JPH03500414A

JPH03500414A - ボンベシンレセプター用の不可逆的ペプチドリガンド

Info

Publication number: JPH03500414A
Application number: JP1507759A
Authority: JP
Inventors: デ・キヤステイグリオーネ，ロベルト; ギヤランテイーノ，マウロ; コラデイ，フアビオ; ゴズイニイ、ルイギア; シオメイ、マリナ; モリナリ、イザベラ
Original assignee: フアルミタリア・カルロ・エルバ・エツセ・エルレ・エルレ
Priority date: 1988-07-21
Filing date: 1989-07-19
Publication date: 1991-01-31
Also published as: PT91215A; DK71990D0; DE68909584D1; DK71990A; HUT54711A; WO1990001037A1; FI901369A0; NZ229957A; HU894456D0; PT91215B; EP0380623B1; AU619573B2; GR1000608B; GR890100414A; EP0380623A1; HU205771B; AU3878889A; CA1331074C; ES2017028A6; IL90997A0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ボンベシンレセプター　の１０　ペプ　トリガント■ 本発明は新規生物学的活性ペプチド、該ペプチドの医薬として許容し得る塩、該ペプチドの製造方法及び治療剤としての使用に関する。

本明細書内の記号及び略語は通常ペプチド化学（Ｅｕｒ、Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅ＋＊、（１９８４）　１３８．９−３７参照）で使用されているものである。従って、３文字のアミノ酸記号はＬ配置のキラルアミノ酸を示している。Ｄ−アミノ酸は小文字により、例えばａｌｔ　＝　Ｄ−＾１ａと表す、使用する他の記号及び略語は＾＾、アミノ酸；＾ｃＯＥｔ、酢酸エチル；＾ｅＯＨ、酢酸；Ｂ２１．ベンジル；ＢＢＳ、ボンベシン；Ｂｏｃ、ｔ−ブチルオキシカルボニル；　ＢｕＯＨ，ブチルアルコール、ＣＣＤ、向流分配；　ＤＣＣ，Ｎ、Ｎ ’−ジシクロへキシルカルボジイミドＨｄｅｃ、、分解、　ＤＭＡＰ、４−ジメチルアミノピリジン、　ＤＭＦ、ジメチルホルムアミド；　Ｄｎｐ、２．４−ジニトロフェニル、ＥＣＣ，エチルクロロカーボネー）　；　ＥｔｚＯ，ジエチルエーテル、　Ｇｌｐ、Ｌ−ピログルタミン酸；　ｈ−ＧＲＰ（又はｐ−ＧＲＰ）　。

ヒト（又はブタ）のガストリン放出ペプチド、　ＨＣＩ／＾ｃｏｎ、無水酢酸中の乾燥ＦＩＣＩ　；　ＨｏＢｔ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール；　ｉ、ｃ、ｖ、、脳室内の（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）　；　ＭｅＯＨ。

メチルアルコール；Ｉｌ、ｐ、融点；　＋ｎＭｅｌ；論−ビス（２−り四ロエチル）アミノ−し−フェニルアラニン、　ｎ、ｄ、、測定されず；ＮＭＭ。

Ｎ−メチルモルホリン；　ｐＨｅｌ＝ｐ−ビス（２−クロロエチル）アミノ−し −フェニルアラニン；　ＨＰＬＣ，高速液体クロマトグラフィー　；　ＯＳｕ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、ＴＦ＾、トリフルオロ酢Ｍ　、　ＴＨＦ、テトラヒドロフラン、ＴＬＣ，薄層クロマトグラフィー；　Ｔｏｓ、ｐ−）ルエンスルホニル；　ＴｓＯＨ，ｐ−）ルエンスルホン酸；ｚ、ベンジルオキシカルボニルである。

本発明は、より詳細にはｋＲＰ系のペプチドに属する、ヒト腫瘍の治療に有効なボンベシン拮抗活性を有するペプチドに関する。

過去に他のボンベシンアンタゴニストが製造されたが、それらのペプチドはＢＢＳレセプターに対して適度な親和力を示していたく＾、　Ｃｏｗａｎ（１９８８）　ＴＩＰＳ、９．１−３）。

本発明は、式（１）：％式％（１）［式中、＾＝ｌ、Ｂｏｅ、＾ＣＣ＝−（原子価結合）、Ｃｌｙ、Ｌｅｕ−Ｃｌｙ、　Ｅ−Ｌｅｕ−［；Ｉｙ、Ｃ１ｎ−Ｅ　−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｅ、Ｅ−ＧｌｙＤ＝−１＾ｓｎ、ＴｈｒＥ；＾ｒｇ（＾）、ａｒｇ（＾）、Ｌｙｓ（＾）、Ｉｙｓ（＾）　、　Ｏｒｎ　（＾）、ｏｒｎ（＾）Ｘ：Ｇｌｙ、ａｌｔｙ＝−５Ｈｉｓ（Ｒ，）、ｈｉｓ（Ｒ＋）、Ｐｈｅ、　ｐｈｅ、　Ｓｅｒ、　ｓｅｒ、＾ｌａ、　ａｉｍＴ＝−２Ｌｅｕ、Ｉｅｕ＋Ｐｈｅ＋ｐｈｅＮ＝Ｏ）ｌ、　ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＨ３、ＮＨ（ＣＨｚ）ｓｃａｎｓ、Ｎｅｔ−Ｒ２、Ｌｅｕ−Ｒ２，１１ｅ−Ｒｘ、Ｎ１ｅ−Ｒ２Ｒ，＝Ｈ，Ｔｏｓ、　Ｄｎｐ、　ＢｚｌＲ２＝ＮＩＩ、、ＯＦｌ、ＯＭｅ、　ＮＨ−ＮＨ２であるコで示されるペプチドに関する。

Ｂ及びＣは逆転し得る（Ｂは３位、Ｃは２位）、この場合＾：ＨならばＧｌｎ− ＾ｒｇ−Ｌｅｕ−にＩｙはｃａｐ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙになり得る。

医薬上許容し得る酸とこれらのペプチドとの塩は本発明有機酸、例えば硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、ケイ皮酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、安息香酸、サリチル酸、グルコン酸、アスコルビン酸、及び関連する酸から誘導され得る。

ボンベシン（ＢＢＳ）は、元々蛙の皮膚から分離された式Ｃ１ｐ−Ｇｌｎ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｃ１ｙ−＾ｓｎ−にＩｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｃｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ，で示されるテトラデカペプチドである。生物学的活性は分子のＣ末端部分に備わっている。　ＢＢＳ（６−１４）ノナペプチドは親化合物と同様の活性を有する。ヒトのボンベシン等個物はガストリン放出ペプチド（ｈ−［；ＲＰ）として知られている２７アミノ酸ペプチドである。ボンベシン及びボンベシン様ペプチドは、ヒト小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ＩｕＢｅａｒｃｉｎｏ＋ｍａ）　（ＳＣＬＣ）に対するオートクライン（ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）増殖促進作用（Ｆ、　Ｃｕｔｔｉｔｔａ等（１９８５）Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖｅｙ／、４，７０７〜７２７）、ヒト前立腺癌細胞のオートクライン及び／又はバラクライン（ｐａｒａｅｒｉｎｅ）刺激による増殖（Ｍ、Ｂｏｌｏｇｎａ等、Ｃａｎｃｅｒ。

印刷中）並びにＥＧＦレセプターの調節（１、Ｚａｃｈａｒｙ及びＥ。

Ｒｏｚｅｎｇｕｒｔ（１９８５）Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖｅｙｓ、４，７２９〜７６５）を含む、多くの生物学的活性を示す（Ｊ、ＨＪａｌｓｈ（１９８３）著 “ＢｒａｉｎＰｅｐｔｉｄｅｓ”　、Ｄ、Ｔ、Ｋｒｉｅｇｅｒ、ＭＪ、Ｂｒｏｗｎｓｔｅｉｎ及びＪ、Ｂ、Ｍａｒｔｉｎ（編者）、Ｈｉｌｅｙ　Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌ、、９４１〜９６０ページ）。

この場合、ボンベシンアンタゴニストはレセプター用天然リガンドと競合して、細胞の異常増殖につながる事象のカスケードの誘発部分を阻害するか又は変化させる。

式■のアルキル化ボンベシン類似体はボンベシンレセプターアンタゴニストであり、従ってＧａＰ系のペプチドによって直接又は他の増殖因子と共同して腫瘍の増殖及び進行が調節されているヒト腫瘍の治療に応用される。

更には、ＧＲＰ様ペプチドの過剰分泌による、前記疾病と関連した臨床症状の処置にこれらのアルキル化類似体を使用することができる。

本発明の化合物は、通常の投与経路により、例えば静脈注射若しくは注入、又は筋肉、皮下、洞内及び鼻腔内投与のような非経口経路により投与され得る。

用量は患者の年令、体重及び状態、並びに投与経路に依る。

マウスの”ｉｎ　ｖｉｔｒｏ”及び“ｉｎ　ｖｉｖｏ”データに基づいて、ヒトの治療用量は１日１回〜６回の投与で１０ｎｇ／ｋｇ〜Ｌｏｎｇ／に、であると推定し得る。

本発明は更に、活性物質としての式（Ｉ）の化合物舎医薬として許容し得る１種又は数種の賦形剤と組み合わせて含んでいる医薬組成物を提供する。

本発明の医薬組成物は通常従来の方法に従って製造し、医薬として適切な形態で投与する。

例えば、静脈注射又は注入用溶液は担体として例えば無灰菌水を含み得るか、又好ましくは無菌の等張食塩水溶真の形態であり得る。

筋肉注射用懸濁液又は溶液は、活性化合物と共に医薬として許容し得る担体、例えば無菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、プロピレングリコールのようなグリコール類、及び所望により適量の塩酸リドカインを含み得る。

本発明は更に神経内分泌系の腫瘍、例えば小細胞肺癌及び前立腺癌、又は治療が必要な患者に見られる前記疾病に関連する臨床上の症状の治療方法に関し、該治療方法は本発明の組成物を患者に投与することからなる。

健本発明のペプチドは古典的な溶液法により合成し得る。

この合成は主に保護されたアミノ酸又はペプチドの適切な連続的縮合からなる。

得られたペプチドが所望のアミノ酸残基配列を有するように縮合を実施する。

ペプチド化学で公知の方法に基づいて縮合し得るアミノ酸及びペプチドは、酸若しくはアルカリ処理又は水素化分解により除去され得る適切な保護基により保護される、ペプチド結合形成に関与しないアミン基及びカルボキシル基を有する。

アミノ基を保護するためには例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、トリチル、ホルミル、トリフルオロアセチル、０−ニトロフェニルスルフェニル、４−メチルオキシベンジルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、３，５−ジメトキシ−α−α′−ジメチルベンジルオキシカルボニル、又はメチルスルホニルエトキシカルボニルのような保護基を使用し得る。

カルボキシル基を保護するためには例えばメチル、エチル、ｔ−ブチル、ベンジル、ｐ−二トロベンジル５フルオロレニルメチル、アミド、ヒドラジド、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド又はベンジルオキシカルボニルヒドラジドのような保護基を使用し得る。

ヒドロキシアミノ酸のヒドロキシ官能基及びヒスチジンのイミノ官能基を（合成中常に又は幾つかの段階でのみ）３１切な保護基により保護してもよいし、保護しなくてもよい。

ヒドロキシ官能基を保護するためには例えばｔ−ブチル、ベンジル、アセチルのような保護基を使用し得る。イミダゾールイミノ官能基を保護するためには例えば２，４−ジニトロフェニル、トシル、ベンジルのような基を使用し得る。ペプチド化学で公知の方法に基づいて脱保護反応を実施する。

ペプチド結合を形成するための１分子のアミノ基と他の分子のカルボキシル基との縮合は、活性化アシル誘導体、例えば混合酸無水物、アジド若しくは活性化エステルを介して行われ得るか、又はジシクロへキシルカルボジイミドのような縮合剤のみの存在下で、若しくは該縮合剤とトヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのようなラセミ化防止剤との存在下で、若しくは該縮合剤と４−ジメチルアミノ−ピリジンのような活性化剤との存在下で、遊離アミノ基と遊離カルボキシル基とを直接縮合させて行われ得る。溶媒、例えばジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ピリジン、アセトニトリル、テトラヒドロフランスはＮ−メチル−２−ピロリドン中で縮合を実施してもよい。

反応温度は一り０℃〜室温であり得る。反応時間は一般に１〜１２０時間である。

合成方法、保護基及び縮合剤はラセミ化の危険を避けるように選択する。

以下の展開系：系Ａ：酢酸エチル／ベンゼン／酢酸／水＝　５００１５００／１００１５０容量（上相）系Ｂ：酢酸エチル／ベンゼン／酢酸／水＝　５００１５００／Ｚｏｏ／７５容量（上相）系Ｃ：ｎ−ブタノール／酢酸／水＝　Ｂｏｏ／１５０／１５０容量系Ｄ：クロロホルム／メタノール／ＮＨ，０Ｈ３０％＝　４８８／３３８／１５０容量系Ｅ：クロロホルム／メタノール＝　９０７１０容量系Ｆ：トルエン／酢酸エチル／酢酸／水＝　１００／１００／２０／１０容量を使用する、あらかじめ被覆された、層厚さが０．２５ｍｍで長さが２０ｃｍのシリカゲル６０Ｆ　ｚｓ−プレート（Ｍｅｒｅｋ）の上でＲｔ値を測定する。

１８℃〜２５℃の温度でＴＬＣ分析を実施する。従ってＲ２値は±５％で変動し得る。

２１０ｎｍで作動する紫外線検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｅｋａｒｄ１０８４Ｂ装置を使用して、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を実施した。４　ｘ　２５０１のＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ　１８５μのカラム上でペプチドを分離する。以下の溶媒を使用する。

Ａ）３％Ｈ３Ｐ０．／ＣＨ３ＣＮ（容量比は９：１）でｐＨ３，５に調整した０、０２８ＫＨ２ＰＯ，。

Ｂ）３％Ｈ，ＰＯ，／Ｃ１１２ＣＮ（容量比は３ニア）でｐＨ３，５に調整した０、０２８ＫＨ２ＰＯ，。

６０％〜９０％Ｂの直線勾配（ｌｉｎｅａｒ　ｇｒａｄｉｅｎｔ）で２０分間（系Ａ）又は３０〜７０％Ｂの直線勾配で１５分間（系Ｂ）、次いで１１７分の流量で平行移動で１５分間と溶離をプログラムする。

ペプチドは保持時間（ＲＴ）により特徴付けられる。酸加水分解物についてアミノ酸分析を実施した（６Ｈのｌ１Ｃ１＋０．１％フェノールでは１１０℃で２２時間、又は３Ｎメルカプトエタンスルホン酸では１００℃で１６時間、共にＮ２の存在下）、天然アミノ酸残基のみを測定した０通常の加水分解条件下での部分分解のために、スルホン酸を含む加水分解物でのみＴｒｐを測定した。

二立ヱ本発明のボンベシンレセプター用化合物の結合親和力をマウス５ｗ１ｓｓ　３Ｔ３の繊維芽細胞で測定した（１．　Ｚａｃｈａｒｙ及びＥ、Ｒｏｚｅｒ＋ｇｕｒｔ（１９８５）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、ｓｃｉ、ＵＳＡ、ξ：２．７６１６−７６２０）　（表１）。

無血清培地内に保持した静止期（ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ）及び融合性のＳｗｊｓｓ　３Ｔ３細胞で有糸分裂生起への作用を測定した（＾、Ｎ。

Ｃｏ　ｒ　ｐ　ｓ等（１９８５）Ｂｉｏｅｈｅｍ　Ｊ、　２３１，７８１−７８５）、第１組の実験では、類似体を単独又はボンベシンと組み合わせて与える。

第２組の実験では、細胞をアルキル化ペプチドであらがしめ処理し、洗浄し、３７℃で２４時間放置し、次いでボンベシンを投与して誘発試験を行う（ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ）、いずれの場合も［Ｈリチミジンの取り込みとしてＤＮ八へ成を評価した（表２）。

ボンベシンレセプター複合体と会合した１１５　ＫＤタンパク質（ｐＨ５）をリン酸化するタンパク質−チロジンキナーゼ活性として、ボンベシン及びその類似体のマイトジェン効果も評価した（Ｄ、Ｃ１ｒｉｌｌｏ等（１９８６）Ｍｏ１．Ｃｅ１１．Ｂｉｏ１４，４８４１−４６４９）　（表３）。

更には、０．１〜５６μＨの範囲のこれらのペプチドに晒すと、（ＮＣＩ−８３４５、ＮＣｌ−Ｎ５９２．ＮＣｌ−１１２８のような）ＳＣＬＣ細胞系並びに（ＤＵ１４５及びＰＣ３のような）前立腺癌細胞系の増殖が相当抑制された。

これらのペプチドをヌードマウスにＩＯＢ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量非経口投与すると、前記の移植したヒト５ＣＬＣ細胞系及本利び前立腺癌細胞系の増殖が相当抑制された。〆請作用及び中枢作用に対する評価はそれぞれ、膀胱収縮として“１ｎｖｉｔｒｏ”で（Ｍ、Ｂｒｏｃｃａｒｄｏ等、　＜１９７５）Ｂｒ　、Ｊ　、Ｐｈａｒｍａｃ　、　、５５．２２１−２２７）及びブルーミング（ｇｒｏｏｍ　ｉｎｇ）挙動としてｉ、ｃ、ｖ、投与により ’ｉｎ　ｖｉｖｏ”で（＾、Ｃｏｗａｎ等、（１９８５）Ｌｉｆｅ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、３７，１３５−１４５）、共にボンベシンの存在下及び不在下においてラットで行った。

１１ユＢｏｃ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖａｌに１ｙ−ＯＲ（Ｉ［Ｉ　）ｌＨユ　旺虹戸ｍｌＵユ０．６８４ｇ＜１．８５＋＋＋ｍｏｌ）のＨ−ｐＭｅｌ−ＯＥｔ、ＨＣＩ（Ｆ、Ｂｅｒｇｅｌ及びＪ、＾。

５ｔｏｃｋ（１９５４）Ｊ　、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｅ、２４０９−２４１７）と　、　０．４８５ｇ（２，２ｍｍｏｌ）の（Ｂｏａ）２０とを、４０ｍ１の水及び１３ｍ１のｔ−ＢｕＯＨに溶解した。　ＩＮのＮａＯＨで溶液をｐＨ１０に調整し、１５分撹拌し、次いで４０ｍ１の水と１１０ｍｆのＭｅＯＨとを加えた。　Ｉ　ＮａＯＨでｐＨを１３．５にした。

反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いでｌＮＨＣｌでｐＦＩ８．５にし、真空下に濃縮した。水溶液をｎ−ヘキサン（４×３０＠１）で洗浄し、次いで一５℃ に冷却し、撹拌しながらｌＮｌＣｌでｐＨ２と酸性にし、冷却した＾ｃＯＥｔ（４ｘ３０ｍｌ）で抽出した。有機層をプールし、ＮａＣＩの飽和溶液で洗浄して中性にし、無水Ｎ１１２ＳＯ−で乾燥し、−過し、真空蒸発させた。Ｃ［１，Ｃ１，／＾ｃＯＨ（９９：１）の混合物に残留物を溶解し、同一の溶媒混合物で溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。　０．７．（収率７７．８％）の生成物■を油状物として得た（Ｒ，Ａｏ、７０）　。

［２Ｂｏａ−Ｍｅｌ［；Ｉｎ−Ｔｒ−＾１ａ−Ｖａｔ−ＣＩ　−０Ｂｚ１０．６ｇのＢｏｅ−ｐＭｅｌ−ＯＨ（１）（１，４８＋１ｎｏｌ）を１０ｍＡ’の無水ＴＨＦに溶解した。溶液を一２０℃に冷却し、０．１６ｍ１（１，４８ｍ＋＊ｏｌ）のＮＭＭと０．１５ｍ１’（１，４８＋ｓｍｏｌ）のＥＣＣとを続けて加えた。この温度で２分間撹拌した後、１．０２ｇ（１，４８ｍｍｏｌ）のＨ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＢｚ１．）ＩＣＩ（本出願人の英国特許第８８０８７６８．９号）及び０．１６＋１（０，４８ｍ＋＊ｏｌ）のＮＭＭを含む１０ｍ１の冷却した無水ＤＭＦ溶液を加えた０反応混合物を一１０℃〜− １５℃で２時間撹拌し、次いで一過して、真空蒸発させた。

２０−１のＤＭＦに残留物を溶解し、４０ｗ＋１の１０％クエン酸溶液中に５℃ で滴下した。混合物を１０℃未満の温度で１時間撹拌し、次いで枦遇して、水で洗浄して中性にした。　１．４ｇ（収率９１．５％）の生成物■を得た（Ｒ，０，４８）　。

改ｌユＢｏａ−Ｍｅｔ−Ｇｌｎ−Ｔｒ−＾１ｔ−ＶａｌにＩ　−０ｔ１０．４４ｇの１０％Ｐｄ／Ｃ２及び１．２＋＊１のＨＣＯＯＨと、３．３ａｌのＮＭＭと、１００ｍ１のＭｅＯＨとから製造するあらかじめ暖めた２４ｍ１の溶液を、１．２ｇ（１，１６ｍｍｏ１）のＢｏａ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−ＶａｉにＩｙ−ＯＢｚｌ（ＩＩ）を含む２４ｍｆの無水ＤＭＦ溶液に加えた０反応混合物を４０℃で１５分間撹拌し、次いで室温に冷却し、枦遇して、真空蒸発させた。残留物をＤＭＦに溶解し、＾ｅＯＥｔで沈澱させると、１．１ｇの粗生成物が得られた。この粗生成物を向流分配により溶媒系（水／ＤＭＦ／ｎ−ＢｕＯＨ／＾ｅＯＥｔ　＝　４０／３／２０／８０）中で精製した。純粋な生成物を含む両分をプールして、真空蒸発させた。残留物をＤＭＦ　、ＭｅＯ）Ｉ及びＡｅＯＥｔ中で粉末化し、０．６８０ｇ（収率６３％）の生成物１［１：　Ｒ，ＤＯ，５４；　ＲＴＡ８．４　；静比；Ｇｌｕ　Ｏ，９３（１）、にＩＦ　０．９９（１）、＾ｌａ　０．９９（１）、Ｖａｌ　１（Ｔｒｐ及びｐｉｅ　Ｉはｎ、ｄ、）を得た。

Ｋ見ＩＢｏｃ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨｚ（ＩＶ）０．３３０ｇ（０，３５＋ｕａｏ１）のＢｏｃ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａ）−Ｇｌｙ−ＯＲ（１）を含む３ｍＮの無水ＤＭＦ溶液に、０．０５３ｇ（０，３９ｍｍｏｌ）の無水ＨＯＢｔと、０．０８１ｇ（０，３９ｍｍｏ１）のＤＣＣと１．０．２３５８（０，３９ｍｍｏｌ）のＨ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＭＨｚ、ＨＣｌ（Ｆ、＾ｎｇｅｌｕｃｃｉ及びＲ，ｄｅＣａｓｔｉｇＩｉｏｎｅ（１９７５）Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ、５０７−５０８）と、　０．０４３ｍ１（０，３９＋ａ＋ＩＩｏりのＮＭＭとを続けて加えた０反応混合物を０℃で１時間、室温で３０時間撹拌し、次いでそれを一過して、真空蒸発させた。残留物を３ｍｌの無水ＤＭＦに溶解し、６ｇのＮａＣｌと３ｇのクエン酸とを含む３０ｍ１の水溶液中に１０℃未満の温度で滴下した。　１０℃未満の温度で１時間撹拌した後に、懸濁液を濾過し、生成物を洗浄して中性にした。粗製物を１０ｍ１の無水ＤＭＦから２度蒸発させ、次いで３ｖａｌの無水ＤＭＦに溶解し、１．５ｇのＮａＨＣＯ３と６ｇのＮａＣＩとを含む３０ｍ１の水溶液中に１０℃未満の温度で滴下した。混合物を１時間撹拌し、次いで一過して、水で洗浄して中性にし、０．５ｇ（収率９５．６％）の生成物■：　Ｒ，ｏ＝ｏ：８４．　ＲＴＡ２１．２　、＾＾比：　Ｔｒｐ　Ｏ，９７（１）、　Ｇｌｕｌ、００（１）、にＩｙ　１．　八Ｉａ　１．００（１）、Ｖａｌ　１．００（１）、Ｎｅｔ　１．１０（１）、　Ｌｅｕ　１．Ｏ［１）（ｐＭｅ！及びＨｉｓ（Ｄｎｐ）はｎ、ｄ、）を得た。

Ｋ凰■ユ［１−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖａｔ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ） −Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＭＨｚ、ＨＣＩ（Ｖ）０．１００ｇ（０，０６７ｍｍｏ１）のＢｏｃ−ｐＭｅｌ−Ｃ１ｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖｉｌ−Ｃｌｙ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨｚ（ＩＶ）を、０．２ｍＮの２−メルカプトエタノールと０．１１のアニソールとを含む１ｍｌの１．３３ＮＨＣ１／＾ｃｏ）ｌと反応させた１反応混合物を３０分間室温で撹拌し、次いで８３．５％）の生成物Ｖ　：　Ｒ，ｅ−０，５７；　ＲＴＡ９．３　、＾＾比：　Ｇｌｕｏ、９９（１）、　Ｇｌｙ　Ｏ，９８（１）、＾ｌａ　１．０４（１）、　Ｖａｔ　１．１０（１）。

Ｎｅｔ　０．８２（１）、　Ｌｅｕ　Ｏ，８１（１）（Ｔｒｐ、ｐＭｅｌ及び旧５（Ｄｎｐ）はｎ、ｄ、）Ｂｏａ−ｐＭｅｌｃＩｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　１ｙ−Ｈ１ｓ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＭＨｚ（ＶＩ　）０．４ｇ（０，２７ｗ＋＋ａｏ１）のＢｏａ−ｐｅｅｌ−にＩｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖｉｌ−Ｇｌｙ −）１ｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨｚ（ＩＶ）を、４００＋ｅ１の無水ＤＭＦに溶解し、次いで（ＩＮＫＯＨでｐＦＩ８．１にした）５．３６ｖａｌの０．１ＭＫＨ２ＰＯ，と、２０ｍ１の２−メルカプトエタノールとを加えた０反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで真空濃縮した。残留物を自流分配により溶媒系：水／ｎ−ＢｕＯＨ／＾ｃＯＨ＝　４０／３５／１で精製した。純粋な生成物を含む両分をプールし、真空蒸発させ、０．３５ｇ（理論収率）の生成物ＶＩ　：　Ｒ，ＧＯ，６３；　Ｒ，ＤＯ，８２；　ＲＴＡ１４．２　；＾＾比：　Ｇｌｕ　１．　にＩＦ　１．００（１）　；＾Ｉｍ　１．０４（１）、　Ｖａｌ　１．０４（１）　：Ｎｅｔ　０．９４（１）、　Ｌｅｕ　１．０２（１）、　）ｌｉｓ　Ｏ，９５（１）、　Ｔｒｐ　０．８８（１）（ｐｉｅ　ｌはｎ、ｄ、）を得た。

天ｌｕＩ旦Ｈ−ｐＭｅｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＭＨｚ、２ＨＣＩ（■）０．１ｇ（０，０７５＋ｎｍｏ１）のＢｏｃ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖａｌ−にｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ− Ｎ）１２（■）を実施例３に記載の如く脱保護して、０．０８９ｇ＜収率９１％）の生成物■：　Ｒ，ｃＯ，４５、ＲＴ、　１１．３　；＾＾比：　Ｇｌｕ　１．０６（１）、　にＩＦ　１．００（１）、＾Ｉａ　０．９９（１）、　Ｖａｌ　１゜Ｎｅｔ　０．９４＜１）、　Ｌｅｕ　Ｏ，９６（１）、　Ｈｉｓ　０．９４＜１）（Ｔｒｐ及びｐＭｅ　！はｎ、ｄ、）を得た。

Ｋ族五玉Ｂｏａ−ｐｅｅｌにＩｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｍｅｔ−ＭＨｚ（■）０．１５ｇ（０，１６ｍｍｏ１）のＢｏｃ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ΔＩａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨ（Ｉ［［）を、１２＋＊ｆの無水ＤＭＦに溶解して、０．０２３ｇ（０，１６９＋＊ｍｏｌ）の無水ＨＯＢｔを加えた。０℃に冷却した溶液に０．０４１゜（０，１７７ｍｍｏｌ）のＤＣＣと、０．０８５ｇ（０，１９２ｍｍｏｌ）の）Ｉ−ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−８１２，ＨＣＩ（本出願人の英国特許第８８０８７６８．９．実施例１一段階１４）と、０．０２２ａｆのＮＭＭ（０，１９２ｍｍｏｌ）とを続けて加えた。

０℃で１５分間撹拌した後、０．００２ｇ　（０，０１６ｍｍｏｌ）のＤＭ＾Ｐを加えた０反応混合物を０℃で１時間、室温で一晩撹拌し、次いで一過して、真空蒸発させた。残留物を３ｂｌの無水ＤＭＦに溶解し、３ｇのクエン酸と６ｇのＮａＣｌとを含む３０Ｆ１の水溶液中に１０℃未満の温度で滴下した。１時間撹拌した後、固体を一過し、水で洗浄して中性にした０次いで、生成物を１０ｍ１の無水ＤＭＦに溶解し、真空蒸発させた。残留物をＥｔ２０で粉末化して、０．１９０ｇ（収率８８．８％）の粗化合物■を得た。

０．０５％　（’）　ＴＦＡ　（Ａ）　ト０　、０５％　（’）　ＴＦＡ／ＣＨ）ＣＮ　＝　３／７　（Ｂ）　トノＸＩＯ％　〜９０％Ｂの直線勾配系を使用して、逆相半分数ＨＰＬＣにより試料を精製した（Ｒｒｃ　Ｏ，８５、ＲＴＡ１８．４　；　ＡＡ比：　にｌｕ　Ｏ，９０（１）。

Ｃ１ｙ　１．１４（１）、＾ｌａ　１．０２（１）、　Ｖａｌ　Ｏ，９９（１）、　Ｎｅｔ　０．９４（１）。

Ｌｅｕ　１．０８（１）、　ｐｈｅ　Ｏ，９６（１）、　Ｔｒｐ　０．９６（１）（ｐＭｅｌはｎ、ｄ、））。

Ｘ豊■ユＢｏｅ−ｍＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨ（ＩＸ　）引き続きＨ−ｍＭｅｌ−ＯＨ（Ｈ，Ｆ、Ｃ：ｒａｍ等（１９６３）Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、、６．８５−８７）から得られるＢｏｃ−ｍＭｅｌ−ＯＨを出発材料として、実施例１に記載の方法で当該化合’ｌ’Ｊ　：　Ｒｒｏ　Ｏ，５６；　ＲＴＡ　８．５　；＾＾比：　にＩＬＩ　０．９３（１）、　Ｇｌｙ　Ｏ，９５（１）、＾ｌａ　Ｏ，９５＜１）、　Ｖａｌ　１（Ｔｒｐ及びｐｉｅ　ｌはｎ、ｄ、）を得た。

Ｋ凰■溢Ｂｏａ−ｍＭｅｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−にＩｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ −Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＭＨｚ（ＸＩＶ）ｆＬＪ！ＬｉＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌ　−０Ｂｚｌ（Ｘ）２．３３ｍｆ（２０，７ｍｍｏｌ）のＮＭＭと、２．９１ｍＮ（２０，７ｍｍｏｌ）のイソブチルクロロカーボネートとを、４．８Ｆｌ（２０，７ｍｍｏｌ）のＢｏａ−Ｌｅｕ−ＯＨを含む一２５°Ｃに冷却した７０ｍＲの無水ＴＨＦ溶液に続けて加えた０反応混合物を約−１２℃で３分間撹拌した後、６．９８ｇ（２０，７ｍ＋５ｏｌ）のＨ− に１ｙ−ＯＢｚｌ、ＴｓＯＨと、２．３３＋ｏｆ（２０，７ｍｍｏｌ）のＮＭＭとを含む５０ｍＮの無水ＤＭＦ冷溶液溶液えた。反応混合物を約−１２℃で４５分間、０℃で９０分間撹拌し、次いで濾過して、真空蒸発させた。残留物を八ｃＯＥｔに溶解し、１０％のクエン酸水溶液と、塩水と、５％ＮａＨＣＯ，溶液と、再度塩水とで数回続けて洗浄した。有機層を無水Ｎａ２５Ｏ，で乾燥させ、溶媒を真空除去して、７．８ｇ（収率１００％）の化合物Ｘを油状物として得た（Ｒ，、０，８３、ＲＴＡ１３．６）。

１室１Ｈ−Ｌｅｕ−ＣＩ　−０Ｂｚ１．）ＩＣＩ（７，４ｇ（１９，６ｍｓ＋ｏｌ）のＢｏｃ−Ｌｅｕ−にＩｙ−ＯＢｚｌ　（Ｘ　）を実施例３に記載の方法で脱保護した。油状残留物を石油エーテルで数回粉末化し、３．９４ｇ（収率６３．８％）の化合物ＸＩ　：　Ｒ，ＣＯ，５９を得た。

段１］−Ｂｏｃ−ｍＭｅｌ−Ｌｅｕ−にＩ　−０Ｂｚ１５．７ｇ（１２，５１ｍｍｏｌ）のＢｏａ−ｍＭｅｌ−０）１と、３．９４ｇ＜１２．５１ｍｍｏｌ）のＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ、ＨＣＩ（ＸＩ　）とを実施例１の段階２に記載の方法により縮合した。残留物を八ｃＯＥｔで溶解し、１０％のクエン酸溶液と、塩水と、５％ＮａｔｌＣＯ，溶液と、再度塩水とで数回続けて洗浄した。有機層を無水Ｎａ２５ｏ、で乾燥させ、溶媒を真空除去した。残留物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、＾ｃＯＥｔ／Ｅｔ２０：１／７で溶離した。泡状物として６．２５ｇ（収率７５％）の生成物ｎ　：　Ｒ，Ｆ　Ｏ，８０５、Ｏｇ（９，０ｍｍｏ１）のＢｏｃ−ｍＭｅｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ− ＯＢｚｌ（Ｘｎ）を実施例１の段階３に記載の方法に従って処理した。残留物を＾ｃＯＥｔ／Ｅｔ２０／石油エーテルで粉末化し、４．３ｇ（収率８３％）の化合物ＸＩＩＩ　：　ＲＩＦ　０．４３を得た。

ｌ■二Ｂｏｅ−ｍＭｅｌ−Ｌｅｕ−ＣＩ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒ−＾ｌａ−■ａＩ−Ｇ１−Ｌｅｕ−鼓巨肌、ｌｌ… ０．０９２ｇ（０，１６ｍ＋ｎｏ１）のＢｏｃ−ｍＭｅｌ−Ｌｅｕ−Ｃ１ｙ−ＯＨ（Ｘｌｌｌ）と、０．１０５ｇ（０，１６＋ｎｍｏｌ）のＨ−Ｔｈｒ−１１：Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｉに１ｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２，８ＣＩ（本出願人の英国特許第８８０８７６８．９．実施例４）とを実施例２に記載の方法に従って縮合した。溶媒を蒸発させた後、残留物を１０ｍ１のＤＭＦに溶解し、１００ｍ１の１０％クエン酸溶液中に滴下し、１５分間撹拌し、次いで濾過し、洗浄して、中性にした。粗生成物を３０ｍ１のＤＭＦに溶解し、真空蒸発させた。

残留物をＤＭＦ／ＭｅＯＨ／＾ｃＯＥｔ／ＥｔｚＯで粉末化し、０．１７８（収率７２．７％）の粗化合物ｘ１■を得た。試料を実施例６に記載の方法に従って半分数ＨＰＬＣにより精製した（Ｒ，ｃＯ，８４；　ＲＴＡ１６．５　、＾＾比：　Ｔｈｒ　Ｏ，９４（１）、　Ｃｌｕ　１．０６（１）、　Ｇｌｙ　２．１２（２）。

八１ａ　Ｏ，９４（１）、　Ｖａｌ　Ｏ，９４＜１）、　Ｎｅｔ　１．００（１）、　Ｌｅｕ　２．　ＴｒｐＯ，８７（１）（＋＊Ｍｅｌはｎ、ｄ、））。

同様にして以下のペプチドも合成した。

ＸＹ　Ｈ−ｐＭｅｌ−ｆｌ：Ｉｎ−Ｔｒｐ−八Ｉａ−Ｖａｔ−Ｇｌｙ−ｐｈｅ− Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＬ　。

ＨＣＩＲ，ｃＯ，７２；　ＲＴＡ９．６ＸＶＩ　Ｂｏａ−ｍＭｅｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖａｌ−Ｃ１ｙ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２ＲｌＤ　Ｏ，８６；ＲＴＡ２１．５；＾＾比：Ｇｌｕ　１．Ｇｌｙ　Ｏ，９９（１）。

＾１ｍ　１．０３（１）、Ｖａｔ　Ｏ，９！０１）、Ｎｅｔ　１．０３（１）、Ｌｅｕｌ、０４（１）、Ｔｒｐ　１．０５（１）（ｍＭｅｌ及びＨｉｓ（Ｄｎｐ）はｎ、ｄ、）Ｘ’／ＩＩ　Ｈ−ｍＮｅｌ−Ｃ１ｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−Ｖａｌ− Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２，８ＣＩＲ，ｃｏ、７４．ＲＴＡ９．４．＾＾比：ＧＩｕ　Ｏ，９９（１）、Ｇｌｙｌ、０４（１）、八１ｍ　１．０２（１）、Ｖａｌ　１．Ｍｅｔ　Ｏ，９６（１）。

Ｌｅｕ　Ｏ，９６（１）（Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）Ｔｒｐ及びｍＭｅ　ｌはｎ、ｄ、）ＸＶＩＩＩ　Ｂｏａ−ｍＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ，、ＣＦ３ＣＯ０ＨＲ，ｃＯ，５５：Ｒ，、０，８０；ＲＴＡ１４．４；＾＾比ＨＧＩｕ　１゜Ｃ１ｙ　Ｏ，９９（１）、＾ｌａ　Ｏ，９９（１）、Ｖａｔ　１．０６（１）、Ｎｅｔｌ、０５（１）、Ｌｅｕ　０．９７（１）、Ｈｉｓ　Ｏ，９０（１）、Ｔｒｐ　１．０３＜１）（ｍＭｅｌはｎ、ｄ、）ＸＩＸ　Ｈ−ｍＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−八１ａ−Ｖａｉ−Ｃ□Ｉｙ−Ｈｉｓ− Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２゜２１（ＣＩＲ，ＣＯ，４４；ＲＴＩ　１１．３．＾＾比：ＧＩｕ　１．００（１）。

Ｃ１ｙ　１．００＜１＞、＾ｌａ　１．０５（１）、Ｖａｌ　１．Ｎｅｔ　０．９１（１）。

Ｌｅｕ　Ｏ，８９（１）、Ｈｉｓ　Ｏ，９９（１）（＋ｏＭｅｌ及びＴｒｐはｎ、ｄ、）ＸＸ　Ｂｏｃ−ｍＭｅｌにＩｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２Ｒ，、０，７４；ＲＴＡ１５．４；＾＾比：Ｇｌｕ　１．０３（１）、Ｇｌｙ　１゜＾１ａ　１．０４（１）、Ｖａｔ　Ｏ，９６（１）、Ｎｅｔ　０．９３（１）。

Ｌｅｕ　１．０２（１）、Ｔｒｐ　０．９４（１）（ｍＭｅｌはｎ、ｄ、）ＸＸＩ　Ｔｌ−ｍＭｅｌ−Ｃ１ｎ−Ｔｒｐ−八１ａ−Ｖａｉ（：ｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＭＨｚ　、ＨＣＩＲ，ｃ　Ｏ，６５；ＲＴＡ　５．７ＸＸＩ　Ｉ　Ｈ−＋ｎＭｅｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−（：Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｔ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＮＨ２，ＨＣｌＲ１゜０．５２；ＲＴＡ　６．６ＸＸＩＩＩ　Ｈ−ｐＭｅｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−ｆ；Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２，ＨＣＩＸＸＩＶ　Ｈ−ｐＭｅｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−ａｌａ−Ｈｉｓ− Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨｚ　。

ＲＣＩＸＸＶ　Ｈ−ｐＭｅｌ−＾ｓｎ−にＩｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮＨ２，ＨＣＩＸＸＶＩ　Ｈ−ｐＭｅｌ−＾ｓｎｌ；Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ− Ｌｅｕ−ＮＨ（ＣＨ，）、ＣＨ，、）ＩＣＩＸＸＶＩ　Ｉ　Ｈ−ｐＭｅｌ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−＾ｓｎ４：Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ｍ−Ｖａｌｌｌ：Ｉｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２，ＨＣＩＸＸＶＩＩＩ　Ｈ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Δｒｇ−Ｌｅｕ−Ｃ１ｙ−＾５ｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−にＩｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２，２８Ｃ］ＸＸＩＸ　Ｈ−ｐＭｅｌ−Ｃ１ｎ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−＾５ｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮＨ２，１（ＣＩＸＸＸ　Ｈ− ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−＾５ｎ−Ｃ１ｎ−Ｔｒｐ−＾１ｔ −Ｖａｌ−ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ（ＣＩ（２）ｚｃｓＨｓ、ＨＣＩＸＸＸＩ　Ｈ −Ｇｌｐ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｃｌｙ−ｐＭｅｌ−＾５ｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮＨ２、ＨＣＩＸＸＸＩ　Ｉ　ｔｌ−Ｌｅｕ−Ｃ１ｙ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ｐｈｅ− Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮＨｚ　、ＨＣＩＸＸＸＩＩＩ　Ｈ−Ｌｅｕ−Ｃ１ｙ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−八Ｉａ−Ｖａｌ（：１ｙ−ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮＬ、ＨＣＩＸＸＸＩＶ　Ｈ−ｐＭｅｌ−＾ｓｎｌ：　ｌ　ｎ−Ｔｒｐ−八１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＮＨ−Ｎｌ１２．）ＩｃＩＸＸＸＶ　Ｂｏｃ−ｐＭｅｌ−Ｃ：Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２Ｒ，ｃｏ、８６．ＲＴＡ１５．３；＾＾比：Ｇｌｕ　１．０２（１）。

Ｇｌｙ　１．０７（１）、八ｌａ　１．１０（１）、Ｖａｌ　１．Ｍｅｔ　Ｏ，９２（１）。

Ｌｅｕ　Ｏ，９８（１）（Ｔｒｐ及びｐｉｅ　ｌはｎ、ｄ、）ＸＸＸＶＩ　Ｈ− ｐＭｅｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−八ｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２，ＨＣＩＲ，、０，５７；ＲＴｍ　１６．８；＾＾比；Ｇｌｕ　１．０８（１）。

にＩＦ　１．０１（１）、＾Ｉａ　Ｏ，９８（１）、Ｖａｌ　１．Ｍｅｔ　Ｏ，９０（１）。

Ｌｅｕ　Ｏ，９４（１）（Ｔｒｐ及びｐｉｅ　Ｉはｎ、ｄ、）ＸＸＸＶＩＩ　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｌｙ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ −Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２Ｒ，、０，７３；ＲＴＡ１８．７；＾＾比：Ｃ１ｕ　１．０７（１）。

Ｇｌ、　２．０２（２）、＾Ｉａ　１．１８（１）、Ｖａｌ　１．Ｎｅｔ　０．８８＜１）。

Ｌｅｕ　Ｏ，９５（１）、Ｌｙｓ　１．０８（１）（Ｔｒｐ及びｐｉｅ　Ｉはｎ、ｄ、）ＸＸＸＶＩＩＩ　Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｔ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−Ｎｉ１２．２ＣＦ３ＣＯＯＨＲ，、０，７１；ＲＴ、　１５．４；＾＾比：ＧＩｕ　Ｏ，９９（１）。

Ｇｌｙ　２．０２（２）、＾Ｉａ　１．００（１）、Ｖａｔ　１．Ｎｅｔ　０．８８（１）；Ｌｅｕ　Ｏ，９１（１）、Ｌｙｓ　１．１５（１）、Ｔｒｐ　Ｏ，９１（１）（ｐｅｅｌはｎ、ｄ、）ＸＸＸＩＸ　Ａｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏａ）−ｔｌ、ｌｙ−ｐＭｅｌ−Ｃｌｎ−Ｔｒｐ −＾Ｉａ−Ｖａｌ−Ｃ１ｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨｚＲ，ｃ　Ｏ，７７、ＲＴＡ　１１．９；へ＾比：ＧＩｕ　１．０５（１）。

にＩＦ　１．９７（２）、＾ｌａ　０．９８（１）、Ｖａｌ　１．Ｎｅｔ　０．８９（１）。

Ｌｅｕ　Ｏ，９２（１）、Ｌｙｓ　０．９２（１）、Ｔｒｐ　０．８８（１）（ｐｉｅ　ｌはｎ、ｄ、）ＸＬ　Ａｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ｐＭｅｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｎｅｔ−ＮＨ２，ＣＦ３ＣＯ０ＨＲ，Ｄ　０．７８．ＲＴ、　１６．２；＾＾比：Ｇｌｕ　１；Ｇｌｙ　２．１１（２）。

＾Ｉｔ　０．９９（１）；Ｖａｌ　Ｏ，８９（１）；Ｍｅｔ　０．９１（１）；Ｌｅｕ　Ｏ，９２（１）；Ｌｙｓ　１．１０（１）（Ｔｒｐ及びｐＭｅｌはｎ、ｄ、）ＸＬＩ　Ｂｏａ−ｐＭｅｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ− ＾１ａ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ−ＮＨ（ＣＬＬＣＬＲ，、０，８８，ＲＴＡ２４．２．＾＾比：Ｔｈｒ　１．０４（１）。

Ｇｌｕ　Ｏ，９６（１）、Ｇｌｙ　２．＾ｌａ　１．０３（１）、Ｖａｌ　Ｏ，９５（１）。

Ｌｅｕ　１．９２（２）、（Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）、Ｔｒｐ及びｐｉｅ　ｌはｎ、ｄ、）ＸＬＩ　Ｉ　Ｈ−ｐＭｅｌ−Ｌｅｕｌ：１ｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｔ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）−Ｌｅｕ　−ＮＯ（ＣＨｚ）４ＣＨａ、ＨＣＩＲ，ｃｏ、５０．ＲＴＡ１８．７：＾＾比：Ｔｈｒ　Ｏ，９２（１）。

Ｇｌｕ　Ｏ，９７＜１）、にＩＦ　２．０４＜２）、＾ｌａ　１．０４（１）。

Ｖａｔ　１．Ｌｅｕ　１．８８（２）、（Ｈｉｓ（Ｄｎｐ）、Ｔｒｐ及びｐｉｅ　Ｉはｎ、ｄ、）ＸＬＩＩＩ　Ｂｏａ−ｐＭｅｌ−Ｃ１ｎ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−にＩｙ−＾５ｎ−Ｃ：Ｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮＨ２，ＣＦ３ＣＯ０ＨＲＴＡ　１８．４ＸＬＩＶ　Ｈ−ｐＭｅｌ−Ｇｉｎ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ１１：Ｉｙ−＾５ｎ−Ｇｌｎ −Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｖａｌ−ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｎｌｅ−ＮＨ２，２ＣＦ３ＣＯＯＨ表１マウスＳ［ＳＳ　３７３の繊維芽細胞に対するボンベシンのアルキル化類似体の結合親和力化合物　ＩＤ５゜（口Ｍ）１［１１２，０００±４００［８，２００±６８０ ■　６０±２０Ｖ　６８０±１５０ＸＩＸ　９５±８ＸＶＩ＋　１４８＋２７Ｖｌ　４８±２ＩＶ　１，１７０±４００ＸＶＩＩ＋　４０＋１２ＸＶＩ　３９０±１６０ＸＸ　６０．１＋３．３ＸＩＶ　４４５±６０参考ペプチド：ＢＢＳ　１２．６±３．８Ｓｐａｎｔｉｄｅ　１１，１００［ｐｒｏ’］５ｐａｎｔｉｄｅ　１４，０００［Ｌｅｕ’３＃（ＣＨ２−ＮＨ）Ｌｅｕ”］ＢＢＳ　２１４±３０表２マウス５ＷＩＳＳ　３７３の繊維芽細胞への［Ｈ３］チミジンの組み込み化合物　基礎値に対する増加倍率　２５ｎＭのＢＢＳの存在下での阻害％Ａ　Ｂ５ｎＭ　５０ｎＭ　５００ｎＭ　５０００ｎＭ　５００ｎＭ　５０００ｎＭ　５００ｎＭ　５０００ｎＭＩ［Ｉ　−−１，２１，３０６４±１０２７±１４３９ ±７Ｉ￥−−１１０５７±１３　１７土４　２２±３■　２．１　４．７　４．３　４．８　６±２１７±４５７±１４６１±９Ｖ　１　１　１．４　１．８　２６±８　４４±１２　８７±９　８３土６ＸＩＸ　１　４．１　４．３　４．４　１９４７　９＋５　５４４１　６２＋６Ｘ■　１　２．９　４．２　３．９　６±３　２０±７　５８土１３　６２４１Ｖｌ　４．１　８．０　７．０　６．６　３±２２０±３２１±３３４±５■１　１　１．７　２．３　５９±３６７±３　８１　７３Ｘ■　５．４　７．０　７．３　５．４　４±２３±１３± ２１４±３ＸＶＩ　１．２　１．６　３．１　３．９　１７４２　４１±１４７ ±１０３７±７■　−１，１１，２１，２２８±６　３７±４　５６１３　７７ ±１１ＸＸ　−１，０１，５１，２３９±１６８±８０３５±３Ｘ■−１，２１，３１，２６±２１４±２０３２±８参考ペプチド：ＢＢＳ　３．０±１［Ｌｅｕ　”≠（ＣＨｚ−ＮＨ）ＬｅｕＩ４コＢＢＳ１．０　１．０　２９±１０５６±４　０　０Ａ　＝　ＢＢＳと組み合わせて類似体を与える。

Ｂ＝細胞をあらかじめ類似体で処理し、洗浄し、３７℃で２４時間放置し、次いでＢＢＳを投与して誘発試験を行う。

表３ボンベシンレセプターと会合したｐ１１５タンパク質のリン酸化化合物　最小活性用量（ｎＭ）ｍ　＞　１ｏｏｏ。

ＸＶＩＩ＋　１０ＸＶ　Ｉ　４０ＸＸ　＞５００ＸＩＶ　＞１０００参考ペプチド：ＢＢＳ　３Ｓｐａｎｔ　ｉｄｅ　＞　１００００アルキル化部分をアゴニスト構造（化合物■、■、Ｘ■。

ＸＩＸ）内に導入すると、得られるアルキル化類似体は単独で与えられたときにはチミジンの組み込みを増大させ、ＤＢＳと共に与えられたときには弱いアンタゴニストとなったが、ＢＢＳを加える２４時間前に与えられたときには強力なアンタゴニストとなったことが、前記の表から明らかである。

“本来”不活性な（化合物■及び■）又は弱いアンタゴニスト（化合物■、　Ｖ、　Ｗ、　ＸＩＶ、　ＸＶＩ、　ＸＩ、　ＸＸ）＋７）ＢＢＳ類似体内にアルキル化部分を導入すると、得られるアルキル化化合物はチミジンの組み込みを増大させず、通常ＢＢＳと同時に与えられるか又はＤＢＳ処理処理後２量有効なアンタゴニストとして作用した。

国際調査＠告 −−−−−、ｐｃ：／三Ｐ　２９１０Ｏε４２国際調査報告ＥＰε９００８４２ＳＡ　２９８６９

Claims

【特許請求の範囲】

１．式Ｉ：Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｘ−Ｙ−Ｔ−Ｗ　Ｉ［式中、Ａは水素原子、Ｂｏｃ若しくはアセチル茎であり、Ｂ及びＣの−方はｐＭｅｌ若しくはｍＭｅｌ残基であり、Ｂ及びＣの他方は原子価結合、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ− Ｇｌｙ、Ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ若しくはＧｌｎ−Ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｅ，Ｅ−Ｇｌｙ残基（式中、Ｅ＝Ａｒｇ（Ａ），ａｒｇ（Ａ），Ｌｙｓ（Ａ），ｌｙｓ（Ａ），Ｏｒｎ（Ａ）及びｏｒｎ（Ａ））であるか、又はＡは水素原子であり、ＢはＧｌｐ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ残基であり、ＣはｐＭｅｌ又はｍＭｅｌ残基であり、並びにＤは原子価結合文はＡｓｎ若しくはＴｈｒ残基であり、ＸはＧｌｙ又はａｌａ残基であり、Ｙは原子価結合又はＨｉｓ（Ｒ１）、ｈｉｓ（Ｒ１）、Ｐｈｅ、ｐｈｅ、Ｓｅｒ、ｓｅｒ、Ａ１ａ若しくはａｌａ残基であり、Ｔは原子価結合文はＬｅｕ、ｌｅｕ、Ｐｈｅ若しくはｐｈｅ残基であり、ＷはＯＨ、アミノ、ペンチルアミノ若しくはフェネチルアミノ基又はＭｅｔ−Ｒ２、Ｌｅｕ−Ｒ２、Ｉｌｅ−Ｒ２若しくはＮｌｅ−Ｒ２残基であり、Ｒ１は水素原子又はＴｏｓ、Ｄｎｐ若しくはＢｚｌ基であり、Ｒ２はアミノ、ヒドロキシ、メトキシ又はヒドラジノ基である］で示されるペプチド又はこのようなペプチドの医薬上許容し得る塩。
２．【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】，又は【配列があります】で示されるいずれかｌつのペプチド。
３．医薬上許容し得る希釈剤若しくは担体と混合した、請求項ｌ若しくは２に記載のペプチド又は該ペプチドの医薬上許容し得る塩を含む医薬組成物。
４．訴求項ｌに記載のペプチドの製造方法であって、アミノ酸及び／若しくはアミノ酸誘導体を所望の配列に、及び／又はこれらのアミノ酸及び／若しくはアミノ酸誘導体を含むペプチドフラグメントを所望の配列に縮合して所望のペプチドを得、末端カルボン酸基又は末端アミノ基をペプチド結合のために活性化し且つ残基を保護し、場合により得られたペプチドを脱保護し及び／又は得られたペプチドをその医薬上許容し得る塩に変換することからなる方法。