JPH03220131A - カソキシンｃを有効成分とする血圧降下剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 主！上度机尻分立 本発明は、カッキシン（Ｃａｓｏｘｉｎ）Ｃのアミノ酸
配列をペプチド構造中に含むペプチドを有効成分とする
血圧降下剤に関する。

災米坐伎歪 Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃは、吉川らにより発見されたペプチ
ド（Ｙｏｓｈｉｋａｗａ他、ジャーナル　オブ　デイリ
ーリサーチ誌（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｄａｉｒｙ　Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈ）＋　５６巻３６３〜３６６、１９８９
年〕でに一カゼインを酵素分解して得られ、また、化学
合成でも得ることができる。

Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃは、オピオイド活性阻害作用を持つ
物質（オピオイドアンタゴニスト）として単離された。

このようなオピオイドアンタゴニストとしては他にＣａ
５ｏｘｉｎ　Ａ、　Ｃａ５ｏｘｉｎ　４．　Ｃａ５ｏｘ
ｉｎ　６など多数のペプチドが分離されている。

本発明者らは、これらのペプチドの生理効果を研究する
過程に於いて、Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃが強いアンジオテン
シン変換酵素阻害活性を有することを見い出した。

Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃがこのような活性を有することは、
本発明者らが初めて見出したものであり、これまでの文
献には未記載である。アンジオテンシン変換酵素阻害活
性を有するペプチドとしては、ヘビ毒由来のペプチドや
特公昭６０−２３０８５号公報、同６０−２３０８６号
公報、同６０−２３０８７号公報に開示されている牛カ
ゼイン由来のペプチド、その他のペプチドが発表されて
いる。Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃはこれらのペプチドとアミノ
酸配列が異なっており、さらにオピオイドアンタゴニス
ト活性も有することから極めて有用なペプチドである言
える。

が“　しよ゛と　る　　占 本発明は、Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃ又はＣａ５ｏｘｉｎ　Ｃ
のアミノ酸配列をもつペプチドを有効成分とする血圧降
下剤を提供することを課題とする。

課屈壬邂決工ゑ食汝久王殺 本発明に示ずＣａ５ｏｘ：ｎ　Ｃ、若しくはＣａ５ｏｘ
：ｎ　Ｃのアミノ酸配列をペプチド構造に含むペプチド
は、カゼインの酵素加水分解物をＨＰＬＣ処理に付する
ことにより得られる。又、化学的に合成したり、ペプチ
ドシンセサイザーを使用して合成することも可能である
。いずれにしても目的とするペプチドはＴｙｒ−Ｉ　Ｅ
　ｅ−Ｐｒｏ−Ｉ　ｌ２ｅ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ　
−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｒｇの配列を含むことが必要であ
り、両末端の片方または両方に数個のアミノ酸が伸長さ
れたものであってもよい。また、両末端の片方または両
方のアミノ酸が１個程度はずれたものであってもよい。

これらは、Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃと同様の血圧膝下作用を
示す限り、本発明におけるププチドに含まれる。

ペプチドをカゼインから得る場合には上述したジャーナ
ル　オブ　デイリー　リサーチ誌に記載される方法に従
って酵素加水分解し、ＨＰＬＣ処理を行って精製して得
ることができる。即ち、に−カゼインをトリプシンによ
り３７°Ｃで酵素分解し、次いで酵素を１００　’Ｃで
１０分間加熱処理し、失活させた後、遠心を行い上清を
得る。この上清をオクタデシルシリル（ＯＤＳ）カラム
（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ　５Ｃ＋ｓ）などの逆相ＨＰＬＣカ
ラムにより、アセトニトリルＯ〜６０％濃度勾配で溶出
し、目的とするペプチドを得ることができる。合成する
場合には、市販のペプチド合成装置、例えばバイオリサ
ーチ社製ＳＡＭ２ペプチドシンセサイザーなどを用いて
合成することができる。このようにして得られたＣａ５
ｏｘｉｎ　Ｃ，若しくはＣａ５ｏｘｉｎ　Ｃのアミノ酸
配列をペプチド構造中にもつペプチドは、血圧降下剤と
して、そのまま若しくは製剤化して使用することができ
る。

これらのペプチドは生体内ですみやかに分解されるため
通常の血圧降下剤と比較して毒性も低く、又副作用もな
い。

ペプチドの特徴として消化管内で分解されやすいため治
療剤として使用するためには、旺射剤や、鼻腔噴霧剤、
座刑などの投与形態が適するが、マイクロカプセル化や
、プロテアーゼ阻害剤との併用により経口剤として投与
することもできる。

製剤化にあたっては、通常使用される賦型剤、安定化剤
であれはどのようなものでも使用することができる。−
船釣には、ヒト血清アルブミンを安定化剤として液量中
に１〜２％含有させる方法、マンニトール、デキストラ
ンなどの水溶剤と製剤化する方法があげられる。また、
必要に応じて凍結乾燥製剤とし、用時溶解する形態にす
ることもできる。治療に用いる場合には、０．１〜５■
／ｋｇの用量で投与することで血圧降下剤として作用さ
せる口止が可能である。

以下に実施例を示し、さらに本発明の詳細な説明する。

実施例ｌ Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃを含む注射剤の製造（１）ペプチド
合成により得たＣａ５ｏｘｉｎ　Ｃ１０ｇを１１の生理
食塩水にｌ容解し、フィルター滅菌した後、ｌ−容のア
ンプルに１戚ずつ充填し、溶封した。本アンプル中には
１０■のＣａ５ｏｘｉｎ　Ｃが含有されている。

（２）ペプチド合成により得たＣａ５ｏｘｉｎ　Ｃ１０
ｇ、ヒト血清アルブミン２５００■を注射用蒸留水によ
り熔解し全量を１１とした。この組成液をミリポアフィ
ルタ−により滅菌し、バイアル瓶にｌｄずつ分注し、凍
結乾燥後密封した。このバイアルを１ｍの生理食塩水に
溶解することにより、１０■のＣａ５ｏｘｉｎ　Ｃを含
有する注射液が作成された。

実施例２ 本実施例において、Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃのアンジオテン
シン変換酵素阻害活性及び血圧降下効果を説明する。

（１）アンジオテンシン変換酵素阻害活性先ず、５ｇの
ラビットラングアセトンパウダ−を５０ｄの０．１　Ｍ
ホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝８．３）に溶かし、４
００００Ｇ　、４０分の条件下で遠心処理し、その上澄
液をさらに上記緩衝液で５倍に希釈して、アンジオテン
シン転換酵素液を得た。

Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃを含む試料を試験管に０．０Ｍ！入
れ、これに基質として、０．２５ｄのヒプリルヒスチヂ
ルロイシン（最終濃度５　ｍＭ、　ＮａＣｌ　３００ｍ
Ｍを含む）を添加し、３７°Ｃで１０分間保温後、上記
酵素液を０．１　ｄ添加し、３７°Ｃで３０分間反応さ
せた。

その後、ＩＮ塩酸０．２５−を添加して反応を停止させ
た後、１．５　ｍｌ！の酢酸エチルを加え、酢酸エチル
中に抽出されたヒプリル酸の吸収２２８ｎｍの値を測定
し、これを酵素活性とした。なお、この条件でＣａ５ｏ
ｘｉｎ　Ｃを含まない場合の２２８ｎｍの吸収値はほぼ
０．２５である。

このような実験を複数行い、阻害率を次の式％式％（） Ａ　：　Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃを含まない場合の２２８ｎ
ｍの吸収値（０，２５） Ｂ　：　Ｃａ５ｏｘｉｎ　Ｃ添加の場合の２２８ｎｍの
吸収値阻害率５０％の時のＣａ５ｏｘｉｎ　Ｃ濃度ＩＤ
、。を求めたところ３．８μＭであった。

（２）血圧隣下効果 ４００ｇの雄ラットを用い、ウレタン麻酔下に頚動脈に
カニユーレを挿入し、このカニユーレを圧トランスジュ
ーサーに接続してポリグラフに記録するようにした。

大腿静脈より実施例１（１）で製造した本発明の血圧降
下剤を投与し血圧の降下を観察した。５■／ｋｇの投与
で１２０ｍｍＨｇの血圧が９０ｍｍＨｇに降下すること
が観察された。

光凱夏四果 本発明の実施によりアンジオテンシン変換酵素阻害活性
とともにオピオイドアンタゴニスト活性をあわせ持つ新
規な血圧降下剤を提供することができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下記配列をペプチド構造に含むペプチドを有効成分とす
   る血圧降下剤 Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｖ
   ａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ