JPH03291237A

JPH03291237A - アレルギー性疾患治療用医薬組成物

Info

Publication number: JPH03291237A
Application number: JP2093200A
Authority: JP
Inventors: Yoshiki Otsuka; 大塚　善樹; Kazuyoshi Hori; 一良堀; Hiroshi Hayashi; 林　紘
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1990-04-10
Filing date: 1990-04-10
Publication date: 1991-12-20

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、腫瘍壊死因子（以下ＴＮＦと略す）を有効成
分とするアレ１シギ一性疾患治療用医薬組成物に関する
。

（従来の技術）気管支喘息、アレルギー性鼻炎、花粉症、薬物ｙしｎキ
ー、などによって代表されるアレルギー性疾患は特定の
抗原に対する特異的な免疫反応に基づく全身性または局
所性の障害である。７しｌＬギー反応は成因や症状から
４つの型に分類される。すなわち、主にＩｇＢ抗体が関
与し、血管透過性亢進や平滑筋収縮を特徴とする即時型
のＩ型アレルギー、抗体と補体が細胞を傷害する■型ア
レルギー、抗原と抗体の免疫複合体が血管壁に沈着して
炎症を起こす■型７Ｈギー、細胞性免疫が関与する遅延
型の■型７１ｚ３ギー、の４種類である。

しかし、実際のヒトのアレルギー性疾患では、幾つかの
型の反応が組合されて起こる場合が多い。例えば、気管
支喘息は、■型、■型、■型が組合されて起こると考え
られているし、アレ１シギー性血管炎においてもＩ型と
■型が関与する病態が存在する。

アレルギー性疾患治療剤は、その疾患に関与するアレル
ギー反応のいずれかを抑制することにより、その治療目
的を遠戚することができる。現在までに気管支拡張剤Ｌ
　メデイエータ−遊離抑制剤、　抗ヒスタミン　剤、ス
テ■イＦ剤、免疫抑制剤などがアレルギー性疾患の治療
に用いられてきているが、その効果はしばしば必ずしも
充分なものではない。

（問題点を解決するための手段）腫瘍壊死因子、すなわちＴＮＦは多様な生物活性を有す
る公知のサイト力インである０本発明者らはＴＮＦに対
し、その薬理作用について鋭意研究を続けていたところ
、意外にも、ＴＮＦがアレルギー反応抑制作用を有する
ことを発見し、該知見に基づきさらに研究を続け、本発
明を完成した。

本発明によれば、アレルギー性疾患の治療に有効な量の
ＴＮＦと少なくとも一種の医薬投与可能な担体、希釈剤
あるいは賦形剤を含有する７レルギー性疾患治療用の新
規医薬組成物が提供される。アレルギー性疾患患者の治
療に用いられる本発明の医薬組成物においては、腫瘍壊
死因子は、ヒト由来の細胞から、あるいは組替えＤＮＡ
技術によって製造されるものであることが好ましい。こ
のような組成物には、例えば、静脈内注射用、筋肉内注
射、皮下注射用、皮肉注射用、経口投与用、直腸内投与
用、外部施用用、局所施用用、点眼用、吸入用などに適
合する投与形態を与えることができる。さらに、本発明
の医薬組成物はポリペプチド組成物に適合する投与形態
を与えることができる。

腫瘍壊死因子、すなわちＴＮＦは、生存能力のあるマイ
クロバクテリウム　ボーヴアイス（Ｍｉｃｒ。

ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｂｏｖｉｃｅのバチルスカルメ
ツドーグニリン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｃａｌｍｅｔｔｅ
−Ｇｕｅｒｉｎ）株（ＩＩＧＧ）を前投与後、細菌のエ
ンドトキシンを静脈内投与したマウスの血清中から初め
て発見された［ブロシーデインダス・オブ・ナショナル
・アカデミ−・オブ・サイエンス・ニー・ニス・ニー（
Ｐｒｏｃ、Ｎａ１．Ａｃ−ａｄ、　Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ
、）７２巻第９号、３６６６−７０頁（１９７５年）］
、ＴＮＦを含有するマウス血清は、ｉｎ　ｖｉｔ−ｎ　
試験で多数のマウス及びヒト形質転換細胞系に対して細
胞傷害活性作用あるいは殺細胞活性を示すが、これらの
作用は正常細胞に対しては非常に弱い。ＴＮＦを含有す
るマウス血清は、マウスに移植可能な腫瘍の壊死を生じ
せしめる。ＴＮＦはラット、ウサギ及びモルモットの血
清中にも産生ずる。さらに、ＴＮＦは哺乳類由来の単核
食細胞、繊維芽細胞、Ｂ細胞などによってもある条件下
において産生され得るものである。これに関しては、ロ
イド　ジェイ・オールド（Ｌｌｏｙｄ　Ｊ、０１ｄ）に
よってサイエンティフィック　アメリカン（Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ　ａｍｅｒｉｃａｎ）　２５８巻第５号５９
−７５頁（１９８８年５月）の総説に引用された文献中
に多くの報告がある０本発明においては、哺乳類由来の
血清あるいは哺乳類由来の細胞から得られる上記ＴＮＦ
を活性成分として用いることができるが、ヒトの患者に
使用するためには、免疫適合性の点がらヒ）ＴＮＦを含
有する医薬組成物を用いることが好ましい。

本発明において使用するのに適したヒトＴＮＦは、組換
えＤＮＡ技術によって製造することができる。あるいは
また、ヒトＴＮＦはヒト由来の細胞を培養することによ
っても製造することができる。

組換えＤＮＡ技術によりヒトＴＮＦを製造する方法の通
例としては、たとえば、シライ　ティー（Ｓｈｉｒａｉ
　Ｔ、）　　ら、ネーチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ）、３１３
巻８０３゜８０６　真（１９８５年〉や特開昭６０−２
５２４９６号（欧州特許出願公開第０．１５８，２８６
号に対応）に記載されている。例えば、大ｍ菌の培養に
よって均質なヒトＴＮＦを得ることができる。精製中の
ヒトＴＮＦ活性は、Ｌ−Ｍ細胞［アメリカン　タイプ　
力ルチャーコレクシゴン、シーシーエル１．２（Ａｍｅ
ｒｉｃａｎＴｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　ｃｏｒｅｃｔｉ
ｏｎ、ＣＣＬ　１．２）］　　を用いたウィリアムソン
等（Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ　ｅｌ、　ａｌ、）の方法の
変法によるマウスルー細胞に対する殺細胞活性によって
知ることができる。従って、必要に応じてより高純度の
ヒトＴＮＦは、グイアン　ベニ力（ＤｉａｎｅＰｅｎｎ
ｉｃａ）らがネーチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）、３１２巻
、２０−２７頁（１９８４年１２月）に記載した方法や
、欧州特許出願公開第１６８２１４号及び第１５５５４
９号等に記載されている他の公知の方法によっても製造
する□ことができる。

ヒトＴＮＦを構成するアミノ酸の数は、ＴＮＦを得るた
めに用いる製造方法によって異なる。たとえば、欧州特
許出願公開第０１５８２８６号に記載されている組換え
ＤＮＡ技術によって製造されるヒトＴＮＦは１５５個の
アミノ酸から成る。一方、上記のべ二カ（Ｐｅｎｎｉｃ
ａ）等の方法によって製造されるヒトＴＮＦは１５７個
のアミノ酸と、そのＮ末端に結合した２個のアミノ酸か
らなる配列を有する。

組換えＤＮＡ技術によって製造されるＴＮＦは、上記の
アミノ酸配列のＮ末端にメチオニン残基が結合している
ポリペプチドと、上記のアミノ酸配列のＮ末端にヒトＴ
ＮＦのシグナルペプチドの一部分あるいは全部が結合し
ている中間体も包含する。自然の変異、あるいは人為的
変異によって、そのボリペチドの活性に有為な変化を生
じることなくポリペプチドをコードするＤＮＡの構造の
一部を変えることは可能である。

本発明で用いることのできるヒトＴＮＦは、上記のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドの相同変異体（ｈｏａ＋
ｏｌｏｇｏｕｓ　ｖａｒｉａｎｔ）に相当する構造を有
するポリペプチドを包含する。相同変異体の例として、
米国特許第４，６７７．０６３号と第４，６７７．０６
４号に記載されているペプチドが挙げられ、この開示内
容は、参照によって本明細書に記載する。これらすべて
の生理活性ペプチドも、以下「ヒ）ＴＮＦＪと称する。

天然のし）ＴＮＦは、生化学的修飾あるいは化学的修飾
を受は易く、また、２量体や３量体のような会合体の形
になり易い。天然に産生されるこれらのＴＮＦポリペプ
チドもまた、以下「ヒトＴＮＦＪと称し、本発明の医薬
組成物の活性成分として使用できる。

ＴＮＦば現在、抗癌剤としての臨床研究が進められてい
るほか、非アレルギー性炎症モデルを用いた実験結果か
ら抗炎症・鎮痛作用を有することが報告されている（日
本公開特許公報昭６２−２９２７２７　＞ほか、免疫複
合体病として定義される自己免疫疾患抑制作用をも有す
ることが報告されている（日本公開特許公報昭６３−３
０４２６　）。しかし、遅延型および即時型の７１ｚル
ギ一反応に対するＴＮＦの抑制作用については全く明ら
かにされていない。その反対に、ＴＮＦは遅延型アレル
ギー反応の発現に関与しているのではないか、という推
測すらなされていた【ジャヤラマン（Ｊａｙａｒａｍａ
ｎ　）ら、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、Ｉｏ
＋ｍｕｎｏ＋、）　、１４４巻、９４２−９５１頁、（
１９９０年）１゜ところが発明者らはマウスを用いた実
験モデルにおいて、意外にもＴＮＦの投与が遅延型およ
び即時型のアレルギー反応を抑制することを見出した。

すなわち、本発明は既に知られている作用のいずれとも
異なった新しいＴＮＦの作用の発見に基づくものである
。以下にその具体的な実験例をしめす。

実験例アレルギー反応のモデルとして、抗原特異的な遅延型ア
レルギー反応（■型アレルギー）および、それに付随し
て起こる即時型のアレルギー反応（■型アレルギー）に
ついてマウスの足蹴反応を用いて検討した。

抗原はキー本−ルリンベフト　（笠貝）　由来ヘモシア
ニン　（以下ＫＬＨと略す）を使用した。７週齢のＢＡ
ＬＢ／ｃマウスにＫ　　Ｌ　Ｈｏ、１ｍｇ　　を完全７
０インド７ンユバント　と共に尾根部に皮下感作し、１
週間後にＫ　Ｌ　Ｈｏ、０１ｍｇを足跡に二次感作する
ことによってアレルギー反応を誘起した。

ヒトＴＮＦは、欧州特許出願公開第０．１５８，２８６
号に記載の方法に従って組換えＤＮＡ技術によって製造
したものを用い、１０，０００単位／匹を１日１回、−
次感作の当日、２日後、５日後、および１週間後の二次
感作直前の計４回尾静脈内投与した。対照群には、ヒト
ＴＮＦを溶解するのに用いた溶液（０，１Ｘｔうｆシ含
有リン酸緩衝液）をヒ）ＴＮＦ投与投与量しスケジュー
ル、同し投与法で投与した。

また、−次感作なしで二次感作のみを行う非感作群を陰
性コン）ａ−ルとして設定した。足踏のアレルギー反応
は、足跡の厚みを二次感作の直前、および２時間後（即
時型）、２４時間後（遅延型）にノギスで測り、足跡の
厚みの増加として表わした。

結果は別表に示すごとく、対照群では二次感作の２時間
後、２４時間後の両方において非感作群に対して足跡の
厚みの有意な増加を認めたが、ヒ）ＴＮＦ投与投与量、
そのような増加は両方の時間において有意に抑制された
。

（以下余白）別表（注）数値は１群５匹のマウスの平均上標準偏差を表わ
す。

以上の結果より、ヒ）ＴＮＦの投与は遅延型（■型）お
よび即時型（Ｉ型）の７レルギ一反応を抑制する作用を
有していることがわかり、ＴＮＦのアレルギー性疾患治
療剤としての有用性が明らかとなった。

本発明の７１ｒルギ一性疾患治療用医薬組戒物は静脈内
、筋肉内、皮下及び皮肉注射剤として、または経口剤、
外用剤、全開、点眼剤、吸入剤として投与することが出
来る。

製剤例としては、溶液または凍結乾燥品が挙げられる。

その製剤化にあったでは、賦形剤として、バレイショデ
ンプン、トウモロコシデンプン、デキストリン、小麦、
デン粉等のデンプン類、ヒドロキシプロピルスターチ等
のデンプン誘導体、乳糖、ブドウ糖、シｇ糖、マントニ
トール、ソルビトール等の糖類、メチルセルロース、カ
ルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロ
ース等のセルロース類、塩化ナトリウム、ホウ酸、硫酸
カルシウム、リン酸カルシウム類、沈降炭酸カルシウム
等の無機物質、流動化剤としては、重質酸化マグネシウ
ム、合成ケイ酸アル旦ン酸マグネシウム、含水ケイ酸、
タルク、ステアリン酸マグネシウム、無水ケイ酸、カオ
リン（Ｋａｏｌｉｎ）等、結合剤としては、ポリエチレ
ングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアル
コール等の合成高分子及びこれらの誘導体、アラビアゴ
ム、トラガント、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、グ
ルテン等の天然物、安定化剤としては、アルブミン、ゼ
ラチン、グロブリン、プロタミン、プロタミン塩等の蛋
白質、及びアミノ酸類、ｐｔ＋調節剤としては、塩酸、
水酸化ナトリウム、リン酸塩類、クエン酸塩、炭酸塩等
を使用する事が出来る。

本発明の医薬組成物は、底入に対するヒトＴＮＦの一日
投与量として、−ｇに約５０から１００．０００，００
０単位の用量で、好ましくは、局所投与の場合には、約
５０から５００　、０００単位の用量で、静脈内投与や
筋肉内投与のような一般的な投与の場合、約１　、００
０から１０，０００，０００単位の用量で、そして経口
投与の場合には、約１０，０００からｉｏｏ、ｏｏｏ、
ｏｏｏ単位の用量でアレルギー性疾患患者に投与するこ
とができる。−日の投与量は患者の年齢や症状によって
異なる。上記のように本発明の医薬組成物は、通常、数
日から数週間にわたり、−日５０から１００，０００，
０００単位の用量で投与することができる。この−日投
与量は、−度に、あるいは数回に分けて患者に投与する
ことができる。本発明の医薬組成物は、連日、あるいは
、間隔をおいて投与することができる。その代表的な投
与方法の例を次に示す。

ａ）１週間から４週間の連日投与ｂ）６日間毎日投与した後、７日間から数週間の体薬を
はさむ間歇的投与Ｃ）１週間に１回投与ｄ）５日間毎日投与した後、１ケ月の体薬期間をはさむ
間歇投与。

以上のように本発明によれば、アレルギー性疾患治療用
医薬組成物の提供が可能となる。

以下に実施例にて本発明の一実施態様を具体的に説明す
る。

（実施例）ヒ１−ＴＮＦを上記組換えＤＮＡ技術によって調製し、
得られるヒトＴＮＦを用いて下記の組成を持つ注射用凍
結乾燥製剤を調製する。

組成ヒトＴＮＦＤ−マンニトール正常血清アルブミン（ヒト）塩化ナトリウムリン酸二水素ナトリウム（水酸化ナトリウムでｐｎ　ｓ、。

５００．０００単位０　ｒａｇ０　ｍｇ２．０　ｍｇ３．９　ｍｇに調製）以上

Claims

【特許請求の範囲】

（１）腫瘍壊死因子を有効成分とするアレルギー性疾患
治療用医薬組成物。