JPH03247285A - 組換えワクシニアウイルス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ブタヘルペスウィルス１型由来の新規な蛋白
質及びそれをコードする遺伝子に関する。

詳しくは、ブタヘルペスウィルス１型の主要カプシド蛋
白質、それをコードする遺伝子及び該遺伝子が組込まれ
た組換えワクシニアウィルスに関する。

（従来の技術及び発明が解決しようとする問題点）ブタ
ヘルペスウィルス１型（以下５）（Ｖ〜１と言う。）は
、一般にオーエスキー病ウィルスまたは仮性狂犬病ウィ
ルスと呼ばれているが、霊長類を除くほとんどのは乳類
と一部の鳥類に感染する病原性ウィルスである。ブタ以
外の動物が感染すると、はとんどの場合径ようを特徴と
する狂犬病様症状を呈し、急性の経過をとり死亡する。

ブタが感染すると、成豚はほとんど無症状に経過しウィ
ルスキャリアーとなり、妊娠豚は死流産を起こし、幼若
豚は急性の経過をとり死亡することが多い。

５ＨＶ−１は、潜伏感染するウィルスの性質から世界中
のブタに流行して経済的損失をもたらしており、養豚業
者の間で特に問題となっている。

対策としては、抗５ＨＶ−１抗体陽性豚の摘発淘汰によ
るキャリア豚の排除が基本であり、効果的であるが、そ
れには確定診断が重要となる。

これまでにいくつかの診断薬が開発・使用されてきたが
、これらは培養細胞由来の５ＨＶ−１または５ＨＶ−１
感染細胞を利用したものであり、ウィルス表面糖蛋白質
の株間での変異または欠損による疑陰性反応あるいは非
特異結合による縦隔性反応等が問題となっている。また
ワクチンに関しても、感染防止に有効なものは未だ開発
されていない〔第４９会日本養豚学会大会講演要旨、４
３真−５１頁、（１９８８））。

近年、インフルエンザウィルスの研究から、ウィルス粒
子の内部蛋白質は、表面糖蛋白質より株間の変異が少な
い事及びウィルス感染細胞排除の為の認識機構の標的抗
原である事が明らかにされて来た〔セル（Ｃｅｌｌ）、
４土、９５９−９６８　（１９８６））。しかし、５Ｈ
Ｖ−１に関しては、ウィルス粒子の主要内部蛍白質であ
るカプシド蛋白質に関しては、はとんど解析がなされて
おらず、先に本発明者らの一部によって該遺伝子の一部
の制限酵素地回が明らかにされているに過ぎない（第１
０７回日本獣医学会講演要旨集、１６４頁、平成元年３
月１日発行）。従って所謂オーエスキー病の診断・予防
・治療に有用な５ＨＶ１主要カプシド蛋白質及びそれを
コードする遺伝子は解明されておらず、該遺伝子を組込
んだワクシニアウィルスも未だ得られていなかった。

（問題点を解決するための手段） そこで本発明者らは、５ＨＩ−１主要カプシド蛋白質を
コードする遺伝子を解明し、該遺伝子をゲノムＤＮＡに
組込んだ増殖可能な組換えワクシニアウィルスの構築を
目指し鋭意検討を重ね、本発明を完成した。

即ち、本発明の要旨は、第１図で示されるアミノ酸配列
をコードする５ＨＶ−１カプシド蛍白質遺伝子、第１図
で示される塩基配列で表わされる５ＨＶ−１カプシド蛋
白質遺伝子、該５ＨＶ−１カプシド蛋白質遺伝子の全部
、または一部を有する組換えワクシニアウィルス及び第
１図で示されるアミノ酸配列の全部または一部を有する
組換え５ＨＶ−１カプシド蛋白質に存する。

以下、本発明を説明するに、本発明の５ＨＶ−１主要カ
プシド蛋白質は、第１図に示すとおり、１３３０個のア
ミノ酸からなる蛋白質である。もとより本発明において
は、該蛋白質の免疫学的性質を損なわない範囲で一部の
アミノ酸を除去、修飾あるいは追加する等の改変を行っ
たものも、本発明の抗原蛋白質として含まれる。

上記主要カプシド蛋白質をコードする遺伝子としては、
例えば、第１図に示すようなアミノ酸配列をコードする
ものまたは、第１図に示すような塩基配列のものが挙げ
られる。尚、図中において塩基配列は他の相補的な塩基
配列を省略して１本鎖のみ記載した。

本発明の主要カプシド蛋白質をコードする遺伝子は、例
えば、次のような方法によって得られる。

まず、ウシ腎由来ＭＤＢＫ細胞、ウサギ腎由来ＲＫ−１
３細胞、サル腎由来Ｖｅｒｏ細胞、ブタ腎由来ＰＫ−１
５細胞等の培養細胞に５ＨＶ−１を感染させ、チオシア
ン酸グアニジン水溶液で可溶化し、Ｃｈｉｒｇｗｉｎら
の方法〔バイオケミストリー（Ｂ　ｉ　ｏ　ｃ　ｈ　ｅ
　ｍ　ｉ　ｓ　ｔ　ｒ　ｙ　）　ｌｉ、　　５２９４−
５２９９．（１９７９））に従って、塩化セシウム平衡
密度勾配超遠心法によって全ＲＮＡを沈澱として分離す
る。分離後、フェノール抽出、エタノール沈殿により全
ＲＮＡを精製する。

抗原遺伝子のｍＲＮＡは、ポリＡ部分を含むことが一般
的であることから定法によりこれをオリゴ（ｄＴ）セル
ロースカラムクロマトグラフィーにより精製し、ポリ（
Ａ）含有ＲＮＡ（ｐｏｌｙＡ“ＲＮＡ）を単離しｍＲＮ
Ａ原料とする。このｍＲＮＡ原料よりランダムプライマ
ー法〔セル（Ｃｅｌｌ）、４０，７４７−７５８．　　
（１９８０）］によりこれらｐｏｌｙＡ″ＲＮＡに対す
るｃＤＮＡライブラリーを得る。例えば、６塩基程度の
任意のプライマーを用い逆転写酵素により上記ｍＲＮＡ
に対するｃＤＮＡをランダムに合成する。さらにこのｃ
ＤＮＡをＤＮＡメチラーゼ（例えばＥｃｏＲ１メチラー
ゼ）によりメチル化し、ｃＤＮＡ中に存在する該制限酵
素切断部位を保護した後、両端に該制限酵素切断部位入
りＤ　Ｎ　Ａ　ＩＪンカー〔例えばＥｃｏＲＩリンカ−
（ＧＧＡＡＴＴＣＣ））を付加し、該制限酵素（例えば
Ｅｃ。

Ｒ１）により消化し、例えばＣＬ−４Ｂカラム等で精製
する。

このものをプラスミドあるいはλファージ等の発現・ク
ローニングベクターのクローニング部位に定法に従い挿
入する。例えば市販の発現クローニングベクターである
λｇｔｌｌＤＮＡ［プロシーデインゲス・オブ・ナショ
ナル・アカデミ−・オブ・サイエンス・ニー・ニス・ニ
ー（Ｐ　ｒ　ｏ　ｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、）。

８０．１１９４−１１９８．（１９８３）〕のＥｃｏＲ
１部位に導入することができる。

例えばλｇｔｌｌファージ内に組込まれたｃＤＮＡはλ
ｇｔｌｌファージ上のβ−ｇａｌ遺伝子の中に組込まれ
るので該ファージの大腸菌への感染（＆ＩＰＴＧ（イソ
プロピルβ−Ｄガラクトピラノシド）等の添加による該
ファージ上のラクトースオペロンプロモーターの誘導に
よりβ−ガラクトシダーゼと該ｃＤＮＡにコードされる
ペプチドとの融合蛋白質として容易に発現が誘導される
。

この様にして、ｃＤＮＡが組込まれたλｇｔ１１ファー
ジなどの発現ベクターファージを冨沢らの方法（「バク
テリオファージの実験法」９９頁−１７４頁、岩波書店
、１９７０年５月３０日発行）により大腸菌に感染させ
、寒天培地で培養する。形成されたプラークを５ＨＶ−
１主要力プシド蛋白質特異モノクローナル抗体を使用し
、免疫スクリーニング等の方法（例えば「ラボマニュア
ル遺伝子工学」９０頁−９３頁、丸善株式会社、１９８
８年１２月３０日発行）によって選択することにより容
易に目的とするｃＤＮＡを有するファージクローンを得
ることができる。

この免疫スクリーニング法に使用する抗体は、例えば５
ＨＶ−１感染細胞から、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル上で分子量により単離した蛍白質でマウスを免疫し、
常法によりマウスモノクローナル抗体産生株を樹立し、
次いで抗体を単離することにより得ることができる。

更に上記免疫スクリーニング陽性のプラークから冨沢ら
の方法によりファージを増殖させ、そのものからＭａｎ
ｉａｔｉｓらの方法〔モレキュラー・クローニング（Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ　　Ｃ１゜ｎｉｎｇ）、８５頁、コー
ルド・スプリング・バーバー・ラボラトリ−（Ｃｏｌｄ
　　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ）、（１９８２）］によりＤＮＡを精製し、適切な制
限酵素（例えばＥｃｏＲＩ等）で切断後、Ｍａｘａｍａ
ｎｄ　　Ｇ１１ｂｅｒｔの方法によって、または制限酵
素で切断後適切なプラスミドベクターまたはＭ１３ファ
ージなどのファージベクターにクロニングしＳａｎｇｅ
ｒらのジデオキシ法〔プロシーデインゲス・オブ・ナシ
ョナル・アカデミ−・オブ・サイエンス・ニー・ニス・
ニー（Ｐｒ。

ｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃ　ｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ。

）、ユ土、５４６３．（１９７７））によって目的ｃＤ
ＮＡの塩基配列すなわち該ｃＤＮＡの構造が決定できる
。

このようにして５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質をコード
するｃＤＮＡ断片が得られる。しかしながら、このよう
にして得られるｃＤＮＡ断片は、通常５ＨＶ−１主要カ
プシド蛋白質をコードする遺伝子の部分ｃＤＮＡ断片と
して得られる。５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質の全アミ
ノ酸をコードするＤＮＡは、まず上記部分ｃＤＮＡをプ
ローブとした常法のサザンブロットハイプリダイゼーシ
ョンにより５ＨＶ−１ゲノムＤＮＡの適切な制限酵素（
例えばＢａｍＨＩ等）断片内にマツプすることができる
。

かかるプローブの作成法としては、ストレプトアビジン
法、フォトビオチン核酸及び３２Ｐ核酸を使用した二ッ
クトランスレーシゴン法等が好ましい。

このようにして得られた制限酵素断片をプラスミドある
いはλファージ等のクローニングベクターにクローニン
グする。例えばクローニングベクターであるｐＵｃ１９
（ジーン（Ｇｅｎｅ）。

３３．１０３−１１９．（１９８５））のＢａｍＨ１部
位に導入することができる。このようにして調製した制
限酵素断片含有プラスミドを常法、例えばり、Ｈａｎａ
ｈａｎの方法〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイ
オロジー（Ｊ、　Ｍｏ　１゜Ｂｉｏｌ、）、１６６．５
７７、　　（１９８３））により大腸菌に形質転換し、
ベクターに存する薬剤耐性、例えばアンピシリン耐性を
マーカーにしてプラスミドを有する大腸菌株を取得する
。

このようにして得られた大腸菌のコロニーを培養しＢｉ
ｒｍｂｏｉｍらの方法［ニュークレイツク・アシッド・
リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ　　Ａｃ１ｄ　　Ｒｅｓ、）
、７，１５１３．（１９７９）］に従ってプラスミドＤ
ＮＡを得、適切な制限酵素で切断後、上記のＭａｘａｍ
　　ａｎｄ　　ＧｉＩｂｅｒｔの方法によってまたは、
制限酵素で切断後、更にＭ１３ファージなどのファージ
ベクターもしくはブラスミトヘクターＰＵＣ１１Ｂ、ｐ
ＵＣ１１９等にクローニングし、上述のＳａｎｇｅｒら
のジデオキシ法によって、目的の完全長ＤＮＡセグメン
トの塩基配列を決定することができる。

後述の実施例においては、このようにして得られるＤＮ
Ａセグメントの塩基配列は４８５０塩基対からなり、第
１図に示す５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質のアミノ酸配
列に対応する全長３９９３塩基対からなる５ＨＶ−１主
要カプシド蛋白質の構造遺伝子全長を含んでいる。

上記のようにして得られるＤＮＡ断片はそのままあるい
はその５′末端を修飾して、公知の発現ベクターにそれ
自体公知の方法でプロモーターの下流に挿入され、次い
で上記ＤＮＡが挿入された発現ベクターは、大腸菌、酵
母、動物細胞宿主等、公知の細胞中にそれ自体公知の方
法で導入される。

例えば、後述の実施例に示すようにして発現ベクターを
構築し、宿主に導入することによって５ＨＶ−１カプシ
ド蛋白質を発現する形質転換体を得ることができる。ま
た、上記ＤＮＡ断片を含むプラスミドをリン酸カルシウ
ム法等によりあらかじめワクシニアウィルスを感染させ
た細胞に導入することにより、組換えワクシニアウィル
スを得ることができる。

（実施例） 以下の実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが
、本発明は、その要旨を越えない限り以下の実施例によ
って限定されるものではない。

実施例１ （１）抗５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質マウスモノクロ
ーナル抗体の調製 免疫スクリーニングに用いる抗５ＨＶ−１主要カプシド
蛋白質マウスモノクローナル抗体産生細胞株は、常法に
より作製された。すなわち、４×１０１１個のＭＤＢＫ
細胞（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
、ＡＴＣＣＣＣＬ２２）に５ＨＶ−１インデイアナＳ株
（農林水産省家畜衛生試験場から入手できる）をマルチ
・プリシティ−・オブ・インフェクション（Ｍ、Ｏｏｌ
、：感染の多重度）、４プラーク・フォーミング・ユニ
ット（ＰＦＵ）／ｃｅｌｌで感染させ、３７°Ｃで培養
した。

この感染細胞を１６時間後に２０００Ｘｇ、１０分間遠
心後沈殿として回収し、５０ｍ１のリン酸生理食塩水（
ＰＢＳ）で３回洗浄し、２０００×ｇ、１０分間遠心後
沈殿として回収した。

この感染細胞の沈殿を３５ｍｊ！の１％トリトン（Ｔｒ
　ｉ　ｔ　ｏｎ）　Ｘ−１００及び１ｍＭフェニルメチ
ルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）を含むＰ　Ｂ　
Ｓ　ニ溶解し４°Ｃ−夜攬はんし、１００，０００Ｘｇ
、１時間遠心後沈殿として回収した。

この沈殿を４ｍｌの１ｍＭＰＭＳＦを含む６Ｍウレア水
溶液に溶解し、１６．ＯＯＯＸｇ、１０分間遠心し上清
を回収した。得られた上清３．９ｍｌを等量の４％ドデ
シル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、２０％グリセリン、１
０％β−メルカプトエタノール、０．００４％ブロモフ
ェノールブルーを含む０．２５　Ｍ　トリス−塩ｒｌ！
　（ｐＨ６，８）と混合し、１００°０１３分間インキ
ュベート後空冷し、常法により０．１％Ｓ　Ｄ　Ｓ　−
７，５％ポリアクリルアミドゲル電気泳動した。

このポリアクリルアミドゲルをクマシーブリリアントブ
ルーで染色後、同時に平行して電気泳動した分子量マー
カー（シグマ社製、ＭＷ−Ｓ　Ｄ　Ｓ−２００）との比
較により、分子量１４０〜１５０キロダルトンのバンド
を切り取り細切した。

この細切したポリアクリルアミドゲルから、常法により
マックスイールド（アト−社製）を用いて電気泳動的に
蛋白質を抽出し、アセトン沈殿を３回行い、約７００μ
ｇの精製主要カプシド蛋白質を得た。

このようにして得られた主要カプシド蛋白質２０μｇを
０．５　ｍ　１．のＰＢＳに溶解後、フロイント完全ア
ジュバントと等量混合乳化し、ＢＡＬＢ／Ｃマウスに一
匹当たり０．２５　ｍ　ｌずつ腹腔に接種した。４週間
後、ＰＢＳに溶解した抗原１０μｇ／　０．２５　ｍ　
ｌずつ腹腔に接種し、その４日後のひ細胞を抗体産生細
胞として、Ｐ３χ６３Ａｇ８Ｌ］。

１マウスミエローマ細胞（アメリカン・タイプ・カルチ
ャー・コレクション、ＡＴＣＣＣＲＬＩ５９７）と、常
法によりポリエチレングリコール法で細胞融合させた。

この融合細胞を９６穴マイクロプレートに分注し、）Ｉ
ＡＴ選択培地で培養し、１０〜１４日後に増殖してきた
ウェルの培養上清について、つぎにしめずＥＬＩＳＡ法
で抗体活性を調べた。

ＥＬＩＳＡ法 １、　１０ｕｇ／ｍｌにＰＢＳで希釈した精製抗原液を
５０μ２ずつ９６六マイクロタイタープレート（ファル
コン社製、３９１２）に分注し、４℃で一夜吸着させる
。

２、　抗原溶液を除き、５％ウシ血清アルブミンを含む
ＰＢＳを２５０μβずつ９６六マイクロタイタープレー
トに分注し、室温で２時間ブロックする。

３、　ブロック液を除き、ハイブリドーマの認められる
ウェルの培養上清を５０μ２ずつ９６六マイクロタイタ
ープレートに分注し、２〜１６時間室温で反応させる。

４、　培養上清を除き、０．１％トウイーン（Ｔｗｅｅ
ｎ）２０を含むＰＢＳで５回洗浄し、１：２０００倍希
釈の西洋ワサビパーオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ抗
体（カペル社製）を５０μｌずつ９６穴マイクロタイタ
ープレートに分注し、２〜１６時間室温で反応させる。

５、　標識抗体を除き、０．１％トウイーン（Ｔｗｅｅ
ｎ）２０を含むＰＢＳで５回洗浄し、０．０２％オルト
−フェニレン−ジアミン、０．０１％過酸化水素を含む
ＰＢＳを１００μβずつ９６六マイクロタイタープレー
トに分注し、室温で１０分間反応させ判定する。

このようにして得られた抗体産生ハイブリドーマは、常
法により３回限界希釈法でクローニングし、３クローン
の抗５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質モノクローナル抗体
産生株（ＩＢＩＩ、ＩＨＩ２．３Ｇ１２）を樹立した。

以上で得られた抗体産生ハイブリドーマを大量培養し、
常法によりプロティンＡカラムクロマトグラフィーで、
精製抗５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質モノクローナル抗
体を得た。

このようにして得られた抗体の特異性は、常法により３
ＳＳ−メチオニン（デュポン社製）で標識した５ＨＶ−
１感染細胞ライゼートを用いた免疫沈降法により、第２
図に示す通り確認された。

（２）ＳＨＶ−１主要カプシド蛋白質をコードする部分
ｃＤＮＡの取得 基質となる５ＨＶ−１ｃＤＮＡは常法に従って作製した
。すなわち４．４Ｘ１０”個の５ＨＶ−１感染ＭＤＢＫ
細胞よりチオシアン酸グアニジン−塩化セシウム法〔モ
レキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　　Ｃ
ｌｏｎｉｎｇ）、１９６頁、コールド・スプリング・ハ
ーバ−・ラボラトリ−（Ｃｏｌｄ　　Ｓｐｒｉｎｇ　　
ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）、　　（１９８２
））に従い下記の如く調製した。４．４Ｘ１０”個の５
ＨＶ−１感染ＭＤＢＫ細胞を５０ｍ１のＰＢＳで２回洗
浄後、７００Ｘｇ、５分間遠心し、細胞を沈殿として回
収した。

この細胞の沈殿を４Ｍチオシアン酸グアニジン、０．５
％ドデシル硫酸ナトリウム、２５ｍＭＥＤＴＡ、０．１
３％アンチホルムＡ及び０．ＩＭβ−メルカプトエタノ
ールからなる溶液６０ｍＡに可溶化した。この可溶化物
６０ｍｌを遠心管中で２ｍｆｆ１の２．４Ｍ塩化セシウ
ム溶液、８ｍｊ２の５．７Ｍ塩化セシウム溶液上に静か
に重層し、８３．ＯＯＯＸｇ、２０°Ｃ１３０時間遠心
後ＲＮＡを沈殿として回収した。

このＲＮＡ沈殿を５％ドデシル硫酸ナトリウム、１ｍＭ
ＥＤＴＡ、１０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７゜５）および
５％フェノールからなる溶液１ｍｆに溶解し、フェノー
ル−クロロホルムで抽出後、エタノール沈殿により回収
した。得られたＲＮＡ２１ｍｇを水５ｍｊ２に溶かした
。７０°Ｃ１３分間インキュベートし、塩化カリウムお
よびトリス−塩酸（ｐＨ７，５）をそれぞれ０．５Ｍお
よび１０ｍＭとなるように加えた。この混合物をオリゴ
（ｄＴ）セルロース・カラム（アマジャム社製）にかけ
た。

吸着したポリ（Ａ）を有するｍＲＮＡを１０ｍＭトリス
−塩酸（ｐ）１７．５）及び１０ｍＭ塩化カリウムから
なる溶液で溶出し、ポリ（Ａ）を有するｍＲＮＡ約９０
０μｇを得た。

このようにして得られたポリ（Ａ）ｍＲＮＡｌｏｕｇを
ＲＴ緩衝液［２０ｍＭトリス−塩酸（ｐ）（８，８）、
０．１Ｍ塩化カリウム、１２ｍＭ塩化マグネシウム、２
ｍＭ塩化マンガン］５０μｌに溶かし、ランダムプライ
マーｐｄ（Ｎ）６（アマジャム社製）８μｇを加え、９
５°Ｃ１３分間加熱し、変性させた。これを室温まで徐
冷し、ランダムプライマーをアニールさせた。このもの
に１０ｍＭｄＮＴＰ　（ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ
、ｄＧＴＰ）１０μ！、逆転写酵素２２５Ｕ　（アマジ
ャム社製）を加え、水を加えて計１００μｌの系とし４
２°Ｃで１時間反応させ第−鎖のｃＤＮＡを合成した。

　上記反応液５０μｌを使用し１０ｍＭＮＡＤ２ａｌ、
１０ｍＭｄＮＴＰ１０μｃ　ＲＮａ　ｓ　ｅＨ５Ｕ、大
腸菌リガーゼＩＵ、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩ　６．
３　Ｕ、１０倍濃度の大腸菌ＤＮＡリガーゼ緩衝液（０
，ＩＭＩ−リス−塩酸（ｐＨ７゜５）、０．ＩＭＤＴＴ
、６０ｍＭ塩化マグネシウム）１０μｌを加え、水を加
えて計１００μｌの系とし、３７°Ｃで１時間反応させ
、第２鎖のｃＤＮＡを合成した。

このようにして得られた２本鎖ＤＮＡを同量の水飽和フ
ェノールで抽出し、エーテルで水層のフェノールを除い
た後、エタノール沈殿を行った。

このようにして得られた沈殿を５０μ２の水に溶かし、
１０倍濃度のＴ４ＤＮＡポリメラーゼ緩衝液（０，３３
Ｍ）リス−酢酸（ｐＨ７，９）　、０．６６Ｍ酢酸カリ
ウム、０．１Ｍ酢酸マグネシウム、５ｍＭＤＴＴ）　１
０μｊ２．１０ｍＭｄＮＴＰ　１０ｐｉ！、Ｔ４ＤＮＡ
ポリメラーゼ６Ｕを加え、水を加えて計１００μｌの系
とし、３７°Ｃで１時間反応させ、２本鎖の平滑末端を
持ったＤＮＡを得た。このものを上述したとおりフェノ
ールで抽出し、除蛋白した後、エタノール沈殿を行って
ＤＮＡを精製後、風乾した。

このものにＣ５０ｍＭ）リス−塩酸（ｐＨ７，５）、１
ｍＭＥＤＴＡ−２ナトリウム、５ｍＭＤＴＴ）２０μ！
、１００μＭＳ−アデノシル−し−メチオニン２μ！、
１．８ｍｇ／ｍｆ　　ＥｃｏＲＩメチラーゼ０．２μｌ
を加え３７℃で１５分間反応させ、ＤＮＡ断片上のＥｃ
ｏＲＩ制限酵素切断部位のメチル化を行いその後フェノ
ール抽出を行いエタノール沈澱でＤＮＡを回収した。

つぎに、５′リン酸化したＥｃ　ｏＲＩリンカ−（ＧＧ
ＡＡＴＴＣＣ）（アマジャム社製）をｌμｇのｃＤＮＡ
あたり１００ｐｍ１００ｐ加え、１０倍濃度の７４ＤＮ
Ａリガーゼ緩衝液（０，５Ｍトリス塩酸（ｐＨ７，５）
　、６０ｍＭ塩化マグネシウム、１０ｍＭＤＴＴ〕を５
ｕｆ加え、０．１ＭＡＴＰ５μｆ、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ
５Ｕを加え計５０μｌの系とし、１４”Ｃで１６時間反
応させた後、７０″Ｃ１１０分間加熱して酵素を失活さ
せた。つぎに１０倍濃度のＥｃｏＲＴ緩衝液（ＩＭ）リ
ス−塩酸（ｐＨ７，５）　、０．５Ｍ塩化ナトリウム、
６０ｍＭ塩化マグネシウム）１０μｆ、ＥｃｏＲｌｌｏ
ｏＵを加えて計１００ｕｆＯ系とし、３７′Ｃで２時間
反応させ、リンカ−を切断した。さらにＢｉ。

Ｇｅｌ　　Ａ−５０（Ｂｉｏ　　Ｒａｄ社製）にこの反
応液を通し、１０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７，５）−６
ｍＭ塩化マグぶシウム緩衝液にて流出し、余分なＥｃ　
ｏＲＩリンカ−と、Ｅｃ　ｏＲ１リンカ−の付いた二本
鎖ｃＤＮＡを分離した。

得られたＥｃｏＲ１リンカ−付き二本鎖ｃＤＮＡＤＮＡ
断片上０ｎを用い、ＥｃｏＲＩで切断したλｇｔ　１１
ＤＮＡ２ｔｔｇと１００ｍＭＡＴＰを含む１０倍濃度の
Ｔ４ＤＮＡリガーゼ緩衝液（前述）０．５μｎ、Ｔ４Ｄ
ＮＡリガーゼＩＯＵを加え計５μ！の反応系で１４°Ｃ
１１６時間反応させλｇｔｌｌＤＮＡに上記二本ｔＪｉ
ｃＤＮＡを挿入した。

λファージパッケージングキント（アマジャム社製）を
用い上記ＤＮＡをλフアージ粒子中に導入した。パンケ
ージの手順はキットの説明書に従った。

このＤＮＡパンケージングを終了したλｇｔ１１ファー
ジを冨沢らの方法（［バクテリオファージの実験法Ｊ９
９頁−１７４頁、岩波書店、１９７０年５月３０日発行
）により大腸菌Ｙ１０９０に感染させ、プラークを形成
させた。約１０万個のプラークより以下に示すような免
疫スクリーニング法により陽性クローン１個を得た。こ
の免疫スクリーニングに使用した抗体は、上記（１）に
記載した方法で調製したものである。

まずλｇｔｌｌファージに感染したＹ１０９０〔プロシ
ーデインゲス・オフ・ナショナル・アカデミ−・オフ・
サイエンス・ニー・ニス・ニー（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ。

Ｓ、Ａ、）、主０．　１１９４−１１９８．　　（１９
８３）〕を４２°Ｃに保温した上層軟寒天とともにシャ
ーレにまき、４２°Ｃに５時間放置した。つぎに１０ｍ
ＭＩ　ＰＴＧを含ませ風乾したニトロセルロースフィル
ター（Ｓ＆Ｓ社製ＢＡ−８３）をその上に置き３７°Ｃ
にて３〜４時間培養した。このニトロセルロースフィル
ターを風乾したのちＴＢＳ〔１０ｍＭトリス−塩酸（ｐ
Ｈ７，５）　、５０ｍＭ塩化ナトリウム］で軽く濯ぎ、
３％ゼラチンを含むＴＢＳ緩衝液４００ｍｆに浸し、４
０°Ｃ１１時間振とうを行ってニトロセルロースフィル
ターのブロッキングを行った。つぎに、抗５ＨＶ−１主
要カプシド抗原に対するモノクローナル抗体を１％ゼラ
チンを含むＴＢＳ緩衝液で２０μｇ　／　ｍ　Ｅに希釈
し、フィルター１枚につき２ｍ！になるようにビニール
袋にフィルターとともに入れ、室温で１６時間反応させ
た。次に０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＢＳ緩衝液
４００ｍｌにて１０分間３回洗浄し、標識２次抗体であ
る抗マウスＩｇ−ＨＲＰ　（ホースラデイツシュパーオ
キシダーゼ）（アマジャム社製）を１％ゼラチンを含む
ＴＢＳ緩衝液に１０００分のｌ量加え、フィルター１枚
につき２ｒｎｅになるようにビニール袋にフィルターと
ともに入れ、室温で２時間反応させ、同様に０．０５％
Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＢＳ緩衝緩衝液４００紀ｆ１０
分間３回洗浄した。発色はフィルターを、０，０５％３
．３′−ジアミノベンチジン及び０．０１％過酸化水素
を含む２０ｍ１のＴＢＳ緩衝液に浸して行った。

このようにしてフィルター上に発色してポジティブなシ
グナルを与えるプラークを１個得た。このポジティブプ
ラークのシングルプラークアイソレーションを３度行っ
た。３度とも免疫スクリーニングを同様に行い、ポジテ
ィブであることを確認した。

つぎにこの単一なポジティブプラークからファージを大
量に増殖させ、そのＤＮＡを精製した。

まず大腸菌Ｙ１０９０をＮＺ培地（ＮＺアミン１０ｇ、
塩化ナトリウム５ｇ、５ｍＭ塩化マグ７シウムを水１Ｎ
に加え、ｐＨ７，２に調製）１０ｍｆで一晩培養した。

このもの１ｍｌにＭ、Ｏ，１，＝０、Ｉ　ＰＦＵ／ｃ　
ｅ　ｌ　ｌになるようにファージを感染させ、３７°ｃ
ｉｏ分放置後、ＮＺ培地１１に移し菌が溶菌するまで７
〜８時間３７°Ｃにて振とう培養を行いクロロホルム５
ｍｌを加え、さらに３０分間振とうを続けた。つぎに菌
体残渣を２０００Ｘｇ、１０分の遠心分離により除去し
、上清に塩化ナトリウム４２ｇ、ポリエチレングリコー
ル１００ｇを加えよく溶かしてから４°Ｃで一晩放置し
た。６５００ｒｐｍ、２０分遠心分離操作で沈殿を集め
、よく水滴を切り、沈殿を２０ｍｆの１Ｍ緩衝液［１０
ｍＭ）リス−塩酸（ｐＨ７，５）　、５ｍＭ塩化マグネ
シウム〕に溶かしＤＮａ　ｓ　ｅ　Ｉ。

ＲＮａ　ｓ　ｅＡをともにｌｏμｇ／ｍｆの濃度になる
ように加え、３７℃で１時間反応させた。

つぎに、２０ｍＡクロロホルムを加えて攪はんし、ポリ
エチレングリコールをクロロホルムに溶解させて水層か
ら除去した。この水層をさらに１０４．０００Ｘｇで６
０分の超遠心分離にかけファージ粒子を沈殿として回収
した。この沈殿を１ｍｌのＴＭ１１１衝液に溶かし、塩
化セシウム密度勾配遠心（１４５，０００Ｘｇ、２時間
）によりρ＝１．４５〜１．５０のファージ粒子を含ん
だ分画を得た。ＴＭＳＩ衝液に対し一晩、透析を行った
後、プロテネースＫを１００μｇ　／　ｍ　１になるよ
う加え、５６°Ｃで１時間反応させた。その後、同量の
水飽和フェノールを加えゆるやかにフェノール抽出を行
った。１２００Ｘｇ、１０分間の遠心分離の後、水層を
とり出し、透析チューブに入れて水に対して４°Ｃで一
晩、透析を行った。このようにして、約５ｍｇのＤＮＡ
が得られた。

このＤＮＡ１００μｇをＥｃｏＲｌｌｏｏＵで前述の緩
衝液系１００μ！中にて３７°Ｃで１時間反応させ切断
したところ１１２ｂｐのｃＤＮＡセグメントがファージ
ＤＮＡに挿入されていることが判明した。このＥｃ　ｏ
ＲＩフラグメントをクローニングベクターであるｐＵｃ
１１９のＥＣＯＲ■部位に再度クローニングし、ジデオ
キシ法にて塩基配列を決定した。該ｃＤＮＡ断片は、第
１図に示す５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質をコードする
遺伝子の２４５６〜２５６７に一致する、部分ｃＤＮＡ
断片であった。

つぎに、このＥｃ　ｏＲＩ断片５００ｎｇをニック・ト
ランスレーションキット（アマシ中ム社製）を用いＲ１
標識し、完全長の遺伝子を持ったＤＮＡのスクリーニン
グ用のプローブとした。ニック・トランスレーションの
手順はキットの説明書に従った。

（３）完全長の遺伝子を持ったＤＮＡの取得完全長の遺
伝子を持ったＤＮＡの原料となるウィルスは、５Ｘ１０
”個の５ＨＶ−１感染ＭＤＢＫ細胞より、Ｂｅｎ−Ｐｏ
ｒａｔらの方法〔ヴイロロジ−（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）、
６土、２９−３７、　　（１９７４））に従い精製し、
沈殿としてウィルスを回収した。

このようにして得られた沈殿を、１ｍｆのＴＢＳに溶解
し、ドデシル硫酸ナトリウム及びプロナーゼをそれぞれ
最終濃度０．６％及び４００ｕｇ／ｍｌ加え、３７℃で
一晩インキユベートした。

このものからフェノール−クロロホルムによりＤＮＡを
抽出し、エタノール沈殿した。このようにして、２５０
μｇのウィルスＤＮＡが得られた。

このようにして得られたウィルスＤＮＡ２０μｇを種々
の制限酵素、例えばＢａｍＨＩ等で切断後、５ｏｕｔｈ
ｅｒｎの方法〔ジャーナル・オプ・モレキュラー・バイ
オロジー（Ｊ、　Ｍｏ　１．８　ｉｏｆ、）、主８，５
０３−５１７．　　（１９７５））に従ってアガロース
ゲル電気泳動し、ニトロセルロースフィルターに転写後
、（２）で作製したプローブでハイブリダイゼーション
を行った結果、５ＲＶ−１主要カプシド蛋白質をコード
する遺伝子は、ＢａｍＨＩ第４フラグメント内のＮｃｏ
Ｉ部分切断フラグメント内に位置することが判明した。

つぎに、ウィルスＤＮＡ１００μｇをＢａｍＨＩ緩衝液
（１０ｍＭ）リス−塩酸（ｐ）１７．５）、１５０ｍＭ
塩化カリウム、７ｍＭ塩化マグネシウム〕３００μｊ２
に溶解し、ＢａｍＨｌｌｏｏＵを加え、３７℃で２時間
反応後、アガロースゲル電気泳動し、９．３　ｋ　ｂ　
ｐのＢａｍＨＩ第４７ラグメントをゲルより抽出した。

このようにして得られたＢａｍＨＩ第４フラグメント５
μｇをエタノール沈殿し、Ｎｃｏｌ緩衝液ＮＯｍＭ）リ
ス−塩酸（ｐＨ７，５）、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、
７ｍＭ塩化マグネシウム〕５０μｌに溶解し、Ｎｃｏ１
５ＬＪを加え、３７℃で２０分間反応後、アガロースゲ
ル電気泳動し、４゜９ｋｂｐのＮｃｏ１部分切断フラグ
メントをゲルより抽出した。

このようにして得られたＮｃｏ１部分切断フラグメント
１μｇをエタノール沈殿し、沈殿を２０μｌの水に溶か
し、１０倍濃度のＴ４ＤＮＡポリメラーゼ緩衝液（０，
３３Ｍ）リス−酢酸（ｐＨ７，９）、０．６６Ｍ酢酸カ
リウム、０１１Ｍ酢酸マグネシウム、５ｍＭＤＴＴ）５
ｕｌ、ｌｏｍＭｄＮＴＰ５μ２、Ｔ４ＤＮＡポリメラー
ゼ１０Ｕを加え、水を加えて計５０μｌの系とし、３７
°Ｃで１時間反応させ、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭトリス緩
衝液、１ｍＭＥＤＴＡ　（ｐ）１７．５））飽和フエノ
ールでＤＮＡを抽出した後、エタノール沈殿した。

このようにして得られた２本鎖の平滑末端をもったＤＮ
Ａを、プラスミドｐＵｃ１９のＳｍａ　１サイトにクロ
ーニングし、第３図に示す組換えプラスミドｐＴＭＣＰ
を得た。

このようにして得られた組換えプラスミドｐＴＭＣＰを
制限酵素Ｅｃ　ｏＲＩ及びＨｉｎｄｌＩ［で切断して得
た４、　９　ｋ　ｂ　ＰのＤＮＡ断片をＳａｎｇｅｒら
のジデオキシ法（前述）により、塩基配列の決定を行っ
た。すなわち、プラスミドｐＵｃ１１８（宝酒造社製）
をＥｃ　ｏＲＩ及びＨｉｎｄＩＩｒで切断したものに、
上記４．９　ｋ　ｂ　Ｔ）のＤＮＡ断片をサブクローニ
ングしたプラスミドを構築し、５ｐｈｌ及びＢｓｔＥＩ
ｌまたはＢａｍＨＩで切断後、Ｈｅｎ１ｋｏｆｆの方法
〔ジーン（Ｇｅｎｅ）。

２８．３５１−３５９．　　（１９８４）、　　ジーン
（Ｇｅｎｅ）、３３．１０３−１１９．（１９８５）〕
にて欠失変異株を得た。

このようにして得られた欠失変異株のＤＮＡ断片をＳａ
ｎｇｅｒらのジデオキシ法（前述）により、塩基配列の
決定を行った。さらには該塩基配列の確認の為に逆方向
からの塩基配列の決定を行った。すなわち、ｐＴＭＣＰ
のＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄＩ［ｌＤＮＡ断片をｐＵｃ１１
９をＥｃ　ｏＲＩ及びＨｉｎｄｎｌで切断したものにサ
ブクローニングしたプラスミド及び、ｐＴＭＣＰのＢｇ
ｌＩＩ−Ｋｐｎｌｌ、８ｋｂｐＤＮＡ断片に５ａｌｌリ
ンカ−を付加し５ａｌＩで切断したものを、ｐＵｃ１９
プラスミドを５ａｌｌで切断したものにサブクロニング
したプラスミドを構築し、ＫｐｎＩ及びＢｇｌｎ、Ｋｐ
ｎＩ及びＢａｍＨＩでそれぞれ切断後欠失変異株を分離
し、上記と同様の方法で塩基配列の決定を行った。

以上の結果５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質をコードする
遺伝子の塩基配列は、第１図に示す通りであることが分
かった。すなわち、第１図に示す配列の第１番から第３
番に最初のＡＴＧがあり、また、第３９９１番から第３
９９３番に終結コドンのＴＧＡがあることから、１３３
０個のアミノ酸からなる蛋白質をコードするオープンリ
ーディングフレームがあることが解った。

実施例２　５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質をコードする
遺伝子を組込んだ組換えワタシ ニアウイルスの作製 ワタシニアウイルスＩＨＤ−Ｊ株の血球凝集素（ＨＡ）
遺伝子〔ヴイロロジー（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）、１５０，
４５１．（１９８６））を含むｐＵＣ系プラプラスミド
ｐＨＡ１３ィルス、エエ６゜２３、（１９８６））を制
限酵素ＨｉｎｄＩ［［で切断し、Ｔ４ＤＮＡポリメラー
ゼで処理後ライゲーションしてＨｉｎｄｌＩ［切断部位
を除去した。同様の方法で５ａｌＩ切断部位、二つのＡ
ａｔＩ［切断部位の内の一つを除去した。

このようにして得られたプラスミドをＡａｔＩＩ及びＡ
ｃｃｌで切断し、これに第５図に示すような、両端にＡ
ａｔｌｌ及びＡｃｃｌ切断部位を持ち、内部にＨｉｎｄ
Ｉ［［切断部位を持つ合成りＮＡリンカ−を導入し、プ
ラスミドｐＨＡＳ２を構築つぎに、第６図に示すように
、プラスミドｐＴＭＣＰ　（第３図）から制限酵素Ｐｓ
ｔｌで切り出した２、　４　ｋ　ｂ　ｐのＤＮＡ断片を
Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼで処理して平滑末端にし、Ｈｉ
ｎｄＩ［Ｉリンカ−［ｄ　（ｐｃｃＡＡＧｃＴＴＧＧ）
）（宝酒造社製）をＴ４ＤＮＡリガーゼで付加後、Ｈｉ
ｎｄ■で切断した。これとプラスミドｐＵＣ９（宝酒造
社製）をＨｉｎｄＩＩＩで切断したものとをＴ４ＤＮＡ
リガーゼで連結しプラスミドｐＰＨを構築した。このよ
うにして得られたプラスミドｐＰＨをＢｓｔＥＩ［及び
Ｅｃ　ｏＲＩで切断し、得られた断片とｐＴＭＣＰをＢ
ｓｔＥＩｌ及びＥｃｏＲＩで切断した約３．４　ｋ　ｂ
　ｐのＤＮＡ断片とを７４ＤＮＡ１ガーゼで連結し、合
計で約４．　Ｏｋ　ｂ　ｐの５ＨＶ１主要カプシド蛋白
質をコードする遺伝子断片を持つプラスミドｐＨＥ（第
７図）を構築した。

このようにして得られたプラスミドｐＨＥを制限酵素Ｅ
ｃ　ｏＲＩで切断し、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼで処理し
平滑末端にした後、ＨｉｎｄＩＩ［リンカ−（ｄ　（ｐ
　ＣＡ、ＡＧＣＴＴＧ）　〕　（宝宝酒造社製をＴ４Ｄ
ＮＡリガーゼで付加し、ＨｉｎｄＩ［［で切り出すこと
により上記約４．０　ｋ　ｂ　ｐの５ＨＶ−１主要カプ
シド蛋白質をコードする遺伝子断片を取得した。これを
上記ｐＨＡＳ２プラスミドをＨｉｎｄｌ［Ｉで切断した
ものに挿入し、ワクシニアウィルスＲＡＭ白質のＮ末端
から２５番目のアミノ酸の下流に、５ＨＶ−１主要カプ
シド蛋白質のＮ末端から５３番目のアミノ酸が３個のア
ミノ酸を間に挿入したプラスミドｐＨＡｓ２−ＭＣＰ　
（第４図及び第８図）を構築した。

つぎに、直径３．５　ｃｍデイツシュ（ヌンク１５３０
６６）（インターメッド社製）で、サル腎由来ＣＶ−１
細胞（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
、ＡＴＣＣＣＣＬ７０）を５×１０５個培養し、ワタシ
ニアウィルスＬＣ１６ｍＯ株〔臨床とウィルス、３，２
２９−２３５゜（１９７５））を５Ｘ１０’　ＰＦＵ感
染させ、１時間後、上述の組換えプラスミドｐ　ＨＡＳ
　２−ＭＣＰｌｏｕｇをリン酸カルシウム法〔プロシー
デインゲス・オブ・ナシヲナル・アカデミ−・オブ・サ
イエンス・ニー・ニス・ニー（Ｐｒｏｃ、Ｎａ　ｔ　１
．Ａｃａｄ、Ｓｃ　ｉ、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　）、ユ９
．１２１０−１２１４．　　（１９８２））によってＤ
ＮＡ−リン酸カルシウム共沈物を作製し、その０．３　
ｍ　ｌを培養液に添加した。３７°Ｃで４時間インキュ
ベートした後、培養液を交換し、更に３７°Ｃで１８時
間インキュベートし、デイツシュごと３回凍結融解し、
超音波処理した。

このようにして得られたウィルス液から、組換えワクシ
ニアウィルスを得るために、直径９ｃｍデイシュ（ファ
ルコン社製、３００３Ａ）にウサギ腎由来ＲＫ−１３細
胞（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、
ＡＴＣＣＣＣＬ３７）を２×１０６個単層培養したもの
に、ウィルス液を２Ｘ１０３ＰＦＵ感染させ、３７°Ｃ
で３６時間培養後、０．５％ニワトリ赤血球液３ｍｌを
室温で１時間反応させ、ニワトリ赤血球が吸着しないＨ
Ａ−プラークを単離した。

このようにして単離したプラークを、その後３回連続し
て限界希釈法によりシングルプラークアイソレーション
し、最終的に２０種のＨＡ−ワクシニアウィルス株を得
た。これらのウィルス株を、８穴テイツシユ・カルチャ
ー・チェンバー・スライド（インターメッド社製、４８
０８）に単層培養したＲＫ−１３細胞に感染させ、３７
°Ｃで１６時間培養し、ＰＢＳで洗浄後室温で１０分間
アセトン固定し、実施例１の（１）で作製した抗５ＨＶ
１主要カプシド蛋白質マウスモノクローナル抗体を一次
抗体とし、イソチオシアン酸フルオレッセイン（ＦＩＴ
Ｃ）標識抗マウスＩｇＧ抗体（カペル社製）を二次抗体
として用いた間接蛍光抗体法でチエツクした。その結果
、８株のＨＡ−ワクシニアウィルス株が５ＨＶ−１主要
カプシド蛋白質を発現していることが確認された。

更に、上記の２０種のＨＡ−ワクシニアウィルス株感染
ＲＫ−１３細胞より抽出したＤＮＡを、それぞれ制限酵
素Ｈｉｎｄ［［で切断したものをサザンブロンドし、実
施例１の（２）で作製したプローブでチエツクした。そ
の結果、５ＨＶ−１主要カプシド蛋白質の発現がｆＩ認
された上記８株のＨＡワクシニアウィルス株が約４．０
　ｋ　ｂ　ｐの５ＨＶ１主要カプシド蛋白質をコードす
る遺伝子を持つことが確認された。（第９図）。

（発明の効果） 本発明によれば、所謂オーエスキー病の診断・予防・治
療に有用な、ブタヘルペスウィルス１型の主要カプシド
蛋白質を組換えＤＮＡ技術により生産することができる
。

【図面の簡単な説明】

第１図はブタヘルペスウィルス１型の主要カプシド蛋白
質のアミノ酸配列及び蛋白質をコードする遺伝子の塩基
配列を示す図である。 第２図は、抗ブタヘルペスウィルス１型の主要カプシド
蛋白質マウスモノクローナル抗体を用いた免疫沈降実験
の結果を示す図である。 第３図は、プラスミドｐＴＭＣＰの構築手順を示す図で
ある。 第４図は、プラスミドｐＨＡＳ２−ＭＣＰに組込まれた
ブタヘルペスウィルス１型の主要カプシド蛋白質をコー
ドする遺伝子の塩基配列を示す図である。 第５図は、プラスミドｐＨＡＳ２、第６図は、プラスミ
ドｐＰＨ１第７図はプラスミドｐＨＥ、第８図は、プラ
スミドｐＨＡＳ２−ＭＣＰの構築手順を示す図である。 第９図は、ＨＡ−ワクシニアウィルス株感染ＲＫ−１３
細胞より抽出したＤＮＡのＨｉｎｄＩ［Ｉ断片をサザン
プロットした結果を示す図である。 出　願　人　　農林水産省家畜衛生試験場三菱化成株式
会社 代　理　人　　弁理士　　要否用　　　−（ほか１名） 第 図 （その１） ＴＧ ｅｔ ４８４　　　ＣＴＧ　　ＧＡＣＴＣＧ　　ＴＴＣＧＡＧ
　　ＣＧＴ　　ＧＧＣ１６２Ｌｅｕ　　Ａｓｐ　　Ｓｅ
ｒ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｕ　　Ａｒｇ　　Ｇｌｙ５３２　
　　ＡＴＧ　　ＧＡＧ　　ＡＡＧ　　ＧＣＧ　　ＣＣＧ
　　ＣＣＣＣＴＧ１７８　　　Ｍｅｔ　　Ｇｌｕ　　Ｌ
ｙｓ　　Ａｌａ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ５８０
　　　ＧＡＧ　　ＧＧＣＣＧＧ　　ＣＴＣＧＣＧ　　Ｇ
ＡＣＣＧＣ１９４Ｇｌｕ　　Ｇｌｙ　　Ａｒｇ　　Ｌｅ
ｕ　　Ａｌａ　　Ａｓｐ　　Ａｒｇ６２８　　　ＣＴＧ
　　ＡＡＧ　　ＣＧＣＣＧＣＧＴＧ　　ＣＧＣＧＡＣ２
１０Ｌｅｕ　　Ｌｙｓ　　Ａｒｇ　　Ａｒｇ　　Ｖａｔ
　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ６７６　　　ＣＧＣＡＡＣＡＡＧ
　　ＧＡＣＧＣＧ　　ＧＴＣＣＴＧ２２６　　　Ａｒｇ
　　Ａｓｎ　　Ｌｙｓ　　Ａｓｐ　　Ａｌａ　　Ｖａｌ
　　Ｌｅｕ７２４　　　ＡＣＣＧＣＧ　　ＣＣＣＴＣＧ
　　ＧＴＧ　　ＧＣＣＧＴＣ２４２Ｔｈｒ　　Ａｌａ　
　Ｐｒｏ　　Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　Ａｌａ　　Ｖａｌ？
７２　　　ＧＧＧ　　ＣＧＣＣＣＣＧＴＣＧＡＣＧＧＧ
　　ＧＴＧ２５８　　　Ｇｌｙ　　Ａｒｇ　　Ｐｒｏ　
　Ｖａｌ　　Ａｓｐ　　Ｇｌｙ　　Ｖａ１８２０　　　
ＣＧＧ　　ＣＴＣＣＴＧ　　ＣＡＣＣＡＣＧＴＧ　　Ｃ
ＴＧ２７４　　　Ａｒｇ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｈｉ
ｓ　　Ｈｉｓ　　Ｖａｌ　　Ｌｅｕ２２ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １ｕ Ｐｒ。 図 （その２） Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｈ２Ｓ Ｇｌｕ ２５ ＧＡＣＣＧＧ　　ＣＴＣＴＣＧ　　ＧＡＣＣＴＧ　　Ｇ
ＴＧ　　ＡＡＣＴＧＣ７２３Ａｓｐ　　Ａｒｇ　　Ｌｅ
ｕ　　Ｓｅｒ　　Ａｓｐ　　Ｌｅｕ　　Ｖａｌ　　Ａｓ
ｎ　　Ｃｙｓ　　　　２４１ＧＣＧ　　ＣＧＣＡＴＧ　
　ＡＣＣＣＡＣＧＣＧ　　ＧＡＣＡＣＧ　　ＣＡＧ　　
　　７７１Ａｌａ　　Ａｒｇ　　Ｍｅｔ　　Ｔｈｒ　　
Ｈｉｓ　　Ａｌａ　　Ａｓｐ　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｎ　　
　　２５７ｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｌａ Ａｓｐ Ｖａｌ ８９ ＧＴＧ　　ＡＴＣＧＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＣＣＴＣＧＴ
Ｇ　　ＡＣＧ　　　　９１５Ｖａｌ　　ｌｉｅ　　Ａｌ
ａ　　Ａｓｎ　　Ｔｈｒ　　Ａｓｎ　　Ｌｅｕ　　ＶＥ
ＩＩ　　Ｔｈｒ　　　　３０５ＧＴＣＡＧＣＡＡＣＡＴ
Ｇ　　ＧＡＣＧＡＣＧＴＧ　　ＧＣＧ　　ＣＧＣ９６３
Ｖａｌ　　Ｓｅｒ　　Ａｓｎ　　Ｍｅｔ　　Ａｓｐ　　
Ａｓｐ　　Ｖａｌ　　Ａｌａ　　Ａｒｇ　　　　３２１
ＧＣＣＣＣＣＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧ　　ＣＣＣＧＴ
Ｇ　　ＧＧＣ＋０１１Ａｌａ　　Ｐｒｏ　　Ａｓｐ　　
Ａｓｐ　　Ｇｌｙ　　Ｌｙｓ　　Ｐｒｏ　　Ｖａｌ　　
Ｇｌｙ　　　　３３７５４ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ １８ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａｓｐ ９８ ｒｐ Ａｌａ １ａ Ｐｒ。 Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ 図 （その３） ＣＴＣＧＴＣＧＴＣＧＴＣＧＧＣＧＡＣＣＧＣＣＴＧ　
　ＧＴＧ　　　＋０５９Ｌｅｕ　　Ｖａｌ　　Ｖａｌ　
　Ｖａｌ　　Ｇｌｙ　　Ａｓｐ　　Ａｒｇ　　Ｌｅｕ　
　Ｖａｌ　　　　３５３ＣＧＣＧＴＧ　　ＴＡＣＣＡＧ
　　ＧＣＣＡＣＧ　　ＣＡＧ　　ＧＴＧ　　ＣＣＧ　　
　１ｌ１０７Ａｒ　　Ｖａｌ　　Ｔｙｒ　　Ｇｌｎ　　
Ａｌａ　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｎ　　Ｖａｔ　　Ｐｒｏ　　
　　３６９ＧＡＣＧＴＧ　　ＡＣＣＴＴＣＧＴＣＡＴＧ
　　ＣＣＣＣＴＧ　　ＧＧＧ　　　１１５５Ａｓｐ　　
Ｖａｌ　　Ｔｈｒ　　Ｐｈｅ　　Ｖａｌ　　Ｍｅｔ　　
Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ　　　　３８５ＣＧＣＴＡ
ＣＧＣＧ　　ＣＧＣＣＡＣＧＣＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣ１
２０３Ａｒｇ　　Ｔｙｒ　　Ａｌａ　　Ａｒｇ　　Ｈｉ
ｓ　　Ａｌａ　　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　Ｐｈｅ　　　　
４０１ＧＡＣＣＣＧ　　ＣＧＣＡＣＧ　　ＣＡＣＣＣＧ
　　ＣＣＣＣＧＣＧＣＣ１２５１Ａｓｐ　　Ｐｒｏ　　
Ａｒｇ　　Ｔｈｒ　　Ｈｉｓ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　
Ａｒｇ　　Ａｌａ　　　　４１７１ｓ Ｐｒ。 Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｌａ ４９ ＧＡＧ　　ＣＣＣＧＣＧ　　ＧＡＧ　　ＧＴＧ　　ＣＡ
Ｇ　　ＴＧＣＧＣＣＴＴＣ１３９５Ｇｌｕ　　Ｐｒｏ　
　Ａｌａ　　Ｇｌｕ　　Ｖａｌ　　Ｇｌｎ　　Ｃｙｓ　
　Ａｌａ　　Ｐｈｅ　　　　４６５ＣＧＣＣＣＣＧＡＣ
ＧＣＣＣＴＣＧＴＣＧＧＧ　　ＣＴＣＡＴＧ　　　１４
４３Ａｒｇ　　Ｐｒｏ　　Ａｓｐ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ
　　Ｖａｌ　　Ｇｌｙ　　Ｌｅｕ　　Ｍｅｔ　　　　４
８１７４ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｌｅｕ 、へｒｇ Ａｒｇ Ｌｅｕ １ｅ 図 （その４） ２０６８　　　ＣＴＧ　　ＧＧＣＡＡＣＣＡＧ　　ＣＣ
ＣＣＡＧ　　ＧＡＧ６９０　　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ　　
Ａｓｎ　　Ｇｉｎ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｎ　　Ｇｌｕ２１
１６　　　ＡＣＧ　　ＣＴＧ　　ＣＴＧ　　ＣＣＣＣＣ
Ｇ　　ＣＴＣＡＴＣ７０６Ｔｈｒ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ
　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ　　Ｉｌｅ３８ ｈｅ Ｇｉｎ Ｈｉｓ １ｅ Ｌｅｕ ｒｐ ａ１ 図 （その５） ＧＡＧ　　ＣＴＣＡＡＣＣＡＣＧＣＧ　　ＣＴＧ　　Ｇ
ＣＧ　　ＧＡＣＧＣＣ２１１５Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ａ
ｓｎ　　Ｈｉｓ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ａ
ｓｐ　　Ａｌａ　　　　７０５ＴＧＧ　　ＧＡＣＴＧＣ
ＧＡＣＣＣＣＡＴＣＣＴＧ　　ＴＡＣＣＧＣ２１６３Ｔ
ｒｐ　　Ａｓｐ　　Ｃｙｓ　　Ａｓｐ　　Ｐｒｏ　　Ｉ
ｌｅ　　Ｌｅｕ　　Ｔｙｒ　　Ａｒｇ　　　　７２１ｌ
ａ ｌｕ ｒｐ ｅｔ ａｌ Ｌｅｕ ｅｔ ｙｓ Ｉｌｅ ８５ Ａｌａ Ａｓｐ Ａｌａ ｅｔ Ｌｅｕ １ｅ Ｌｅｕ Ｇｉｎ ｌｕ ６５ ８２ Ａｌａ Ｐｒ。 ｓｐ Ａｌａ １ｙ ｅｔ Ａｌａ ０２６ ｒｇ ｈｅ Ａｌａ ｈｒ ｌｕ ｓｎ ａ１ 図 （その６） ｅｕ ｈｅ Ａｌａ ｌｕ ｙｓ Ａｌａ ｅｔ Ｃ；ｌｕ ｅｔ 　０４　ｌ 第 図 （その７） １２３４ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｐｒ。 Ａｌａ Ｇｌｕ １ａ ３７４８　　　ＣＴＣＡＴＣＧＣＣＧＡＣＡＣＧ　　Ｇ
ＧＣＣＣＧ１２５０　　　Ｌｅｕ　　ｒｌｅ　　Ａｌａ
　　Ａｓｐ　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｙ　　Ａｌａ３７９６　
　　ＴＡＣＣＡＧ　　ＴＴＣＡＡＧ　　ＣＧＧ　　ＣＣ
ＣＧＴＧ１２６６　　　Ｔｙｒ　　Ｇｌｎ　　Ｐｈｅ　
　Ｌｙｓ　　Ａｒｇ　　Ｐｒｏ　　Ｖａ１３８４４　　
　ＴＧＣＧＣＧ　　ＣＴＣＴＴＣＣＡＧ　　ＧＡＧ　　
ＣＣＧ１２８２　　　Ｃｙｓ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ　　
Ｐｈｅ　　Ｇｌｎ　　Ｇｌｕ　　Ａｌａ３８９２　　　
ＧＣＧ　　ＣＴＧ　　ＣＴＧ　　ＣＧＧ　　ＡＣＧ　　
ＣＣＣＣＴＣ１２９８Ａｌａ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　
Ａｒｇ　　Ｔｈｒ　　Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ３９４０　　　
ＣＴＣＡＴＣＣＧＣＧＡＣＧＡＧ　　ＴＣＣＣＣＧ１３
１４　　　Ｌｅｕ　　Ｉｌｅ　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ　　
Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒ。 ３９８８　　　ＧＣＣＴＧＡ １３３０　　　Ａｌａ　　＊＊＊ 図 （その８） ４ 図 （その１） ５４２− ＡＳ　２ ｅＣ１ｅｒ ６７６　　　ＣＧＣＡＡＣＡＡＧ　　ＧＡＣＧＣＧ　　
ＧＴＣＣＴＧ２２６　　　Ａｒｇ　　Ａｓｎ　　Ｌｙｓ
　　Ａｓｐ　　Ａｌａ　　Ｖａｌ　　Ｌｅｕ８６ Ｖａｌ ｈｅ Ｌｙｓ Ｐｒ。 Ａｌａ Ａｌａ Ａｓｐ 図 （その２） ｅｕ Ｖａｌ ｈｒ ｈｒ Ａｌａ ｌｙ Ｖａｌ Ａｒｇ ｌｎ ７３ Ｖａｌ ｅｒ Ａｓｎ ｅｔ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｒｇ ２１ Ａｒｇ ｙｒ 、へ１　ａ Ａｒｇ ｉｓ Ａｌａ ｌｙ ｅｔ ｈｅ ０１ ６２ Ｌｙｓ Ｐｒ。 Ｖａｌ 、へｓｐ ｈｅ Ａｒｇ Ｓｐ 図 （その３） ＋？３２　　　ＣＧＧ　　ＣＡＴ　　ＣＧＧ　　ＣＴＧ
　　ＧＣＣＣＣＧ　　ＧＣＣ５７８Ａｒｇ　　Ｈｉｓ　
　Ａｒｇ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ１
７８０　　　ＣＧＣＧＡＣＧＣＣＡＡＣＴＡＣＣＣＣＡ
ＴＧ５９４　　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ　　Ａｌａ　　Ａｓ
ｎ　　Ｔｙｒ　　Ｐｒｏ　　Ｍｅｔ＋８２８　　　ＣＡ
ＣＧＧＧ　　ＡＧＣＧＡＧ　　ＣＧＣＡＣＣＴＴＣ６１
０Ｈｉｓ　　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　Ｇｌｕ　　Ａｒｇ　
　Ｔｈｒ　　Ｐｈｅ１８７６　　　ＴＧＣＡＴＣＣＡＧ
　　ＡＧＣＴＡＣＴＧＧ　　ＣＧＣ６２６Ｃｙｓ　　Ｉ
ｌｅ　　Ｇｉｎ　　Ｓｅｒ　　Ｔｙｒ　　Ｔｒｐ　　Ａ
ｒｇ３８ Ｐｈｅ Ｇｉｎ Ｈｉｓ １ｅ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｖａｌ 図 （その４） ＡＣＧ　　ＧＴＧ　　ＧＣＣＧＣＧ　　ＧＴＧ　　ＣＧ
ＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣ１７７９Ｔｈｒ　　Ｖａｌ　　Ａ
ｌａ　　Ａｌａ　　Ｖａｌ　　Ａｒｇ　　Ｇｌｙ　　、
Ａｌａ　　Ｐｈｅ　　　　５９３ｓｎ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｓｎ ４１ ＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧ　　ＧＧＣＡＡＣＧＧ
Ｇ　　ＧＡＧ　　　１９７＋１１ｅ　　Ａｓｎ　　Ｔｈ
ｒ　　Ｔｙｒ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ　　Ａｓｎ　　Ｇｌ
ｙ　　Ｇｌｕ　　　　６５７Ｉｙ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｒ。 Ｇｌｙ ５ｐ Ｐｒ。 ８９ ＧＡＧ　　ＣＴＣＡＡＣＣＡＣＧＣＧ　　ＣＴＧ　　Ｇ
ＣＧ　　ＧＡＣＧＣＣ２１＋５Ｇｌｕ　　　Ｌｅｕ　　
　、へｓｎ　　　Ｈｉｓ　　　Ａｌａ　　　Ｌｅｕ　　
　Ａｌａ　　　Ａｓｐ　　　Ａｌａ　　　　　　　７０
５ＴＧＧ　　ＧＡＣＴＧＣＧＡＣＣＣＣＡＴＣＣＴＧ　
　ＴＡＣＣＧＣ２１６３Ｔｒｐ　　Ａｓｐ　　Ｃｙｓ　
　Ａｓｐ　　Ｐｒｏ　　ｌｉｅ　　Ｌｅｕ　　Ｔｙｒ　
　Ａｒｇ　　　　７２１ＣＣＧ　　ＧＡＧ　　ＣＴＧ　
　ＣＧＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＧＣＧ　　ＣＡＣ２２１１
Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｖａｌ　　
Ａｓｎ　　Ｇｌｙ　　Ａｌａ　　Ｈｉｓ　　　　７３７
ＧＡＧ　　ＡＴＧ　　ＧＣＣＣＡＧ　　ＧＴＧ　　ＡＡ
ＣＴＴＴ　　ＣＧＣＡＡＣ２２５９Ｇｌｕ　　Ｍｅｔ　
　Ａｌａ　　Ｇｌｎ　　Ｖａｔ　　Ａｓｎ　　Ｐｈｅ　
　Ａｒｇ　　Ａｓｎ　　　　７５３図 （その５） Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｐｈｅ １’５Ｆｒ Ｐｒ。 １ａ Ｐｒ。 ｌ０９０ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｐｒ。 Ｇｌｎ 図 （その６） Ｓｎ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ａｌａ １’ｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｙ １ａ Ｐｒ。 １０５ 第 図 ３３１６　　　ＣＣＣＡＴＧ　　ＣＴＧ　　ＧＡＣＧＣ
Ｇ　　ＧＡＣＧＣＧ　　ＧＡＣ＋＋０６　　　Ｐｒｏ　
　Ｍｅｔ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｐ　　Ａｌａ　　Ａｓｐ　
　Ａｌａ　　Ａｓｐ３３６４　　　ＧＣＣＧＧＣＡＡＣ
ＣＧＣＣＴＧ　　ＧＣＧ　　ＣＣＣＧＴＧ１１２２　　
　Ａｌａ　　Ｇｌｙ　　Ａｓｎ　　Ａｒｇ　　Ｌｅｕ　
　Ａｌａ　　Ｐｒｏ　　Ｖａ１３４１２　　　ＣＡＧ　
　ＧＴＧ　　ＣＣＣＧＣＧ　　ＧＧＣＣＴＧ　　ＧＣＣ
ＣＧＣ１１３８Ｇｌｎ　　Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ
　　Ｇｌｙ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　ＡｒｇＡＣ Ａｓｐ 　１７０ ＣＣＣ Ａｓｎ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｇ　　ｃｌｙ　　Ａｒｇ　　
Ａｌａ　　Ａｌａ　　ＧｌｙＡＣ Ａｓｐ ２０２ Ａｌａ ５ｎ Ｐｒ。 ｒｐ Ａｌａ Ｍｅｔ ＣＣＧ Ｇｌｎ　　Ａｒｇ ＣＣＣ Ｇｌｙ ＣＴＣ Ｖａｌ ２５０ ＣＣＣ Ｌｅｕ　　ｌｉｅ　　Ａｌａ　　Ａｓｐ　　Ｔｈｒ　　
Ｇｌｙ　　Ａｌａ　　Ａｌａ３７９６　　　ＴＡＣＣＡ
Ｇ　　ＴＴＣＡＡＧ　　ＣＧＧ　　ＣＣＣＧＴＧ　　Ｇ
ＧＣ１２６６Ｔｙｒ　　　Ｇｌｎ　　　Ｐｈｅ　　　Ｌ
ｙｓ　　　、へｒｇ　　　Ｐｒｏ　　　Ｖａｌ　　　Ｇ
ｌｙ（その７） ＧＡＣＴＡＣＣＴＧ　　ＣＧＣＣＧＣＡＣＧ　　ＧＴＣ
ＡＡＣ３３６３Ａｓｐ　　Ｔｙｒ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ
　　Ａｒｇ　　Ｔｈｒ　　Ｖａｌ　　Ａｓｎ　　　１１
２１ＣＣＣＧＴＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧ　　ＡＴＧ　　Ｃ
ＴＧ　　ＣＣＣ３４１１Ｐｒｏ　　Ｖａｌ　　Ｐｈｅ　
　Ｇｌｙ　　Ｇｌｎ　　Ｍｅｔ　　Ｌｅｕ　　Ｐｒｏ　
　　１１３７ＧＧＧ　　ＣＡＧ　　ＣＡＧ　　ＴＣＧ　
　ＧＴＧ　　ＴＧＣＧＡＧ　　ＴＴＣ３４５９Ｇｌｙ　
　Ｇｌｎ　　Ｇｌｎ　　Ｓｅｒ　　Ｖａｌ　　Ｃｙｓ　
　Ｇｌｕ　　Ｐｈｅ　　　１１５３ＣＴＧ　　ＧＣＣＴ
ＡＣＴＴＴ　　ＣＧＧ　　ＣＧＣＧＣＧ　　ＴＧＣ３５
０？Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ｔｙｒ　　Ｐｈｅ　　Ａｒｇ
　　Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｃｙｓ　　　＋１６９ＧＡＧ
　　ＧＴＧ　　ＣＡＣＧＧＣＧＡＧ　　ＧＡＧ　　ＧＧ
Ｇ　　ＣＴＧ　　　３５５５Ｇｌｕ　　Ｖａｌ　　Ｈｉ
ｓ　　Ｇｌｙ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｙ　　Ｌｅ
ｕ　　　１１８５ＣＣＣＧＣＧ　　ＣＡＣＣＣＣＣＡＣ
ＣＧＣＧＣＣＡＣＣ３６０３Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ｈｉ
ｓ　　Ｐｒｏ　　Ｈｉｓ　　Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｔｈ
ｒ　　　１２０１ＣＡＣＴＣＧ　　ＴＡＣＧＣＧ　　Ｇ
ＡＣＣＧＧ　　ＣＴＣＴＡＣ３６５１Ｈｉｓ　　Ｓｅｒ
　　Ｔｙｒ　　Ａｌａ　　Ａｓｐ　　Ａｒｇ　　Ｌｅｕ
　　Ｔｙｒ　　　１２１７ＣＣＧ　　ＧＣＣＴＡＣＡＧ
ＣＣＣＣＴＧＣＴＴＣＡＡＧ　　　３６９９Ｐｒｏ　　
Ａｌａ　　Ｔｙｒ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｃｙｓ　　
Ｐｈｅ　　Ｌｙｓ　　　１２３３ＧＣＣＡＡＧ　　ＡＧ
ＣＣＧＧ　　ＧＧＧ　　ＣＴＧ　　ＧＣＧ　　ＣＧＧ　
　　３７４７Ａｌａ　　Ｌｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ａｒｇ　
　Ｇｌｙ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ａｒｇ　　　１２４
９ＧＣＣＴＣＧ　　ＣＣＧ　　ＡＣＧ　　ＡＧＣＡＡＣ
ＧＧＣＧＡＧ　　　３７９５１へ　ｌａ　　　Ｓｅｒ　
　　Ｐｒｏ　　　Ｔｈｒ　　　Ｓｅｒ　　　Ａｓｎ　　
　Ｇｌｙ　　　Ｇｌｕ　　　　　１２６５ＧＣＣＧＧＣ
ＧＡＧ　　　ＣＴＣＧＴＣＧＡＧ　　　Ｇ、ＡＣＣＣＧ
　　　　３８４３、へ　ｌａ　　　Ｇｌｙ　　　Ｇｌｕ
　　　Ｌｅｕ　　　Ｖａｌ　　　Ｇｌｕ　　　Ａｓｐ　
　　Ｐｒｏ　　　　　１２８１１３３０ Ａｌａ 本本本 ０３６ ０８４ ＣＣＧ　　ＣＣＣＴＧＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＴ
ＣＣＣＧ　　ＣＧＣＧＧＣＧＣＣＧＣＧ　　ＣＧＴ１３
２ ＣＣＣ ＣＣＣ ＣＡ ＴＧ ＣＴ ＣＴ ＴＣ 図 （その８） ＡＣ ＣＣＣ ＣＣＧ ＣＣＣ ＣＣＣ ＧＡ ＣＣＣ ＣＣＣ ＣＴ ０３５ ＣＣＣ ＣＣＣ ＣＴ ＴＧ ＣＡ ＣＣＣ ＣＣＣ ＣＣＣ ＣＣＣ ０８３ ＴＡ ＡＴ ＡＡ ＴＧ ＧＴ ＣＡ ＣＣＧ ＡＣ ＣＣＣ １３１ ｅｒ 第 ６ 図 第 図

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）第１図で示されるアミノ酸配列をコードするブタ
   ヘルペスウィルス１型カプシド蛋白質遺伝子。
2. （２）第１図で示される塩基配列で表される、ブタヘル
   ペスウィルス１型カプシド蛋白質遺伝子。
3. （３）特許請求の範囲第１項または第２項に記載のブタ
   ヘルペスウィルス１型カプシド蛋白質遺伝子を有する組
   換えワクシニアウイルス。
4. （４）第１図で示されるアミノ酸配列の全部または一部
   を有する組換えブタヘルペスウィルス１型カプシド蛋白
   質。