JPH03197432A - 抗エイズウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、カカオ豆などの水抽出物を含有する抗エイズ
ウィルス剤に関するものである。

（従来技術および発明が解決しようとする課題）エイズ
（Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓ、　ａｃｑｕｉｒｅｄ　ｉｍｍｕｎｏ
ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｓｙｎｄｒｏｍｅ）は、ＨＩ　Ｖ
　（ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖ
ｉｒｕｓ）と呼ばれているヒトリンパ球好性レトロウィ
ルスがＴ４’ｌンパ球に感染して引き起こされ、日和見
感染症や悪性腫瘍等を併発し、非常に死亡率の高い疾患
であり、近年特に問題となっている。

そこで、エイズ治療薬として数多くの化合物が研究され
ているが、未だに充分に治療効果があるものはなく、現
在のところ認可されているのはアジドチミジン（Ａ　Ｚ
　Ｔ）のみである。

ＡＺＴの作用機作は、エイズウィルスのＲＮＡからＤＮ
Ａへの合成の制御に関するので、感染細胞から非感染細
胞への感染、いわゆるｃｅｌｌ　ｔ。

ｃｅｌｌ系の感染に対しては効果がないとされている。

しかし、ｃｅｌｌ　ｔｏ　ｃｅｌｌ系の感染による巨細
胞形成は宿主に重大な影響を及ぼし、エイズの発症に関
係するといわれている。更に、ＡＺＴに対する面寸性株
も発見されているため、ＡＺＴに代わる治療薬や併用薬
剤が求められている。

（課題を解決するための手段） 我々は、タンニン、タンニン、松かさ等の植物抽出物に
含有されるポリフェノール系化合物に抗ウィルス作用が
８忍められることに着目し、食用天然着色料として安全
性が確認され、長期間利用されてきたカカオ豆殻なとか
ら抽出されるカカオ色素についてエイズウィルスに対す
る抑制効果を調べたところ、エイズウィルスに対しｃｅ
ｌｌ　ｆｒｅｅ系の感染のみならず、ｃｅｌｌ　ｔｏ　
ｃｅｌｌ系の感染をも抑制する効果があることを見出し
、新規な抗エイズウィルス剤を発明するに至った。

すなわち、本発明は、カカオ豆、タマリンド、コウリア
ンの実又はその殻を９１１４以上の水溶液もしくは含水
溶媒で抽出した抽出液であって、分子量が２万以上の化
合物を含有する該抽出液を含むことを特徴とする抗エイ
ズウィルス剤を提供する。

本発明で抽出を行うために使用する原料としては、生又
は乾燥したカカオ豆、タマリンド、コウリャンの実又は
その殻があげられる。このうち、カカオ豆の殻が好まし
、い。

本発明では、上記抽出原料に任意の量の水を加えて抽出
を行う。ここで、抽出効率を上げるために、抽出原料を
粉砕したものを使用するのが好ましく、水を加えた後、
酸またはアルカリ剤を加えて、水溶液のＰＨを４以上、
好ましくは９以上、特に好ましくはＰＨ９〜１２に副整
する。又、予、６ＰＨ調整した水を加えることもできる
。

本発明で；よ、水の代わり；こ含水溶媒を１吏用するこ
ともでき、このような含水溶媒としでは、エタノール、
メタノール、プロパツール、メタノール、アセトンなど
の親水性溶媒の含水溶媒を使用するのがよい。通常、抽
出原料１００重量部当たり、１０〜５０重量部の水又は
含水溶液を加えるのがよい。抽出は任意の温度で行うこ
とができるが、５０〜１００℃の熱水で行うのがよい。

上記のようにして、中性からアルカリ性で熱水抽出した
抽出液の中には、同時に酸性多糖の様なガム質や有機酸
類、カフェイン、テオブロミンの様なキザンチンも抽出
されて混入しているため、そのままでは純度が低い場合
が多い。そこで例えば、特公昭５４−１０５６７号公報
に記載の方法により、カカオ豆殻を微アルカリ性で蒸煮
することによってガム質等の不純物と共に色素を抽出し
、塩酸等によってｐＨを強酸性にしてアセトンを加えて
ガム質を分離し、次に、このガム質を除去したアセトン
液を中性から微アルカリ性にすることによってカカオ色
素を純度よく得る方法に準じることができる。本発明は
、この様な精製方法に何ら制約を受けるものではないが
、カカオ色素以外の様々な不純物をある程度除去して得
られた色素組成物を、限外濾過等の方法によって分子量
分画を行ない、分子量２万以上、特に５万〜３０万の物
質を含有する画分が、高い抗エイズウイルス活性を有す
ることに基つく。すなわち、本発明の抽出物はエイズウ
ィルスをＭＴ−２及び１ｖＩＴ−４細胞にｃｅｌｌ　　
ｆｒｅｅ感染系て作用させる方法、そしてエイズウィル
スに感染したＭＯＬＴ−４細胞を非感染のＭＯＬＴ−４
細胞に感染させる両方法において優れた抗エイズウィル
ス効果を有することが確認できた。

本発明の抽出物のＤＤＹ系マウスによる急性経口毒性試
験結果は１０　ｇ／ｋｇ−ｂジノ以上であった。

本発明の抽出物は０．５〜５０ｇ／回で経口投与するこ
とができ、また５〜５０Ａ１ｇ／回で皮下注射すること
ができる。

本発明の抽出物中の分子量２万以上の物質の構造は確か
ではないが、カカオ豆殻などに存在しているカテキン、
ロイコアンドンアニン、アンドンアニン等のフラボノイ
ド化合物がカカオ豆の収穫後に発酵、乾燥処理が加えら
れることによって、酵素作用、酸化、縮重合等の複雑な
過程を経て生成したカカオ色素であると推定され、この
ものは比較的分子量の大きなフラボノイド化合物である
と考えられる。

（発明の効果） 本発明の抽出物に含まれるフラボノイド化合物は、古く
から食されてきたチョコレートやココアと原料を同じく
する食用天然色素であり、安全かつ安定な物質である。

そして、本発明の抽出物によれば、ｃｅｌｌ　ｆｒｅｅ
系のみならずｃｅｌｌ　ｔｏ　ｃｅｌｌの感染にも抗エ
イズウイルス活性を有することが明らかになり、エイズ
治療薬として使用可能である。

（実施例） 次に、本発明を実施例により説明する。

実施例１ カカオ豆殻４００ｇに１／　１０　Ｎ　　ＮａＯＨ５Ｒ
を加え、１時間煮沸後、濾過して粗色素液を得た。

この色素液を約１βに濃縮し、濃塩酸０．１！、アセト
ンＩＩ！を加えて撹拌後、遠心分離によりガム質を除去
した。色素液に、Ｎａ０ｆｌ　５２　ｇを加えてｐＨ１
０に調整し、生じた沈殿を遠心分離によりカカオ色素組
成物４１ｇを得た。この色素組成物を分離したアセトン
液には、まだカカオ色素組成物が含まれているため、塩
酸でｐＨを８に調製後、減圧濃縮してアセトンを除去し
、残液をミリポア限外濾過膜１０１００ＯＮ　（ＭＷ１
００Ｏカットトフ）で脱イオン水を補充しつつ、濾液の
塩素イオンがなくなるまで濾過を続けた。こうして得ら
れた色素液を、更にアミコン限外濾過チューブＣＦＣＦ
２５（２５，０００カツトオフ）で濾過し、濾液、濃縮
液ともに凍結乾燥してそれぞれ乾燥品１．２ｇと２．３
ｇを得た。両乾燥品（乾燥抽出物）を以下の抗エイズ活
性試験に供した。

修生血清を１０％添加したＲＰＭＩ培養液（１０％ＦＣ
３ＲＰＭＩ液）に両乾燥抽出物を溶解し、１０２４μｇ
／ｍｌに調製した。これを同培養液を用いて倍々稀釈し
、２μｇ／ｍｊ２まで９水準の濃度を乾燥抽出物添加培
養液を調製した。次に、これらをミリポアフィルタ−（
ポアーサイズ０，２２μｍ）で濾過除菌し、９６六マイ
クロプレートに１００μβ宛注入した。

エイズウィルスの感染はＭＴ４細胞（ＩＸＩＯ’個）に
１００ＴＣＩＤ５ｏのエイズウィルスを３７℃、１時間
作用させ、３７℃で３日間培養した。抑制効果の判定は
ＭＴ４細胞の傷害度を見て判定した。同時にエイズウィ
ルスを加えないコントロール及び乾燥抽出物を加えない
ポジティブコントロールも１００μβ注入して試験した
。

乾燥抽出物の用量と抗エイズウィルス活を表１に示す。

表−１ （註）判定基準　細胞増殖度（多）○〉△〉×（少）ウ
ィルスによる細胞傷害度 （低）−＜士〈十〈←＜　−１４（高）表−１より明ら
かな様に、分子量２５万以上の抽出物を３２μｇ／ｍβ
〜２５６μｇ／ｍβの濃度で加えた時に、抗エイズウイ
ルス活性が確認された。

尚、実施例１でえられた抽出物の赤外吸収スペクトルを
第１図に示し、第２図に可視紫外吸収スペクトルを示す
。また、本抽出物について高速液体クロマトグラフィー
を カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ　５Ｃ１８４，５ｍｍＸ　１
５０ｍｍ溶媒：　ＭｅＯＨ：　０．２％〈ＮＨ４＞２Ｈ
ＰＯ４＝　３５　：　６５流速：　０．５　ｍｆ！、／
ｍｉｎ 検出器：ＴＯ３ＯＨＵＶ−８０００ 検出波長：２５４ｎｍ の条件で行ったところ、分子Ｍ２．５万以上の物質の保
持時間は約２５分であった。

実施例２ 実施例１に準じて、分子量２．５万以上の両分の抽出物
とエイズウィルス及びＭＴ４細胞を培養して、細胞増殖
度、細胞傷害度を調べた結果を表２に示す。

実施例１と同様に、３２μｇ／ｍβ〜２５６μｇ０ ／ｍβの濃度において抗エイズウイルス活性が認められ
た。

表−２ エイズウィルスに感染したＭＯＬＴ４細胞と非感染ＭＯ
ＬＴ４細胞をそれぞれ５　ＸＩＯ３／ｍｆｆとなる様に
混合し、更に抽出物と混合後、３７℃で３日間培養した
。試験結果は表−３に示した様に、１６１−１ｇ／ｍ１
〜２５６μｇ　７ｍ　ｌの濃度において巨細泡形成は見
られず、本抽出物のｃｅｌｌ　ｔｏ　ｃｅｌｌ系でのエ
イズウィルス感染に対する制御効果が確認された。

表−３ 実施例３ 実施例１に準じて、分子量２５万以上の画分の抽出物を
１０％ＦＣ３ＲＰＭＩ培養液に４μｇ／ｍβ〜５１２μ
ｇ／ｌＴｌβとなる様に溶解した。次に、１ ２ 実施例４ 実施例１で調製したカカオ抽出物４１ｇのうち３０ｇを
脱イオン水５００　ｍβに溶解し、東ソー■限外濾過モ
ジュールＵＰ−ＬＭＳ■に限外濾過膜ＵＰ−２Ｃ３−５
０ＰＳ　（ＭＷ５万カットオフ）、ＵＦ−２Ｃ３−１０
０ＰＳ　（ＭＷＩ　Ｏ万カットオフ）及びＵＦ−２Ｃ３
−３００ＰＳ　（〜ＩＷ３０万カットオフ）を装着し、
脱イオン水を補充しつつ残留液を順次限外濾過した。即
ち、分画分子量５万〜１０万、１０万〜３０万、３０万
以上の４画分に分け、それぞれの両分の収量は０．８ｇ
、２．８ｇ、１２．０ｇであった。各両分の抗エイズウ
イルス活性を、実施例１に準じて評価した結果を表−４
に示す。

表−４ 表に示した様に、分子Ｍ５万〜３０万のカカオ抽出物に
強い抗エイズウイルス活性が確認された。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抽出物の赤外吸収スペクトルを示し、
第２図はその可視紫外吸収スペクトルを示す。 ３ ４ 符開ｙ［′− ３ １！Ｊ’／４；慴（０） １冒 手 続 補 正 書

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. カカオ豆、タマリンド、コウリャンの実又はその殻をｐ
   Ｈ４以上の水溶液若しくは含水溶媒で抽出した抽出液で
   あって、分子量が２万以上の化合物を含有する該抽出液
   を含むことを特徴とする抗エイズウィルス剤。