JP2002281959A - 糞便中大腸菌ｏ１５７の検出用培地 - Google Patents
糞便中大腸菌ｏ１５７の検出用培地Info
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- JP2002281959A JP2002281959A JP2001089525A JP2001089525A JP2002281959A JP 2002281959 A JP2002281959 A JP 2002281959A JP 2001089525 A JP2001089525 A JP 2001089525A JP 2001089525 A JP2001089525 A JP 2001089525A JP 2002281959 A JP2002281959 A JP 2002281959A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】本発明は食中毒菌である大腸菌Ｏ１５７の分離
用培地に関し、特に糞便検体中の大腸菌Ｏ１５７を、特
殊な熟練や技術を必要とせず、短時間にかつ容易にまた
正確に検出できる特定の培地組成物を提供する。 【解決手段】本発明の課題は、培地にセフィキシム、亜
テルル酸カリウム、アミカシン等の抗菌剤を添加し、培
地の選択性を高めた大腸菌Ｏ１５７検出用培地により達
成された。
用培地に関し、特に糞便検体中の大腸菌Ｏ１５７を、特
殊な熟練や技術を必要とせず、短時間にかつ容易にまた
正確に検出できる特定の培地組成物を提供する。 【解決手段】本発明の課題は、培地にセフィキシム、亜
テルル酸カリウム、アミカシン等の抗菌剤を添加し、培
地の選択性を高めた大腸菌Ｏ１５７検出用培地により達
成された。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は食中毒菌である腸管
出血性大腸菌血清型Ｏ１５７（大腸菌Ｏ１５７）の検出
用培地に関するものであり、特に糞便検体中の大腸菌Ｏ
１５７の検出に有用な培地に関する。
出血性大腸菌血清型Ｏ１５７（大腸菌Ｏ１５７）の検出
用培地に関するものであり、特に糞便検体中の大腸菌Ｏ
１５７の検出に有用な培地に関する。
【０００２】なお、本発明では次の略語を使用すること
がある。
がある。
【略語表】ＳＭＣ培地：ソルビットマッコンキー培地。 ＣＴＳＭＣ培地：セフィキシム亜テルル酸ソルビットマ
ッコンキー培地。 ＣＬＩＧ培地：セロビオース添加ＬＩＧ（Ｌａｃｔｏｓ
ｅ−Ｉｎｄｏｌｅ−β−Ｄ−Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓ
ｅ）培地。 アンドレイド試薬：酸性フクシン０．５Ｇを精製水１０
０ｍＬで溶解後、１Ｎ水酸化ナトリウム液１６ｍＬを加
えたｐＨ指示薬。
ッコンキー培地。 ＣＬＩＧ培地：セロビオース添加ＬＩＧ（Ｌａｃｔｏｓ
ｅ−Ｉｎｄｏｌｅ−β−Ｄ−Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓ
ｅ）培地。 アンドレイド試薬：酸性フクシン０．５Ｇを精製水１０
０ｍＬで溶解後、１Ｎ水酸化ナトリウム液１６ｍＬを加
えたｐＨ指示薬。
【０００３】
【従来の技術】大腸菌Ｏ１５７は腸内細菌科に属し、グ
ラム陰性、通性嫌気性の無芽胞桿菌であり、菌体表面に
ある抗原構造によって通常の大腸菌と区別される。大腸
菌Ｏ１５７による食中毒は、本菌に汚染された食肉、牛
乳、卵及びこれらの加工食品を摂取すると、菌が腸管内
で増殖することによって起こる感染型食中毒で、産生さ
れるベロ毒素が出血性大腸炎を起こし、死に至らしめる
こともある危険な食中毒である。
ラム陰性、通性嫌気性の無芽胞桿菌であり、菌体表面に
ある抗原構造によって通常の大腸菌と区別される。大腸
菌Ｏ１５７による食中毒は、本菌に汚染された食肉、牛
乳、卵及びこれらの加工食品を摂取すると、菌が腸管内
で増殖することによって起こる感染型食中毒で、産生さ
れるベロ毒素が出血性大腸炎を起こし、死に至らしめる
こともある危険な食中毒である。
【０００４】大腸菌Ｏ１５７の検出は一般的には以下の
ように行われている。まず、検体をｍｏｄｉｆｉｅｄＥ
Ｃ（ｍＥＣ）培地により増菌培養を行い、次いでＳＭＣ
培地もしくはＣＴＳＭＣ培地に接種して分離培養し、培
地上の集落を観察する。さらにＣＴＳＭＣ平板培地上の
ソルビット非分解の集落を釣菌し、ＣＬＩＧなどの確認
培地に接種し、３７℃で１８−２４時間培養後、Ｏ１５
７と疑わしき性状のコロニーについて抗血清による免疫
学的試験を行い、血清型Ｏ１５７であることを確認して
いる。
ように行われている。まず、検体をｍｏｄｉｆｉｅｄＥ
Ｃ（ｍＥＣ）培地により増菌培養を行い、次いでＳＭＣ
培地もしくはＣＴＳＭＣ培地に接種して分離培養し、培
地上の集落を観察する。さらにＣＴＳＭＣ平板培地上の
ソルビット非分解の集落を釣菌し、ＣＬＩＧなどの確認
培地に接種し、３７℃で１８−２４時間培養後、Ｏ１５
７と疑わしき性状のコロニーについて抗血清による免疫
学的試験を行い、血清型Ｏ１５７であることを確認して
いる。
【０００５】このように従来の大腸菌Ｏ１５７検出法は
複雑な工程、熟練された技術と３〜５日間の長時間が必
要であるという問題があった。また、使用する各種の選
択分離培地は大腸菌のみの選択分離を目的としたもので
はなく、そのほとんどの培地では多くの腸内細菌が発育
する。それ故、このような選択分離培地から大腸菌を疑
う菌株を鑑別するには熟練と経験が必要であり、大腸菌
と確認された後さらに血清型を特定する必要がある。通
常検査される材料中には食中毒の原因となる大腸菌Ｏ１
５７と同時に通常の大腸菌が混在している場合が多く、
そのため多くの集落を釣菌して確認する必要があり、原
因菌の特定は困難を極めている。なお大腸菌Ｏ１５７の
性状や検出法に関しては、雑誌「臨床と微生物」１８巻
４号、４４３〜５２９ページ、１９９１年７月発行、及
び同誌２３巻臨時増刊号、７７９〜９１３ページ、１９
９６年１２月発行に特集され詳細に記載されている。
複雑な工程、熟練された技術と３〜５日間の長時間が必
要であるという問題があった。また、使用する各種の選
択分離培地は大腸菌のみの選択分離を目的としたもので
はなく、そのほとんどの培地では多くの腸内細菌が発育
する。それ故、このような選択分離培地から大腸菌を疑
う菌株を鑑別するには熟練と経験が必要であり、大腸菌
と確認された後さらに血清型を特定する必要がある。通
常検査される材料中には食中毒の原因となる大腸菌Ｏ１
５７と同時に通常の大腸菌が混在している場合が多く、
そのため多くの集落を釣菌して確認する必要があり、原
因菌の特定は困難を極めている。なお大腸菌Ｏ１５７の
性状や検出法に関しては、雑誌「臨床と微生物」１８巻
４号、４４３〜５２９ページ、１９９１年７月発行、及
び同誌２３巻臨時増刊号、７７９〜９１３ページ、１９
９６年１２月発行に特集され詳細に記載されている。
【０００６】また、大腸菌Ｏ１５７を容易に検出できる
培地として、特表2000-508176、特開2000-342249が出願
されており、酵素発色基質を含有するこれらの培地を用
いると、食材や食品等の比較的きれいな（雑菌の少な
い）検体であれば、簡便に大腸菌Ｏ１５７を検出できる
とされている。
培地として、特表2000-508176、特開2000-342249が出願
されており、酵素発色基質を含有するこれらの培地を用
いると、食材や食品等の比較的きれいな（雑菌の少な
い）検体であれば、簡便に大腸菌Ｏ１５７を検出できる
とされている。
【０００７】また、飲食物取扱従事者に対する定期的な
検便検査が行われている。伝染病予防法第１９条及びそ
の要綱に基づいて、伝染病の予防、及び予防思想の普及
を図るために飲食物取扱従事者に対する検便（保菌者検
出事業）が実施されている。飲食物取扱従事者の中で、
特に集団発生源となりやすい寿司屋、弁当屋を含む仕出
し屋、そば屋、魚介類販売業、豆腐製造業、集団給食施
設調理従事者、水道施設従事者、及び季節旅館を重点業
種と指定して、５月−９月の間毎月１回定期的に行う法
定検便が実施されている。さらにそれ以外の業種であっ
ても、またその法定期間以外であっても、年間を通して
勧奨検便が行われている。そのため、膨大な数の検便検
査が検査センターや保健所等の施設で実施されている。
しかしながら、糞便検体は大量の雑菌を含むため、上述
の従来の培地や検出方法では、常在菌の発育のため大腸
菌Ｏ１５７の分離が難しく、その検出には時間と手間、
熟練された技術が必要であった。
検便検査が行われている。伝染病予防法第１９条及びそ
の要綱に基づいて、伝染病の予防、及び予防思想の普及
を図るために飲食物取扱従事者に対する検便（保菌者検
出事業）が実施されている。飲食物取扱従事者の中で、
特に集団発生源となりやすい寿司屋、弁当屋を含む仕出
し屋、そば屋、魚介類販売業、豆腐製造業、集団給食施
設調理従事者、水道施設従事者、及び季節旅館を重点業
種と指定して、５月−９月の間毎月１回定期的に行う法
定検便が実施されている。さらにそれ以外の業種であっ
ても、またその法定期間以外であっても、年間を通して
勧奨検便が行われている。そのため、膨大な数の検便検
査が検査センターや保健所等の施設で実施されている。
しかしながら、糞便検体は大量の雑菌を含むため、上述
の従来の培地や検出方法では、常在菌の発育のため大腸
菌Ｏ１５７の分離が難しく、その検出には時間と手間、
熟練された技術が必要であった。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、複数の細菌が混在している糞便検体中の大腸菌Ｏ１
５７を、特殊な熟練や技術を必要とせず、短時間にかつ
容易にまた正確に検出できる特定の培地組成物を提供す
ることにある。
は、複数の細菌が混在している糞便検体中の大腸菌Ｏ１
５７を、特殊な熟練や技術を必要とせず、短時間にかつ
容易にまた正確に検出できる特定の培地組成物を提供す
ることにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】かかる実状において本発
明者は、糞便検体を接種する培地中にノボビオシンやア
ミカシン等の抗菌剤を添加し、さらにソルビット等の鑑
別物質を加えることにより、培地の選択性が向上し、大
腸菌Ｏ１５７のみが容易に発育することを見いだし、鋭
意努力の結果、本発明を完成した。
明者は、糞便検体を接種する培地中にノボビオシンやア
ミカシン等の抗菌剤を添加し、さらにソルビット等の鑑
別物質を加えることにより、培地の選択性が向上し、大
腸菌Ｏ１５７のみが容易に発育することを見いだし、鋭
意努力の結果、本発明を完成した。
【００１０】（１） 本発明は、ノボビオシン、亜テル
ル酸カリウム、セフィキシム、アミカシンを含有する大
腸菌Ｏ１５７選択発色培地であり、（２） 培地１００
０ｍＬあたり、ノボビオシン１−５０ｍｇ、亜テルル酸
カリウム１−４０ｍｇ、セフィキシム０．０１−０．１
ｍｇ、アミカシン０．０１−０．１ｍｇを含有する
（１）記載の大腸菌Ｏ１５７選択発色培地であり、
（３） 培地１０００ｍＬ当たり以下の組成を含有する
（１）記載の大腸菌Ｏ１５７選択発色培地であり、
ル酸カリウム、セフィキシム、アミカシンを含有する大
腸菌Ｏ１５７選択発色培地であり、（２） 培地１００
０ｍＬあたり、ノボビオシン１−５０ｍｇ、亜テルル酸
カリウム１−４０ｍｇ、セフィキシム０．０１−０．１
ｍｇ、アミカシン０．０１−０．１ｍｇを含有する
（１）記載の大腸菌Ｏ１５７選択発色培地であり、
（３） 培地１０００ｍＬ当たり以下の組成を含有する
（１）記載の大腸菌Ｏ１５７選択発色培地であり、
【組成４】 ──────────────────────── ペプトン ５−２０ｇ 酵母エキス １−１０ｇ 塩化ナトリウム ５−３０ｇ 胆汁酸塩 ０．５− ５ｇ Ｄ−ソルビット １−３０ｇ ニュートラルレッド ３−１００ｍｇ ノボビオシン １−５０ｍｇ 亜テルル酸カリウム ２−４０ｍｇ アミカシン ０．０１−０．２ｍｇ セフィキシム ０．０１−０．１ｍｇ カンテン ５−２０ｇ ──────────────────────── （４） さらに上記（１）〜（３）記載の選択発色培地
に糞便検体もしくは糞便検体懸濁液を接種して培養した
後、当該培地上の褐色集落の有無を検出することを特徴
とする糞便中大腸菌Ｏ１５７の検出方法である。
に糞便検体もしくは糞便検体懸濁液を接種して培養した
後、当該培地上の褐色集落の有無を検出することを特徴
とする糞便中大腸菌Ｏ１５７の検出方法である。
【００１１】大腸菌Ｏ１５７は亜テルル酸カリウムに耐
性でかつ亜テルル酸カリウムを還元することが知られて
おり、本発明では、大腸菌Ｏ１５７は亜テルル酸カリウ
ムの作用により褐色の集落（コロニー）を生成するが、
その他の菌は発育しないか、無色または桃色のコロニー
となることを基本原理としている。そのため、本発明
は、大腸菌Ｏ１５７の存在を確認するために、亜テルル
酸カリウムが還元されて生成する褐色又は黒色のコロニ
ーの有無を判断する大腸菌Ｏ１５７用の分離用培地、鑑
別用培地等に応用可能である。本培地に添加するノボビ
オシンはエンテロバクター属菌やProteus属菌の発育を
抑制し、セフィキシムは大腸菌Ｏ１５７以外の一部の大
腸菌を抑制し、アミカシンはグラム陰性桿菌や緑膿菌を
抑制する。ソルビットは大腸菌Ｏ１５７の鑑別に使い、
大腸菌Ｏ１５７はソルビット非分解性であるが、他の腸
内細菌はソルビットを分解し酸を生成する。これらの選
択剤の添加により、本培地は選択性が向上し、大腸菌Ｏ
１５７のみが褐色集落を形成し、他の菌は発育しても無
色または桃色のコロニーとなる。なお、培地のｐＨは
６．９〜７．５が好ましく、褐色集落が明瞭に出現す
る。
性でかつ亜テルル酸カリウムを還元することが知られて
おり、本発明では、大腸菌Ｏ１５７は亜テルル酸カリウ
ムの作用により褐色の集落（コロニー）を生成するが、
その他の菌は発育しないか、無色または桃色のコロニー
となることを基本原理としている。そのため、本発明
は、大腸菌Ｏ１５７の存在を確認するために、亜テルル
酸カリウムが還元されて生成する褐色又は黒色のコロニ
ーの有無を判断する大腸菌Ｏ１５７用の分離用培地、鑑
別用培地等に応用可能である。本培地に添加するノボビ
オシンはエンテロバクター属菌やProteus属菌の発育を
抑制し、セフィキシムは大腸菌Ｏ１５７以外の一部の大
腸菌を抑制し、アミカシンはグラム陰性桿菌や緑膿菌を
抑制する。ソルビットは大腸菌Ｏ１５７の鑑別に使い、
大腸菌Ｏ１５７はソルビット非分解性であるが、他の腸
内細菌はソルビットを分解し酸を生成する。これらの選
択剤の添加により、本培地は選択性が向上し、大腸菌Ｏ
１５７のみが褐色集落を形成し、他の菌は発育しても無
色または桃色のコロニーとなる。なお、培地のｐＨは
６．９〜７．５が好ましく、褐色集落が明瞭に出現す
る。
【００１２】（５）また本発明は、亜テルル酸カリウ
ム、セフィキシム、アミカシン、ゲンタマイシンを含有
する大腸菌Ｏ１５７簡易検出用培地でもあり、（６）培
地１０００ｍＬあたり、亜テルル酸カリウム１−４０ｍ
ｇ、セフィキシム０．０１−０．１ｍｇ、アミカシン
０．０１−０．１ｍｇ、ゲンタマイシン０．０１−０．
１ｍｇ、を含有する請求項５記載の大腸菌Ｏ１５７簡易
検出用培地でもあり、（７）培地１０００ｍＬあたり、
以下の組成を含有する（５）記載の大腸菌Ｏ１５７簡易
検出用培地でもあり、
ム、セフィキシム、アミカシン、ゲンタマイシンを含有
する大腸菌Ｏ１５７簡易検出用培地でもあり、（６）培
地１０００ｍＬあたり、亜テルル酸カリウム１−４０ｍ
ｇ、セフィキシム０．０１−０．１ｍｇ、アミカシン
０．０１−０．１ｍｇ、ゲンタマイシン０．０１−０．
１ｍｇ、を含有する請求項５記載の大腸菌Ｏ１５７簡易
検出用培地でもあり、（７）培地１０００ｍＬあたり、
以下の組成を含有する（５）記載の大腸菌Ｏ１５７簡易
検出用培地でもあり、
【組成５】 ──────────────────────── ペプトン ５−２０ｇ 酵母エキス １−１０ｇ 塩化ナトリウム ３−３０ｇ 胆汁酸塩 ０．５− ５ｇ Ｄ−ソルビット １−３０ｇ ニュートラルレッド ３−１００ｍｇ 亜テルル酸カリウム １−４０ｍｇ セフィキシム ０．０１−０．１ｍｇ アミカシン ０．０１−０．５ｍｇ ゲンタマイシン ０．０１−０．１ｍｇ カンテン ５−２０ｇ ──────────────────────── （８）（５）〜（７）記載の簡易検出用培地に糞便検体
もしくは糞便検体懸濁液を接種して培養した後、当該培
地上の褐色集落の有無を検出することを特徴とする糞便
中大腸菌Ｏ１５７の検出方法でもある。
もしくは糞便検体懸濁液を接種して培養した後、当該培
地上の褐色集落の有無を検出することを特徴とする糞便
中大腸菌Ｏ１５７の検出方法でもある。
【００１３】本発明では、添加したアミカシンとゲンタ
マイシンの作用により培地の抑制力・選択性を強めてい
る。そのため、他の菌は発育せず、大腸菌Ｏ１５７も１
０4ＣＦＵ(Colony Forming Unit)／ｍＬ以上でないと発
育しない。そのため１０8ＣＦＵ／ｍＬ以上の高濃度の
大腸菌Ｏ１５７も独立したコロニーとなり、検便検査で
輸送中に雑菌が増殖してしまったような検体でも、大腸
菌Ｏ１５７検出が可能である。従って、本培地は大腸菌
Ｏ１５７が大量に含まれる患者下痢便の試験などに適す
る。なお、培地のｐＨは６．９〜７．５が好ましく、大
腸菌Ｏ１５７の褐色集落が明瞭に出現する。
マイシンの作用により培地の抑制力・選択性を強めてい
る。そのため、他の菌は発育せず、大腸菌Ｏ１５７も１
０4ＣＦＵ(Colony Forming Unit)／ｍＬ以上でないと発
育しない。そのため１０8ＣＦＵ／ｍＬ以上の高濃度の
大腸菌Ｏ１５７も独立したコロニーとなり、検便検査で
輸送中に雑菌が増殖してしまったような検体でも、大腸
菌Ｏ１５７検出が可能である。従って、本培地は大腸菌
Ｏ１５７が大量に含まれる患者下痢便の試験などに適す
る。なお、培地のｐＨは６．９〜７．５が好ましく、大
腸菌Ｏ１５７の褐色集落が明瞭に出現する。
【００１４】本培地は選択性が高く、高濃度の菌が接種
でき、菌液を希釈する必要がないので、次のような使い
方もできる。長方形の角シャーレに寒天平板を作成し、
それを実験台上に５度〜１０度に傾けて置く。液状の検
体をその上部に１滴滴下すると、検体は傾斜に沿って流
れ落ち、白金耳で検体を画線したのと同様の画線が描け
る。この方法では菌液の希釈は起こらないが、高選択性
の本培地では十分に大腸菌Ｏ１５７の検出が可能であ
る。また、寒天平板を固化する際に、角シャーレを傾け
て、斜面状の平板培地を作製しても、同様の接種及び培
養ができる。従って、白金耳の操作に不慣れで塗抹接種
が不得手な初心者であっても、本培地であれば容易に検
体の接種が可能である。
でき、菌液を希釈する必要がないので、次のような使い
方もできる。長方形の角シャーレに寒天平板を作成し、
それを実験台上に５度〜１０度に傾けて置く。液状の検
体をその上部に１滴滴下すると、検体は傾斜に沿って流
れ落ち、白金耳で検体を画線したのと同様の画線が描け
る。この方法では菌液の希釈は起こらないが、高選択性
の本培地では十分に大腸菌Ｏ１５７の検出が可能であ
る。また、寒天平板を固化する際に、角シャーレを傾け
て、斜面状の平板培地を作製しても、同様の接種及び培
養ができる。従って、白金耳の操作に不慣れで塗抹接種
が不得手な初心者であっても、本培地であれば容易に検
体の接種が可能である。
【００１５】（９） さらに本発明は、亜テルル酸カリ
ウム、ノボビオシン、セフィキシム、アンホテリシン
Ｂ、ズルシット、及びペプトン１−５ｇ／１０００ｍＬ
を含有する大腸菌Ｏ１５７スクリーニング用培地であ
り、（１０） 培地１０００ｍＬあたり、亜テルル酸カ
リウム１−１００ｍｇ、ノボビオシン１−１００ｍｇ、
セフィキシム０．０１−１ｍｇ、アンホテリシンＢ１−
２０ｍｇ、ズルシット１−３０Ｇ、ペプトン１−５ｇを
含有する（９）記載の大腸菌Ｏ１５７スクリーニング用
培地であり、（１１） 培地１０００ｍＬあたり、以下
の組成を含有する（９）記載の大腸菌Ｏ１５７スクリー
ニング用培地であり、
ウム、ノボビオシン、セフィキシム、アンホテリシン
Ｂ、ズルシット、及びペプトン１−５ｇ／１０００ｍＬ
を含有する大腸菌Ｏ１５７スクリーニング用培地であ
り、（１０） 培地１０００ｍＬあたり、亜テルル酸カ
リウム１−１００ｍｇ、ノボビオシン１−１００ｍｇ、
セフィキシム０．０１−１ｍｇ、アンホテリシンＢ１−
２０ｍｇ、ズルシット１−３０Ｇ、ペプトン１−５ｇを
含有する（９）記載の大腸菌Ｏ１５７スクリーニング用
培地であり、（１１） 培地１０００ｍＬあたり、以下
の組成を含有する（９）記載の大腸菌Ｏ１５７スクリー
ニング用培地であり、
【組成６】 ──────────────────────── ペプトン １− ５ｇ 塩化ナトリウム ３−３０ｇ 胆汁酸塩 ０．５− ５ｇ リン酸塩 ０．１−１０ｇ アンドレイド試薬 １０−４０ｍＬ ズルシット １−３０ｇ 亜テルル酸カリウム １−１００ｍｇ ノボビオシン １−１００ｍｇ セフィキシム ０．０１−０．２ｍｇ アンホテリシンＢ １−２０ｍｇ カンテン ０−１０ｇ ───────────────────────── （１２） （９）〜（１１）のスクリーニング用培地に
糞便検体もしくは糞便検体懸濁液を接種して輸送もしく
は培養した後、輸送中もしくは培養中に生じた当該培地
の色変化の有無を検出することを特徴とする糞便中大腸
菌Ｏ１５７のスクリーニング方法でもある。
糞便検体もしくは糞便検体懸濁液を接種して輸送もしく
は培養した後、輸送中もしくは培養中に生じた当該培地
の色変化の有無を検出することを特徴とする糞便中大腸
菌Ｏ１５７のスクリーニング方法でもある。
【００１６】本培地は、添加するペプトン量を通常の１
／３〜１／５に削減し、さらに選択剤を加えた大腸菌Ｏ
１５７スクリーニング用培地である。ペプトン量を１−
５ｇ／１０００ｍＬと通常の１／３〜１／５に減少する
と、大腸菌Ｏ１５７は通常通り発育するが、その他の菌
は栄養成分が不足するので、発育が阻害される。添加し
た薬剤アンホテリシンＢはカンジダの様な真菌や糸状菌
の発育を抑制する。ズルシットは、大腸菌Ｏ１５７が分
解する糖の中で他の菌との鑑別がつけやすい糖である。
大腸菌Ｏ１５７はズルシットを１００％分解するが、大
腸菌Ｏ１５７以外の通常の大腸菌は４０％程度分解し、
他の腸内細菌は非分解性のものが多く大腸菌Ｏ１５７の
鑑別に有効である。添加したズルシットは大腸菌Ｏ１５
７によって分解されて酸を生成し、培地のｐＨを下げ、
アンドレイド試薬と反応し、培地の色を赤変させる。
（３）や（７）で添加したソルビットでは大腸菌Ｏ１５
７はそれを分解しないので、ｐＨが変わらず、培地色は
変化しない。なお、アンドレイド試薬は、無色から赤に
変化するｐＨ指示薬で、他のｐＨ指示薬のような中間色
を示さず、培地色が少しでも赤になれば陽性と判断でき
るので本発明では使用している。リン酸塩はｐＨ調整と
緩衝能を強くするために添加しており、本発明にはK2HP
O4、Na2HPO4、KH2PO4、NaH2PO4、及びそれらの水和物が
適している。本培地のｐＨは８．０〜８．６が好まし
く、検体中に大腸菌Ｏ１５７が存在すると培地色が無色
から赤色に変化する。
／３〜１／５に削減し、さらに選択剤を加えた大腸菌Ｏ
１５７スクリーニング用培地である。ペプトン量を１−
５ｇ／１０００ｍＬと通常の１／３〜１／５に減少する
と、大腸菌Ｏ１５７は通常通り発育するが、その他の菌
は栄養成分が不足するので、発育が阻害される。添加し
た薬剤アンホテリシンＢはカンジダの様な真菌や糸状菌
の発育を抑制する。ズルシットは、大腸菌Ｏ１５７が分
解する糖の中で他の菌との鑑別がつけやすい糖である。
大腸菌Ｏ１５７はズルシットを１００％分解するが、大
腸菌Ｏ１５７以外の通常の大腸菌は４０％程度分解し、
他の腸内細菌は非分解性のものが多く大腸菌Ｏ１５７の
鑑別に有効である。添加したズルシットは大腸菌Ｏ１５
７によって分解されて酸を生成し、培地のｐＨを下げ、
アンドレイド試薬と反応し、培地の色を赤変させる。
（３）や（７）で添加したソルビットでは大腸菌Ｏ１５
７はそれを分解しないので、ｐＨが変わらず、培地色は
変化しない。なお、アンドレイド試薬は、無色から赤に
変化するｐＨ指示薬で、他のｐＨ指示薬のような中間色
を示さず、培地色が少しでも赤になれば陽性と判断でき
るので本発明では使用している。リン酸塩はｐＨ調整と
緩衝能を強くするために添加しており、本発明にはK2HP
O4、Na2HPO4、KH2PO4、NaH2PO4、及びそれらの水和物が
適している。本培地のｐＨは８．０〜８．６が好まし
く、検体中に大腸菌Ｏ１５７が存在すると培地色が無色
から赤色に変化する。
【００１７】また本培地は組成中の寒天量を調節するこ
とにより、培地を液状培地、半流動培地、固形培地（平
板）とすることができる。つまり寒天濃度が０〜０．０
４％（０〜０．４ｇ／Ｌ）の時は培地は液状培地とな
り、寒天濃度が０．０５〜０．６％（０．５〜６．０ｇ
／Ｌ）の時は培地は半流動培地となり、寒天濃度が１〜
２％（１０．０〜２０．０ｇ／Ｌ）の時は培地は固形培
地となる。液状培地はマイクロプレート等を用いた微量
液体希釈法に有用であり、半流動培地は穿刺培養に適し
ているので菌の保存や検体の輸送用培地として有用であ
り、固形培地（寒天平板）は一般的な細菌培養や平板希
釈法に有用である。特に、本培地の寒天濃度を０．０５
〜０．６％（０．５〜６．０ｇ／１０００ｍＬ）とし、
培地を半流動培地とすると、本培地は輸送スクリーニン
グ培地として有用である。特に糞便を採取して送付する
ために用いられる輸送採便容器に本培地を適用すると、
輸送中に大腸菌Ｏ１５７のみが増菌し、培地を赤変させ
ることで検体中の大腸菌Ｏ１５７の存否が判断でき、ス
クリーニングに有用である。もちろん通常のスクリーニ
ング培地と同様に用いてスクリーニングを行っても良
い。
とにより、培地を液状培地、半流動培地、固形培地（平
板）とすることができる。つまり寒天濃度が０〜０．０
４％（０〜０．４ｇ／Ｌ）の時は培地は液状培地とな
り、寒天濃度が０．０５〜０．６％（０．５〜６．０ｇ
／Ｌ）の時は培地は半流動培地となり、寒天濃度が１〜
２％（１０．０〜２０．０ｇ／Ｌ）の時は培地は固形培
地となる。液状培地はマイクロプレート等を用いた微量
液体希釈法に有用であり、半流動培地は穿刺培養に適し
ているので菌の保存や検体の輸送用培地として有用であ
り、固形培地（寒天平板）は一般的な細菌培養や平板希
釈法に有用である。特に、本培地の寒天濃度を０．０５
〜０．６％（０．５〜６．０ｇ／１０００ｍＬ）とし、
培地を半流動培地とすると、本培地は輸送スクリーニン
グ培地として有用である。特に糞便を採取して送付する
ために用いられる輸送採便容器に本培地を適用すると、
輸送中に大腸菌Ｏ１５７のみが増菌し、培地を赤変させ
ることで検体中の大腸菌Ｏ１５７の存否が判断でき、ス
クリーニングに有用である。もちろん通常のスクリーニ
ング培地と同様に用いてスクリーニングを行っても良
い。
【００１８】従来の検便検査は、糞便をそのまま輸送す
るか、適当な輸送培地に接種してそれを輸送しており、
検査機関では、それら全ての検体を培養し、検査を行わ
ざるを得なかった。しかし、健常者糞便であれば大腸菌
Ｏ１５７の陽性率は５万検体に１件程度であり（社内デ
ータ）、全数検査のために多くの労力を必要とする割に
は、甚だ無駄の多い検査であった。本発明の大腸菌Ｏ１
５７スクリーニング用培地を輸送培地として用いると、
輸送の段階で大腸菌Ｏ１５７を含有すると思われる検体
のみが、赤色に発色し、輸送中にスクリーニングが可能
となる。さらに本スクリーニング培地は、室温で１日の
培養でも十分に大腸菌Ｏ１５７が発育するが、栄養成分
を制限しているので、１週間後でもその発育状態が変化
しない。つまり、輸送中に本スクリーニング培地で陽性
となった糞便検体のみが、確認試験が必要な検体と判定
され、従来の検査の労力が大幅に削減できる。
るか、適当な輸送培地に接種してそれを輸送しており、
検査機関では、それら全ての検体を培養し、検査を行わ
ざるを得なかった。しかし、健常者糞便であれば大腸菌
Ｏ１５７の陽性率は５万検体に１件程度であり（社内デ
ータ）、全数検査のために多くの労力を必要とする割に
は、甚だ無駄の多い検査であった。本発明の大腸菌Ｏ１
５７スクリーニング用培地を輸送培地として用いると、
輸送の段階で大腸菌Ｏ１５７を含有すると思われる検体
のみが、赤色に発色し、輸送中にスクリーニングが可能
となる。さらに本スクリーニング培地は、室温で１日の
培養でも十分に大腸菌Ｏ１５７が発育するが、栄養成分
を制限しているので、１週間後でもその発育状態が変化
しない。つまり、輸送中に本スクリーニング培地で陽性
となった糞便検体のみが、確認試験が必要な検体と判定
され、従来の検査の労力が大幅に削減できる。
【００１９】以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細
に説明する。なお、下記実施例は単に説明のためのもの
であり、本発明を何ら限定するものではない。
に説明する。なお、下記実施例は単に説明のためのもの
であり、本発明を何ら限定するものではない。
【００２０】実施例１ 培地の作製 請求項１−４に対応する本培地Ａ、請求項５−８に対応
する本培地Ｂ、請求項９−１２に対応する本培地Ｃ、及
び対照として、市販のＣＴＳＭＣ寒天培地（栄研化学社
製）を調製した。以下の組成の原料を秤量後、約１００
０ｍＬの精製水に溶解し、１２１℃１５分高圧滅菌し
た。本培地Ａ及び本培地Ｂは滅菌後５０〜５６℃に冷却
後シャーレに２０ｍＬづつ分注し、固化後３０分乾燥さ
せた。本培地Ｃは滅菌後５０〜５６℃に冷却後、試験管
に２ｍＬずつ分注した。ＣＴＳＭＣ寒天培地はその添付
文書に従って調製した。
する本培地Ｂ、請求項９−１２に対応する本培地Ｃ、及
び対照として、市販のＣＴＳＭＣ寒天培地（栄研化学社
製）を調製した。以下の組成の原料を秤量後、約１００
０ｍＬの精製水に溶解し、１２１℃１５分高圧滅菌し
た。本培地Ａ及び本培地Ｂは滅菌後５０〜５６℃に冷却
後シャーレに２０ｍＬづつ分注し、固化後３０分乾燥さ
せた。本培地Ｃは滅菌後５０〜５６℃に冷却後、試験管
に２ｍＬずつ分注した。ＣＴＳＭＣ寒天培地はその添付
文書に従って調製した。
【組成７】本培地Ａ（１０００ｍＬ） ─────────────────────── ペプトン １０ｇ 酵母エキス ３ｇ 塩化ナトリウム ５ｇ デソキシコール酸ナトリウム １ｇ Ｄ−ソルビット １０ｇ ニュートラルレッド ５ｍｇ ノボビオシン ５ｍｇ 亜テルル酸カリウム １０ｍｇ アミカシン ０．１ｍｇ セフィキシム ０．０５ｍｇ カンテン １５ｇ ─────────────────────── ｐＨ７．２ ±０．２
【組成８】本培地Ｂ（１０００ｍＬ） ─────────────────────── ペプトン １０ｇ 酵母エキス ３ｇ 塩化ナトリウム ５ｇ デソキシコール酸ナトリウム １ｇ Ｄ−ソルビット １０ｇ ニュートラルレッド ５ｍｇ 亜テルル酸カリウム １０ｍｇ セフィキシム ０．０５ｍｇ アミカシン ０．２５ｍｇ ゲンタマイシン ０．０３ｍｇ カンテン １５ｇ ─────────────────────── ｐＨ７．２ ±０．２
【組成９】本培地Ｃ（１０００ｍＬ） ─────────────────────── ペプトン ３ｇ 塩化ナトリウム ５ｇ デソキシコール酸ナトリウム １ｇ リン酸２カリウム １ｇ アンドレイド試薬 ２０ｍＬ ズルシット １５ｇ 亜テルル酸カリウム ４０ｍｇ ノボビオシン ４０ｍｇ セフィキシム ０．１ｍｇ アンホテリシンＢ ４ｍｇ カンテン ４ｇ ─────────────────────── ｐＨ８．３ ±０．３
【組成１０】ＣＴＳＭＣ寒天培地（１０００ｍＬ） ─────────────────────── ペプトン ２０ｇ Ｄ−ソルビット １０ｇ 胆汁酸塩No.2 １．５ｇ 塩化ナトリウム ５ｇ ニュートラルレッド ３０ｍｇ クリスタルバイオレット １ｍｇ セフィキシム ０．０５ｍｇ 亜テルル酸カリウム ２．５ｍｇ カンテン １４ｇ ─────────────────────── ｐＨ７．０ ±０．２
【００２１】実施例２ 本培地における大腸菌Ｏ１５７
の発育 本培地Ａ、Ｂ、Ｃ及び対照培地に表１記載の菌種を接種
し、３７℃で１８〜２４時間培養し、各菌の発育状態を
調べた。検体として、１０4ＣＦＵ／ｍＬの各菌液１０
μＬを各培地に白金耳で接種した。糞便混合検体は糞便
１ｇに各菌液を添加し、１０4ＣＦＵ／ｍＬとした糞便
懸濁菌液を作製し、その１０μＬを白金耳で接種した。
の発育 本培地Ａ、Ｂ、Ｃ及び対照培地に表１記載の菌種を接種
し、３７℃で１８〜２４時間培養し、各菌の発育状態を
調べた。検体として、１０4ＣＦＵ／ｍＬの各菌液１０
μＬを各培地に白金耳で接種した。糞便混合検体は糞便
１ｇに各菌液を添加し、１０4ＣＦＵ／ｍＬとした糞便
懸濁菌液を作製し、その１０μＬを白金耳で接種した。
【００２２】
【表１】 ─────────────────────────────── 本培地Ａ 本培地Ｂ 本培地Ｃ ＣＴＳＭＣ ─────────────────────────────── E.coli O157 T40 褐 褐 赤 白 E.coli 0157 T50 褐 褐 赤 白 E.coli 0157 T51 褐 褐 赤 白 E.coli 456 桃 ＮＧ − 桃 E.coli 675 桃 ＮＧ − 桃 E.cloacae 3 桃 ＮＧ − 桃 E.cloacae 606 桃 桃 − 桃 C.freundii 389 桃 ＮＧ − 桃 P.mirabilis 436 ＮＧ ＮＧ − ＮＧ 糞便1 桃 ＮＧ − 桃 糞便1+O157 T40 褐、桃 褐 赤 桃、白 糞便1+O157 T50 褐、桃 褐 赤 桃、白 糞便1+E.cloacae 3 桃 ＮＧ − 桃 糞便1+E.cloacae 606 桃 桃 − 桃 糞便2 桃 ＮＧ − 桃 糞便2+O157 T40 褐、桃 褐 赤 桃、白 糞便2+O157 T50 褐、桃 褐 赤 桃、白 糞便2+E.cloacae 3 桃 ＮＧ − 桃 糞便2+E.cloacae 606 桃 桃 − 桃 ─────────────────────────────── 褐：褐色のコロニー、 桃：桃色のコロニー、 白：コロニーの中心部に褐色がみられる無色のコロニー、 ＮＧ：No growth、コロニーが形成されない。 赤：培地色が赤色、 −：変化なし、培地色が変わらない。
【００２３】本培地Ａ、Ｂにおいて、菌単独でもまた糞
便に混入しても大腸菌Ｏ１５７は褐色のコロニーを形成
し、その他の菌は桃色のコロニーとなった。本培地Ｂで
は本培地Ａより生育しないもの（ＮＧ）が多くみられ
た。対照培地では大腸菌Ｏ１５７は無色のコロニーを形
成し、その他の菌は桃色のコロニーを形成した。本培地
Ｃでは、菌単独でも糞便に混入しても大腸菌Ｏ１５７が
存在すると培地が赤変した。その他の菌では培地色は変
化しなかった。
便に混入しても大腸菌Ｏ１５７は褐色のコロニーを形成
し、その他の菌は桃色のコロニーとなった。本培地Ｂで
は本培地Ａより生育しないもの（ＮＧ）が多くみられ
た。対照培地では大腸菌Ｏ１５７は無色のコロニーを形
成し、その他の菌は桃色のコロニーを形成した。本培地
Ｃでは、菌単独でも糞便に混入しても大腸菌Ｏ１５７が
存在すると培地が赤変した。その他の菌では培地色は変
化しなかった。
【００２４】実施例３ 本培地の感度試験、選択性試
験。 各本培地の感度試験、選択性試験を行った。検体とし
て、表２記載の各菌を普通ブイヨンで１夜培養した菌
を、大腸菌Ｏ１５７は１０1〜１０8ＣＦＵ／ｍＬに１０
倍稀釈し、その他の菌は１０4、１０6ＣＦＵ／ｍＬにな
るように稀釈した。糞便混合検体は、表２記載の菌数と
なるように、１ｇの糞便に各菌液１００μＬ添加し十分
混合して作製した。菌液検体は本培地Ａ、Ｂにはそれぞ
れ１白金耳（１０μＬ）を塗抹接種し、本培地Ｃには滅
菌綿棒で１００μＬの菌液を接種した。糞便混合検体は
本培地Ａ、Ｂ、Ｃとも滅菌プラスチックステイック（採
便棒）で約１０ｍｇを接種した。培養は本培地Ａ、Ｂは
３５℃２４時間、本培地Ｃは２５℃で３日培養した。対
照培地のＣＴＳＭＣは本培地Ａ、Ｂと同様に接種、培養
した。
験。 各本培地の感度試験、選択性試験を行った。検体とし
て、表２記載の各菌を普通ブイヨンで１夜培養した菌
を、大腸菌Ｏ１５７は１０1〜１０8ＣＦＵ／ｍＬに１０
倍稀釈し、その他の菌は１０4、１０6ＣＦＵ／ｍＬにな
るように稀釈した。糞便混合検体は、表２記載の菌数と
なるように、１ｇの糞便に各菌液１００μＬ添加し十分
混合して作製した。菌液検体は本培地Ａ、Ｂにはそれぞ
れ１白金耳（１０μＬ）を塗抹接種し、本培地Ｃには滅
菌綿棒で１００μＬの菌液を接種した。糞便混合検体は
本培地Ａ、Ｂ、Ｃとも滅菌プラスチックステイック（採
便棒）で約１０ｍｇを接種した。培養は本培地Ａ、Ｂは
３５℃２４時間、本培地Ｃは２５℃で３日培養した。対
照培地のＣＴＳＭＣは本培地Ａ、Ｂと同様に接種、培養
した。
【００２５】
【表２】 ────────────────────────────────── 検体 CFU/mL 本培地Ａ 本培地Ｂ 本培地Ｃ ＣＴＳＭＣ ────────────────────────────────── E.coli O157 T50 １０1 − − − − E.coli O157 T50 １０2 ＋ − ＋ − E.coli 0157 T50 １０3 ＋ − ＋ ＋ E.coli 0157 T50 １０4 ＋ ＋ ＋ ＋ E.coli O157 T50 １０5 ＋ ＋ ＋ ＋ E.coli 0157 T50 １０6 ＋ ＋ ＋ ＋ E.coli 0157 T50 １０7 ＋ ＋ ＋ ＋ E.coli 0157 T50 １０8 ＋ ＋ ＋ ＋ E.coli 456 １０4 − − − − E.coli 456 １０6 − − − − E.coli 675 １０4 − − − − E.coli 675 １０6 − − − − E.cloacae 3 １０4 − − − − E.cloacae 3 １０6 − − − − E.cloacae 606 １０4 − − − − E.cloacae 606 １０6 − − − − C.freundii 389 １０4 − − − − C.freundii 389 １０6 − − − − P.mirabilis 436 １０4 − − − − P.mirabilis 436 １０6 − − − − 糞便+O157 T50 １０1 − − − − 糞便+O157 T50 １０2 ＋ − − − 糞便+O157 T50 １０3 ＋ ＋ ＋ ＋ 糞便+O157 T50 １０4 ＋ ＋ ＋ ＋ 糞便+O157 T50 １０5 ＋ ＋ ＋ ＋ 糞便+O157 T50 １０6 ＋ ＋ ＋ ＋ 糞便+O157 T50 １０7 ＋ ＋ ＋ ＋ 糞便+O157 T50 １０8 ＋ ＋ ＋ ＋ ────────────────────────────────── ＋：陽性（本培地Ａ、Ｂは褐色のコロニー、本培地Ｃは赤変） −：陰性
【００２６】本培地Ａは、１０2ＣＦＵ／ｍＬで大腸菌
Ｏ１５７を検出できた。本培地Ｂでは１０3ＣＦＵ／ｍ
Ｌ以上で大腸菌Ｏ１５７の褐色コロニーを検出した。本
培地Ｃでは、１０2ＣＦＵ／ｍＬで培地が赤くなり陽性
となった。尚本培地Ａ、Ｃは対照培地ＣＴＳＭＣより検
出感度が高い結果となった。本培地Ｂは、ＣＴＳＭＣと
同等の感度であった。選択性は本培地Ａ，Ｂ，ＣはＣＴ
ＳＭＣ培地と同等でみなされた。しかし、本培地Ａや対
照培地では１０4以上ではそれぞれのコロニーが重なり
合ってしまったが、本培地Ｂでは単独のコロニーが生育
した。従って本培地Ｂは、大腸菌Ｏ１５７が大量に含ま
れる患者下痢便などの試験に適するとかんがえられた。
Ｏ１５７を検出できた。本培地Ｂでは１０3ＣＦＵ／ｍ
Ｌ以上で大腸菌Ｏ１５７の褐色コロニーを検出した。本
培地Ｃでは、１０2ＣＦＵ／ｍＬで培地が赤くなり陽性
となった。尚本培地Ａ、Ｃは対照培地ＣＴＳＭＣより検
出感度が高い結果となった。本培地Ｂは、ＣＴＳＭＣと
同等の感度であった。選択性は本培地Ａ，Ｂ，ＣはＣＴ
ＳＭＣ培地と同等でみなされた。しかし、本培地Ａや対
照培地では１０4以上ではそれぞれのコロニーが重なり
合ってしまったが、本培地Ｂでは単独のコロニーが生育
した。従って本培地Ｂは、大腸菌Ｏ１５７が大量に含ま
れる患者下痢便などの試験に適するとかんがえられた。
【００２７】実施例４ 本培地Ｃにおける大腸菌Ｏ１５
７の発育 健常者糞便に大腸菌Ｏ１５７、及びE.cloacaeを添加し
た検体を用い、検体輸送中に、本培地Ｃが糞便中大腸菌
Ｏ１５７のスクリーニングに使用可能か確認した。各菌
を１０4ＣＦＵ／ｍＬとなるように添加混合した糞便を
検体とし、その約１０ｍｇを滅菌プラスチックのステイ
ック（採便棒）で本培地Ｃ（スクリーニング培地）に接
種した。２０〜２５℃で培養（放置）し、１日、４日、
７日目に、培地色が赤色に変化したものを、大腸菌Ｏ１
５７が陽性と判定した。
７の発育 健常者糞便に大腸菌Ｏ１５７、及びE.cloacaeを添加し
た検体を用い、検体輸送中に、本培地Ｃが糞便中大腸菌
Ｏ１５７のスクリーニングに使用可能か確認した。各菌
を１０4ＣＦＵ／ｍＬとなるように添加混合した糞便を
検体とし、その約１０ｍｇを滅菌プラスチックのステイ
ック（採便棒）で本培地Ｃ（スクリーニング培地）に接
種した。２０〜２５℃で培養（放置）し、１日、４日、
７日目に、培地色が赤色に変化したものを、大腸菌Ｏ１
５７が陽性と判定した。
【００２８】
【表３】 ──────────────────────────── １日 ４日 ７日 ──────────────────────────── 糞便１ − − − 糞便１＋E.coli O157 T40 ＋ ＋ ＋ 糞便１＋E.coli O157 T50 ＋ ＋ ＋ 糞便１＋E.cloacae 3 − − − 糞便１＋E.cloacae 606 − − − 糞便２ − − − 糞便２＋E.coli O157 T40 ＋ ＋ ＋ 糞便２＋E.coli O157 T50 ＋ ＋ ＋ 糞便２＋E.cloacae 3 − − − 糞便２＋E.cloacae 606 − − − ──────────────────────────── ＋：陽性（赤変） −：陰性
【００２９】本培地Ｃでは、大腸菌Ｏ１５７が糞便中に
含まれるものは赤変した。大腸菌Ｏ１５７が混入してい
ない検体では、培地の変化はみられなかった。E.cloaca
eの一部（約１５％）には大腸菌Ｏ１５７と同様にズル
シットを分解するものが存在し、従来の培地では大腸菌
Ｏ１５７と同様に生育することが知られている。表３の
E.cloacae２株はズルシット分解性の菌であるが、本培
地では大腸菌Ｏ１５７とは異なった挙動を示した。
含まれるものは赤変した。大腸菌Ｏ１５７が混入してい
ない検体では、培地の変化はみられなかった。E.cloaca
eの一部（約１５％）には大腸菌Ｏ１５７と同様にズル
シットを分解するものが存在し、従来の培地では大腸菌
Ｏ１５７と同様に生育することが知られている。表３の
E.cloacae２株はズルシット分解性の菌であるが、本培
地では大腸菌Ｏ１５７とは異なった挙動を示した。
【００３０】実施例５ 実際の糞便検体の使用 実際の検便検体２５例を本培地Ａ、Ｂ、Ｃと対照培地に
接種し、その差異を調べた。検便検体２５例より、その
１０ｍｇを各培地に採便棒で接種し、３７℃で１８〜２
４時間培養し、コロニーの発育状況を比較した。本培地
Ａ、Ｂでは褐色のコロニーを形成したものを、本培地Ｃ
では培地色が赤変したものを、対照培地では無色のコロ
ニーを形成したものを、大腸菌Ｏ１５７陽性と判定し
た。
接種し、その差異を調べた。検便検体２５例より、その
１０ｍｇを各培地に採便棒で接種し、３７℃で１８〜２
４時間培養し、コロニーの発育状況を比較した。本培地
Ａ、Ｂでは褐色のコロニーを形成したものを、本培地Ｃ
では培地色が赤変したものを、対照培地では無色のコロ
ニーを形成したものを、大腸菌Ｏ１５７陽性と判定し
た。
【００３１】
【表４】 ────────────────────────── 検体番号 本培地Ａ 本培地Ｂ 本培地Ｃ ＣＴＳＭＣ ────────────────────────── １ − − − − ２ − − − − ３ − − − − ４ ＋ ＋ ＋ ＋ ５ − − − − ６ − − − − ７ − − − − ８ − − − − ９ − − − − １０ − − ＋ ＋ １１ − − − − １２ − − ＋ ＋ １３ − − − − １４ − − − − １５ − − − − １６ − − ＋ ＋ １７ − − − − １８ − − − − １９ − − − − ２０ − − − − ２１ − − − − ２２ − − ＋ ＋ ２３ − − − − ２４ − − − − ２５ − − − − ────────────────────────── ＋：陽性 −：陰性
【００３２】本培地Ａ、Ｂでは大腸菌Ｏ１５７だけが褐
色の集落を形成し、本培地Ｃでは、大腸菌Ｏ１５７以外
にも陽性にでたものがあるが、偽陰性はなかった。ＣＴ
ＳＭＣ培地は、大腸菌Ｏ１５７以外でも陽性となった。
本培地ＣとＣＴＳＭＣ培地で偽陽性を示したコロニーを
分離し、バイオテスト１号（栄研化学社製）及びＣＬＩ
Ｇ培地に接種し、確認試験及び同定試験を行ったとこ
ろ、エンテロバクター属菌とクリューベラ属菌であっ
た。本培地Ａ、ＢはＣＴＳＭＣ培地よりも高選択性であ
った。
色の集落を形成し、本培地Ｃでは、大腸菌Ｏ１５７以外
にも陽性にでたものがあるが、偽陰性はなかった。ＣＴ
ＳＭＣ培地は、大腸菌Ｏ１５７以外でも陽性となった。
本培地ＣとＣＴＳＭＣ培地で偽陽性を示したコロニーを
分離し、バイオテスト１号（栄研化学社製）及びＣＬＩ
Ｇ培地に接種し、確認試験及び同定試験を行ったとこ
ろ、エンテロバクター属菌とクリューベラ属菌であっ
た。本培地Ａ、ＢはＣＴＳＭＣ培地よりも高選択性であ
った。
【００３３】
【発明の効果】従来は、食材などからの分離に使われる
培地はあったが、糞便のように雑菌が多量に含まれてい
るものには向かなかった。本培地は、雑菌が多量にいる
糞便からでも熟練された技術を必要とせず大腸菌Ｏ１５
７が分離できる。スクリーニング培地では、糞便を輸送
する段階で大腸菌Ｏ１５７の存在が疑われる検体を選択
でき、試験する検体の数を削減できる。
培地はあったが、糞便のように雑菌が多量に含まれてい
るものには向かなかった。本培地は、雑菌が多量にいる
糞便からでも熟練された技術を必要とせず大腸菌Ｏ１５
７が分離できる。スクリーニング培地では、糞便を輸送
する段階で大腸菌Ｏ１５７の存在が疑われる検体を選択
でき、試験する検体の数を削減できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QA07 QA18 QA19 QQ03 QQ06 QR41 QR43 QR44 QR48 QR50 QR66 QR68 QR69 QR75 QS10 QS36 QX01 4B065 AA26X BB02 BB03 BB04 BB13 BB14 BB15 BB19 BB23 BB29 CA46
Claims (12)
- 【請求項１】 ノボビオシン、亜テルル酸カリウム、セ
フィキシム、アミカシンを含有する大腸菌Ｏ１５７選択
発色培地。 - 【請求項２】 培地１０００ｍＬあたり、ノボビオシン
１−５０ｍｇ、亜テルル酸カリウム１−４０ｍｇ、セフ
ィキシム０．０１−０．１ｍｇ、アミカシン０．０１−
０．１ｍｇを含有する請求項１記載の大腸菌Ｏ１５７選
択発色培地。 - 【請求項３】 培地１０００ｍＬ当たり以下の組成を含
有する請求項１記載の大腸菌Ｏ１５７選択発色培地。 【組成１】 ──────────────────────── ペプトン ５−２０ｇ 酵母エキス １−１０ｇ 塩化ナトリウム ５−３０ｇ 胆汁酸塩 ０．５− ５ｇ Ｄーソルビット １−３０ｇ ニュートラルレッド ３−１００ｍｇ ノボビオシン １−５０ｍｇ 亜テルル酸カリウム ２−４０ｍｇ アミカシン ０．０１−０．２ｍｇ セフィキシム ０．０１−０．１ｍｇ カンテン ５−２０ｇ ──────────────────────── - 【請求項４】 請求項１〜３記載の選択発色培地に糞便
検体もしくは糞便検体懸濁液を接種して培養した後、当
該培地上の褐色集落の有無を検出することを特徴とする
糞便中大腸菌Ｏ１５７の検出方法。 - 【請求項５】 亜テルル酸カリウム、セフィキシム、ア
ミカシン、ゲンタマイシンを含有する大腸菌Ｏ１５７簡
易検出用培地。 - 【請求項６】 培地１０００ｍＬあたり、亜テルル酸カ
リウム１−４０ｍｇ、セフィキシム０．０１−０．１ｍ
ｇ、アミカシン０．０１−０．１ｍｇ、ゲンタマイシン
０．０１−０．１ｍｇ、を含有する請求項５記載の大腸
菌Ｏ１５７簡易検出用培地。 - 【請求項７】 培地１０００ｍＬあたり、以下の組成を
含有する請求項５記載の大腸菌Ｏ１５７簡易検出用培
地。 【組成２】 ──────────────────────── ペプトン ５−２０ｇ 酵母エキス １−１０ｇ 塩化ナトリウム ３−３０ｇ 胆汁酸塩 ０．５− ５ｇ Ｄ−ソルビット １−３０ｇ ニュートラルレッド ３−１００ｍｇ 亜テルル酸カリウム １−４０ｍｇ セフィキシム ０．０１−０．１ｍｇ アミカシン ０．０１−０．５ｍｇ ゲンタマイシン ０．０１−０．１ｍｇ カンテン ５−２０ｇ ──────────────────────── - 【請求項８】 請求項５〜７記載の簡易検出用培地に糞
便検体もしくは糞便検体懸濁液を接種して培養した後、
当該培地上の褐色集落の有無を検出することを特徴とす
る糞便中大腸菌Ｏ１５７の検出方法。 - 【請求項９】 亜テルル酸カリウム、ノボビオシン、セ
フィキシム、アンホテリシンＢ、ズルシット、及びペプ
トン１−５ｇ／１０００ｍＬを含有する大腸菌Ｏ１５７
スクリーニング用培地。 - 【請求項１０】 培地１０００ｍＬあたり、亜テルル酸
カリウム１−１００ｍｇ、ノボビオシン１−１００ｍ
ｇ、セフィキシム０．０１−１ｍｇ、アンホテリシンＢ
１−２０ｍｇ、ズルシット１−３０Ｇ、ペプトン１−５
ｇを含有する請求項９記載の大腸菌Ｏ１５７スクリーニ
ング用培地。 - 【請求項１１】 培地１０００ｍＬあたり、以下の組成
を含有する請求項９記載の大腸菌Ｏ１５７スクリーニン
グ用培地。 【組成３】 ──────────────────────── ペプトン １− ５ｇ 塩化ナトリウム ３−３０ｇ 胆汁酸塩 ０．５− ５ｇ リン酸塩 ０．１−１０ｇ アンドレイド試薬 １０−４０ｍＬ ズルシット １−３０ｇ 亜テルル酸カリウム １−１００ｍｇ ノボビオシン １−１００ｍｇ セフィキシム ０．０１−０．２ｍｇ アンホテリシンＢ １−２０ｍｇ カンテン ０−１０ｇ ──────────────────────── - 【請求項１２】 請求項９〜１１記載のスクリーニング
用培地に糞便検体もしくは糞便検体懸濁液を接種して輸
送もしくは培養した後、輸送中もしくは培養中に生じた
当該培地の色変化の有無を検出することを特徴とする糞
便中大腸菌Ｏ１５７のスクリーニング方法。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001089525A JP2002281959A (ja) | 2001-03-27 | 2001-03-27 | 糞便中大腸菌ｏ１５７の検出用培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001089525A JP2002281959A (ja) | 2001-03-27 | 2001-03-27 | 糞便中大腸菌ｏ１５７の検出用培地 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002281959A true JP2002281959A (ja) | 2002-10-02 |
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ID=18944444
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| JP2001089525A Pending JP2002281959A (ja) | 2001-03-27 | 2001-03-27 | 糞便中大腸菌ｏ１５７の検出用培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002281959A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014121338A (ja) * | 2008-09-01 | 2014-07-03 | Eiken Chemical Co Ltd | 腸管出血性大腸菌検出用培地および検出方法 |
-
2001
- 2001-03-27 JP JP2001089525A patent/JP2002281959A/ja active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014121338A (ja) * | 2008-09-01 | 2014-07-03 | Eiken Chemical Co Ltd | 腸管出血性大腸菌検出用培地および検出方法 |
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