30 | 2013-06-04 | Abbott Laboratories | Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies |
| EP2124952A2 (en) | 2007-02-27 | 2009-12-02 | Abbott GmbH & Co. KG | Method for the treatment of amyloidoses |
| MX336196B (es) | 2010-04-15 | 2016-01-11 | Abbvie Inc | Proteinas de union a amiloide beta. |
| MX358739B (es) | 2010-08-14 | 2018-09-03 | Abbvie Inc Star | Proteinas de union a amiloide beta. |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8724412D0 (en) * | 1987-10-19 | 1987-11-25 | Medical Res Council | Protein |
-
1990
- 1990-06-26 EP EP90401835A patent/EP0411974A1/en not_active Withdrawn
- 1990-06-29 IL IL94912A patent/IL94912A0/xx unknown
- 1990-07-02 AU AU58092/90A patent/AU5809290A/en not_active Abandoned
- 1990-07-05 CA CA002020544A patent/CA2020544A1/en not_active Abandoned
- 1990-07-05 JP JP2178473A patent/JPH03151893A/ja active Pending
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|---|
| ACTA NEUROPATHOL=1984 * |
| AM J PATHOL=1987 * |
| BRAIN RESEARCH=1986 * |
| EUR J IMMUNOL=1982 * |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006046644A1 (ja) * | 2004-10-28 | 2006-05-04 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | アルツハイマー病の検定方法及び診断試薬 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0411974A1 (en) | 1991-02-06 |
| IL94912A0 (en) | 1991-04-15 |
| AU5809290A (en) | 1991-01-10 |
| CA2020544A1 (en) | 1991-01-06 |
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