JPH03502584A - ホルモン分泌を変化させる組換え体融合タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ホルモン分泌を変化させる組換え体融合タンパク質発明の分野 本発明は組換えＤＮＡ技術によって製造されそして本来的に抗原でないペプチド に対して能動免疫原として使用される融合タンパク質の製造に関するものである 。肝炎表面抗原（ＢＢｓＡｇ）のような抗原性の高いタンパク質の遺伝子と、本 来は抗原性でないタンパク質、タンパク質の１部またはペプチドをコードするｃ ＤＮ＾とを組合わせることによって、融合タンパク質が発現される。この抗原性 の高い融合タンパク質の注入後に、抗原性の高いタンパク質および問題のタンパ ク質の双方に向けられたポリクローナル抗体が製造される。かくして、この技術 は生体内で産生されたホルモンを免疫的に無効化させる方法を提供し、そして生 殖力のない状態を誘導するがまたは急速に増殖する組織のホルモン依存性増殖を 阻止するために使用することができよう。

本発明の背景 １９６０年代後期中のギレメン（Ｇｕｉｌｌｅ＋ｍ１ｎ）、　シャリ−（Ｓｃｈ ａｌｌｙ）および共同研究書違の開拓的な研究結果として、視床下部デカペプチ ド、即ち黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲ）りが全ての哺乳動物の生殖能 力の開始および維持に深く係わっていることが明らかになってきた。

ＬＨＲＨの合成または、視床下部と下垂体間の体液連絡をもたらす毛細管網への ＬＢＲＨの移送に係わる神経経路の崩壊または破壊によってゴナドトロピンの合 成および放出の減少並びに不妊症がもたらされる（　ＫａｌｒａおよびＫａｌｒ ａ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　Ｒｅｖｉｅｗｓ、　４．３１１．１９８３）。

同様に、ＬＨＲＨ−下垂体相互作用の低下はＬＨＨの長時間作用性競合的拮抗剤 の投与によって誘導することができる。これらの合成ペプチドは下垂体Ｌｌ（Ｒ Ｅレセプターに結合するが、レセプター後細胞内活性は刺激しない。上記ペプチ ドは、タンパク質分解作用の不活性化に対する抵抗性によって異常に長時間レセ プターが占有されるため、Ｌ）１１？ｔｌレセプター数の制御低下によってＬＩ ’ｌＲＩ＋に対する下垂体の非感受性状態を誘導する。Ｌｌ（ＲＨ拮抗剤による 薬理学的な下垂体刺激低下はゴナドトロピンの放出低下および不妊症をもたらす （Ｌａｂｒｉｅ等［Ｗ］、ＬＨＲ）Ｉおよびその類似体。　アムステルダム：　 　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓＳ１９８４ ）。

ＬＥＲ［＋＝下垂体相互作用の破壊に使用されるもう１つの方法はＬＢＲＨこ対 する抗体の産生であった。ＬＨＲＨ能動免疫１９７３）　、雌ヒツジ（Ｃ１ａｒ ｋｅ等、Ｊ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　　７＋！、　　３９．１９７ｇ）および アカゲザル（Ｃｈａｐｐｅｌ等、Ｂｉｏｌ、Ｒｅｐｒｏｄ、　２２．３３３．１ ９８０）を含む、多数の種で達成されている。全ての種で、ＬＨＲＨに対する能 動免疫法は生殖機能の損傷をもたらし、これはゴナドトロピンおよび性腺ステロ イドの血清濃度低下並びに配偶子形成の損傷が特徴である。動物におけるＬＢＲ Ｈの半減期が極端に短い（５分以下）ため、大部分の能動免疫法は、免疫応答を 誘導するためにウシ血清アルブミンのようなかなり大きい分子に抱合し且つフロ イントの完全アジュバント中に存在するＬＨＲＨを用いて行われている。視床下 部ＬＩＴＲ免疫中和法は、ゴナドトロピンおよび性腺ステロイドの循環値低下並 びに無排卵または無精子を特徴とする不妊状態を誘導するために定型的方法とし て使用することができる。

能動免疫法によるＬＢＲＨこ対する抗体産生は、痛みはないにしても、動物にと って不快なものである。この方法は不妊状態を誘導し、そして発情行動を減少さ せる（性腺ステロイドのｗＩ環低下のため）か、ベット避妊剤として使用するこ とはできないであろう。

米国ではネコやイヌの数の深刻な過剰があり、これは一般大衆、動物愛護協会、 獣医および保健省役人の重大関心事である。ネコの集団においては、繁殖速度は これら動物に住居が利用できるようになるほぼ２倍の速度であると報告されてい る（　５ｈｒｅｉｄｅｒおよびＶａｉｄａ、　Ｊ、　Ａｍ。

Ｙｅｔ、　Ａｓ５ｏｃ、、１６８　４８１．１９７５）。ネコ数の増大を中止さ せるために、繁殖力のあるネコの約８ε％の卵巣を除去すべきである（　Ｎａｓ ｇａｒおよび１ｌａｓｉｅｒ％Ａｊ　Ｊ、　￥ｅｔ、　Ｒｅｓ、、所に送られ、 その内約８０％が殺される。不要のネコやイヌの収容および屠殺費用は　１年当 たり１億２５００万ドルから５億ドルの範囲である（ＡＩｌ、　Ｈｕｍａｎｅ　 ５ｏｃｉｅｔｙ：　Ｐｒｏｃｅｅｄ−ｉｎｇｓ　ｏｎ　Ｅｃｏｌｏｇｙ　ｏｒ　 ５ｕｒｐｌｕｓ　Ｃａｔ　ａｎｄ　Ｄｏｇ　Ｐｉｏｂｌｅｍ）。

現在、イヌおよびネコの集団での望まれない妊娠の問題に対する唯一の解決は完 全な拘束および外科的去勢である。どちらの方法も出産制限として有効でないと 考えられる。拘束は発情に関連した行動問題を減少させず、そして去勢診療所は 動物数過剰問題を緩和する程十分な動物数には及んでいない。外科手術、麻酔、 抗生物質および手術後介護を行うための熟練した専門家の費用は多くのベット所 有者の財力を超えている。

妊娠制限の効果的で、安全で、利用し易くそして回復可能な手段を提供する組換 え体融合タンパク質またはワクチンを提供することか本願発明の目的である。投 与の容易なワクチンは外科的不妊状態に取って替わり、イヌ、ネコおよび他の動 物に効果的な避妊を提供するように思われる。

妊娠した雌ウシは典型的には、発育する胎児に多くの栄養が必要であるので、飼 料から肉への魅力ある転換を示さない。その結果、飼育項生は一般的には、妊娠 していることがわかっていないかまたは確認されていない雌ウシに支出する金顕 はかなり少ない、成る割合の雌ウシが飼育場で妊娠し、胎児が浪費を示す。かく して、積み出しの６〜１０ケ月前に不妊状機を誘導する方法は、成長性のある、 価値ある製品であると考えられる。　ウシが「妊娠していないＪと農場主が保証 出来る場合には、彼はその動物により高い値段を要求できるであろう。

それ故、飼育場の未経産雌ウシの排卵周期の阻害を生じさせる注入可能な組換え 体製品を提供することがもう１つの目的である。

ヒトのホルモンが介在した組ｌａｉ！Ｊ形成に関する例は多数ある。男性では、 前立腺癌（ＢＰＨ）が増殖継続を前立腺テストステロンに依存していることは良 く知られている。精巣ステロイド分泌を阻止するためにゴナドトロピンの血清値 を減少させ、その結果過形成組織の退化を誘導することは有益であろう。長期に 作用するＬＨＲＨ拮抗剤が前立腺過形成の治療に使用できることが最近報告され ている（　ＰｅｔｅｒｓおよびＷａｌｓｈＳＮｅｗ　　Ｅｎｇｌａｎｄ　　Ｊｏ ｕｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ　３１７−１５９９．１９８７）。　この治療の作 用メカニズムは、下垂体ＬＨＲＨレセプターの調節低下によるＬＨおよびＦＳ） ！分泌の阻害である。　その結果、テストステロン産生の低下を生じさせるゴナ ドトロピン分泌の阻害がもたらされる。血清テストステロンの減少は前立腺過形 成の退行をもたらす。しかし乍ら、ＬＩＩＲＨ拮抗剤の注入により誘導されるＬ ＥＩ分泌阻害には長時間が必要であり、それ故、反復して投与する必要があると 著者は述べている。

ゴナドトロピン分泌を阻害するため、即ち、内因性ＬＨＲＨの免疫無効化のため にＬＨＲ■拮抗剤の複数回の注入を避けることが本願発明の更にもう１つの目的 である。

浄書（白参に変更なし）　　　　　　−実質的に非抗原性ペプチドを、好ましく はフロイントの完全アジュバントのようなアジュバントを使用することを必要と しないで、高度に免疫原性にする方法を提供することが本願発明の更にもう１つ の目的である。

本ｌ更公！旌 本願発明の原理および目的に従って、潜在的な免疫原として使用可能な融合体タ ンパク質を創製する方法が提供される。理想的には、本願発明の上記方法はｃＤ ＮＡ　（複数）を−緒に融合し、そして独特な融合タンパク質を産生させるため それらを真核細胞発現ベクター中にいれる合タンパク質の大部分は非常に抗原性 であり且つ潜在的な免疫原である。これらは実質的に親水性でなければならない 、このような免疫原の良好な例はＢ型肝炎表面抗原のような被覆タンパク質であ る。黄体形成ホルモン放出ホルモン分子のような、抗体を生じさせることが望ま れる問題のペプチドをコードするオリゴヌクレオチドを１つまたはそれ以上のタ ンパク質領域、好ましくは最も親水性の高い１つまたはそれ以上の領域に入れる 。得られたタンパク質、最も好ましくはＬＨＲ）ｌ−）ＩＢｓＡｇ融合タンパク 質を治療的に有効な濃度で注入すると全分子に対する抗体が発生する。これら抗 体の１部は問題のペプチドに対して向けられる。最も好ましくは、ペプチドがＬ ＨＲ）ｌであるとき、ＬＨＲＨに対する十分な抗体価がもたらされ、それによっ て視床下部−下垂体連絡が妨げられそして不妊状態が誘導される。この免疫原は また動物の抗−妊娠ワクチンおよび良性の前立腺肥大の治療を含む、種々の商業 的または治療的環境でも有利に用いることができる。

本願発明の融合タンパク質は、アジュバントまたは多数回の注入の使用（これら は共に対象が良好に耐えることができない）の必要性がなくなる程、十分に免疫 原性である。

図１１づＩＬ翌翌３ 図１は、［ｆＢｓ八８へンパク質の露出親水性領域内へのゴナドトロピン放出ホ ルモン配列の挿入を示す。上部はｎＢｓＡｇタンパク質の略図であり、　その際 、ＬＦＩＲＨデカペプチドを有する部位が点描されている。その下にはＢＢｓＡ ｇをコードするｃＤＮＡに沿ってＪＶａ　１１部位があり、その際、ＬＦＩＲＢ のｃＤＮＡが理想的に挿入されている。下の図は被覆タンパク質配列間に挿入さ れたＬＨＲＨを有するウィルス被覆粒子を示す。

図２は、ＢＢｓＡｇのＡＶａ　ｎ部位（図１参照）に挿入される合成りＮＡリン カ−を示す。このリンカ−はＨＢｓＡＨのアミノ酸１１９（グリシン）の後のオ リゴヌクレオチド配列用に　フレキシブルな挿入部位を提供する。　これによっ て、ｆｌＢｓＡｇ配列を元に戻す舶に　プロリン残基（１２０位）に３個のアミ ノ酸が挿入される。好ましくは、ＬＨＲＩＩＩフラグメントはリンカ−の５−ａ ｌおよび適当な読み取りフレームが保持される（図３参照）。

図３は、ＢＢｓＡｇ　ｃＤＮＡ内の合成リンカ−に挿入されるＬＨＲＩＩペプチ ドのヌクレオチド配列を示す。適当な読み取りフレームを保持するために、挿入 されたＬＨＲＩＩペプチドのすぐ後にグリシン（ＧＧＧ）を付加し適当な読み取 りフレームを保持するオリゴヌクレオチドの３“末端に２個のヌクレオチド（Ｇ Ｇ）が付加されている。

合成りＮＡリンカ−（図２）に挿入されたとき、適当な読み取りフレームを保持 するために３゛末端に付加されたＧＯＩご注意すること。本発明者は、切断リン カ−に適切に挿入するためにも１工Ｈのオーバーハングも付加した。

図４は、マウスのメタロチオネインプロモーター（ＣＬ２８ベクター）にＨＢｓ Ａｇ　−ＬＨＲＨ融合体を挿入しそしてその後ＢＰＶゲノムを挿入するために使 用される概略図である。　プラスミドＢＰＶ−ＢＬはＣ１２７細胞を形質転換す るために好都合に使用される。

本発明の詳細な説明および最良の実施態様Ｂ型肝炎表面抗原をコードする遺伝子 は既にクローン化されそして発現されている（　Ｈｓｉｕｎｇ等、Ｊ、　１ｌｏ １．　ＡＩ）ｐｌ。

Ｇｅｎ、、２．４９７．１９８４）　、この遺伝子は我々哺乳動物の発現系で有 利に発現される。被覆タンパク質をコードするＤＮＡはマウスのメタロチオネイ ン遺伝子、即ち転写開始部位から２．３個の塩基対中にクローニング化された。

挿入された遺伝子（被覆タンパク質用の）の哺乳動物細胞内での発現を調節する 全てのシグナルはマウス遺伝子から供給され、該遺伝子のコード化配列およびポ リＡ付加シグナルは挿入物の下流に存在する。表面抗原タンパク質は培地中に分 泌され、その際、該タンパク質は粒子の形態で見い出される。組換え体産生物（ 即ち、核物質を有していない表面抗原）はモルモットで抗原性の高いことが示さ れている。

ＤＮＡ配列から、肝炎抗原のアミノ酸配列が決定される。

この配列は、最も親水性の特性を有すると思われる分子の領域について分析した 。該領域（図１のＡｖａ　Ｕで同定される）に、独特のクローニング部位を提供 する短いオリゴヌクレオチド配列（図２）をクローニングした。この領域に、特 定のタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列を、固有の違す、１部位かまたはＢｇ ｌ工■部位（図２参照）のどちらかでのプラント末端連結によって挿入すること ができる。

視床下部遺伝子の公表された構造（Ｓｅｅｂｕｒｇおよび＾ｄｅｌ＊ａｎ、　　 Ｎａｔｕｒｅ　３１１．６６６．１９８４：　　図３）を使用するが、上記のよ うに修正して、ＬＨＲＨをコードするオリゴヌクレオチドは、カラサーズ（Ｃａ ｒｕｔｈｅｒｓ）等（ＧｅｎｅｔｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　４．１〜１７． １９８２）が開発した固相合成法を使用してアプライドバイオシステムズ（Ａｐ ｐｌｉｅｄ　　Ｂｌｏ−５ｙｓｔｅｓｓ）　３８０−Ａ　ＤＮＡ自動合成器で合 成した。オリゴヌクレオチドは濃縮水酸化アンモニウムを使用して固体支持体か ら切り離した。精製は分離用ゲル電気泳動を使用して達成した。精製したオリゴ ヌクレオチドはポリヌクレオチドキナーゼであり、大きさおよび純度はゲル電気 泳動で分析した。

ＬＩＩＲＨオリゴヌクレオチドは　下記の方法でＳｍａｌおよびＢｇｌＩＩクロ ーニング部位に挿入した：　　ＬＨＲＨオリゴヌクレオチドは３°プラント末端 および５°ＣＴＡＧオーバーハングを有するように（図３に示されるように）合 成した。垣１およびジ１工■でＨＢｓＡｇ　ＤＮＡ　（合成挿入物を有する）を 消化した後、Ｌｌ’ｌＲＨＤＮＡを挿入した。得られた構造はＨＢｓＡｇ　−Ｌ ＨＲ）Ｉと命名した。　合成１１旧リンカ−を　ＨＢｇＡｇ　−ＬＨＲ）１ｃＤ ＮＡの各末端に付加し、　そして適当な配向でベクターＣＬ２ｇ／Ｂａｎ中に挿 入した。ディーンハーｖ　−（Ｄｅａｎ　Ｂａ５ｅｒ）博士（ＮＩＨの）から入 手したＣＬ２１１／Ｂａｇは、全メタロチオネイン遺伝子を含有する　３．８ｋ ｂｐのマウスＤＮＡフラグメントを有しており、細菌ベクターｐＢＲ３２２のＥ ｃｏＲ１部位に挿入された上流の制御エレメントを有している。ＣＬ２ｇ／Ｂａ ｇはｐＪＹＭＭＴ（Ｅ）の誘導体であって（Ｄｅａｎ　［１ａＩｌｅｒ等、Ｊ、 　Ｍｏｌ。

Ａｐｐｌ、　Ｇｅｎｅｔ、　１．　４．２７３〜２８８（１９８２）　）　、Ｓ Ｖ４０配列が除去されている以外はＰＪＹＭＭＴ（Ｅ）と同一である。マウス遺 伝子の転写開始領域の直後に位置する固有の醜±■部位挿入可能になる。ＨＢｇ Ａｇ　−ＬＨＲＨ融合遺伝子をＣＬ２ｇ／Ｂａｇに挿入しそして適当な制限パタ ーン（ネズミのプロモーターに関して）による配向をエンドヌクレアーゼで証明 した後、　ウシ乳頭腫ウィルス（ＢＰＶ）の全ゲノムは７．８ｋｂｐのＢａｇ旧 −３ａｌｌフラグメントとして挿入した。最終的な構造は、アガロースゲルおよ びポリアクリルアミドゲルの両方での診断制限酵素消化パターンの試験によって 証明された。本方法の図示は図４で提供する。

かくして、得られたＢ型肝炎表面タンパク質は該分子の親水性領域内にＬＨＲＩ Ｉ配列を含有していた。

融合ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨタンパク質を発現する細胞株を作成するために、精製 したＢＰｖ−ＨＢｓＡｇ−Ｌｌ（ＲＨｃＤＮＡ　１０８ｇを、担体としてサケ精 子ＤＮＡ　ＬＯａｇを含有する２５０ＩＩＩＭ　ＣａＣＬ溶液０．５ｍｌに加え た。この混合物を２８＋ｍＭ　ＮａＣｌ、５０℃Ｍ　ＥＥＰＥＳおよび１．５ｍ Ｍりん酸ナトリウムの０．５　ｍｌ中に吹き込んで加えた。室温で３０〜４０分 間置いて装ん酸カルシウムの沈澱物を形成させた。

形質転換の２４時間府に、　５×１０′１個のマウスＣ１２７細胞を１．Ｏｈｍ のベトリ皿に入れた。外来ＤＮＡを加える直前に、細胞に新鮮な培地を与えた（ ダルベツコの修正イーグル培地＋１０％のウシ胎児血清）。りん酸カルシウム沈 澱物１■Ｌを各皿（ｌｆｉｌ、）に加え、細胞は３７℃で６〜８時間時間インベ コベート。

培地を吸引器で吸い取り、そしてりん酸緩衝生理食塩液（ｐｌに７．０）中２０ ％のグリセロ−・・ル　５ｍｌを用いて室温で２分間置き換えた。細胞はりん酸 緩衝生理食塩液で洗浄し、ｆｏｗｌの培地を与えそして３７℃でインキュベート した。２０〜２４時間後、培地を交換し、細胞は３〜４日毎に再度加えた。

１４〜２１日後、形質転換した細胞の集まり（形態の変化が特徴である）を同定 し、モしてＴ−２５フラスコに移して株膨張を開始させた。細胞株から得た培地 はＨＢｓＡｇの存在およびＬＨＲＨ免疫活性を試験した。組織培地は低速遠心機 で澄明にし、モしてＨＢｓＡｇ粒子は４２．００Ｏｒｐｍ（２００，０００Ｘｇ ）で４時間沈澱させた。ベレットは少量のりん酸緩衝生理食塩液中に再懸濁させ 、そして出発物質および上澄液のＨＢｓＡｇ活性は、　クリニカルアッセイズイ ンコーボレーテッド（Ｃ１ｉｎｉｃａｌ　Ａｓ５ａｙＳ、　Ｉｎｃ、）から購入 した市販のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）で分析した。培地上澄液および再懸 濁ベレットのＬ！’ＩＲ）ｌ免疫活性は、アルネルアンタイボディーズインコー ボレーテッド（Ａｒｎｅｌ　Ａｎｔｉ−ｂｏｄｉｅｓ、　Ｉｎｃ、）から購入し たＬＨＲ［（抗血清を使用するラジオイムノアッセイで分析した。ヨード化用！ 、１１　ＲＨおよび参照調製物はシグマ　ファインケミカルズインコーボレーテ ッド（Ｓｉｇｍａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅ＋ｍｉｅａ１ｇ、　Ｉｎｃ、）から購入し そして不溶性のタンパク質Ａ（ベレット抗原抗体コンプレックスへの）はシグマ ファインケミカルズインコーポレーテッドから入手した。

これらの方法に続いて、融合タンパク質を発現する細胞株を作成し、そしてこれ は標準的スクリーニング法で容易に確認された。２．３ミリグラムの精製材料で は、雄ウサギまたは他の動物の不妊状態を誘導するのに適す−る投与量は滴定タ イプの方法で決定することができる。

例えば、血液試料採集と組み合わせてタンパク質０．５、ｌまたは５１１ｇを雄 ウサギに注入して血清ゴナドトロピン値および精巣ステロイド値並びに抗ＬＨＲ Ｈ抗体価を決定することができる。同様に、適当な追加免疫間隔も決定すること ができる。

上記から、当該技術分野の熟練者は、本願発明の精神または範囲のいずれかから 離れることなく、融合遺伝子および遺伝子産生物に免疫学的に活性が低下しない 抗原性遺伝子またはタンパク質遺伝子の選択のような多くの修正が可能であるこ とを容易に決定できよう。例えば、他の親水性の被覆タンパク質またはＢ型肝炎 コア抗原のような、ＨＢｓＡｇ以外の免疫原性の高いタンパク質を使用すること ができる。更に、当該技術分野の熟練者は、ＬＨＲＨ以外のペプチドが使用でき ることを理解しよう。免疫系に抗原性エピトープを与えるために、オーストラリ ア特許６９７９２／１７で同様な方法が報告されているが、ウィルス、細菌およ び原生動物エピトープのような抗原性エピトープが常に使用されている。先行技 術のハプテン化技術の不利益を有することなく、非抗原性ペプチドに対する抗体 の産生誘導を可能にするために、このような融合タンパク質中で非抗原性ペプチ ドを使用することはこれまで示唆されていない。

実質的に非抗原性ペプチドの例は、種によって構造が実質的に異なっていないペ プチドまたは、異なる動物に注入するとき、生じる抗体価が実質的に大きくなら ない任意の他のペプチドまたはタンパク質である。ＬＨＲＨの他に、成長ホルモ ン放出ホルモン、副腎皮質ホルモン、副甲状腺ホルモン、インヒビンおよびゴナ ドトロピンのサブユニットを挙げることができる。このようなペプチドの一部ま たは僅かに修正したものも使用することができる。

ＩＧ　Ｉ Ｂａｍ　　Ａｖａ　　Ａｖａ　　Ｘｂａ　　Ａｖａ　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　ＢａｍＢａｍ　　　Ａｖａ　　Ａｖａ　　　Ｘｂａ　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＢａｍＩＧ　２ Ｓｍａｌ　　　Ｂｇｌｌｌ　　　　　　Ｂａ１１ＦＩＧ　３ ＦＩＧ　４ 手続補正書（斌） 平成　３年　２月２１日

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．１つのプロモーターで制御される２つの遺伝子の発現で得られる組換え体融 合タンパク質であって、その際、第１の遺伝子は高い抗原性で高い親水性のタン パク質の産生をコードしており、そして第２の遺伝子は、それ単独では実質的に 抗原性でないペプチドまたはこのようなペプチドの１部をコードしている。
2. ２．融合タンパク質が高度に抗原性でありそして上記の実質的に非抗原性ペプチ ドに対する抗体を有する抗体を産生させる請求の範囲第１項に記載の融合タンパ ク質。
3. ３．上記ペプチドがホルモンからなりそして産生された抗体が内在的に産生され る同じホルモンを免疫無効化することができる請求の範囲第２項に記載の融合タ ンパク質。
4. ４．上記の高い抗原性で高い親水性のタンパク質が肝炎表面抗原である請求の範 囲第１項に記載の融合タンパク質。
5. ５．第２の遺伝子が、内在的に産生されるホルモンの活性と実質的に同じホルモ ン活性を有するタンパク質をコードしている請求の範囲第４項に記載の融合タン パク質。
6. ６．上記第２の遺伝子が黄体形成ホルモン放出ホルモンをコードしている請求の 範囲第５項に記載の融合タンパク質。
7. ７．上記第２の遺伝子が上記第１の遺伝子の１つまたはそれ以上の領域に挿入さ れている請求の範囲第１項に記載の融合タンパク質であって、その際、上記領域 の各々は上記タンパク質の高親水性領域をコードしている。
8. ８．上記２つの遺伝子、転写開始領域、プロモーターおよび発現ベクターからな る請求の範囲第１項に記載の融合タンパク質をコードするＤＮＡであって、その 際該ＤＮＡは哺乳動物の細胞を形質転換して融合タンパク質を発現させることが できる。
9. ９．マウスのメタロチオネインプロモーターとウシ乳頭種ウイルスゲノムとが適 当な配列で融合したＨＢｓＡｇ−ＬＨＲＨタンパク質および読み取りフレームを コードしているＤＮＡからなる請求の範囲第８項に記載のＤＮＡであって、これ にようて黄体形成ホルモン放出ホルモンタンパク質が抗原性特性を有して発現さ れる。
10. １０．上記第２の遺伝子が上記第１の遺伝子の１つまたはそれ以上の領域に挿入 されている請求の範囲第８項に記載のＤＮＡであって、その際上記領域の各々は 上記タンパク質の高親水性領域をコードしている。