JPH0326165B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はベシクル用組成物に関し、更に詳細に
は長期間に渡つて安定なベシクルを調製すること
のできるベシクル用組成物に関する。 生体膜の重要な構成成分であるリン脂質、特に
レシチンが水中においてリポゾームと呼ばれる二
重膜中空小胞体を形成することは既によく知られ
ている。このリポゾームは、中空脂質二重膜球で
あり、内腔に種々の化学物質を包含することがで
きる等その構造が赤血球に酷似しているため、赤
血球のモデルあるいは細胞モデルとして研究さ
れ、生体膜研究に重要な役割りを果たしている。 また、近年、このリポゾームは薬物の生体内運
搬体として注目されている。すなわち、内腔に
種々の化学物質を包含することのできるリポゾー
ムは一種のカプセルと見なすことができ、薬物を
リポゾーム内部に入れて投与すると、薬物の生体
内代謝が抑制され長期間生体内に留つて薬効を持
続したり（例えばFEBS Letters，36巻，３号，
292頁，1973年）、薬物の副作用、例えばアレルギ
ー性が抑制されたり（例えばFEBS Letters，45
巻，１号，71頁，1974年）、薬物の各種臓器への
分布が変化したりする（例えばEur.J.Biochem.，
47巻，179頁，1974年）ことが報告されている。 この様にリポゾームは薬物の生体内運搬体とし
て優れた諸性質を示すのであるが、中でも薬物の
臓器分布を変化させ得る性質は薬物を疾患臓器へ
選択的に作用させ得る可能性を有しており、所謂
リポゾームによる標的効果として注目を集めてい
る。例えば制癌剤は癌細胞のみならず健康な正常
細胞にも作用するため副作用の伴なうことが多い
が、制癌剤をリポゾームに入れて投与することに
より癌組織に選択的に作用させることができれば
極めて有用であると考えられる。実際、その様な
試みが良好な結果を得ている場合がある（例えば
日本癌学会講演要旨集，８頁，1976年）。 また二重膜部分にアルキルアミン等の適当な伝
導性物質を包埋し、リポゾームの内液に第２銅イ
オン等の光還元性物質を、リポゾームの外液にア
スコルビン酸等の光酸化性物質を入れ、これに光
を照射することにより二重膜に包埋した伝導性物
質の性質に応じて、特定のイオンを外液から内液
に濃縮することが可能であり、たとえば海水から
ある特定の元素イオンを取出して資源化すること
ができる。この様にリポゾームは薬物投与等に画
期的な新しい手法をもたらすものであるが、リポ
ゾームを形成し得るリン脂質が生体由来物質のた
めその化学構造が極めて制限されており各種機能
の付与に不便であること、また、比較的化学的安
定性に乏しいこと等の欠点があつた。 そこで、リン脂質リポゾームのかかる制約を取
り除くために、最近合成界面活性剤を原料とする
リポゾーム型小胞体、すなわちベシクルを形成せ
しめるための研究がなされ、現在までに数種類の
界面活性剤にベシクル形成能があることが確認さ
れている。そしてかかる界面活性剤のベシクルも
リポゾームと同様に二重膜中空小胞体構造を有し
ており、上記の薬物運搬体等に適用され得るもの
である。 しかしながら、これら界面活性剤のベシクル
は、いずれも界面活性剤のみを水中に分散せし
め、これに例えば超音波を照射することにより得
られるもので、そのベシクル構造が不安定であ
り、長期間の保存に耐えられないのが現状であ
る。例えば、本発明で用いるジアルキルリン酸エ
ステル塩について叙上の方法でベシクルを得ても
ベシクル構造は数日以内に壊れ、溶液は白濁若し
くはゲル状を呈するようになる。 したがつて、界面活性剤ベシクルを薬物運搬体
やその他の目的に利用するためにはこの安定性を
改善することが不可欠であり、そのための技術が
強く要望されているのが現状であつた。 斯る現状に鑑み、本発明者らは長期間に渡つて
安定なベシクルを得べく鋭意研究をおこなつた結
果、ベシクル形成能を有する特定のリン酸エステ
ル塩、ある種の界面活性剤及び水を配合した系よ
り得たベシクルは長期間に渡つて安定に存在し得
ることを見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明は次の２成分(A)及び(B)を含有
し、(A)成分と(B)成分の重量比が100：１〜100：
100であるベシクル用組成物を提供するものであ
る。 (A) 一般式（） 式中、記号は次のものを示す。 R₁及びR₂：炭素数６〜24の炭化水素基 Ｍ：アルカリ金属、アルカノールアンモニウム、
水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジン、
アルギニン、ヒスチジン又はモルホリンのいず
れか で表わされるリン酸エステル塩 (B) 一種又は二種以上の、次の式(a)〜（ｗ） R₃COOM (a) R₃OSO₃M (d) R₃O（AO）_oSO₃M (e) R₃O（AO）_oＨ (h) HO（AO）_p（C₃H₆O）_q（AO）_rＨ (j) R₃COO（AO）_oR₆ (l) R₃NH（−CH₂）−_tCOOM （ｖ） 式中、各記号は次のものを示す。 R₃：炭素数６〜36の炭化水素基 R₄及びR₅：炭素数５〜23の炭化水素基 R₆，R₇及びR₈：水素原子又は炭素数６〜24のア
シル基 （ただし、一分子中にR₇とR₈を両方含む場合、
そのうち少なくとも一方は水素原子である） R₉及びR₁₀：水素原子又は炭素数６〜24の炭化水
素基 （ただし、少なくとも一方は水素原子である） R₁₁，R₁₂及びR₁₃：炭素数１〜24の炭化水素基 R₁₄：炭素数９〜23の炭化水素基 R₁₅：炭素数１〜24の炭化水素基若しくはヒドロ
キシ炭化水素基 R₁₆及びR₁₇：炭素数１〜４の炭化水素基若しく
はヒドロキシ炭化水素基又はベンジル基 Ａ：炭素数２〜４のアルキレン基 Ｍ：前記と同じ意味を有する ｌ，ｍ及びｎ：０又は１〜150の整数 ｐ，ｑ及びｒ：１〜150の整数 ｔ：１〜４の整数 で表わされる化合物群から選ばれた界面活性剤。 (A)成分であるリン酸エステル塩（）がベシク
ルを形成することはすでに公知であり、例えば学
術雑誌J.Am.Chem.Soc.，101巻，2231頁（1979）
に報告されている。しかしながら、(A)成分に(B)成
分を配合することによりベシクルが長期間安定に
保たれることは全く知られておらず、このことは
本発明者らの研究によつて初めて明らかにされた
ものである。 本発明の(A)成分であるリン酸エステル塩は、次
の式（′） （式中、R₁及びR₂は前記した意味を有する） で表わされるリン酸エステルを塩基性化合物で中
和することにより得られる。中和に用いられる塩
基性化合物としてはアルカリ金属含有塩基性化合
物（たとえば水酸化ナトリウム，炭酸ナトリウム
など）、アルカノールアミン類、水酸化テトラア
ルキルアンモニウム類、リジン、アルギニン、ヒ
スチジンおよびモルホリンが好ましい。また、ア
ルカノールアミン類の中では、アルカノール部分
がモノエタノール、ジエタノール、トリエタノー
ル、モノプロパノール、ジプロパノール又はトリ
プロパノールであるものが特に好ましく、更に水
酸化テトラアルキルアンモニウム類の中ではアル
キル部分がメチル、エチル、プロピル、ブチル又
はペンチルであるものが特に好ましい。これら(A)
成分の具体例としては、ジデシルリン酸エステル
トリエタノールアミン塩、ジドデシルリン酸エス
テルトリエタノールアミン塩、ジヘキサデシルリ
ン酸エステルトリエタノールアミン塩、ジオレイ
ルリン酸エステルトリエタノールアミン塩、ジオ
クタデシルリン酸エステルナトリウム塩、ジオク
タデシルリン酸エステルモノエタノールアミン
塩、ジオクタデシルリン酸エステルジエタノール
アミン塩、ジオクタデシルリン酸エステルジイソ
プロパノールアミン塩、ジオクタデシルリン酸エ
ステル水酸化テトラメチルアンモニウム塩、ジオ
クタデシルリン酸エステルリジン塩、ジオクタデ
シルリン酸エステルアルギニン塩、ジオクタデシ
ルリン酸エステルモルホリン塩等をあげることが
できる。また、これらリン酸エステル塩の二本の
疎水鎖（R₁，R₂）は不飽和結合を有するもので
もさしつかえないが、飽和の炭化水素基の方が好
ましい。 また、本発明の(B)成分の界面活性剤は、ベシク
ルを安定に保つ作用を有するものと考えられてお
り、このうち(a)〜(g)は陰イオン性界面活性剤に、
(h)〜（ｓ）は非イオン性界面活性剤に、（ｔ）〜
（ｗ）は両性界面活性剤にそれぞれ属するもので
ある。これら(B)成分のうち、(h)〜（ｓ）の非イオ
ン性界面活性剤に付加するアルキレンオキサイド
としては、エチレンオキサイドが好ましい。 本発明のベシクル用組成物においては、(A)成分
と(B)成分の配合重量比が重要であり、(A)成分と(B)
成分の比が100：１〜100：100の範囲であること
が必要である。配合重量比がこの範囲を外れた場
合、ベシクルが生成しないか又はベシクルが生成
しても不安定となる。 本発明のベシクル用組成物を製造するには公知
の方法に従い、(A)成分及び(B)成分を、これら両方
を溶解し得る溶媒に溶解し、撹拌して均一とし、
次いで溶媒を除去すれば良い。 斯くして得られた本発明のベシクル用組成物か
らベシクルを得るには、ベシクル用組成物を水に
懸濁させ、これに超音波を照射すれば良い。しか
しながら、この方法のみに限らず、例えば水に可
溶なエタノールの様な溶媒にベシクル用組成物を
溶解させ、この水溶液を水中に強く射出する方法
や水溶性の界面活性剤で可溶化し、次いで透析で
その界面活性剤を除去しながら作成する方法等も
利用し、ベシクル溶液を得ることができる。 本発明のベシクル用組成物により調製されるベ
シクル溶液は、その濃度が１〜50重量％（以下単
に％で示す）が好ましく、より好ましくは５〜30
％である。溶液のベシクル濃度が50％を越えると
粘度が高くなり過ぎ、ベシクルの調製工程及びベ
シクルの使用時において不都合の生じることがあ
る。また、濃度が１％未満の場合、調製及び使用
には何ら支障はないが、ベシクル溶液の輸送費や
容器の面でコストが上昇し、経済的ではない。 このようにして調製されたベシクル溶液中のベ
シクルを確認するための現在知られている最も確
かな方法はネガテイヴ染色法による電子顕微鏡観
察である。ネガテイヴ染色法とはリンタングステ
ン酸や酢酸ウラニールによつてベシクルを形成し
得る界面活性剤等の親水基部分の電子密度を高く
し、その部分を黒く染色する方法である。本発明
においてはこの方法によつてベシクルの生成を観
察した。ベシクルを含有するベシクル溶液は透明
でありかつ流動性も良い。一方、前記化合物がベ
シクルとはならず多層状構造となつた場合の溶液
はゲル状で白濁しかつ流動性も極めて不良であ
る。従つて、ベシクルの安定性試験（後述）にお
いては、たとえば超音波法でベシクル溶液を作
り、該溶液の透明度と流動性を経時的に観察する
ことによりベシクル用組成物の安定性を判定する
ことができる。また、ベシクルを確認するための
補助的な簡便法として、核磁気共鳴（NMR）法
が知られている。すなわち、¹H−又は¹³C−NMR
の緩和時間もしくは吸収線幅は、ベシクルの場合
とそうでない場合とでは大きく異なる。つまり、
ベシクルの場合は緩和時間が長くなり、吸収線幅
は狭く鋭くなる。一方、ベシクルでない場合は、
緩和時間が短く吸収線幅は広くなる。しかしなが
らNMR法では、ベシクルの特徴である二重膜構
造の存在を直接確認することができず、ベシクル
の存在の厳密な確認のためには上記の電子顕微鏡
による観察を行うべきである。 次に実施例により本発明を更に詳しく説明する
が、本発明はかかる実施例に限定されるものでは
ない。 実施例 １ 表−１に示すリン酸エステル塩と各種界面活性
剤とからベシクル用組成物を調製し、ベシクルの
生成及びその安定性を調べた。この結果を表−１
に示す。 〔ベシクル用組成物の調製〕 エタノールに溶解せしめたリン酸エステル塩10
ｇと界面活性剤１ｇを混合し、均一になるまで撹
拌した。次いでエバポレーターを用いてエタノー
ルを除去し、ベシクル用組成物の粉末を得た。 〔ベシクルの生成及びその確認〕 得られたベシクル用組成物の粉末10ｇに対し、
水90ｇを加えて撹拌すると粘稠で白濁したゲル状
組成物となつた。このゲル状組成物を60℃に保
ち、100W、25KHzの超音波を約１時間照射した。
得られた溶液について、電子顕微鏡観察をおこな
い、ベシクルの生成を確認した。なお、ベシクル
の生成しているものは、ほぼ透明で流動性の良い
溶液となつていた。 〔ベシクルの安定性試験〕 上記の如くして得られたベシクル溶液を３カ月
間20℃の恒温槽で保存し、３カ月経過後の状態を
透明度及び流動性の面から製造直後の状態と比較
して安定性を評価した。なお、ベシクルの生成及
びその安定性についての評価基準は次の通りであ
る。 Ａ：保存後の状態が製造直後と全く変わらず、ベ
シクル構造が完全に保持されている。 Ｂ：製造直後に比べわずかに増粘している程度で
あり、ベシクル構造がほぼ完全に保持されてい
る。 Ｃ：製造直後の溶液の増粘と白濁が著しく、ベシ
クル構造がほとんど存在しない。 Ｄ：製造直後の溶液が完全にゲル化白濁し、ベシ
クル構造の存在が全く認められない。 ＊：超音波照射を行つてもベシクルとはならな
い。

【表】

【表】 比較例 １ 表−１に示したリン酸エステル塩10ｇを水90ｇ
に溶解し、実施例１の方法に準じてベシクルを生
成させた。これを３カ月間20℃の恒温槽で保存
し、保存後の状態を調べた。７種のリン酸エステ
ル塩すべての場合においてベシクルは生成する
が、３カ月の保存の後は溶液がゲル状で白濁し、
ベシクル構造が失われていた。 実施例 ２ ジオクタデシルリン酸エステルトリエタノール
アミン塩と表−２に示された界面活性剤を用い、
実施例１の方法に従つてベシクル用組成物を調製
し、該組成物から得られるベシクルの安定性を調
べた。この結果を表−２に示す。

【表】

【表】 実施例 ３ 表−３に示す合計15種類のリン酸エステル塩
と、実施例１で用いた３種類の界面活性剤をそれ
ぞれ組み合わせて、実施例１の方法に準じて合計
45種類のベシクル用組成物を調製し、該組成物か
ら得られるベシクルの安定性を調べた。 この結果を表−３に示す。

【表】 実施例 ４ ジオクタデシルリン酸エステルトリエタノール
アミン塩と実施例１で用いた界面活性剤とを、表
−４に示す配合比率で混合し、実施例１の方法に
従つて合計39種のベシクル組成物を調製した。こ
の組成物について、実施例１と同様にしてベシク
ル生成及びその安定性を調べた。この結果を表−
４に示す。

【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の２成分(A)及び(B)を含有し、(A)成分と(B)成
   分の重量比が100：１〜100：100であるベシクル
   用組成物。 (A) 一般式（） 式中、記号は次のものを示す。 R₁及びR₂：炭素数６〜24の炭化水素基 Ｍ：アルカリ金属、アルカノールアンモニウ
   ム、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジ
   ン、アルギニン、ヒスチジン又はモルホリンの
   いずれか で表わされるリン酸エステル塩 (B) 一種又は二種以上の、次の式(a)〜（ｗ） R₃COOM (a) R₃OSO₃M (d) R₃O（AO）_oSO₃M (e) R₃O（AO）_oＨ (h) HO（AO）_p（C₃H₆O）_q（AO）_rＨ (j) R₃COO（AO）_oR₆ (l) R₃NH（−CH₂）−_tCOOM （ｖ） 式中、各記号は次のものを示す。 R₃：炭素数６〜36の炭化水素基 R₄及びR₅：炭素数５〜23の炭化水素基 R₆，R₇及びR₈：水素原子又は炭素数６〜24のア
   シル基 （ただし、一分子中にR₇とR₈を両方含む場合、
   そのうち少なくとも一方は水素原子である） R₉及びR₁₀：水素原子又は炭素数６〜24の炭化水
   素基 （ただし、少なくとも一方は水素原子である） R₁₁，R₁₂及びR₁₃：炭素数１〜24の炭化水素基 R₁₄：炭素数９〜23の炭化水素基 R₁₅：炭素数１〜24の炭化水素基若しくはヒドロ
   キシ炭化水素基 R₁₆及びR₁₇：炭素数１〜４の炭化水素基若しく
   はヒドロキシ炭化水素基又はベンジル基 Ａ：炭素数２〜４のアルキレン基 Ｍ：前記と同じ意味を有する Ｘ ：４級アンモニウムイオンの対イオンとなる
   アニオン ｌ，ｍ及びｎ：０又は１〜150の整数 ｐ，ｑ及びｒ：１〜150の整数 ｔ：１〜４の整数 で表わされる化合物群から選ばれた界面活性剤。 ２ (B)成分中、基Ｍにおけるアルカノールアンモ
   ニウムがモノエタノールアンモニウム、ジエタノ
   ールアンモニウム、トリエタノールアンモニウ
   ム、モノイソプロパノールアンモニウム、ジイソ
   プロパノールアンモニウム又はトリイソプロパノ
   ールアンモニウムのいずれかであり、テトラアル
   キルアンモニウムがテトラメチルアンモニウム、
   テトラエチルアンモニウム、テトラプロピルアン
   モニウム、テトラブチルアンモニウム、又はテト
   ラペンチルアンモニウムのいずれかである特許請
   求の範囲第１項記載のベシクル用組成物。