JPH02306998A - ボンベシン拮抗剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明は、ペプチド、これらペプチドを含有する医薬組
成物、その製造方法、並びに治療剤としてのその適用に
関するものである。 〔従来の技術〕 本明細書において、アミノ酸および保護基に関する略号
は生化学命名法に基づく１υＰＡＣ−ＩＵＢ委員会の推
奨に基づいている〔ヨーロピアン・ジャーナル・バイオ
ケミスト、第１３８巻、第９〜３７頁（１９８４）参照
〕。３文字のアミノ酸記号は、キシルアミン酸のし一装
置を示している。Ｄ−アミノ酸は小文字により示され；
たとえばａｌａ−Ｄ−Ａｌａである。特に本明細書全体
にわたり次の略号を用いる：Ｂｏｃ、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル；Ｂ　ｚｌ、ベンジル；ＣＣＤ、向流分配、
ＣＩＺ、　　２−クロロベンジルオキシカルボニル、Ｄ
ＣＣ，ジシクロへキシルカルボジイミド、ＤＣＭ、　　
ジクロロメタン、ＤＭＦ、　ジメチルホルムアミド；Ｄ
ｎｐ。 ２．４−ジニトロフェニル；Ｆｍｏｃ、９−フルオレニ
ルメチルオキシカルボニル１ＨＯＢｔ、　　ｌ−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール、１．Ｄ、、内径；１−Ｐｒ／
Ｈ，２−プロパツール；ＭｅＯＨ，メタノール、ＮＭＭ
、Ｎ−メチルモルホリン、ＲＰ−ＨＰＬＣ，逆相高性能
液体クロマトグラフィー：Ｔｏｓ、４−トルエンスルホ
ニル；ＴＦＡ、　　トリフルオロ酢酸；ＴＬＣ，薄層ク
ロマトグラフィー。 〔発明の要点〕 本発明は、式Ｉ： Ｒ−Ａ−Ｂ−ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｌｒｐ−Ｃ−Ｄ
−Ｌｅｕ−Ｅ−ＲＩ〔式中、Ｒは水素原子または末端窒
素保護基を示Ａは原子価結合を示すか、またはＲが水素
原子を示す場合にはＧ　ｌｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ａ　ｒｇ
　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇ　ｌｙもしくはＣ１ｐ残基を示し、 Ｂは原子価結合またはＬ　ｙｓ、　Ａ　ｓｎもしくはＴ
ｈｒ残基を示し、 Ｃは原子価結合またはＧＩＮ’、　ａｌａもしくはＰｈ
ｃ残基を示し、 Ｄは原子価結合またはｌ＋ｉｓもしくはｔｒｐ残基を示
し、 ＥはＮｌｅ、　　Ｌｅｕ、　　ＰｈｅもしくはＩｅｕ残
基を示し、ＲはＯＲもしくはＮＲ３Ｒ４基を示し、ここ
でＲ２１Ｒ３，Ｒ４のそれぞれは独立して水素原子また
は１−ｔｔ個の炭素原子を有するアルキル基を示す〕 のペプチド、およびその医薬上許容しうる塩を提供する
。 Ｒが水素原子を示しかつＡおよびＢが両者とも原子価結
合を示す場合、Ｄ−グルタミン残基はＤ−ピログルタミ
ン酸残基となりうろことに注目すべきである。 Ｒが示しうる好適な末端窒素原子保護基はホルミル、ア
セチル、トリフルオロアセチル、プロピオニル、ベンゾ
イル基、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、４−ニトロ
ベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキ
シカルボニル、２，４−ジクロロベンジルオキシカルボ
ニル、２−ブロモベンジルオキシカルボニル、２−クロ
ロベンジルオキシカルボニル（ＣＩ　Ｚ）　、９−フル
オレニルメトキシカルボニル カルボニル（ＢＯＣ）、ｌ−メチルシクロブトキシカル
ボニル、アダマンチル（ａｄａｗＬａＬｙｌ）オキシカ
ルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、トリチル、
ベンジル、メチルおよびイソプロピル基を包含する。特
に好適なＮ−保護基はアセチルおよび

【−ブチルオキシ
カルボニル基である。 ＲＲおよびＲ４が示しうる好適なアルキ２゛３ ル基はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、
ｎ−ブチル、Ｓ−ブチル、イソブチルおよびｔ−ブチル
基を包含する。 医薬上許容しうる塩は、各種の無機酸および有機酸、た
とえば硫酸、燐酸、塩酸、臭化水素酸、沃化水素酸、硝
酸、スルファミン酸、クエン酸、乳酸、ピルビン酸、蓚
酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、桂皮酸、酢酸、ト
リフルオロ酢酸、安息δ酸、サリチル酸、グルコン酸お
よびアスコルビン酸から誘導される酸付加塩とすること
ができる。 本発明のペプチドは、当業者に知られた固相もしくは溶
液法によって製造することができる。 好適な方法において、保護されたペプチドは、ポリスチ
レン１％−ジビニルベンゼン共重合体から誘導されたク
ロロメチル樹脂にて段階的に作成される。Ｎ　　−Ｂｏ
ｃ−アミノ酸が一般に合成全体にわたって用いられる：
リジンをＮ　　−Ｆｉｏｅ誘導体として導入することも
できる。保護されないままのトリプトファンのインドー
ル環を除いて、ペプチド結合形成に関与しない官能基は
、適する保護基により保護される。すなわち、ヒスチジ
ンのイミダゾール環は４−トルエンスルホニル（ｈｉｓ
（Ｔｏｓ）　）により、或いは２，４−ジニトロフェニ
ル（ｈｉｓ（Ｄ　ｎｐ）　）により保護され；スレオニ
ンのヒドロキシルはベンジル［Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）　）
により；リジンのアミノ基はｔ−プチルオ午ジカルボニ
ル（Ｌｙｓ　（Ｂｏｃ）　］により或いは２−クロロベ
ンジルオキシカルボニルＣＬｙｓ　（ＣＩ　Ｚ）　）に
よりＲ３され；アルギニンのグアニジノ基はニトロ（Ａ
ｒｇ　（Ｎ　０２　）　）により保護される。側鎖保３
基は、合成の各工程にてα−アミノ保ａ基の除去につき
用いられる条件に対し安定であり、一般にカップリング
条件下で開裂せず、合成の終了時点で容品に除去される
。 ヒスチジンにおける４−トルエンスルホニル基はＨＯＢ
ｔにより除去される。したがって、ｈｉｓ（Ｔｏｓ）誘
導体の使用は、最後のカップリング工程においてのみＨ
ＯＢｔエステルを活性化誘導体として含む合成に限るが
、それｉよ早期の側鎖保護解除を回避するためである。 カップリングは、ＤＣＭもしくはＤＭＦまたはこれら溶
剤の混合物中における対称無水物または活性エステル法
のいずれかによって達成される。アミノ酸無水物および
活性エステルは、それぞれ２倍過剰および４倍過剰でカ
ップリングさせる。第１のＢｏｃ−アミノ酸はセシウム
塩の方法により固体支持体に結合するＣＢ、　ｌ’、ギ
シン（１９７３）　、エルベチ力・ヒミカ・アクタ、第
５６巻、第１４７６〜１４８２頁〕。その後の全アミノ
酸は二重カップリング操作によって導入される。 包括的な操作は本質的に次の工程で構成される：求電子
性アルキル化およびトリプトファンの酸化分解に対する
スカベンジャーとして５％メルカプトエタノールおよび
５％アニソールを含有する、ＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ（
Ｂ、ｏｃ−除去）、或いはＤＭＦ中における２０％ピペ
リジン（Ｆ　ｔｇｏｃ−除去）のいずれかを用いるＮａ
−保護解除；酸性処理により保護解除を行なう場合にの
み、Ｄ　ＣＦｖＩ中における１０９６　Ｎ　Ｍ　Ｍを用
いる中和；および活性アミノ酸誘導体カップリング。 樹脂からのペプチドの切断は、所望のアルコールを用い
る塩基触媒のエステル交換（必要に応じ、続いてアンモ
ノリシスもしくは鹸化を伴う）により、或いは無水アン
モニアで飽和されたＤ　Ｍ　Ｆおよびアルコール（典型
的にはＭ　ｅ　ＯＨもしくはトリフルオロエタノール）
の溶液中における直接的アンモノリシスのいずれかで行
なうことができる。 カップリングおよび切断工程に対し耐性の側鎖保：Ｊ１
基の保護解除は、水添分解（Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）　。 Ｌｙｓ（ＣＱＺ）およびＡ　ｒｇ　（Ｎ　Ｏ２）　］に
より或いは無水条件下での酸性処理（Ｌｙｓ　（Ｂｏａ
）　）により或いはＤＭＦにおけるチオールでの処理Ｃ
ｈｉｓ（Ｄｎｐ）　）により、選択的に達成することが
できる。グルタミンがＮ−末端アミノ酸であれば、これ
は意図的に酢酸水溶液もしくはトリフルオロ酢酸水溶液
中でピログルタミン酸まで環化することができる。最終
的に、ペプチドはＣＣＤもしくはＲＰ−ＨＰＬＣにより
精製される。 生物学的活性 本発明のペプチドは、ボンベシン（Ｂ　Ｂ　Ｓ）により
誘発される「インビトロ」および「インビボ」作用（た
とえば・１也滑筋の収縮、中枢源（ｃｃｎＬｒａ！ｏｒ
ｉｇｉｎ）の挙動改肩およびＨ糸分裂）にλ、■する白
゛力な拮抗作用を有する。 ボンベシン（ＢＢＳ）、すなわち元来水陸両性動物の皮
膚から単離されたテトラデカペプチドおよびその唾乳動
物の対応物質、すなわちガストリン放出性ペプチド（Ｇ
ＲＰ）は、桶乳動物における広範ＤＨの生物学的作用を
示す。これらはホルモン分泌（ガストリン、インシュリ
ン、グルカゴン、コレシストキニン、プロラクチン、成
長ホルモンなど）の刺戟、平滑筋収縮の刺戟、並びに中
枢源の挙動（ブルーミング、フィーディング、熱調整な
ど）の変化を０含する。 さらに、ボンベシン族のペプチドは白゛糸分裂因子であ
ることが示され、３Ｔ３ネズミ繊維芽細胞の「インビト
ロＪ増殖、並びに胃細胞および気管支上皮細胞の過血漿
症を誘発する。さらに、ヒト小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）細
胞ラインは、ボンベシン様ペプチドを生成しかつ分泌す
ると共に、これらペプチドに対する１１−　種類の高親
和性リセブタを発現し、ＢＢＳ／ＧＲＰ様ペプチドがオ
ートクリン機構を介してこの腫瘍に対し自己刺戟作用を
発揮しうろことを示唆する。 末梢および中枢作用が、ラットにおいて膀胱収縮として
「インビトロ」で試験されており（Ｒ。 マテソン等、ヨーロピアン・ジャーナルナファーマコロ
ジー・第１１４巻、第」４７〜１５５頁（１９８５））
かつ１．ｃ、ｖ投与によりブルーミング挙動として「イ
ンビボ」で試験されている（’ｉｆ、　＋１ギブセンお
よびＲ，Ｌ、イサークソン、ファーマコロジー・テラビ
ューチック、第１２巻、第２０６〜２４６頁（１９８１
）　）。作用効果および拮抗作用の両者が評価された。 第１表および第２表に要約する結果は、作用活性を欠如
する他に、本発明の同じ化合物がボンベシンにより誘発
される膀胱収縮およびブルーミング挙動を阻止すること
を示している。 これら両試験において、化合物■は公知のＢＢＳ拮抗剤
スパンタイドおよび関連ペプチドよりも強力である。さ
らに、化合物■は低投与量でさえスパンタイドにより示
される中枢神経毒性作用（たとえばバレル回転、虚脱、
ジスブネア、運動障害）を持たない。 本発明による化合物の白゛糸分裂作用は、ネズミ３Ｔ３
繊維芽細胞で検査されている。 ボンベシン受容体に対する結合親和性は１．　ザチャリ
ーおよびＥ、　ロゼングルト１こよりＪ己載された方法
〔プロシーディング・ナショナル・アカデミ−・サイエ
ンス、　　ＵＳＡ　（＋９８５）　、第８２巻、第７６
１６〜７６２０頁〕にしたがって決定されている。本発
明の化合物は、ＢＢＳ受容体に対し結合親和性を示した
（第３表）。〔Ｈ３〕チミジン組込みに影響を与える能
力は、ボンベシンの不存在下および存在下の雨音にて、
血清フリーの媒体中に維？、１ｊされた体＋ｔおよび融
合スイス３Ｔ３細胞で評価されている〔＾、Ｎ、コーブ
ス等（１９８５）　、バイオケミカル・ジャーナル、第
２３１巻、第７８１〜７８５頁〕。その結果を第４表に
要約する。 これらの表に報告された結果は、本発明の化合物がヒト
５ＣＬＣの処置および／またはこの病気に関連しかつボ
ンベシン関連ペプチドの分泌過多に基づく臨床的徴候（
痒み、食欲不振、高血糖症、体温低下性）の管理におい
て治療用途を有することを示している。 さらに、本発明によるペプチドの毒性は全く無視するこ
とができる。 したがって、本発明はさらに、本発明の化合物もしくは
その医薬上許容しうる塩を医薬上もしくは獣医上許容し
うる希釈剤もしくはキャリヤと混合して含む医薬組成物
をも提供する。 が　　　　　　　　　紫　Ｋ、　ω Ｑ　　ρ− 第　　　２　　　表 Ｂ　Ｂ　Ｓ　（０，０１７７ｇ　／ラットｉ、ｅ、ｖ、
）により誘発されるブルーミング挙動に 対するＢＢＳ拮抗剤の作用 第　　　３　　　表 ■Ｇ±１，７ ■　　６．５±０．Ｉ ＸＶ３．８”０．８ ＸＩＩＩ　　　６．２±０，３ Ｘ■　　５．３±０，２ 比較ペプチド スパンタイド　　　　　　　　　　　　１１（ｐｒｏ２
）スパンタイド　　　　１４第　　　４　　　表 マウススイス３Ｔ３繊維芽細胞に おける〔Ｈ３〕チミジン組込み 基礎値に対する　２５ｎＭ　ＢＩ３５の存在化合物増加
倍率による阻止Ｑ６ ０．５μＭ５μＭＯ８５μＭ　　５μＫＩＵ　　　　　
１．５　　　１．３　　　０　　３４＋３Ｘ■　　０．
７　０．９　２７±１３５９±１６Ｘｍ　　　１．６　
１．１　８３　４２±１６Ｘ■　　１．４　１．４　　
０　４５±ｌ７ＸＶＩＩ　　　１．５　０．７　１３＋
９　１８＋１２スパン　　　１．２　　１．０　　３７
　　４１±１１タイド ［実施例〕 以下、眼部ｖないが実施例により本発明を説明する。 方法： （ａ）　　シリカゲル６０Ｆ　　（メルク社）の層厚さ
０．２５ｍｍ、長さ２０ｃ１１１の予備被覆されたプレ
ートでＴＬＣを行なった。なお、次の溶出剤を用いた：
方４Ａ　（ＲｆＡ）：　）ルエン：酢酸エチル：酢酸：
水メ５：　　５：　　２：０．７５（上相）（ｂ）　　
ヒューレットバッカードＭｏｄ、１０８４装置にて、２
５０×内径４ｍｙｇ、粒径５μの１．１ｃｈｒｏｓｏｒ
ｂ　ｌ１ｌｂａｒ１？Ｐ−１８カラム（メルク社）でＲ
Ｐ−ＨＰＬＣ分析を行なった。次の溶出剤を用いた： Ａ四Ｋ　Ｈ２Ｐ　０４２０１Ｍ、ｐＩ＋３−５ニアセト
ニトリル９：１／ Ｂ　＝　Ｋ　Ｈ２Ｐ　Ｏ４２ｈＭ、　ｐＨ３，５ニアセ
トニトリル３ニア／ 流速−１ｍ１／ｇｉｎ　；検出波長−２１０ｎｍ；溶出
法１（ＲＴ、）−１分間１０％　Ｂ　ニ”Ｃ１次イテ２
０分間１゜〜９０％Ｂの直線濃度勾配にてアイソクラチ
カリーに（＋５ｏｃｒａｔｉｃａ！Ｉｙ）　　；溶出法
２　（ＲＴ２）二ｒ分間６０％Ｂにて、次いで２０分間
６０〜９０％Ｂの直線濃度勾配にてアイソクラチカリー
に。 （ｃ）　　Ｄｅｌｔａ　Ｐｒｃｐ　３０００型装置（ウ
ォータース社）を用い、２５０Ｘ３５＋＋ｕｓ内径、粒
径７μのＬＩＣｈｒｏｓｏｒｂｌｌｉｂａｒ　ＲＰ−１
８カラム（メルク社）にて調製用ＲＰ−ＨＰＬＣを行っ
た。次の溶出剤を用いた：Ａ−水中０，０５％ＴＦＡ／
／ Ｂ−アセトニトリル：水７：　３における０、０５％Ｔ
ＦＡ　。 流速−３５ｍ１／ｓｉｎ　；検出波長２２ＯｎＩＩｏ溶
出法は１１１−の例で記録した。 それぞれの場合、フラクションをＨＰＬＣ分析により検
査し、かつ９８％より高い純度を示すものを集めた。ア
セトニトリルを除去した後、溶液を凍結乾燥した。 （ｄ）　　酸加水分解物（１０６℃にて１６時間にわた
るメルカプトエタンスルホン酸）によりアミノ酸分析を
行なった。 実施例】 Ｎ　　−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−グル工程Ｉ Ｎ′ｒ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−グル２．４
９ｇのＢｏｃ　−Ｎ　ｌｅ　−ＯＣＨ２−樹脂（０，５
８１ミリモルＮｌｃ／ｇ）を反応容器に入れ、ＤＣＭ（
３Ｘ２１０）で洸浄して膨潤させ、次いで下記カップリ
ング方式（プロトコール）（Ｎａ−保護アミノ酸−Ｂｏ
ｃ−Ｌｅｕ　−ＯＨ）に１回かけた：方式Ａ 工程　試薬および操作 Ｉ　　　ＤＣＭ中における４ｏ％Ｔ　Ｆ　Ａ　（５９（
ｉ　２＝メルカプトエタノール＋５９６７二ソール含＃
）（２Ｘ　１ｓｌｎ＋　ｌ　ｘ　３０ａＩｎ）２　　０
ＣＭ（８Ｘ２ｓＩｎ） ３　　　ＤＣＭ中における１０９ｏＮ１０９ｏＮ　１ｍ
１ｎ＋　ｌ　ｘ　５ｍ１ｎ）４　　　ＤＣＭ（８Ｘ２ａ
ｉｎ＞ ５　　　ＤＣＭ中におけるＮａ−保護アミノ酸の対称無
水物２倍過剰（Ｉ　Ｘ　Ｉｈ）６　　　Ｄ　ＣＭ　（３
Ｘ　２ｍＩｎ）７　　　ｉ　Ｐ　ｒ　ＯＨ（３Ｘ２ｍＩ
ｎ）８　０ＣＮＯｘ２ｍＩｎ＞ 上記方式の工程３〜８を反復して、第２回［１の結合を
行なった。その後のアミノ酸の５種（すなわちＢｏｃ−
Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨ，ＢｏＣ−Ｌ−Ｐｈｅ　−ＯＨ，Ｂｏ
ｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ　−ＯＨお
よびＢｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ−ＯＨ）を順湯薔じ手順により
添加した。Ｂｏｃ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＨを導入するため、
第１回目の結合を次の方式により行なった： 方式Ｂ 工程　　試薬および操作 ４　　ＤＣＭ（５Ｘ２ｉｉｎ） ５　　　　ＤＭＦ（３Ｘ２ａ１口） ６　ＤＭＦ中におけるＮ　−保護 アミノ酸のＨＯＢｔエステル （４倍過剰）　（ｌＸ４ｈ） ７　　　ＤＭＦ（３Ｘ２ｍＩｎ） ８　　　ＤＣＭ（３Ｘ２ｓｉｎ） ９　　　ｉ　Ｐ　ｒ　ＯＨ（３Ｘ２ｍＩｎ）１０　　Ｄ
ＣＭ（３Ｘ２ａｉｎ） 方式Ｂの工程３〜ｌＯを反復して、第２回目の結合を行
なった。生成物Ｉを減圧下で乾燥した後、出発物質に関
し１．１１ｇの重量増加が得られた。 旦俣１ Ｎａ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−グル３、［ｉ
　ｇのベフ仁ムシ嘉脂Ｉを４０ｍ１のＤＭＦ：ＭｅＯＨ
ｌ：１　　（容積）に懸濁させた。この懸濁物を水浴中
で急冷し、かつ無水ＮＨ３を飽和させ、次いで室温にて
４日間撹拌した。この樹脂を濾過により除去し、Ｍｅ　
ＯＨ（３Ｘ４０ｍｌ）で洗浄し、かつ濾液を合して減圧
下に蒸発させた。残留物をＭ　ｅ　ＯＨ（５ｍｌ）で溶
解させ、ペプチドをジエチルエーテルで沈澱させた。粗
生成物■を濾過により回収し、かつ乾燥させた（１．３
５ｇ）。生成物をフレイブ装置にてＣＣＤにより精製し
、その際次の溶剤の分配で得られたｔｌ、Ｊを用いた；
トルエン：酢酸エチル：　Ｄ　ＣＭ　：　Ｍ　ｅ　ＯＨ
：酢酸トリエチルアンモニウム（酢酸てｐ１１４に、凋
整された０　、　０１　Ｍのトリエチルアミン）　１０
：　　Ｌ：　　５：１２：６（容積）。フラクションを
集めて分ｌＪ′ｒＲＰ−ＨＰＬＣにより検査し、９８％
より高い純度を示すフラクションを集　　　　　　゛め
た。減圧蒸発により溶剤を除去した後、純水物■を水に
よりＭ　ｅ　ＯＨから沈澱させた。収量：４１０１１１
ｇｏアミノ酸比：　Ｇ　ＩＸ　１．００（１）　；　Ａ
　ｌａ　１．０５（１）　；Ｔｒｐ　２．４（３）　　
；　Ｐｉｋｅ　Ｏ，９１（１）　；　Ｌｅｕ　０．９Ｇ
（１）　；Ｎｌｅ　１．００（１）、　Ｒｆ　　Ｏ，２
Ｕ；　ＲＴ、、　ＩＧ、７ｍ１ｏ。 実施例２ 二［ｆ聞１ Ｎ　　−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−グル１頭題
化合物を、化合物Ｉにつき記載した１順により２．３ｇ
のＢ　ｏｃ　　Ｎ　ｌ　ｃ　　ＯＣＨ２−樹脂（０，５
Ｇ１ミリモルＮ　ｌｃ／　ｇ　）から出発して合成した
。Ｄ−ヒスチジル残基をＢｏｅ−ｈｉｓ（Ｔｏｓ）　−
ＯＨとして導入した。生成物■は、出発物質に対し０．
９３ｇの重量増加を示した。 に程２ Ｎａ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−グルルオロア
セテート（ＩＶ）の製造 ３．１ｇのペプチジル樹脂■に、化合物Ｉにつき記載し
た開裂法を施した。このようにして得られた粗生成物（
１，０６＋ｒ）を、溶出剤Ａ中にお１プる３０〜８０％
の溶出作ＩＢの濃度勾配を用いるＲＰ−ＨＰＬＣにより
２０分間にわたり精製した。収量二０．４０ｇ、アミノ
酸比：　Ｇ　ｌｘ　１．０（１）：Ｇ　Ｉｙ　１．０ｇ
（１）　；Ａｌａ　１．０１（１）　；　Ｌｅｕ　Ｏ，
９５（１）　；　Ｎｌｅ　１；　Ｈｆ５Ｏ，９９（１）
；Ｔｒｐｌ、７（２）、　ＲｆＢＯ，５８；　ＲＴ、　
１８．６ｍ１ｎ　；ＲＴ　２　　　６．３ｍｉ口。 工程３ １３０ｍｇの化合物■を、５％のアニソールと５９６の
２−メルカプトエタノールとを含有する１、３ｍｌのＴ
ＦＡに溶解させた。室温にて３０分間撹拌した後、溶液
を（ｉｏｍｌのアセトニトリル、次いでＢｏｍｌの水で
希釈し、かつ５０℃にて２４時間保った。次いで、この
溶液を減圧蒸発させ、残留物を〜１ｅＯＨで再溶解させ
、生成物をジエチルエーテル：ジイソブ口ビルエーテル
１：１（容積）で沈澱させた。収量：１０５　ａｇｏこ
の生成物を、溶出剤Ａ中における４５〜８００６の溶出
剤Ｂの濃度勾配を用いるＲＰ−ＨＰＬＣにより２５分間
にわたり精製した。収量　：　４５ｔａｇ。 アミノ酸比：　Ｇ　ＩＸ　１．０（＋）　　；　Ｇ　ｌ
ｙ　Ｏ，９９（１）　；　Ａ　Ｉａｌ、０（１）　；　
Ｌｅｕ　１．０５（１）　；　Ｎｌｅ　１．０６（１）
　；　Ｈｉｓｌ、口２（１）　　　；　　Ｔｒｐ　　１
．９１（２）。　Ｒｆ　、　　０．４８　；　　ＲＴ。 １［ｉ、７ｍＩｎ　。 実施例３ ルーム−ロイシル−し一ノルロイシンアミド　トリフル
オロアセテート（■） 工程Ｉ Ｎ’−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リシ１ｇのＢ
ｏｃ−Ｎ　Ｉｃ　−ＯＣＨ２−＋１５ｆ脂（０，５’Ｊ
ミリモルＮｌｃ／ｇ）を反応容器に入れ、ＤＣＭ（３Ｘ
２■ｉｎ）で洗浄して膨潤させ、次いでカップリングｈ
゛式Ａ　（Ｎａ−保護アミノ酸−Ｂｏｃ　−Ｌｅｕ　−
ＯＨ）に１回かけた。第２回目のカップリングは、上記
方式の工程３〜８を反復して行なった。ＢＯｅ−Ｄ−Ｇ
ｉｎ−ＯＨを除く全てのアミノ酸（すなわちＢｏｃ−Ｄ
−Ｔｒｐ−ＯＨ，ＢｏＣ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ。 Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨ，ＢｏＣ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ
。 Ｆｍｏｃ　−Ｌｙｓ　−（Ｂｏｃ）−ＯＨ）を順次に同
じ手順により付加した。Ｂｏｃ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＨを導
入するため、第１回目のカップリングを次の方式Ｂによ
り行ない、かつ第２回目のカップリングを同じ方式の工
程３〜１０を反復して行なった。次いで、保護されたノ
ナペプチジル−樹脂を次の保護解除方式にかけた： 方式Ｃ 工程　　　試薬および操作 Ｉ　　　ＤＭＦ（３Ｘ２ｓＩｎ＞ ２　　　ＤＭＦ中２０％ピペリジン （Ｉ　Ｘ　３ａｉｎ＋　Ｉ　Ｘ　１５１ｎ）３　　　Ｄ
ＭＦ（３Ｘ５ｓＩｎ） ４　　　ＤＣＭ（３Ｘ５ａｌｎ） 減圧下で生成物■を乾燥した後、出発物質に対し０．６
３．の重量増加がｉ５られた。 ］二程２ Ｎ　−アセチル−Ｎ　　−ｔ−ブチルオキシカル０．８
１ｇのペプチジル樹脂■を２０ｍ１のＤＭＦ：ＭｅＯＨ
ｌ、Ｉ（容積）に懸濁させた。この＠濁物を水浴内で急
冷し、かつ無水ＮＨ３を飽和させ、夕日 いて室温にて４Ｈ間撹拌した。この樹脂を濾過により除
去し、ＤＭＦ　（３Ｘ２０ｍｌ）で洗浄し、濾液を合し
て減圧蒸発させた。残留物をＤＭＦ　（１５ｍｌ）で再
溶解させ、かつＮ−アセチルイミダゾール（６６０■）
を添加した。この溶液を室温にて２時間撹拌し、次いで
これを減圧蒸発させた。残留物をＭ　ｅ　ＯＨ（３ｍｌ
）で溶解し、かつペプチドをジエチルエーテルで沈澱さ
せた。粗生成物■をａ、過により回収し、かつ乾燥させ
た（２９０ｍｇ）。ＲＴ、、ｌ！＋１１ｎ　　。 工程３ Ｎａ−アセチル−し−リシル−Ｄ−グルタミニ０．２５
ｇの化合物■を２，５ｍｌのＴＦＡ（５％のアニソール
と５％の２−メルカプトエタノールとを含ａ）に溶解し
、その溶液を室温にて３０分間撹拌した。次いで、これ
をｔ−ブチルメチルエーテル（５０ｍｌ）中に注ぎ込み
、沈澱した粗ペプチドを濾過により回収し、かつ乾燥さ
せた（２３ｂ＋ｇ）。生成物を、溶出剤Ａ中における４
０〜７２％の溶出剤Ｂの濃度勾配を用いるＲＰ−ＨＰＬ
Ｃにより２５分間にわたりも１製した。収量：ｌ０２ｍ
ｇ０アミノ酸比：Ｃ：Ｉｘｌ、０４（＋）　　；　Ａ　
ｌａ　２．０［１（２）　；　Ｌｅｕ　１．００（１）
　；　Ｌｙｓｏ、９９（１）　　；　Ｎ　ｌｅ　１．０
２（１）　；　Ｔｒｐ　２．８７（３）、　Ｒｆ　ＡＯ
，５ｔ３；　ＲＴ　　１８．４ｍ１ｎ　；　ＲＴ、、　
５．７１ｎ。 実施例４ 工程Ｉ Ｌ−ピログルタミル−し−グルタミニルーＮｇ０．８５
ｇのＢｏｃ　−Ｎ　ｌｅ　−ＯＣＨ２−樹脂（０，５９
ミリモルＮ＋ｅ／ｇ）を反応溶液に入れ、ＤＣＭ（３Ｘ
２１ｎ）で洗浄することにより膨潤させ、次いで、カッ
プリング方式Ａ　（Ｎ　　−保護アミノ酸−ＢｏＣ−Ｌ
ｅｕ−ＯＨ）に１回かけた。第２番目のカップリングは
、同じ方式の工程３〜８を反復して行なった。同じ手順
を、次のアミノ酸の導入に用いた：Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ
−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｄ−Ｐｈａ−ＯＨ。 Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ−ＯＨ
。 Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ，Ｌ−Ｇｌｐ−ＯＨｏＢｏｃ−Ｄ
　−〇Ｉｎ−ＯＨ，Ｂｏａ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＨ，Ｂｏｃ
−Ｌ　−Ｇｌｎ−ＯＨ，Ｂｏｅ−Ｌ−Ａｒｇ（Ｎｏ２）
−ＯＨを導入するため、最初のカップリングを次の方式
Ｂによって行ない、第２回目のカップリングを同じ方式
の工程３〜ｌＯを反復して行なった。生成物■を減圧下
で乾燥させた後、出発物質に対し０．７７ｇの重量増加
が得られた。 工程２ Ｌ−ピログルタミル−し−グルタミニルーＮｇ（Ｘ）の
製造 １．５　Ｋのペプチジル樹脂■を６０ｍ１のトリフルオ
ロエタノールニＤＭＦ　２：　１（容積）に懸濁させた
。 この懸濁物を水浴で急冷し、かつ無水ＮＨ３を飽和させ
、次いで室温にて４日間撹拌した。この樹脂を濾過によ
り除去し、ＤＭＦ（３Ｘ５０ｍｌ）で洗浄し、濾液を合
して減圧蒸発させることにより粗生成物■が油状物とし
て得られた。収量　：　０．７３ｇ。 ＲＴ２　１０．５ａＩｎ　　。 工程３ ０．３ｇの粗生成物ＸをＤ　Ｍ　Ｆ　（３ｍｌ　）で溶
解させ、この溶液を恒温浴にて３５℃で撹拌し、次いで
炭素上の１０％Ｐｄ（（１，３＋ｒ）および蟻酸アンモ
ニウム（０゜３８ｇ）をこの順序で添加し、かつ懸濁物
を撹拌しながら３５℃にて１０分間保った。触媒をセリ
ットによる濾過で回収し、かつ濾液を蒸発乾固させた。 生成物を、溶出剤Ａ中における６０〜９０％の溶出剤Ｂ
の濃度勾配を用いるＲＰ−ＨＰＬＣにより３０分間にわ
たり精製した。収ｔａ：１３０ｍｇ、アミノ酸比：　Ａ
ＳＸ　１．０７（１）　；　Ｇｌｙ　１．０３（１）　
；　Ａｌａ　０．９７（１）　；Ｌｅｕ　１．９５（２
）　；　Ｎ　Ｉｅ　Ｏ，９Ｂ（１）　；　Ｇ　１１２．
０（２）　　；Ｔｒｐ　２．０（３）　　；　Ｐｈｃ　
１．０８（１）　；　Ａｒｇ　Ｏ，９８（１）。 Ｒｆ　　Ｏ，２１；ＲＴ２９．１ｍ１ｎ。 同様にして、次のペプチドを合成した：Ｘ■ １１−Ａｓｎ−ｇ　ｌ　ｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｌｒｐ−
Ｐｈｅ−ｔｒｐ−１．ｅｕ−Ｎｌｅ−１１ｆｔ、、　ｅ
ＣＰ３ＣＯＯＩ＋ アミノ酸比：　ＡＳＸ　１．１（１）　　；　Ａ　Ｉａ
　０．９９（１）　；Ｌｅｕ　１．０（１）　　；　Ｎ
ｌｃ　Ｏ，９７（１）　；　ＧＩＸ　１．Ｈｌ）　　；
Ｔ　ｒｐ２．７（３）　；　Ｐ　ｈｅ　Ｉ、１（１）　
。Ｒｆ　ｎ　Ｏ，５１；ＲＴ２１３．１０ Ｘ■ ＢＯｅ−ｇ　ｌ　ｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−ｔｒｐ−Ｐｈｅ
−ｈｉｓ−１．ｅｕ−Ｎｌｅ−Ｎｉ１２゜ＣＦ３ＣＯＯ
Ｈ アミノ酸比：　Ｇ　ＩＸ　１．０（１）　　；　Ａ　ｌ
ａ　０．９６（１）　；Ｌｅｕ　Ｏ，９４（１）　；　
Ｎｌｅ　０．９７（１）　；　Ｐｈｅ　１．０６（１）
　；ＨＩｓ　１．０３（１）　；　”ｒｒｐ　１−ｂ（
２）　。Ｒｆ　ｎ　Ｏ，７５；ＲＴ　　２１．４；ＲＴ
２１０．０゜ ■ ＩＶ ｆｌｏｅ−ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｌｒｐ−Ｇｌｙ−
Ｌｒｐ−１，ｅｕ−Ｎｌｅ−Ｎｉ１２　ｅＣ１！３ＣＯ
ＯＩ＋ アミノ酸比：　Ｇ　ｌｘ　１．０２（＋）　；　Ｇ　Ｉ
ｙ　Ｏ，９９（１）　＋Ａ　Ｉａ　　０．９７（１）；
　　Ｌｅｕ　　１．口（１）　　；　　Ｎｌｅ　　１．
０（１）　　；Ｔｒｐ　２．４７（３）。Ｒｆ　　Ｏ，
２１；ＲＴ　　２１．８：ＲＴ２＾　　　　　　　　１ １１．０゜ Ｘ■ １１ｏｃ　ｇ　Ｉ　ｎ−Ｔ　ｒ　ｐ−Ａ　Ｉ　ａ　Ｌ　
ｒ　ｐ−Ｌ　ｒ　ｐ−Ｌｅｕ−Ｎ　Ｉ　（！−Ｎ１１２
アミノ酸比：　Ｇ　ｌｘ　Ｏ，９５（１）　；　Ａ　Ｉ
ａ　１．０５（１）　：Ｌｅｕ　１．０（１）　　；　
Ｎ　Ｉｃ　Ｏ，９６（１）　；　Ｔｒｐ　２．４（３）
。 Ｒｆ　　Ｏ，２２；　ＲＴ　　２２．４；　ＲＴ２１２
．３゜Ａ　　　　　　　　Ｉ Ｘ■ Ｂｏｃ−ｇ　ｌ　ｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｌｒｐ−ｈｉｓ
−１，，ｅｕ−Ｎｉｅ−Ｎｌ１２ｍＣＰ３ＣＯＯＩ＋ アミノ酸比：　ＧＩＸ　１，０（＋）　　；　Ａｌａ　
１．４（１）　　；Ｌｅｕ　０．９９（１）　；　Ｎ　
Ｉｅ　１．０４（１）　；　Ｔｒｐ　１．８（２）；Ｈ
Ｉｓｌ、０１（１）。Ｒｆ　　Ｏ，７３；ＲＴ　　ｉ９
．２；ＲＴ２７．０゜Ｂ　　　　　　　　　Ｉ Ｘ■ ｇｌｐ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｌ　ｒｐ−Ｐｈｅ−ｔｒｐ−
１，ｅｕ−Ｎ　Ｉｅ−Ｎ！Ｉ２アミノ酸比：　Ｇｌｘ　
１．０６（１）　；　Ａｌａ　１．１（１）　　：Ｌｅ
ｕ　１．０５（１）　；　Ｎｌｅ　１．０（１）　　；
　Ｐｈｅ　Ｏ，９ｇ（１）　　；Ｔ　ｒｐ　２．８９（
３）。Ｒｆ　　Ｏ，７７；ＲＴ　　２３．３；ＲＴ、。 Ｈｌ １４．４゜ Ｘ■ ｇｌｐ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｌｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−１
．ｅｕ−Ｎｌｅ−０１１アミノ酸比：　ＧＩＸ　１．１
（１）　　；　Ａｌａ　１．１（１）　　；Ｌｅｕ　１
．０（１）　　；　Ｎ　Ｉｅ　Ｏ，９２（１）　；　Ｌ
ｅｕ　Ｏ，９３（１）　　；Ｔｒｐ２−５（３）　。Ｒ
ｆ　　０１７８　；　ＲＴ　　２３．２　；　ＲＴ２Ｂ
　　　　　　　　　Ｉ ■４．３゜ ＩＸ Ｇ　ｌ　ｐ−１，ｙｓ−ｇ　Ｉ　ｎ−Ｔｒｐ−＾Ｉａ−
Ｌｒｐ−ａｌａ−ｔｒｐ−１．ｅｕ−Ｎｌｅ−Ｎｌ＋２
．　ＣＦ３ＣＯ０Ｉ＋ アミノ酸比：　Ｇ　ＩＫ　１．９８（２）　：　Ａ　ｌ
ａ　１．８４（２）　；Ｌｅｕ　１．０３（１）　；　
Ｎ　Ｉｃ　１．０（１）　　；　Ｌｙｓ　１．０２（１
）　：Ｔ　ｒｐ　２．７ｇ（３）。Ｒｆ　　Ｏ，５８；
ＲＴ　　１１１．４；ＲＴ２＾　　　　　　　　　１ ５．７　。 出秩べ　　７フルミ′す７°フル０“−工′ン七中エル
し・工ｌレレ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 I ： Ｒ−Ａ−Ｂ−ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ｔｒｐ−Ｃ−Ｄ
   −Ｌｅｕ−Ｅ−Ｒ＿１ I 〔式中、Ｒは水素原子または
   末端窒素保護基を示し、 Ａは原子価結合を示すか、またはＲが水素原子を示す場
   合にはＧｌｐ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙもしく
   はＧｌｐ残基を示し、 Ｂは原子価結合またはＬｙｓ、ＡｓｎもしくはＴｈｒ残
   基を示し、 Ｃは原子価結合またはＧｌｙ、ａｌａもしくはＰｈｅ残
   基を示し、 Ｄは原子価結合またはｈｉｓもしくはｔｒｐ残基を示し
   、 ＥはＮｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅもしくはｌｅｕ残基を示し
   、Ｒ＿１はＯＲ＿２もしくはＮＲ＿３Ｒ＿４基を示し、
   ここでＲ＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿４のそれぞれは独立して水
   素原子または１〜１１個の炭素原子を有するアルキル基
   を示す〕 のペプチド、およびその医薬上許容しうる塩。
2. （２）請求項１記載のペプチドまたはこの種のペプチド
   の医薬上許容しうる塩を医薬上許容しうる希釈剤もしく
   はキャリヤと混合してなる医薬組成物。
3. （３）所望の配列にて不活性支持体に対し必要に応じ結
   合したアミノ酸および／またはアミノ酸誘導体および／
   または所望の配列にてこれらアミノ酸もしくはその誘導
   体を含有するペプチド断片を縮合させて所望ペプチドを
   生成させ、その末端カルボン酸基をペプチド結合のため
   に活性化させると共に、残余の基を保護して樹脂から開
   裂させ、かつ／または得られた化合物を保護解除し、か
   つ／または得られたペプチドをその医薬上許容しうる塩
   まで変換させることを特徴とする請求項１記載のペプチ
   ドの製造方法。