JPH03224477A - 菌類選択培地 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、正常な場合は無菌である体液がらの酵母、糸
状菌および他の臨床的に重要な菌類の採取および検出に
関する。より詳細には本発明は、臨床的に重要な菌類の
採取および検出に用いる液体培地に関する。

（従来の技術および課題） ！！！ＩＭ−残＾祷山ムＪ姦情瞳吻−血／Ｌ＋　　！＋
ｍ卿軸植、化学療法、自己免疫病、および後天性免疫欠
損症の患者）において次第に重要になっている。

残念ながら、臨床的に重要な広範な一群の菌類の速やか
な増殖および検出に適切でありがっ経済的である単一培
地は存在しない。権威ある手引きに下記の記載がある：
／・大部分の血清学的試験（クリプトコックス抗原試験
を除く）は一般に免疫障害患者における菌類感染の診断
を行うのには有用でない。・・・いずれの単一培地も単
独では病原性菌類すべてを採取するのに適切でないので
、適宜な一組の培地を使用すべきである。ｌ／ロバーツ
（Ｒｏｂｅｒｔｓ、　Ｇ、　Ｄ、　）ら、〃臨床検体に
おける菌類の検出および採取、／／Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ
　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ／／、
４版、レネッテ（Ｌｅｎｅｔｔｅ、　Ｅ、Ｈ，）ら編（
１９８５）。

臨床検体からの菌類の採取用として推奨されている培地
は下記のものである（５１ｏ頁に推奨）ニブレインハー
トインフュージョン（ＢＨＩ）寒天、抑制型糸状菌用寒
天、サディ（Ｓａｄｈｉ）寒天、酵母エキスホスフェー
ト寒天、５−１０％ヒツジ血液マイコバイオティック（
Ｍｙｃｏｂｉｏｔｉｃ）寒天、マイコセル（Ｍｙｃｏｓ
ｅｌ）寒天）。これらはすべて固形（寒天含有）培地で
ある。これらの培地の組成は、Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｃ
１１ｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　１１１
章（培地）に見られる。菌類の増殖に用いられる他の培
地には下記のものが含まれる：サブロー寒天、サブロー
・デキストロース寒天、および麦芽エキス寒天。

菌類用として記載されている他の多くの培地はほとんど
すべて特定の一群の菌類のみを増殖させるように特殊化
されているか、または特定の菌類を同定しうるそれらの
能力のために用いられる。

従ってこれらは、可能な限り広い範囲の異なる種類の菌
類の増殖を支持するための上記培地とは異なる。

菌類の採取、培養、増殖および同定用として調製された
培地は実質的にすべて固形または２相である。アイソレ
ーター（ｌ５ｏｌａｔｏｒ、商標）システム（デュポン
、プラウエア州つィルミントン）は固形培地を使用する
。このシステムを用いる場合、試料を遠心管に移して遠
心分離しなければならない。次いで小容量の遠心された
材料を多数の固形培地上で平板培養する。セプティチェ
ク（Ｓｅｐｔｉ−Ｃｈｅｋ、商標）システム（ロツシュ
・ダイアグノスティックス、ニュージャー州ナツトレイ
）は２相系であり、パドル上に固形麦芽寒天が乗せられ
、これがブロス培地を入れたびんに、ブロスへの試料接
種後に固定されなければならない。麦芽は菌類に適して
いるが、選択的ではない。他の種類の２相系は一般にカ
スタネダ（Ｃａｓｔａｎｅｄａ）ボトルとして知られて
いる。これらの系は多数の業者から得られ、液体および
固体の両培地を一緒に１本のボトル内に含む。２相系は
液相に十分に通気することができないという点で重大な
欠点をもつ。

菌類の増殖および検出が可能な、液体のみの血液培地は
得られるが、これらは細菌および菌類両者の増殖および
採取を意図したものである。細菌が存在する場合、細菌
の急速な増殖はより緩徐に増殖する菌類を隠蔽する可能
性がある。

自動血液培養システム、たとえばバクチック（Ｂａｃｔ
ｅｃ、登録商標）システム（ベクトン・ディッキンソン
・ディアグノスティック・インスツルメント・システム
ズ、マリーランド州タウソン）は液体試料を菌類の存在
につきスクリーニングするのに好適である。各バクチッ
ク・システムは、培地および試料を入れた血液培養ボト
ルをインキユベートし、そして微生物の存在を示す二酸
化炭素の増加を定期的に調べる計測器からなる。バクチ
ック４６０（登録商標）システムはＣ１４富化栄養素を
含む培地を用いる。これらの栄養素が消費された結果、
ボトル内の培地の水準より上方の上部空間にガス状Ｃｌ
４０□が生成する。計測器は上部空間内のガスを定期的
にサンプリングし、放射能の増加を検出する。バクチッ
クＮＲ−６６０（登録商標）およびバクチックＮＲ−７
３０（、登録商標）は非放射測定用培地を用いる。これ
らのシステムにおいては、ＣＯ２濃度の増大に伴う近赤
外線の吸収の増大を測定することにより微生物の増殖が
検知される。

バクチック・システムに用いられる培地は菌類の増殖を
支持するが、菌類の増殖および検出に必ずしも好適では
ない。それらは主として細菌の増殖用として意図されて
いるのて、菌類の増殖は最適ではない。菌類の存在が、
存在する細菌の過剰増殖により隠蔽される可能性もある
。最後に試料中の血液の代謝により、２つの理由から菌
類の存在が隠蔽される可能性がある。第１に血球自身が
栄養素を消費してバックグラウンド水準のＣＯ２増加を
生じる。このバックグラウンドノイズははるかに速やか
に増殖する細菌を検出する場合は許容されるが、比較的
緩徐に増殖する菌類を検出する際には許容されない。真
菌血症（ｆｕｎｇｅｍｉａ）をスクリーニングする際に
望まれる大量の血液試料（たとえば１０ｍ１）を用いる
場合は、これはいっそう問題となる。第２に血液は菌類
の増殖を抑制する。

従って広範な一連の臨床的に重要な菌類が速やかにかつ
選択的に増殖する液体培地が求められている。

（課題を解決するための手段） 本発明は、菌類以外の微生物の増殖を抑制した状態で種
々の菌類の増殖を促進すべく意図された液体培地に関す
るものである。普通に無菌状態の体液（ｎｏｒｍａｌｌ
ｙ　５ｔｅｒｉｌｅ　ｂｏｄｙ　ｆｌｕｉｄ）（たとえ
ば胸水、滑液、髄液、腹水など）または好ましくは血液
の試料を無菌的に培地に添加し、次いでバイアルを３０
−３５℃で撹拌下に数週間までの期間インキュベートす
る。培地を入れたバイアル内に生存可能な菌類が存在す
ることは、視覚的にバイアルを濁りの増加、培地の色の
変化、隆起した隔膜（ｓｅｐｔａ）その他の菌類増殖の
兆候につき検査することにより、または少量の試料を無
菌的に取り出して鏡検もしくは適切な固形培地での二次
培養を行うことにより示される。

培地中での菌類の増殖は、好ましくは自動血液培養シス
テム、たとえばバクチック（登録商標）システムにより
検出される。バクチックＮＲ６６０およびＮＲ７３０に
用いるためには培地を５０ｍ１のバイアルに、特定の既
知濃度の二酸化炭素を富化したガスが液体の上方に含ま
れる状態で（上部空間ガス）装填する。次いで二酸化炭
素の増加量を測定することにより菌類の増殖を検出しう
る。

本発明の培地中で増殖しうる菌類は１１酵母／ｌから二
形性または繊維性形態にまで及ぶ。代表例にはカンジダ
（Ｃａｎｄｉｄａ）、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓ
ｉｓ）、クリプトコックス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
）、ジオトリクム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）、酵母菌（
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　）、アスペルギルス（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、およびヒストプラズマ（Ｈｉ
ｓｔｏｐｌａｓｍａ）属の各種が含まれる。

本発明の液体培地は窒素性栄養素、グルコース、ショ糖
およびマルトースよりなる群から選ばれる１種または２
種以上の糖類、血液凝固防止剤、第二または第一鉄イオ
ン源、ならびに菌類の増殖を抑制することなく細菌の増
殖を抑制する有効量の抗菌薬１種または２種以上を含む
。本発明の培地は、糖類と窒素性栄養素の比率が公称１
：２にまで増大しており、菌類の増殖を刺激する化学物
質（ミオイノシトールおよびクエン酸第−鉄アンモニウ
ム）を含有し、かつ細菌の増殖を抑制する抗菌薬を含有
するという点で、通常の培地と異なる。

この新規な組み合わせが下記の２つの主要な効果を生じ
る： １、液体培地における菌類の増殖に最適な条件、および ２、菌類以外の微生物の抑制。

窒素性栄養素は細菌用培地にしばしば用いられるもの、
たとえばカゼインの膵液消化物、大豆粉のパパイン消化
物、ゼラチンの膵液消化物、子ウシ脳浸出物、ウシ心臓
浸出物、酵母自己溶解物エキス、ビーフエキス、麦芽エ
キス、動物組織エキスおよびポリペプトンから選ばれる
。好ましくは窒素性栄養素は大豆−カゼイン消化ブロス
、プレインハートインフュージョンブロス、および酵母
自己溶解物エキスからなる。凝固防止剤はナトリウムポ
リアネトールスルホネート、アミロ硫酸ナトリウム、ク
エン酸ナトリウム、およびエチレンジアミン四酢酸より
なる群から選ばれる。好ましくは凝固防止剤はナトリウ
ムポリアネトールスルホネートである。これはその凝固
防止剤としての機能のほかに、菌類に対する血液の抗菌
作用を低下させるのに役立つからである。

上記培地において菌類以外の微生物、より詳細には細菌
の増殖を抑制する成分は抗菌薬である。

一般に菌類に対して有害でなく、培地中で、または数カ
月以上の期間安定である抗菌薬が用いられる。存在する
抗菌薬の数も１種から５種以上にまで変えられる。選択
および存在数は可能な限り広範な細菌の増殖を抑制する
効力に基づく。好ましくはクロラムフェニコールとトブ
ラマイシンの混合物が用いられる。これら２種の抗菌薬
は、極めて多数のグラム陰性およびグラム陽性双方の細
菌の増殖を抑制しうるそれらの併用効果のため選ばれた
。

好ましい培地には溶血薬が含まれる。溶血薬の存在によ
って３つの効果が得られる。それは血液自体の成分から
のＣＯ２生成を排除し、白血球を溶解し、これにより包
み込まれていた菌類がある場合にはこれを放出させ、か
つ多くの菌類の増殖に対して血液がもつ抑制作用を低下
させる。

上記のうち第１の効果がもつ価値は、いわゆる／／バッ
クグラウンド／／のＣＯ２、すなわち菌類以外の供給源
から生成するＣＯ２を低下させることである。５ｍ１以
上の容量の血液が存在する場合、血球が溶解されない限
り高いバックグラウンドが生じるであろう。血液バック
グラウンドを排除または低下させることにより、バクチ
ック（登録商標）システムに培地を用いる場合、より好
ましいシグナル対ノイズ条件が得られ、従って計測器は
より高い精度および速度で菌類増殖の有無を検出するこ
とができる。

好ましい溶解剤はサポニンである。あるいは他の溶解剤
、たとえば洗剤、界面活性剤および酵素も用いられる。

代表例にはトライトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００，各
種のツイーン（Ｔｗｅｅｎ）およびブライシ（Ｂｒｉｊ
）系界面活性剤、ならびに蛋白質溶解酵素ロサイム（Ｒ
ｈｏｚｙｍｅ）が含まれる。

培地調製技術の分野では、成分の濃度は慣例としてｗ／
ｖ％（１００ｍ　１当たりのｇ数）で表される。以下の
説明および特許請求の範囲においては、この取り決めを
採用する。本発明の菌類培地は約１．０−約３．０％（
ｗ／ｖ）の窒素性栄養素、約０．５−約１．０％（ｗ／
　ｖ　）の、グルコース、ショ糖およびマルトースより
なる群から選ばれる１種または２種以上の糖類、約０．
０１−約０．１２５％（ｗ／ｖ）の血液凝固防止剤、菌
類の増殖を刺激するのに有効な量の第二または第一鉄イ
オン源、ならびに菌類の増殖を抑制することなく細菌の
増殖を抑制する有効量の抗菌薬１種または２種以上を含
む。窒素性栄養素と糖類の比率は約１：１−約６：１、
好ましくは２　＋１−６１の範囲にある。

窒素性栄養素は１．５％（ｗ／ｖ）を構成することが好
都合であり、カゼインの膵液消化物、大豆粉のパパイン
消化物、ゼラチンの膵液消化物、子ウシ脳浸出物、ウシ
心臓浸出物、酵母自己溶解物エキス、ビーフエキス、麦
芽エキス、動物組織エキスおよびポリペプトンよりなる
群から選ばれる。

好ましくは窒素性栄養素は０．３−０．７％（ｗ／ｖ）
の大豆カゼイン消化ブロス、０．８−１゜２％（ｗ／ｖ
）のプレインハートインフュージョンブロス、および０
．０２−０．６％（ｗ／　ｖ　）の酵母自己溶解物エキ
スを含む。極めて好ましくは窒素性栄養素は０．５％（
ｗ／ｖ）の大豆カゼイン消化ブロス、１．０％（ｗ／ｖ
）のプレインハートインフュージョンブロス、および０
，０３５％（ｗ／ｖ）の酵毒自己溶解物エキスを含む。

これらの成分はそれぞれバクトン・ディッキンソン・マ
イクロバイオロジー・システムズから得られる。

好ましい糖成分はグルコースおよびショ糖の混合物であ
る。好ましくは０．５−１．０％（ｗ／Ｖ）の、グルコ
ースおよびショ糖の混合物が用いられる。好ましい混合
物は０．４−０．８％（Ｗ／ｖ）のショ糖および０．０
５−０．３％（ｗ／Ｖ）のグルコースを含む。極めて好
ましい配合物においては０．６％（Ｗ／　Ｖ　）のショ
糖および０゜１％（ｗ／ｖ）のグルコースが用いられる
。

好ましい凝固防止剤はナトリウムポリアネトールスルホ
ネートである。好ましくは菌類培地は０゜０１−０．１
２５％（ｗ／ｖ）の凝固防止剤を含有する。極めて好ま
しくは０．０２５％（Ｗ　／　Ｖ　）のナトリウムポリ
アネトールスルホネートが用いられる。ナトリウムポリ
アネトールスルホネートはバイオロジー（イリノイ州ス
コーキー）から市販されている。他の適切な凝固防止剤
にはアミロ硫酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムおよび
エチレンジアミン四酢酸が含まれる。

菌類の増殖を促進するために鉄が含有される。

鉄は第二鉄または第一鉄イオンとして存在する。

０．０００１％（ｗ／ｖ）の看の硫酸第二鉄アンモニウ
ムが好ましい。あるいは他のいずれかの有機または無機
の第二鉄または第一鉄イオン源を用いることができる。

たとえば硫酸第二鉄アンモニウム、塩化第二鉄および硫
酸第一鉄が用いられる。

ミオイノシトールは特定の菌類、特にクリプトコックス
・ネオホルマンス（Ｃ，ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）の増殖
を促進するポリオール系アルコールである。これは好ま
しくは０．０５％（ｗ／ｖ）の量で含有される。

抗生物質が細菌の増殖を抑制するために存在する。クロ
ラムフェニコールおよびトブラマイシンが好ましいが、
菌類を抑制しない他の抗生物質も用いられる。たとえば
シプロフロキシシン、ノルフロキシシンまたはオフロキ
サシンをクロラムフェニコールの代わりに用い、ゲンタ
マイシンまたはアミカシンをトブラマイシンの代わりに
用いることができる。あるいは以上のいずれかの混合物
を用いてもよい。

培地の１形態には血球を溶解する薬剤、が含有される。

適切な溶解剤にはサポニン、トライトンＸ−１００、な
らびに各種のツイーンおよびブライジ系界面活性剤が含
まれる。好ましくはサポニンが０．１−０．４％（ｗ／
ｖ）の量で用いられる。

より好ましくはサポニンは０．２４％（ｗ／ｖ）の量で
存在する。

本発明の特に好ましい形態の培地はバクチック（登録商
標）自動血液培養システム用として適したものである。

培地を放射測定型バクチックシステムに用いたい場合、
米国特許第３．８５８．０４５号明細書により教示され
るように１４Ｃ源が含有される。

この培地を非放射測定用ハクチックシステムに用いる場
合、ボトル内の培地の上方空間に、ボトル内Ｃ０２平衡
濃度が１．　０−３．　５％となるようにＣＯ２および
空気の混合物を充填する。

この培地が５ｍｌを越えない通常の血液試料と共に用い
られる場合、５０ｍ１のボトルに３０ｍ１の培地を装填
する。この菌類培地が血液溶解剤を含有する場合、これ
はより多量の、１０ｍ１に及ぶ血液試料を検査するため
に用いることができる。比較的多量の血液試料について
菌類の存在を検出する時間はミ血液溶解剤が存在する場
合は著しく短縮される。多量の血液試料を検査する場合
、５０ｍ１のボトルに２５ｍ１の培地を装入すべきであ
る。

菌類培地およびそれが菌類の存在を迅速に検出しうるこ
とは、下記の実施例からさらに理解されるが、これらは
本発明を限定するものではない。

実施例１ この例においては、異なる１４株の菌類の増殖および検
出を数種の血液培地において比較する。

各側において培地を入れたボトルにヒト保存血試料およ
び既知の菌類を接種した。培地は標準バクチック（登録
商標）ＮＲ６Ａ　（非放射測定用、バクトン・ディッキ
ンソン・ダイアグノスティック・インスツルメント・シ
ステムズより入手）および本発明の異なる２形態の菌類
培地であった。各側において菌類培地は下記のものを含
有していた二０．５％（ｗ／ｖ）大豆−カゼイン消化ブ
ロス１．０％（ｗ／ｖ）プレインハートインフュージョ
ンブロス ０．０３５％（ｗ／ｖ）酵母自己溶解物エキス０．６％
（ｗ／ｖ）ショ糖 ０．１％（ｗ／ｖ）グルコース ０．０５％（ｗ／ｖ）ミオイノシトール０．０２５％（
ｗ／ｖ）ナトリウムポリアネトールスルホネート ０．０００１％（ｗ／ｖ）クエン酸第二鉄アンモニウム ０．００５％（ｗ／　ｖ　）クロラムフェニコールおよ
び ０．００１％（ｗ／ｖ）ｈブラマイノン第１組の菌類培
地ボトル（第１表にＦＭと表示）には３０ｍ１の培地お
よび血液試料サイズ４ｍｌを入れた。この菌類培地は溶
解剤を含有しなかった。第２組の菌類培地ボトル（第１
表にＨＢＶ−ＦＭと表示）には２５ｍ１の培地を入れた
。これらのボトルを４ｍｌおよび１０ｍ１の血液試料に
つき検査した。第２組のボトルに用いた菌類培地は０．
２４％（ｗ／ｖ）のサポニンを含有していた。

菌類接種サイズはすべての例においてバイアル当たり９
５ｃ、ｆ、ｕ、であった。すべてのバイアルを３５±１
℃でインキュベートし、インキュベーションの最初の４
８時間は２８０±２０ｒｐｍのオービタルシェーカー上
で撹拌した。バイアルをバクチック６６０計測器により
最初の２日間は１日２回、その後は１日１回、合計７日
間検査した。

増殖値（ＧＶ）が２０を越えた場合、または前回の読み
より１０以上増加した場合、バイアルを計測器プラスと
みなした。

第１表においてＴＴＤ＝バクチック計測器における検出
までの期間（日）、Ｇｖ＝バイアルが計測器プラスとな
った場合の増殖値（プラスの時点でのＧＶ）　、ＮＤ＝
検出されず（バクチック６６０におけるＧＶによる）、
十＝二次培養プラス（バクチック計測器においては増殖
が検出されなかったが、寒天平板での二次培養はバイア
ルが生存菌類を含むことを示した）。示した数値はすべ
て二重試験バイアルの平均である。

第１表 微生物 培地 血液 容量 ＴＴＤ ＧＶ カンジダ・アルビカンス＃６１ （Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ） ６Ａ　　　　４１ｍ１　　１．０　　２５ＦＭ　　　　
ｈｌ　　　１．０　　７１０ＢＹ−ＦＭ　　　　　　４
ｍｌ　　　　１．０　　　２９Ｆｉｌ　　　　４ｍｌ　
　　１．０　１６８ＨＢＶ−ＦＭ　　　　４＋＋１　　
１．０　１１１ＦＭ　　　　４ｍ１　　１．０　１７２
ＨＢＶ−ＦＭ　　　　４ｍｌ　　　１．０　　７２ＦＭ
　　　　４ｍｌ　　　１．０　　７１ＨＢＶ−ＦＭ　　
　　４ｍｌ　　　１．０　　３１（Ｃ，ｔｒｏｐｉｃａ
ｌｉｓ） ＦＭ　　　　４ｍｌ　　　Ｏ，８２２３ＨＢＶ−ＦＭ　
　　　４ｍｌ　　　０．８　　６８ＦＭ　　　　４ｍｌ
　　　１．０　１１２ＨＢＶ−ＦＭ　　　　４ｍｌ　　
　１．０　　６６（Ｃ０ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ） ＦＭ　　　　４ｍｌ　　　１．８　　４３ＨＢＶ−ＦＭ
　　　　４ｍｌ　　　１．８　１６０ＢＢＹ−ＦＭ　　
　１０ｍ１　　１．８　１１５微生物 培地 血液 容量 ＴＴＤ ＧＶ カンジダ・ルゴサ （Ｃ，ｒｕｇｏｓａ） ６Ａ　　　　４ｍｌ　　　ＮＤ　　　＋ＦＭ　　　　４
ｍｌ　　　３．２　　２７ＨＢＶ−Ｆｌｌ　　　　４ｍ
ｌ　　　３．０　　２２（Ｔ、　ｇｌａｂｒａｔａ） ＦＭ　　　　４ｍｌ　　　１．８２５ ＨＢＶ−ＦＭ　　　　４ｍｌ　　　１．８　１８５ＦＭ
　　　　４ｍｌ　　　１．８　１３０ＨＢＶ−ＦＭ　　
　　４ｍｌ　　　１．０３６（Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ） ＦＭ　　　　４ｍｌ　　　１．０　２２３ＨＢＶ−ＦＭ
　　　　４ｍｌ　　　１．０１７３（Ｃ，ｎｅｏｆｏｒ
ｍａｎｓ） ＦＭ　　　　４ｍｌ　　　４．０　　３５ＨＢＶ−ＦＭ
　　　　４ｍｌ　　　３．０　　２０ＦＭ　　　　４ｍ
ｌ　　　４．０　　２６８ＢＶ−ＦＭ　　　　４ｍｌ　
　　３．０　　２９ＦＭ　　　　４ｍｌ　　　Ｏ，８２
４ ＨＢＶ−Ｆｌ　　　　４ｍｌ　　　０．８　　５０以上
の実験は、ＦＭおよびＨＢＶ−ＦＭ培地が大部分の被験
菌類につきより高いＧＶおよび／またはより速やかなＴ
ＴＤを示すという点で標準バクチックＮＲ６Ａ培地より
優れていることを示す。

これらの菌類を用いた理由は、それらが臨床試料から最
も普通に分離される菌類だからである。

実施例２ 菌類培地（前記）をＴＴＤにつき通常のバクチックＮＲ
６Ａ血液培地および血液培養に慣用される２種類の異な
る２相培地と対比して試験した。前記のように２相培地
は血液試料からの菌類の培養に関しすべての液体培地よ
り優れていると一般にみなされる。２相ボトル２種類は
下記のとおり＝１、カスタネダ／／Ｓ／／、ダイアグノ
スティックス・パスツール製、サブロー・デキストロー
ス寒天およびブロスを含有。非選択的（抗菌薬不在）。

２、ヘモライン・サブロー２相、バイオメリウ製、寒天
およびブロスを共に含有。細菌の増殖を制限するために
０．０１％ゲンタマイシンを含有するので、ｍａｔにつ
いて遺枳的であるー測定はすべて二重試験法で行われた
。接種はボトルまたはバイアル当たり合計５−５　Ｑｃ
、ｆ、ｕ、であった。人血をバクチックＮＲ６Ａおよび
菌類培地（ＦＭ）の場合は５ｍｌ、２相ボトルの場合は
製造業者の指示に従ってｌＱｍｌ添加した。培養物はす
べて３５±１℃でインキュベートされ、ノ（クチツクＮ
Ｒ６Ａおよび菌類培地は最初の４８時間は２８０±２Ｏ
ｒｐｍのオービタルシェーキングにより撹拌された。バ
クテ・ツクＮＲ６Ａおよび菌類培地における陽性度を、
バクテ・ツク６６０計測器でしきい値２０およびデルタ
（ある読みから次の読みへの変化）ＧＶＩＯにより読み
取ることによって測定した。２相ボトルについては陽性
度は寒天表面で増殖しているコロニーもしくはブロスの
濁りの視覚検査または両者によった。

試験した微生物はＦＭおよびヘモライン培地の選択機能
を示すために３菌株（第２表の最後）を含んでいた。第
２表においてＴＴＤ　（検出までの期間）は時間で表さ
れる。ＮＧ＝７日後の試験終了時に増殖がなかった。

第２表 ＴＴＤ　（時間） 培地 ヘモ カンジダ・アルビカンス＃６１　　　　　　　　４２カ
ンジダ・アルビカンス＃３９９　　　　　　　２５カン
ジダ・アルビカンス＃４９７　　　　　　　２５カンジ
ダ・パラブシロシス＃４９１　　　　　　４２カンジダ
・トロピカリス＃４０７　　　　　　　２５トルロプシ
ス・ゲラブラタ＃１５６　　　　　　９０トルロプシス
・ゲラブラタ＃２３１　　　　　　６６ゲオトリクム　
ｓｐ、＃２３０　　　　　　　　２５クリブトコフクス
・ネオホルマンス＃６９１　　９０クリブトコフクス・
ネオホルマンス＃６９６　　４２緑膿菌＃２７８５３　
　　　２５ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　＠ｅｒｕｇｉｎｏｓａ）
黄色ブドウ球菌＃２９２１３　　１８ （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）大腸
菌＃２５９２２　　　　１８ （Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）Ｇ Ｇ これらのデータからＦＭは代表的な被験菌類の検出に際
し２相系より一般に迅速であることが認められる。

ＦＭは細菌 （後３種） の増殖をも防止 し、 これは通常のバクチック （登録商標） Ｒ６ Ａまたはカスタネダ２相ボトルには無い利点である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、菌類を選択的に培養するための液体培地において （ａ）約１．０−約３．０％（ｗ／ｖ）の窒素性栄養素
   、 （ｂ）約０．５−約１．０％（ｗ／ｖ）の１種または２
   種以上の糖類、 （ｃ）約０．０１−約０．１２５％（ｗ／ｖ）の凝固防
   止剤、 （ｄ）菌類の増殖を刺激するのに有効な量の第二鉄また
   は第一鉄イオン源、および （ｅ）菌類の増殖に影響を与えることなく細菌の増殖を
   抑制する、有効量の１種または２種以上の抗菌薬 を含み、窒素性栄養素：糖類の比が約１：１−約６：１
   である液体培地。 ２、窒素性栄養素がカゼインの膵液消化物、大豆粉のパ
   パイン消化物、ゼラチンの膵液消化物、ウシ心臓浸出物
   、酵母自己溶解物エキス、ビーフエキス、麦芽エキス、
   動物組織エキスおよびポリペプトンよりなる群から選ば
   れる１種または２種以上の窒素性栄養素の混合物からな
   る、請求項１に記載の液体培地。 ３、糖類がグルコース、ショ糖およびマルトースよりな
   る群から選ばれる１種または２種以上の糖類の混合物か
   らなる、請求項１に記載の液体培地。 ４、凝固防止剤がナトリウムポリアネトールスルホネー
   ト、アミロスルホン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム
   、およびエチレンジアミン四酢酸よりなる群から選ばれ
   る、請求項１に記載の液体培地。 ５、第二鉄または第一鉄イオン源が硫酸第二鉄アンモニ
   ウム、塩化第二鉄および硫酸第一鉄よりなる群から選ば
   れる、請求項１に記載の液体培地。 ６、第二鉄または第一鉄イオン源が硫酸第二鉄アンモニ
   ウムである、請求項４に記載の液体培地。 ７、抗菌薬がクロラムフェニコールおよびトブラマイシ
   ンよりなる群から選ばれる１種または２種以上の抗菌薬
   の混合物からなる、請求項１に記載の液体培地。 ８、さらに有効量のミオイノシトールを含む、請求項１
   に記載の液体培地。 ９、菌類の選択的培養法において （ａ）無菌状態の体液（ｓｔｅｒｉｌｅｂｏｄｙｆｌｕ
   ｉｄ）の試料を下記よりなる液体培地に添加し： （ｉ）窒素性栄養素； （ｉｉ）１種または２種以上の糖類； （ｉｉｉ）凝固防止剤； （ｉｖ）第二鉄または第一鉄イオン源； （ｖ）１種または２種以上の抗菌薬； （ｖｉ）血液溶解剤；および （ｖｉｉ）ミオイノシトール、 （ｂ）上記混合物を約３０−約３５℃で撹拌しながら約
   ２週間インキュベートし； （ｃ）該混合物を微生物増殖の兆候につき視覚検査し；
   そして （ｄ）生育可能な菌類の存在について該混合物の鏡検を
   行う ことを含む方法。 １０、菌類の選択的培養法において （ａ）無菌状態の体液（ｓｔｅｒｉｌｅｂｏｄｙｆｌｕ
   ｉｄ）の試料を下記よりなる液体培地に添加し： （ｉ）０．５％（ｗ／ｖ）大豆−カゼイン消化ブロス； （ｉｉ）１．０％（ｗ／ｖ）脳心臓浸出ブロス；（ｉｉ
   ｉ）０．０３５％（ｗ／ｖ）酵母自己溶解物エキス； （ｉｖ）０．６％（ｗ／ｖ）ショ糖； （ｖ）０．１％（ｗ／ｖ）グルコース； （ｖｉ）０．０２５％（ｗ／ｖ）ナトリウムポリアネト
   ールスルホネート； （ｖｉｉ）０．０００１％（ｗ／ｖ）硫酸第二鉄アンモ
   ニウム； （Ｖｉｉｉ）０．０５％（ｗ／ｖ）ミオイノシトール； （ｉｘ）０．００５％（ｗ／ｖ）クロラムフェニコール
   ； （Ｘ）０．００１％（Ｗ／Ｖ）トブラマイシン；および （ｘｉ）０．２４％（ｗ／ｖ）サポニン、 （ｂ）上記混合物を約３０−約３５℃で撹拌しながら約
   ２週間インキュベートし； （ｃ）該混合物を微生物増殖の兆候につき視覚検査し；
   そして （ｄ）生育可能な菌類の存在について該混合物の鏡検を
   行う ことを含む方法。