JPH032515B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH032515B2 JPH032515B2 JP55001233A JP123380A JPH032515B2 JP H032515 B2 JPH032515 B2 JP H032515B2 JP 55001233 A JP55001233 A JP 55001233A JP 123380 A JP123380 A JP 123380A JP H032515 B2 JPH032515 B2 JP H032515B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell line
- medium
- hybrid
- rat
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 121
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 40
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 11
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 8
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 5
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 claims description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 description 30
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 19
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 13
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 13
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 10
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 3
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000012090 serum-supplement Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- LRZPQLZONWIQOJ-UHFFFAOYSA-N 10-(2-methylprop-2-enoyloxy)decyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCCCCCCCCCOC(=O)C(C)=C LRZPQLZONWIQOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 206010060964 Arterial haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000537222 Betabaculovirus Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/91—Cell lines ; Processes using cell lines
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Semiconductor Memories (AREA)
- Static Random-Access Memory (AREA)
- Internal Circuitry In Semiconductor Integrated Circuit Devices (AREA)
Description
本発明は細胞ライン（Cell lines）および抗体
生産におけるその利用に関する。 特定の親細胞ラインから細胞融合技術によつて
誘導される細胞ラインから抗体を生産することが
最近注目されるようになつた。この方法はいくつ
かのマウス骨髄腫細胞ラインのうちの１種を親細
胞ラインとして使用しており、該親細胞ラインは
免疫化されたマウスまたはラツトからの細胞と融
合して雑種骨髄腫（hybrid myeloma）を与え、
該骨髄腫は増殖して免疫化に用いた免疫原
（immunogen）に対する抗体を生産する。この方
法の特有の利点は、非精製免疫原を用いて高度に
特異的な抗体を生産するのに使用できることであ
る。この方法は免疫学において重要な新しい手段
を提供するものであつたが、入手し得る親細胞ラ
インの性質から生ずる一定の制限を現在まで受け
てきている。 本発明の目的は、単クローン性（monoclonal）
抗体を調製するために現在入手し得るマウス骨髄
腫細胞ラインよりも一定の利点を有する親規な細
胞ラインを提供することである。 即ち本発明は、コレクスイオーン・ナスイオナ
ール・ドウ・クルトウール・ドウ・ミクロオーガ
ニスム〔Collection Nationale de Cultures de
microorganismes（C.N.C.M.）〕に１−078番で寄
託された細胞の特質を有するラツト骨髄腫細胞ラ
インに関する。 本発明の細胞ラインはマウス骨髄腫細胞ライン
に比べていくつかの利点を有する。抗体を生産す
るための雑種細胞ラインの生体内培養は、生体外
組織培養法に比べて一定の利点を有しており、例
えば培地に比べて動物血清中で得られる１mlあた
りの抗体が非常に高準位であるということも利点
に含まれる。生体内培養にラツトを使用すること
はマウスを使用することよりもいくつかの点で好
ましい。例えば血清や腹水流体（ascitic fluid）
の収量は多く、同産群（litters）も一般に多く、
またラツトはマウスに比べて抗原刺激に対してよ
り良く応答する。さらにラツトは単クローン性の
異種抗マウス抗体および同種抗ラツト抗体の生産
に必要であるが、本発明者らは免疫化されたラツ
トからの細胞とマウス骨髄腫親細胞ラインとを組
合せて生産される雑種細胞がマウスとラツトのど
ちらにおいても容易には培養されないことを見い
出した。さらにまた、本発明による細胞ラインは
一定の異種融合、例えばラビツトまたはヒトの細
胞の異種融合にも利点を有する。 ラツト骨髄腫細胞ラインは文献に記載されてい
るが、本発明者らは単クローン性抗体の生産にお
いて該細胞ラインを親細胞ラインとして使用する
ことが全く不適当であることを見い出した。ま
た、本発明による細胞ラインを生産するためには
該細胞ラインを淘汰および／または突然変異の広
範囲な過程に付す必要があつた。本発明による細
胞ライン調製の出発点はラツト骨髄腫腫瘍S210
の８−アザグアニン耐性変異菌210、RCY3、
Ag1であつた〔コトン（Cotton）およびミルスタ
イン（Milstein）、ネイチヤー（Nature）、1973
年、第244巻、第42頁〕。この変異菌について最初
に正常また免疫化したラツトの脾臓と融合する能
力があるかどうか試験したところ期待はずれの結
果となつた。それにもかかわらず、この細胞を軟
性寒天培地内で２回二次クローン化させ
（subcloned）、その後の研究のためにクローンY3
−Ag1.2.3を最終的に選択して107個の細胞バツチ
を試験したところリバータント（revertants）を
与えなかつた。このクローンの融合効率は最初は
なお満足すべきものではなかつたのでスピナーフ
ラスコ内で連続的に増殖させ、経時的な融合効率
を試験した。低い細胞密度および高い細胞密度の
両段階を含めて、本発明による良好な融合特性を
示す細胞ラインを得たのは５々月後であつた。
Y3−Ag1.2.3として特定されるこの細胞ラインの
保存ストツクはMRCの分子生物学研究所に保管
されている。さらにこの細胞ラインは1979年１月
９日にパリにあるパスツウール研究所のC.N.C.
M.に寄託されており、該寄託物はC.N.C.M.1−
078番で特定されている。 本発明による細胞ラインは親ライン210、
RCY3、Ag1と同様な一般的形態を有しており、
親ラインよりも一般により良い増殖特性で群がつ
て増殖する傾向のある非球状細胞を含んでいる。
さらに、親ラインのように８−アザグアニンに耐
性があり、S210で命名されるカツパコード型の
独特な軽鎖を生産して分泌し、ヒポキサンチン／
アミノプテリン／チミジン（HAT）培地内では
死滅する。この細胞ラインはもちろん別の特性を
有していて、細胞104〜106個あたり一般に１の範
囲にある良好な効率でラツトの脾臓細胞と連続的
に融合する。ラツトの細胞ライン１−078番の細
胞は外観上はマウスのP3−X63−Ag8骨髄腫細胞
に比べてより小さく、その増殖の初期段階は顕微
鏡下ではそれほど明瞭ではない。（このことは１
−078番細胞から誘導される雑種細胞のある種の
ものに対しては真実であるが、すべてに対してそ
うであるわけではない。）軟性寒天培地内でのラ
ツト細胞ラインのクローン化能（clonability）は
良好で、該ラインとそのラツト−ラツト雑種は、
マウスラインとそのマウス−マウス雑種がきつち
りした（tight）クローンを与えるのに比べて一
般にどちらかと言えば瀰漫性クローン（diffuse
clones）を与える。 １−078番細胞では液体窒素中に保存してもよ
く、また種々の形態の栄養培地内で増殖させても
よい。従つて本発明は、C.N.C.M.に１−078番と
して栄養培地内に入れて寄託されている細胞の特
性を有するラツト骨髄種細胞ラインを含む細胞培
養系にも及ぶものである。このような細胞培養系
は生体外のものが便利であり、その培地は本質的
には合成培地であるが、血清のような天然源から
得られる成分を含んでいてもよい。このような培
地としては、イーグルの最低必須培地（Eagles
minimum essential medium）〔例えば、ギブ
コ・ビオカルト・リミツテツド（Gibco Biocult
Ltd.）（ペイズリ、スコツトランド）から入手で
きる〕を10％またはそれ以下の胎児段階の子牛
（foetal calf）血清または熱で不活性化したウマ
血清のような血清補液（serum supplement）ま
たは血清を含まないイスコブ（Iscove）改質培地
を用して改質したドルベツコ（Dulbecco）改質
培地が例示される。このような培地で増殖された
細胞は別の培地、例えば胎児段階の子牛血清を含
んだRPMI1640や当該分野の文献に記載されてい
る細胞培養に一般に使用されている種々の培地内
で短期間の適応で増殖することができる。 本発明による細胞ラインは単クローン性抗体の
調製に使用することができる雑種細胞ラインの生
産に特に有用である。親細胞ラインからの雑種細
胞ラインの生産法には脾臓または免疫原に感作さ
れた他の免疫細胞を細胞ラインの細胞と融合させ
ることが含まれる。感作された免疫細胞は種々の
ソース（sources）から取り出してもよいが、ラ
ツト細胞を用いる方がマウス等の他のホスト
（host）からの細胞を用いるよりも良い結果が得
られる。免疫細胞の感作は常態、即ち自然におこ
る免疫化によつておこなわせてもよいが、直接免
疫化（direct immunisation）によつておこなう
のが好ましく、必要な免疫原をホスト動物へ投与
する。融合の後の、クローニングまたは二次クロ
ーニング（sub−cloning）をおこなつて１種また
はそれ以上の適当な雑種を選択するのが便利であ
る。 適当な免疫細胞と細胞ラインの細胞とを融合す
るには一般に融合促進剤を含有する適当な培地内
で混合することが必要である。従つて本発明は、
C.N.C.M.に１−078番で寄託されている細胞の特
性を有する細胞を免疫細胞、例えばマウスまたは
特にラツトの脾臓細胞等を該細胞の融合促進剤と
共に栄養培地内で融合する系も含む。このような
培地は合成培地であるのが便利であるが、所望に
よつて天然ソースから得られる成分を含ませても
よい。しかしながらこのような可能性はこの場合
それほど見込みがなく、培地には血清が存在しな
いのが好ましい。このような培地としてはイーグ
ルの最小必須培地、該培地のドルベツコ改質培
地、RPMI1640、当該分野の文献に記載されてい
る細胞培養に通常使用される種々の他の培地が例
示される。種々の融合剤、例えばセンダイウイル
ス（Sendai virus）のようなウイルスを用いても
よいが、ポリエチレングリコール、例えば
PEG1500等が好ましい。これらの融合剤を用い
る細胞融合は文献に記載されていて、その実施例
に述べられているがその手引として次のことが指
摘されている。即ち約40〜約55％のポリエチレン
グリコールをしばしば使用し、その最適濃度は分
子量に依存し、例えばPEG1500の場合は約50％
であり、また所望によりジメチルスルホキシドを
ポリエチレングリコールに添加してもよい。雑種
細胞ラインの分離は、親細胞ラインに対しては毒
性はあるが雑種ラインに対しては一般に毒性のな
いHAT培地で元の培地をおきかえて補助するの
が便利である。 雑種細胞ラインおよび親細胞ラインを一定の条
件下で増殖させることによつて、これらの細胞に
類似した有用な特性を有する細胞ラインを誘導す
ることができ、本発明はこのような誘導ラインを
生産するための１−078番細胞ラインの利用法お
よび特に誘導親細胞ラインおよびそれから誘導さ
れる雑種にも及ぶものである。本発明によるラツ
ト骨髄腫細胞ライン１−078番およびこれから誘
導される雑種の大部分はカツパ鎖S210を含んで
いるが、雑種によつて生産される抗体にとつては
元の骨髄腫のイムノグロブリン鎖を含まないのが
有利である。特に重要な細胞群は、もはやS210
カツパ鎖で表わすことはできないが抗体分泌能を
保持する誘導親細胞ラインによつて提供され、こ
れらは長期培養またはより直接的な処理によつて
変種として生産される。 上述のように、所望の免疫原に感作された免疫
細胞は別の方法によつても入手できる。これらは
自然に発生する所望の型の免疫細胞を分離するこ
とによつて得てもよいし、当該分野の文献に記載
されている手順、即ち免疫原を適当ならばフロイ
ンド補薬のような補薬と共に連続的に動物に投与
した後脾臓または他の免疫細胞を採取することに
よつて入手してもよい。ヒトの免疫細胞を使用す
る場合には自然に発生する免疫細胞の利用が特に
重要であり、この場合免疫原の投与はそれほど注
目すべきものではなく、患者からの感染によつて
自然に生産される免疫細胞がより適当である。自
然な免疫細胞に関して特に重要な領域は自己抗体
（auto antibodies）の生産である。 本発明は、蛋白質、糖蛋白質、少糖類、多糖
類、リポ糖類、ハプテン等のような抗原、例えば
ペプチド、ニユートロ・トランスミツター
（neutro transmitters）およびホルモン等を含む
広範囲な免疫原に対して感作された直接または自
然に免疫化された動物からの免疫細胞に適用でき
る。表面マーカー（surface merkers）でありか
つ腫瘍物（neoplastic naterial）、特に固体状腫
瘍から誘導される免疫原はかなり重要であるが、
本発明は細菌性抗原やウイルス性抗原および原虫
類や菌類から誘導される免疫原に適用してもよ
い。 さらに本発明は、C.N.C.M.に１−078番で寄託
されている細胞の特性を有するラツト骨髄腫細胞
ラインと、免疫原に感作された例ばマウスまたは
特にラツトからの脾臓または他の免疫細胞との雑
種細胞を含む。 この雑種細胞の上述のように親細胞と同様の一
般的な型の培地内で増殖させてもよい。 単クローン性抗体の生産に対しては、この雑種
細胞をラツトに接種して固体状腫瘍または腹水腫
瘍を生産させる。適当な増殖期間後、動物を殺し
て抗体を分離するために当該分野の常套法によつ
て腹水および／または血清を採取する。このよう
な手順には免疫吸着剤や膜フイルターの使用を含
む沈殿、透析、クロマトグラフイーが含まれる。 従つて本発明は、上述のようにして雑種細胞を
ラツトに接種して固体状腫瘍または腹水腫瘍をラ
ツトの体内で増殖させた後、ラツトの血清または
腹水液体から抗体を分離させることを特徴とする
単クローン性抗体の生産法を含む。 このような体内での抗体生産は上述のように体
外生産に比べていくつかの特別な利点を有する
が、抗体に対しては化学的な性質よりも免疫学的
性質のいくつかの利用法があり、この場合は生体
内生産に起因する不純物の濃度よりも性質のため
に体外生産が好ましい。他の場合でも、この細胞
は生体内では増殖しないので生体外生産が必要と
なる。適当な組織培養手順例にはスピナー・コン
テナー（spinner containers）内での塊状増殖
（massiue growth）や当該分野で周知の集団培
養（mass culture）法が含まれる。さらに、組
織培養は動物を使用する方法に比べ技術的に非常
に簡易化されるという利点が認められるが、この
利点は一般に収量が低いために実施規模を大きく
する必要があるという点で相殺される。体内法に
よつて生産される抗体の場合に上述した方法と類
似の精製手順を一般に使用してもよい。 本発明は上述した雑種細胞を用いて調製した抗
体にも及ぶものである。この腫の抗体は治療や特
に診断、および親和性クロマトグラフイーのよう
な手順において広範囲に適用できる。後術する
Fdフラグメントの注がれた抗マウスIgG単クロー
ン性抗体は単クローン性抗体生産雑種の一例であ
り、該雑種は間接接合アツセイ（indirect
binding assays）や他の中間手順において第２抗
体として適当な試剤を提供する。生産される他の
単クローン性抗体にはヒトの筋肉の起点
（human origin）の種々の腫瘍細胞に対する抗体
が含まれ、該腫瘍細胞にはヒトの細胞の亜集団が
認められ、血液学的診断に有効に利用されうる。
他の利用法としては蛋白質のような自然に生じる
物質を精製するための抗体の利用が例示される。 本発明による細胞ラインは抗体生産活性の回復
率が高いために特に価値があることが証明され
た。従つて一つの実験においては、細胞ラインと
免疫化されたラツトの脾臓細胞との融合によつて
得られた雑種について、元の骨髄腫とは異なつた
Igを分泌するその能力を分析した。この分析は分
泌物質のSDS−PAGE分析によつておこなつた。
12種の被試験培養物（すべて単クローン性とみら
れる）のうち11種がIg鎖を分泌し、わずかに１種
だけが元の骨髄腫とは異なつた鎖を分泌しなかつ
たので、試験した培養の90％以上が新しいイムノ
グロブリンを分泌したことになる。さらに、少な
くとも80％が本発明による細胞ラインを含んでい
た。この値はケーラー（ko¨hler）とミルスタイン
（Milstein）の報文〔ヨーロピアン・ジヤーナ
ル・オブ・イムノロジー（European Jornal of
Immunology）、1976年、第６巻、第511頁〕に記
載されているマウス系に対して得られた値よりも
高い。該報文の値はめつたに50％を越えることは
なく、全体的には一般に40〜60％である。 本発明を以下の実施例によつて説明する。 実施例 実施例で使用したDMM−10％FCSは以下の成
分を混合して調製した。 ドルベツコMEM500ml〔グルコース4500mg／
、焦性ブドウ酸ナトリウム含有せず。ギブコ−
ビオカルト（Gibco−Biocult）カタログNo.320−
1965〕 焦性ブドウ酸ナトリウムMEM100ｍＭ ５ml
（ギブコ−ビオカルト カタログNo.320−1360） ペニシリン／ストレプトマイシン 10ml（5000
ユニツトペニシリン／500ｍｃｇ ストレプトマ
イシン／ml。ギブコ−ビオカルトカタログNo.600
−5070） 子牛の胎児血清 50ml〔異なつたバツチから分
離された血清。セラ−ラブ（Sera−Lab）カタロ
グNo.５−000−la〕 DMM−HSおよび培地Ｄはそれぞれ子牛の胎
児血清のかわりにウマ血清を用いるか、これを省
略する以外は同様にして調製した。 実施例 １ ラツト骨髄腫細胞ライン１−078の調製 新しいガラス瓶に入つた凍結細胞210、RCY3
−Ag.1をイーグルの最低必須培地−熱で失活さ
せた10％ウマ血清（HS）で補充したドルベツコ
改質培地（DMM）を含有するプラスチツク瓶内
でCO210％−空気90％の雰囲気下37℃のもとで増
殖した。３週間増殖後、対数増殖期の細胞500個
をHS10％および寒天0.25％を含有するDMM2ml
中に37℃の下で懸濁し、この懸濁液をHB10％お
よび寒天0.5％を含有するDMM15ml（直径９cm
の組織培養ペトリ皿上に凝固させたもの）上に注
ぎかける。CO2を７％含有し水蒸気で飽和した空
気雰囲気下37℃で２週間細胞を培養した。最も早
く増殖した20のクローンを選び取つて培養皿に移
し、８−アザグアニンに対する耐性およびS210
軽鎖の生産分泌能について試験した。これに基づ
き、１つのクローン（Y3−Ag.1.2）を選び、上
記の手順を繰り返し二次クローン（Y3−
Ag.1.2.3）を分離した。 この二次クローンを培養フラスコ内において
DMM（HS10％で補充）上37℃で増殖させ、よく
増殖させた後（１週間）、同一の培地を含有し
CO210％−空気90％の雰囲気の１スピナーフラ
スコ内に移す。スピナーフラスコ内で３ケ月間連
続増殖させた後、培養物（culture）10mlを培養
瓶に入れ、10％FCS（子牛の胎児血清）で補充し
たDMMを用いて培地を２週間かけてゆつくりと
取替える。培養物をスピナーフラスコに移し、細
胞密度が非常に低い段階（約104細胞／ml）から
高い段階（約１×106〜２×106細胞／ml）に至る
種々の増殖期を含めさらに２ケ月間連続的に細胞
を増殖させる。細胞の融合効率をこの過程の種々
の段階で試験した。肉眼で識別できる改良は増殖
の最後の月に認められた。 37℃のフラスコ内での５ヶ月間の増殖段階にお
いて、各々２×1065×106個の細胞を含有するい
くつかの試料を取り出し、10％ジメチルスルホキ
シド（DMSO）および90％FCSの存在下におい
て、温度勾配約1゜／２分間で凍結させた。これら
の細胞はC.N.C.M.に１−078番で寄託された。 最良の融合は少なくとも２週間対数的に増殖さ
せた培養物を用いておこなわれた。使用するに
は、原試料の細胞または新たに凍結保存した試料
の細胞を急激に溶解させてから10％FCSを含有す
るDMMを用いて10mlまで希釈し、遠心分離機に
かけ、次いで10％FCSを含有するDMM10ml中に
再懸濁させた後、上記基準に従つて上述のように
して培養フラスコ内で増殖させる。６ケ月間増殖
させた培養物は融合効率の低下を示さず、その改
良さえ示すが、誘導のない細胞ラインを保存する
ためには連続増殖よりも液体窒素下で貯蔵する。 実施例 ２ 細胞ライン１−078番と、マウスIgGで超免疫
化したラツトの脾臓細胞との雑種の生産 DA種族のラツトに３週間間隔で完全フロイン
ド補助液中のマウスIgG100μｇを５のフツトパツ
ド（footpad）注射をうつて免疫化し、補助液を
含まない塩水中の同量のIgGを融合の４日前に静
脈注射して追加免疫化をおこなつた。このラツト
の脾臓細胞をはじめに子牛の胎児血清（FCS）２
％含有するドルベツコ燐酸塩緩衝塩水（PBS）
中で融合用に調製した。次いでこの細胞を血清補
充液を含まないドルベツコ改質培地（培地Ｄ）で
洗浄し、108個の脾臓細胞を培地に懸濁した細胞
ライン１−078番の細胞５×107個と混合する。混
合物を50mlプラスチツク製円錐形管中600ｇで７
分間遠心分離機にかけ、次いて上澄みを除去し、
細胞ペレツトを管底部を静かにたたいて粉砕し
た。その後の操作は約37℃でおこなつた。50％ポ
リエチレングリコール（PEG）1500（調製したば
かりの試料または暗所に保存した試料）の培地Ｄ
溶液（フエノールレツドによるPHは7.6−7.8）0.8
ml含有する１mlピペツトを用い１分間かけて該溶
液を細胞に静かに添加して細胞を懸濁させた。こ
の懸濁液を37℃で１分間保つた後、培地Ｄを１分
間かけて添加した。さらに培地D20mlを５分間か
けて添加した後、細胞を遠心分離機にかけ、
FCS20％含有するドルベツコ改質培地（DMM）
中に静かに再懸濁した。この懸濁液をリンブロ
（Linbro）BCL−5041トレーのくぼみ（２ml）48
個に分配した。24時間後、培地の半分をHAT含
有培地〔リトルフイールド（Littlefield）、サイ
エンス（Science）、1964年、第145巻、709頁〕で
取替えた。この操作を次の２日間およびその後は
２日おきに繰り返した。 13〜15日後くぼみ内に急激な増殖がみられ、好
結果の雑種クローンを示した。二次培養のわずか
に６試料が雑種増殖を示した。各雑種培養に使用
した培地は次の手順により、羊の赤血球
（SRBC）に特異性に異なつたマウスの単クロー
ン性抗体で感作されたSRBCの間接的血球凝集反
応によつて試験した。即ち、SRBC2.5×108個を
凝集をふせぐために抗SRBC雑種骨髄腫（ケーラ
ーおよびミルスタイン、ヨーロピアン・ジヤーナ
ル・オブ・イムノロジー、1976年、第６巻、511
頁）の培養上澄み液５mlで希釈し室温で培養して
被覆した。被覆SRBCを遠心分離機にかけて沈降
させ、ペレツトをPBS2.5ml中に再懸濁した。部
分標本25μをＶ形底のマイクロ滴定トレー中に
分配し、雑種培養物の上澄み液を各くぼみに滴下
した。１時間培養後、プレートを200ｇで４分間
遠心分離機にかけ、次いで45゜傾斜させ30〜60分
間保持した。この方法において１種の培養物
（YA2／40）を取り出した。該培養物はSPBCを
SP3（IgG1）で被覆したときは明らかに陽性であ
り、Sp2（IgG2b）またはSp1（IgM）で被覆した
ときは陰性であつた。この陽性雑種は軟性寒天培
地ではクローン化した。８つの別々のクローンを
選び取つた。これらのクローンはすべてSp3で被
覆したSRBCを用いる試験では陽性であつた。８
つのクローンの各々に対して、そのクローンから
分泌された抗体を、 14C−リジンで細胞を24時間
培養することによつて内部標識した。次いで上澄
み液をケーラーおよびミルスタインの報文（前記
文献）に記載のように、全還元後のソジウムドデ
シルスルフエートポリアクリルアミド（10％）ゲ
ル電気泳動法（SDS−PAGE）および等電的集束
法（IEF）を用いて分析した。すべてのクローン
は同一とみられ、分子量約50000の重鎖を示し、
単結合が軽鎖帯に存在する（親細胞ラインは重鎖
帯を欠いている）。予期した２種の軽鎖（骨髄腫
親軽鎖および抗体特異性軽鎖）は証明できなかつ
たが、これはこれらの軽鎖が類似の可動性を保持
するためと考えられる。８つのクローンのうちの
３つは再びクローン化し、純度を確実にしかつ安
定性を高めた。二次クローンのうち１つ
〔YA2／4H（LK）〕を選び以下に述べるようにそ
の特性について特別な試験に供した。 雑種細胞ラインYA2／40H（LK）の特性〔 3H
−Lys〕で内部標識化した抗体YA2／40を、異な
つたクラスの抗SRBC抗体で被覆した細胞と結合
させると、雑種には３種のIgM骨髄腫ではなく、
数種のマウスIgGが認められた。Sp1（IgM）で被
覆した細胞と結合させると、未被覆細胞と結合し
たバツクグランドと同じ値が得られたが、Sp3
（Igg1）およびSp2（Igg2）で被覆した細胞と結合
させるとそれぞれバツクグラウンドの4.9培およ
び35倍の値が得られた。この差はSp2およびSp3
によつて認められる抗原サイトの数と関連づけら
れる（Sp1によつて認められる抗原サイトの数は
Sp2とSp3の中間の値である）。 Sp2で被覆することは〔 3H〕YA2／40H（LK）
の結合アツセイに対しては敏感な手順である。こ
の結合を抑制することによつて特異性試験をおこ
なつた。これらの試験から、雑種にはIgGのサブ
クラスγ1およびγ2からの蛋白質が認められるこ
とが確認された。IgMによる抑制は少なくとも50
倍は効果は劣るが、蛋白質濃度が高いとある程度
の抑制がみられた。これは調製試料中のIgG不純
物によると考えられる。MOPC21、その変種IF1
（CH3領域を欠く）およびIF2（CH1領域を欠く）、
およびMOPC21（CH2およびCH3領域を欠く）の
Ｆ（ab′）2フラグメントを用いた抑制試験から、
IgG1の抗原決定因子（antigenic determinant）
はCH1領域にあることが確証された。 種特異性試験においては、単クローン性抗体
YA2／40はヒト、ウマまたはラツトの血清に対
して完全に陰性であるが、ラビツトの形成に対し
てはある程度の交差反応を示した。他方、該抗体
はモルモツトの血清とは全く効果的に交差結合し
た。IgGの異なつた種間の交差反応のこのパター
ンは、モルモツトおよび異なつたマウスのサブク
ラス（ヒト、ウマおよびラツトとは完全に異な
る）における局部構造の類似性が抗原決定因子に
含まれることを示す。 実施例 ３ 細胞ライン１−078番と、AOラツトの細胞で
免疫化されたDAラツトからの脾臓細胞との雑
種の生産 実施例２においてマウスIgGによる免疫化につ
いて述べた手順と同様の手順により、DA種のラ
ツトをAOラツトの細胞で免疫化した。このラツ
トの脾臓細胞を実施例２において述べた手順と同
様の手順を用いて細胞ライン１−078番と融合さ
せた。培養物を96個のセルに分配し、選択培地内
で４週間増殖させる。種々の培養物の雑種を、
SDS−PAGE分析法を用い親の骨髄腫と異なるIg
を分泌する能力によつて分析した。得られた結果
を以下の表−１に示す。
生産におけるその利用に関する。 特定の親細胞ラインから細胞融合技術によつて
誘導される細胞ラインから抗体を生産することが
最近注目されるようになつた。この方法はいくつ
かのマウス骨髄腫細胞ラインのうちの１種を親細
胞ラインとして使用しており、該親細胞ラインは
免疫化されたマウスまたはラツトからの細胞と融
合して雑種骨髄腫（hybrid myeloma）を与え、
該骨髄腫は増殖して免疫化に用いた免疫原
（immunogen）に対する抗体を生産する。この方
法の特有の利点は、非精製免疫原を用いて高度に
特異的な抗体を生産するのに使用できることであ
る。この方法は免疫学において重要な新しい手段
を提供するものであつたが、入手し得る親細胞ラ
インの性質から生ずる一定の制限を現在まで受け
てきている。 本発明の目的は、単クローン性（monoclonal）
抗体を調製するために現在入手し得るマウス骨髄
腫細胞ラインよりも一定の利点を有する親規な細
胞ラインを提供することである。 即ち本発明は、コレクスイオーン・ナスイオナ
ール・ドウ・クルトウール・ドウ・ミクロオーガ
ニスム〔Collection Nationale de Cultures de
microorganismes（C.N.C.M.）〕に１−078番で寄
託された細胞の特質を有するラツト骨髄腫細胞ラ
インに関する。 本発明の細胞ラインはマウス骨髄腫細胞ライン
に比べていくつかの利点を有する。抗体を生産す
るための雑種細胞ラインの生体内培養は、生体外
組織培養法に比べて一定の利点を有しており、例
えば培地に比べて動物血清中で得られる１mlあた
りの抗体が非常に高準位であるということも利点
に含まれる。生体内培養にラツトを使用すること
はマウスを使用することよりもいくつかの点で好
ましい。例えば血清や腹水流体（ascitic fluid）
の収量は多く、同産群（litters）も一般に多く、
またラツトはマウスに比べて抗原刺激に対してよ
り良く応答する。さらにラツトは単クローン性の
異種抗マウス抗体および同種抗ラツト抗体の生産
に必要であるが、本発明者らは免疫化されたラツ
トからの細胞とマウス骨髄腫親細胞ラインとを組
合せて生産される雑種細胞がマウスとラツトのど
ちらにおいても容易には培養されないことを見い
出した。さらにまた、本発明による細胞ラインは
一定の異種融合、例えばラビツトまたはヒトの細
胞の異種融合にも利点を有する。 ラツト骨髄腫細胞ラインは文献に記載されてい
るが、本発明者らは単クローン性抗体の生産にお
いて該細胞ラインを親細胞ラインとして使用する
ことが全く不適当であることを見い出した。ま
た、本発明による細胞ラインを生産するためには
該細胞ラインを淘汰および／または突然変異の広
範囲な過程に付す必要があつた。本発明による細
胞ライン調製の出発点はラツト骨髄腫腫瘍S210
の８−アザグアニン耐性変異菌210、RCY3、
Ag1であつた〔コトン（Cotton）およびミルスタ
イン（Milstein）、ネイチヤー（Nature）、1973
年、第244巻、第42頁〕。この変異菌について最初
に正常また免疫化したラツトの脾臓と融合する能
力があるかどうか試験したところ期待はずれの結
果となつた。それにもかかわらず、この細胞を軟
性寒天培地内で２回二次クローン化させ
（subcloned）、その後の研究のためにクローンY3
−Ag1.2.3を最終的に選択して107個の細胞バツチ
を試験したところリバータント（revertants）を
与えなかつた。このクローンの融合効率は最初は
なお満足すべきものではなかつたのでスピナーフ
ラスコ内で連続的に増殖させ、経時的な融合効率
を試験した。低い細胞密度および高い細胞密度の
両段階を含めて、本発明による良好な融合特性を
示す細胞ラインを得たのは５々月後であつた。
Y3−Ag1.2.3として特定されるこの細胞ラインの
保存ストツクはMRCの分子生物学研究所に保管
されている。さらにこの細胞ラインは1979年１月
９日にパリにあるパスツウール研究所のC.N.C.
M.に寄託されており、該寄託物はC.N.C.M.1−
078番で特定されている。 本発明による細胞ラインは親ライン210、
RCY3、Ag1と同様な一般的形態を有しており、
親ラインよりも一般により良い増殖特性で群がつ
て増殖する傾向のある非球状細胞を含んでいる。
さらに、親ラインのように８−アザグアニンに耐
性があり、S210で命名されるカツパコード型の
独特な軽鎖を生産して分泌し、ヒポキサンチン／
アミノプテリン／チミジン（HAT）培地内では
死滅する。この細胞ラインはもちろん別の特性を
有していて、細胞104〜106個あたり一般に１の範
囲にある良好な効率でラツトの脾臓細胞と連続的
に融合する。ラツトの細胞ライン１−078番の細
胞は外観上はマウスのP3−X63−Ag8骨髄腫細胞
に比べてより小さく、その増殖の初期段階は顕微
鏡下ではそれほど明瞭ではない。（このことは１
−078番細胞から誘導される雑種細胞のある種の
ものに対しては真実であるが、すべてに対してそ
うであるわけではない。）軟性寒天培地内でのラ
ツト細胞ラインのクローン化能（clonability）は
良好で、該ラインとそのラツト−ラツト雑種は、
マウスラインとそのマウス−マウス雑種がきつち
りした（tight）クローンを与えるのに比べて一
般にどちらかと言えば瀰漫性クローン（diffuse
clones）を与える。 １−078番細胞では液体窒素中に保存してもよ
く、また種々の形態の栄養培地内で増殖させても
よい。従つて本発明は、C.N.C.M.に１−078番と
して栄養培地内に入れて寄託されている細胞の特
性を有するラツト骨髄種細胞ラインを含む細胞培
養系にも及ぶものである。このような細胞培養系
は生体外のものが便利であり、その培地は本質的
には合成培地であるが、血清のような天然源から
得られる成分を含んでいてもよい。このような培
地としては、イーグルの最低必須培地（Eagles
minimum essential medium）〔例えば、ギブ
コ・ビオカルト・リミツテツド（Gibco Biocult
Ltd.）（ペイズリ、スコツトランド）から入手で
きる〕を10％またはそれ以下の胎児段階の子牛
（foetal calf）血清または熱で不活性化したウマ
血清のような血清補液（serum supplement）ま
たは血清を含まないイスコブ（Iscove）改質培地
を用して改質したドルベツコ（Dulbecco）改質
培地が例示される。このような培地で増殖された
細胞は別の培地、例えば胎児段階の子牛血清を含
んだRPMI1640や当該分野の文献に記載されてい
る細胞培養に一般に使用されている種々の培地内
で短期間の適応で増殖することができる。 本発明による細胞ラインは単クローン性抗体の
調製に使用することができる雑種細胞ラインの生
産に特に有用である。親細胞ラインからの雑種細
胞ラインの生産法には脾臓または免疫原に感作さ
れた他の免疫細胞を細胞ラインの細胞と融合させ
ることが含まれる。感作された免疫細胞は種々の
ソース（sources）から取り出してもよいが、ラ
ツト細胞を用いる方がマウス等の他のホスト
（host）からの細胞を用いるよりも良い結果が得
られる。免疫細胞の感作は常態、即ち自然におこ
る免疫化によつておこなわせてもよいが、直接免
疫化（direct immunisation）によつておこなう
のが好ましく、必要な免疫原をホスト動物へ投与
する。融合の後の、クローニングまたは二次クロ
ーニング（sub−cloning）をおこなつて１種また
はそれ以上の適当な雑種を選択するのが便利であ
る。 適当な免疫細胞と細胞ラインの細胞とを融合す
るには一般に融合促進剤を含有する適当な培地内
で混合することが必要である。従つて本発明は、
C.N.C.M.に１−078番で寄託されている細胞の特
性を有する細胞を免疫細胞、例えばマウスまたは
特にラツトの脾臓細胞等を該細胞の融合促進剤と
共に栄養培地内で融合する系も含む。このような
培地は合成培地であるのが便利であるが、所望に
よつて天然ソースから得られる成分を含ませても
よい。しかしながらこのような可能性はこの場合
それほど見込みがなく、培地には血清が存在しな
いのが好ましい。このような培地としてはイーグ
ルの最小必須培地、該培地のドルベツコ改質培
地、RPMI1640、当該分野の文献に記載されてい
る細胞培養に通常使用される種々の他の培地が例
示される。種々の融合剤、例えばセンダイウイル
ス（Sendai virus）のようなウイルスを用いても
よいが、ポリエチレングリコール、例えば
PEG1500等が好ましい。これらの融合剤を用い
る細胞融合は文献に記載されていて、その実施例
に述べられているがその手引として次のことが指
摘されている。即ち約40〜約55％のポリエチレン
グリコールをしばしば使用し、その最適濃度は分
子量に依存し、例えばPEG1500の場合は約50％
であり、また所望によりジメチルスルホキシドを
ポリエチレングリコールに添加してもよい。雑種
細胞ラインの分離は、親細胞ラインに対しては毒
性はあるが雑種ラインに対しては一般に毒性のな
いHAT培地で元の培地をおきかえて補助するの
が便利である。 雑種細胞ラインおよび親細胞ラインを一定の条
件下で増殖させることによつて、これらの細胞に
類似した有用な特性を有する細胞ラインを誘導す
ることができ、本発明はこのような誘導ラインを
生産するための１−078番細胞ラインの利用法お
よび特に誘導親細胞ラインおよびそれから誘導さ
れる雑種にも及ぶものである。本発明によるラツ
ト骨髄腫細胞ライン１−078番およびこれから誘
導される雑種の大部分はカツパ鎖S210を含んで
いるが、雑種によつて生産される抗体にとつては
元の骨髄腫のイムノグロブリン鎖を含まないのが
有利である。特に重要な細胞群は、もはやS210
カツパ鎖で表わすことはできないが抗体分泌能を
保持する誘導親細胞ラインによつて提供され、こ
れらは長期培養またはより直接的な処理によつて
変種として生産される。 上述のように、所望の免疫原に感作された免疫
細胞は別の方法によつても入手できる。これらは
自然に発生する所望の型の免疫細胞を分離するこ
とによつて得てもよいし、当該分野の文献に記載
されている手順、即ち免疫原を適当ならばフロイ
ンド補薬のような補薬と共に連続的に動物に投与
した後脾臓または他の免疫細胞を採取することに
よつて入手してもよい。ヒトの免疫細胞を使用す
る場合には自然に発生する免疫細胞の利用が特に
重要であり、この場合免疫原の投与はそれほど注
目すべきものではなく、患者からの感染によつて
自然に生産される免疫細胞がより適当である。自
然な免疫細胞に関して特に重要な領域は自己抗体
（auto antibodies）の生産である。 本発明は、蛋白質、糖蛋白質、少糖類、多糖
類、リポ糖類、ハプテン等のような抗原、例えば
ペプチド、ニユートロ・トランスミツター
（neutro transmitters）およびホルモン等を含む
広範囲な免疫原に対して感作された直接または自
然に免疫化された動物からの免疫細胞に適用でき
る。表面マーカー（surface merkers）でありか
つ腫瘍物（neoplastic naterial）、特に固体状腫
瘍から誘導される免疫原はかなり重要であるが、
本発明は細菌性抗原やウイルス性抗原および原虫
類や菌類から誘導される免疫原に適用してもよ
い。 さらに本発明は、C.N.C.M.に１−078番で寄託
されている細胞の特性を有するラツト骨髄腫細胞
ラインと、免疫原に感作された例ばマウスまたは
特にラツトからの脾臓または他の免疫細胞との雑
種細胞を含む。 この雑種細胞の上述のように親細胞と同様の一
般的な型の培地内で増殖させてもよい。 単クローン性抗体の生産に対しては、この雑種
細胞をラツトに接種して固体状腫瘍または腹水腫
瘍を生産させる。適当な増殖期間後、動物を殺し
て抗体を分離するために当該分野の常套法によつ
て腹水および／または血清を採取する。このよう
な手順には免疫吸着剤や膜フイルターの使用を含
む沈殿、透析、クロマトグラフイーが含まれる。 従つて本発明は、上述のようにして雑種細胞を
ラツトに接種して固体状腫瘍または腹水腫瘍をラ
ツトの体内で増殖させた後、ラツトの血清または
腹水液体から抗体を分離させることを特徴とする
単クローン性抗体の生産法を含む。 このような体内での抗体生産は上述のように体
外生産に比べていくつかの特別な利点を有する
が、抗体に対しては化学的な性質よりも免疫学的
性質のいくつかの利用法があり、この場合は生体
内生産に起因する不純物の濃度よりも性質のため
に体外生産が好ましい。他の場合でも、この細胞
は生体内では増殖しないので生体外生産が必要と
なる。適当な組織培養手順例にはスピナー・コン
テナー（spinner containers）内での塊状増殖
（massiue growth）や当該分野で周知の集団培
養（mass culture）法が含まれる。さらに、組
織培養は動物を使用する方法に比べ技術的に非常
に簡易化されるという利点が認められるが、この
利点は一般に収量が低いために実施規模を大きく
する必要があるという点で相殺される。体内法に
よつて生産される抗体の場合に上述した方法と類
似の精製手順を一般に使用してもよい。 本発明は上述した雑種細胞を用いて調製した抗
体にも及ぶものである。この腫の抗体は治療や特
に診断、および親和性クロマトグラフイーのよう
な手順において広範囲に適用できる。後術する
Fdフラグメントの注がれた抗マウスIgG単クロー
ン性抗体は単クローン性抗体生産雑種の一例であ
り、該雑種は間接接合アツセイ（indirect
binding assays）や他の中間手順において第２抗
体として適当な試剤を提供する。生産される他の
単クローン性抗体にはヒトの筋肉の起点
（human origin）の種々の腫瘍細胞に対する抗体
が含まれ、該腫瘍細胞にはヒトの細胞の亜集団が
認められ、血液学的診断に有効に利用されうる。
他の利用法としては蛋白質のような自然に生じる
物質を精製するための抗体の利用が例示される。 本発明による細胞ラインは抗体生産活性の回復
率が高いために特に価値があることが証明され
た。従つて一つの実験においては、細胞ラインと
免疫化されたラツトの脾臓細胞との融合によつて
得られた雑種について、元の骨髄腫とは異なつた
Igを分泌するその能力を分析した。この分析は分
泌物質のSDS−PAGE分析によつておこなつた。
12種の被試験培養物（すべて単クローン性とみら
れる）のうち11種がIg鎖を分泌し、わずかに１種
だけが元の骨髄腫とは異なつた鎖を分泌しなかつ
たので、試験した培養の90％以上が新しいイムノ
グロブリンを分泌したことになる。さらに、少な
くとも80％が本発明による細胞ラインを含んでい
た。この値はケーラー（ko¨hler）とミルスタイン
（Milstein）の報文〔ヨーロピアン・ジヤーナ
ル・オブ・イムノロジー（European Jornal of
Immunology）、1976年、第６巻、第511頁〕に記
載されているマウス系に対して得られた値よりも
高い。該報文の値はめつたに50％を越えることは
なく、全体的には一般に40〜60％である。 本発明を以下の実施例によつて説明する。 実施例 実施例で使用したDMM−10％FCSは以下の成
分を混合して調製した。 ドルベツコMEM500ml〔グルコース4500mg／
、焦性ブドウ酸ナトリウム含有せず。ギブコ−
ビオカルト（Gibco−Biocult）カタログNo.320−
1965〕 焦性ブドウ酸ナトリウムMEM100ｍＭ ５ml
（ギブコ−ビオカルト カタログNo.320−1360） ペニシリン／ストレプトマイシン 10ml（5000
ユニツトペニシリン／500ｍｃｇ ストレプトマ
イシン／ml。ギブコ−ビオカルトカタログNo.600
−5070） 子牛の胎児血清 50ml〔異なつたバツチから分
離された血清。セラ−ラブ（Sera−Lab）カタロ
グNo.５−000−la〕 DMM−HSおよび培地Ｄはそれぞれ子牛の胎
児血清のかわりにウマ血清を用いるか、これを省
略する以外は同様にして調製した。 実施例 １ ラツト骨髄腫細胞ライン１−078の調製 新しいガラス瓶に入つた凍結細胞210、RCY3
−Ag.1をイーグルの最低必須培地−熱で失活さ
せた10％ウマ血清（HS）で補充したドルベツコ
改質培地（DMM）を含有するプラスチツク瓶内
でCO210％−空気90％の雰囲気下37℃のもとで増
殖した。３週間増殖後、対数増殖期の細胞500個
をHS10％および寒天0.25％を含有するDMM2ml
中に37℃の下で懸濁し、この懸濁液をHB10％お
よび寒天0.5％を含有するDMM15ml（直径９cm
の組織培養ペトリ皿上に凝固させたもの）上に注
ぎかける。CO2を７％含有し水蒸気で飽和した空
気雰囲気下37℃で２週間細胞を培養した。最も早
く増殖した20のクローンを選び取つて培養皿に移
し、８−アザグアニンに対する耐性およびS210
軽鎖の生産分泌能について試験した。これに基づ
き、１つのクローン（Y3−Ag.1.2）を選び、上
記の手順を繰り返し二次クローン（Y3−
Ag.1.2.3）を分離した。 この二次クローンを培養フラスコ内において
DMM（HS10％で補充）上37℃で増殖させ、よく
増殖させた後（１週間）、同一の培地を含有し
CO210％−空気90％の雰囲気の１スピナーフラ
スコ内に移す。スピナーフラスコ内で３ケ月間連
続増殖させた後、培養物（culture）10mlを培養
瓶に入れ、10％FCS（子牛の胎児血清）で補充し
たDMMを用いて培地を２週間かけてゆつくりと
取替える。培養物をスピナーフラスコに移し、細
胞密度が非常に低い段階（約104細胞／ml）から
高い段階（約１×106〜２×106細胞／ml）に至る
種々の増殖期を含めさらに２ケ月間連続的に細胞
を増殖させる。細胞の融合効率をこの過程の種々
の段階で試験した。肉眼で識別できる改良は増殖
の最後の月に認められた。 37℃のフラスコ内での５ヶ月間の増殖段階にお
いて、各々２×1065×106個の細胞を含有するい
くつかの試料を取り出し、10％ジメチルスルホキ
シド（DMSO）および90％FCSの存在下におい
て、温度勾配約1゜／２分間で凍結させた。これら
の細胞はC.N.C.M.に１−078番で寄託された。 最良の融合は少なくとも２週間対数的に増殖さ
せた培養物を用いておこなわれた。使用するに
は、原試料の細胞または新たに凍結保存した試料
の細胞を急激に溶解させてから10％FCSを含有す
るDMMを用いて10mlまで希釈し、遠心分離機に
かけ、次いで10％FCSを含有するDMM10ml中に
再懸濁させた後、上記基準に従つて上述のように
して培養フラスコ内で増殖させる。６ケ月間増殖
させた培養物は融合効率の低下を示さず、その改
良さえ示すが、誘導のない細胞ラインを保存する
ためには連続増殖よりも液体窒素下で貯蔵する。 実施例 ２ 細胞ライン１−078番と、マウスIgGで超免疫
化したラツトの脾臓細胞との雑種の生産 DA種族のラツトに３週間間隔で完全フロイン
ド補助液中のマウスIgG100μｇを５のフツトパツ
ド（footpad）注射をうつて免疫化し、補助液を
含まない塩水中の同量のIgGを融合の４日前に静
脈注射して追加免疫化をおこなつた。このラツト
の脾臓細胞をはじめに子牛の胎児血清（FCS）２
％含有するドルベツコ燐酸塩緩衝塩水（PBS）
中で融合用に調製した。次いでこの細胞を血清補
充液を含まないドルベツコ改質培地（培地Ｄ）で
洗浄し、108個の脾臓細胞を培地に懸濁した細胞
ライン１−078番の細胞５×107個と混合する。混
合物を50mlプラスチツク製円錐形管中600ｇで７
分間遠心分離機にかけ、次いて上澄みを除去し、
細胞ペレツトを管底部を静かにたたいて粉砕し
た。その後の操作は約37℃でおこなつた。50％ポ
リエチレングリコール（PEG）1500（調製したば
かりの試料または暗所に保存した試料）の培地Ｄ
溶液（フエノールレツドによるPHは7.6−7.8）0.8
ml含有する１mlピペツトを用い１分間かけて該溶
液を細胞に静かに添加して細胞を懸濁させた。こ
の懸濁液を37℃で１分間保つた後、培地Ｄを１分
間かけて添加した。さらに培地D20mlを５分間か
けて添加した後、細胞を遠心分離機にかけ、
FCS20％含有するドルベツコ改質培地（DMM）
中に静かに再懸濁した。この懸濁液をリンブロ
（Linbro）BCL−5041トレーのくぼみ（２ml）48
個に分配した。24時間後、培地の半分をHAT含
有培地〔リトルフイールド（Littlefield）、サイ
エンス（Science）、1964年、第145巻、709頁〕で
取替えた。この操作を次の２日間およびその後は
２日おきに繰り返した。 13〜15日後くぼみ内に急激な増殖がみられ、好
結果の雑種クローンを示した。二次培養のわずか
に６試料が雑種増殖を示した。各雑種培養に使用
した培地は次の手順により、羊の赤血球
（SRBC）に特異性に異なつたマウスの単クロー
ン性抗体で感作されたSRBCの間接的血球凝集反
応によつて試験した。即ち、SRBC2.5×108個を
凝集をふせぐために抗SRBC雑種骨髄腫（ケーラ
ーおよびミルスタイン、ヨーロピアン・ジヤーナ
ル・オブ・イムノロジー、1976年、第６巻、511
頁）の培養上澄み液５mlで希釈し室温で培養して
被覆した。被覆SRBCを遠心分離機にかけて沈降
させ、ペレツトをPBS2.5ml中に再懸濁した。部
分標本25μをＶ形底のマイクロ滴定トレー中に
分配し、雑種培養物の上澄み液を各くぼみに滴下
した。１時間培養後、プレートを200ｇで４分間
遠心分離機にかけ、次いで45゜傾斜させ30〜60分
間保持した。この方法において１種の培養物
（YA2／40）を取り出した。該培養物はSPBCを
SP3（IgG1）で被覆したときは明らかに陽性であ
り、Sp2（IgG2b）またはSp1（IgM）で被覆した
ときは陰性であつた。この陽性雑種は軟性寒天培
地ではクローン化した。８つの別々のクローンを
選び取つた。これらのクローンはすべてSp3で被
覆したSRBCを用いる試験では陽性であつた。８
つのクローンの各々に対して、そのクローンから
分泌された抗体を、 14C−リジンで細胞を24時間
培養することによつて内部標識した。次いで上澄
み液をケーラーおよびミルスタインの報文（前記
文献）に記載のように、全還元後のソジウムドデ
シルスルフエートポリアクリルアミド（10％）ゲ
ル電気泳動法（SDS−PAGE）および等電的集束
法（IEF）を用いて分析した。すべてのクローン
は同一とみられ、分子量約50000の重鎖を示し、
単結合が軽鎖帯に存在する（親細胞ラインは重鎖
帯を欠いている）。予期した２種の軽鎖（骨髄腫
親軽鎖および抗体特異性軽鎖）は証明できなかつ
たが、これはこれらの軽鎖が類似の可動性を保持
するためと考えられる。８つのクローンのうちの
３つは再びクローン化し、純度を確実にしかつ安
定性を高めた。二次クローンのうち１つ
〔YA2／4H（LK）〕を選び以下に述べるようにそ
の特性について特別な試験に供した。 雑種細胞ラインYA2／40H（LK）の特性〔 3H
−Lys〕で内部標識化した抗体YA2／40を、異な
つたクラスの抗SRBC抗体で被覆した細胞と結合
させると、雑種には３種のIgM骨髄腫ではなく、
数種のマウスIgGが認められた。Sp1（IgM）で被
覆した細胞と結合させると、未被覆細胞と結合し
たバツクグランドと同じ値が得られたが、Sp3
（Igg1）およびSp2（Igg2）で被覆した細胞と結合
させるとそれぞれバツクグラウンドの4.9培およ
び35倍の値が得られた。この差はSp2およびSp3
によつて認められる抗原サイトの数と関連づけら
れる（Sp1によつて認められる抗原サイトの数は
Sp2とSp3の中間の値である）。 Sp2で被覆することは〔 3H〕YA2／40H（LK）
の結合アツセイに対しては敏感な手順である。こ
の結合を抑制することによつて特異性試験をおこ
なつた。これらの試験から、雑種にはIgGのサブ
クラスγ1およびγ2からの蛋白質が認められるこ
とが確認された。IgMによる抑制は少なくとも50
倍は効果は劣るが、蛋白質濃度が高いとある程度
の抑制がみられた。これは調製試料中のIgG不純
物によると考えられる。MOPC21、その変種IF1
（CH3領域を欠く）およびIF2（CH1領域を欠く）、
およびMOPC21（CH2およびCH3領域を欠く）の
Ｆ（ab′）2フラグメントを用いた抑制試験から、
IgG1の抗原決定因子（antigenic determinant）
はCH1領域にあることが確証された。 種特異性試験においては、単クローン性抗体
YA2／40はヒト、ウマまたはラツトの血清に対
して完全に陰性であるが、ラビツトの形成に対し
てはある程度の交差反応を示した。他方、該抗体
はモルモツトの血清とは全く効果的に交差結合し
た。IgGの異なつた種間の交差反応のこのパター
ンは、モルモツトおよび異なつたマウスのサブク
ラス（ヒト、ウマおよびラツトとは完全に異な
る）における局部構造の類似性が抗原決定因子に
含まれることを示す。 実施例 ３ 細胞ライン１−078番と、AOラツトの細胞で
免疫化されたDAラツトからの脾臓細胞との雑
種の生産 実施例２においてマウスIgGによる免疫化につ
いて述べた手順と同様の手順により、DA種のラ
ツトをAOラツトの細胞で免疫化した。このラツ
トの脾臓細胞を実施例２において述べた手順と同
様の手順を用いて細胞ライン１−078番と融合さ
せた。培養物を96個のセルに分配し、選択培地内
で４週間増殖させる。種々の培養物の雑種を、
SDS−PAGE分析法を用い親の骨髄腫と異なるIg
を分泌する能力によつて分析した。得られた結果
を以下の表−１に示す。
【表】
【表】
実施例 ４
細胞ライン１−078番と種々の感作された脾臓
細胞 実施例２で述べた手順と同様の手順によつて
種々の雑種細胞ラインを生産し、骨髄細胞、腫瘍
物の細胞、補体細胞および薬剤を含む種々の対象
に対する抗体を生み出した。これらの雑種および
その調製の顕著な特徴を以下の表−２にまとめ
た。表−２において、種々の見出しはそれぞれ感
作脾臓細胞を作るのに用いた免疫化剤、活性増殖
を示す雑種の二次培養物数、免疫化剤に対して陽
性活性を示す二次培養物数、これらの二次培養物
から単離されたクローン数、および一般に使用し
た感作剤に相当するこれらのクローンの抗体対象
を示す。
細胞 実施例２で述べた手順と同様の手順によつて
種々の雑種細胞ラインを生産し、骨髄細胞、腫瘍
物の細胞、補体細胞および薬剤を含む種々の対象
に対する抗体を生み出した。これらの雑種および
その調製の顕著な特徴を以下の表−２にまとめ
た。表−２において、種々の見出しはそれぞれ感
作脾臓細胞を作るのに用いた免疫化剤、活性増殖
を示す雑種の二次培養物数、免疫化剤に対して陽
性活性を示す二次培養物数、これらの二次培養物
から単離されたクローン数、および一般に使用し
た感作剤に相当するこれらのクローンの抗体対象
を示す。
【表】
実施例 ５
マウスIgGに対する単クローン性抗体の体内生
産 (1) 実施例２で述べたようにして生産したYA／
40H（LK）細胞（５×107個）をF1（Lou×DA）
ラツトに皮下注射して固体腫瘍として増殖させ
た。約10日後、注射した場所に腫瘍が発現しは
じめた。この動物が苦痛の徴候を示しはじめた
ときに全麻痺後、動脈から完全に出血させて殺
した。集めた血液を37℃で30分間凝結させ、血
清を遠心分離によつて清澄した。血清収量は典
型的には１匹あたり５〜10mlであつた。該血清
には10〜15mg／mlのIgGが含有され〔ラジアル
免疫拡散法（radial immunodiffusion）によ
つて測定〕、該IgGは酢酸セルロース電気泳動
法において顕著な骨髄腫帯成分を生じさせた。 (2) 上記手順の変形として、腫瘍を腹水腫瘍とし
て増殖させ、抗体源として血液および腹水流体
を提供した。５×107個の細胞を腹膜内注射す
る約２週間前にプリスタン0.5mlを腹膜内注射
して腫瘍を生じさせた。動物が苦痛の徴候を示
しはじめたときに殺し、血液を補集して上記の
ように処理し、腹腔を切開した後、死亡動物か
ら腹水流体を取り出した。腹水流体の収 は典
型的には１匹あたり約10mlで、５〜10mg／mlの
IgGが含有されていた。 上記(1)および(2)で得られた血清および／または
腹水流体は用途に応じ当該分野の文献に記載され
ている周知の手順、例えば以下の実施例６記載の
手順によつて適当な純度までさらに精製してもよ
い。 実施例 ６ マウスIgGに対する単するクーロン性抗体の生
体外生産 実施例２で述べたようにして生産したYA2／
40H（LK）細胞を最小量の血清（５％あるいはそ
れ以下）の存在下に適応させて増殖させた。細胞
はいつたん適応すると、イーグルの最低必須培
地、および５％子牛胎児血清で補充したドルベツ
コ改質培地を含有する５スピナーフラスコ内で
CO210％−空気90％の雰囲気下において増殖し
た。この細胞を定常相(1)に達するまで増殖させ
た。この時点で懸濁液は１mlあたり10〜50μｇの
抗体を含有した。 抗体調製品(2)を精製するために、硫酸アンモニ
ウムを懸濁液に添加して50％を飽和させ、得られ
た沈殿物を補集した。沈澱物の最小量の燐酸塩緩
衝塩水で溶解させ、この溶液を同じ媒体に対して
透析して精製抗体を調製した。 (1) 上記手順の変形として、細胞の最小血清濃度
で対数段階において増殖させ、次いで血清は含
有しないが増殖添加物（growth additives）、
例えばイスコブによつて推奨されている添加物
を含有する媒体で直接希釈する。 (2) 上記手順のさらに別の変形として、精製過程
をDEAEクルマトグラフイーまたは免疫吸着
剤、例えば抗ラツトイムグロブリン等を使用し
ておこなうか、あるいはこの過程を膜フイルタ
ーの使用で置き替える。
産 (1) 実施例２で述べたようにして生産したYA／
40H（LK）細胞（５×107個）をF1（Lou×DA）
ラツトに皮下注射して固体腫瘍として増殖させ
た。約10日後、注射した場所に腫瘍が発現しは
じめた。この動物が苦痛の徴候を示しはじめた
ときに全麻痺後、動脈から完全に出血させて殺
した。集めた血液を37℃で30分間凝結させ、血
清を遠心分離によつて清澄した。血清収量は典
型的には１匹あたり５〜10mlであつた。該血清
には10〜15mg／mlのIgGが含有され〔ラジアル
免疫拡散法（radial immunodiffusion）によ
つて測定〕、該IgGは酢酸セルロース電気泳動
法において顕著な骨髄腫帯成分を生じさせた。 (2) 上記手順の変形として、腫瘍を腹水腫瘍とし
て増殖させ、抗体源として血液および腹水流体
を提供した。５×107個の細胞を腹膜内注射す
る約２週間前にプリスタン0.5mlを腹膜内注射
して腫瘍を生じさせた。動物が苦痛の徴候を示
しはじめたときに殺し、血液を補集して上記の
ように処理し、腹腔を切開した後、死亡動物か
ら腹水流体を取り出した。腹水流体の収 は典
型的には１匹あたり約10mlで、５〜10mg／mlの
IgGが含有されていた。 上記(1)および(2)で得られた血清および／または
腹水流体は用途に応じ当該分野の文献に記載され
ている周知の手順、例えば以下の実施例６記載の
手順によつて適当な純度までさらに精製してもよ
い。 実施例 ６ マウスIgGに対する単するクーロン性抗体の生
体外生産 実施例２で述べたようにして生産したYA2／
40H（LK）細胞を最小量の血清（５％あるいはそ
れ以下）の存在下に適応させて増殖させた。細胞
はいつたん適応すると、イーグルの最低必須培
地、および５％子牛胎児血清で補充したドルベツ
コ改質培地を含有する５スピナーフラスコ内で
CO210％−空気90％の雰囲気下において増殖し
た。この細胞を定常相(1)に達するまで増殖させ
た。この時点で懸濁液は１mlあたり10〜50μｇの
抗体を含有した。 抗体調製品(2)を精製するために、硫酸アンモニ
ウムを懸濁液に添加して50％を飽和させ、得られ
た沈殿物を補集した。沈澱物の最小量の燐酸塩緩
衝塩水で溶解させ、この溶液を同じ媒体に対して
透析して精製抗体を調製した。 (1) 上記手順の変形として、細胞の最小血清濃度
で対数段階において増殖させ、次いで血清は含
有しないが増殖添加物（growth additives）、
例えばイスコブによつて推奨されている添加物
を含有する媒体で直接希釈する。 (2) 上記手順のさらに別の変形として、精製過程
をDEAEクルマトグラフイーまたは免疫吸着
剤、例えば抗ラツトイムグロブリン等を使用し
ておこなうか、あるいはこの過程を膜フイルタ
ーの使用で置き替える。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ヒポキサンチン／アミノブテリン／チミジン
（HAT）培地内で死滅し、S210カツパーイムノ
グロブリン鎖を発現する能力を有するY3−
Ag1.2.3として特定されるラツト骨髄腫細胞ライ
ン。 ２ 栄養培地内の第１項記載の細胞ライン。 ３ ヒポキサンチン／アミノブテリン／チミジン
（HAT）培地内で死滅し、S210カツパーイムノ
グロブリン鎖を発現する能力を有するY3−
Ag1.2.3として特定されるラツト骨髄腫細胞ライ
ンの細胞融合により得られるヒポキサンチン／ア
ミノブテリン／チミジン（HAT）培地内で死滅
せず、S210カツパーイムノグロブリン鎖を発現
する能力を有する雑種細胞ライン。 ４ Y3−Ag1.2.3として特定されるラツト骨髄腫
細胞ラインとマウスまたはラツトからの免疫細胞
から誘導される第３項記載の雑種細胞ライン。 ５ 免疫細胞が脾臓細胞である第４項記載の雑種
細胞ライン。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB7900775 | 1979-01-09 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015947A Division JPH02227096A (ja) | 1979-01-09 | 1990-01-25 | 抗体およびその製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55113722A JPS55113722A (en) | 1980-09-02 |
| JPH032515B2 true JPH032515B2 (ja) | 1991-01-16 |
Family
ID=10502406
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP123380A Granted JPS55113722A (en) | 1979-01-09 | 1980-01-09 | Cell lines |
| JP2015947A Granted JPH02227096A (ja) | 1979-01-09 | 1990-01-25 | 抗体およびその製法 |
| JP4182190A Expired - Lifetime JP2648419B2 (ja) | 1979-01-09 | 1992-07-09 | モノクローナル抗体混合物 |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015947A Granted JPH02227096A (ja) | 1979-01-09 | 1990-01-25 | 抗体およびその製法 |
| JP4182190A Expired - Lifetime JP2648419B2 (ja) | 1979-01-09 | 1992-07-09 | モノクローナル抗体混合物 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4350683A (ja) |
| EP (1) | EP0014519B1 (ja) |
| JP (3) | JPS55113722A (ja) |
| AT (1) | ATE2965T1 (ja) |
| AU (1) | AU542303B2 (ja) |
| CA (1) | CA1142466A (ja) |
| DE (1) | DE3062558D1 (ja) |
| DK (1) | DK169586B1 (ja) |
| GB (1) | GB2039948B (ja) |
| IE (1) | IE50418B1 (ja) |
| ZA (1) | ZA797020B (ja) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3167442D1 (en) * | 1980-07-07 | 1985-01-10 | Nat Res Dev | Improvements in or relating to cell lines |
| JPS57501147A (ja) * | 1980-07-16 | 1982-07-01 | ||
| IL62965A0 (en) * | 1980-07-17 | 1981-07-31 | Scripps Miles Lab Inc | Monoclonal antibodies to drugs and theri production |
| US4608337A (en) * | 1980-11-07 | 1986-08-26 | The Wistar Institute | Human hybridomas and the production of human monoclonal antibodies by human hybridomas |
| US4722896A (en) * | 1981-01-26 | 1988-02-02 | The Beth Israel Hospital Association | Method for affinity purification of hybridoma antibodies |
| DE3235924T1 (de) * | 1981-03-06 | 1983-05-05 | Celltech Ltd., Slough, Berkshire | Monoklonaler antikoerper |
| US4474893A (en) * | 1981-07-01 | 1984-10-02 | The University of Texas System Cancer Center | Recombinant monoclonal antibodies |
| US4714681A (en) * | 1981-07-01 | 1987-12-22 | The Board Of Reagents, The University Of Texas System Cancer Center | Quadroma cells and trioma cells and methods for the production of same |
| US4987079A (en) * | 1982-07-06 | 1991-01-22 | Wilbur D. Smith | Composition and method for in vitro cell culture |
| US4517289A (en) * | 1982-08-18 | 1985-05-14 | Brigham And Women's Hospital | Monoclonal antibodies for human tissue cross-matching |
| US4950598A (en) * | 1982-09-22 | 1990-08-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Process for making T cell hybridomas |
| WO1984003106A1 (en) * | 1983-02-04 | 1984-08-16 | Wadley Inst Of Molecular Medic | Production and characterization of hybridoma antibodies directed specifically against common determinant(s) present among closely related, but distinct proteins |
| US4508643A (en) * | 1983-02-08 | 1985-04-02 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Rat antibody to hCG |
| GB8318575D0 (en) * | 1983-07-08 | 1983-08-10 | Cobbold S P | Antibody preparations |
| US4468346A (en) * | 1983-10-27 | 1984-08-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Monoclonal antibodies to porcine immunoglobulins |
| US4469630A (en) * | 1983-11-25 | 1984-09-04 | J. T. Baker Chemical Co. | Purification of monoclonal antibodies |
| US4596769A (en) * | 1984-03-05 | 1986-06-24 | Temple University | Monoclonal antibodies to peptidoglycan and methods of preparing same |
| US4604235A (en) * | 1984-05-23 | 1986-08-05 | J. T. Baker Chemical Company | Purification of monoclonal antibodies |
| JPS60258128A (ja) * | 1984-06-06 | 1985-12-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ラツトモノクロ−ナル抗体 |
| US4791068A (en) * | 1984-06-22 | 1988-12-13 | Scripps Clinic And Research Foundation | Diagnostic assay for inhibitor of tissue-type and urokinase-type plasminogen activators |
| JPS6179164A (ja) * | 1984-09-26 | 1986-04-22 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 抗原抗体反応の短縮方法 |
| US4757018A (en) * | 1985-02-11 | 1988-07-12 | Hazleton Biotechnologies, Inc. | Myeloma cell lines and uses thereof |
| US4814275A (en) * | 1985-05-13 | 1989-03-21 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Monoclonal hybridoma antibody specific for a human epithelial antigen |
| CA1302919C (en) * | 1985-07-03 | 1992-06-09 | Robert T. Buckler | Histamine derivatives, immunogen conjugates and antibodies raised thereto |
| US5292636A (en) * | 1986-03-31 | 1994-03-08 | T Cell Diagnostics, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods using soluble T cell surface molecules |
| JP2520681B2 (ja) * | 1986-08-04 | 1996-07-31 | ザ ユニバーシティ オブ ニュー サウス ウェールズ | 生合成のヒトの成長ホルモン製品 |
| US5939391A (en) * | 1993-03-31 | 1999-08-17 | Pro-Neuron, Inc. | Hemoglobin alpha chain peptide fragments useful for inhibiting stem cell proliferation |
| PT691988E (pt) | 1993-03-31 | 2003-02-28 | Wellstat Therapeutics Corp | Inibidor da proliferacao de celulas estaminais e suas utilizacoes |
| US6610654B2 (en) | 1993-03-31 | 2003-08-26 | Wellstat Therapeutics Corporation | Inhibitor of stem cell proliferation and uses thereof |
| US5861483A (en) | 1996-04-03 | 1999-01-19 | Pro-Neuron, Inc. | Inhibitor of stem cell proliferation and uses thereof |
| DK2275540T3 (en) * | 1999-04-09 | 2016-05-09 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule. |
| US7504256B1 (en) * | 1999-10-19 | 2009-03-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing polypeptide |
| US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
| JPWO2003084569A1 (ja) | 2002-04-09 | 2005-08-11 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗体組成物含有医薬 |
| US7340957B2 (en) | 2004-07-29 | 2008-03-11 | Los Alamos National Security, Llc | Ultrasonic analyte concentration and application in flow cytometry |
| US8088757B2 (en) | 2004-09-10 | 2012-01-03 | Biorings Llc | Betulinol derivatives as anti-cancer agents |
| ES2586410T3 (es) | 2005-02-11 | 2016-10-14 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Procedimientos y composiciones de detección de un mutante de EGFR resistente a fármacos |
| US7835000B2 (en) | 2006-11-03 | 2010-11-16 | Los Alamos National Security, Llc | System and method for measuring particles in a sample stream of a flow cytometer or the like |
| EP2156178B1 (en) | 2007-04-02 | 2011-12-21 | Acoustic Cytometry Systems, Inc. | Methods for enhanced analysis of acoustic field focused cells and particles |
| US7837040B2 (en) * | 2007-04-09 | 2010-11-23 | Los Alamos National Security, Llc | Acoustic concentration of particles in fluid flow |
| US8083068B2 (en) | 2007-04-09 | 2011-12-27 | Los Alamos National Security, Llc | Apparatus for separating particles utilizing engineered acoustic contrast capture particles |
| US8263407B2 (en) * | 2007-10-24 | 2012-09-11 | Los Alamos National Security, Llc | Method for non-contact particle manipulation and control of particle spacing along an axis |
| US8528406B2 (en) | 2007-10-24 | 2013-09-10 | Los Alamos National Security, LLP | Method for non-contact particle manipulation and control of particle spacing along an axis |
| US8266950B2 (en) | 2007-12-19 | 2012-09-18 | Los Alamos National Security, LLP | Particle analysis in an acoustic cytometer |
| US8714014B2 (en) | 2008-01-16 | 2014-05-06 | Life Technologies Corporation | System and method for acoustic focusing hardware and implementations |
| US11324222B2 (en) | 2016-03-28 | 2022-05-10 | Toyo Seikan Group Holdings, Ltd. | Dispersion liquid, method for producing the same, and copper compound particles |
| JP6984122B2 (ja) * | 2016-12-15 | 2021-12-17 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 抗ウイルス性を有する分散液 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4196265A (en) * | 1977-06-15 | 1980-04-01 | The Wistar Institute | Method of producing antibodies |
| ZA783261B (en) * | 1977-06-15 | 1979-06-27 | Wistar Inst | Method of producing antibodies |
| US4172124A (en) * | 1978-04-28 | 1979-10-23 | The Wistar Institute | Method of producing tumor antibodies |
-
1979
- 1979-12-21 CA CA000342515A patent/CA1142466A/en not_active Expired
- 1979-12-27 ZA ZA00797020A patent/ZA797020B/xx unknown
-
1980
- 1980-01-03 US US06/109,391 patent/US4350683A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-01-07 DK DK007380A patent/DK169586B1/da active
- 1980-01-08 EP EP80300077A patent/EP0014519B1/en not_active Expired
- 1980-01-08 AU AU54456/80A patent/AU542303B2/en not_active Expired
- 1980-01-08 AT AT80300077T patent/ATE2965T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-01-08 DE DE8080300077T patent/DE3062558D1/de not_active Expired
- 1980-01-08 IE IE32/80A patent/IE50418B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-01-08 GB GB8000595A patent/GB2039948B/en not_active Expired
- 1980-01-09 JP JP123380A patent/JPS55113722A/ja active Granted
-
1990
- 1990-01-25 JP JP2015947A patent/JPH02227096A/ja active Granted
-
1992
- 1992-07-09 JP JP4182190A patent/JP2648419B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3062558D1 (en) | 1983-05-11 |
| JPS55113722A (en) | 1980-09-02 |
| EP0014519B1 (en) | 1983-04-06 |
| AU5445680A (en) | 1980-07-17 |
| US4350683A (en) | 1982-09-21 |
| AU542303B2 (en) | 1985-02-14 |
| DK7380A (da) | 1980-07-10 |
| IE50418B1 (en) | 1986-04-16 |
| JPH02227096A (ja) | 1990-09-10 |
| ATE2965T1 (de) | 1983-04-15 |
| EP0014519A3 (en) | 1981-01-07 |
| GB2039948B (en) | 1983-04-07 |
| GB2039948A (en) | 1980-08-20 |
| EP0014519A2 (en) | 1980-08-20 |
| CA1142466A (en) | 1983-03-08 |
| JP2648419B2 (ja) | 1997-08-27 |
| JPH052318B2 (ja) | 1993-01-12 |
| IE800032L (en) | 1980-07-09 |
| JPH05276983A (ja) | 1993-10-26 |
| DK169586B1 (da) | 1994-12-12 |
| ZA797020B (en) | 1981-08-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2648419B2 (ja) | モノクローナル抗体混合物 | |
| US4472500A (en) | Rat myeloma cell lines | |
| US4468346A (en) | Monoclonal antibodies to porcine immunoglobulins | |
| US4634664A (en) | Process for the production of human mono-clonal antibodies | |
| JP2640463B2 (ja) | ヒト―ヒトハイブリドーマの製造法 | |
| US4487833A (en) | Method of preparing hybridomas and of purifying immunogenic materials | |
| EP0038642B1 (en) | A monoclonal antibody against hepatitis b and its production, a hybridoma producing the monoclonal antibody and compositions containing it, the propagation of the hybridoma and the monoclonal antibody for use as an antiviral agent against hepatitus b and in isolating hepatitus b surface antigen from a sample | |
| US5114847A (en) | Process for the production of permanently culturable animal and human cell lines and the use thereof | |
| US4517289A (en) | Monoclonal antibodies for human tissue cross-matching | |
| JPS5939832A (ja) | モノクロ−ナル抗体ならびにその製法、使用法 | |
| US4792601A (en) | Monoclonal antibody to mullerian inhibiting substance | |
| EP0251106A2 (en) | Improved fusion method | |
| JP3043023B2 (ja) | ハイブリドーマ | |
| KR900007950B1 (ko) | 모노클로날 항체의 제조방법 | |
| JPS6239999B2 (ja) | ||
| EP0618978A1 (en) | In vitro antibody production | |
| JPS63253098A (ja) | ヒト抗体に対するモノクロ−ナル抗体、その製法及び用途 | |
| JPH03271235A (ja) | 抗カンジダ菌抗体分泌ハイブリドーマ | |
| JPH0570437B2 (ja) |