JPH03503403A

JPH03503403A - 生物学的に活性な分子

Info

Publication number: JPH03503403A
Application number: JP50554188A
Authority: JP
Inventors: アストン，ロジャー
Original assignee: ペプチド　テクノロジー　リミテッド; アストン、ロジャー
Priority date: 1987-07-06
Filing date: 1988-07-06
Publication date: 1991-08-01
Also published as: WO1989000166A3; FI900075A0; DK4390D0; WO1989000166A2; DK4390A; AU1967288A; AU630591B2; EP0433276A1; FI900075A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】生物学的に活性な分子技術分野本発明は、生物学的に活性な分子、特にペプチド、さらにウシ生長ホルモン（ｂＧＨ）、ブタ生長ホルモン（ｐＧＨ）、トリ生長ホルモン（ｃＧＨ）、ヒツジ生長ホルモン（ｏＧＨ）およびその他の変異誘導体を含む生長ホルモン活性を増大ないし促進し得る生長ホルモンのペプチドフラグメントに関するものである。ヒト生長ホルモン（ｈＧＨ）、ラット生長ホルモン（ｒＧＨ）、マウス生長ホルモン（ｍＧＨ）　、ウマ生長ホルモン（ｅＧＨ）およびサケ生長背景技術ポリペプチドホルモン類は、医薬ならびに動物薬用として重要である。このようなホルモンの１種である生長ホルモンは、を椎動物内に見出され、かつ体細胞生長の促進に重要である。異なる種からの生長ホルモンは、構造上ならびに機能上の両特性を共有する。生長ホルモン類は、通常長さが、約１９１の残基のアミノ酸配列よりなるものである。生長ホルモンが体細胞の生長を刺激し、ヒツジの毛の生長を促進し、体の組成に影響し、食物効率を改善し、がつ適当な種における乳の分泌を促進することは知られている。生長ホルモン類の構造上ならびに機能１−の特性の異なる点は、記載されている［ニコルら（Ｎｊｃｏｌｌ　ｅｔ　ａｌ）１９８６　；アイサクソンら（ｌｓａｋｓｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ）、　１９８５　；ウオリス（Ｗａｌｌｉｓ）、　　１９７ｇ］　。

ホルモン類に対する抗体は（ｉ）ホルモン活性を増強し、（１１）ホルモン活性に対する無影響または（Ｈｉ　）ホルモン活性を抑制し得ることで示されている［トンプソン（Ｔｈ。

ｍｐｓｏｎ）１９７３　；　ｏ−ラング（Ｒｏｌａｎｄｓ）　、　１９３９　；グツドフレンドら（Ｇｏｏｄｆｒｉｅｎｄ　ａｔ　ａｌ）、１９７０；シェラチャ−（Ｓｈｅｃｈｔｃｒ）　、　１９７９ａ、１９７９ｂ；　コールら（Ｃｏｌｅ　ｅｔ　ａｔ）、　１９７５；アシュトンら（Ａｓｈｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ）、　１９８６．１９８７　　；　　ファーガソン（Ｆｅｒｇｕｓ。

口）、１９５４　］。さらに詳しくは、アシュトンら（１９８６，１９８７）は、生長ホルモン類に対するある種の抗体が、生体内（ｉｎｖｉｖｏ）でホルモンの生物学的活性を増大し得ることを示している。これらの研究は、抗体によるホルモンの増大が、前述のように特別な特異性であると結論付けられた（Ｃｏｌｅｅｔ　ａｔ、　１９７５：　Ｇｏｏｄｆｒｆｅｎｄ　ｅｔ　ａｌ、　１９７０）。しかしながら、これらの研究において、小さなペプチドを用いることにより増強抗血清をいかにして確実に生成させるかを示すのに利用できる方法はない。ＥＰ−Ａ−０１３７２３４は、生長ホルモンの大きな７キロダルトンのフラグメントが生長ホルモン活性を増強させる抗体を生成し得ることを開示している。しかしながら、このフラグメントは、その寸法および確実な増強抗血清を産生ずる限られた能力のために、この目的に必ずしも通じない。現在、このような大きなポリペプチドの生成は、ペプチド合成経路により問題がある。

ＧＨのペプチドフラグメント投与によるホルモン活性の増強は、ＷＯ−Ａ−８４０４９１５に開示されている。この特別な開示において、ＧＨ分子のアミノ末端部位から誘導される短いペプチドが低血糖活性を増大させることが示されている。しかしながら、このペプチドは、免疫原の形では投与されない。ＧＨおよびインスリンの両者は、動物に投与されたときに低血糖値をひき起す。ＧＨのペプチドフラグメントのインスリン増強活性も別に記載されている（Ｐｕｌｌｉｎ　ｅｔ　ａｌ、　１９８９；　Ｎｇ　ｅｔ　ａｉ、、　１９８０）。

発明の開示本発明は、種々の特定のペプチドおよび生長ホルモン活性を増強する抗体を誘発する能力を有する該ペプチドの誘導体に関するものである。該ペプチドの少なくとも若干のものは、それら自身で生長ホルモン活性を有している。

本発明の第１の目的によれば、自然生長ホルモンの１１２〜１５９部位の少なくとも若干のものに対して生じる抗体を産生ずる抗原性分子が提供される。これは、１１２〜１５９部位の少なくとも部分に対して抗原性平衡を有する分子を提供することにより達成できる。

本発明の第２の目的によれば、少なくとも部分が自然生長ホルモンの１１２〜１５９の残基から選ばれたオリゴペプチドに対して抗原的に平衡な（天然生長ホルモン以外の）分子が提供される。

種々の天然生長ホルモンは、つぎのアミノ酸配列を有している。

ウシ、ヒツジ、ブタおよびトリの生長ホルモンが好ましい。ヒツジの生長ホルモンは、ｂＧＨと非常に似ている。

上記および本明細書全体を通して、アミノ酸残基は、通常のＩＵＰＡＣの一字命名法により規定されている。最近の一字命名定義は、っぎのアミノ酸の従来の三叉定義と関連している。

Ａ＝Ａ］ａ　　　　Ｇ−Ｇｌｙ　　　　Ｍ−Ｍｅｔ　　　　Ｓ−５ｅｒＣ−Ｃｙｓ　　　　ｆｔ−１１ｉ　ｓ　　　　Ｎ−Ａｓｎ　　　　Ｔ−ＴｈｒＤ＝Ａｓｐ　　　　ｌ−１１ｅ　　　　Ｐ−Ｐｒｏ　　　　Ｖ−ＶａｌＥ−Ｇｌｕ　　　　Ｋ−Ｌｙｓ　　　　Ｑ−Ｇｌｎ　　　　Ｗ−ＴｒｐＦ＝Ｐｈｅ　　　　Ｌ−Ｌｅｕ　　　　Ｒ−Ａｒｇ　　　　Ｙ−Ｔｙｒオリゴペプチドは、抗原性を与えるのに必要な少なくとも最少サイズである。すなわち、それは少なくとも６〜７残基であるが、例えば２０個のアミノ残基以下のいずれの適当なものであってもよい。最良のオリゴペプチドは、天然の生長ホルモン分子の表面特性に相当することが期待され、すなわち、これらの特性は、ホルモンの周囲の表面レベルからあるいは該レベルに延びる若干の三次元特性を有している。好ましいオリゴペプチドは、１３３〜１５９および１２８〜１４７の部位に相当する。

恐らく、分子の少なくとも一部をオリゴペプチドと抗原的に同等にする最も簡単な方法は、オリゴペプチドと同一または立体配座上類似であるアミノ酸残基の配列を含む分子の一部にすることである。しかしながら、抗原的に同等性を産生ずる他のいかなる方法も使用できる。すなわち、例えば、抗イデイオタイプ抗原または他の（非蛋白質であっても）類縁物を使用することである。

したがって、本発明は、生長ホルモンと構造的に相同性を有しかつ動物に投与されたときにホルモン活性を増強し得る短いペプチド（好ましくは２０個以下のアミノ酸残基であるが、通常少なくとも６〜７個の残基である）を包含するものである。ホルモン活性（特に生長ホルモン活性）の増大は、問題のホルモンに直接的あるいは間接的に効果により起る。

したがって、本発明は次のアミノ酸配列ＧＴＰＲＡＧＱＩ　ＬＫＱＴＹＤＫＦＤＴＮＭＲまたはその活性フラグメントおよび／または保存的突然変異体よりなる天然の生長ホルモン以外のペプチドを包含するものである。この配列は、ｂＧＨペプチド１３０〜１５０からとられる。

このペプチドは、通常抗原性であり、かつ適当な配合中で生長ホルモンの効果を増強する抗体の生産を刺激し得る。

前記のように、特定の配列の活性サブフラグメントが使用できる。活性フラグメントは、１個以上のつぎのヘキサペプチド類よりなるかあるいは含むものである。

ＧＴＰＲＡＧ　　　ＱＩＬＫＱＴ　　　ＹＤＫＦＤＴＴＰＲＡＧＱ　　　ＩＬＫＱＴＹ　　　ＤＫＦＤＴＮＰＲＡＧＱＩ　　　ＬＫＱＴＹＤ　　　ＫＦＤＴＮＭＲＡＧＱＩＬ　　　ＫＱＴＹＤＫ　　　ＦＤＴＮＭＲＡＧＱＩＬＫ　　　ＱＴＹＤＫＦＧＱＩＬＫＱ　　　ＴＹＤＫＦＤ活性サブフラグメントはまた、１個以上のつぎのヘプタペプチド類よりなるかあるいは含んでもよい。

ＧＴＰＲＡＧＱ　　　ＩＬＫＱＴＹＤ　　　ＫＦＤＴＮＭＲＴＰＲＡＧＱＩ　　　ＬＫＱＴＹＤＫＰＲＡＧＱＩＬ　　　ＫＱＴＹＤＫＦＲＡＧＱＩＬＫ　　　ＱＴＹＤＫＦＤＡＧＱＩＬＫＱ　　　ＴＹＤＫＦＤＴＧＱＩＬＫＱＴ　　　ＹＤＫＦＤＴＮＱＩＬＫＱＴＹ　　　ＤＫＦＤＴＮＭ本発明はまた、つぎのアミノ酸配列ＡＧＱＩ　ＬＫＱＴＹＤＫＦＤＴＮＬＲ８ＤＤＡまたはその活性フラグメントおよび／またはその保存的突然変異体よりなる天然の生長ホルモン以外のペプチドを包含するものである。この配列は、ｐＧＨペプチド１３４〜１５４からとられる。

活性サブフラグメントは、１個以上のつぎのヘキサペプチド類よりなるかあるいは含んでもよい。

ＡＧＱＩＬＫ　　　ＱＴＹＤＫＦ　　　ＤＴＮＬＲ３ＧＱＩＬＫＱ　　　ＴＹＤＫＦＤ　　　ＴＮＬＲ３ＤＱＩＬＫＱＴ　　　ＹＤＫＦＤＴ　　　ＮＬＲ５ＤＤＩＬＫＱＴＹ　　　ＤＫＦＤＴＮ　　　ＬＲ５ＤＤＡＬＫＱＴＹＤ　　　ＫＦＤＴＮＬＫＱＴＹＤＫ　　　ＦＤＴＮＬＲ活性サブフラグメントは、１個以上のつぎのへブタペプチド類よりなるかあるいは含んでもよい。

ＡＧＱＩＬＫＱ　　　ＴＹＤＫＦＤＴ　　　ＮＬＲ，５ＤＤＡＧＱＩＬＫＱＴ　　　ＹＤＫＦＤＴＮＱＩＬＫＱＴＹ　　　ＤＫＦＤＴＮＬＩＬＫＱＴＹＤ　　　ＫＦＤＴＮＬＲＬＫＱＴＹＤＫ　　　ＦＤＴＮＬＲ８ＫＱＴＹＤＫＦ　　　ＤＴＮＬＲ５ＤＱＴＹＤＫＦＤ　　　ＴＮＬＲ３ＤＤ本発明はまた、つぎのアミノ酸配列ＩＱＡＬＭＲＥＬＥＤＧＳＰＲＡＧＱＩＬＫＱまたはその活性フラグメントおよび／またはその保存的突熱度異体またはその塩よりなる天然の生長ホルモン以外のペプチドを包含するものである。この配列は、ｐＧＨペプチド１２０〜１４０からとられる。

活性サブフラグメンとは、１個以−Ｌのつぎのヘキサペプチド類よりなるかあるいは含んでもよい。

Ｉ　Ｑ　Ａ　Ｌ　Ｍ　ＲＥ　Ｌ　Ｅ　Ｄ　Ｇ　Ｓ　　　Ｐ　ＲＡ　Ｇ　Ｑ　ＩＱＡＬＭＲＥ　　　ＬＥＤＧＳＰ　　　ＰＡＧＱＩＬＡＬＭＲＥＬ　　　ＥＤＧＳＰＲＡＧＱＩＬＫＬＭＲＥＬＥ　　　ＤＧＳＰＲＡ　　　ＧＱＩＬＫＱＭＲＥＬＥＤ　　　ＧＳＰＲＡＧＲＥＬＥＤＧ　　　５ＰＲＡＧＱ活性サブフラグメントは、１個以上のつぎのへブタンペプチド類よりなるか含んでもよい。

ＩＱＡＬＭＲＥ　　　ＬＥＤＧＳＰＲＡＧＱＩＬＫＱＱＡＬＭＲＥＬ　　　ＥＤＧＳＰＲＡＡＬＭＲＥＬＥ　　　ＤＧＳＰＲＡＧＬＭＲＥＬＥＤ　　　ＧＳＰＲＡＧＱＭＲＥＬＥＤＧ　　　５ＰＲＡＧＱ！ＲＥＬＥＤＧＳ　　　ＰＲＡＧＱＩＬＥＬＥＤＧＳＰ　　　ＲＡＧＱＩＬＫ他の好ましい配列は、つぎのちのおよびその活性フラグメント（ヘキサおよびヘプタペプチドを含む）および／またはその保存的突然変異体またはその塩である。

ＥＤＧＳＰＲＡＧＱＩ　ＬＡＧＱ　Ｉ　ＬＫＱＴＹＤＫＲＡＧＱ　Ｉ　ＬＫＱＴＹＤＫＦＤＴＮＬＲ３ＤＤＤＴＮＬＲ５ＤＤＡＬＬＫＱＴＹＤＫＦＤＴＮＬＲ８ＤＤＡＬＬＫＮＹＬＲ８ＤＤＡＬＬＫＮＹ上記配列の１種以上の組合わせが使用できることに注目すべきである。

本発明の他の目的によれば、有効量の上記ペプチドまたは他の分子をを推動物に投与することよりなる生長ホルモン（または生長ホルモン活性を有する物質）の活性を促進する方法である。したがって、本発明は、生長ホルモンまたは生長ホルモン活性を有する物質の活性を促進するのに使用する薬剤の製造において上記のごときペプチドまたは他の分子の使用を含むものである。

本発明によるペプチド類および他の分子類は、種々の方法で提供され得る。好ましくは、本発明による分子中の抗原性部位（ペプチドフラグメントまたはサブフラグメント）は、キャリヤーペプチドまたは蛋白質に結合した選択のアミノ酸配列を含む。例えば５〜１０のキャリヤーに結合したペプチド配列（例えば上記配列の１個以上）の複数のコピーを有することが通常好ましい。このキャリヤーは、好適には、通常大きな蛋白質であり、これは材料としては不活性であり、天然の生長ホルモンと会合したものから異なる種または属から導かれる。キャリヤーの例としては、（それほど多くはないペプチド類がこの最後のケースでキャリーすることが可能とはいえ、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミンおよび卵アルブミンのようなアルブミンがある。あるいは鍵穴リンペットヘモシアニンも使用できる。キャリヤーは、通常、好ましくはフラグメントが基礎とするものとは異なる種から（る。

上記のペプチド配列がアルブミン類と結合することが必須ではない。すなわち、 β−ガラクトシダーゼ、特にバクテリア由来のもののような他の巨大分子と結合してもよい。

本発明は、上記ペプチド類と配列的（例えば３０％以上、５０％あるいは７０％でさえ）な配列相同性を有するペプチド類またはペプチド部位の分子を含むものである。同様に、保存的アミノ酸置換は、ペプチド類の免疫性または抗原性を減じない。したがって、抗原的に同様な類縁体は、上記のようにペプチド類の定義と同じ部位においてＧＨｓに結合する抗体を誘発する。類縁体の使用が「自己」耐性を避ける手段であることは知られている。したがって、他の種からの相当する配列の使用は、本発明において有利である。好ましいウシ、ブタおよびヒツジの生長ホルモンに類縁な配列の例は、ウマＧＨ，マウスＧＨ，トリＧＨ，マスまたはサケＧＨまたはラットＧＨの相当する配列部位から導かれたものである。

また、上記のごとき配列のポリマーであるかあるいは該ポリマーを含むペプチド類であるかあるいは該ペプチド類を含む分子も本発明において可能である。適当な配列は、２個のシスティン残基を架橋させてジスルフィド結合を形成させるか、あるいは（カルボジイミド、グルタルアルデヒドまたは他のジアルデヒド類または二（または多）官能カルボン酸類等の外部化学カップリング剤を用いることによって重合され得る。さらに別の方法としては、ＤＮＡ組換えの技術もペプチドポリマーを生産するのに使用できる。

化学的カップリング（例えば、リジン残基の作用により起る）およびジスルフィド結合生成は、カップリング残基が配列の末端であるときに限られるものではないことに注目すべきである。すなわち、内部残基も好適である。カップリング残基、例えばシスティン残基は、必要により加えてもよい。

上記配列のいずれかと外部ペプチドとをカップリングさせることが必要でないことが見出される。これらは、自己に対して抗原性である。このような場合、ＤＥＡＥデキストランおよびメルク７４２６　（Ｍｅｒｃｋ　７４２Ｂ）のような特別なアジュバントを選択することが望ましい。

本発明の他の目的によれば、」二記分子と医薬的または動物薬的に許容され得るキャリヤーとよりなる医薬または動物薬組成物を提供するものである。この組成物は、アジュバント、例えばＤＥＡＥデキストラン、メルク７４２６、サポニンおよびアルミニウムヒドロゲルを含んでもよい。

これらの代りにあるいはさらにフロイント（Ｆｒｅｕｎｄ）完全アジニバントを使用するともできる。−１−記のよ・うに、ある種のアジュバントは、特別な情況ではより好ましい。

本発明による組成物は、埋設あるいは注射用に用いられるように、通常滅菌性である。静脈７を射は好ましくない。

すなわち、恐らく筋肉注射および／または腹膜内注射も可能であるとはいえ、皮下注射が好まし７い。

皮下注射の好ましい個所は、動物の場合、首の背部である。これは、組織の破断ないし損傷による商品としての有用な肉に損害を与えることを少な（するためである。

キャリヤーは、通常、等張な緩衝液プラスＰＢＳまたは生理的食塩水のような食塩水である。

投与量は、通常、医師または獣医の処方に記載されているとおりであるが、ウシおよびブタに適用する場合には、５〜５００ＩＩＩＣｇ１特に５０〜１００＋ａｃｇのペプチドまたはその他の分子が好適であることが見出されている。

生長ホルモン活性を有するかあるいは促進する物質は、本発明によればペプチドまたは他の分子の直後（あるいはある場合には前あるいは同時に）投与することができる。

ついで、生長ホルモンの活性が増強される。これは、生長に関連した増強された生長、改善された身体組成（例えば、ブタにおいては脂肪が少なくかつ背部がより筋肉質である）、ヒツジでは良好な羊毛の生長、改善された生長効率（すなわち、所定の供給された単位量に対する良好な生長性）および乳牛および羊における乳分泌の増強が導かれる。この後者の応用は、ヒトの消費に対する乳供給を改善するだけでなく、羊がその子供を育てるのをより効率的にする。

本発明による生長ホルモン自身および他の分子以外の生長ホルモン活性を促進する物質の例としては、生長ホルモン禁止剤に対する抗体、生長ホルモン拮抗剤に対する抗体、例えばソマトスタチンまたはり二一ティニシング（Ｉｅｕｔｌｎｌｓｉｎｇ）ホルモン散失ホルモン（ＬＨＲＨ）に対する抗体等がある。例えばソマトスタチンに対する抗体の産生産生はＧＨレベルの循環を増大させ、かつ本発明による分子の効果を生じさせる。生長ホルモン活性を促進するものとみなされる他の物質は、同様に投与することができる生長ホルモン放出ホルモン（ＧＲＦ）である。

他の目的において、本発明は、第１の目的の分子に対して生じる抗体を提供するものである。このような抗体は、生長ホルモン生長効果を産生ずる適当な配合で通常、動物に対して皮下的に投与される。好ましい配合および投与の詳細は、適当に変えて上記のとおりである。

図面の簡単な説明本発明は、つぎの実施例により説明される。実施例は、添付の図面を参照して行なわれる。

第１図は、ｐＧＨおよびｂＧＨにおける高い抗原性の部位を示す線グラフである。

第２図、第３図およびｈｉＪ４図は、小動物マウスの生長率を増強する本発明による分子を示す棒グラフである。

第５ａ〜５ｅ図は、ヒツジの生長および代謝に関する抗ペプチド抗血清の効果を示す棒グラフである。

発明を実施するための最良の形態実施例Ｉ　Ｃ−末端Ｃｙｓ−Ａｌａ含有ｂＧＨ１３０〜１５０ペプチド（配列１）の合成ペプチド類の合成は、基本的にはドライランドおよびシェパード（Ｄｒｙｌａｎｄ　ａｎｄ　５ｅｐｐａｒｄ）　（１９８６）により記載されているフモック法（Ｆｍｏｃ−ｍｅｔｈｏｄｌｏｇｙ）によりまず行なわれた。

このペプチド類は、重合されたポリジメチルアクリルアミドに共有結合されたＣ −末端に結合する。この物質は、ペプチド合成においてペプシンＫ　Ａ　（Ｐｅｐｓｙｎ　Ｋ＾）樹脂として入手できる。

エステル結合を経ての該樹脂に対する最初のアミノ酸の付着は、触媒としてジメチルアミノピリジンを使用することにより行なわれる。合成全体を通じてジメチルホルムアミドは、溶媒として使用される。仮りのＮａ−アミノ基保護が、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンで除去され得る塩基に不安定な９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｓ＋ｏｅ）基で行なわれる。つづいて、アミノ酸類がアミノ脱保護の反復的なプロトコルにより添加され、活性化アミノ酸の力・ンプリングが行なわれる。

セリン、スレオニンおよびチロシンのヒドロキシ側鎖は、ｔ−ブチルエーテルとして保護され、アスパラギン酸およチルとして保護される。リジンおよびヒスチジンの塩基性側鎖は、ｔ−Ｂｏｃ基で保護されるが、アルギニンのグアニジノ側鎖官能性は、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフエニルスルホニル誘導体として保護される（Ａｔｈｅｒｔ。

ｎ　ｅｔ　ａｌ、１９８３）　ｏシスティンはＳ−アセトアミド（ＡＣＭ）またはトリチル誘導体として保護される。

アミノ酸誘導体は、触媒としてのヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）によりそのペンタフルオロフェニルエステル（ＰＰＰ）として添加されるが、セリンおよびスレオニンは、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＤＨＢＴ）エステルとして添加される（Ａｔｈｅｒｔｏｎ　ｅｔ　ａｔ、１９８６）　Ｏ場合によっては、Ｆｍｏｃアミノ酸は、その予め形成された対称な無水物として添加される。

アシル化および脱保護化段階は、分光側的あるいはトリニトロベンゼンスルホン酸（Ｔ　Ｎ　Ｂ　Ｓ　Ａ　）　（Ｈａｎｃｏｃｋ　ａｎｄ　Ｂａｔ、ｔｅｒｓｂｙ、　１９７８）試験法、また場合によってはペプチドに結合した樹脂の酸加水分解物のアミノ酸分析により検出される。

ペプチドの結合が完了したのち、ペプチド樹脂結合は、開裂され、大部分の側鎖保護基は、９５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／遊離基捕捉剤混合物の作用により同時に除去される。通常使用される遊離基捕捉剤は、水、フェノール、エタンジチオール、エチルメチルスルフィド、アニソ−ルおよびチオアニソールである。

遊離基捕捉剤および開裂条件の選定は、ペプチドの組成により変る。ＴＦＡは、減圧除去され、該遊離基捕捉剤はエーテル中に抽出される。粗ペプチドは、凍結乾燥により水性層から回収することができる。

ペプチド類は、ｔ−Ｂｏｃ／ベンジル法により合成される。担体は、４−（オキシメチル）−フェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）またはベンズヒドリルアミン（ＭＢＨ）のいずれかであった。仮りＮａ−保護は、酸不安定ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）基であり、これはジクロロメタン中でトリフルオロ酢酸により除去される。中和後、つぎのＢｏｃアミノ酸が予め形成された対称な無水物として、例えばアプライド・バイオシステムズ−４３０Ａ（Ａｐｐｔｉｅｄ　ｂｉｏｓｙｓｔｃｍｓ　４３０Ａ）ペプチド合成機にしたがって添加される。結合したペプチドは、通常ベンジルに基づく側鎖保護基を除去する無水フッ化水素（ＨＦ）で樹脂から開裂する。

ペプチドの精製は、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフおよび高速液クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）またはこれらの方法の組合わせにより行なわれる。

ペプチドの同質性は、分析的ＨＰＬＣ，薄膜クロマトグラフ（ＴＬＣ）およびセルロースの薄層の電気泳動により検定される。酸加水分解物のアミノ酸分析および合成ペプチドのアミノ酸配列の決定は、最終生成物の純度を表示するためにも用いられる。

ペプチド類は、合成が容易なカルボキシ末端または架橋過程でＣｙｓまたはＣｙｓ−Ａｌａ残基により必要により調製される。

実施例２　Ｃ−末端Ｃｙｓ−Ａｌａ含有ｐＧＨ１３４〜１５４ペプチド（配列２）の合成実施例１の方法に準じて上記配列が合成された。

実施例３　Ｃ−末端Ｃｙｓ−Ａｌａ含有ｂＧＨ１２０〜１４０ペプチド（配列３）の合成実施例１の方法に準じて上記配列が合成された。

実施例４〜６　キャリヤーに結合した免疫性ワクチンの調製実施例４実施例１の方法で調製された合成ベチフド（配列１）を、グルタルアルデヒドを用いてキャリヤー（卵アルブミン）に架橋させた。この免疫原は、同一重量のキャリヤー（卵アルブミン５ｍｇ）と混合した５１ｍｇのペプチドよりなり、全容ｆｆ１４ｍ１のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（２５ｍＭのオルソリン酸二水素ナトリウムおよび０．８％Ｎａ４を含有する２５ｍＭのオルソリン酸水素ニナトリウム、ｐＨ７，４）に溶解した。この混合物に、グルタルアルデヒド［シグマ（Ｓｉｇｍａ）　］溶液を添加した。通常、架橋剤の使用量は、０゜１または０．５ｍ！の０．５％（ｗ／ｖ）水溶液であった。

結合混合物は、透析前に３０〜６０分間２０℃で培養し、アジュバントで乳化した。ワクチン製造において、透析は必要な過程ではなく、またしばしばプロトコールから省略されることが見出された。

実施例５実施例２で調製された合成ペプチド（配列２）を使用した以外は、実施例４の方法に準じて行なった。

実施例６実施例３で調製された合成ペプチド（配列３）を使用した以外は、実施例４の方法に準じて行なった。

実施例７〜９　キャリーなし免疫性ワクチンの調製実施例４〜６の一般方法を繰返すことにより「キャリー」なし免疫原を調製したが、結合混合物から卵アルブミンは除いて行なった。実施例７のワクチンは配列１に基づき、実施例８のワクチンは配列２に基づき、また実施例９は配列３に基づいている。　　　　一実施例１０〜１２　羊におけるワクチンプロトコール全容量４ｍｌのＰＢＳにおけるそれぞれ実施例４〜６に調製されたペプチドワクチンを、７ｍｌのフロイント完全アジュバントで乳化し、かつ羊（メリノ一種）の２個所に皮下注射（Ｓ　Ｃ）を行なった。２回目（さらに２個所）を同一ワクチンを用いて、２８日後にフロインド不完全アジュバント内で行ない、１４日後およびその後退間隔で血液サンプルを採取した。血清は、血漿がヘパリン処理管に採血することにより得られる血液の凝血をさせることにより調製された。７０インドアジユバントは、ディフコ・ラボラトリーズ（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から購入した０牛および豚のワクチン投与は、同様な条件下で行なった。

実施例１３〜１５血清または血漿の調製および血清または血漿サンプル中の抗生長ホルモン抗体の検定抗体に対する検定は、生長実験が硫酸ナトリウム沈澱により調製された血清の免疫グロブリンフラクションで行なわれる希釈血清または血漿により行なわれた。

血清は、２容量の硫酸ナトリウム（２７ｗ　／　ｖ％の水溶液）で沈澱させ、遠心分離により回収した。ついで、グロブリンフラクションをＰＢＳに対して極度に透析した［ジョンストンおよびトーペ（Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ　ａｎｄ　Ｔｈｏｒｐｅ）、１９ｇ２コ。

ワクチンの免疫性および抗原性は、前記のように液相ラジオイムノアッセイ法を用いて決定された（Ａｓｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ。

１９８５）。本質的に、血清または血漿は、ＰＢＳ中で希釈され（１１５０〜１１５．０００）　、０．０５ｍ１が１２５Ｉで標識化されたｂＧＨまたはｐＧＨを０．０５ｍ１添加することにより検定された。血清中でのトレーサーへの抗体の結合は、セルロース［５ＡＣ−ＣＥＬ、ウェルカム・ダイアグ、ノスティックス（Ｗｅ）ｌｃｏｉ　Ｄｉａｇｒ＋ｏｓｔ１ｃｓ）］にカップリングされた第２の抗体で沈澱させることにより行なわれた。５ＡＣ−ＣＥＬの語は、商標名である。

固相検定（ＥＬＩＳＡ）は、つぎのようにして行なわれた。ｂＧＨおよびｐＧＨを、ミクロ滴定板をヘモグロビンの代りに１％のウシ血清アルブミンＢＳＡでブロックした以外は、前記のごとき固相ミクロ滴定板上に被覆した（Ａｓｈｔｏｎ　ｃｔ　ａｌ、］、９８５）　ｏ血清は、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡ中で数枚を接触させて希釈しく１１５０．１１５００．１１５゜０００．１１５０．０００）　、３７℃で２時間または４℃で一液培養（また。血清中の抗生長ホルモン抗体の数枚への結合は、ラビット抗ヒツジ免疫グロブリン複合体（パーオキシダーゼ）　（Ｄａｋｋｏ、１％ＢＳＡ／ＰＢＳの１／１．０００＞の添加により行ない、これは１ウェル当り０．１ｍｌで３７℃で２時間培養した。基材である２、２− アジノージ（３−エチルベンズチアゾリンスルホネート（６）（Ａ、ＢＴＳ）［ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｃｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）コは、クエン酸緩衝液ｐＨ４，２中でｉｏｎｇ／ｍｌの濃度であり５ｍｌ当り３０％の過酸化水素を含有していた。これを、４１０ｒ＋ｍでダイナチックＭ　Ｒ６００（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　ＭＲ６００）？イクロ板リーダーで読取る前に室温で５分間培養した。

比較検定比較血清または血漿サンプルは、ペプチドの不存在下にグルタルアルデヒドで架橋されたキャリヤー蛋白質を受けた羊から誘導された。比較用ワクチンは、ペプチドワクチン処理と平行して動物の群に投与された。羊の群のサイズは、通常５〜１０頭であるが、場合により１群当り５０頭程度であった。

その結果を第１表および第２表に示すが、これはペプチド類による免疫化により生長ホルモン妨害反応性抗体の発生を示している。

１１２〜１５９部位内の短いペプチド類による羊の免疫化が、ｂＧＨおよびｐＧＨ（１９１外の１種または２種のアミノ酸において異なり、このため両ホルモンが同一抗血清品質ウェルに結合していることが価値がある）と結合する抗体を誘導することを示している。抗体生産の効率は、使用する配列により変る。ある種の配列が、キャリーがこの目的から重要性が低い他のものに使用される場合に、より良好な応答を与えることも示されている。異なる種からの生長ホルモン間の広範な配列関係は、主としてｐＧＨに対する高い親和性抗体を誘発することを可能にする。ｂＧＨ配列が抗体認識ｐＧＨを誘発することを第１表は明確に示している。自動抗体を誘発する自己成分よりも同等物を使用することは、知られている。

第１表は、ウシおよびブタＧＨからのペプチド配列に対する羊の抗体応答を示すものである。抗体は、液相ラジオイムノアッセイ（ＲＸ　Ａ）により決定された（陽性は、比較のための免疫化された羊の血清以上の２００〜２．０００ｅｐｍのカウントが保持された。）第１表配列（１）　　ｂＧＨ１３０〜１５０含有Ｃ末端Ｃｙａ−Ａｌａ配列（２）　　ｐＧＩＩ　１３４〜Ｌ５４ａ有Ｃ末端Ｃｙａ−Ａｌａ配列（３）　　ｂＧＩ（１２０〜１４０含ｉｃ末端Ｃｙａ−Ａｌａ応答動物（ｎ　＝　５）％ｂＧＨｐＧＨ配列（１）　　　　　　　　　　６０　　　　８０配列（２）　　　　　　　　　　　７０　　　　４０配列（３）　　　　　　　　　　８０　　　　８０応答の効力は、キャリヤーを使用したかどうかとは関係がない。同一結果が、ペプチドが卵アルブミンキャリヤーに架橋かあるいはそれら自身で重合しているかで得られた。

０〜１４０抗原性に関する他の羊の実験を示す。ｎ＝５０／群。血清は、ペプチドワクチンを２回注射したのちの２週間後に行なわれたものに相当して検出された。この場合、ペプチドは、実施例８および９にしたがってグルタルアルデヒドでそれら自身で重合された。

第２表応答羊（％）ｂＧＨｐＧＨ配列（２）　　ｐＧＨ１３４〜１５４　　　５４　　　５６配列（３）　　ｂＧＨ１２０〜１４０　　　６０　　　７４（比較の血清のもの以上の４００〜２．０００ｃｐｍの間の抗血清への結合）実施例１６〜１８　小マウス中の生長増強抗血清の測定実施例１６スネル小マウス（Ｓｎｅｌｌ　ｄｗａｒｆ’　ｍ１ｃｅ）における生長の代謝検定を前記のとおり行なった（Ａｓｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８６．１９８７：ｌｌ。

１ｄｅｎ　ｅｔ　ａ［，１９８０）。基本的には、雄および雌動物を、同−処置群の２頭のマウスが同一ケージ内にいないように、無作為にかつケージ内に配分した。ホルモンおよび抗ペプチド抗体とのコンプレックス（注射１時間前に調製）を、３５Ｓで標識化した硫酸ナトリウム（０，５ｍｃＣｉ／ｇ）（Ａｍｅｒｓｈａｓ　Ｒａｄｉｏｃｈｃｍｉｃａｌｓ）でさらに２４時間注射する前に、２８後皮下投与（０，１ｍ１）　シた。放射性を与えることにより軟質組織の除去後胸骨に直接接合する肋骨の軟骨を測定した。各処置群の平均生長率は、ｄｐｍ／ｍｇの軟性で表現され、また６頭の動物から３５８−硫酸塩の理解を表わす。重要性は、スチューデントのＴ−試験により測定された。体細胞生長と軟骨への放射性の導入との直接の関係は、前記のとおりである（Ａｓｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ、１９８８．１９８７：Ｈｏ１ｄｅｎ　ｅｔ　ａ１．１９８５）。その結果を、第２図に示す。

第２図は、軟骨への３５８−硫酸塩導入により測定されたように抗ＧＨ抗血清による小マウス生長率の増強を示す（ＡＳｔｕｎ　ｅｔ　ａｌ、１９ｇ６．１９８７）　ＯペプチドｐＧＨ１３４〜１５４でワクチン投与された羊により生じたｂＧＨおよびｐＧＨへの位置を目指す抗血清は、注射前にｐＧＨ（５０ｍｃｇ）で複合化した小マウス内での効果で測定された。比較の動物は、比較のワクチン（ＦＣＡ／卵アルブミンのみ）を受けた羊からの抗体を受けた。各処置動物群は６頭からなっていた。試験された３種の免疫グロブリン製剤（Ａ、Ｂ。

Ｃ）は、異なる動物から導いた。重要性は、不対スチューデントＴ−試験により測定した。

実施例１７第２の小マウス実験において、２種類の抗ペプチド抗血清の生長増強活性が測定された。その結果を第３図に示す。

マウスは、比較の免疫グロブリン（第１欄）またはペプチドでｐＧＨ１３４〜１５４（第２欄）またはｂＧＨ１２０〜１４０（第３欄）またはｂＧ）Ｉ活性を増強するモノクローナル抗体陽性比較（第４欄）でワクチン化された羊から誘導された免疫グロブリンのいずれかと混合したｂＧＨ（５０ｍｃｇ）で処置された。

ｂＧＨの生長促進活性の重大な増強は、上記ペプチドで生じた免疫グロブリンにより達成される。

実施例１８第３の小マウス実験において、さらにｐＧＨ１３４〜１５４およびｂＧＨ１２０〜１４０により生じた抗血清が試験された。その結果を第４図に示した。マウスは、比較のグロブリンまたは配列ｐＧＨ１３４〜１５４またはｂＧＨ１２０〜１４０で羊をワクチン化した。羊により生じたｐＧＨに対する免疫グロブリンのいずれかと混合したｐＧＩ（（５０ｍｃｇ）で処置された。生長率を、軟骨への３５゜硫酸塩の混合により測定した（Ａｓｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　１９８６．１９８７）。

レベルは、平均±ＳＥＭに相当した。得られた重要は、実験（ハツチング部分）の終りに測定し、またｐＧＨ（５０ｍｃｇ）十特定の免疫グロブリン（抗ｐＧＨ１３４〜１５いて、生長の重大な増加が観察された（Ｐｒｏ、００１）。

実施例１９　羊の生長および代謝に関する抗ペプチド免疫グロブリンの受動投与の効果羊（純ポル・ドーセット）を、４つの処置ＦＴ（ｎ−７）の一つに、ランダムに配列した。４つの群は、３週間のＴ・備装置および１週間当り２度秤量した。Ｔ −６ｉ処装期間中に、秤量時に採血を行なった。１５０に、血液サンプルを、カテーテルから１８時間にわたって連続的に採取した。１８日に、動物に関してインスリン耐性試験を行なった。全動物が１６％の粗蛋白質ファーム混合物の即席ダイエツトが維持された（毎日の拒絶が記録された）。

処置は、ｂＧＨＳｂＧＨ十抗ペプチド免疫グロブリン、抗ペプチド免疫グロブリンのみ、および比較用グロブリンについて行なった。

処置期間（１８日間）中、動物は、上記と同じダイエツトが維持され、１週間当り２回秤量した。８日の処置において、連続的採血が（１８時間）にわたって行なわれ、１０日に他のインスリン耐性試験が行なわれた（ＩＴＴ）。

８頭の動物を１４日、１５日および１７日に屠殺し、残りの４頭は、１８に屠殺した。屠殺時に、肝臓を秤量し、皮下脂肪のサンプルを採取した。サンプルは、脂肪分解活性、脂質生成活性および脂質酸化を分析した。脂肪脂質生成は、１４Ｃ酢酸エステルを脂質に配合することにより、脂質分解は、グリセリン放出（ＢＣＬ試験キット１４８２７０）により、また脂肪分解は、前述（Ｓｍｉｔｈ　ａｎｄ　Ｗａｌｓｈ、１９８４．１９８８：Ｙａｎｇ　ａｎｄ　Ｂａｌｄｗｉｎ、　１９７３）のｃｏ２生成により測定した。

その結果を、第５ａ〜５ｅ図に示す。これらは、羊の生長および代謝に関する抗ペプチド抗血清（ｐＧＨ１３４〜１５４）の効果を示す。ペプチドｐＧＨ１３４〜１５４でワクチン化された年中で生じたｏＧＨ（またｂＧＨおよびｐＧＨでも同様）と交叉重合性である免疫グロブリンは、成年（ドーセット）に投与された。生長率、肝臓重量および脂肪組織の代謝活性は、屠殺して測定した。処置は、（Ａ）比較用免疫グロブリン（卵アルブミン免疫羊からの）、（Ｂ）ｐＧＨ１３４〜１５４で免疫化された羊により生じた抗ヒツジ抗血清、（Ｃ）ウシＧＨ（１０ｍｇ）および（Ｂ）＋　ＣＣ’）の組合わせで行なった。処置は、別の日に（ｎ−７動物／群）に投与して行なった。

抗ｐＧＨ１３４〜１５４免疫グロブリンによる羊の処置は、行なわれた生長ホルモン（Ｃ）よりも程度が低いとはいえ、生長速度（Ｂ）が増加した。

生長ホルモンは、動物に投与された場合、糖尿病を起しやすいことは知られている。このため、内因性ＧＨ活性を増強する薬剤は、糖尿病誘発活性（インスリンに対する抵抗）を明確にすることが期待される。ｂＧＨまたは抗ｐＧＨ１３４〜１５４抗血清により複合体内でのｂＧＨによる羊の処置は、重大な糖尿病誘発活性を引起こす。それ自身に対する抗血清の投与も、その程度が低いとはいえ（第５ｄ図）、糖尿病を誘発する。インスリン耐性試験のためのインスリンの投与は、生体ｋｇ当り０゜０８単位であった。

インスリン耐性試験用の単位は、１時間の間の変化としてミリモル−グルコース／っである。糖尿病誘発活性の計算は、実際上インスリンに対する動物の応答性の測定である。

すなわち、生長ホルモンまたは抗ペプチド抗血清で処置したのち、その動物はインスリンに対して応答性がより低い。

より低い応答性である程度は、無処置の期間および１処置期間のインスリン耐性試験を行なうことにより各動物で計算される。すなわち、差は、本質的に糖尿病誘発活性である。

生体内での生長ホルモンの他の影響は、脂肪代謝を変えることである。皮下脂肪（腎周囲の）を除去し、かつ脂質に１４ｃ酢酸エステルを配合することおよびグリセリン放出によりそれぞれ脂質活性および脂質酸化を検定した。抗ペプチド免疫グロブリン（ｐＧＨ１３４〜１５４）による羊の処置は、脂質合成を確実に減少させる。同様に、それ自体であるいは抗ペプチド抗血清とを組合わせてのｂＧＨの投与は、確実に脂質生成を減少させる（２時間で脂質１ｇ当りトリグリセライドに配合される酢酸エステルの量（マイクロモル）として測定）。同様な現象が脂質酸化にも観察された（第５図ｅ）（脂質酸化は、２時間で脂質１ｇ当り二酸化炭素に変化した酢酸エステルの量（マイクロモル）として測定した）。

実施例２０〜４１　配列部位１１２〜１５９内の抗原性部位のマツピング実施例１の一般手順に準じて、第３表に示す以外のペプチド類を、配列部位１１２〜１５９　（ｎ＝５）内の好ましい抗原性部位をマツピングするために調製した。このペプチド類は、キャリヤーなしにあるいは卵アルブミンキャリヤーとともに、実施例４のように羊に注射し、かつ羊応答の割合を示した。

床３表ＮＣ：キャリヤーなしＯＶＡ　：卵アルブミンｎｄ：検出されず配　　列　　　　　　　　　　　　　応　　答（％）ＮＣＯＶＡＡＬＭＲＥＬ［ＥＤＧＳ　　　０　２０ＫＬＫＤＬＥＩ′ＧＩＱＡＬＭＲＥＬＥＤＧＳ　　　Ｏ８０ＲＥＬＥＤＧＳＰＲＡＧ　　ｎ　ｄ　　ｎ　ｄＤＬＥＥＧＩＱＡＬＭＲＥＬＥＤＧＳＰＲＡＧ　　ｎ　ｄ　　ｎ　ｄＥＤＧＳＰＲＡＧＱＩＬ　　８０１００ＥＧＩＱＡＬＭＲＥＬＥＤＧＳＰＲＡＧＱＩＬ　　４０　４０ＳＰＲＡＧＱＩＬＫＱＴ　　　Ｏ６０ＱＡＬＭＲＥＬＥＤＧＳＩ）ＲＡＧＱＩＬＫＱＴ　　８０　２０ＡにＱＩＬＫＱＴＹＤＫ　　４０　６０ＭＲＥＬＩＥＤＧＳＰＩ？ＡＧＱＩＬＫＱＴＹＤＫ　　８０　０ＩＬＫＱＴＹＤＫＦＤＴ　　４０　８０Ｌ［：ＤＧＳＩ’ＲＡＧＱＩＬＫＱＴＹＤＫＩ’ＤＴ　　４０　４０配　　　列　　　　　　　　　　　　応　　　答ｃ％）ＱＴＹＤＫＦＤＴＮＬＲ４０２０ＧＳＰＲＡＧＱＩＬＫＱＴＹＤＫｌ’ＤＴＮＬＲ４０２０ＤＫＩ’ＤＴにＬＲ８ＤＤ　　２０　４０ＲＡＧＱＩＬＫＱＴＹＤＫＦＤＴＮＬＲＳＤＤ　　８０　６０ＤＴＮＬＲ８ＤＤＡＬＬ　　８０　４０ＱＩＬＫＱＴＹＤＫＦＤＴＮＬＲ８ＤＤＡＬＬ　　８０　０ＬＲ８ＤＤＡＬＬＫＮＹ　　４０　８０ＫＱＴＹＤＫＰＤＴＩＲ３ＤＤＡＬＬＫＮＹ　　　　　　　　　　　　４　０　　　　　１　０　０ＤＤＡＬＬＫＮＹ　　　　　　　　　　　　　　　４　０　　　　　　　６　０ＹＤＫＦＤ′ｒｌｔＬＲ８ＤＤＡＬＬＫＮＹ　　　　　　　　　　　　　　　６　０　　　　　　　８　０陽性は、２種の異なる希釈におけるバックグラウンドを越えて１２５標識化ｂＧＨの結合において２００〜２，０００ｃｐｍである。個々の血清の力価は、１１５０〜１１５゜０００の間で変る（固相ＲＩＡにおいて応答の水準は、常に８０〜１００％である）。

その結果は、第１図にグラフで示す。この結果は、たいていの抗原性部位は、１３３〜１５９および１２８〜１４７にあることを示している。データはまた、ある場合には短いペプチド類（約１０アミノ酸）が、より短い配列が部分を形成する相当するより長い配列よりもよく達成することを示している。

実施例４２〜４４ペプチド配列ｐＧＨ１３４〜１５４およびｂＧＨ１２０〜１４０は、調製され、かつ羊または子牛に注射された。

ヒツジまたはウシ抗生長ホルモン面清は、免疫により生じかつ適定された結合は、　　　Ｉ−ｂＧＨまたは１２５Ｉ。

ＧＨのいずれかとともに液相ＲＩＡにより測定された。その結果を第４表に示す。

第４表血清の希釈率　　　１１５０　１１５００　１／１．０００　１１５．０００検定に希釈血清のｃｐｓ１５０ｍｃ１１２５１−ｐＧＩ（（羊＞　　１７５０　　１０５０　　８６５　　　２６５１２５１−ｂＧＨ（羊）　　２２５０　　１８９０　　９９５　　　３７５１２５１−ｂＧｌｌ　　（子牛）’９００　　１０９７　　９２５　　　５０５応答の効率は、キャリヤーを使用したか否かには関係しない。同様な結果が、ペプチド類か卵アルブミンキャリヤーに交叉結合しているかあるいは自身で重合でいるかで得られた。

実施例４５豚を７ラグメントｂＧＨ１２０〜１４０およびｐＧＨ１３４〜１５４て免疫化し１、それぞれを完全フロイント・アジュバント（２５０ｍｃｇ／豚）中で卵アルブミンと複合化し、かつ２８０後に不完全フロイント・アジュバント中で同一量で行なった。血液をさらに１０口後に採取し、かつ固相ＥＬＩＳＡによりｂＧＨおよびｐＧＨに対する抗体を検定した。本質的に、板をｂＧＨおよびｐＧＨで被覆し、かつ血清の結合を、同相でヒツジ抗ホルモン抗体の測定について１−記したど同様な方法（実施例１３〜１５）でブタＩｇ［ダコ（Ｄａｋｏ）、デンマーク］に対するパーオキシダーゼ複合ウサギ免疫グロブリンでｎｌＪ定した。動物は、板１−の天然ホルモンと交叉反応する抗体を形成して両ペプチドに応答した。力価は、応答はペプチドｂ　Ｇ　Ｈ／　ｐ　Ｇ　Ｈ１２０〜１４０に対して良好であるとはいえ、１１５０〜１１５．０００の範囲で変化させた。その結果を、第５表に示す。

第５表ペプチド　　　　　応答率（％）（１群当り４頭）ｂＧＨｐＧＨｂＧＨ１２０〜１４０　　　　　７５　　　　１００ｐＧ）１１３４〜１５４　　　　　７５　　　　　７５参考文献Ａｓｔｏｎ、Ｒ，、Ｈｏ１ｄｃｒ、Ａ、Ｔ、、Ｐｒｅｅｅｅ、Ｍ　　、Ａ、　　ａｎｄ　　Ｉｖａｎｙｉ、Ｊ。

（１９８６）　Ｊ、Ｅｎｄｏｅｒｊｎｏｌ、１１０．３８１−３８８゜Ａｓｔｏｎ、Ｒ，ＪＩｏｌｄｅｒ、Ａ、Ｔ、、Ｉｖａｎｙｉ、Ｊ、　　ａｎｄ　　Ｂｏｍｆｏｒｄ、　　Ｒ。

＜１９８７）Ｍｏｌｅｅ、Ｉｍａ＋ｕｎｏ１．２４．１４３−１５０゜１ｏ１ｄｅｒ、Ａ、Ｔ、Ａｓｔｏｎ、　　Ｒ，Ｐｒｅｅｅｅ、　　Ｍ、Ａ、　　ａｎｄ　　ＩｖａｎｙｉＪ。

（１９８５）　Ｊ、Ｅｎｄｏｅｒｊｎｏｌ、１０７．Ｒ９−Ｒ１２、Ｃｏ１０．　　Ｉｌ、Ｉ［、、Ｄｃｗｅｙ、　　Ｒ，、Ｇｅｓｃｈｗｉｎｄ、　　１．！、　　ａｎｄ　　Ｃｈａｐｍａｎ、Ｍ。

＜１９７５）　Ｂｉｏｌ、Ｒｃｐｒｏｄ　１２．５１６Ｐｃｒｇｕｓｏｎ、　Ｋ、Ａ、（１９５４）　Ｎａｔｕｒｃ　１７４．４１１Ｎｇ、Ｐ、、　　ｔｌｃｒ＋ｒｌｃｒｓｏｎ、　　Ｔ、、　　Ｂｒｏｍｌｃｙ、Ｊ、　　ａｎｄ　　Ｂｏｒｎｓｔｃｆｎ、　　Ｊ（１９８３）　３０．６３−７１゜Ｐｕ１ｌｉｎ、　　Ｃ，０，、Ｈａｒｃｏｕｒｔ、　　Ｊ、Ａ、、　　Ｎｇ、　　Ｆ、Ｍ、　　ａｎｄＢｏｒｎｓｔｅｉｎ、　Ｊ、（１９８１）　Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ。

１８、３１８−３２３Ｓｍｉｔｈ、Ｒ，Ｗ、ａｎｄ　Ｗａｌｓｈ、Ａ、＜１９８４）　　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　１ａｃｔａｔｉｏｎｏｎ　ｔｈｅ　ｎ＋ｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　５ｈｅｅｐ　ａｄｉｐｏｓｅ　ｔｉｓｓｕｅ、　Ｉ？ｅｓｅａｒｃｈｉｎ　　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　　５ｃｉｅｎｃｅ　　ＶｏｌＪ７゜Ｓｍ１ｔｈ、Ｒ，Ｗ、ａｎｄ　　Ｗａｌｓｈ、Ａ、（１９８８）　　　Ｅｆｆｅｃｔｓ　　ｏｆ　　Ｐｅｒｇｎａｎｃｙａｎｄ　１ａｃｔａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅ、　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｖｏｌ、４４Ｙａｎｇ、　Ｙ、Ｔ、　ａｎｄ　Ｂａ１ｄｖｉｎ、　Ｒ，Ｌ、（１９７３）　Ｊ、Ｄａｉｒｙ　５ｃｉｅｎｃｅ。

１ｓａｋｓｓｏｎ、　０．Ｇ、Ｐ、、Ｅｄａｎ、Ｓ、Ｊａｎｓｓｏｎ、Ｊ−０（１９８５）　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ。

Ｐｈｙｓｉｏｌ、４７．４８３−４９９゜Ｎ１ｃｏｌｌ、　Ｃ，Ｓ、、　Ｍａｙｅｒ、　Ｇ、Ｌ、、　ａｎｄ　Ｒｕ５ｓｅ１１．　Ｓ、Ｍ、（１９８Ｂ）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　　　Ｒｃｖ、　　７．　１６９−２０３゜Ｒｏｌａｎｄｓ、　　１．Ｗ、　　（１９３９）　Ｊ、　Ｅｎｄｏｅｒｊｎｏｌ、１，１７７Ｓｈｅｃｈｔｅｒ、　Ｙ、、Ｃｈａｎｇ、　Ｋ、Ｊ、、　Ｊａｃｏｂｓ、　Ｓ、　ａｎｄＣｕａｔｒｅｃａｓａｓ、Ｐ、（１９７９）　　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ。

７６．２７２０Ｓｈｅｅｈｔｅｒ、　Ｙ、、ｌ１ｅｒｎａｅｚ、　Ｌ、、　Ｓｅｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ、Ｊ　ａｎｄＣｕａｔｒｃｃａｓａｓ、　Ｐ、（１９７９）　Ｎａｔｕｒｅ　２７８．８３５−８３８　。

Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、　Ｋ、Ｗ、　Ｐｒｏｅ、　Ｓｏｅ、　Ｅｘｐ！、　Ｂｉｏｆ、　ＮＹ　３５，６４０゜Ｇｏｏｄｆｒｉｅｎｄ、　　Ｔ、Ｌ、、　　Ｗｅｂｓｔｅｒ、Ｍ、Ｅ　　、、　）ｌｅＧｕｉｃｒ、Ｊ、Ｓ、（１９７０）Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｅｎｄｏｃｒ４ｎｏ１．Ｍｅｔａｂ、３０．５６５−５７２゜Ａｓｔｏｎ、　　Ｒ，、Ｃｏｏｐｅｒ、　Ｌ、、　　１ｌｏｌｄｅｒ、　　Ａ、Ｔ、　　Ｉｖａｎｙｉ、　　Ｊ、　　ａｎｄＰｒｃｃｅｃ、　　Ｍ、Ａ、　　（１９８５）　Ｍｏ１ｃｅ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　２２．２７１−２７５゜ンぐ＼Ｎ・＼ｅ”ｑ −二ｉとデセヨＪにユζ℃晶こニーＦＩ６．２ＦｔＧ、ＪＦ／ｃ、４゜（ン５ン　　　　　　　　　　　　　　Ｆ／ｃ、５（Ｃ〕１う乍訪焚エステルかうＬ・ツク′・ノ１−・２Ｆへ・マイ７匹ｒｌ／３−刃斥ｇ／／２緯ｈｑ国際簿−＄輻牛ｌｍｗ＋ｔｔ＋Ｉ＃ｓａｌ　＾ｓｔｂｍｎ。Ｈ，、ＰＣＴ／ＧＢ　８１３１００５２１１１　　２１ｍｔｒｎａ１．Ｐ、”ａ６ｈｅｌＨ””＠、　　ＰＣＴ／ＧＢ　　８Ｂ１００５２８国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．天然生長ホルモンの１１２〜１５９部位の少なくとも若干のものに対して高められる抗体を生成する抗原性分子。
２．少なくとも一部が天然生長ホルモンの１１２〜１５９残基から選ばれたオリゴペプチドに対して抗原的に同等である（天然生長ホルモン以外の）分子。
３．生長ホルモンがウシ、ヒツジ、ブタまたはトリ生長ホルモンである請求の範囲第１項または第２項に記載の分子。
４．オリゴペプチドが６〜２０個のアミノ酸残基である請求の範囲第１項または第２項に記載の分子。
５．オリゴペプチドに対して抗原的に同等である分子または分子の一部分がオリゴペプチドと同一または立体配座的に類似であるアミノ酸残基の配列よりなるものである請求の範囲第１項または第２項に記載の分子。
６．つぎのアミノ酸配列よりなる請求の範囲第１項または第２項に記載の分子。【配列があります】または【配列があります】または【配列があります】または【配列があります】または【配列があります】または【配列があります】または【配列があります】または【配列があります】またはこれらの活性フラグメントおよび／またはこれらの保存的突然変異体またはこれらの塩類。
７．請求の範囲第１項または第２項に記載の分子の有効量を脊椎動物に投与することを特徴とする生長ホルモン（または生長ホルモン活性を有する物質）の活性を増進する方法。
８．生長ホルモンまたは生長ホルモン活性を有する物質が同時にまたは引続いて投与されてなる請求の範囲第７項に記載の方法。
９．生長ホルモンまたは生長ホルモン活性を有する物質の活性の促進に使用される薬剤の製造における請求の範囲第１項または第２項に記載の分子の使用法。
１０．同時にまたは引続いて投与される薬剤の製造において生長ホルモンまたは生長ホルモン活性を有する物質とともに使用する請求の範囲第８項に記載の使用法。
１１．キャリヤーペプチドまたは蛋白質を含む請求の範囲第１項または第２項に記載の分子。
１２．抗原的に同等な部分の複数のコピーを有してなる請求の範囲第２項に記載の分子。
１３．医薬的または動物薬的に許容し得るキャリヤーとともに請求の範囲第１項または第２項に記載の分子を含有してなる医薬または動物薬組成物。
１４．生長ホルモン活性を有する物質よりなる請求の範囲第１３項に記載の組成物。
１５．請求の範囲第１項または第２項に記載の分子に対する抗体。
１６．医薬的または動物薬的に許容し得るキャリヤーとともに請求の範囲第１５項に記載の抗体を含んでなる医薬または動物薬組成物。