JPH03157329A - ポリプレノイド化合物を含有する脂肪乳剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はポリプレノイド化合物を含有する脂肪乳剤に関
する。さらに詳しくは、医薬品として有用なポリプレノ
イド化合物の投与に適した脂肪乳剤に関する。

〔従来の技術〕

ポリプレノイド化合物は種々の幅広い生理活性を示し例
えば、癌増殖抑制、癌転移抑制、分化誘導、血球産生能
改善、肝機能改善など有用な生理作用により、医薬品と
しての開発が期待されている。しかしながらポリプレノ
イド系化合物は一般に医薬品として利用可能な溶媒に対
する溶解性が極めて低く、有効な投与を可能にする製剤
化方法の開発が重要な課題であった。

従来、ポリプレノイド化合物およびその近緑化合物を実
験動物に対して懸濁液として注射する方法、油脂類に溶
解して経口投与する方法［Ｊｐｎ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅ
ｒ　Ｒｅ５（Ｇａｎｎ）、７７巻、３５１−３５５頁（
１９８６）］　、　リポソームに含有させて投与する方
法（特開昭６２−３９５２１）などが試みられてきた。

〔発明が解決しようとする課題〕

ポリプレノイド化合物を懸濁液として投与する方法は、
該化合物の薬理効果を減退させるという欠点を伴なう他
に、静脈内投与には適さず、また油脂類に溶解して投与
する方法も静脈内投与には適用し難い。さらにまた、ポ
リプレノイド化合物をリポソーム製剤とする場合に同製
剤は呆存安定性が悪いために医薬品としての応用に限界
がある等の欠点があった。従ってポリプレノイド化合物
を、静脈内投与を含む幅広い投与ルートで安全に人体に
投与することが出来、かつ保存安定性が良好な製剤とす
る方法の開発が強く求められていた。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、ポリプレノイド化合物を経口投与、皮下
投与、静脈内投与等幅広い投与ルートで医薬品（例えば
、癌転移抑制剤、癌転移抑制剤、細胞分化誘導剤）とし
て適用することが可能な製剤化方法を鋭意検討した結果
、同化合物を粒子径の小さい脂肪乳剤とすることにより
、保存安定性が良好なポリプレノイド化合物含有製剤の
作製に成功して本発明を完成した。

すなわち、本発明は次の一般式、 ＣＨｌ ［式中、−ＣＨｔ−Ｃ−Ｃ−Ｃｌ＋！−はトランス型イ
ソプレン単■ Ｑは２〜８の整数、ｍは０または５〜１８の整数、ｎは
０または１を示し、Ｑ十ｍは８〜２０の範囲にある。Ｘ
は水素原子または式−ＰＯ，Ｒ（Ｒは水素原子またはナ
トリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム等のカ
チオンを示す。）で示される基を意味する。１で表わさ
れるポリプレノイド化合物と油成分、乳化剤および水を
混合してなる脂肪乳剤に関する。

上記したポリプレノイド化合物の具体例としては、 ソラネソールーリン酸ニアンモニウム塩（化合物Ａ） １−ジヒドロデカプレノール−リン酸ニアンモニウム塩
（化合物Ｃ） 炭素ぶ十数が４５から６０のポリプレノールの混合物（
化合物Ｄ） 炭素原子数が５０から６０のα−ジヒドロポリプレノー
ルの混合物（化合物Ｅ） α−ジヒドロデカプレノール（化合物Ｂ）炭素原子数が
７５から１１０のドリコール−リン酸ニアンモニウム塩
の混合物（化合物Ｆ）ａ−ジヒドロデカブレニル−リン
酸（化金物Ｇ） α−ジヒドロデ力ジグレニル−リン酸二ナトリウム塩化
合物Ｈ） などの化合物が挙げられる。

上記化合物Ａ１ＢおよびＣは、Ｊｐｎ、　　Ｊ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　（Ｇａｎｎ）、　７６＋　７
６０−７７０．　Ａｕｇｕｓｔ。

１９８５に記載の方法によって製造することができる。

これらの化合物の毒性は極めて低く、例えばマウス（Ｉ
ＣＲ雄）に対して腹腔内投与した場合、ＬＤｉｏ＞　１
９／　ｋｇの急性毒性しかなかった。

本発明の脂肪乳剤における油成分としては、製薬の技術
分野における脂肪乳剤の調製に際して通常用いられる製
薬上許容されうる油脂類の総べてか使用可能であって、
かかる油脂類の具体例としては、大豆油、綿実油、ナタ
ネ油、サフラワー油、ゴマ油、米ヌカ油、コーン胚芽油
、ヒマワリ油などの植物油、ニシン油、イワシ油、イカ
油なとの魚油またはこれら植物油または魚油の部分水素
添加処理で得られるかエステル交換反応で得られる油、
などを挙げることができる。

更に天然に産生ずるか、または天然に産生じたものを分
別あ理（例えば溶剤分別、脱ろう処理など）および／ま
たはエステル交換処理して得られる一般にＭＣＴと呼称
される炭酸数８〜１２の中鎖長の脂肪酸のトリグリセリ
ド、例えばパーム油、分別パーム油などの液体油もこの
油成分として使用することができる。

更にまた炭酸数６〜１８の脂肪酸のジまたはモノグリセ
リドの一つまたはこれらジまたはモノグリセリドの二つ
以上の混合物もこの油成分として使用することができる
。

本発明の脂肪乳剤における乳化剤としては、製薬上許容
されうるりン脂質および非イオン性界面活性剤の一つま
たは二つ以上の混合物を使用することが可能であって、
リン脂質としては卵黄リン脂質の例えば卵黄レシチン、
大豆リン脂質の例えば大豆レシチン、これらの水素添加
生成物、７オスフアチジルコリン、フオスファチジルエ
タノールアミンなどが挙げられる。また非イオン性界面
活性剤としては、分子量８００〜２０．０００の高分子
系のもの、例えばポリオキシエチレン−ポリオキシプロ
ピレン共重合体、ポリオキシエチレンアルキルエーテル
、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、硬化
ヒマシ油ポリオキシエチレン誘導体などを挙げることが
できる。

本発明の脂肪乳剤は、上記した通り、ポリプレノイド化
合物と、油成分と、乳化剤とから成り、これに水を混合
して調製されるが、上記の成分の他に、必要によっては
その乳化力を向上させるために乳化補助剤を、また乳化
剤の安定性を向上させるために乳化安定剤を、更に浸透
圧を調整するために等張化剤を加えることができる。

かかる乳化補助剤の具体例としては炭素数６〜３０の脂
肪酸、これら脂肪酸の塩またはモノグリセリド、例えば
カプロン酸、カプリン酸、カプリル酸、ラウリン酸、ミ
リスチン酸、バルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、
バルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール酸、アラキ
ドン酸、エイコサベンクエン酸、ドコサヘキサエン酸、
およびこれらのカルボン酸の塩、例えばナトリウム塩、
カリウム塩、カルシウム塩、およびこれらのカルボン酸
のモノグリセリドが挙げられる。

また乳化安定剤の具体例としてはコレステロール、トコ
フェロール、アルブミン、脂肪Ｍ７ミド誘導体、多糖類
、多糖類の脂肪酸エステル誘導体を挙げることがで、き
る。

また等張化剤としては、グリセリン、デキストラン、ア
ルブミンなどが使用されうる。

本発明の脂肪乳剤は、ポリプレノイド化合物を０．００
１〜ｌＯ％（以下の割合はすべてｖ／ｖ％で示される）
好ましくはｏ、ｏｏｔ−ｔ％、油成分を１〜５０％、好
ましくは１〜２０％、乳化剤を０．１−１０％、好まし
くは０．５〜５％、含むものであり、そして乳化補助剤
を０．３％以下の量で、また乳化安定剤を０．５％以下
の量で含んでいても良い。

そして上記した成分に水を加えて１００％の量となるよ
うに調製され、この際必要に応じて浸透圧調整のために
等張化剤が加えられる。

本発明の脂肪乳剤は、所定量のポリプレノイド化合物、
油成分、乳化剤、必要によっては更に乳化補助剤、乳化
安定剤および等張化剤を混合し、３０〜９０℃の温度に
加温し、これに所定量の水を加えて混合物を常用のホモ
ジナイザーまたはホモミキサー、例えば加圧噴射型ホモ
ジナイザー、超音波ホモジナイザー、高速回転型ミキサ
ーなどを用いて均質化処理して粗乳化液とし、必要によ
って水を加え、さらに上記のホモジナイザーで均質化処
理して得られる。

本発明の脂肪乳剤は製造の都合によっては脂肪乳剤の生
成後に乳化安定剤、等張化剤を加えても良く、更に場合
によっては脂肪乳剤の生成前または生成後にその他の添
加剤例えば着色剤、抗酸化剤、賦香剤、甘味剤などを添
加することができる。

本発明のポリブレノイド化合物を含有する脂肪乳剤は平
均粒子径が３００ｎｍ以下の微細な粒子よりなる乳化液
であり、その保存安定性は極めて良好である。そしてこ
の脂肪乳剤を癌細胞の培養系に添加した場合、および実
験動物に投与した場合、ポリブレノイド化合物の有する
生理作用を効果的に発現させることが出来る。この脂肪
乳剤は例えば静脈内、筋肉内、皮下などに投与するため
の注射液として用いることが出来、まｊ；カプセル化な
どをした後、経口投与剤として用いることも出来る。

本発明の脂肪乳剤を注射液として用いる場合には、１日
当りポリプレノイド化合物としてＩＯμｇ／　ｋｇ〜ｌ
ｏｍｚ／　ｋｇの投与量で用いられる。また経口投与剤
として用いる場合１日当りポリブレノイド化合物として
０．５ｍｇ／　ｋｇ　〜１００１１９／　ｋｇの投与量
で用いられる。

〔実施例〕

つぎに本発明を実施例により詳細に説明する。

実施例１〜５ 化合物Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｇまｊ；はＨを含有する脂肪乳剤の
夫々を作製した。大豆油５０ｇ、大豆レシチン６ｇ、グ
リセリン１２．５ｇと化合物ＡＳＢ。

Ｃ，ＧまたはＨ２，５９を混合し、５０〜６０℃に加温
して溶解させた。これに２５０ｎ１２の蒸留水を加え、
ミキサーで均質化して粗乳化液を得ｌ：。この粗乳化液
に蒸留水を加えて全量を５００１とした後、マントン・
ゴーリン型高圧乳化機の液槽に入れて循環させ、均質な
脂肪乳剤を作製した。このようにして作製した化合物Ａ
ＳＢ、Ｃ，ＧまたはＨを含有する脂肪乳剤の平均粒子径
はいずれも２００ｎｍ以下であった。これらの脂肪乳剤
を約４℃で３か月保存した場合、いずれの脂肪乳剤の平
均粒子径も２００ｎｍ以下に維持されていた。

実施例　６．７ 化合物ＣまたはＧを含有する脂肪乳剤の夫々を作製した
。大豆油２０ｇ、卵黄レシチン２．４ｇと化合物Ｃまた
はＧ　Ｏ，８９を混合し、５０〜６０℃に加温して溶解
させた。これにｌｏｏ＋Ｉ２の蒸留水を加え、ミキサー
で均質化して粗乳化液を得た。

この粗乳化液に蒸留水を加えて全量を２００１２とした
後、マントン・ゴーリン型高圧乳化機の液槽に入れて循
環させ、均質な脂肪乳剤を作製した。このようにして作
製した化合物ＣまたはＧを含有する脂肪乳剤の平均粒子
径は２００ｎｍ以下であった。これらの脂肪乳剤を約４
℃で３か月保存した場合、いずれも平均粒子径は２００
ｎｍ以下に維持されていた。

実施例　８ 化合物Ｆを含有する脂肪乳剤を作製した。大豆油２０ｇ
、卵黄レシチン２．４９、バルミチン酸ナトリウム０．
０９９、グリセリン５ｇと化合物Ｆ　Ｏ，５９を混合し
、５０〜６０℃に加温して溶解させた。これに１００＋
ｘｆｆの蒸留水を加え、ミキサーで均質化して粗乳化液
を得た。この粗乳化液に蒸留水を加えて全量を２００１
１２とした後、マントン・ゴーリン型高圧乳化機の液槽
に入れて循環させ、均質な脂肪乳剤を作製した。このよ
うにして作製した化合物Ｆを含有する脂肪乳剤の平均粒
子径は３０Ｏｎ＋ｏ以下であった。この脂肪乳剤を約４
℃で３か月保存した場合、平均粒子径は３００ｎｎ＋以
下に維持されていた。

実施例　９ 実施例３で作製した化合物Ｃを含有する脂肪乳剤を用い
、ヒト白血病細胞ＨＬ−６０に対する分化誘導効果をニ
トロブルー・テトラゾリウム（ＮＢＴ）還元活性を指標
として測定した。測定に先立ち化合物Ｃを含有する脂肪
乳剤を対照脂肪乳剤（化合物Ｃを加えず、実施例３と同
じ方法で作製したポリプレノイド化合物不含有脂肪乳剤
）と適当な比率で混合し、終濃度０．５〜５１９／ｍ（
ｌの化合物Ｃを含有する脂肪乳剤を得た。

ＨＬ−６０細胞を、２ＸｌＯ’個／＋＊ｆｆの密度テｌ
θ％ウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ　１６４０培地に
懸濁し、２４穴プラスチツクプレートの各人に１ｍＱず
つ播いた。即座に、培地中の化合物Ｃの終濃度がＯ〜５
０μｇ／ｙａｎとなるように、対照脂肪乳剤または化合
物Ｃを含有する脂肪乳剤を添加した。プレートをＣＯ，
インキュベーター中、３７°Ｃで４日間保温した。保温
後、遠心して細胞を集め、１０’個／Ｉの密度で、ｌＯ
％ウシ胎児血清、０．１％ＮＢＴおよび１１００ｎ／＋
Ｉ２のホルボール・１２−ミリステート・１３−アセテ
ートを含有するＲＰＭｌ　　１６４０培地に懸濁しＩ；
。この細胞懸濁液を３７℃で２０分間保温した後、一部
をスライドグラス上にとり、メタノール固定した。ＮＢ
Ｔの還元によって濃青色に染まった細胞の数を数え、全
細胞数に対するパーセンテージを算出した。

表　　１ ２２．１ ３５．５ ４５．５ ５３．７ ５７．４ 表１に示した結果から明らかなように、化合物Ｃ含有脂
肪乳剤で処理しｆ：　ＨＬ　−６０細胞においては、培
地中の化合物Ｃの濃度に応じてＮＢＴを還元する細胞の
パーセンテージが増加した。即ち化合物Ｃ含有脂肪乳剤
は培養ＨＬ−６０細胞に対して有意な分化誘導効果を示
した。

実施例　ＩＯ 実施例１〜３で作製した化合物Ａ、ＢまたはＣを含有す
る脂肪乳剤を用いて、癌転移抑制効果を測定した。測定
に先立ち、まず化合物Ａ１ＢまたはＣを含有する脂肪乳
剤を対照脂肪乳剤（化合物Ａ、ＢまたはＣのいずれをも
力ａえず、実施例１と同じ方法で作製したポリズレノイ
ド化合物不含有脂肪乳剤）と適当な比率で混合し、終濃
度０．０３〜０−２１１ｇ／１１１２の化合物Ａ、Ｂま
たはＣを含有する脂肪乳剤を得た。

測定時、Ｂ１６ＦｌＯメラノ一マ細胞４ＸｌＯ’個をＣ
５７ＢＬ／　６マウス（雄、６週令）の左後肢足社に移
植した。対照脂肪乳剤または終濃度０．０３〜０．２ｍ
ｇ／＋ｒｌの化合物Ａ、ＢまたはＣを含有する脂肪乳剤
を、移植後１日目より２５５日目で３日目ごとに９回、
尾静脈内に投与した。移植後２７７日目左後肢を切断し
、４１１日目マウスを解剖して肺に形成された転移結節
数を測定した。対照脂肪乳剤を投与したマウスにおいて
形成された肺転移結節数の平均値（Ｎｏ）と化合物Ａ、
　ＢまたはＣを含有する脂肪乳剤を投与したマウスにお
いて形成された肺転移結節数の平均値（Ｎ）から、次式
に従って肺転移抑制率を算出した。

肺転移抑制率（％）−（１−Ｎ／Ｎ、）Ｘ　１００なお
各実験群の使用動物数はいずれも１０匹であつ　ｔこ　
。

表　　２ （１１９／　ｋｇ）　　　　　　　（％）ＣＯ，３７９ Ｇ　　　　　　　　Ｏ，８７８ Ｇ　　　　　　　　２．０　　　　　　　　　　８５Ａ
　　　　　　　　０．８　　　　　　　　　　　６７Ｂ
　　　　　　　　０．８　　　　　　　　　　５４表２
に示した結果から明らかなようｌこ、０．３〜２．０暑
ｇ／　ｋｇの化合物Ｃ５または０．８１１１９／　ｋｇ
の化合物ＡまたはＢを含有する脂肪乳剤を投与したマウ
スにおいては、対照脂肪乳剤を投与したマウスに比べて
、肺転移が顕著に抑制された。

〔発明の効果〕

実施例１〜８に示したように、本発明のポリブレノイド
化合物を含有する脂肪乳剤は平均粒子径が３００ｎｍ以
下の微細な粒子よりなる乳化液であり、約４°Ｃで３か
月保存してもその微細な粒子が安定に維持される。そし
てこの脂肪乳剤を実験動物に投与した場合、ポリプレノ
イド化合物の持つ生理作用が効果的に発現される。実施
例９にポリブレノイド化合物Ｃを含有する脂肪乳剤を辷
ト白血病細胞の培養系に添加した場合、同細胞の分化が
誘導されることを示した。

さらに実施例１０にポリプレノイド化合物Ａ、　Ｂまた
はＣを含有する脂肪乳剤をマウスの静脈内に投与した場
合、顕著な癌転移抑制効果が発揮されることを示した。

上記した事実から、本発明のポリズレノイド化合物を含
有する脂肪乳剤は医薬品としての利用に極めて適した製
剤であることが分かる。

比較例　１ 化合物Ａの懸濁液を作製した。化合物Ａ２００ｍｇに対
してジメチルスルホキシド１ｍ＋２を加え、メノウ乳鉢
を用いて可能な限り均一化した。さらに生理的食塩水を
加えて全量を１００ｍｆｆとし、化合物Ａの懸濁液を作
製した。このようにして作製した懸濁液は光学顕微鏡で
見ると不均質な粒子よりなり、４℃で約１時間放置する
と粒子の沈澱が生じた。

実施例　１１ 実施例１で作製しＩ；化合物Ａを含有する脂肪乳剤およ
び比較例１で作製した化合物Ａの懸濁液を用いて、癌転
移抑制効果を比較した。測定に先立ち、化合物Ａを含有
する脂肪乳剤を対照脂肪乳剤と適当な比率で混合し、終
濃度０．２５〜Ｉ　ａｙ／　ｔｉ（ｌの化合物Ａを含有
する脂肪乳剤を得た。

また化合物Ａの懸濁液と１％ジメチルスルホキシドを含
有する生理的食塩水を適当な比率で混合し、終濃度０．
２５〜ｌ　ｔｒｇ／　ｒｔｒＱの化合物Ａの懸濁液を得
た。

測定時、実施例６に記載したのと同一の方法でマウスに
癌細胞を移植した。対照脂肪乳剤また（よ終濃度０．２
５〜ｌ　ｍｙ／　ｒｔｒＱの化合物Ａを含有する脂肪乳
剤（実験１）を、あるいは１％ジメチルスルホキシドを
含有する生理的食塩水または終濃度０．２５〜ｌｉＩｇ
／ｍＱの化合物Ａの懸濁液（実験■）を、移植後１日目
より２７日目まで隔日に１４回、腹腔内に投与した。移
植後２８日目に左後肢を切断し、４２日目にマウスを解
剖して肺に形成された転移結節数を測定しｊ；。実験Ｉ
においては実施例６に記載したのと同一の方法で肺転移
抑制率を算出した。また実験■においては１％ジメチル
スルホキシドを含有する生理的食塩水を投与したマウス
において形成された肺転移結節数の平均値（Ｍ、）と、
化合物Ａの懸濁液を投与したマウスにおいて形成された
肺転移結節数の平均値（Ｍ）から次式に従って肺転移抑
制率を算出しｔ；。

肺転移抑制率（％）　−（１−Ｍ／Ｍ、）Ｘ　ｔｏ。

なお各実験群の使用動物数はいずれも１０匹であった。

表　　３ Ｃｒｍｙ／ｋｇ）　　　　　　　　　（％）■（脂肪乳
剤）　　　　　２．５　　　　　　　５６５　　　　　
　　　　　　９３ ■（懸濁液）　　　　　　２．５　　　　　　　１３５
　　　　　　　　　　　４６ 表３に示した結果から明らかなように、化合物Ａを含有
する脂肪乳剤を投与したマウスにおいては、懸濁液とし
て投与した場合よりも大きい効果が得られた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次の一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、▲数式、化学式、表等があります▼はトランス
   型イソプレン単 位、▲数式、化学式、表等があります▼はシス型イソプ
   レン単位、 ▲数式、化学式、表等があります▼はジヒドロイソプレ
   ン単位を示す。 ｌは２〜８の整数、ｍは０または５〜１８の整数、ｎは
   ０または１を示す。ｌ＋ｍは８〜２０の範囲にある。Ｘ
   は水素原子または式−ＰＯ＿３Ｒ（Ｒは水素原子又はナ
   トリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム等のカ
   チオンを示す。）で示される基を意味する。］で表わさ
   れるポリプレノイド化合物、油成分、乳化剤および水を
   混合してなる脂肪乳剤。