CN115212293A - 一种融合蛋白的制药用途 - Google Patents

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Abstract

一种融合蛋白的制药用途。本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)及免疫球蛋白杂合Fc融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途。

Description

一种融合蛋白的制药用途
技术领域
本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及免疫球蛋白杂合Fc(Fc)融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途。
背景技术
体重管理，是困扰很多现代人的一个难题，包括减轻体重、治疗和/或预防肥胖症、治疗和/或预防超重以及防止体重增加等。其中“超重”是指受试者的BMI为至少26，如至少26至小于30；“肥胖症”是指受试者的BMI为至少30。其中，“BMI”是指受试者的体重(以千克为单位)除以该受试者的身高(以米为单位)的平方，单位为kg/m2。肥胖症是一种以体内脂肪过度续集和体重超常为特征的慢性代谢性疾病，是引起高血压、糖尿病、心脑血管病、肿瘤等慢性非传染型疾病的危险因素和病理基础。肥胖发生的机制是能量摄入超过能量消耗，是遗传因素、环境因素、内分泌调节异常、炎症、肠道菌群等多种原因相互作用的结果。
世界卫生组织(WHO)最新数据显示2016年全球成人超重/肥胖比例高达39％肥胖是糖尿病、心血管疾病及其他代谢性疾病和肿瘤的潜在危险因素。
超重/肥胖症的预防和/或治疗主要包括生活方式(膳食和体育运动)调整、内科药物及外科手术治疗等多种手段。科学合理的营养治疗联合运动干预仍是目前最有效、最安全的基础治疗。肥胖治疗的主要方式是减少热量摄取和增加热量消耗。除生活方式改变外，必要时可以辅以药物或者手术治疗。外科治疗的方法有吸脂术、切脂术和各种减少食物吸收的手术，但可能会引起营养不良、贫血、消化道狭窄等并发症，需要严格把握适应症。目前国内仅有肠道脂肪酶抑制剂奥利司他被批准上市，尚无被批准用于治疗不合并糖尿病的肥胖的药物。FDA仅批准了六类治疗药物(芬特明、芬特明/托吡酯、氯卡色林、奥利司他、纳曲酮/安非他酮、利拉鲁肽)，其中，利拉鲁肽经批准用于罹患肥胖症或超重伴有至少一种与体重相关的共病状况的人的长期体重管理，其最常见的不良事件是胃肠紊乱，尤其是恶心。在我国，西布曲明已因不良反应退市，目前上市的减重药物只有奥利司他。可见，仍然需要用于体重管理的改进的药物治疗。
胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1，GLP-1)是由小肠和大肠的肠内分泌L 细胞营养依赖性产生、分泌的无生物活性的GLP-1(1-36)经过修饰变为具有生物活性的 GLP-1(7-36amide)，它是肠粘膜分泌的最强的食物反应型促胰岛素激素。GLP-1的生理作用包括以下几个方面：1)抑制胃排空和食物摄入，对营养消化进行调节，2)刺激糖依赖性的胰岛素分泌、合成，3)胰岛细胞增生、新生，以及4)抑制胰高血糖素的分泌来控制营养吸收后血糖的水平。但二肽基肽酶-4(DPP-4)会通过清除N-端使存在于循环系统内的GLP-1转化为无活性的GLP-1(9-36amide)：其血浆半衰期仅2分钟，代谢清除率为12～13ml/kg/min，这一特性使得GLP-1的临床应用受到极大的限制。
发明内容
本发明人研究发现，在一定给药剂量或给药频率下，例如每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次，1-40mg或5mg-35mg或7.5-30mg,尤其是15mg-30mg施用本发明的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及免疫球蛋白杂合Fc(Fc)融合多肽时，其在非糖尿病的超重或肥胖患者中具有较好的减重效果，且安全性、耐受性良好。同时，试验显示其和GLP-1受体亲和力高，并且药物半衰期长，可满足至少每周一次给药。
在一些实施方案中，本发明涉及一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及免疫球蛋白杂合 Fc(Fc)融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途，其中所述融合多肽包括：(a)胰高血糖素样肽-1或其类似物，以及(b)免疫球蛋白Fc多肽；其中，上述免疫球蛋白Fc多肽可包括(i)从序号1序列的C-末端开始由35个至49个连续的氨基酸序列构成的分离的IgD铰链区域；以及(ii)由序号2的氨基酸序列构成的CH2 及CH3区域。
优选地，上述胰高血糖素样肽-1或其类似物的C-末端可与免疫球蛋白Fc多肽的N-末端相结合，在免疫球蛋白Fc多肽内，IgD铰链区域的C-末端可与CH2及CH3区域的N-末端相结合。由此，从N-末端沿着C-末端方向可依次与胰高血糖素样肽-1或其类似物、IgD铰链区域以及CH2和CH3区域相结合。
优选地，上述胰高血糖素样肽-1类似物可以是从胰高血糖素样肽-1(7-37)中8位、22位和/或36位氨基酸被置换得到的具有序号3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或 13的氨基酸序列的胰高血糖素样肽-1类似物，可以是从胰高血糖素样肽-1(7-36)中8位、 22位和/或36位氨基酸被置换得到的具有序号14、15、16、17、18、19、20、21、22、 23或24的氨基酸序列的胰高血糖素样肽-1类似物。并且，更优选地，可以是作为借助二肽基肽酶-4的切割位点的8位氨基酸被突变的具有序号3、4、7、8、9、10、12或 13、14、15、18、19、20、21、23或24的氨基酸序列的胰高血糖素样肽-1类似物，最优选地，可以是作为8位氨基酸的丙氨酸(A)置换成甘氨酸(G)的具有序号3的氨基酸序列的胰高血糖素样肽-1类似物。在本发明的一些实施例中，利用具有序号3的氨基酸序列的上述胰高血糖素样肽-1类似物确认其效能。
本发明的免疫球蛋白Fc片段可从N-末端沿着C-末端方向包括铰链区域、CH2结构域区域及CH3结构域区域。具体而言，本发明的免疫球蛋白Fc片段可以是杂合免疫球蛋白Fc片段，由此，上述铰链区域可包括人类Ig铰链区域，上述CH2结构域区域可包括人类IgD和IgG4 CH2结构域的氨基酸残基部分，上述CH3结构域区域可包括人类IgG4 CH3结构域的氨基酸残基部分。
本发明的可与胰高血糖素样肽-1或其类似物相结合的合适的免疫球蛋白Fc多肽，其特征在于，包含35至49个氨基酸长度的IgD铰链区域。
具体而言，在作为IgD铰链区域的序号1的氨基酸序列中，从C-末端沿着N-末端方向，可包括具有35至49个连续的氨基酸序列的分离的IgD铰链区域。并且，优选地，在序号1的氨基酸序列中，可以是从C-末端沿着N-末端方向的具有35至40个连续的氨基酸序列的IgD铰链区域，更优选地，可以是具有35个或40个连续的氨基酸序列的 IgD铰链区域，更优选地，可以是具有40个连续的氨基酸序列的IgD铰链区域。在序号1的上述氨基酸序列中，由35个连续的氨基酸序列构成的IgD铰链区域表示为序号 25、由40个连续的氨基酸序列构成的IgD铰链区域表示为序号26、由49个连续的氨基酸序列构成的IgD铰链区域表示为序号27。
在本发明中，与如上所述的IgD铰链区域相结合的免疫球蛋白Fc CH2及CH3区域虽不改变本发明的融合多肽的药理学及药物效能，或者除非引起抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)和/或补体依赖细胞毒性(CDC)等细胞毒性，否则可以无限制使用，优选地，可使用本发明人开发的IgD及IgG4的杂合Fc CH2及CH3区域。具体而言，可使用由序号2的氨基酸序列构成的CH2及CH3区域。
通过如上所述的胰高血糖素样肽-1或其类似物与包含IgD铰链区域及CH2及CH3区域的免疫球蛋白Fc多肽相结合而最终构成本发明的融合多肽。
虽然不对此进行限定，但作为例子，本发明的融合多肽可由选自由序号28至30 组成的组中的氨基酸序列构成，更具体地，可由序号28或29的氨基酸序列构成，或者可由序号29的氨基酸序列构成。序号28的上述氨基酸序列为本发明的序号3的胰高血糖素样肽-1类似物、序号25的IgD铰链区域及序号2的CH2及CH3区域相结合的形态并以“GLP-1-hyFc8”表示，序号29的氨基酸序列为本发明的序号3的胰高血糖素样肽-1类似物、序号26的IgD铰链区域及序号2的CH2及CH3区域相结合的形态并以“GLP-1-hyFc9”表示，序号30的氨基酸序列为本发明的序号3的胰高血糖素样肽-1 类似物、序号27的IgD铰链区域及序号2的CH2及CH3区域相结合的形态并以“GLP-1-hyFc11”表示。
本发明还提供包含上述融合多肽作为有效成分的药物组合物在制备用于体重管理的药剂中的用途。
本发明的药物组合物还可以包括根据通常的方法的适当的载体、赋形剂或稀释剂。作为可包含在本发明的组合物的载体、赋形剂及稀释剂包括但不限于乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓醇、麦芽糖醇、淀粉、合金橡胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油。
本发明的药物组合物可根据通常的方法以散剂、颗粒剂、锭剂、胶囊剂、悬浊液、乳状液、浆液、气雾剂等口服型剂型、外用剂、栓剂或灭菌注射溶液的形态剂型化后使用。具体而言，在剂型化的情况下，可使用通常的填充剂、稀释剂、结合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂来制备。用于口服的固体制剂有锭剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，在这种固体制剂中，上述化合物可杂合至少一种赋形剂来制备，例如，淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等。并且，除了单纯的赋形剂之外，还可以使用硬脂酸镁、滑石等润滑剂。用于口服的液状制剂有悬浮剂、内用液剂、乳剂、浆剂等，除了通常使用的作为单纯稀释剂的水、液体石蜡之外，还可以包括各种赋形剂，例如湿润剂、甜味剂、芳香剂、保鲜剂等。非口服制剂包括灭菌的水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冻干制剂及栓剂。作为非水性溶剂、悬浮剂，可使用丙二醇、聚乙二醇、橄榄油等植物性油、油酸乙酯等可注射的乙酯等。作为栓剂的制剂，可使用合成脂肪酸酯、聚乙二醇、吐温61、可可脂、羟基香茅醛、甘油明胶等。
本发明的组合物以药学上的有效的量用药。上述药学上的有效量是指以可适用于医学治疗的合理受益/风险比例足以治疗疾病，且不引发副作用的量，有效用量水平可根据包括患者的健康状态、疾病的类型、重症程度、药物的活性、对药物的敏感性、用药方法、用药时间、用药路径及排除比例、治疗期限、配合或并用药物的要素以及其他医学领域中普遍认知的要素而决定。
并且，本发明的药物组合物可单独使用或者与其他可用于体重管理的其他药物配合使用。本发明的药学组合物可通过各种路径向大鼠、小鼠、家畜、人类等哺乳动物用药。上述用药表示以所有合适的方法向患者提供规定的物质，只要能够到达目标组织，本发明的组合物的用药路径不受限制。例如，包括但不限于关节内注射、腹腔内注射、静脉内注射、肌肉内注射、皮下注射、皮内注射、口服、局部注射、鼻内注射、肺内注射、直肠内注射。
上述的融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途，其中以每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次，1-40mg的量向所述受试者施用所述融合多肽。
上述的融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途，其中以每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次，15-30mg的量向所述受试者施用所述融合多肽。
上述的融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途，其中以每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次，7.5、15、22.5或30mg 的量向所述受试者施用所述融合多肽。
上述的融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途，其中以每周一次，7.5、15、22.5或30mg的量向所述受试者施用所述融合多肽。
上述的融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途，其中所述用途减少所述受试者的胃肠道不良事件。
上述的融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途，其中所述用途减少所述受试者中的以恶心为表现形式的胃肠道不良事件。
根据前述实施方案中任一项的用途，其中所述体重管理选自：减轻体重、治疗和/或预防肥胖症、治疗和/或预防超重以及防止体重增加等，优选为治疗和/或预防超重/ 肥胖。
根据前述实施方案中任一项的用途，其中所述肥胖是指BMI≥30，超重是指BMI ≥26。
根据前述实施方案的用途，其中所述受试者不合并糖尿病。
根据前述实施方案的用途，其中所述受试者还具有至少一种与体重相关的共病状况 (如高血压、血脂异常等)。
根据前述实施方案中任一项的用途，其中所述融合多肽经皮下施用，例如通过皮下注射施用。
根据前述实施方案中任一项的用途，其中所述融合多肽以进一步包含一种或多种药学上可接受的辅料的组合物的形式施用。
根据前述实施方案中任一项的用途，其中所述组合物是溶液或悬浮液如水溶液的形式。
根据前述实施方案中任一项的用途，其中所述药学上可接受的辅料包括一种或多种选自等渗剂、缓冲液和防腐剂的辅料。
附图说明
图1各剂量组入选患者分布图；
图2各剂量组平均体重较基线变化-时间图(Mean±SD)(药效动力学分析集)；
图3各剂量组平均较基线体重下降百分比-时间图(Mean±SD)(药效动力学分析集)；
图4各剂量组平均腰围较基线变化-时间图(Mean±SD)(药效动力学分析集)；
实施例
本发明基于一项临床试验，以评估并比较每周一次GLP-1-hyFc9注射液共三个剂量与安慰剂相比在不合并糖尿病的超重/肥胖受试者中诱发和维持体重减轻的剂量-响应。该试验被设计为一项随机、双盲、安慰剂对照的多次给药临床试验，其比较了在不合并糖尿病的超重/肥胖受试者中以四个不同的剂量(范围从15mg至30mg)每周一次皮下施用GLP-1-hyFc9注射液与安慰剂，旨在评价GLP-1-hyFc9在肥胖/超重不合并糖尿病受试者的安全性、耐受性、PK和PD特征。试验包括筛选期，12周的给药期和随访期。
试验药物：
GLP-1-hyFc9注射液：剂型：注射液，1mL/瓶；给药途径：皮下注射；规格：25mg/mL；对照药物：
GLP-1-hyFc9模拟注射液(安慰剂)：剂型：注射液，1mL/瓶；给药途径：皮下注射；规格：0mg/mL即不含GLP-1-hyFc9活性成分；
本试验包括3个剂量水平的GLP-1-hyFc9注射液或安慰剂。ABC三个剂量组的受试者按3：1的比例随机接受GLP-1-hyFc9注射液或安慰剂给药。
A组：15mg剂量组(试验组：安慰剂组＝12:4)
B组：22.5mg剂量组(试验组：安慰剂组＝12:4)
C组：30mg剂量组(试验组：安慰剂组＝12:4)
本试验所有剂量组平行入组。每组受试者从低剂量7.5mg开始，逐步递增到目标剂量，每周给药1次，连续给药12周。在目标剂量首次给药和第12周给药后采集PK血，进行药代动力学研究，用于检测GLP-1-hyFc9浓度。
试验主要目的:
评价GLP-1-hyFc9注射液在肥胖/超重不合并糖尿病受试者中多次给药的安全性和耐受性。
试验次要目的：
1、评价GLP-1-hyFc9注射液在肥胖/超重不合并糖尿病受试者中多次给药的药代动力学(PK)特征；
2、评价GLP-1-hyFc9注射液在肥胖/超重不合并糖尿病受试者中多次给药的药效学 (PD)特征；
3、评价GLP-1-hyFc9注射液在肥胖/超重不合并糖尿病受试者中多次给药的免疫原性。
评估标准：
药代动力学：
1、血清中GLP-1-hyFc9的浓度；
2、PK参数：
(1)目标剂量首次给药药代动力学参数AUC0-t，AUC0-inf、AUC_％Extrap、Cmax、Tmax、 CL/F、Vz/F、t1/2等参数；
(2)目标剂量末次药代动力学参数Cmax,ss、AUCss、AUC0-t，AUC0-inf、AUC_％Extrap、Cavg,ss、Cmin,ss、Tmax、DF、CLss/F、Vz/F、t1/2、蓄积比Ra(AUC)和Ra(Cmax)等参数；
药效学：
相对基线的体重变化值，各剂量组较基线体重降低超过5％的受试者比例及两组间的比值，腰围、腰臀比、血压、血脂等相对基线的变化；
安全性：
安全性评价内容包括：不良事件(AE)、合并用药、体格检查(皮肤、粘膜、淋巴结、头部、颈部、胸部(包括胸廓、肺、心脏)、腹部、脊柱/四肢、神经系统)、生命体征检查(血压、脉搏、体温、呼吸)、体重、实验室检查(血常规、凝血功能、血液生化、肾小球滤过率、胱抑素、尿常规、尿β2微球蛋白)、12导联心电图检查。方案中提供了有关AE和SAE定义、报告程序，以及其他安全性变量评价的完整信息。
免疫原性：
抗药抗体(ADA)发生率。
该试验的关键纳入标准：
1.年龄18-75(含)周岁，男女均可；
2.体重指数≥26.0kg/m2，体重指数＝体重(kg)/身高(m)2。受试者体重应在60kg以上 (包含60kg)，且体重保持稳定(3个月内自述体重变化小于5％)；
3.筛选时空腹血糖在3.9-7.0mmol/L(不含边界值)之间，HbA1c<6.5％者；
4.在整个研究期间及末次给药后至少6个月内愿意且必须采用可靠的避孕方式以避免女性受试者妊娠或男性受试者伴侣怀孕者；
5.能够理解本研究的全过程，自愿参加并签署知情同意书。
该试验的关键排除标准：
1.曾对任何GLP-1类药物过敏，或既往对食物或药物等有严重过敏反应者；
2.存在继发性肥胖，如代谢性疾病(如库欣综合征、甲状腺功能下降等)引起的肥胖或药物性肥胖(如糖皮质激素、三环类抗抑郁药、非典型抗精神病药等)；
3.明确诊断的1型或2型糖尿病患者；
4.既往或现在患有胰腺炎(慢性胰腺炎或急性胰腺炎的病史)；
5.既往有临床显著的胃排空异常(如胃出口梗阻)，严重慢性胃肠道疾病(如6个月内发生过活动性溃疡)；
6.有甲状腺髓样癌(MTC)或2型多发性内分泌肿瘤综合征个人史或家族史，或其他遗传性疾病容易诱导甲状腺髓样癌者；筛选时甲状腺功能异常且有临床意义，需要药物治疗或治疗后尚未达到临床稳定者；
7.对于既往或现在患有胆汁淤积，或胆囊结石(曾行胆囊结石取石或碎石术)和/或胆囊切除术的受试者，如没有进一步的后遗症，可由研究者评估风险后判断是否能够进入研究；
8.既往有慢性吸收不良综合征者；
9.有明显血液系统疾病(如再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征)或任何引起溶血或红细胞不稳定的疾病(如疟疾)；
10.筛选前1个月内患有严重的全身感染性疾病；
11.筛选期收缩压≥160mmHg和/或舒张压≥100mmHg；
12.筛选前有任何以下严重的心脑血管事件：需要住院治疗的不稳定性心绞痛、心肌梗塞、冠状动脉旁路移植术、经皮冠脉介入(诊断性血管造影术是允许的)、中重度充血性心力衰竭(NYHA Ⅲ级或Ⅳ级)、需要住院的心房或心室心律不齐(如：心房颤动、室性心动过速等)、未安装心脏起搏器的情况下12导联心电图出现II度或III度房室传导阻滞、具有临床意义的长QT综合征或QTc间期延长、有局部缺血性心脏病迹象、起搏器或除颤器植入、半年内有卒中或短暂性脑缺血发作或脑血管意外事件者；或计划进行冠脉搭桥术或血管重建术者；
13.筛选期血白细胞总数超出正常值范围的10％，或血红蛋白<100g/L者；
14.筛选时转氨酶(ALT或AST)≥正常值上限的2.5倍，或空腹甘油三酯≥5.64mmol/L，或eGFR<60mL/(min*1.73m2)者(CKD-EPI公式计算)；
15.既往有严重的呼吸道、血液系统、中枢神经系统(如癫痫等)等疾病病史；或既往有恶性肿瘤、精神类疾病(如抑郁症、焦虑症等)病史；或有其他可能危及受试者安全的疾病史且研究者认为不适宜入组者；
16.首次给药前3个月内使用减肥药物或保健品，如orlistat(奥利司他)和(或)其他具有减重作用的产品；
17.有通过手术方法减肥病史者(如果1年前有过吸脂手术可豁免)；
18.在首次给药前3个月应用过任何肠促胰岛素拟似物以及其他研究者认为可能影响试验的药物者；
19.筛选前5年内有药物滥用或依赖史，筛选时尿液药物滥用筛查阳性；
20.筛选前3个月内酒精摄入量平均每周超过21个单位酒精(男性)/14个单位酒精(女性)(1单位≈360mL啤酒，或45mL酒精含量为40％的烈酒，或150mL葡萄酒)，或给药前酒精呼气测试阳性者；
21.筛选前3个月内每日吸烟量大于5支；
22.筛选前3个月内献血≥400mL或有失血量≥400mL的外伤或大型手术者；
23.筛选前3个月内参加过任何药物临床试验(以接受试验药物治疗为准)；
24.在筛选前28天内接种过疫苗或计划在接受试验用药品后1周内接种疫苗者；
25.乙肝表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、抗人类免疫缺陷病毒抗体或抗梅毒螺旋体特异性抗体检查有一项或一项以上阳性者；
26.筛选时或试验开始前经研究者判断处于妊娠期、哺乳期或妊娠测试血HCG阳性者，或在试验期间或末次给药后6个月内有生育计划的男性及女性受试者；
27.研究者认为存在其他原因而不适合参加本临床研究。
统计分析方法
分析人群：
全分析集(Full Analysis Set，FAS)：根据意向性治疗(ITT)的基本原则，包括所有随机后至少接受一次给药的受试者。FAS用于人口学及基线特征的分析。
安全性分析集(SS，Safey Set)：所有随机化且至少接受一次给药的受试者。SS集用于分析安全性终点，将按照实际接受治疗组别进行分析。
药代动力学分析集(Pharmacokinetic Concentration Analysis Set，PKCS)：所有随机化且接受过活性药GLP-1-hyFc9注射液，且至少有一个可测量浓度的受试者。将受试者的某个血药浓度从PK分析集中排除的原因包括但不限于以下各项：出现了影响血药浓度的因素(例如，错误治疗)；血液样本处理不当；血样检测有误等。
药代动力学参数分析集(Pharmacokinetic Parameter Analysis Set，PKPS)：所有随机化且接受过活性药GLP-1-hyFc9注射液，试验期间至少有1个有效PK参数的受试者。不纳入PKPS者，包括：a)因严重违背方案入选者，影响PK参数结果，或无法估测参数者；b)试验过程中出现合并用药，且对PK参数有影响者。
药效动力学分析集(Pharmacodynamics Analysis Set,PDS)：所有随机化且接受了试验用药品(活性药GLP-1-hyFc9注射液或安慰剂)，试验期间至少有1个药效结果的受试者。不纳入PDOS者还包括：a)因严重违背方案对药效有影响者；b)试验过程中出现合并用药，且对药效有影响者。
药代动力学分析方法
统计分析方法
基于PKCS，分剂量组及各时间点对血药浓度进行列表和描述性统计，包括血药浓度的例数、均值、标准差、中位数、最大值、最小值和变异系数。
基于PKCS，按实际采血时间，绘制个体药物浓度-时间曲线图和个体药物浓度-时间曲线叠加图(线性和半对数)；按照计划采血时间，绘制各剂量组平均药物浓度-时间曲线图(线性和半对数)。
基于PKPS，采用WinNonlin软件8.1及以上版本非房室模型(NCA)，按实际采血时间计算各剂量组目标剂量首次给药和末次给药后各受试者的PK参数，分剂量组对PK 参数进行列表和描述性统计，包括PK参数的例数、算术平均数、标准差、中位数、最小值、最大值、变异系数、几何均值、下四分位数、上四分位数、对数标准差以及几何变异系数。
采用幂函数模型分析主要PK参数(目标剂量首次给药：AUC0-t、AUC0-inf、Cmax；目标剂量末次给药：AUC0-t、AUC0-inf、AUCss、Cmax,ss)与给药剂量的比例关系。
PK缺失值和离群值数据缺失数据的处理
若PK浓度数据未收集或缺失，不对缺失数据进行填补，任何丢失的样本均以“M”形式表示。由于样本量不够重新分析或实验室流程规定的其他原因导致没有浓度的数据将以“NR”形式表示，缺失数据不参与统计汇总，仅做列表处理。
PK参数以实际采样时间计算。
若PK参数无法通过PK浓度计算得到，则在列表中将显示为“未计算(NC)”，在统计汇总表格中将被处理成缺失值。在进行统计模型分析时，“NC”的PK参数值也将被处理为缺失值。
若给药信息缺失或未收集，不对缺失数据进行填补，该受试者不纳入PK统计分析。
药效学分析方法：
体重：
体重的基线值定义为：第-1天的空腹测量值。
基于PDS，按计划访视时间，分剂量组对受试者的体重、体重较基线变化值以及较基线体重下降百分比进行描述性统计，统计量包括：n、Mean、SD、Median、Q1、Q3、 Min、Max。按计划访视时间，分剂量组对较基线体重下降超过5％的受试者比例进行汇总。并基于PDS，对受试者个体的体重、体重较基线变化值以及较基线体重下降百分比进行列表。基于PDS，以剂量组作为固定效应，基线体重作为协变量，对12周治疗后 (第13周)的体重较基线变化值进行协方差分析(ANCOVA)，评价GLP-1-hyFc9注射液各剂量组对体重的作用与安慰剂的差异。
基于PDS，以剂量组作为固定效应，基线体重作为协变量，对12周治疗后(第13 周)的较基线体重下降超过5％的受试者比例进行Logistic回归分析，评价GLP-1-hyFc9 注射液各剂量组对体重的作用与安慰剂的差异。
基于PDS，分别对体重、体重较基线变化值以及较基线体重下降百分比，分剂量组绘制的个体效应-时间曲线、效应-时间曲线个体叠加图以及平均效应-时间曲线。
腰围
腰围的基线定义为：第-1天的空腹测量值，如果在筛选期的第-7天～第-2天完成了腰围的测量，则筛选期的测量值即为基线值。
基于PDS，按计划访视时间，分剂量组对受试者的腰围、腰围较基线变化值以及较基线腰围下降百分比进行描述性统计，统计量包括：n、Mean、SD、Median、Q1、Q3、Min、 Max。并基于PDS，对受试者个体的腰围、腰围较基线变化值以及较基线腰围下降百分比进行列表。
基于PDS，以剂量组作为固定效应，基线腰围作为协变量，对12周治疗后(第13周)的腰围较基线变化值进行协方差分析(ANCOVA)，评价GLP-1-hyFc9注射液各剂量组对腰围的作用与安慰剂的差异。
基于PDS，分剂量组绘制平均腰围较基线变化-时间曲线。
受试者情况
分析数据集：
实际入组48例受试者，43例受试者完成试验。2例受试者因发生严重方案偏离，影响PK分析，故不纳入PKCS、PKPS集，此外，安慰剂组12例受试者不纳入PKCS、PKPS集。综上48例受试者进入FAS、SS、PDS，34例受试者进入PKCS、PKPS。
每个剂量组入选和完成情况以及数据集划分分别见图1和表1。
表1各剂量组完成情况及数据集划分
全分析集 12(100％) 12(100％) 12(100％) 12(100％) 48(100％)
安全性分析集 12(100％) 12(100％) 12(100％) 12(100％) 48(100％)
药代动力学分析集 12(100％) 12(100％) 12(100％) 0 34(70.8％)
药代动力学参数分析集 12(100％) 10(83.3％) 12(100％) 0 34(70.8％)
药效动力学分析集 12(100％) 12(100％) 12(100％) 12(100％) 48(100％)
药代动力学结果
纳入PKPS分析集的34例受试者中，B组4例受试者在D15访视(即目标剂量首次给药阶段)未按方案给药(计划给药22.5mg，实际给药15mg)，故目标剂量首次给药阶段PK参数分析未纳入该4例受试者，最终目标剂量首次给药阶段共30例受试者 PK参数分析结果，其中A组12例，B组6例，C组12例。此外，纳入PKPS分析集的34例受试者中有3例受试者中途退出，最终目标剂量末次给药阶段共31例受试者 PK参数分析结果，其中A组11例，B组10例，C组10例。
基于PKPS，根据实际采样时间，采用WinNonlin 8.2或以上版本的非房室模型(NCA) 计算血清中PK参数。目标剂量首次给药阶段和目标剂量末次给药阶段的PK参数汇总分别表2和表3。
由表2可知，A组(15mg)、B组(22.5mg)和C组(30mg)目标剂量首次给药阶段的中位达峰时间(Tmax)比较接近，分别为36.00h、35.89h和48.00h。不同剂量组 GLP-1-hyFc9注射液目标剂量首次给药暴露水平(Cmax、AUC0-t、AUC0-inf)随着给药剂量的递增而增加。A组(15mg)、B组(22.5mg)和C组(30mg)的Cmax平均值分别为469ng/mL、1250ng/mL和1870ng/mL，AUC0-t的平均值分别为56.1ug*h/mL、 130ug*h/mL和214ug*h/mL。由于多数受试者目标剂量首次给药阶段的AUC_％Extrap>20％，与末端消除相关参数(如AUC0-inf、t1/2、Vz/F、CL/F、λz、MRT0-inf、AUC_％Extrap)的计算结果仅供参考。
表2各剂量组目标剂量首次给药阶段GLP-1-hyFc9的PK参数汇总表(PKPS)
Figure BDA0003589718730000121
Figure BDA0003589718730000131
注：Mean：算术均值；SD：标准差；Median：中位数；Min：最小值；Max：最大值；GeoMean：几何均值；％CVb：几何变异系数。
注：由于多数受试者目标剂量首次给药阶段的AUC_％Extrap>20％，与末端消除相关参数(如AUC0-inf、 t1/2、Vz/F、CL/F、λz、MRT0-inf、AUC_％Extrap)的计算结果仅供参考。
当Rsq_adjusted<0.8时，lambda_z和其他与末端消除相关参数计算可能不准确。故在分析中剔除 S01029和S04049的AUC0-inf、t1/2、Vz/F、CL/F、λz、MRT0-inf、AUC_％Extrap。
由表3可知，A组(15mg)、B组(22.5mg)和C组(30mg)目标剂量末次给药阶段的中位达峰时间(Tmax)比较接近，分别为36.02h、35.82h和48.03h。不同剂量组 GLP-1-hyFc9注射液目标剂量末次给药暴露水平(Cmax,SS、AUCSS、AUC0-t、AUC0-inf) 随着给药剂量的递增而增加。A组(15mg)、B组(22.5mg)和C组(30mg)的Cmax,ss平均值分别为951ng/mL、1410ng/mL和1690ng/mL，AUC0-t的平均值分别为150ug*h/mL、 249ug*h/mL和321ug*h/mL，AUC0-inf的平均值分别为159ug*h/mL、261ug*h/mL和 340ug*h/mL，AUCss的平均值分别为103ug*h/mL、171ug*h/mL和211ug*h/mL。各剂量组的半衰期(T1/2)比较接近，分别为116h、110h和116h。各剂量组的稳态表观清除率(CLss/F)也比较接近，分别为0.159L/h、0.144L/h和0.149L/h。15-30mg剂量组多次给药达稳态后，GLP-1-hyFc9累积比Ra(Cmax)平均值分别为2.08、1.34和0.940，Ra(AUC)平均值分别为1.93、1.46和1.01。可见三个剂量的蓄积比随着剂量的增加有降低趋势，可能是由于本研究采用滴定给药方式达到目标剂量，导致不同剂量组的蓄积程度略有差异。实际蓄积可能比该蓄积稍大。
表3各剂量组目标剂量末次给药阶段GLP-1-hyFc9的PK参数汇总表(PKPS)
Figure BDA0003589718730000141
注：Mean：算术均值；SD：标准差；Median：中位数；Min：最小值；Max：最大值；GeoMean：几何均值；％CVb：几何变异系数。
药效动力学结果
体重：
基于PDS，各剂量组平均体重较基线变化-时间图以及平均较基线体重下降百分比- 时间图分别见图2和图3。治疗12周后体重相对基线下降≥5％的受试者比例汇总分析结果见表4。
由表4可知，GLP-1-hyFc9 15mg、22.5mg、30mg剂量组D85体重较基线下降平均值(SD)分别为-5.65(3.301)kg、-5.35(3.391)kg、-5.13(2.561)kg，安慰剂组体重较基线下降平均值(SD)为-1.37(2.127)kg，试验组较安慰剂组D85体重较基线下降值均有统计学差异(P<0.05)。GLP-1-hyFc9 15mg、22.5mg、30mg剂量组D85体重较基线下降百分比平均值(SD)分别为-7.156(4.0301)％、-6.031(3.4523)％、-6.374 (2.7422)％，安慰剂组体重较基线下降百分比平均值(SD)为-1.718(2.3499)％，试验组较安慰剂组D85体重较基线下降百分比均有统计学差异(P<0.05)。
表4 D85体重访视统计描述(药效动力学分析集)
Figure BDA0003589718730000151
由表5可知，治疗12周后体重相对基线变化百分比的修正均数A组、B组、C组分别为-7.24％，-5.79％与-6.47％，安慰剂组为-1.76％。A组、B组、C组与安慰剂的组间修正均数差(A/B/C组-安慰剂组)分别为-5.48(95％CI：-8.77～-2.19)％，-4.03(95％CI： -7.51～-0.55)％，-4.71(95％CI：-8.08～-1.33)％，P值(经多重性校正)分别为：0.0006，0.0195，0.0043。修正均数差的95％CI上限均小于0，且P值均小于0.05，故A组、B 组、C组治疗12周后体重降低疗效优于安慰机组。
表5治疗12周后体重相对基线变化百分比的协方差分析模型(PDS)
Figure BDA0003589718730000161
注：[1]两组修正均数差＝各剂量组-安慰剂组。基线定义为首次给药前的最后一次非空的检查结果。
由表6可知，基于PDS，采用Logistic回归分析模型，以基线体重为协变量，组别为自变量，结果显示，A组、B组、C组出现体重较基线变化≥5％的受试者比例较安慰剂组出现体重较基线变化≥5％的受试者比例的优势比分别为33.73％(95％CI： 2.78～408.63)、8.93％(95％CI：0.78～102.43)、19.14(95％CI：1.62～226.56)，对应的P 值分别为0.0057/0.0785和0.0192,。其中，除B组外，A组和C组优势比的95％CI均不包含1，且P值小于0.05，故A组与C组中出现体重较基线变化≥5％的受试者比例高于安慰剂组。
表6治疗12周后体重相对基线下降≥5％的受试者比例(PDS)
Figure BDA0003589718730000162
注：[1]Pearson卡方检验。百分比的计算基于各组药效动力学分析集人数。体重较基线变化百分比下降≥5％＝是(event＝1)。D85缺失的受试者不纳入Logistic回归分析。
腰围
基于PDS，各剂量组平均腰围较基线变化-时间图(Mean±SD)(药效动力学分析集)见图4。治疗12周后体重相对基线变化百分比的协方差分析结果见表7。
由表7可知，安慰剂和GLP-1-hyFc9各剂量组受试者腰围随着时间变化均有一定程度的下降，安慰剂组受试者腰围波动较大。15mg剂量组和22.5mg剂量组与安慰剂相比下降不明显，30mg剂量组腰围下降最明显，说明30mg剂量组效果较好。D85天 GLP-1-hyFc915mg、22.5mg、30mg剂量组腰围较基线变化平均值(SD)分别为-5.50 (4.399)cm、-4.30(3.676)cm、-6.17(5.148)cm，安慰剂组腰围较基线变化平均值(SD) 为-3.31(2.899)cm，跟安慰剂组相比，试验组D85腰围较基线下降值均无统计学差异 (P>0.05)。
表7 D85体重访视统计描述(药效动力学分析集)
Figure BDA0003589718730000171
总结
体重：
治疗12周后GLP-1-hyFc9各剂量组受试者体重均有一定程度的下降，试验组较安慰剂组比较均有统计学差异(P<0.05)。且15mg、22.5mg、30mg剂量组下降趋势基本一致，体重下降趋势无明显剂量相关性。
腰围：
治疗12周后GLP-1-hyFc9各剂量组受试者腰围较安慰剂组均有一定程度的减少，30mg剂量组腰围减少最明显，但跟安慰剂组相比，试验组腰围变化均无统计学差异 (P>0.05)。
安全性：
48例受试者中共有45例受试者出现466例次AE，大部分AE均为1、2级，未出现SAE、未出现导致死亡的AE、未出现导致退出试验的AE。GLP-1-hyFc9整体安全耐受性良好。
应该理解，本发明描述的具体实例和方案仅仅是为了例证目的作为示例给出，不视为对本发明的限制，包括在本申请的精神和范围内的各种进一步修改或变化均视为涵盖在本发明的公开范围内。
<110> 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司；石药集团百克（山东）生物制药股份有限公司
<120> 一种融合蛋白的制药用途
<130>
<160> 30
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 64
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
<210> 2
<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> IgD及IgG4的杂合Fc CH2及CH3区域
<400> 2
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
1 5 10 15
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
20 25 30
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
35 40 45
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
50 55 60
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
65 70 75 80
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
85 90 95
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
100 105 110
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
115 120 125
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
130 135 140
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
145 150 155 160
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
165 170 175
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
180 185 190
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
195 200 205
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215
<210> 3
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-37）类似物（A8G）
<400> 3
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1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
20 25 30
<210> 4
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223>GLP-1（7-37）类似物（A8V）
<400> 4
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
20 25 30
<210> 5
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-37）类似物（G22E）
<400> 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-37）类似物（R36G）
<400> 6
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<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-37）类似物（A8G/G22E）
<400> 7
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
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<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
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<400> 9
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-37）类似物（A8V/R36G）
<400> 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-37）类似物（G22E/R36G）
<400> 11
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-37）类似物（A8G/G22E/R36G）
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-37）类似物（A8V/G22E/R36G）
<400> 13
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（A8G）
<400> 14
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1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
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<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（A8V）
<400> 15
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20 25 30
<210> 16
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（G22E）
<400> 16
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 17
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（R36G）
<400> 17
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly
20 25 30
<210> 18
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（A8G/G22E）
<400> 18
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 19
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（A8V/G22E）
<400> 19
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 20
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（A8G/R36G）
<400> 20
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly
20 25 30
<210> 21
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（A8V/R36G）
<400> 21
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly
20 25 30
<210> 22
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（G22E/R36G）
<400> 22
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly
20 25 30
<210> 23
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（A8G/G22E/R36G）
<400> 23
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly
20 25 30
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1（7-36）类似物（A8V/G22E/R36G）
<400> 24
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly
20 25 30
<210> 25
<211> 35
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 25
Ala Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys
1 5 10 15
Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro
20 25 30
Glu Cys Pro
35
<210> 26
<211> 40
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 26
Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly
1 5 10 15
Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg
20 25 30
Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
35 40
<210> 27
<211> 49
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 27
Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro
1 5 10 15
Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu
20 25 30
Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys
35 40 45
Pro
<210> 28
<211> 281
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1-hyFc8
<400> 28
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Ala
20 25 30
Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu
50 55 60
Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
275 280
<210> 29
<211> 286
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1-hyFc9
<400> 29
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Ala
20 25 30
Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly
35 40 45
Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu
50 55 60
Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe
65 70 75 80
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
85 90 95
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
100 105 110
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
115 120 125
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
130 135 140
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
145 150 155 160
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
165 170 175
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
180 185 190
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
195 200 205
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
210 215 220
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
225 230 235 240
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
245 250 255
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
260 265 270
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
275 280 285
<210> 30
<211> 295
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221>
<222>
<223> GLP-1-hyFc11
<400> 30
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Ala
20 25 30
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
35 40 45
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
50 55 60
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
65 70 75 80
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
85 90 95
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
100 105 110
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
115 120 125
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
130 135 140
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
145 150 155 160
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
165 170 175
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
180 185 190
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
195 200 205
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
210 215 220
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
225 230 235 240
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
245 250 255
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
260 265 270
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
275 280 285
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
290 295

Claims (10)

1.一种胰高血糖素样肽-1及免疫球蛋白杂合Fc融合多肽在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途，其中所述融合多肽包括：(a)胰高血糖素样肽-1或其类似物，以及(b)免疫球蛋白Fc多肽；其中，上述免疫球蛋白Fc多肽可包括(i)从序号1的氨基酸序列的C-末端开始由35个至49个连续的氨基酸序列构成的分离的IgD铰链区域；以及(ii)由序号2的氨基酸序列构成的CH2及CH3区域。
2.权利要求1所述的用途，其特征在于，所述胰高血糖素样肽-1类似物是从胰高血糖素样肽-1(7-37)中8位、22位和/或36位氨基酸被置换得到的具有序号3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13的氨基酸序列的胰高血糖素样肽-1类似物，优选地，所述胰高血糖素样肽-1类似物为8位氨基酸的丙氨酸(A)置换成甘氨酸(G)的具有序号3的氨基酸序列的胰高血糖素样肽-1类似物。
3.权利要求1-2任一项所述的用途，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc多肽包含在作为IgD铰链区域的序号1的氨基酸序列中，从C-末端沿着N-末端方向，35至49个氨基酸长度的IgD铰链区域，优选地，35至40个氨基酸长度的IgD铰链区域，更优选地，40个氨基酸长度的IgD铰链区域。
4.权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述胰高血糖素样肽-1及免疫球蛋白杂合Fc(Fc)融合多肽具有序号28-30所示的氨基酸序列，优选具有序号29所示的氨基酸序列。
5.权利要求1-4任一项所述的用途，其特征在于，以每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次，1-40mg的量向所述受试者施用所述融合多肽；优选地，以每周一次15-30mg的量向所述受试者施用所述融合多肽。
6.权利要求5所述的用途，其特征在于，以每周一次15mg、22.5或30mg的量向所述受试者施用所述融合多肽。
7.权利要求5-6任一项所述的用途，其特征在于，给药周期为6-24周，优选12-18周，更优选12周。
8.权利要求1-7任一项所述的用途，其中所述体重管理的受试者为超重/肥胖症不合并糖尿病患者。
9.包含权利要求1-4任一项所述的融合多肽作为有效成分的药物组合物在制备用于体重管理尤其是超重/肥胖症预防和/或治疗的药剂中的用途。
10.权利要求9所述的用途，其中所述超重/肥胖症不合并糖尿病。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024199491A1 (zh) * 2023-03-30 2024-10-03 广州银诺医药集团股份有限公司 一种包含glp-1融合蛋白的药物制剂及其应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024199491A1 (zh) * 2023-03-30 2024-10-03 广州银诺医药集团股份有限公司 一种包含glp-1融合蛋白的药物制剂及其应用

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