JPH03227923A - ひと免疫不全ウイルス疾患処置剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ この発明は、ひと免疫不全ウィルス（ＨｕｍａｎＩ　ｍ
ｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　　Ｖ　１ｒｕｓ、以下
ＨＴ　Ｖと略称）が起す諸疾患の処置剤に関するもので
ある。

［従来の技術］ エイズ（後天性免疫不全症候群、ＡＩＤＳ、Ａｃｑｕｉ
ｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒ
ｏｍｅ）は、１９８０年代の初めに現れ、エイズの原因
ウィルスとして知られているＨ　Ｔ　Ｖ感染者の高い発
症率、感染経路の特殊性により大きな社会問題となって
いる。エイズは、Ｔ４リンパ球が攻撃を受けて免疫機構
が直接破壊されるウィルス性疾患である。免疫機構が破
壊される結果、カリニ肺炎やカンシダ症のような日和見
感染症、カボン肉腫のような悪性腫瘍、精神障害などが
現われ、−度エイズか発病すると有効な治療手段をとら
ない限り半年ないし１年のような短時日に死に至るので
、予後不良の疾患として恐れられている。したがって、
エイズに対する治療薬の開発は、現在きわめて重要かつ
急を要する課題である。

現在、ＨＩ　Ｖに対して抗ウィルス作用を有することが
知られている薬剤としては、アジドデミジン（ＡＺＴ：
３°−アジド−３°−デオキシチミジン）のような核酸
系抗ウィルス剤およびグリデルリチン（甘草成分）のよ
うな特殊な植物成分がある。

［発明が解決しようとする課題］ しかし、ＡＺＴのような核酸系抗ウィルス剤は骨髄抑制
等の毒性が強く、グリデルリチンのような植物成分は効
果が充分でないという欠点があった。そこで、充分な効
果を有し副作用が少ない抗ＨＩ　Ｖ剤の開発が望まれて
いた。

［課題を解決するだめの手段］ 発明者は、すでに医薬、香料等に使用されているクマリ
ン誘導体のような安全性の高い物質に着目し、抗ＨＩ　
Ｖ作用を有するものを探索した結果、強い抗ｒ−ｒ　ｒ
　ｖ作用を有するものを見出した。本発明はこのような
知見に基づくものである。

すなわち、本発明は、一般式 ［式中、Ｒ１、Ｒ２′、 Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、 水素、ヒドロキン、ハロゲン、スルホ、ホスホノ、カル
ボキン、　低級アルコキシ、単環性アリ ールオキシ ルボキシ、アミノ、モノもしくはジ低級アルギルアミノ
、低級アルカノイルおよび単環性アリールからなる群か
ら選ばれる基により置換されていてもよい低級アルキル
もしくは低級アルケニル、またはハロゲン、ヒドロキシ
、ヒドロキシ低級アルキル、カルボキシ、カルボキシ低
級アルキル、アミノ、モノもしくはジ低級アルギルアミ
ノおよび低級アルカノイルからなる群から選ばれる基に
より置換されていてもよい単環性アリール、または低級
アルキルもしくは低級アルカノイルにより置換されてい
てもよいアミノ基を表す］を有するクマリン誘導体、ま
たは生理学的に許容され加水分解され得るエステルもし
くは生理学的に許容される塩を有効成分とするひと免疫
不全ウィルス疾患処置剤を提供するものである。

［実施態様］ 低級の語は、特にことイっらない限り６個以下の炭素原
子を有する基を示すために用いる。

上式中、低級アルキルとしては、メチル、エヂル、プロ
ピル、イソプロピル、ブヂル、ペンチル、ヘキシル等の
炭素原子数１−６個のアルキル基が含まれる。

低級アルケニルとしては、ビニル、アリル、プロペニル
、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等の炭素原子数２
−６個の基が含まれる。

低級アルコキンとしては、上記の低級アルギルの１位に
一〇−が結合したものが含まれる。

低級アルカノイルは上記の低級アルギルの１位が酸化さ
れてーＣ〇−となったものを含む。

ヒドロキシ低級アルキルとしては、上記の低級アルキル
基の任意の位置に１個以」二で好ましくは３個以下のヒ
ドロギン基を有する基が含まれる。

カルボキシ低級アルキルとしては、」−記の低級アルキ
ル基の任意の位置に１個以」二で好ましくは３個未満の
カルボキシ基を有する基が含まれる。

モノもしくはジ低級アルキルアミノとしては、アミノ基
の水素の１個または２個が」二記の低級アルキルにより
置換されたものを含む。

ハロゲンとして（Ｊ、ふっ素、塩素、臭素およびよう素
が含まれる。

単環性アリールとしては、非置換フェニル、およびトリ
ル、キンリル、クメリルのような低級アルキル置換フェ
ニルが含まれる。

単環性アリールオキシは、」−記の単環性アリールのベ
ンゼン核に−０−が結合したものが含まれる。

好ましい化合物は、一般式において、Ｒ１ａＧが同一ま
たは異なって、それぞれ水素、メチル、ヒドロキシ、エ
トキシ、カルボキシ、カルボキンメチル、２−ジエチル
アミノ−エチル、１−フェニル−２−アセデル−エチル
または２−ｔ−ブチルアミノ−エチルであるクマリン誘
導体またはその生理学的に許容され、加水分解され得る
エステル、または生理学的に許容され得る塩である。

さらに好ましい化合物は、一般式において、Ｒ１が、水
素、メチル、エチル、ヒドロキシまたは２−ジエチルア
ミノ−エチル、 Ｒ２が、水素、メチル、エチル、またはヒドロキシ、 Ｒ３が、水素、メチル、エチル、またはヒ！・ロキシ、 Ｒ４が、水素、メチル、エチル、またはヒドロキノ、 Ｒ５が、水素、メチル、エチル、ヒドロキノ、工トギシ
またはカルベトキンメチル、 Ｒ６は、水素、メチル、エチル、ヒドロキシ、エトキン
、またはｔ−ブチルアミノ−２−ヒドロキシ−プロポキ
ンのものである。

上記一般式の化合物には公知化合物および新規化合物が
含まれる。これらは、公知方法または周知の合成方法の
応用により得られる。周知の合成力法の１−バ」バー；
）−ン反応によるもので、ザリチルアルデヒド誘導体を
例えば無水酢酸と酢酸ナトリウムで加熱する方法である
。また、Ｏ−クレゾール誘導体をリン酸エステルとした
後、塩素を作用させて、クレゾールのメチル基をジクロ
ロメチルとし、ついでこれに無水酢酸と酢酸すｌ・リウ
ムを反応させてクマリン誘導体を得ることができる。

同様に０−クレゾール誘導体のナトリウム塩にホスゲン
を作用させて０−クレゾールの炭酸ジエステルとし、つ
いて」二記の方法と同様に塩素を作用させてンクロロメ
チルとし、これを酢酸ナトリウムまたはカリウムと加熱
してもクマリン誘導体が得られる。

生理学的に許容される塩には酸との塩おにび塩基との塩
が含まれる。生理学的に許容される塩とは、投与量にお
いて著しい毒性を示さず、投与を困難にする物理的・化
学的性質をもたない塩を意味する。このような塩のうち
、酸との塩としては、塩酸、硫酸、りん酸等の無機酸（
鉱酸）との塩、並びに酢酸、酒石酸、くえん酸、こはく
酸、フマール酸等のカルボン酸およびメタンスルポン酸
、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸等のスルポン
酸のような有機酸との塩が含まれる。塩基との塩として
は、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カ
ルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、
アルミニウム塩、マンガン塩等の多価金属塩、トリメデ
ルアミン塩、トリエチルアミン塩、シクロヘキシルアミ
ン塩、エタノ−ルアミン塩、ジェタノールアミン塩、ｌ
・ロメタミン塩、モルホリン塩、ピペリジン塩、プロカ
イン塩、カフェイン塩等の有機アミン塩が含まれる。

カルボキシ基が多数存在する場合、そのうち任意の数が
塩になることかできる。

生理学的に許容され加水分解されるエステルとは、投与
量において著しい毒性を示さず、投与を困難にする物理
的・化学的性質をもたないエステルであって、生理学的
条件下、例えば動物体内の条件下で加水分解されて対応
する酸と生成量において著しい毒性を示さないアルコー
ルを生じ得るエステルを意味する。このようなエステル
としては低級アルギルエステル（例えばメチルエステル
、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエ
ステル、ｔ−ブチルエステル）、低級アルカノイルオキ
シ低級アルキルニスデル（例えばアセトキンメチルエス
テル、ピバロイルオキシメチルエステル）、１−（低級
アルコギシカルボニルオキシ）低級アルキルエステル（
例えばＩ−（エトキシカルボニルオキシ）エチルエステ
ル）、フェニルエステル、フタリジルエステル、５−イ
ンダニルエステル、２−（３−フタリジリデン）エチル
エステル、（５−メチル−２−オキソ−１，３−ノオギ
ソール４−イル）メチルエステルが含まれ、ヒドロギア
基のエステルとして、炭酸エステル（例えばメトギシカ
ルボニル、エトキンカルボニル、２２２−トリクロロエ
トキンカルボニル、アリルオキシカルボニル、イソブチ
ルオギシカルポニル、ｐニトロフェノキジブＪルポニル
、ベンノルオニ）−ンカルボニル）、低級アルカノイル
エステル（例えばポルミル、アセデル、ピパロイル、ス
クシニル）、置換アセチルエステル（例えばトリプルオ
ロ、クロロ、メトキシ、フェノキシアセデル）、単環性
アロイルエステル（例えばベンゾイル、ｐ−ニトロベン
ゾイル）および燐酸エステルが含まれる。カルボキン基
およびヒドロキシ基が多数存在する場合、そのうち任意
の数がエステルになり得る。

ＨＩ　Ｖは、リンパ線層関連ウィルス（Ｌｙｍｐｈａｄ
ｅｎｏｐａｔｈｙ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｄ　Ｖ　１ｒｕ
ｓ：　Ｌ　Ａ　Ｖ）、ひと′１゛リンパ細胞向性ウィル
スｍ　（Ｈｕｍａｎ　Ｔ　−Ｌ　ｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉ
ｃ　Ｖｉｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　ｍ：　Ｉ（ＴＬＶ−ＴＩＴ
）、エイズ関連レトロウィルス（Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓ　−Ａ
ｓ５ｏｃｉａｔｅｄ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｓ　：　Δ■
えＶ）等を包含し、培養細胞に対する感染性等の性質が
異なる変異株（たとえば、ｒ−ｒＴＶ−２）が存在する
が、これらをすべて包含するものとする。

ＨＩ　Ｖウィルス疾患としては、エイズ（ＡＩＤＳ）、
エイズ関連症候群（ＡＲＣ）、持続性−酸リンパ腺症（
ＰＣＩ、）、およびリンフォアデノパシー症候ＩＴ、　
（Ｌ△Ｓ）が含゛よれ、別の分類によると、Ｉ−ＩＩＶ
ｇ染による急性症状、全身性リンパ腺腫脹、持続性の発
熱、下痢、体重減少、痴呆、延髄障害、末梢神経障害、
カリニ肺炎、トキソプラズマ症、カンジダ症、ヘルペス
ウィルス感染症、カボジ肉腫、非ホジキン性リンパ腫、
ガン等が含まれる。

処置には、感染の予防、感染しているが発病しない場合
の発病の予防、疾患の悪化防止（維持）、症状の軽減、
無症状化、全快等のあらゆる予防および治療を包含する
ものとする。

」二記の処置を実施するためのクマリン誘導体ま＋ま たはその塩の投与量は、患者の年令、状態、目的とする
処置により異なるが、通常１０〜１０００ｍｇ、　この
ましくは５０〜５００ｍｇであり、これを１日２〜４回
投与するか、または持続性製剤として投与するのが好適
である。

投与に際しては、薬剤を経口投与、直腸内投Ｍ、外用、
注射等の投与方法に適した有機または無機の固体または
液体賦形剤のような医薬用担体と混合して、常用の医薬
製剤の形で投与することができる。

このような製剤には、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤
等の固体、および溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液体、半割
および軟膏が含まれる。

」−記担体としては、でんぷん、乳糖、ぶどう糖、しょ
糖、デキストリン、セルロースおよびその誘導体、パラ
フィ゛・、脂肪酸グリセリド、水、アルコール等が用い
られる。

また、必要に応じて、補佐薬、安定剤、湿潤剤、乳化剤
、滑沢剤、結合剤および他の常用添加剤を加えることか
こきる。

２ この発明によるクマリン誘導体を有効成分とする薬剤の
活性は、例えば下記のような２種類の試験方法により確
認することができる。

ＭＴ−４細胞を用いた抗ＨＩＶ活性の試験ＭＴ−４細胞
に１−１１　ＶのＬ　Ａ　Ｖ株を感染の多重度（ｍｕｌ
ｔｉｐｌｉｃｉｔｙ　　ｏｆ　　１ｎｆｅｃｔｉｏｎ：
ＭＯＩ）０．００１’ｒＣＩＤ５ｏ（５０％ｔｉｓｓｕ
ｅ　　ｃｕｌｔｕｒｅ　　ｉｎｆ’ｅｃｔｉｏｕｓ　　
ｄｏｓｅ：　５０％組組織培養感染度）／細胞で感染さ
せる。ウィルスを細胞に１時間吸着させた後、薬剤存在
下で４日間培養後培養上清中のＨＩＶ産生量をＭＴ−４
細胞を用いて測定し、５０％組織培養感染濃度１．”　
ＣＩ　Ｄ　６０を算定する。

の試験 ＰＢＭＣをＨＩ　Ｖ抗体陰性の健常人の抹消血からフィ
コルーコンレイ法により分離し、ＰＨＡ〜Ｐで３日間刺
激後ＨＩ　ＶをＭＯＴ　　Ｏ，００］ＴＣＴ　Ｄ　５ｏ
／細胞で感染させる。薬剤存在下で１週間培養後（但し
ＨＩ　Ｖ感染後４日めに培養上清１／２を除去し新たに
薬剤を添加した培養液を同量加える）、培養」１清中の
Ｉ（Ｔ　Ｖ産生量をＰＢＭＣを用いて測定し、ＴＣｒＤ
ｂｏを算定する。この方法はＭ’ｒ−４を用いた系より
もインビボの状態に近いと考えられる。

［実施例］ 以下、この発明を実施例により説明し、試験例によりこ
の発明の効果を明らかにする。

なお、各実施例中、有効成分とあるのは、この発明のク
マリン誘導体、そのエステルまたはその塩の任意の１種
を示す。

実施例１ 有効成分　　　　　　　　　　　　　　２０ｍｇ微結晶
性セルロース　　　　　　　　　２５ｍｇヒドロキソプ
ロピルセルロース　　　　　Ｉｍｇカルボキシメヂメチ
ルロースカルシウム　５ｍｇステアリン酸マグネシウム
　　　　　　　２ｍｇ乳糖　　　　適量を加えて全１５
０ｍｇとする。

実施例２ 有効成分　　　　　　　　　　　　　５０ｍｇ生理食塩
水　適量を加えて全１０ｍ１とする。

試験例１ この発明の化合物の１つである４−ヒドロギンクマリン
を用い、次の試験を行った。

１、ＭＴ−４（２ｘｌ　０５細胞／ｍρ）２６ｘ０．を
遠心（ＩＯｏｏｒｐｍ、５分）分離器にかけ上清を取り
除く。

２．８ＴＶ（Ｉ　Ｏ”ＴＣＴＩ）ｒ、ｏ／ｚｃ）Ｉ　Ｏ
，４ｍＱを添加する（ＭＯＩ　　Ｏ，００１’Ｉ’ＣＩ
Ｄ５０／細胞）。

３．３７°Ｃで１時間静置する（ＨＩＶを細胞に吸着さ
せる）。

４、遠心分離（］　ＯＯＯｒｐｍ、　５分）シ」−清を
取り除く（未吸着のＨｒ　Ｖを取り除く）。

５．１０％牛脂児血〆ｉ’Ｊ（ｆｅＬａｌ　　ｃａｌｆ
’　　ｓｅｒｕｍ：Ｆ　Ｃ８）添加ＲＰＭＩ　］　６４
０を２３．４ａ１２加える。

６２４穴マイクロプレートに所望濃度より１０倍高い濃
度の薬剤液を０１７Ｉσ／穴で加える（所望５ 濃度力月００１ｔ’ｉ／ｍＱならば、Ｉ＊ｇ／ｍ１２を
０．　１叶／穴で加える）。

７５を０．９靜／穴で６に添加する。

８３７℃で４日間培養する。

９、注射器で培養」１清を吸いとり、フィルター（０４
５ｕｍ）で濾過する（これを培養」１清とする）、。

１０、培養」１清中のＨＩ　Ｖ産生量を測定する。

Ｂ）Ｈｒｖ産生量の測定 ■、培養」１清を１０％ＦＣ８！加Ｒ１）ＭＩＩ６／１
０にてｌＯ倍階段希釈する。

２、マイクロプレー１−（９６穴）にＭＴ−４細胞を２
×１０５細胞１０１ｍρ／穴になる様に添加する。

３．１を０．ｌｘρ／穴になる様に２に添加する（１希
釈濃度につき４穴用意する）。

４．５日めまで細胞変性効果（ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ　
ｅｆｆｅｃｔＣｌ）Ｅ）を観察し、ＴＣＴＤ５０を算定
する（ＨＩＶが細胞に感染すると細胞の形態が変化し、
顕微鏡下で観察すると未感染の細胞と識別できる）。

Ｃ）　Ｔ　ＣＴ　Ｄ　５０の算定方法 ＴＣＩＤ５．は５０％の試験管にＣＰＥを示すつ６ イルス希釈度をリードームエンヂ（Ｒｅｅｄ　−Ｍｕｅ
ｎｃｌｌ）法で出す。

Ｄ）結果 結果を第１表に示す。表中の数値は１ＣＩＤ、。

であり、対照は薬剤無添加である。４−ヒドロギンクマ
リンに抗エイズウイルス作用が見られる。

試験例２ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　　ｃｅｌｌｓ）を用いた抗Ｈ
Ｉ　Ｖ活性の試験 Ａ）薬剤存在下でのＨＩ　Ｖの増殖 １．８ＴＶ抗体陰性健常人の抹消血からフィコルコンレ
イ（Ｐ　１ｃｏｌ　Ｉ−Ｃｏｎｒａｙ）法によりＰＢＭ
Ｃを分離する。

２、ＰＨＡ−Ｐで３日間刺激する（刺激することにより
、Ｔ−Ｉ　Ｉ　Ｖに対する感受性が高まる）。

３、ＰＢＭＣを遠心分離（］　０００ｒｐｍ、５分）し
、」１清を除去する。

４、Ｉ−［ＶをＭＯＩ　　Ｏ，００１ＴｃＩＤ５ｏ／細
胞になる様に添加する（例）ＰＢＭＣ（２Ｘ　Ｉ　０６
細胞／ｘ（り３０７１ρ分すなわち、細胞数にして６Ｘ
１０７細胞にＨＩ　Ｖ（１０”−’Ｔ　ＣＩ　Ｄｓｏ／
ｆｆ（２）　Ｉ　２１１１２を添加する。

５．２４穴マイクロプレートに所望濃度より１０倍高い
濃度の薬剤液をＯ，ｌｘρ／穴で加える（所望濃度が＋
　００　μｇ／ｒｔｒＱならば、Ｉｍｇ／ｌｒｔρを０
　、　ｌ　ｍＯ／穴で加える）。

６４を０，９好／穴で５に添加する。

７．１週間培養する。但し、４日めに培養上清を５００
μρ取り除き新たに薬剤を溶解した培養液を５００μρ
添加する。この時には、ＴＬ−２（０，＋２５Ｕ／ｘ０
．）及び抗ひとインターフェロン−α（ａｎｔｉｈｕｍ
ａｎ　　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　−α）（４６Ｕ／ｚｆ
ｆ）が添加しである。ｒＬ−２はＰＢＭＣがインビトロ
で活性化された状態で培養できる様に、抗ひとインター
フェロン−αはＰＢＭＣが分泌するインターフェロンに
よりＨＩ　Ｖ増殖が阻害されないように添加する。

８、注射器で培養」１清を吸い取り、フィルター（０゜
４．５日ｍ）で濾過する（これを培養上清とする）。

９、培養上清中のＨＩ　Ｖ産生量を測定する。

Ｂ）Ｉ−１１Ｖ産生りよの測定 １２０％ＦＣ３添加ＲＩ）Ｍ１１６４０にて培養−４−
清を１０倍階段希釈する。

２、Ａ）の時と同様に刺激したＰＢＭＣを２ＸＩＯ５細
胞１５０μρ／穴になる様にマイクロプレート（９６穴
）に添加する。

３１を５０μρ／穴になる様に２に添加する。

４６４日めに更に刺激したＰＢＭＣを２ｘｌＯ５細胞／
１００μρ／穴で添加する。

５１週間めまてＣＰＥを観察し、ＴＣＩＤｆｉＱを算定
する。

この時もＴ　Ｌ−２及び抗ひとインターフェロンαがＡ
）と同様に添加しである。

Ｄ）結果 結果を第２表に示す。表中の数値は′Ｊ″ＣＩＮ）５゜
を示す。対照は薬剤無添加のものである。４−ヒドロキ
シクマリンはＭＴ−４、およびＰＢＭＣのいずれの試験
においても抗エイズウイルス作用を９ 有することが判明した。

第１表 ＭＴ−４細胞 薬剤濃度（μｇ／ｍの 第２表 抹消血単核球（ＰＢＭＣ） 薬剤 ４−ヒドロキソクマリン 対照 薬剤濃度（μｇ／ｍ（り ０．１　　１．０　１０．０　　］、ＯＯ，０１０’、
。ＩＯ’、’　　１０２・５　溶けず０４０

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾４、Ｒ＾５およ
   びＲ＾６は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、スルホ、ホ
   スホノ、カルボキシ、低級アルコキシ、単環性アリール
   オキシ、またはハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、ア
   ミノ、モノもしくはジ低級アルキルアミノ、低級アルカ
   ノイルおよび単環性アリールからなる群から選ばれる基
   により置換されていてもよい低級アルキルもしくは低級
   アルケニル、またはハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシ
   低級アルキル、カルボキシ、カルボキシ低級アルキル、
   アミノ、モノもしくはジ低級アルキルアミノおよび低級
   アルカノイルからなる群から選ばれる基により置換され
   ていてもよい単環性アリール、または低級アルキルもし
   くは低級アルカノイルにより置換されていてもよいアミ
   ノ基を表す］を有するクマリン誘導体、または生理学的
   に許容され加水分解され得るエステルもしくは生理学的
   に許容される塩を有効成分とする、ひと免疫不全ウィル
   ス疾患処置剤。
2. （２）疾患がエイズ（ＡＩＤＳ）、エイズ関連症候群（
   ＡＲＣ）、持続性一般リンパ腺症（ＰＧＬ）、またはリ
   ンフォアデノパシー症候群（ＬＡＳ）である、請求項１
   記載の処置剤。