JPH03266999A - 全血からの少なくとも一つの白血球のサブ‐ポピュレーションの自動フローサイトメトリー測定用の試薬及び該試薬を用いた測定方法 - Google Patents
全血からの少なくとも一つの白血球のサブ‐ポピュレーションの自動フローサイトメトリー測定用の試薬及び該試薬を用いた測定方法Info
- Publication number
- JPH03266999A JPH03266999A JP2317640A JP31764090A JPH03266999A JP H03266999 A JPH03266999 A JP H03266999A JP 2317640 A JP2317640 A JP 2317640A JP 31764090 A JP31764090 A JP 31764090A JP H03266999 A JPH03266999 A JP H03266999A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- concentration
- sub
- reagent according
- blood cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 title claims description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 5
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- DEXKHGVSCDMMLD-UHFFFAOYSA-N [ClH]1N=CC=C1 Chemical compound [ClH]1N=CC=C1 DEXKHGVSCDMMLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 4
- -1 alkylene glycol Chemical compound 0.000 claims description 3
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000003866 tertiary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical group O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003509 tertiary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims 1
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 claims 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 12
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract description 6
- ATFARZXNCCWOKJ-MGDYUOCISA-N Nc1ccc(\N=N\c2ccc(cc2)-c2ccc(cc2)\N=N\c2c(N)c3c(O)c(\N=N\c4ccccc4)c(cc3cc2S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)c(N)c1 Chemical compound Nc1ccc(\N=N\c2ccc(cc2)-c2ccc(cc2)\N=N\c2c(N)c3c(O)c(\N=N\c4ccccc4)c(cc3cc2S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)c(N)c1 ATFARZXNCCWOKJ-MGDYUOCISA-N 0.000 abstract 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- WONRDHPFOHAWOG-UHFFFAOYSA-N 2-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C(Cl)C=CC2=C1 WONRDHPFOHAWOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- XIVJNRXPRQKFRZ-UHFFFAOYSA-N naphthalen-1-yl butanoate Chemical compound C1=CC=C2C(OC(=O)CCC)=CC=CC2=C1 XIVJNRXPRQKFRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/101666—Particle count or volume standard or control [e.g., platelet count standards, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Ecology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、白血球のサブ−ポピュレーション（ｓｕｂ−
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）をカウントし、区別することに
よる血液組成の分析、より詳しくは少なくとも一つの白
血球のサブ−ポピュレーションをフローサイトメトリー
（ｆｌｏｗ ｃｙｆｏｍｅｔＢ）を用いて測定するため
の試薬及び該試薬を用いた測定方法に関する。
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）をカウントし、区別することに
よる血液組成の分析、より詳しくは少なくとも一つの白
血球のサブ−ポピュレーションをフローサイトメトリー
（ｆｌｏｗ ｃｙｆｏｍｅｔＢ）を用いて測定するため
の試薬及び該試薬を用いた測定方法に関する。
従来の技術
診断の際に、異なる白血球の集団を正確に測定すること
の重要性は、以前から認識されてきた。
の重要性は、以前から認識されてきた。
実際、異常な白血球の比率の発生は、ある種の疾患（免
疫反応、炎症反応、腫瘍又は白血病の出現等）の発生と
相互に関連性がある。
疫反応、炎症反応、腫瘍又は白血病の出現等）の発生と
相互に関連性がある。
物理的に赤血球を分離しく沈降又は凝集による）、次い
で白血球の細胞質及び核を特異的に染色し、顕微鏡下で
それらの形態を観察することを含む伝統的な手動の分析
方法で、すでにあらゆるタイプの白血球、即ち顆粒球（
好塩基球、好酸球及び好中球）及び無顆粒球（単球及び
リンパ球）を同定することが可能である。これらの方法
は、信頼できる結果を与えるが、それらは長時間を要す
るため自動装置を用いた測定とは、はとんど置換できな
いか又は置換できたとしても困難を伴うだけである。
で白血球の細胞質及び核を特異的に染色し、顕微鏡下で
それらの形態を観察することを含む伝統的な手動の分析
方法で、すでにあらゆるタイプの白血球、即ち顆粒球（
好塩基球、好酸球及び好中球）及び無顆粒球（単球及び
リンパ球）を同定することが可能である。これらの方法
は、信頼できる結果を与えるが、それらは長時間を要す
るため自動装置を用いた測定とは、はとんど置換できな
いか又は置換できたとしても困難を伴うだけである。
白血球集団の自動計測を可能にする異なる装置がすでに
市販されており、種々の試薬及び染色剤が開発され、そ
のような装置の運転原理に適するようになっている。
市販されており、種々の試薬及び染色剤が開発され、そ
のような装置の運転原理に適するようになっている。
例えば、抵抗率の変化又は光回折（ｏｐｔｉｃａｌ ｄ
ｆｆｒａｃｔｉｏｎ）を測定することにより細胞のサイ
ズ（細胞質の特異的な溶解の後）を測定することができ
、また、異なる細胞のタイプに特異的な染色（酵素的又
はその他）を行い、異なる波長で細胞のサイズ及び光学
密度を測定することもできる。
ｆｆｒａｃｔｉｏｎ）を測定することにより細胞のサイ
ズ（細胞質の特異的な溶解の後）を測定することができ
、また、異なる細胞のタイプに特異的な染色（酵素的又
はその他）を行い、異なる波長で細胞のサイズ及び光学
密度を測定することもできる。
発明が解決しようとする課題
自動化による困難な問題の一つは、赤血球とある小型の
白血球の間での混同の可能性であり、それは、顕微鏡観
察では発生しない人為的な結果（ａｒｔｅｆａｃｔ）で
ある。従って、血液サンプルが装置に供される前に、白
血球の完全性を保持すると同時に赤血球を全て溶解して
しまうことが保証されなければならない。加えて、反応
混合物は、ヒストグラム上で異なるタイプの白血球の間
の区別と極めて明確なゾーンへのグループ分けを容易に
する１又は２以上の試薬を含まなければならない。
白血球の間での混同の可能性であり、それは、顕微鏡観
察では発生しない人為的な結果（ａｒｔｅｆａｃｔ）で
ある。従って、血液サンプルが装置に供される前に、白
血球の完全性を保持すると同時に赤血球を全て溶解して
しまうことが保証されなければならない。加えて、反応
混合物は、ヒストグラム上で異なるタイプの白血球の間
の区別と極めて明確なゾーンへのグループ分けを容易に
する１又は２以上の試薬を含まなければならない。
国際公開ＷＯ３５０５６８４（クルター・エレクトロニ
クス・インコーホレイティラド（ＣｏｕｌｔｅｒＥｌｅ
ｃ４ｒｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ、））は、２段階、即ちサポ
ニンによる赤血球の特異的溶解及び次ぎのグルタルアル
デヒドによる白血球の固定化（及びそれによる保護）を
保証する一群の試薬を記載している。そして、異なるタ
イプの白血球の間の区別は、フェノキシ−２−エタノー
ルのような試薬の添加により補助され、ある集団は、特
異的に染色され、蛍光により同定される。この効果的で
、信頼性はあるが複雑である方法は、米国特許第 ３．
５０２．９７４号公報に記載されているようにクルター
カウンター（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ） ｅタ
イプの装置のために特に適している。
クス・インコーホレイティラド（ＣｏｕｌｔｅｒＥｌｅ
ｃ４ｒｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ、））は、２段階、即ちサポ
ニンによる赤血球の特異的溶解及び次ぎのグルタルアル
デヒドによる白血球の固定化（及びそれによる保護）を
保証する一群の試薬を記載している。そして、異なるタ
イプの白血球の間の区別は、フェノキシ−２−エタノー
ルのような試薬の添加により補助され、ある集団は、特
異的に染色され、蛍光により同定される。この効果的で
、信頼性はあるが複雑である方法は、米国特許第 ３．
５０２．９７４号公報に記載されているようにクルター
カウンター（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ） ｅタ
イプの装置のために特に適している。
又、例えば米国特許第３．７４０．１４３号公報に記載
された他の方法は、テクニコン（Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ）
’装置のために特に適したものであって、同時並行の
かつ各々の細胞のタイプを現す幾つかの反応を含み、こ
れらの特別な反応の前に又は該反応に引続き赤血球の溶
解処理及び可能であれば白血球の固定化処理が行われる
。前記特別な反応は、伝統的な組織学的染色、例えば好
塩基球のためのニュートラル レッド（ｎｅｕｔｒａｌ
ｒｅｄ））及び酵素的染色（例えばクロロナフトール
を用いた好酸球および好中球のペルオキシダーゼ含量を
示すもの又はナフトールブチレートを用いた単球のリパ
ーゼ含量を現すもの）を含む。
された他の方法は、テクニコン（Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ）
’装置のために特に適したものであって、同時並行の
かつ各々の細胞のタイプを現す幾つかの反応を含み、こ
れらの特別な反応の前に又は該反応に引続き赤血球の溶
解処理及び可能であれば白血球の固定化処理が行われる
。前記特別な反応は、伝統的な組織学的染色、例えば好
塩基球のためのニュートラル レッド（ｎｅｕｔｒａｌ
ｒｅｄ））及び酵素的染色（例えばクロロナフトール
を用いた好酸球および好中球のペルオキシダーゼ含量を
示すもの又はナフトールブチレートを用いた単球のリパ
ーゼ含量を現すもの）を含む。
一般的に言うと、詳細な信頼のおける分析は、高度に複
雑な装置と、異なる試薬を用いて成される幾つかの異な
る段階を含む方法を用いてのみ可能となる。それらの複
雑性のために、そのような分析のコストは非常に高く、
日常の診断のためには同様の識別力及び同様の信頼性を
保持する一方、方法を単純化するのが常に好ましい。
雑な装置と、異なる試薬を用いて成される幾つかの異な
る段階を含む方法を用いてのみ可能となる。それらの複
雑性のために、そのような分析のコストは非常に高く、
日常の診断のためには同様の識別力及び同様の信頼性を
保持する一方、方法を単純化するのが常に好ましい。
課題を解決するための手段
本出願人は、単一の反応で赤血球の溶解、白血球の保護
のための固定化及び好酸性の細胞の染色を可能にし、同
様にヒストグラム上の異なる白血球のサブ−ポピュレー
ションの効果的な分離を可能にする組成物を開発した。
のための固定化及び好酸性の細胞の染色を可能にし、同
様にヒストグラム上の異なる白血球のサブ−ポピュレー
ションの効果的な分離を可能にする組成物を開発した。
本発明の組成物の使用方法は、特に迅速なものであり、
いかなるタイプの自動計測装置にも好適なものである。
いかなるタイプの自動計測装置にも好適なものである。
より詳しくは、本発明の試薬は、少なくとも一つの赤血
球溶解試薬、好ましくはサポニン及びドデシル硫酸ナト
リウム（ＳＤＳ）を含むとともに、種々の白血球集団を
特異的に染色できる試薬、とくに５０〜６５０ｍｇ／ｌ
の間の濃度のクロラゾールブラック（ｃｈｌｏ＋ａｚｏ
ｌ ｂｌａｃｋ）を含有する。該試薬の他の成分は、細
胞の自然状態及び形態の完全さを保存するとともに、光
学的検出により細胞の識別性を改良するように予定され
たものであって、０ ｐＨを７．０〜１２．０に維持する少なくとも一つの生
理学的な塩、三級または四級のアンモニウム塩、−級、
二級または三級アルコール、界面活性剤、細胞構造保護
剤及びアルキレングリコールを含む。
球溶解試薬、好ましくはサポニン及びドデシル硫酸ナト
リウム（ＳＤＳ）を含むとともに、種々の白血球集団を
特異的に染色できる試薬、とくに５０〜６５０ｍｇ／ｌ
の間の濃度のクロラゾールブラック（ｃｈｌｏ＋ａｚｏ
ｌ ｂｌａｃｋ）を含有する。該試薬の他の成分は、細
胞の自然状態及び形態の完全さを保存するとともに、光
学的検出により細胞の識別性を改良するように予定され
たものであって、０ ｐＨを７．０〜１２．０に維持する少なくとも一つの生
理学的な塩、三級または四級のアンモニウム塩、−級、
二級または三級アルコール、界面活性剤、細胞構造保護
剤及びアルキレングリコールを含む。
フロラゾール ブラック（エリエ ブラック（Ｅｒｉｅ
ｂｌａｃｋ）又はフォルミツク ブラック（ｆｏｒｍ
ｉｃ ｂｌａｃｋ） としても知られている）は、植物
組織学において１９３７年以来使用されている一般的な
試薬であり（キャノン エイチ、ジー、）（Ｃａｎｎｏ
ｎ Ｈ，Ｇ、）、ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ） 、１
３９．５４９）、顕微鏡下で観察するために好酸性の細
胞を特異的に染色するために使用される。（この試薬及
びその使用方法は、エム、ピエッテ（ＭＰｉｅｊｔｅ）
、Ａｎｎ、Ｂｉｏｌ、Ｃ１１ｎ、、１９６１．１９．
７２９−７３４、及びケイ、ローレンス（ＫＬａｗｒｅ
ｎｃｅ） 、Ａｍ、 Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｐａｊｈｏｌ
、 １９８１．７６．８１Ｃ１−８１２により記載
されている）フロラゾール ブラックの習慣的な使用条
件（６５０ｍｇ／Ω）では、好酸性の細胞は黒くなり過
ぎ、他の細胞は完全に透明に見えることから、自動光ダ
イオード装置による検出には全く好ましくない。血液サ
ンプルについて試薬濃度を減少させると同時に反応が行
われる温度を上昇させる新しい使用条件が開発された。
ｂｌａｃｋ）又はフォルミツク ブラック（ｆｏｒｍ
ｉｃ ｂｌａｃｋ） としても知られている）は、植物
組織学において１９３７年以来使用されている一般的な
試薬であり（キャノン エイチ、ジー、）（Ｃａｎｎｏ
ｎ Ｈ，Ｇ、）、ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ） 、１
３９．５４９）、顕微鏡下で観察するために好酸性の細
胞を特異的に染色するために使用される。（この試薬及
びその使用方法は、エム、ピエッテ（ＭＰｉｅｊｔｅ）
、Ａｎｎ、Ｂｉｏｌ、Ｃ１１ｎ、、１９６１．１９．
７２９−７３４、及びケイ、ローレンス（ＫＬａｗｒｅ
ｎｃｅ） 、Ａｍ、 Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｐａｊｈｏｌ
、 １９８１．７６．８１Ｃ１−８１２により記載
されている）フロラゾール ブラックの習慣的な使用条
件（６５０ｍｇ／Ω）では、好酸性の細胞は黒くなり過
ぎ、他の細胞は完全に透明に見えることから、自動光ダ
イオード装置による検出には全く好ましくない。血液サ
ンプルについて試薬濃度を減少させると同時に反応が行
われる温度を上昇させる新しい使用条件が開発された。
Claims (17)
- （１）少なくとも１つの赤血球溶解剤、クロラゾールブ
ラック、少なくとも１つの生理学的塩、少なくとも１つ
の三級又は四級アンモニウム塩、アルコール、界面活性
剤、保存剤及びアルキレングリコールを含むことを特徴
とする、自動フローサイトメトリーアナライザーで少な
くとも１つの白血球のサブ−ポピュレーションを測定す
るための試薬。 - （２）前記赤血球溶解剤が、サポニン及びドデシル硫酸
ナトリウムの単独又は組合わせたものの中から選択され
るものであることを特徴とする請求項（１）に記載の試
薬。 - （３）前記サポニンの濃度が、試薬１ｌあたり１００ｍ
ｇ〜７００ｍｇの間にあることを特徴とする請求項（２
）に記載の試薬。 - （４）前記ドデシル硫酸ナトリウムの濃度が、試薬１ｌ
あたり１００ｍｇ〜４００ｍｇの間にあることを特徴と
する請求項（２）に記載の試薬。 - （５）前記クロラゾールブラックの濃度が、試薬１ｌあ
たり５０ｍｇ〜６５０ｍｇの間にあることを特徴とする
請求項（１）〜（４）のいずれかに記載の試薬。 - （６）前記クロラゾールブラックの濃度が、１００ｍｇ
／ｌ未満であることを特徴とする請求項（５）に記載の
試薬。 - （７）前記試薬が、ｐＨを７．０と１２．０の間に維持
するために塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、炭酸ナト
リウムの単独または組合わせたものの中から選択された
生理学上の塩を含むことを特徴とする請求項（１）〜（
６）のいずれかに記載の試薬。 - （８）前記塩化ナトリウムの濃度が、試薬１ｌあたり１
．３ｇ〜９．５ｇの間にあることを特徴とする請求項７
に記載の試薬。 - （９）前記硫酸ナトリウムの濃度が、試薬１ｌあたり１
５ｇ〜２０ｇの間にあることを特徴とする請求項（７）
に記載の試薬。 - （１０）前記炭酸ナトリウムの濃度が、試薬１ｌあたり
４００ｍｇ〜７００ｍｇの間にあることを特徴とする請
求項（７）に記載の試薬。 - （１１）前記試薬が、最終的な比率で該試薬の０．０３
容量％〜０．１０容量％の範囲の少なくとも１つの三級
又は四級アンモニウム塩を含むことを特徴とする請求項
（１）〜（１０）のいずれかに記載の試薬。 - （１２）前記アルコールが、最終的な比率で前記試薬の
２〜１３容量％の範囲の一級、二級又は三級アルコール
の中から選択されたものであることを特徴とする請求項
（１）〜（１１）のいずれかに記載の試薬。 - （１３）前記界面活性剤が、最終的な比率で前記試薬の
０．２〜２容量％の範囲のポリオキシエチレンソルビタ
ンエステルの水溶液であることを特徴とする請求項（１
）〜（１２）いずれかに記載の試薬。 - （１４）前記保存剤が、最終的な比率で前記試薬の０．
１〜０．８重量％の範囲のグルタルアルデヒド及びホル
ムアルデヒドから選択されたものであることを特徴とす
る請求項（１）〜（１３）のいずれかに記載の試薬。 - （１５）前記アルキレングリコールが、最終的な比率で
前記試薬の２〜１３重量％の範囲のエチレングリコール
及びプロピレングリコールから選択されたものであるこ
とを特徴とする請求項（１）〜（１４）のいずれかに記
載の試薬。 - （１６）温度調節器でコントロールされたチェンバー中
に、請求項（１）〜（１５）のいずれかに記載の試薬と
接触させて血液サンプルを入れ、 抵抗性若しくは吸光度又はそれらの組み合わせたものの
変化を測定することにより白血球間で検出及び区別を行
い、 白血球のサブ−ポピュレーションの分布の標本である輪
郭の視覚的な表示を可能にするマトリクス又はヒストグ
ラムの形態でこれら測定結果を記録することを特徴とす
る、 自動フローサイトメトリーアナライザーで少なくとも一
つの白血球のサブ−ポピュレーションを測定する方法。 - （１７）前記試薬と血液との接触を、２０〜８０℃の温
度で２０秒未満行なうことを特徴とする請求項（１６）
に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8915166 | 1989-11-20 | ||
| FR8915166A FR2654744B1 (fr) | 1989-11-20 | 1989-11-20 | Reactif et methode d'utilisation de celui-ci pour la determination automatique en cytometrie de flux d'au moins une sous-population leucocytaire a partir du sang total. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03266999A true JPH03266999A (ja) | 1991-11-27 |
| JP2920690B2 JP2920690B2 (ja) | 1999-07-19 |
Family
ID=9387538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2317640A Expired - Fee Related JP2920690B2 (ja) | 1989-11-20 | 1990-11-20 | 全血からの少なくとも一つの白血球のサブ‐ポピュレーションの自動フローサイトメトリー測定用の試薬及び該試薬を用いた測定方法 |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5232857A (ja) |
| EP (1) | EP0430750B1 (ja) |
| JP (1) | JP2920690B2 (ja) |
| KR (1) | KR100194407B1 (ja) |
| AT (1) | ATE117803T1 (ja) |
| AU (1) | AU634600B2 (ja) |
| CA (1) | CA2030381C (ja) |
| DE (1) | DE69016377T2 (ja) |
| DK (1) | DK0430750T3 (ja) |
| ES (1) | ES2078327T3 (ja) |
| FI (1) | FI93658C (ja) |
| FR (1) | FR2654744B1 (ja) |
| GR (1) | GR3015847T3 (ja) |
| IE (1) | IE65785B1 (ja) |
| NO (1) | NO180787C (ja) |
| PT (1) | PT95928B (ja) |
| ZA (1) | ZA909212B (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0660113A3 (en) * | 1993-12-22 | 1995-09-06 | Toa Medical Electronics | A reagent for the analysis of leukocytes. |
| JP2008534946A (ja) * | 2005-03-31 | 2008-08-28 | セドゥー ディアグノスチックス | 血液検体の分析方法並びにそれを実施するための装置および試薬 |
| JP2008256713A (ja) * | 2001-02-23 | 2008-10-23 | Abx Sa | 生物学的細胞の同定および計数のための方法 |
| JPWO2009133928A1 (ja) * | 2008-05-02 | 2011-09-01 | アークレイ株式会社 | 白血球の分析方法およびそれに使用する分析試薬 |
| JP2014235076A (ja) * | 2013-06-03 | 2014-12-15 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 血球破壊試薬及びそれを用いる血球破壊方法 |
| JP2020030180A (ja) * | 2018-08-24 | 2020-02-27 | 東ソー株式会社 | 血液試料の溶血剤 |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2685482B1 (fr) * | 1991-12-24 | 1994-07-29 | Melet Francois | Procede de numeration des hematies ou des thrombocytes et dispositif de mise en óoeuvre. |
| EP0582736A1 (en) * | 1992-08-11 | 1994-02-16 | Abbott Laboratories | Flow cytometry sheath reagent for elimination of red cells with preservation of nucleated cells |
| DE69327775T2 (de) * | 1992-11-19 | 2000-06-21 | Sysmex Corp., Kobe | Verfahren zur Vorbehandlung für Blutanalyse |
| AU6235994A (en) * | 1993-02-25 | 1994-09-14 | Abbott Laboratories | Multipurpose reagent system for rapid lysis of whole blood samples |
| JP3467310B2 (ja) * | 1994-04-21 | 2003-11-17 | シスメックス株式会社 | 白血球分析用試薬及び白血球の分類方法 |
| JP3355038B2 (ja) * | 1994-08-03 | 2002-12-09 | シスメックス株式会社 | 白血球分類方法 |
| US5639630A (en) * | 1995-05-16 | 1997-06-17 | Bayer Corporation | Method and reagent composition for performing leukocyte differential counts on fresh and aged whole blood samples, based on intrinsic peroxidase activity of leukocytes |
| US5786224A (en) * | 1995-06-29 | 1998-07-28 | Coulter Corporation | Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood |
| US5817518A (en) * | 1995-12-18 | 1998-10-06 | Coulter International Corp. | Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood |
| IL135934A0 (en) * | 1997-11-11 | 2001-05-20 | Kowa Co | Method and apparatus for counting leukocytes |
| FR2782166B1 (fr) * | 1998-08-04 | 2000-10-06 | Abx Sa | Reactif pour la mesure de l'hemoglobine et la determination des leucocytes dans un echantillon de sang |
| US7745219B2 (en) * | 2003-07-21 | 2010-06-29 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Reagent composition for the analysis of residual white blood cells in leuko-reduced blood banking products |
| US20060228252A1 (en) * | 2004-04-20 | 2006-10-12 | Mills C R | Process and apparatus for treating implants comprising soft tissue |
| US7648676B2 (en) * | 2004-04-20 | 2010-01-19 | Rti Biologics, Inc. | Process and apparatus for treating implants comprising soft tissue |
| CN101349644B (zh) * | 2007-07-20 | 2012-06-27 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 一种白细胞分类试剂和其使用方法 |
| US8102161B2 (en) * | 2007-09-25 | 2012-01-24 | Tdk Corporation | Stable output in a switching power supply by smoothing the output of the secondary coil |
| CN105440725A (zh) * | 2008-01-04 | 2016-03-30 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 不对称菁类荧光染料，组合物及在生物样品染色中的用途 |
| CN101602762B (zh) * | 2008-06-10 | 2013-10-16 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 不对称菁类化合物、其制备方法及应用 |
| CN101726579B (zh) * | 2008-10-17 | 2014-06-18 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 血液检测试剂和方法 |
| CN101750274B (zh) * | 2008-12-17 | 2014-06-25 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 白细胞分类计数试剂、试剂盒以及白细胞分类计数的方法 |
| CN101988082B (zh) * | 2009-07-31 | 2015-04-08 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 白细胞分类计数试剂、试剂盒及其制备方法和白细胞分类计数的方法 |
| JP6738652B2 (ja) * | 2016-05-26 | 2020-08-12 | シスメックス株式会社 | 試料分析方法、試料分析装置および試薬 |
| CN109735484B (zh) * | 2018-12-12 | 2022-07-12 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种细胞保护剂、一种试剂及试剂的用途 |
| CN109655607B (zh) * | 2019-01-25 | 2021-02-23 | 广东菲鹏生物有限公司 | 红细胞裂解试剂及其应用 |
| CN113068683B (zh) * | 2021-03-03 | 2022-04-01 | 北京诚智光辉科技有限公司 | 一种液基细胞检查用细胞保存液及其制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4286963A (en) * | 1979-11-23 | 1981-09-01 | Coulter Electronics, Inc. | Differential lymphoid-myeloid determination of leukocytes in whole blood |
| US4346018A (en) * | 1980-06-16 | 1982-08-24 | Coulter Electronics, Inc. | Multi-purpose blood diluent and lysing agent for differential determination of lymphoid-myeloid population of leukocytes |
| US4529705A (en) * | 1983-06-06 | 1985-07-16 | Coulter Electronics, Inc. | Reagent for combined diluting and lysing whole blood |
| US4751179A (en) * | 1984-05-31 | 1988-06-14 | Coulter Electronics, Inc. | Method and reagents for differential determination of four populations of leukocytes in blood |
| AU602129B2 (en) * | 1985-09-06 | 1990-10-04 | Technicon Instruments Corportion | Method for the determination of a differential white blood cell count |
-
1989
- 1989-11-20 FR FR8915166A patent/FR2654744B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-11-14 AU AU66631/90A patent/AU634600B2/en not_active Ceased
- 1990-11-15 ES ES90403231T patent/ES2078327T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-15 DK DK90403231.5T patent/DK0430750T3/da active
- 1990-11-15 EP EP90403231A patent/EP0430750B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-15 AT AT90403231T patent/ATE117803T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-11-15 NO NO904963A patent/NO180787C/no unknown
- 1990-11-15 DE DE69016377T patent/DE69016377T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-16 ZA ZA909212A patent/ZA909212B/xx unknown
- 1990-11-19 PT PT95928A patent/PT95928B/pt not_active IP Right Cessation
- 1990-11-19 US US07/615,710 patent/US5232857A/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-19 IE IE416390A patent/IE65785B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-11-19 KR KR1019900018731A patent/KR100194407B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-11-19 CA CA002030381A patent/CA2030381C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-20 JP JP2317640A patent/JP2920690B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-20 FI FI905725A patent/FI93658C/fi not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-04-17 GR GR950400977T patent/GR3015847T3/el unknown
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0660113A3 (en) * | 1993-12-22 | 1995-09-06 | Toa Medical Electronics | A reagent for the analysis of leukocytes. |
| US5618733A (en) * | 1993-12-22 | 1997-04-08 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent for analyzing leucocytes |
| JP2008256713A (ja) * | 2001-02-23 | 2008-10-23 | Abx Sa | 生物学的細胞の同定および計数のための方法 |
| JP2008534946A (ja) * | 2005-03-31 | 2008-08-28 | セドゥー ディアグノスチックス | 血液検体の分析方法並びにそれを実施するための装置および試薬 |
| JP4838300B2 (ja) * | 2005-03-31 | 2011-12-14 | セドゥー ディアグノスチックス | 血液検体の分析方法並びにそれを実施するための装置および試薬 |
| JPWO2009133928A1 (ja) * | 2008-05-02 | 2011-09-01 | アークレイ株式会社 | 白血球の分析方法およびそれに使用する分析試薬 |
| JP2014235076A (ja) * | 2013-06-03 | 2014-12-15 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 血球破壊試薬及びそれを用いる血球破壊方法 |
| JP2020030180A (ja) * | 2018-08-24 | 2020-02-27 | 東ソー株式会社 | 血液試料の溶血剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE117803T1 (de) | 1995-02-15 |
| DE69016377D1 (de) | 1995-03-09 |
| NO180787C (no) | 1997-06-18 |
| NO180787B (no) | 1997-03-10 |
| US5232857A (en) | 1993-08-03 |
| JP2920690B2 (ja) | 1999-07-19 |
| GR3015847T3 (en) | 1995-07-31 |
| NO904963D0 (no) | 1990-11-15 |
| AU634600B2 (en) | 1993-02-25 |
| PT95928A (pt) | 1991-09-13 |
| DK0430750T3 (da) | 1995-03-20 |
| FI905725A (fi) | 1991-05-21 |
| DE69016377T2 (de) | 1995-05-24 |
| ZA909212B (en) | 1991-10-30 |
| IE904163A1 (en) | 1991-05-22 |
| IE65785B1 (en) | 1995-11-15 |
| FR2654744A1 (fr) | 1991-05-24 |
| EP0430750A1 (fr) | 1991-06-05 |
| FR2654744B1 (fr) | 1992-03-13 |
| FI905725A0 (fi) | 1990-11-20 |
| FI93658B (fi) | 1995-01-31 |
| EP0430750B1 (fr) | 1995-01-25 |
| ES2078327T3 (es) | 1995-12-16 |
| KR100194407B1 (ko) | 1999-06-15 |
| FI93658C (fi) | 1995-05-10 |
| AU6663190A (en) | 1991-05-23 |
| NO904963L (no) | 1991-05-21 |
| CA2030381C (en) | 1997-03-25 |
| PT95928B (pt) | 1998-01-30 |
| CA2030381A1 (en) | 1991-05-21 |
| KR910010188A (ko) | 1991-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH03266999A (ja) | 全血からの少なくとも一つの白血球のサブ‐ポピュレーションの自動フローサイトメトリー測定用の試薬及び該試薬を用いた測定方法 | |
| US7625712B2 (en) | Method for a fully automated monoclonal antibody-based extended differential | |
| US4751179A (en) | Method and reagents for differential determination of four populations of leukocytes in blood | |
| JP4366478B2 (ja) | 赤芽球の識別方法 | |
| EP1004880B1 (en) | Erythroblast diagnostic flow-cytometry method and reagents | |
| US7674598B2 (en) | Method for a fully automated monoclonal antibody-based extended differential | |
| EP0268766B1 (en) | Method of classifying leukocytes by flow cytometry and reagents used in the method | |
| JP4433611B2 (ja) | 有核の赤血球の識別方法 | |
| US6632676B1 (en) | Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells | |
| US20040241769A1 (en) | Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells | |
| JPH11507733A (ja) | 血液中の白血球の鑑別式決定のための試薬及び方法 | |
| JP4087560B2 (ja) | 赤芽球の識別方法 | |
| CA1319592C (en) | Conservative whole blood sample preparation technique | |
| JPH0599919A (ja) | 白血球分析方法 | |
| US3476514A (en) | Cancer cytoscreening | |
| WO1996034283A1 (en) | Lytic system utilizing propionic acid for leukocytes differentiation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080430 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090430 Year of fee payment: 10 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |