JPH03228680A - 感染性気管支炎ウイルスワクチン - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は感染性気管支炎ウィルス（ＩＢＶ）のスパイク
タンパク質ポリペプチドをコードする核酸配列、このよ
うな核酸配列を含む組換核酸分子、該核酸配列を含むベ
クター又は宿主細胞、ＩＢＶのスパイクタンパク質ポリ
ペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチド、該ポリペ
プチドに対して免疫反応性の抗体又は抗血清、及び動物
を１１３Ｑ５染から保護するためのワクチンに係る。
タンパク質ポリペプチドをコードする核酸配列、このよ
うな核酸配列を含む組換核酸分子、該核酸配列を含むベ
クター又は宿主細胞、ＩＢＶのスパイクタンパク質ポリ
ペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチド、該ポリペ
プチドに対して免疫反応性の抗体又は抗血清、及び動物
を１１３Ｑ５染から保護するためのワクチンに係る。
１Ｂウイルスは、気管う音、息切れ、咳及び鼻汁分泌の
ような典型的な呼吸症状により特徴付けられるニワトリ
の急性で高感染性の疾患の原因となる。ＩＢは特にワカ
ドリに高い死亡率をもたらす。
ような典型的な呼吸症状により特徴付けられるニワトリ
の急性で高感染性の疾患の原因となる。ＩＢは特にワカ
ドリに高い死亡率をもたらす。
更に、腎臓及び生殖路を冒し、生殖路の損傷は、産卵鶏
又は飼育鶏の産卵の低下をもたらし得る。
又は飼育鶏の産卵の低下をもたらし得る。
１Ｂは所定の大腸菌株による感染をニワトリ、特にブロ
イラーに誘発し、死亡率の増加をもたらす。
イラーに誘発し、死亡率の増加をもたらす。
ニワトリはＩＢウィルスの唯一の宿主であるとみなされ
ていたが、最近ではシチメンチョウからもウィルスが単
離された。
ていたが、最近ではシチメンチョウからもウィルスが単
離された。
ＩＢＶは約２０ｋｂの一重鎖ＲＮ＾から構成されるゲノ
ムを含む１群のエンベロープ付きウィルスであるＣｏｒ
ｏｎａｖ ｉｒ １ｄａｅ属の１員である。このゲノム
は特に３種の主要な構造タンパク質、即ちスパイクタン
パク質（Ｓ＞、膜タンパク質（Ｍ）及びヌクレオキャプ
シドタンパク質（Ｎ）をコードする。グリコジル化スパ
イクタンパク質の１５５ｋＤ前駆物質は翻訳後に２つの
構造的に無関係なサブユニットＳ１及びＳ２に開裂され
る。Ｓｌ及びＳ２の各々の２又は３個のコピーが特徴的
ＩＢＶ表面構造、スパイク又はベプロマーを形成する。
ムを含む１群のエンベロープ付きウィルスであるＣｏｒ
ｏｎａｖ ｉｒ １ｄａｅ属の１員である。このゲノム
は特に３種の主要な構造タンパク質、即ちスパイクタン
パク質（Ｓ＞、膜タンパク質（Ｍ）及びヌクレオキャプ
シドタンパク質（Ｎ）をコードする。グリコジル化スパ
イクタンパク質の１５５ｋＤ前駆物質は翻訳後に２つの
構造的に無関係なサブユニットＳ１及びＳ２に開裂され
る。Ｓｌ及びＳ２の各々の２又は３個のコピーが特徴的
ＩＢＶ表面構造、スパイク又はベプロマーを形成する。
スパイクタンパク質及びそのサブユニットフラグメント
は感染したトリに循環ウィルスに対する中和抗体を誘導
するという点において重要な役割を果す。
は感染したトリに循環ウィルスに対する中和抗体を誘導
するという点において重要な役割を果す。
現在、ニワトリは弱毒化ウィルス生ワクチンによりＩＢ
Ｖ感染に対して保護され得る。しかしながら、この型の
ワクチンは多数の欠点があり、安定性が低く、腎臓、呼
吸器及び生殖路に悪影響を及ぼし得る。更に、弱毒化生
ワクチンを使用すると、部分的に弱毒化した病原性ウィ
ルスを動物に接種する危険を常に伴う。更に、弱毒化ウ
ィルスは高怒染状態に戻り、接種動物に疾患を生’−Ｅ
ＹＴ’動物群に高感染性ウィルスを蔓延させる可能性が
ある。
Ｖ感染に対して保護され得る。しかしながら、この型の
ワクチンは多数の欠点があり、安定性が低く、腎臓、呼
吸器及び生殖路に悪影響を及ぼし得る。更に、弱毒化生
ワクチンを使用すると、部分的に弱毒化した病原性ウィ
ルスを動物に接種する危険を常に伴う。更に、弱毒化ウ
ィルスは高怒染状態に戻り、接種動物に疾患を生’−Ｅ
ＹＴ’動物群に高感染性ウィルスを蔓延させる可能性が
ある。
生ウイルスワクチンの使用に伴う別の問題は、ワクチン
ウィルスを増殖するために使用される細胞培養物が別の
ウィルスにより汚染される可能性である。
ウィルスを増殖するために使用される細胞培養物が別の
ウィルスにより汚染される可能性である。
不活化ウィルスワクチンは一般にほんの低レベルの免疫
を誘導するにすぎない。本発明の場合のように、特に呼
吸器又は腸管に局所的保護活性が所望される場合、この
ようなワクチンは別の免疫（ブースター）を必要とする
。更に、ウィルスの中和誘導抗原決定基は不活化処理に
より変質し、ウィルスの保護能力が低下する。
を誘導するにすぎない。本発明の場合のように、特に呼
吸器又は腸管に局所的保護活性が所望される場合、この
ようなワクチンは別の免疫（ブースター）を必要とする
。更に、ウィルスの中和誘導抗原決定基は不活化処理に
より変質し、ウィルスの保護能力が低下する。
ＩＢの撲滅のために現在使用されているワクチンウィル
スは、抗原スペクトルに基づく免疫特性と、病原性の低
下（生ウイルスワクチン）との両方から選択されている
。ワクチンは相同型のみに対して保護するＣｏｎｎｅｃ
ｔｉｃｕｔ（例えばＣｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ単離株＾５
９６８）もしくはＭａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ（例えば
Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｍ４１及びＭ４２）のような特定
の血清型を含み得るか、又はＨｏｌ １ａｎｄ（Ｈ）株
（例えば旧２０及びＭｇ２）のようなより広い抗原スペ
クトルを有することが立証された特定のウィルス株を使
用し得る。しかしながら、上記ワクチンは＾ｒｋａｎｓ
ａｓ血清型に属するＩＢウィルスによる感染に対する実
質的な免疫を提供せず、それ以外にＡｒｋａｎｓａｓ血
清型ＩＢＶ株をトリにワクチン接種する必要があること
が知られている。
スは、抗原スペクトルに基づく免疫特性と、病原性の低
下（生ウイルスワクチン）との両方から選択されている
。ワクチンは相同型のみに対して保護するＣｏｎｎｅｃ
ｔｉｃｕｔ（例えばＣｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ単離株＾５
９６８）もしくはＭａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ（例えば
Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｍ４１及びＭ４２）のような特定
の血清型を含み得るか、又はＨｏｌ １ａｎｄ（Ｈ）株
（例えば旧２０及びＭｇ２）のようなより広い抗原スペ
クトルを有することが立証された特定のウィルス株を使
用し得る。しかしながら、上記ワクチンは＾ｒｋａｎｓ
ａｓ血清型に属するＩＢウィルスによる感染に対する実
質的な免疫を提供せず、それ以外にＡｒｋａｎｓａｓ血
清型ＩＢＶ株をトリにワクチン接種する必要があること
が知られている。
この血清型の存在は最初にり、Ｂ、 Ｆｉｅｌｄｓ（１
９７３）により記載されている。
９７３）により記載されている。
本発明によると、Ａｒｋａｎｓａｓ血清型に属するＩＢ
Ｖ株のスパイクタンパク質ポリペプチド又はその抗原性
フラグメントを実質的にコードする核酸配列が、Ａｒｋ
ａｎｓａｓ血清型ＩＢＶ株によるトリの感染に対して家
禽を免疫するためのワクチンの製造に適用され得、この
ワクチンは弱毒化又は不活化ＩＢＶ生ワクチンの上記欠
点を示さない。
Ｖ株のスパイクタンパク質ポリペプチド又はその抗原性
フラグメントを実質的にコードする核酸配列が、Ａｒｋ
ａｎｓａｓ血清型ＩＢＶ株によるトリの感染に対して家
禽を免疫するためのワクチンの製造に適用され得、この
ワクチンは弱毒化又は不活化ＩＢＶ生ワクチンの上記欠
点を示さない。
特定のウィルス株が＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に属するか
否か、即ちＩＢＶ株ＤＰＩ ３１６８と同一の血清型に
属するか否かを決定するためには−Ｃｏｗｅｎ及び旧ｔ
ｃｈｎｅｒ（１９７５）並びにＣｅ１ｂ他（１９８１）
に記載されているようなウィルス中和試験を使用すべき
である。
否か、即ちＩＢＶ株ＤＰＩ ３１６８と同一の血清型に
属するか否かを決定するためには−Ｃｏｗｅｎ及び旧ｔ
ｃｈｎｅｒ（１９７５）並びにＣｅ１ｂ他（１９８１）
に記載されているようなウィルス中和試験を使用すべき
である。
本明細書中に使用される「核酸配列」なる用語は任意の
長さのヌクレオチドのポリマー形を意味し、リボ核酸配
列及びデオキシリボ核酸配列の両方を含む。原則として
、この用語は分子の一次構造を意味する。即ち、この用
語は二重ＭＤＮ＾、−重鎖ＤＮＡ、二重鎖ＲＮ＾、−重
！ＩＲＮ＾及びその改変形を含む。
長さのヌクレオチドのポリマー形を意味し、リボ核酸配
列及びデオキシリボ核酸配列の両方を含む。原則として
、この用語は分子の一次構造を意味する。即ち、この用
語は二重ＭＤＮ＾、−重鎖ＤＮＡ、二重鎖ＲＮ＾、−重
！ＩＲＮ＾及びその改変形を含む。
特に、本発明の核酸配列としては、ＩＢＶからのＤＩＰ
３１６８株のスパイクタンパク質ポリペプチド又はそ
の抗原性フラグメントを実質的にコードする核酸配列を
使用することができる。
３１６８株のスパイクタンパク質ポリペプチド又はそ
の抗原性フラグメントを実質的にコードする核酸配列を
使用することができる。
本発明にしたがって使用される好適な核酸配列は、ＳＥ
ｏ １０ Ｎｏ：１に示されるアミノ酸配列１〜１１６
８を有するポリペプチド、又はその抗原性フラグメント
を実質的にコードする。
ｏ １０ Ｎｏ：１に示されるアミノ酸配列１〜１１６
８を有するポリペプチド、又はその抗原性フラグメント
を実質的にコードする。
＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶ株のスパイクタ
ンパク質ポリペプチドの抗原性フラグメントをコードす
る核酸配列も本発明の範囲に含まれる。
ンパク質ポリペプチドの抗原性フラグメントをコードす
る核酸配列も本発明の範囲に含まれる。
特に、該核酸配列はＩＢＶからの株ＤＰＩ ３１６８の
スパイクタンパク質ポリペプチドの抗原性フラグメント
をコードする。
スパイクタンパク質ポリペプチドの抗原性フラグメント
をコードする。
本明細書中で使用する「抗原性フラグメント」なる用語
は、適当な形態を呈するとき、感受性動物に該ＩＢＶス
パイクタンパク質に対する免疫応答を誘導することが可
能な分子構造を含む該ＴＢＶスパイクタンパク質ポリペ
プチドのフラグメントを意味する。更に、該フラグメン
トは＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶに特徴的な
ものである。
は、適当な形態を呈するとき、感受性動物に該ＩＢＶス
パイクタンパク質に対する免疫応答を誘導することが可
能な分子構造を含む該ＴＢＶスパイクタンパク質ポリペ
プチドのフラグメントを意味する。更に、該フラグメン
トは＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶに特徴的な
ものである。
＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶ株のスパイクタ
ンパク質ポリペプチドのサブユニットＳ１及びＳ２のよ
うな抗原性フラグメントをコードする本発明の核酸配列
も本発明の一部を形成する。
ンパク質ポリペプチドのサブユニットＳ１及びＳ２のよ
うな抗原性フラグメントをコードする本発明の核酸配列
も本発明の一部を形成する。
特に、スパイクタンパク質ポリペプチドのサブユニット
のいずれかく該サブユニットはＳＥＱ ＩＤ Ｎ。
のいずれかく該サブユニットはＳＥＱ ＩＤ Ｎ。
：１に示されるアミノ酸配列１〜５３９又は５４５〜１
１６８に対応するアミノ酸をコードする領域を有する）
又はその一部を実質的にコードする本発明の核酸配列も
本発明の範囲に含まれる。
１６８に対応するアミノ酸をコードする領域を有する）
又はその一部を実質的にコードする本発明の核酸配列も
本発明の範囲に含まれる。
結合領域（即ちＳｌ及びＳ２サブユニツトを連結するア
ミノ酸配列をコードする核酸配列、特に５ＥＱＩＤ Ｎ
ｏ：１に示されるアミノ酸配列５４０〜５４４）も、夫
々Ｓ、もしくはＳ２サブユニツトを実質的にコードする
核酸配列、又はＳＥｏ １０ Ｎｏ：１に示される約１
〜５３９．５４５〜１１６８のアミノ酸配列の一部を形
成し得る。
ミノ酸配列をコードする核酸配列、特に５ＥＱＩＤ Ｎ
ｏ：１に示されるアミノ酸配列５４０〜５４４）も、夫
々Ｓ、もしくはＳ２サブユニツトを実質的にコードする
核酸配列、又はＳＥｏ １０ Ｎｏ：１に示される約１
〜５３９．５４５〜１１６８のアミノ酸配列の一部を形
成し得る。
更に、ＩＢＶ感染に対する家禽の免疫又は診断目的のた
めのワクチンを製造する−めに使用することが可能なこ
れらのサブユニットの抗原性フラグメントをコードする
核酸配列も本発・、一部を形成する。
めのワクチンを製造する−めに使用することが可能なこ
れらのサブユニットの抗原性フラグメントをコードする
核酸配列も本発・、一部を形成する。
既知のアミノ酸配列内でこのような使用可能なポリペプ
チドフラグメント（エピトープと呼称される）を検出す
るために種々の方法が知られている。既知のアミノ酸配
列に基づき、これらのエピトープは例えば特許公開明細
書ＷＯ８４１０３５６４及び［１８６７０６４８７に記
載されているスクリーニング法により実験的に決定され
得る。
チドフラグメント（エピトープと呼称される）を検出す
るために種々の方法が知られている。既知のアミノ酸配
列に基づき、これらのエピトープは例えば特許公開明細
書ＷＯ８４１０３５６４及び［１８６７０６４８７に記
載されているスクリーニング法により実験的に決定され
得る。
更に、理論的考察及び既知のエピトープとの構造の一致
に基づいて、上記アミノ酸配列を有する多数のポリペプ
チド領域をエピトープと指定することができる。これら
の領域は、Ｊ、Ｐ、 ）ｌｏｐｐ及びＫ。
に基づいて、上記アミノ酸配列を有する多数のポリペプ
チド領域をエピトープと指定することができる。これら
の領域は、Ｊ、Ｐ、 ）ｌｏｐｐ及びＫ。
Ｒ，Ｗｏｏｄｓ（１９８１）による親水性基準とＰ、Ｙ
、 Ｃｈｏｕ及びＧ、Ｄ、 Ｆａｓｍａｎ（１９８７）
による二次構造予測とを組み合わせることにより決定す
ることができる。
、 Ｃｈｏｕ及びＧ、Ｄ、 Ｆａｓｍａｎ（１９８７）
による二次構造予測とを組み合わせることにより決定す
ることができる。
エピトープを含む領域を位置決定するための別の方法は
、所謂ｒｌｌｌｌＬｒＪｌｌｌｌＬｒ上ノクローナル抗
体耐性突然変異体）の使用である。中和モノクローナル
抗体に抵抗する変異ＩＢＶウィルスのゲノムの特異的部
分の核酸配列分析により、該ポリペプチドの中和誘導活
性に不可欠なポリペプチド内の位置を明示することがで
きる。
、所謂ｒｌｌｌｌＬｒＪｌｌｌｌＬｒ上ノクローナル抗
体耐性突然変異体）の使用である。中和モノクローナル
抗体に抵抗する変異ＩＢＶウィルスのゲノムの特異的部
分の核酸配列分析により、該ポリペプチドの中和誘導活
性に不可欠なポリペプチド内の位置を明示することがで
きる。
次の領域：
Ｖａ１５２〜Ｔｙｒｔ□、
ＧＩＶｚｓ〜Ｈ１Ｓ１４７
は特にスパイクタンパク質ポリペプチドに対する抗体反
応の中和活性に重要なエピトープを含む。
応の中和活性に重要なエピトープを含む。
ＩＢＶＩＤＩＰ ３１６８のスパイクタンパク質ポリペ
プチドをコードするデオキシ核酸配列はＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ（配列番号）：１に示されている。このｃＤＮＡ配
列は３５０４ヌクレオチドの長さである。核酸番号１５
１〜１７６７の間の及び１７８３〜３６５４の間の配列
フラグメントは夫々Ｓ１及びＳ２サブユニツトをコード
し、該配列は小さい結合領域により相互に連結されてい
る。該ｃＤＮ＾配列又はそのフラグメント、好ましくは
５ＥＱＩＤ Ｎｏ：１に示される約ヌクレオチド１５１
〜１７６７の間のＳ１サブユニツトコード領域又は約ヌ
クレオチド１７８３〜３６５４の間の８２サブユニツト
コード領域を含むフラグメントを実質的に含み、場合に
より結合領域配列も含む核酸配列も本発明の一部を形成
する。
プチドをコードするデオキシ核酸配列はＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ（配列番号）：１に示されている。このｃＤＮＡ配
列は３５０４ヌクレオチドの長さである。核酸番号１５
１〜１７６７の間の及び１７８３〜３６５４の間の配列
フラグメントは夫々Ｓ１及びＳ２サブユニツトをコード
し、該配列は小さい結合領域により相互に連結されてい
る。該ｃＤＮ＾配列又はそのフラグメント、好ましくは
５ＥＱＩＤ Ｎｏ：１に示される約ヌクレオチド１５１
〜１７６７の間のＳ１サブユニツトコード領域又は約ヌ
クレオチド１７８３〜３６５４の間の８２サブユニツト
コード領域を含むフラグメントを実質的に含み、場合に
より結合領域配列も含む核酸配列も本発明の一部を形成
する。
スパイクタンパク質ポリペプチドのフラグメントをコー
ドする遺伝子情報を含む本発明の好適な核酸配列は、Ｓ
１サブユニツトを実質的にコードし、特に、ＳＥＱ Ｉ
ｌｌ Ｎｏ：１に示される核酸配列１５１〜１７６７を
含む。
ドする遺伝子情報を含む本発明の好適な核酸配列は、Ｓ
１サブユニツトを実質的にコードし、特に、ＳＥＱ Ｉ
ｌｌ Ｎｏ：１に示される核酸配列１５１〜１７６７を
含む。
本明細書中に提供される情報は、＾ｒｋａｎｓａｓ血清
型に属するＩＢＶの１つの株に由来するものであるが、
この情報に基づいて当業者は＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に
属する池の天然に存在する変異ＩＢＶ株（例えば＾ｒｋ
ａｎ〜５ａｓ９９）から誘導されるスパイクタンパク質
ポリペプチド又はその抗原性フラグメントをコードする
核酸配列を単離及び同定することができよう。
型に属するＩＢＶの１つの株に由来するものであるが、
この情報に基づいて当業者は＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に
属する池の天然に存在する変異ＩＢＶ株（例えば＾ｒｋ
ａｎ〜５ａｓ９９）から誘導されるスパイクタンパク質
ポリペプチド又はその抗原性フラグメントをコードする
核酸配列を単離及び同定することができよう。
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１に示されるｃＤＮ＾配列、又は
そのフラグメントをこの目的のために使用することがで
きる。このような核酸配列は、＾ｒｋａｎｓａｓ血清型
に属する池のＩＢＶ株のゲノムＲＮ＾から作製されるｃ
ＤＮ＾ライブラリーを適当に厳格な条件下のハイブリダ
イゼーションによりスクリーニングするために使用され
得る（Ｓｌａｔｅｒ、 Ｒ，Ｊ、、 １９８６． ｃｈ
ａｐ、 ５ ａｎｄＥＩ Ｓｉｎｇｅｒ−Ｓａｍ、 Ｊ
、 ｅｔ ａｌ、、 １９８３； Ｍａｎｉａｔｉｓ、
Ｔ。
そのフラグメントをこの目的のために使用することがで
きる。このような核酸配列は、＾ｒｋａｎｓａｓ血清型
に属する池のＩＢＶ株のゲノムＲＮ＾から作製されるｃ
ＤＮ＾ライブラリーを適当に厳格な条件下のハイブリダ
イゼーションによりスクリーニングするために使用され
得る（Ｓｌａｔｅｒ、 Ｒ，Ｊ、、 １９８６． ｃｈ
ａｐ、 ５ ａｎｄＥＩ Ｓｉｎｇｅｒ−Ｓａｍ、 Ｊ
、 ｅｔ ａｌ、、 １９８３； Ｍａｎｉａｔｉｓ、
Ｔ。
ｅｔ ａｔ、、 １９８９）。
ｃＤＮΔライブラリーの構築方法及びハイブリダイゼー
ション方法については本明細書中に概説する。
ション方法については本明細書中に概説する。
当業者に周知のように、遺伝子コードの縮重はコドンの
塩基置換を可能にし、同一アミノ酸をコードする別のコ
ドンをもたらす（例えばアミノ酸であるグルタミン酸の
コドンはＣＡＴ及びＧ＾＾の両方である）。したがって
、ＳＥｏ １０ Ｎｏ：１に示されるアミノ酸配列を有
するポリペプチド又はその抗原性フラグメントを発現さ
せるためには、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１に示される核酸
配列と異なるこのような代替コトン組成を有する核酸配
列を使用することができる。
塩基置換を可能にし、同一アミノ酸をコードする別のコ
ドンをもたらす（例えばアミノ酸であるグルタミン酸の
コドンはＣＡＴ及びＧ＾＾の両方である）。したがって
、ＳＥｏ １０ Ｎｏ：１に示されるアミノ酸配列を有
するポリペプチド又はその抗原性フラグメントを発現さ
せるためには、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１に示される核酸
配列と異なるこのような代替コトン組成を有する核酸配
列を使用することができる。
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１に示される核酸配列と厳格な条
件下でハイブリダイズする核酸配列も本発明の範囲に含
まれる。該ハイブリダイズ可能な核酸配列はＳＥＱ １
０ Ｎｏ：１に示される核酸配列又はそのフラグメント
との間に実質的な相同性を示すが、ヌクレオチド置換、
突然変異、挿入、欠失、逆位等を含んでもよく、＾ｒｋ
ａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶのスパイクタンパク賞
ポリペプチド又はその抗原性フラグメントと機能的に同
等のタンパク質又はポリペプチドをコードする。即ち、
このような関連ポリペプチドのアミノ酸配列はＩＢＶ株
ＤＰＩ ３１６８のスパイクタンパク質ポリペプチド又
はその抗原性フラグメントのアミノ酸配列と同一てはな
いが、＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶ株のスパ
イクタンパク質ポリペプチド又はその抗原性フラグメン
トに特徴的な対応する免疫学的特性を有する。
件下でハイブリダイズする核酸配列も本発明の範囲に含
まれる。該ハイブリダイズ可能な核酸配列はＳＥＱ １
０ Ｎｏ：１に示される核酸配列又はそのフラグメント
との間に実質的な相同性を示すが、ヌクレオチド置換、
突然変異、挿入、欠失、逆位等を含んでもよく、＾ｒｋ
ａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶのスパイクタンパク賞
ポリペプチド又はその抗原性フラグメントと機能的に同
等のタンパク質又はポリペプチドをコードする。即ち、
このような関連ポリペプチドのアミノ酸配列はＩＢＶ株
ＤＰＩ ３１６８のスパイクタンパク質ポリペプチド又
はその抗原性フラグメントのアミノ酸配列と同一てはな
いが、＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶ株のスパ
イクタンパク質ポリペプチド又はその抗原性フラグメン
トに特徴的な対応する免疫学的特性を有する。
本発明で使用されるＩＢＶ株ＤＰＩ ３１６８の特定の
ポリペプチドでは＾ｒｋａｎｓａｓ血清型の個々のＤＰ
Ｉ ３１６８ウイルス又は株の間に天然の変異が存在し
得ることが理解されよう。これらの変異は配列全体のア
ミノ酸の相異、又は該配列におけるアミノ酸の欠失、置
換、挿入、逆位もしくは付加により示され得る。このよ
うな誘導体をコードする核酸配列は本発明の範囲に含ま
れる。更に、これらの種々の誘導体をコードする核酸配
列の製造に組換ＤＮ＾技術を使用することが可能である
。
ポリペプチドでは＾ｒｋａｎｓａｓ血清型の個々のＤＰ
Ｉ ３１６８ウイルス又は株の間に天然の変異が存在し
得ることが理解されよう。これらの変異は配列全体のア
ミノ酸の相異、又は該配列におけるアミノ酸の欠失、置
換、挿入、逆位もしくは付加により示され得る。このよ
うな誘導体をコードする核酸配列は本発明の範囲に含ま
れる。更に、これらの種々の誘導体をコードする核酸配
列の製造に組換ＤＮ＾技術を使用することが可能である
。
好ましくは、本発明の核酸配列はＤＰＩ ３１６８株の
入手可能な単離株から誘導され得る。
入手可能な単離株から誘導され得る。
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１に示される核酸配列の誘導体又
はそのフラグメントを生成するこのような全改変は本発
明の範囲に含まれる。
はそのフラグメントを生成するこのような全改変は本発
明の範囲に含まれる。
本発明は、上記核酸配列によりコードされ且つＩＢに対
する家禽の免疫に使用され得るＩＢＶ株のポリペプチド
も包含する。
する家禽の免疫に使用され得るＩＢＶ株のポリペプチド
も包含する。
更に、＾ｒｋａｎｓａｓ血清型に属するｒＢＶ、特にＤ
ＰＩ３１６８株のスパイクタンパク質ポリペプチド又は
その抗原性フラグメント（好ましくはＳｌ又はＳ２サブ
ユニツト）のアミノ酸配列を実質的に含むポリペプチド
も本発明に含まれる。
ＰＩ３１６８株のスパイクタンパク質ポリペプチド又は
その抗原性フラグメント（好ましくはＳｌ又はＳ２サブ
ユニツト）のアミノ酸配列を実質的に含むポリペプチド
も本発明に含まれる。
好適態様によると、ＳＥｏ １０ Ｎｏ：１に示される
約１〜１１６８のアミノ酸配列、例えば約１〜５３９又
は５４５〜１１６８のアミノ酸配列を実質的に含むポリ
ペプチドを使用する。
約１〜１１６８のアミノ酸配列、例えば約１〜５３９又
は５４５〜１１６８のアミノ酸配列を実質的に含むポリ
ペプチドを使用する。
特に、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１に示される約１〜５３９
のアミノ酸配列を含むポリペプチドが本発明で使用され
る。
のアミノ酸配列を含むポリペプチドが本発明で使用され
る。
ポリペプチドなる用語はアミノ酸の分子鎖を意味し、生
成物の特定の長さを意味するものではない。したがって
、特にペプチドとしてオリゴペプチド及びタンパク質が
ポリペプチドの定義に含まれる。
成物の特定の長さを意味するものではない。したがって
、特にペプチドとしてオリゴペプチド及びタンパク質が
ポリペプチドの定義に含まれる。
本発明で使用されるＳＥＱ １０ Ｎｏ：１に示される
特定のスパイクタンパク質ポリペプチドには天然の変異
が存在し得ることが理解されよう。これらの変異は配列
全体におけるアミノ酸相異、又は該ポリペプチドにおけ
るアミノ酸の欠失、置換、挿入、逆位もしくは付加によ
り示され得る。
特定のスパイクタンパク質ポリペプチドには天然の変異
が存在し得ることが理解されよう。これらの変異は配列
全体におけるアミノ酸相異、又は該ポリペプチドにおけ
るアミノ酸の欠失、置換、挿入、逆位もしくは付加によ
り示され得る。
更に、単一又は複数のアミノ酸の置換、欠失、付加又は
転位（ｒｅｐｌａｃｅｓ＋ｅｎｔ）により種々に改変さ
れたＳＥＱ １０ Ｎｏ：１に示されるスパイクタンパ
ク質ポリペプチドの種々の誘導体を製造するために組換
ＤＮ＾技術を使用することが可能である。ＳＥＱ ＩＤ
Ｈｏｗｌに示されるスパイクタンパク質ポリペプチドの
誘導体をもたらす上記全改変は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎａ１
ｌに示されるポリペプチド又はその抗原性フラグメント
の主要な特徴的活性が本質的に変わらない限り本発明の
範囲に含まれる。
転位（ｒｅｐｌａｃｅｓ＋ｅｎｔ）により種々に改変さ
れたＳＥＱ １０ Ｎｏ：１に示されるスパイクタンパ
ク質ポリペプチドの種々の誘導体を製造するために組換
ＤＮ＾技術を使用することが可能である。ＳＥＱ ＩＤ
Ｈｏｗｌに示されるスパイクタンパク質ポリペプチドの
誘導体をもたらす上記全改変は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎａ１
ｌに示されるポリペプチド又はその抗原性フラグメント
の主要な特徴的活性が本質的に変わらない限り本発明の
範囲に含まれる。
本発明の核酸配列は、場合によりβ−ガラクトシダーゼ
のような融合タンパク質配列をコードするＤＮＡの一部
を含む種々の複製可能なりＮＡ配列に連結することがで
き、適当な宿主の形質転換に使用可能な所謂組換核酸分
子を生成する。このようなハイブリッドＤＮＡ分子は好
ましくは、例えばプラスミドから、又はバクテリオファ
ージ、コスミドもしくはつ′イルス中に存在する核酸配
列から誘導される。本発明の核酸配列をクローニングす
るために使用可能な具体的なベクターは当業者に知られ
ている（例えばＲｏｄｒｉｎｑｕｅｚ、 Ｒ，Ｌ、及び
り、Ｔ。
のような融合タンパク質配列をコードするＤＮＡの一部
を含む種々の複製可能なりＮＡ配列に連結することがで
き、適当な宿主の形質転換に使用可能な所謂組換核酸分
子を生成する。このようなハイブリッドＤＮＡ分子は好
ましくは、例えばプラスミドから、又はバクテリオファ
ージ、コスミドもしくはつ′イルス中に存在する核酸配
列から誘導される。本発明の核酸配列をクローニングす
るために使用可能な具体的なベクターは当業者に知られ
ている（例えばＲｏｄｒｉｎｑｕｅｚ、 Ｒ，Ｌ、及び
り、Ｔ。
Ｄｅｎｈａｒｄｔ、 １９８８）。本発明の組換核酸分
子の構築に使用される方法は当業者に知られており、特
にＭａｎｉａｔｉｓ、 Ｔ、他（１９８２）に記載され
ている。本明細書中に使用される「形質転換」なる用語
は、使用される方法に関係なく宿主細胞への異種核酸配
列の導入を意味し、例えば直接取り込み又はトランスダ
クションを包含する。異種核酸配列は自己複製を通じて
維持され得、あるいは宿主ゲノムに組み込まれ得る。所
望に応じて組換ＤＮＮ背分子、挿入される核酸配列の発
現を調節し得る指定宿主に適合可能な適当な制御配列を
備える。
子の構築に使用される方法は当業者に知られており、特
にＭａｎｉａｔｉｓ、 Ｔ、他（１９８２）に記載され
ている。本明細書中に使用される「形質転換」なる用語
は、使用される方法に関係なく宿主細胞への異種核酸配
列の導入を意味し、例えば直接取り込み又はトランスダ
クションを包含する。異種核酸配列は自己複製を通じて
維持され得、あるいは宿主ゲノムに組み込まれ得る。所
望に応じて組換ＤＮＮ背分子、挿入される核酸配列の発
現を調節し得る指定宿主に適合可能な適当な制御配列を
備える。
適切な宿主細胞は、ポリペプチドをコードする核酸配列
又はこのような核酸配列を含む組換核酸分子により形質
転換され得、所望に応じて該核酸配列によりコードされ
る該ポリペプチドを発現させるために使用可能な細胞で
ある。宿主細胞は原核起源（例えばＥ、ｃｏｌｉ、 Ｂ
、５ｕｂｔｉｌｉｓ及びＰｓｅｕｄｏｍ。
又はこのような核酸配列を含む組換核酸分子により形質
転換され得、所望に応じて該核酸配列によりコードされ
る該ポリペプチドを発現させるために使用可能な細胞で
ある。宿主細胞は原核起源（例えばＥ、ｃｏｌｉ、 Ｂ
、５ｕｂｔｉｌｉｓ及びＰｓｅｕｄｏｍ。
ｎａｓ種のような細菌）でもよいし、真核起源（例えば
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの
ような酵母）又はより高等な真核細胞（例えば昆虫、植
物又は哺乳動物細胞、Ｈｅ１ａ細胞及びチャイニーズハ
ムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む）てもよい。昆虫細
胞は５ｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａのＳ
ｆ９細胞系を含む。真核クローニング系における本発明
の核酸配列のクロニング及び発現に関する情報は、Ｅｓ
５ｅｒ、 Ｋ、他（１９８６）に記載されている。
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの
ような酵母）又はより高等な真核細胞（例えば昆虫、植
物又は哺乳動物細胞、Ｈｅ１ａ細胞及びチャイニーズハ
ムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む）てもよい。昆虫細
胞は５ｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａのＳ
ｆ９細胞系を含む。真核クローニング系における本発明
の核酸配列のクロニング及び発現に関する情報は、Ｅｓ
５ｅｒ、 Ｋ、他（１９８６）に記載されている。
一般に、本発明で有用なベクターの構築におけるＤＮＡ
配列のクローニングには原核細胞のほうが好適である。
配列のクローニングには原核細胞のほうが好適である。
発現のために、本発明の核酸配列は発現制御配列に作動
的に連結される。このような制御配列は、プロモーター
、オペレーター、エンハンサ−、インデューサー、リポ
ソーム結合部位等を含み得る。
的に連結される。このような制御配列は、プロモーター
、オペレーター、エンハンサ−、インデューサー、リポ
ソーム結合部位等を含み得る。
宿主細胞が細菌であるとき、有用な発現制御配列の具体
例はｔｒｐプロモーター及びオペレーター（Ｇｏｅｄｄ
ｅ ｌ他、１９８０）、ｌａｃプロモーター及びオペレ
ーター（Ｃｈａｎｇ他、１９）８）、外膜タンパク質プ
ロモーター（Ｎａｋａｍｕｒａ及びＩｎｏｕｇｅ、 １
９８２）、バクテリオファージスプロモーター及びオペ
レーター（Ｒｅｍａｕｔ、 Ｅ、他、１９８３）、α−
アミラーゼ（Ｂ。
例はｔｒｐプロモーター及びオペレーター（Ｇｏｅｄｄ
ｅ ｌ他、１９８０）、ｌａｃプロモーター及びオペレ
ーター（Ｃｈａｎｇ他、１９）８）、外膜タンパク質プ
ロモーター（Ｎａｋａｍｕｒａ及びＩｎｏｕｇｅ、 １
９８２）、バクテリオファージスプロモーター及びオペ
レーター（Ｒｅｍａｕｔ、 Ｅ、他、１９８３）、α−
アミラーゼ（Ｂ。
５ｕｂｔｉｌｉｓ）プロモーター及びオペレーター、選
択された宿主細胞に適合可能な終止配列並びに他の発現
強化及び制御配列を含む。宿主細胞が酵母であるとき、
有用な発現制御配列の具体例は例えばα接合因子を含む
、昆虫細胞ではバキュロウィルスのポリへドリンプロモ
ーターを使用することができる（Ｓｍｉｔｈ、 （、、
Ｅ、他、１９８３）。宿主細胞が哺乳動物起源のとき、
有用な発現制御配列の具体例は例えば５Ｖ−４０プロモ
ーター（Ｂｅｒｍａｎ、 Ｐ、Ｌ他、１９８３）又は例
えばメタロチオネインプロモーター（ＢｒｉｎｓＬｅｒ
、 Ｒ，Ｌ、他、１９８２）又はヒートショックプロモ
ーター（Ｖｏｅｌ１ｍｙ他、１９８５）を含む。あるい
は、ＩＢＶ中に存在する発現制御配列、特にＤＰＩ ３
１６８スパイクタンパク質の発現を制御する配列も適用
することができる。
択された宿主細胞に適合可能な終止配列並びに他の発現
強化及び制御配列を含む。宿主細胞が酵母であるとき、
有用な発現制御配列の具体例は例えばα接合因子を含む
、昆虫細胞ではバキュロウィルスのポリへドリンプロモ
ーターを使用することができる（Ｓｍｉｔｈ、 （、、
Ｅ、他、１９８３）。宿主細胞が哺乳動物起源のとき、
有用な発現制御配列の具体例は例えば５Ｖ−４０プロモ
ーター（Ｂｅｒｍａｎ、 Ｐ、Ｌ他、１９８３）又は例
えばメタロチオネインプロモーター（ＢｒｉｎｓＬｅｒ
、 Ｒ，Ｌ、他、１９８２）又はヒートショックプロモ
ーター（Ｖｏｅｌ１ｍｙ他、１９８５）を含む。あるい
は、ＩＢＶ中に存在する発現制御配列、特にＤＰＩ ３
１６８スパイクタンパク質の発現を制御する配列も適用
することができる。
ＩＢν感染に対する家禽の免疫は、例えば本発明のポリ
ペプチドを所謂サブユニットワクチンとしてトリに投与
することにより実施され得る。本発明のサブユニットワ
クチンは、場合により医薬上許容可能なキャリヤーの存
在下に純粋形態のポリペプチドを含み得る。ポリペプチ
ドは場合により、例えば融合産物の精製に有利であり得
る無関係なタンパク質に共有結合され得る。具体例はβ
−ガラクトシダーゼ、タンパク質＾、プロキモシン、血
液凝固因子Ｘａ等である。
ペプチドを所謂サブユニットワクチンとしてトリに投与
することにより実施され得る。本発明のサブユニットワ
クチンは、場合により医薬上許容可能なキャリヤーの存
在下に純粋形態のポリペプチドを含み得る。ポリペプチ
ドは場合により、例えば融合産物の精製に有利であり得
る無関係なタンパク質に共有結合され得る。具体例はβ
−ガラクトシダーゼ、タンパク質＾、プロキモシン、血
液凝固因子Ｘａ等である。
場きにより、これらのポリペプチド自体に対する中和抗
体を産生する能力は低い場合がある。その免疫原性を増
強するためには好ましくは小さいフラグメントをキャリ
ヤー分子に結−合する。この目的に適切なキャリヤーは
高分子であり、例えば天然ポリマー（ｋｅｙ ｈｏｌｅ
ｌｉｍｐｅｔ、ヘモシアニン、アルブミン、１〜キシ
ンのようなタンパク質）、合成ポリマー（ポリアミノ酸
、例えばポリリシン、ポリアラニン）、又は両親媒性化
合物のミセル（例えばサポニン）である。あるいはこれ
らのフラグメントは、そのポリマー、好ましくは線状ポ
リマーとして提供され得る。
体を産生する能力は低い場合がある。その免疫原性を増
強するためには好ましくは小さいフラグメントをキャリ
ヤー分子に結−合する。この目的に適切なキャリヤーは
高分子であり、例えば天然ポリマー（ｋｅｙ ｈｏｌｅ
ｌｉｍｐｅｔ、ヘモシアニン、アルブミン、１〜キシ
ンのようなタンパク質）、合成ポリマー（ポリアミノ酸
、例えばポリリシン、ポリアラニン）、又は両親媒性化
合物のミセル（例えばサポニン）である。あるいはこれ
らのフラグメントは、そのポリマー、好ましくは線状ポ
リマーとして提供され得る。
このようなサブユニットワクチンで使用されるポリペプ
チドは当業者に既知の方法、例えばＩＢＶからの該ポリ
ペプチドの単離、組換ＤＮ＾技術又は化学的合成により
製造され得る。
チドは当業者に既知の方法、例えばＩＢＶからの該ポリ
ペプチドの単離、組換ＤＮ＾技術又は化学的合成により
製造され得る。
必要に応じてワクチンで使用される本発明のポリペプチ
ドは例えばグリコジル化、アミド化、カルボキシル化又
はホスホリル化によりｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉ
ｖｏで修飾され得る。
ドは例えばグリコジル化、アミド化、カルボキシル化又
はホスホリル化によりｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉ
ｖｏで修飾され得る。
サブユニットワクチンの代替物は生ベクターワクチンで
ある。本発明の核酸配列は、組換微生物が複製能力を維
持し、したがって、挿入された核酸配列によりコードさ
れるポリペプチドを発現できるように、組換ＤＮ＾技術
により微生物（例えば細菌又はウィルス）に導入される
０次に、この組換微生物をトリに投与して免疫すると、
その後、該微生物は接種したトリの体内で所定時間その
まま維持され、あるいは複製され、本発明の挿入核酸配
列によりコードされるポリペプチドをｉｎ ｖｉｖ。
ある。本発明の核酸配列は、組換微生物が複製能力を維
持し、したがって、挿入された核酸配列によりコードさ
れるポリペプチドを発現できるように、組換ＤＮ＾技術
により微生物（例えば細菌又はウィルス）に導入される
０次に、この組換微生物をトリに投与して免疫すると、
その後、該微生物は接種したトリの体内で所定時間その
まま維持され、あるいは複製され、本発明の挿入核酸配
列によりコードされるポリペプチドをｉｎ ｖｉｖ。
で発現し、その結果、接種したトリの免疫系を刺激する
。本発明の核酸配列の取り込みに適切なベクターは、例
えばポックスウィルス（例えばニワトリポックスウィル
スのような鳥類ポックスウィルス）、ヘルペスウィルス
（例えばマレック病ウィルス又はシチメンチョウヘルペ
スウイルス）、アデノウィルス、インフルエンザウィル
ス、又は細菌（例えば大腸菌又は特定のサルモネラ種）
から誘導される。この型の組換微生物を使用すると、宿
主細胞て合成されたポリペプチドを表面抗原として出現
させることが可能である。この意味では、該ポリペプチ
ドと大腸菌のＯＭＰタンパク質又は線毛（ｐｉｌｕｓ）
タンパク質との融合又は生物により認識されるシグナル
及びアンカー配列の合成による供給を予想することがて
きる。所望に応じて該免疫原性ポリペプチドをそのより
大きい全体の一部として被免疫動物の体内に放出するこ
とも可能である。これらのいずれの場合も、種々の病原
体及び／又は所与の病原体の種々の抗原からの保護を生
じさせる１種以上の免疫原性産物の発現が可能である。
。本発明の核酸配列の取り込みに適切なベクターは、例
えばポックスウィルス（例えばニワトリポックスウィル
スのような鳥類ポックスウィルス）、ヘルペスウィルス
（例えばマレック病ウィルス又はシチメンチョウヘルペ
スウイルス）、アデノウィルス、インフルエンザウィル
ス、又は細菌（例えば大腸菌又は特定のサルモネラ種）
から誘導される。この型の組換微生物を使用すると、宿
主細胞て合成されたポリペプチドを表面抗原として出現
させることが可能である。この意味では、該ポリペプチ
ドと大腸菌のＯＭＰタンパク質又は線毛（ｐｉｌｕｓ）
タンパク質との融合又は生物により認識されるシグナル
及びアンカー配列の合成による供給を予想することがて
きる。所望に応じて該免疫原性ポリペプチドをそのより
大きい全体の一部として被免疫動物の体内に放出するこ
とも可能である。これらのいずれの場合も、種々の病原
体及び／又は所与の病原体の種々の抗原からの保護を生
じさせる１種以上の免疫原性産物の発現が可能である。
本発明のワクチンを製造するには、本発明の核酸配列を
含むベクターウィルスに感染した宿主細胞を培養し、そ
の後、細胞中で増殖したベクターウィルスを場合により
細胞の存在下又は純粋形態て取り出し、場合により凍結
乾燥形態のワクチンに形成する。
含むベクターウィルスに感染した宿主細胞を培養し、そ
の後、細胞中で増殖したベクターウィルスを場合により
細胞の存在下又は純粋形態て取り出し、場合により凍結
乾燥形態のワクチンに形成する。
本発明の核酸配列を含む上記宿主細胞は、該核酸配列に
よりコードされるポリペプチドの発現に好適な条件下で
培養することもできる。ワクチンは粗培養物、宿主細胞
溶解物又は宿主細胞抽出物のサンプルを使用して製造さ
れ得るが、別の態様では本発明のより純粋なポリペプチ
ドを所期の使用に応じてワクチンに賦形する。産生され
たポリペプチドを精製するためには、本発明の核酸配列
を含む宿主細胞を適当な容量で培養し、産生されたポリ
ペプチドをこのような細胞又は培地（タンパク質が分泌
される場合）から単離する。培地中に分泌されるポリペ
プチドは慣用方法（例えば塩分向、クロマトグラフィー
、遠心分離等）により単離及び精製され得、一方、細胞
内ポリベプチドを単離するには、まず該細胞を採集し、
細胞を溶解させた後、ポリペプチドを池の細胞内成分か
ら分離し、ポリペプチドをワクチンに形成する。
よりコードされるポリペプチドの発現に好適な条件下で
培養することもできる。ワクチンは粗培養物、宿主細胞
溶解物又は宿主細胞抽出物のサンプルを使用して製造さ
れ得るが、別の態様では本発明のより純粋なポリペプチ
ドを所期の使用に応じてワクチンに賦形する。産生され
たポリペプチドを精製するためには、本発明の核酸配列
を含む宿主細胞を適当な容量で培養し、産生されたポリ
ペプチドをこのような細胞又は培地（タンパク質が分泌
される場合）から単離する。培地中に分泌されるポリペ
プチドは慣用方法（例えば塩分向、クロマトグラフィー
、遠心分離等）により単離及び精製され得、一方、細胞
内ポリベプチドを単離するには、まず該細胞を採集し、
細胞を溶解させた後、ポリペプチドを池の細胞内成分か
ら分離し、ポリペプチドをワクチンに形成する。
言うまでもなく、既にＩＢＶに感染したトリを該［ＢＶ
に対する抗体で処置することがてきる。本発明のポリペ
プチドに特異的な抗血清又は抗体はＩＢＶ感染の治療に
使用され得る。該特異的抗血清又は抗体は、本発明のポ
リペプチドに対する抗血清を他の既知の血清型のＩＢウ
ィルスの混合物と共にインキュベートすることにより得
られる。本発明のポリペプチドに非特異的な抗体は、添
加されるウィルス材料に吸着し、こうしてインキュベー
ション混合物から例えば遠心分離により本発明のポリペ
プチドに特異的なポリクローナル抗体調製物を得る。
に対する抗体で処置することがてきる。本発明のポリペ
プチドに特異的な抗血清又は抗体はＩＢＶ感染の治療に
使用され得る。該特異的抗血清又は抗体は、本発明のポ
リペプチドに対する抗血清を他の既知の血清型のＩＢウ
ィルスの混合物と共にインキュベートすることにより得
られる。本発明のポリペプチドに非特異的な抗体は、添
加されるウィルス材料に吸着し、こうしてインキュベー
ション混合物から例えば遠心分離により本発明のポリペ
プチドに特異的なポリクローナル抗体調製物を得る。
本発明のポリペプチドに対するモノクローナル抗体は、
ＩＢＶに感染したトリの治療にも使用され得る。該モノ
クローナル抗体はこの目的で当業者に知られている方法
により産生され得、例えばマウスを該ポリペプチドで免
疫し、マウス牌細胞を無限増殖し、有用な抗体を産生ず
るハイブリドーマを選択することにより産生され得る。
ＩＢＶに感染したトリの治療にも使用され得る。該モノ
クローナル抗体はこの目的で当業者に知られている方法
により産生され得、例えばマウスを該ポリペプチドで免
疫し、マウス牌細胞を無限増殖し、有用な抗体を産生ず
るハイブリドーマを選択することにより産生され得る。
無限増殖性抗体産生細胞系は、発癌ＤＮＡによるＢリン
パ球の直接形質転換又はＥｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィ
ルスによるトランスフェクションによっても作製され得
る。
パ球の直接形質転換又はＥｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィ
ルスによるトランスフェクションによっても作製され得
る。
特にモノクローナル抗体を使用して当業者に周知の方法
により抗イデイオタイプ抗体を産生ずることができる。
により抗イデイオタイプ抗体を産生ずることができる。
これらの抗イデイオタイプ抗体はトリのＩＢＶ５染の予
防にも有用である。
防にも有用である。
上記抗血清及びモノクローナル抗体をＩＢＶに感染した
トリの免疫学的診断に使用することもてきる。
トリの免疫学的診断に使用することもてきる。
本発明のワクチンは従来の能動免疫方式で投与され得、
即ち投与調剤に適合可能な方法で、予防上及び／又は治
療上有効であり且つ免疫原性を有する量を１回又は繰り
返し投与する。ワクチンの投与は例えば皮肉、皮下、筋
肉内、静脈内又は鼻孔内で実施され得る。
即ち投与調剤に適合可能な方法で、予防上及び／又は治
療上有効であり且つ免疫原性を有する量を１回又は繰り
返し投与する。ワクチンの投与は例えば皮肉、皮下、筋
肉内、静脈内又は鼻孔内で実施され得る。
また、ワクチン・は、例えば活性及び／又は貯蔵寿命を
増加するためにしばしば他の成分と混合した水性媒体又
は含水懸濁液を更に含み得る。これらの成分は塩、ｐＨ
Ｉ衝液、安定剤（例えばスキムミルク又はカゼイン加水
分解物）、乳化剤、免疫応答を向上するためのアジュバ
ント（例えば鉱物油、ムラミルジペプチド、水酸化アル
ミニウム、サポニン、ポリアニオン及び両親媒性物質）
及び保存剤であり得る。
増加するためにしばしば他の成分と混合した水性媒体又
は含水懸濁液を更に含み得る。これらの成分は塩、ｐＨ
Ｉ衝液、安定剤（例えばスキムミルク又はカゼイン加水
分解物）、乳化剤、免疫応答を向上するためのアジュバ
ント（例えば鉱物油、ムラミルジペプチド、水酸化アル
ミニウム、サポニン、ポリアニオン及び両親媒性物質）
及び保存剤であり得る。
当然のことながら、本発明のワクチンは多価ワクチンを
製造するために更に、ＩＢＶ血清型又は他の疾患に関連
する免疫原を含んでもよく、又はＭａｓｓａｅｈｕｓｅ
ｔｔｓ血清型のＩＢＶ、ニューカッスル病ウィルス（Ｎ
ＯＶ）、感染性嚢疾患ウィルス（ＩＢＤＶ）及びマレッ
ク病ウィルス（ＭＤＶ）の抗原のようなこれらの免疫原
をコードする核酸配列を含んでもよい９及１遭［Ｌ 尿膜腔に１０’ε１０ｓ。／卵を接種することにより、
齢の胚形成卵で増殖した。３７℃で２４時間インキュヘ
ーション後、卵を一晩４℃て冷却した。尿膜液を氷上で
冷却するように注意しながら採取した。
製造するために更に、ＩＢＶ血清型又は他の疾患に関連
する免疫原を含んでもよく、又はＭａｓｓａｅｈｕｓｅ
ｔｔｓ血清型のＩＢＶ、ニューカッスル病ウィルス（Ｎ
ＯＶ）、感染性嚢疾患ウィルス（ＩＢＤＶ）及びマレッ
ク病ウィルス（ＭＤＶ）の抗原のようなこれらの免疫原
をコードする核酸配列を含んでもよい９及１遭［Ｌ 尿膜腔に１０’ε１０ｓ。／卵を接種することにより、
齢の胚形成卵で増殖した。３７℃で２４時間インキュヘ
ーション後、卵を一晩４℃て冷却した。尿膜液を氷上で
冷却するように注意しながら採取した。
赤血球及び破片を４℃て６０００ Ｘ ｇで３０分間遠
心分離により除去した。
心分離により除去した。
Ｂｅｃｋｍａｎｎ Ｔｙｐｅ １９０−ターで５４００
０：ｇで４時間４℃でウィルスを上清からペレット化し
た。ペレットを注射針で繰り返し吸注入することにより
冷ＴＮＥ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、１００ｍＭ
ＮａＣ１，１ｍＭ ＥＤＴ＾、ｐＨ７，５）に再懸濁し
、ＴＮＥ中の２０〜６０％ショ糖直線勾配３２ｚｆ上に
重層した。
０：ｇで４時間４℃でウィルスを上清からペレット化し
た。ペレットを注射針で繰り返し吸注入することにより
冷ＴＮＥ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、１００ｍＭ
ＮａＣ１，１ｍＭ ＥＤＴ＾、ｐＨ７，５）に再懸濁し
、ＴＮＥ中の２０〜６０％ショ糖直線勾配３２ｚｆ上に
重層した。
４℃、５１１１２８０−ター中で２４０００ｒｐｍで一
晩遠心分離後、管の側壁を注射器で穿孔することにより
つイルスパントを採取した。２倍容量のＴＨＥで希釈後
、ウィルスを５Ｗ２８０−ターで１８００Ｏｒｐｍで９
０分間４℃でペレット化した。
晩遠心分離後、管の側壁を注射器で穿孔することにより
つイルスパントを採取した。２倍容量のＴＨＥで希釈後
、ウィルスを５Ｗ２８０−ターで１８００Ｏｒｐｍで９
０分間４℃でペレット化した。
材料を少量のＴＨＥに再懸濁し、０．５％の最終濃度と
なるまでドデシル硫酸ナトリウムを加えた。調製物を２
００１ｙ／ｉ１のプロテイナーゼＫ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒ社）で２時間３７℃で消化し、フェノール／クロロ
ホルムの１＝１混合物で２回抽出した。
なるまでドデシル硫酸ナトリウムを加えた。調製物を２
００１ｙ／ｉ１のプロテイナーゼＫ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒ社）で２時間３７℃で消化し、フェノール／クロロ
ホルムの１＝１混合物で２回抽出した。
水相中のウィルスＲＮ＾をｐＨ６，０の０．１Ｍ酢酸ナ
トリウムの存在下に一２０℃で２倍容量のエタノールで
沈殿させた。遠心分離及び管をエタノールで濯いた後、
ペレットを真空下に乾燥し、滅菌水に溶解し、０．５ｚ
Ｌｉ／ｌｔ’のＲＮＡ濃度とした。アガロースゲル電気
泳動により調べた処、調製物は＞９０％のＩＢＶゲノム
ＤＮ八をへんでおり、これを−２０℃で保存した。
トリウムの存在下に一２０℃で２倍容量のエタノールで
沈殿させた。遠心分離及び管をエタノールで濯いた後、
ペレットを真空下に乾燥し、滅菌水に溶解し、０．５ｚ
Ｌｉ／ｌｔ’のＲＮＡ濃度とした。アガロースゲル電気
泳動により調べた処、調製物は＞９０％のＩＢＶゲノム
ＤＮ八をへんでおり、これを−２０℃で保存した。
゛ツムＲＮＡのｃＤＮ＾クローニン
７５ｕ１の反応容量中、ウィルスＲＮ＾５ＩＪｇを使用
して＾ＭＶ逆転写酵素の存在下にオリゴ（ｄＴ）、２−
、＠で最初の連鎖合成を開始した。３０分間４０℃でイ
ンキュベート後、３分間１００℃で加熱することにより
ＤＮ＾／ＲＮ＾ハイブリッドを変性させ、その後、反応
物を２時間２０℃でインキュベートすることにより大腸
菌ＤＮ＾ポリメラーゼＩ由来の大フラグメントの存在下
に第２の連鎖を合成した。ｃＤＮ＾をエタノール沈殿さ
せ、Ｚｏｏ、１の反応容量中、Ｓｌ−ヌクレアーゼ１０
Ｕで３０分間３７℃で消化した。反応産物を１Ｏｎ＋Ｍ
Ｔｒｉｓｆｌｃｌ、５ｍＭ ＥＤＴ＾、５００ｍＭ
ＮａＣｌ、ｐＨ７，５中の５〜２０％シヨ糖勾配３．２
ｉｅ上に重層し、Ｓ−６５０−ターで３０００Ｏｒｐｍ
で１６時間１５℃で遠心分離した。
して＾ＭＶ逆転写酵素の存在下にオリゴ（ｄＴ）、２−
、＠で最初の連鎖合成を開始した。３０分間４０℃でイ
ンキュベート後、３分間１００℃で加熱することにより
ＤＮ＾／ＲＮ＾ハイブリッドを変性させ、その後、反応
物を２時間２０℃でインキュベートすることにより大腸
菌ＤＮ＾ポリメラーゼＩ由来の大フラグメントの存在下
に第２の連鎖を合成した。ｃＤＮ＾をエタノール沈殿さ
せ、Ｚｏｏ、１の反応容量中、Ｓｌ−ヌクレアーゼ１０
Ｕで３０分間３７℃で消化した。反応産物を１Ｏｎ＋Ｍ
Ｔｒｉｓｆｌｃｌ、５ｍＭ ＥＤＴ＾、５００ｍＭ
ＮａＣｌ、ｐＨ７，５中の５〜２０％シヨ糖勾配３．２
ｉｅ上に重層し、Ｓ−６５０−ターで３０００Ｏｒｐｍ
で１６時間１５℃で遠心分離した。
５００〜５０００塩基対サイズで沈降する材料を採集し
、エタノール沈殿させ、２０μｌの０．１ＳＳＣ（１５
ｎ＋ＭＮａＣｌ、１．５＋ａＭクエン酸ナトリウム）に
溶解した。
、エタノール沈殿させ、２０μｌの０．１ＳＳＣ（１５
ｎ＋ＭＮａＣｌ、１．５＋ａＭクエン酸ナトリウム）に
溶解した。
酵素供給元により推奨される条件に従って、反応容量３
０１１１中、ターミナルトランスフェラーゼ（Ｇｉｂｃ
ｏ−ＢＲＬ）１５０と共に２分間３７℃でインキュベー
トすることにより二重鎖ｃＤＮへの末端を１０〜１５ｄ
Ｇ残基を用いて延長した。反応を５ｍＭ ＥＤＴ＾で停
止した。
０１１１中、ターミナルトランスフェラーゼ（Ｇｉｂｃ
ｏ−ＢＲＬ）１５０と共に２分間３７℃でインキュベー
トすることにより二重鎖ｃＤＮへの末端を１０〜１５ｄ
Ｇ残基を用いて延長した。反応を５ｍＭ ＥＤＴ＾で停
止した。
テール化ｃＤＮ＾１０ｎｇを２５モル過剰のリン酸化合
成オリゴマー５′−ｄ＾＾ＴＴＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣ
−３’と共に１０μ１ＴＥＮの最終容置で２分間６５℃
で加熱し、５０℃で一晩インキユベーションすることに
よりアニールした。
成オリゴマー５′−ｄ＾＾ＴＴＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣ
−３’と共に１０μ１ＴＥＮの最終容置で２分間６５℃
で加熱し、５０℃で一晩インキユベーションすることに
よりアニールした。
ＩＵのＴ、ＤＮ＾Ｎカリゼを加え、４℃で一晩インキユ
ベートすることにより、３０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、
ｐＨ７，５，１０ｍＭ ＭｇＣｌ２．１０ｍＭ ＤＴ
Ｔ、０．１ｍＭ八Ｔへ２０μｌ中で、ＥｃｏＲｌで消化
したλｇｔｌＯＤＮＡ（）ｌｕｙｎｈ他、１９８５）１
０ｇト連結した。ｉｎ ｖｉｔｒｏパッケージング反応
混合物（Ｐｒｏｍｅｇａ）にＤＮＡを加え、大腸菌のｈ
ｆｌＡ株上で培養後に組換ファージを選択することによ
り、ＩＢＶ株ＤＰＩ ３１６８からのｃＤＮ＾ＤＮＡラ
リーを作製した。
ベートすることにより、３０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、
ｐＨ７，５，１０ｍＭ ＭｇＣｌ２．１０ｍＭ ＤＴ
Ｔ、０．１ｍＭ八Ｔへ２０μｌ中で、ＥｃｏＲｌで消化
したλｇｔｌＯＤＮＡ（）ｌｕｙｎｈ他、１９８５）１
０ｇト連結した。ｉｎ ｖｉｔｒｏパッケージング反応
混合物（Ｐｒｏｍｅｇａ）にＤＮＡを加え、大腸菌のｈ
ｆｌＡ株上で培養後に組換ファージを選択することによ
り、ＩＢＶ株ＤＰＩ ３１６８からのｃＤＮ＾ＤＮＡラ
リーを作製した。
ｃＤＮ＾ＤＮＡラリーの１００〜２００ｐｆｕをベトリ
皿中の大腸菌上で培養した。ニトロセルロースの二重フ
ィルター（Ｂｅｎ ｔｏｎとＤａｖｉｓ、１９７８）を
準備し、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、ｐＨ７，５、Ｌ
Ｍ ＮａＣ１，０，１％ＳＤＳ及び４Ｘ Ｄｅｎｈａｒ
ｄｔ溶液（Ｍａｎｉａｔｉｓ他、１９８２）を含むハイ
ブリダイゼーション溶液中で３２ＰｉＭ合成オリゴマー
と共に一晩４２℃でインキュベートした。
皿中の大腸菌上で培養した。ニトロセルロースの二重フ
ィルター（Ｂｅｎ ｔｏｎとＤａｖｉｓ、１９７８）を
準備し、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、ｐＨ７，５、Ｌ
Ｍ ＮａＣ１，０，１％ＳＤＳ及び４Ｘ Ｄｅｎｈａｒ
ｄｔ溶液（Ｍａｎｉａｔｉｓ他、１９８２）を含むハイ
ブリダイゼーション溶液中で３２ＰｉＭ合成オリゴマー
と共に一晩４２℃でインキュベートした。
これらのハイブリダイゼーションでプローブとして使用
した３個の合成オリゴマーは次のヌクレオチド配列構造
を含んでいた。
した３個の合成オリゴマーは次のヌクレオチド配列構造
を含んでいた。
（、５’ −ｄＴＴＣＣ＾＾ＣＡＴＣＴＣＴ＾＾ＣＣＡ
ＧＴ＾＾ＴＴＴＡＣＣＧＴ−３’１１ 、５’ −ｄＴ
ＡＣＣＴＡＣＴ＾＾ＴＴＴＡＣＣＡＣＣＡに＾＾＾ＣＴ
ＡＣ＾＾＾ＣＴＧＣＴＧ−３゜ ■、 ５’ −ｄＴＧＧＡＴｃＡＴＴ＾＾＾ＣＡＣＡＣ
ＴＴＴＴＴＡＧＧＴＣＴＧＴＡＴＴＧＴＴ３゛ これらのプローブのうち１又は好ましくは２個のプロー
ブでシグナルを与える組換ファージを選択し、常法（Ｍ
ａｎｉａｔｉｓ他、１９８２）によりプラーク精製した
。λフアージ組換体からのｃＤＮ＾ＤＮＡメントをＥｃ
ｏＲ１部位で制限処理し、プラスミドクロ一二ングベク
ターｐＧＥＭ４Ｚ（Ｐｒｏｍｅｇａ）からのＥｃｏＲＩ
部位に組み込んだ。
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ブでシグナルを与える組換ファージを選択し、常法（Ｍ
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。λフアージ組換体からのｃＤＮ＾ＤＮＡメントをＥｃ
ｏＲ１部位で制限処理し、プラスミドクロ一二ングベク
ターｐＧＥＭ４Ｚ（Ｐｒｏｍｅｇａ）からのＥｃｏＲＩ
部位に組み込んだ。
２つの候補で制限分析及び部分配列決定した結果、一方
は完全８１をコードし、他方はスノ（イク遺伝子のＳ２
部分をコードすることが判明した。
は完全８１をコードし、他方はスノ（イク遺伝子のＳ２
部分をコードすることが判明した。
これらの２つのＤＮＡフラグメントの配列は特にＳ／Ｓ
２結合部のただ１つのＸｂａ Ｉ−制限部位に関して部
分的に相互にオーバーラツプする。この部位を使用して
上記２つのフラグメントを結合し、プラスミドベク９−
ｐＧＥＭ４Ｚ中ニｒｌｌｖ株ＤＰＩ３１６８カらノス
パイクタンパク質ポリペプチドをコードする完全遺伝子
を保有するプラスミド構築物ｐｌＢ１４を得た。
２結合部のただ１つのＸｂａ Ｉ−制限部位に関して部
分的に相互にオーバーラツプする。この部位を使用して
上記２つのフラグメントを結合し、プラスミドベク９−
ｐＧＥＭ４Ｚ中ニｒｌｌｖ株ＤＰＩ３１６８カらノス
パイクタンパク質ポリペプチドをコードする完全遺伝子
を保有するプラスミド構築物ｐｌＢ１４を得た。
Ｉ直配」百丸定−
これらの実験では酵素エキソヌクレアーゼｍ（Ｅｘｏｌ
［１）を使用してＨｅｎ１ｋｏｆｆ（１９８４）の方法
に従ってＳ遺伝子の一端の増加部分を除去した。この方
法に備えてＤＰＩ ３１８８からＳ遺伝子を調製するた
めに、ＥｃｏＲｌ−Ｈｌｎｄｌｌで消化し、且つ脱リン
酸化したｐＧＥＭ７２ｆ＋ベクタープラスミドにｐｌＢ
１４のＥｃｏＲＩＨｉｎｄＩ［ｌフラグメントを挿入し
た。この構築物をｐ１８１５と命名した。５１１ｇのｐ
ＩＢ１５を＾ｐａｌで消化し、Ｅｘｏ ［１にＴ７−ポ
リメラーゼプライマ一部位を消化させないようにする突
き出た３′末端を残し、更にＥｃｏＲＩで消化し、Ｅｘ
ｏ Ｉ［［によって消化され得る突き出た５″末端を生
成する。３０秒間隔でサンプルを消化混合物から採取し
た。サンプルを５１ヌクレアーゼ及びＫＩｅｎｏｕ＋９
素で処理し、平滑末端化ＤＮＡフラグメントを得た。フ
ラグメントをＴ、−ＤＮＡリガーゼの存在下に環化し、
コンピテント大腸菌細胞に形質転換した。
［１）を使用してＨｅｎ１ｋｏｆｆ（１９８４）の方法
に従ってＳ遺伝子の一端の増加部分を除去した。この方
法に備えてＤＰＩ ３１８８からＳ遺伝子を調製するた
めに、ＥｃｏＲｌ−Ｈｌｎｄｌｌで消化し、且つ脱リン
酸化したｐＧＥＭ７２ｆ＋ベクタープラスミドにｐｌＢ
１４のＥｃｏＲＩＨｉｎｄＩ［ｌフラグメントを挿入し
た。この構築物をｐ１８１５と命名した。５１１ｇのｐ
ＩＢ１５を＾ｐａｌで消化し、Ｅｘｏ ［１にＴ７−ポ
リメラーゼプライマ一部位を消化させないようにする突
き出た３′末端を残し、更にＥｃｏＲＩで消化し、Ｅｘ
ｏ Ｉ［［によって消化され得る突き出た５″末端を生
成する。３０秒間隔でサンプルを消化混合物から採取し
た。サンプルを５１ヌクレアーゼ及びＫＩｅｎｏｕ＋９
素で処理し、平滑末端化ＤＮＡフラグメントを得た。フ
ラグメントをＴ、−ＤＮＡリガーゼの存在下に環化し、
コンピテント大腸菌細胞に形質転換した。
アンピシリン耐性大腸菌コロニーのスクリーニング後、
スパイク遺伝子のほぼ全体をカバーする１２０個のＳ遺
伝子フラグメントを選択した。ミニ調製物からの二重鎖
プラスミドＤＮＡに対しジデオキシチェーンターミネー
ション法を直接使用して、Ｓａｎｇｅｒ他（１９７７）
により記載されているようにＤＮＡ配列決定を実施した
。配列決定をｐＧＥＮ７Ｚｆ＋のＴ７及びＳｐ６プロモ
ータ一部位から開始し、標識反応て「α３２−ＰＪｄＡ
ＴＰを使用するオートラジオグラフィーにより反応生成
物を可視化した。
スパイク遺伝子のほぼ全体をカバーする１２０個のＳ遺
伝子フラグメントを選択した。ミニ調製物からの二重鎖
プラスミドＤＮＡに対しジデオキシチェーンターミネー
ション法を直接使用して、Ｓａｎｇｅｒ他（１９７７）
により記載されているようにＤＮＡ配列決定を実施した
。配列決定をｐＧＥＮ７Ｚｆ＋のＴ７及びＳｐ６プロモ
ータ一部位から開始し、標識反応て「α３２−ＰＪｄＡ
ＴＰを使用するオートラジオグラフィーにより反応生成
物を可視化した。
２８３４位でハイブリダイズする１５塩基の合成プライ
マーを使用して、ヌクレオチド２５００及び２６００の
間の配列中に残ったギャップを埋めた。配列データを収
集し、Ｇｅｎｅ−Ｍａｓｔｅｒプログラム（Ｂｉｏ−Ｒ
ａｄ）を使用してＩＢＮ ＰＣで分析した。
マーを使用して、ヌクレオチド２５００及び２６００の
間の配列中に残ったギャップを埋めた。配列データを収
集し、Ｇｅｎｅ−Ｍａｓｔｅｒプログラム（Ｂｉｏ−Ｒ
ａｄ）を使用してＩＢＮ ＰＣで分析した。
Ｉｇａｒａｓｈ ｉ他（１９８７）により記載されてい
るようなＦＩＶＴのゲノム構造に基づき、外来遺伝子の
挿入のために該ウィルスの短い非反復配列エレメント（
Ｕｓ）中の領域を選択した。ＨＶＴ感染ＣＥＦからの完
全ＤＮＡを部分的に消化することにより構築したλＥＭ
ＢＬ３ライブラリーから対応するＤＮＡフラグメントを
スクリーニングした。
るようなＦＩＶＴのゲノム構造に基づき、外来遺伝子の
挿入のために該ウィルスの短い非反復配列エレメント（
Ｕｓ）中の領域を選択した。ＨＶＴ感染ＣＥＦからの完
全ＤＮＡを部分的に消化することにより構築したλＥＭ
ＢＬ３ライブラリーから対応するＤＮＡフラグメントを
スクリーニングした。
Ｂａｍ）Ｉ ｌ制限部位の不在により特徴付けられるλ
単離物の１つのインサートをλＨＢＴＯ４と命名し、物
理的マツピング（第１図）により詳細に分析した。
単離物の１つのインサートをλＨＢＴＯ４と命名し、物
理的マツピング（第１図）により詳細に分析した。
１７．５ｋｂ挿入フラグメントに存在する配列は挿入さ
れた反復構造のＵｓ領域含有部分の主要部分を表す（Ｉ
ｇａｒａｓｈｉ他、１９８７）。
れた反復構造のＵｓ領域含有部分の主要部分を表す（Ｉ
ｇａｒａｓｈｉ他、１９８７）。
λＨＶＴＯ４からの１．２ｋｂのＸｈｏ ｌ制限フラグ
メントの１つを５ａｌｌで消化したｐＧＥＭ３Ｚにサブ
クローニングし、ＤＮＡフラグメントの挿入に使用可能
なただ１つのＢｇｌ１１部位を含むプラスミドｐＭＤＯ
７を得た。
メントの１つを５ａｌｌで消化したｐＧＥＭ３Ｚにサブ
クローニングし、ＤＮＡフラグメントの挿入に使用可能
なただ１つのＢｇｌ１１部位を含むプラスミドｐＭＤＯ
７を得た。
ＨＶＴウィルスのゲノムへの外来遺伝子の挿入後に外来
遺伝子の発現を誘くことが可能であった強力なプロモー
ターをラウス肉腫ウィルス（ＲＳＶ）の長い末端反復（
ＬＴＲ）配列から選択した。プロモーターをｐＲｓＶｃ
ａｔ（Ｇｏｒｍａｎ他、１９８２）からの５８０ｂｐ
Ｎｄｅｒ／Ｈｉｎｄｌ［［制限フラグメント上にマツピ
ングし、フラグメントの両側の二重鎖合成リンカ−によ
りｐＧＥＭ３Ｚ（Ｐｒｏｍｅｇａ、 Ｍａｄｉｓｏｎ、
ＵＳ＾）の旧ｎｄｌ及びＰｓｔ１部位の間に挿入した
。ベクターｐＧＥＭ３ＺからのＨｉｎｄ［［部位とＬＴ
Ｒプロモーターを担持するＲＳＶフラグメントのＮｄｅ
１部位との間の結合は、一方の部位がＨｉｎｄｌ［、
他方の部位がＮｄｅ ｌに適合可能な付着末端を含む３
０ｂｒ＋リンカ−を用いて行った。しかしながら、連結
後、６塩基対認識配列の外側にあるヌクレオチドを故意
に改変したことにより、これらの制限部位はともに元に
は戻らなかった。これらの２つの部位の除去以外に、リ
ンカ−自体に存在する新たな制限部位（ＢａｍＨＩ ）
が対応する位置に形成された。ＬＴＲフラグメントから
の旧ｎｄＩＩ［部位をｐＧＥＭ３ＺからのＰｓｔ １部
位に連結する第２の２０ｂｐリンカ−を合成し、この場
合、どちらの末端の認識配列も破壊せず、ｐＧＥＭ３Ｚ
のポリリンカーに既に存在する制限部位（例えばＰｓｔ
ｌ 、Ｓａｌ １ 、 ＸｈｏＩ及びＢａｍＨＩ ）に
３つの適当な固有制限部位Ｂｇｌｌｌ、Ｘｈｏ ［及び
ＥｃｏＲＶを加える。得られるｐＧＥＭ３Ｚの誘導体ｐ
ＶＥｃＯ１は従って、ＬＴＲプロモーター配列とそのす
ぐ後に後続し、外来遺伝子の挿入に使用可能な７個の制
限部位とを有する６５０ｂｐ制限フラグメントを含む。
遺伝子の発現を誘くことが可能であった強力なプロモー
ターをラウス肉腫ウィルス（ＲＳＶ）の長い末端反復（
ＬＴＲ）配列から選択した。プロモーターをｐＲｓＶｃ
ａｔ（Ｇｏｒｍａｎ他、１９８２）からの５８０ｂｐ
Ｎｄｅｒ／Ｈｉｎｄｌ［［制限フラグメント上にマツピ
ングし、フラグメントの両側の二重鎖合成リンカ−によ
りｐＧＥＭ３Ｚ（Ｐｒｏｍｅｇａ、 Ｍａｄｉｓｏｎ、
ＵＳ＾）の旧ｎｄｌ及びＰｓｔ１部位の間に挿入した
。ベクターｐＧＥＭ３ＺからのＨｉｎｄ［［部位とＬＴ
Ｒプロモーターを担持するＲＳＶフラグメントのＮｄｅ
１部位との間の結合は、一方の部位がＨｉｎｄｌ［、
他方の部位がＮｄｅ ｌに適合可能な付着末端を含む３
０ｂｒ＋リンカ−を用いて行った。しかしながら、連結
後、６塩基対認識配列の外側にあるヌクレオチドを故意
に改変したことにより、これらの制限部位はともに元に
は戻らなかった。これらの２つの部位の除去以外に、リ
ンカ−自体に存在する新たな制限部位（ＢａｍＨＩ ）
が対応する位置に形成された。ＬＴＲフラグメントから
の旧ｎｄＩＩ［部位をｐＧＥＭ３ＺからのＰｓｔ １部
位に連結する第２の２０ｂｐリンカ−を合成し、この場
合、どちらの末端の認識配列も破壊せず、ｐＧＥＭ３Ｚ
のポリリンカーに既に存在する制限部位（例えばＰｓｔ
ｌ 、Ｓａｌ １ 、 ＸｈｏＩ及びＢａｍＨＩ ）に
３つの適当な固有制限部位Ｂｇｌｌｌ、Ｘｈｏ ［及び
ＥｃｏＲＶを加える。得られるｐＧＥＭ３Ｚの誘導体ｐ
ＶＥｃＯ１は従って、ＬＴＲプロモーター配列とそのす
ぐ後に後続し、外来遺伝子の挿入に使用可能な７個の制
限部位とを有する６５０ｂｐ制限フラグメントを含む。
６５０ｂｐフラグメントをそのいずれが一方の末端のＢ
ａｍＨＩ部位で制限処理し１．ＭＤＯ７からの１．２ｋ
ｂＨＶＴインサートに存在するただ１つのＢｇｌ１１部
位に組み込む。これらの２つの制限酵素により生成され
る付着末端は酵素攻撃に対して適合可能であるが、連結
後にはＢｇＩ］ｌ又はＢａｗｌ Ｔの元の認識配列のい
ずれにももはや戻らない。ＴＲ，に向く方向にＬＴＲを
担持する構築物の１つをｐＶＥｃＯ４と命名し、制限マ
ツピング（第２図）により調べた。この万能ＨＶＴ組換
ベクターの構造はＬＴＲプロモーターのすぐ下流に外来
遺伝子を挿入し、その後、１ｎｖｉｖｏ組換により完全
発現カセットをＨＶＴゲノムに組み込むことができる。
ａｍＨＩ部位で制限処理し１．ＭＤＯ７からの１．２ｋ
ｂＨＶＴインサートに存在するただ１つのＢｇｌ１１部
位に組み込む。これらの２つの制限酵素により生成され
る付着末端は酵素攻撃に対して適合可能であるが、連結
後にはＢｇＩ］ｌ又はＢａｗｌ Ｔの元の認識配列のい
ずれにももはや戻らない。ＴＲ，に向く方向にＬＴＲを
担持する構築物の１つをｐＶＥｃＯ４と命名し、制限マ
ツピング（第２図）により調べた。この万能ＨＶＴ組換
ベクターの構造はＬＴＲプロモーターのすぐ下流に外来
遺伝子を挿入し、その後、１ｎｖｉｖｏ組換により完全
発現カセットをＨＶＴゲノムに組み込むことができる。
ＬＴＲの下流の異なる制限部位の位置、特に酵素Ｂｇｌ
ＩＩ 、Ｘｈｏ Ｉ及びＥｃｏＲＶの位置は、均等な
多重遺伝子挿入を実施できるように設計される。ＤＰＩ
３１６８からのスパイク遺伝子を保有するｐｌＢ１５
からの３．８ｋｂのＳａｌ Ｉ ／Ｘｈｏ ｒ制限フラ
グメントをＬＴＲプロモーターの下流にあるｐＶＥＣＯ
４のただ１つのＸｈｏ Ｉ部位に挿入した。ＬＴＲプロ
モーターに対して適正な方位に挿入された遺伝子を有す
る候補の１つを制限マツピングにより分析し、適正な構
造を確認した。このプラスミドをｐＩＢ２７と命名し、
その後、ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）の同時トラン
スフェクションに使用した。
ＩＩ 、Ｘｈｏ Ｉ及びＥｃｏＲＶの位置は、均等な
多重遺伝子挿入を実施できるように設計される。ＤＰＩ
３１６８からのスパイク遺伝子を保有するｐｌＢ１５
からの３．８ｋｂのＳａｌ Ｉ ／Ｘｈｏ ｒ制限フラ
グメントをＬＴＲプロモーターの下流にあるｐＶＥＣＯ
４のただ１つのＸｈｏ Ｉ部位に挿入した。ＬＴＲプロ
モーターに対して適正な方位に挿入された遺伝子を有す
る候補の１つを制限マツピングにより分析し、適正な構
造を確認した。このプラスミドをｐＩＢ２７と命名し、
その後、ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）の同時トラン
スフェクションに使用した。
ＩＢＶ株ＤＰＩ ３１６８からのスパイクタンパク質を
特異的に認識する抗体プローブで感染細胞培養物を蛍光
抗体染色することにまり組換ＨＶＴウィルスを同定した
。限界希釈法又は単一プラーク単離のような常法により
、均質な組換ＨＶＴウィルス調製物を得た。
特異的に認識する抗体プローブで感染細胞培養物を蛍光
抗体染色することにまり組換ＨＶＴウィルスを同定した
。限界希釈法又は単一プラーク単離のような常法により
、均質な組換ＨＶＴウィルス調製物を得た。
下記の文献は明細書中に引用されたものである：１、
Ｂｅｎｔｏｎ、 Ｗ、Ｄ、、 ａｎｄ Ｄａｖｉｓ
、 Ｒ，Ｗ、 （１９７８）。
Ｂｅｎｔｏｎ、 Ｗ、Ｄ、、 ａｎｄ Ｄａｖｉｓ
、 Ｒ，Ｗ、 （１９７８）。
５ｃ１ｅｎｃｅ １９６゜
１８０゜
２゜
Ｂｅｒｍａｎ。
ｐ、ｗ。
ｅｔ
ａｌ。
（１９８３）。
５ｃｉｅｎｃｅ
２２２゜
５２４−５２７゜
３゜
Ｂｒ１ｎｓｔｅｒ。
Ｒ，Ｌ。
ｅｔ ａｌ。
（１９８２）。
Ｎａｔｕｒｅ ２９６゜
３９−４２゜
４、 Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ。
（１９７Ｂ＞ 。
Ｎａｔｕｒｅ ２７５゜
６１５゜
５、 Ｃｈｏｕ。
Ｐ、Ｙ、。
ｅｔ
ａｌ。
（１９８７） 。
Ａｄｖａｎｃｅｓ
工ｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ４７゜
４５゜
６゜
Ｃｏｗｅｎ。
Ｂ、Ｓ。
ｎｄ
Ｈｉｔｃｈｎｅｒ。
Ｓ、Ｂ、。
（１９７５） 。
Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １９゜５８３゜
７゜
Ｅｓ５ｅｒ。
Ｋ。
ｅｔ
ａｌ。
（１９８６） 。
Ｐｌａｓｍｉｄｅｓ
ｆ
跪社ｙｏｔｅｓ。
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ。
８、 Ｆｉｅｌｄｓ、 Ｄ、Ｂ、 （１９７３）
、 Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １７゜６５９
゜ ９、 Ｇｅ１ｂ、 Ｊ、、 ｅｔ ａｌ、 （
１９８１）、 Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ２５゜ ６５５゜ １０゜ Ｇｅ１ｂ。
、 Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １７゜６５９
゜ ９、 Ｇｅ１ｂ、 Ｊ、、 ｅｔ ａｌ、 （
１９８１）、 Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ２５゜ ６５５゜ １０゜ Ｇｅ１ｂ。
Ｊ。
ｎｄ
Ｃ１ｏｕｄ。
Ｓ、Ｓ。
（１９８３） 。
Ａｖｉａｎ
Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２７゜
６７９゜
１？、 Ｇｏｅｄｄｅｌ ｅｔ ａｌ、 （１９８０
）、 Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、 ８゜４０
５７゜ １２、 Ｇｏｒｍａｎ、 Ｌ、 ｅｔ ａｌ、
（１９Ｂ２）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
）、 Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、 ８゜４０
５７゜ １２、 Ｇｏｒｍａｎ、 Ｌ、 ｅｔ ａｌ、
（１９Ｂ２）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ７９． ６７
７７゜１３、 Ｈｅｎ１ｋｏｆｆ、 Ｓ、 （１９８
４）、 Ｇｅｎｅ ２８． ３５１゜１４、 Ｈｏｐ
ｐ、 Ｊ、Ｐ、、 ｅｔ ａｌ、 （１９８１
）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ。
７７゜１３、 Ｈｅｎ１ｋｏｆｆ、 Ｓ、 （１９８
４）、 Ｇｅｎｅ ２８． ３５１゜１４、 Ｈｏｐ
ｐ、 Ｊ、Ｐ、、 ｅｔ ａｌ、 （１９８１
）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ７Ｂ、 ３
Ｂ２４゜１５、 Ｈｕｙｎｈ、 Ｔ、Ｖ、、 ｅ
ｔ ａｌ、 （１９８５）、 ｉｎ ”ＤＮＡ
ｃｌｏｎｉｎｇ、 Ｖｏｌ、工”、 ｅｄ、 Ｄ、 Ｇ
ｌｏｖｅｒ、 ４９゜１６、工ｇａｒａｓｈｉ、 Ｔ
、 ｅｔ ａｌ、 （１９８７）、 Ｖｉｒｏｌ
ｏｇｙ １５７゜３５１゜ １７、 Ｍａｎｉａｔｉｓ、 Ｔ、、 ｅｔ ａｌ、
（１９８２）、 ｉｎ ”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃ
ｌｏｎｉｎｇ”、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ。
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ｔ ａｌ、 （１９８５）、 ｉｎ ”ＤＮＡ
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ｌｏｖｅｒ、 ４９゜１６、工ｇａｒａｓｈｉ、 Ｔ
、 ｅｔ ａｌ、 （１９８７）、 Ｖｉｒｏｌ
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（１９８２）、 ｉｎ ”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃ
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Ｕ、Ｓ、Ａ。
１Ｂ、 Ｍａｎｉａｔｉｓ、 Ｔ、、 ｅｔ ａｌ、
（１９８９）、 ｉｎ ”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏ
ｎｉｎｇ”、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ。
（１９８９）、 ｉｎ ”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏ
ｎｉｎｇ”、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ。
Ｕ、Ｓ、Ａ。
１９、 Ｎａｋａｍｕｒａ、 Ｋ、 ａｎｄ工ｎ
ｏｕｇｅ、 Ｍ、 （１９８２） 、 ＥＭＢＯ
Ｊ、１，７７１−７７５゜ ２０、 Ｒｅｍａｕｔ、 Ｅ、 ｅｔ ａｌ、 （１
９８３）、 Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ。
ｏｕｇｅ、 Ｍ、 （１９８２） 、 ＥＭＢＯ
Ｊ、１，７７１−７７５゜ ２０、 Ｒｅｍａｕｔ、 Ｅ、 ｅｔ ａｌ、 （１
９８３）、 Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ。
１１、 ４６７７−４６８８゜
２１ 、 Ｒｏｄｒｉｑｕｅｚ、 Ｒ，Ｌ、 ａｎｄ
Ｄｅｎｈａｒｄｔ、 Ｐ、Ｔ、 （１９８８） 。
Ｄｅｎｈａｒｄｔ、 Ｐ、Ｔ、 （１９８８） 。
Ｖｅｃｔｏｒｓ： Ａ ５ｕｒｖｅｙ ｏｆ ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｌｎｇ ｖｅｃｔｏｒｓａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｕｓｅｓ、Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ。
ｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｌｎｇ ｖｅｃｔｏｒｓａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｕｓｅｓ、Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ。
２２、 Ｓａｎｇｅｒ、 １．、 ｅｔ ａｌ
、 （１９７７）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ。
、 （１９７７）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ Ｕ、Ｓ、Ａ、 ７４． ５４６３
゜２３、 Ｓｉｎｇｅｒ−３ｄｍ、 Ｊ、 ｅｔ
ａｌ、 （１９８３）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ
。
゜２３、 Ｓｉｎｇｅｒ−３ｄｍ、 Ｊ、 ｅｔ
ａｌ、 （１９８３）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ
。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ−５，Ａ、 ８０． ８０
２−８０６゜２４、 ５ｌａｔｅｒ、 Ｒ，Ｊ、、
ｅｄ、、 （１９８６）、 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔｓ ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｃ
１１ｆｔｏｎ、 Ｕ、Ｓ、Ａ。
２−８０６゜２４、 ５ｌａｔｅｒ、 Ｒ，Ｊ、、
ｅｄ、、 （１９８６）、 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔｓ ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｃ
１１ｆｔｏｎ、 Ｕ、Ｓ、Ａ。
２５、 Ｓｍ１ｔｈ、 Ｇ、Ｅ、 ｅｔ ａｌ
、 （１９Ｂ３）、 Ｍｏ１．Ｃｅ１ｌ。
、 （１９Ｂ３）、 Ｍｏ１．Ｃｅ１ｌ。
Ｂｉｏｌ、３．２１５６−２１６５゜
２６、 Ｖｏｅｌｌｍｙ ｅｔ ａｌ、 （１９
８５）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
８５）、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
ＳＣ１，Ｕ、Ｓ、Ａ、８２，４９４９−４９５３゜［配
列表］ 配列番号（ＳＥｏ １０ Ｎｏ）： １配列の型
：対応するタンパク質と一緒のヌクレオチド 配列の長さ ＋ ３８２４塩基対：１１６８ア
ミノ酸鎖の数 トポロジー 分子の型 起源 生物基 直接の実験ソース 特性 配列 ：ソースは一重鎖である ：直線状 ゲノムＲＮ＾に対するｃＤＮ＾ ：怒染性気管支炎ウィルス ・ λｇ目ＯｃＤＮ＾ライブラリー ：スパイクタンパク質。
列表］ 配列番号（ＳＥｏ １０ Ｎｏ）： １配列の型
：対応するタンパク質と一緒のヌクレオチド 配列の長さ ＋ ３８２４塩基対：１１６８ア
ミノ酸鎖の数 トポロジー 分子の型 起源 生物基 直接の実験ソース 特性 配列 ：ソースは一重鎖である ：直線状 ゲノムＲＮ＾に対するｃＤＮ＾ ：怒染性気管支炎ウィルス ・ λｇ目ＯｃＤＮ＾ライブラリー ：スパイクタンパク質。
ｃｌｙτｙｒＳ＠ｒＬｙ＊＾ａｎＬｅｕＳ＠ｒＡｌａＡ
ｌａＳｌｌｒＶａ五ＡＡ１１止（Ｉｎ【ＩＬＩＩＩｒｒ
ｏｌ、＠ｕＤｅｃｕＡ７世ＬＧＧＣＴＡＣＡＣＴｋＡＧ
ＡＡＴ ＣＴＣＩＭ；Ｔ ＧＣＣＧＣＣτＧＡ （ｉ
Ａ にＣＣＡＴＣＡＣＴ ＣＣ＾ＣＣＡ ＣＴＡ Ａ（
Ｔ ＣＧＴＡＴＣ
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第１図はｐＭＤＯ７に存在するＸｈｏ ｌフラグメント
を含むＢｇ＋［部位も示すλＨＶＴＯ４の１７．５ｋｂ
インサートの制限酵素地図であり、第２図はｐＭＤＯ７
からの１．２ｋｂ Ｘｈｏ Ｉ ＨＶＴ７ ラグメント
ノタだ１ツ（７）ｈ１１１部位に挿入されたＬＴＲ−プ
ロモーターを示すｐＶＥＣＯ４の制限酵素地図である。
を含むＢｇ＋［部位も示すλＨＶＴＯ４の１７．５ｋｂ
インサートの制限酵素地図であり、第２図はｐＭＤＯ７
からの１．２ｋｂ Ｘｈｏ Ｉ ＨＶＴ７ ラグメント
ノタだ１ツ（７）ｈ１１１部位に挿入されたＬＴＲ−プ
ロモーターを示すｐＶＥＣＯ４の制限酵素地図である。
Claims (14)
- （１）Ａｒｋａｎｓａｓ血清型に属するＩＢＶ株のスパ
イクタンパク質ポリペプチド又はその抗原性フラグメン
トを実質的にコードする核酸配列。 - （２）該配列がＩＢＶからの株ＤＰＩ３１６８のスパイ
クタンパク質ポリペプチド又はその抗原性フラグメント
を実質的にコードすることを特徴とする請求項１に記載
の核酸配列。 - （３）該配列がＳＥＱＩＤＮｏ：１に示されるアミノ酸
配列を有するポリペプチド又はその誘導体又はその抗原
性フラグメントをコードすることを特徴とする請求項２
に記載の核酸配列。 - （４）該配列がＳＥＱＩＤＮｏ：１に示されるデオキシ
核酸配列又はその誘導体の少なくとも１つのフラグメン
トに対応することを特徴とする請求項３に記載の核酸配
列。 - （５）好ましくは発現制御配列に作動的に連結された請
求項１から４のいずれか一項に記載の核酸配列を含む組
換核酸分子。 - （６）請求項５に記載の組換核酸分子を含むベクターウ
ィルス。 - （７）請求項１から４のいずれか一項に記載の核酸配列
又は請求項５に記載の組換核酸分子又は請求項６に記載
のベクターウィルスを含む宿主細胞。 - （８）少なくとも一部が請求項１から４のいずれか一項
に記載の核酸配列によりコードされるアミノ酸配列を有
するポリペプチド。 - （９）ＳＥＱＩＤＮｏ：１に示されるアミノ酸配列の少
なくとも一部を含むポリペプチド又はその誘導体。 - （１０）請求項８又は９に記載のポリペプチドに対して
免疫反応性の抗体又は抗血清。 - （１１）請求項１０に記載の抗体又は抗血清を含む医薬
調製物。 - （１２）請求項１から４のいずれか一項に記載の核酸配
列、請求項５に記載の組換核酸分子、請求項６に記載の
ベクターウィルス、請求項７に記載の宿主細胞又は請求
項８もしくは９に記載のポリペプチドを含むことを特徴
とする、ＩＢＶ感染から家禽を保護するためのワクチン
。 - （１３）請求項７に記載の宿主細胞を培養し、その後、
ＩＢＶ含有材料を収集し、免疫活性を有する医薬調製物
に形成することを特徴とするＩＢＶワクチンの製造方法
。 - （１４）請求項８又は９に記載のポリペプチドを免疫活
性を有する医薬調製物に形成することを特徴とするＩＢ
Ｖワクチンの製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| US42479389A | 1989-10-20 | 1989-10-20 | |
| US424793 | 1989-10-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03228680A true JPH03228680A (ja) | 1991-10-09 |
Family
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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| JP (1) | JPH03228680A (ja) |
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| CA (1) | CA2028045A1 (ja) |
| DE (1) | DE69020848D1 (ja) |
| ES (1) | ES2077017T3 (ja) |
| HU (1) | HUT56136A (ja) |
| NZ (1) | NZ235742A (ja) |
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-
1990
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