JPH03261724A - 脱髄性疾患治療用医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦと略す）を有効成分と
する脱髄性疾患に対する治療用医薬組成物に関する。

（従来の技術） 脱髄性疾患は神経系の髄鞘の破壊を主病変とする疾患で
あり、主に多発性硬化症と急性散在性脳を髄炎の２つに
分類されるほか、広汎性硬化症や白質ジストロフィなど
も含まれる。現在、脱髄性疾患の発現には、髄鞘に対す
るアレルギー性の反応が関与していると考えられている
が、その様な反応を惹き起こす原因についてはよく判っ
ていない。多発性硬化症は寛解・増悪を繰り返す点で急
性散在性脳を髄炎や他の脱髄性疾患と異なるが、急性散
在性脳を髄炎は多発性硬化症へも移行し得る。

これらの疾患の症状は運動障害、知覚障害を主とする神
経症状であり、急性期にはしばしば致死的となる。この
ような重篤な疾患であるにも拘らず、確実な治療法は存
在しないのが現状である。

多発性硬化症の治療に際しては、急性期において副腎皮
質ホルモン様剤が対症療法的に投与されるほか、慢性期
にはリハビリテーションンの施行や感染に対する予防処
置がとられるが、いずれの場合においても治癒には結び
つかない。急性散在性脳を髄炎に対しては、副腎皮質ホ
ルモン様剤の投与が有効な場合があるが、予後は必ずし
もよくなく、神経症状が残ったり、多発性硬化症へ移行
したりする点で問題がある。

Ｃ問題点を解決するための手段） 腫瘍壊死因子、すなわちＴＮＦは多様な生物活性を有す
る公知のサイトカインである。本発明者らはＴＮＦに対
し、その薬理作用について鋭意研究を続けていたところ
、意外にも、ＴＮＦが脱髄性疾患抑制作用を有すること
を発見し、該知見に基づきさらに研究を続け、本発明を
、完成した。

本発明によれば、脱髄性疾患治療に有効な量のＴＮＦと
少なくとも一種の医薬投与可能な担体、希釈剤あるいは
賦形剤を含有する脱髄性疾患治療用の新規医薬組成物が
提供される。脱髄性疾患患者の治療に用いられる本発明
の医薬組成物においては、腫瘍壊死因子は、ヒト由来の
細胞から、あるいは組替えＤＮＡ技術によって製造され
るものであることが好ましい。このような組成物には、
例えば、静脈内注射用、筋肉的注射、皮下注射用、皮肉
注射用、経口投与用、直腸内投与用、髄腔内投与用、外
部施用用、局所施用用、点眼用などに適合する投与形態
を与えることができる。さらに、本発明の医薬組成物は
ポリペプチド組成物に適合する投与形態を与えることが
できる。

腫瘍壊死因子、すなわちＴＮＦは、生存能力のあるマイ
クロバクテリウム　ボーヴアイス（Ｍｉｃｒｏ〜ｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　ｂｏｖｉｃｅ）のバチルスカルメンドー
グニリン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｃａ１ａ＋ｅｔｔｅ−Ｇ
ｕｅｒｉｎ）株（ＢＧＧ）を前投与後、細菌のエンドト
キシンを静脈内投与したマウスの血清中から初めて発見
された［プロシーデインダス・オブ・ナショナル・アカ
デ旦−・オブ・サイエンス・ニー・ニス・ニー（Ｐｒｏ
ｃ、Ｎａ１．＾ｃａｄ　。

Ｓｃｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ、）７２巻第９号、３６６６−７０
頁（１９７５年）〕。

ＴＮＦを含有するマウス血清は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験
で多数のマウス及びヒト形質転換細胞系に対して細胞傷
害活性作用あるいは静細胞活性を示すが、これらの作用
は正常細胞に対しては非常に弱い。

ＴＮＦを含有するマウス血清は、マウスに移植可能な腫
瘍の壊死を生しせしめる。ＴＮＦはラット、ウサギ及び
モルモットの血清中にも産生ずる。さらに、ＴＮＦは哺
乳類由来の単核食細胞、繊維芽細胞、Ｂ細胞などによっ
てもある条件下において産生され得るものである。これ
に関しては、ロイドジエイ・オールド（Ｌｌｏｙｄ　Ｊ
、０１ｄ）によってサイエンテイフ４　ツク　アメリカ
ン（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ａｍｅｒ−４ｃａｎ）　２
５８巻第５号５９−７５頁（１９８８年５月）の総説に
引用された文献中に多くの報告がある。本発明において
は、哺乳類由来の血清あるいは哺乳類由来の細胞から得
られる上記ＴＮＦを活性成分として用いることができる
が、ヒトの患者に使用するためには、免疫適合性の点か
らヒトＴＮＦを含有する医薬組成物を用いることが好ま
しい。

本発明において使用するのに適したヒ）ＴＮＦは、組換
えＤＮＡ技術によって製造することができる。あるいは
また、ヒトＴＮＦはヒト由来の細胞を培養することによ
っても製造することができる。

組換えＤＮＡ技術によりヒトＴＮＦを製造する方法の通
例としては、たとえば、シライ　ティー（Ｓｈｉｒａｉ
　Ｔ、）ら、ネーチ＋　−（Ｎａ　ｔｕｒｅ）　、　３
１３巻８０３８０６頁（１９８５年）や特開昭６０−２
５２４９６号（欧州特許出願公開第０．１５８，２８６
号に対応）に記載されている。

例えば、大腸菌の培養によって均質なヒ）ＴＮＦを得る
ことができる。精製中のヒトＴＮＦ活性は、Ｌ−Ｍ細胞
［アメリカン　タイプ　カルチャーコレクション、シー
シーエル１．２（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１
ｔ−ｕｒｅ　ｃｏｒｅｃｔｉｏｎ、ＣＣＬ　１．２）］
　を用いたウィリアムソン等（Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ　
ｅｔ　ａｌ、＋）の方法の変法によるマウスルー細胞に
対する殺細胞活性によって知ることができる。従って、
必要に応してより高純度ヒトＴＮＦは、ダイアン　ベニ
力（Ｄｉａｎｅ　Ｐｅｎｎ１ｃａ）　　らがネーチ＋　
　（Ｎａ　ｔｕｒｅ）、３１２巻、２０−２７頁（１９
８４年１２月）に記載した方法や、欧州特許出願公開第
１６８２１４号及び第１５５５４９号等に記載されてい
る他の公知の方法によっても製造することができる。

ヒトＴＮＦを構成するアミノ酸の数は、ＴＮＦを得るた
めに用いる製造方法によって異なる。たとえば、欧州特
許出廟公開第０１５８２８６号に記載されている組換え
ＤＮＡ技術によって製造されるヒ）ＴＮＦは１５５個の
アミノ酸から成る。一方、上記のベニ力（Ｐｅｎｎｉｃ
ａ）等の方法によって製造されるヒトＴＮＦは１５７個
のアミノ酸と、そのＮ末端に結合した２個のアミノ酸か
らなる配列を有する。

組換えＤＮＡ技術によって製造されるＴＮＦは、上記の
アミノ酸配列のＮ末端にメチオニン残基が結合している
ポリペプチドと、上記のアミノ酸配列のＮ末端にヒ）Ｔ
ＮＦのシグナルペプチドの一部分あるいは全部が結合し
ている中間体も包含する。自然の変異、あるいは人為的
変異によって、そのポリペチドの活性に有為な変化を生
じることなくポリペプチドをコードするＤＮＡの構造の
一部を変えることは可能である。

本発明で用いることのできるし）ＴＮＦは、上記のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドの相同変異体（ｈｏｍｏ
ｌｏｇｏｕｓ　ｖａｒｉａｎｔ）に相当する構造を有す
るポリペプチドを包含する。相同変異体の例として、米
国特許第４．６７７．０６３号と第４，６７７．０６４
号に記載されているペプチドが挙げられ、この開示内容
は、参照によって本明細書に記載する。これらすべての
生理活性ペプチドも、以下「ヒ）ＴＮＦ。

と称する。

天然のし）ＴＮＦは、生化学的修飾あるいは化学的修飾
を受は易く、また、２量体や３量体のような会合体の形
になり易い、天然に産生されるこれらのＴＮＦポリペプ
チドもまた、以下「ヒトＴＮＦ、と称し、本発明の医薬
、ｌｌａ物の活性酸分として使用できる。

ＴＮＦは現在、抗癌剤としての臨床研究が進められてい
るほか、抗炎症・鎮痛作用（日本公開特許公報昭６２−
２９２７２７）、免疫複合体病として定義される自己免
疫疾患に対する抑制作用（日本公開特許公報昭６３−３
０４２６）　、等をも有することが報告されている。し
かし、ＴＮＦが脱髄性疾患を抑制するという報告はいっ
さいなされていない、その反対に、ＴＮＦは多発性硬化
症における髄鞘破壊に関与する物質の１つではないかと
いう推測［（ホフマンら、ジャーナル・オブ・エクスペ
リメンタル・メディシン（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）
第１７０巻６０７−１２頁（１９８９年）］すらなされ
ていた、ところが、発明者らは脱髄性疾患の動物モデル
としてモルモットの実験的アレルギー性脳を髄炎を用い
た実験において、意外にもＴＮＦを投与すると脱髄性疾
患の発現を抑制することを見出した。すなわち、本発明
は既に知られている作用のいずれとも異なった新しいＴ
ＮＦの作用の発見に基づくものである。

以下にその具体的な実験例をしめす。

ｌ」側舛 実験的アレルギー性脳を髄炎（ＥＡＥ）は脱髄性疾患の
実験モデルとして古くがら研究されている〔田平ら、実
験的アレルギー性脳を髄炎（ＥＡＥ）、「多発性硬化症
−基礎と臨床−Ｊ　ｐ、２４１．新興医学出版社、　（
１９８５年）］。発明者らは、ハートレイ系雌性モルモ
ット（５週令）の足踏にウシ由来ミニリン塩基性蛋白と
フロイント完全アジュバントノエマルションヲ０．１−
１皮下投与して、ＥＡＥを惹起した。ヒ）ＴＮＦは、欧
州特許出願公開第０．１５８．２８６号に記載の方法に
従って組換えＤＮＡ技術によって製造した。このＴＮＦ
を惹起注射の日より毎日３万単位を１群８匹のモルモッ
トに対して１２日間腹腔内投与した。対照群８匹には同
じスケジュールでＴＮＦを溶解するのに用いている溶液
（０，１！ゼラチン含有リン酸緩衝液）のみを投与した
。脳を髄炎の発症は、毎日の神経症状の観察によって記
録し、２１日後の脳とを髄の病理学的検索により確認し
た。惹起注射後２１日間を観察期間とし、その期間に記
録された最大症状の個体数について検定を行った。結果
は別表に示すごとく、ＴＮＦ投与群においてＷｉｌｃｏ
ｘｏｎの順位検定で統計的に有意なＥＡＥの発症の抑制
が観察された。死亡数についても対照群では８匹中２匹
が急性の脳を髄炎で死亡しているのに対して、ＴＮＦ投
与群では死亡例は見られなかった。

（以下余白） 別表 （注）対照群とＴＮＦ投与投与量に一１１ｃｏｘｏｎの
順位検定で、ｐ＜０．０５の有意差あり。

症状の判定基準　−：正常 ＋　：後肢の弱り ＋＋二歩行異常 ＋＋＋：麻痺、振戦 ＋＋＋＋　：死亡 以上の結果より明らかなる如く、ヒトＴＮＦは厘髄性疾
患の発症を抑制する作用を有していることを示している
。

本発明の脱髄性疾患の治療用医薬組成物は静脈内、筋肉
内、髄腔内、皮下及び皮肉注射剤として、または経口剤
、外用剤、坐剤、点眼剤として投与することが出来る。

製剤例としては、溶液または凍結乾燥品が挙げられる。

その製剤化にあったでは、賦形剤として、バレイショデ
ンプン、トウモロコシデンプン、デキストリン、小麦、
デン粉等のデンプン類、ヒドロキシプロピルスターチ等
のデンプン誘導体、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マントニ
トール、ソルビトール等のＩｉ類、メチルセルロース、
カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル
ロース等のセルロース類、塩化ナトリウム、ホウ酸、硫
酸カルシウム、リン酸カルシウム類、沈降炭酸カルシウ
ム等の無機物質、流動化剤としては、重質酸化マグネシ
ウム、台底ケイ酸アルミン酸マグネシウム、含水ケイ酸
、タルク、ステアリン酸マグネシウム、無水ケイ酸、カ
オリン（にａｏｌｉｎ）等、結合剤としては、ポリエチ
レングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルア
ルコール等の合成高分子及びこれらの誘導体、アラビア
ゴム、トラガント、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、
グルテン等の天然物、安定化剤としては、アルブミン、
ゼラチン、グロブリン、プロタミン、プロタミン塩等の
蛋白質、及びア主ノ酸類、ｐＨ調節剤としては、塩酸、
水酸化ナトリウム、リン酸塩類、クエン酸塩、炭酸塩等
を使用する事が出来る。

本発明の他の！１様によれば、脱髄性疾患の治療に有効
な量のＴＮＦを脱髄性疾患の患者に投与することからな
る脱髄性疾患の治療方法が提供される。

本発明の医薬組成物は、底入に対するＴＮＦの一日投与
量として、一般に約５０から１００．０００．０００単
位の用量で、好ましくは、髄腔内投与の場合には、約５
０からｓｏｏ、　ｏｏｏ単位の用量で、静脈内投与や筋
肉的投与のような一般的な投与のばあい、約１，０００
から１０，０００，０００単位の用量で、そして経口投
与の場合には、約１０，０００からｉｏｏ、ｏｏｏ、ｏ
ｏ。

単位の用量で脱髄性疾患の患者に投与することができる
。−日の投与量は患者の年齢や症状によって異なる。上
記のように本発明の医薬組成物は、通常、数日から数週
間にわたり、−日５０からｉｏｏ、　ｏｏｏ、　ｏｏｏ
単位の用量で投与することができる。

この−日投与量は、−度に、あるいは数回に分けて患者
に投与することができる。本発明の医薬組成物は、連日
、あるいは、間隔をおいて投与することができる。その
代表的な投与方法の例を次に示す。

ａ）１週間から４週間の連日投与 ｂ）６日間毎日投与した後、７日間から数週間の体薬を
はさむ間歇的投与 ｃ）１週間に１回投与 ｄ）５日間毎日投与した後、１ケ月の体薬期間をはさむ
間歇投与。

以上のように本発明によれば、現在は確実な治療法が存
在しない脱骨髄性疾患の治療用医薬組成物の提供が可能
となる。

以下に実施例にて本発明の一実施態様を具体的に説明す
る。

（実施例） ヒトＴＮＦを上記組換えＤＮＡ技術によって調製し、得
られるヒトＴＮＦを用いて下記の組成を持つ注射用凍結
乾燥製剤を調製する。

組成 ヒトＴＮＦ ｓｏｏ、　ｏｏｏ単位 Ｄ−マンニトール 正常血清アルブミン（ヒト） 塩化ナトリウム リン酸二水素ナトリウム （水酸化ナトリウムでｐ）ｌ　ｓ、。

０　ｖｘｇ ０　　ｍｇ ２．０　ａ＋ｇ ３．９　ｍｇ に調製）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 　腫瘍壊死因子を有効成分とする脱髄性疾患の治療用医
   薬組成物。