JPH03139298A - 化学発光による酵素測定方法 - Google Patents

化学発光による酵素測定方法

Info

Publication number
JPH03139298A
JPH03139298A JP2033599A JP3359990A JPH03139298A JP H03139298 A JPH03139298 A JP H03139298A JP 2033599 A JP2033599 A JP 2033599A JP 3359990 A JP3359990 A JP 3359990A JP H03139298 A JPH03139298 A JP H03139298A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
phosphatase
enhancer
dioxetane
vinylbenzyl
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2033599A
Other languages
English (en)
Inventor
Irena Y Bronstein
イレーナ・ワイ・ブロンスタイン
Brooks Edwards
ブルックス・エドワーズ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tropix Inc
Original Assignee
Tropix Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tropix Inc filed Critical Tropix Inc
Publication of JPH03139298A publication Critical patent/JPH03139298A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C41/00—Preparation of ethers; Preparation of compounds having groups, groups or groups
    • C07C41/01—Preparation of ethers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/28—Preparation of carboxylic acid esters by modifying the hydroxylic moiety of the ester, such modification not being an introduction of an ester group
    • C07C67/29—Preparation of carboxylic acid esters by modifying the hydroxylic moiety of the ester, such modification not being an introduction of an ester group by introduction of oxygen-containing functional groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D321/00—Heterocyclic compounds containing rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D317/00 - C07D319/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/12—Esters of phosphoric acids with hydroxyaryl compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/655—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6551—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a four-membered ring
    • C07F9/65512—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a four-membered ring condensed with carbocyclic rings or carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
    • C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/65742—Esters of oxyacids of phosphorus non-condensed with carbocyclic rings or heterocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/56—Ring systems containing bridged rings
    • C07C2603/58—Ring systems containing bridged rings containing three rings
    • C07C2603/70—Ring systems containing bridged rings containing three rings containing only six-membered rings
    • C07C2603/74—Adamantanes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Compounds That Contain Two Or More Ring Oxygen Atoms (AREA)
  • Luminescent Compositions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Catalysts (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、エンハンサ−の存在下に１．２−ジオキセタ
ン分子中のホスファターゼによって切断しうる基の酵素
性分解によってもたらされる光学的に検出可能な反応を
用いて特異的結合対の一員を検出し且つ定全化しうる検
定法に関する。
［従来の技術］ １．２−ジオキセタンとして知られる４員環の有機ペル
オキシドは既知化合物であるが、こレマテめったに利用
されたことのない化合物群である。
それらの化合物固有の化学的不安定性ゆえに、いくつか
の１，２−ジオキセタンはある種の条件下で（例えば酵
素の作用により）化学発光分解を示し、このことは“ジ
オキセタンの酵素性分解を用いる物質の検出法“と題す
る係属中の米国特許出願第８８９８２３号に開示されて
いる（これらの技術内容は参照によりここに引用される
）。このような化学発光の間に放出される光線の量は発
光物質の濃度の尺度であり、ひいてはその前駆物質（す
なわち１．２−ジオキセタン）の濃度の尺度である。従
って、発光の強度および持続時間を測定することによっ
て、１．２−ジオキセタンの濃度（それゆえに検定すべ
き物質、すなわち特異的結合対の１．２ジオキセタン員
子に結合した物質、の濃度）を求めることができる。■
、２−ジオキセタン環の置換基を適当に選択すると、そ
の分子の化学的安定性を調節することができ、ひいては
化学発光の開始をコントロールすることができ、それに
より実施目的のための、例えば上記出願明細書中にある
化学発光イムノアッセイにおける、この種の化合物の化
学発光作用の有用性を高めることができる。
発光を用いた従来の検定方法として代表的なものは、■
標識酵素としてＰＯＤを用い、基質としてＨ２Ｏ２及び
ルミノールを用いるＥＩＡ法、■アクリジンエステルを
標識体として用い、Ｈ２Ｏ２で発光させるＣＬＥＩＡ法
が知られている。
［発明が解決しようとする課題］ しかしながら、従来の方法の■の場合、低濃度のリガン
ド測定に対して定量性がなく、■の場合はラベル体自体
の増幅ができない等の欠点を有していた。そのため、高
感度の測定を目指すにはより多くの光量をもった測定法
の開発が望まれていた。
本発明は上述の如き従来方法の欠点を克服し得た。
すなわち、本発明の目的は、エンハンサ−存在下１．２
−ジオキセタンの化学発光分解に基づく検定法を提供す
ることである。
本発明の目的並びにそれらの利点は、以後の説明および
特許請求の範囲を参照することにより十分に理解される
であろう。
［課題を解決するための手段］ 前記の目的は、本発明の方法、すなわち、エンハンサ−
の存在下に光を発生させる方法であって：（ａ）　　次
式： （式中ＲはＣ１−Ｃ４のアルキルであり、Ｍはアルカリ
金属またはアンモニウムである）で表され、ホスファタ
ーゼと反応して光学的に検出可能なエネルギーを放出し
得るジオキセタン化合物を用意し； （ｂ）その安定な１．２−ジオキセタンをホスファター
ゼにより分解する； ことから成る方法によって発生した光を測定することに
よって達成される。
ここで酵素は酸性あるいはアルカリ性ホスファターゼで
あご。
エンハンサ−は蛋白質、螢光剤またはビニルベンジル四
級アンモニウム塩ポリマーあるいはそれらの混合物であ
る。エンハンサ−の例としては、蛋白質がウシ血清アル
ブミン、螢光剤がフルオレセイン、ビニルベンジル四級
アンモニウム塩ポリマーがポリ〔ビニルベンジル（ベン
ジルジメチルアンモニウムクロライド）〕またはポリ　
〔ビニルベンジル（ベンジルトリメチルアンモニウムク
ロライド）〕の場合がある。
本発明の方法に使用する１、２−ジオキセタンは以下の
ように製造される： ＯＲ 式中、Ｒ１はＲについて先に定義した置換基であり得：
Ｗ−はハロゲンイオン（例えば塩素イオン）のような酸
アニオンであり；そしてＸおよび“Ｒ化剤”は以下で定
義する通りである。
上記１．２−ジオキセタン化合物を使用した本発明の方
法は、試料中の特定の物質の存在または濃度を求めるた
めに視覚的検定方法として利用することができる。上記
の１．２−ジオキセタン類はこれらの検定法のいずれに
も使用しうる。こうした検定法の例には、抗体または抗
原（例、αまたはβ−ｈＣＧ、ＴＳＨ，ＬＨ等のホルモ
ン、ＡＦＰ。
ＣＥＡのような癌関連抗原）を検出する免疫検定法（酵
素免疫測定法）；酵素検定法（例、アルカリホスファタ
ーゼ）；カリウムまたはナトリウムイオンなどを検出す
る化学検定法；およびウィルス（例、Ｈ８Ｖ１．ＨＴＬ
ＶＩＩＩもしくはサイトメガロウィルス）または細菌（
例、大腸菌）などを検出するヌクレオチドプローブ法が
含まれる。
検出される物質が抗体、抗原または核酸である場合には
、ジオキセタンの （以下２基と略す） を切断可能な酵素、すなわち酸性又はアルカリ性ホスフ
ァターゼが、検出される物質に特異的な親和性を有する
物質（すなわち検出される物質に特異的に結合する物質
）（例、それぞれ抗原、抗体、または核酸プローブ）に
結合することが好ましい。
酵素を特異的親和性物質に結合させるために常法（例、
カルボジイミドカップリング）が使用される；結合はア
ミド結合を介することが好ましい。
−船内に検定法は下記のように実施することができる。
検出される物質を含む試料と、検出される物質（例えば
抗原）に特異的親和性を有する物質（例えば抗体）に結
合した酵素を含む緩衝液に接触させ更に特異的親和性を
有するもう一つの物質（例えば抗体）を結合した固相（
例えば抗体結合のビーズ）に接触させる。一定時間イン
キュベーションした後過剰の特異的親和性を有する物質
に結合した酵素を洗い流し、その酵素部分によって切断
されうる２基を有する１、２−ジオキセタン類（基質）
を添加する。酵素は２基を切断してジオキセタンを２つ
のケトン（またはＸ基が水素の場合はアルデヒドとケト
ン）に分解する：ケうして励起されて発光する。この発
光はキュベツトまたはカメラルミノメータ−などを用い
て、試料中に検出される物質が存在することの指標とし
て検出される。物質の濃度を求めるために発光強度を測
定することができる。
検出される物質が酵素である場合には、特異的親和性物
質（例えば抗体）は不必要である。その代わりに検出さ
れる酵素によって切断されうるＺ基を有する１、２−ジ
オキセタン類（その酵素の基質）を使用する。そこで、
酵素の検出法は、酵素−含有試料への１，２−ジオキセ
タン類の添加、および酵素の存在と濃度の指標として得
られる発光の検出を含むものである。
［実　施　例］ 以下に本発明の詳細な説明するために実施例が記載され
るが、本発明は何らそれらに限定されず、その要旨を逸
脱しない範囲での修飾および変法を含むものと思われる
。
参考例　１ （Ａ）３−メトキシフェニルアダマント−２−イルケト
ン マグネシウム削り屑（１，８４ｇ、　０．０６７モル）
をアルゴン雰囲気下で火炎乾燥フラスコに入れた。
ヨウ素の小さい結晶および乾燥テトラヒドロフラン（Ｔ
ＨＦ）（水素化アルミニウムリチウム上で新たに蒸留し
たもの）７ｍ１を加えた。一定量（７ｍｌ、　０．０５
５モル）の３−ブロモアニソールを注射器から穏やかに
撹拌した金属懸濁液に加えた。
５０℃で短時間加熱後発熱反応が始まった。フラスコを
室温の水浴に入れ、その間ＴＨＦ　（３３ｍｌ）を滴下
ロートから細流として添加した。発熱反応がおさまった
後、この混合物を４５分間還流した。その還流しつつあ
るグリニヤール試薬へ乾燥ＴＨＦ５０ｍｌ中の２−シア
ノアダマンタン＜８．７ｇ、　０．０５４モル；　“Ｏ
ｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ”、　５７．８　（
Ｗｉｌｅｙ。
１９７７）またはｖａｎ　Ｌｅｕｓｅｎ、　Ａ、　Ｍ、
ら、　Ｊ、　Ｏｒｇ。
Ｃｈｅｍ、、　　４２．３１１４　（１９７７）を参照
されたい）の溶液を１．５時間にわたって滴下した。こ
の反応混合物を還流温度で一晩加熱した後、黄色の懸濁
液を得た。フラスコとその内容物を水浴中で冷却してい
る間に、エーテル（５０ｍｌ）を加えた。濃塩酸（８ｍ
ｌ、　０．０９６モルＨＣｆりを激しく撹拌しながら２
０分間にわたり滴下した。沈殿物を清適により分離し、
エーテルで洗い、乾燥してケテンイミン塩２９．を若干
の残留マグネシウムを含む淡黄色の非吸湿性粉末として
得た。この塩をエタノール９０ｍ１と濃塩酸９０ｍ１と
の混合物中に懸濁し、３時間還流した。その間に混合物
はかなり薄くなった。水浴で冷却後、得られた固形物を
砕き、ン濾過により分離し、中性になるまで洗浄し、乾
燥して薄い灰色のケトン１３．６５ｇ　（２−シアノア
ダマンタンに基づいて収率９３％）を得た（融点１１１
〜１１４℃）。
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はこの生成物がその
後の操作によって十分な純度であることを示した（Ｒ，
０，４５；　Ｋ５Ｆ−ＣＨ２Ｃａ２２　：ヘキサン５０
　：　５０）。ヘキサンから再結晶してプリズム晶とし
て表題化合物を得た（融点１１３〜ｃｍ’　（Ｃ＝　Ｏ
）　、　１５９０ｃｍ−’、　１５７５ｃｍ−１により
生成物の構造が次式の通りであることを確認した。
上記（Ａ）に従って製造した一定量（１１，３ｇ。
０．０４２モル）の３−メトキシフェニルアダマント−
２−イルケトンをモレキュラーシーブ乾燥（３人）ジメ
チルスルホキシド（Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ）　９０ｍ１に懸濁
した。懸濁固体を溶解するために加熱した。
撹拌しながら室温へ冷却すると、微細な懸濁液が得られ
た。カリウムｔ−ブトキシド（８，５ｇ。
０．０７０モル）をアルゴン雰囲気下に加えた。５分後
、はとんど均質な橙色の溶液が得られ、これを５０℃の
水浴に入れた。硫酸ジメチル（４ｍｌ。
０．０４２モル）を注射器から１０分間にわたって滴下
した。さらに１５分撹拌した後、追加の硫酸ジメチル（
３４ｍｌ、　０．０３４モル）を同じやり方で加えた後
、無色の溶液を室温で一晩撹拌した。水浴で冷却後、Ｋ
　　ＣＯｓ　０．５ｇおよび氷水１２５ｍ１を加え、こ
の混合物を５０ｍ１ずつの酢酸エチルで３回抽出した。
合わせた有機画分を水で３回、飽和ＮａＣｆ！水溶液５
０ｍ１で１回洗い、Ｋ２ＣＯ３上で乾燥した。溶媒を真
空除去して油状物を得た。その油状物をヘキサンに溶か
し、得られた溶液をセライトを通してン戸遇し、真空濃
縮して粘稠性のある淡黄色の油状物１１．５ｇ　（収率
９６％）を得た。ＴＬＣは微全のケトン出発物質を含む
エノールエーテル（Ｒｆｏ、６８；Ｅ、　Ｍｅｒｃｋ　
　Ａ（１２０ｓ　　ＣＨ２Ｃａ１２　：ヘキサン５０　
：　５０）へのきれいな転化を示してい１５９０ｃｍ　
　１５８０ｃｍ’、　１５７０ｃｍへ１０９５ｃｍ−１
１０８０１ ｃｍ’　；　’ＨＮＭＲ（ＣＤ　ＣＩ２　ｇ　）　：δ
１．５−２（ＬＩＩ。
１２）１）、　　δ２．５５（ｓ、ＬＨ）、　　δ３．
２（ｓ、ＩＨ）　、　　δ３．２５（ｓ。
３Ｈ）、δ３．７５（ｓ、３Ｈ）、およびδ６．７−７
．３（ｍ、４）１）。
これらのデータにより、この生成物の構造が次式の通り
であることを確認した。
モレキュラーシーブ乾燥（３人）ジメチルホルムアミド
（ＤＭＦ）７０ｍｌ中の上記（Ｂ）に従って製造したメ
トキシ（３−メトキシフェニル）メチレンアダマンタン
（１４ｇ、　０．０４９モル）の溶液を、アルゴン雰囲
気下で同じ溶媒中のナトリウムチオエトキシド（７，４
ｇ　、　０．８８モル）の溶液に加えた。
この混合物を３時間還流した。撹拌しながら水浴で冷却
後、この反応を水２００ｍ１中のＮＨ４Ｃ９６２ｇで停
止させた。酢酸エチル（１２０ｍｌ）および少是の氷水
を加えた。水層を分離し、酢酸エチル７５ｍ！で抽出し
た。有機抽出物を１００ｍ１ずつの水で４回、次に飽和
Ｎ　ａ　Ｃ１ｌ　（１００ｍｌ）で洗い、すばやくＮａ
２ＳＯ４上で乾燥させた。この溶液をン濾過し、濃縮し
て油状物を得、それをヘキサン５０ｍ１で摩砕した。回
転蒸発器で溶媒を除去すると固体が残り、それを冷ヘキ
サンで細かくすりつぶし、？濾過し、ヘキサンで洗った
。粗製の灰白色フェノール系生成物（ｌａｇ）は５％Ｍ
　ｅ　ＯＨＣＨｓ　ＣＮから再結晶して無色プリズム状
結晶１０ｇを得た（融点１３１〜１３３℃）。Ｉ　Ｒ（
ＣＨ２ＣＮ　２’）　：　３５８０１−１ ｃｍ　　、　３３２０ｃｍ　　、　２９１０ｃｍ−１，
１５９０ｃｍ−’、　１５８０ｃｍ−’１４４０ｃｍ’
により生成物の構造が次式の通りであることを確認した
。
フェート 上記（Ｃ）に従って製造したメトキシ（３−ヒドロキシ
フェニル）メチレンアダマンクン（Ｌ、１ｇ。
０．００４モル）をアルゴン雰囲気下でモレキュラーシ
ーブ乾燥（３人）ベンゼン１５ｍ１に溶解した。トリエ
チルアミン（０，５７ｍ１．０．００４モル）を注射器
から加えた。この撹拌溶液を水浴で０℃に冷却し、２−
クロロ−２−オキソ−１，３−ジオキサホスホラン（０
，３７ｍ１．０．００４モル）を滴下した。水浴中で１
０分後、粘稠な混合物を室温へ徐々に温め、３．５時間
撹拌した。ベンゼンを真空除去し、アルゴン下でエーテ
ル６０ｍ１を加えた。この懸濁液を不活性雰囲気下で一
過し、得られた固形物を２０ｍ１ずつのエーテルで３回
洗った。炉液を真空除去してリン酸トリエステル１．６
ｇを粘稠な無色の油状物１−１ １６００ｃｍ　　、　１５７５ｃｍ　　、　１３００ｃ
ｒｎ−’　（Ｐ＝０）　ｏフェノール性ＯＨの伸縮また
はＣ＝　０　（１６７０ｃｍ’）　ノ吸収はＩＲスペク
トルに存在しなかった。ＴＬＣで出発物質のないことを
確認した。これらのデータは３−　（アダマンチリデン
メトキシメチル）フェニルエチレンホスフェートの下記
構造と一致した。
砕してガムを得、そのガムをＣＨ２０ｇ２に取り、真空
除去して淡黄色の非晶質発泡体１．５ｇを得た。
１ １５９５ｃｍ　、　１５７０ｃｍ−１，１４７５ｃｍ−
’、　１２７５ｃｍ−’　（Ｐ＝０）　、　１２３５ｃ
ｒｎ−１，１１００ｃｍ−’。これらのデータはナトリ
ウム３−　（アダマンチリデンメトキシメチル）フェニ
ル−２′−シアノエチルホスフェートの予測された下記
構造と一致した。
上記の油状物はＤＭＦ７ｍｌに溶解し、ＤＭＦ中のシア
ン化ナトリウム（０，２１ｇ　、　０．００４モル）を
加え、この混合物を室温で２４時間撹拌した。得られた
質色の溶液を５０℃で真空除去し、２ｍｌずつのキシレ
ンで数回追い出し、残留物をエーテルで摩この塩（１，
５ｇ、　０．００３５モル）は水５ｍｌに溶解した。次
いで、濃水酸化アンモニウム（５ｍｌ　）を滴下した。
この溶液を室温で一晩撹拌した。
得られた白色スラリーを水浴中で冷却し、アセトニトリ
ル３０ｍ１で処理した。一過し、１５ｍ１ずつの冷アセ
トニトリルで２回洗浄して、短時間の減圧乾燥後に吸湿
性の白色固体（１１５°Ｃで焼結し、１３０〜１３３°
Ｃで融解する）０゜９５ｇを得た。
ＨＰＬＣ（逆相Ｃ１８−０，１％酢酸アンモニウム／Ｃ
Ｈ３ＣＮ勾配）は１つの主要なピークを示した。
ＩＲ（ヌジョール）　　：　１５９５ｃｍ−’、　　１
５７５ｃｍ−１，１２４５８ｍ−’　１２０００ｍ六１
０９５ｃｍ−’、　１０８１０８Ｏ’、　８９０ｃｍ−
ＩＵＶ（２０％Ｍｅ（＞Ｈ−ジオキサン）λｍａｘ　２
８０／ｎｍ　；ε＝　ｔｏ、ｏｏｏｏこれらのデータに
より生成物の構造が次式の通りであることを確認した。
大きい培養試験管中で、上記（Ｄ）に従って製造したエ
ノールエーテルホスフェート塩０．０８５ｇ（０，００
０１７モル）をＣＨＣρｓ　２５ｍ１に溶解した。シリ
カゲル上のメチレンブルー（シリカゲル１ｇ当たり染料
０．００２６ｇ）　０．２ＬＯｇを増感剤として加えた
。試験管は水冷した浸漬ウェルの内部に２５０ワツトの
高圧ナトリウムランプを含む銀めっきしたデユワ−フラ
スコに入れた。−枚の５ミルカプトン（Ｋａｐｔｏｎ；
　ＤｕＰｏｎｔ社）をＵＶフィルターとしてウェルの内
部に置いた。この装置に氷水をポンプで送り、試料の温
度を１５０℃以下に保った。乾燥酸素の連続流を毛細管
を通して反応容器に送った。気体流は固相増感剤の均一
懸濁液を維持するように調節した。２５分の照射時間後
、出発物質のＵ　Ｖ　（２８０ｎｍ）吸収が消失した。
淡黄色溶液をン濾過し、蒸発させ、水１０ｍ１で再調製
した。この水性試料は０．４５ミクロンのナイロンフィ
ルターを通して濾過し、逆相Ｃ１ｇ分離用ＨＰＬＣカラ
ムでクロマトグラフにかけ、水／アセトニトリル勾配で
溶出した。２７７ｎｍで弱いＵＶ吸収を示す各画分を合
わせ、凍結乾燥してジオキセタンを白色の綿状吸湿性固
体として得た。この固体は融点を示さずに１４５’〜１
５０℃で分解してアダマンタンを生成して昇華し、部分
的に分解して残留した固体は２７０℃以下では融解しな
い。’ＨＮＭＲ（Ｉ２０゜ｐｐｍ）　：　０．８９−１
．８５（ｍ、１２Ｈ）　；　２．１０（ｓ、ＬＨ）　；
　３．１５（ｓ。
４Ｈ）。ＩＲ（ヌジョールマル、　ｃｍ’）　　：　３
１２０゜１９７０−１７９０　（弱い２幅広−ＮＨ４）
、１６４０（幅広）。
１６００　（弱い）　、　１５８０．１２８４．１２７
３．１１２２．９８０゜８９５゜この生成物の構造は上
記ＩＲおよびＮＭＲスペクトルにより次式の通りである
と確認した。
参考例　２ メトキシ（３−ホスホリルオキシフェニル）メチレンア
ダマンタンナトリウムアンモニウム塩（３，３ｇ）を１
滴のピリジンを含有する１５ｍ１の水に溶解させた。こ
の溶液（該化合物をピリジニウム塩の形で含む）をアン
バーライトｌＲ１２０（プラス）イオン交換樹脂（アル
ドリッチケミカル社製）の３　ｃｍ　Ｘ　２５ｃｍ０カ
ラムにゆっくり通した。蒸留水でこのカラムを溶出する
と、２８０ｎｍに吸収を示すフラクションが得られ、こ
れらをいっしょにして凍結乾燥した。得られたモノピリ
ジニウム塩（１ｇ、２．３ミリモル）の１部をＬＯＯｔ
ｎｌのＣＨＣｇ３（Ａ　Ｉ２０　ｇで乾燥）に溶解した
。得られた溶液を大きなシリンダー状の試験管に入れ、
５，１０．Ｌ５゜２０−テトラフェニル−２１１１，２
３１１−ポルフィン（２■、１ｍｌ　　ＣＨＣＩａ中）
で処理した。得られた均一な緑色の溶液を０℃に冷却し
、スパージャ−管を通して酸素ガスで前辺って飽和した
。この混合物を銀デユワーフラスコ中で一定の０２流下
に照射した。このフラスコはデュポンのカプトン（Ｋａ
ｐｔｏｎ）ポリイミドフィルムの単一シート（５ミル）
で露光された２５０ワツトナトリウム蒸気ランプの周り
を囲む冷却された浸漬壁をも含んでいる。
デユワ−フラスコ中の温度は、１２分間の照射の間０″
〜５℃に維持された。溶媒を真空で除去し、続いて５０
０　ｍｇのＮａ　　ＨＣＯ３を含有する１００　ｍｌの
蒸留水を添加した。得られた淡いピンク色の溶液を冷却
し、０．４５　ミクロンのテフロン膜を通して濾過した
。得られたジオキセタンの水溶液を、ポリスチレンカラ
ム中ＣＨ３−ＣＮ−０，５％Ｎ　ａ　ＨＣＯｓ勾配を使
用した調製用逆相ＨＰＬＣに付した。続いて２回目は、
ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２０勾配を使用してカラムに通した。得
られた溶液（無機塩を含まない）を凍結乾燥して８００
ｍｇの粒状のかすかに黄色がかった白色固体を得た。こ
の固体は融点を示さずに１４５６〜１５０℃で分解して
アダマンタノンを生成して昇華し、部分的に分解して残
留した固体は２７０℃以下では融解しない。
’ＨＮＭＲ（Ｄ２０）：δ０．８５−δ１．７５（ｍ、
１２Ｂ）；δ２．１５（ｓ、ＬＨ）　；δ２．７５（ｓ
、ＬＨ）　；δ３．１０（Ｓ、３）１）　；δ７．１０
−δ７．３５（ａ＋、４Ｈ）。ＩＲ（ヌジョールマ１ ル）　　：ｌＢｏｏｃｍ　　（弱い）　、１５８０ｃｍ
−’、　１２８５ｃｍ−１’　１２７５ｃｍ　　、１１
２０ｃｍ−１（幅広）　、９８０ｃｍ−’、８９５ｃｍ
−’０１ 実施例　１ 検定 アルカリ性ホスファターゼ検定は次の方法で実施した。
成分 緩衝液：　０．０５Ｍ炭酸ナトリウム、１ｍＭＭｇＣρ
２（ｐＨ９，５） 基　質：　０．４ｍＭ濃度の３−（２’−スピロアダマ
ンクン）−４−メトキシ−４−（３”−ホスホリルオキ
シ）フェニル−１，２−ジオキセタンジナトリウム塩（
ＡＭＰＰＤ） アルカリ性ホスファターゼ：緩衝液中１．１８８μｇ／
ｍｌの原液 条件： １、緩衝液のみ（対照） ２、緩衝液＋ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）３、緩衝液
子ＢＳＡ−フルオレセイン（ＢＳＡ対フルオレセインの
比１：３） ４、緩衝液子ポリ　〔ビニルベンジル（ベンジルジメチ
ル−アンモニウムクロライド））（ＢＤＭＱ）５、緩衝
液＋ＢＤＭＱ＋フルオレセイン　（ＢＤＭＱｌ　ｍｌと
混合したフルオレセインジナトリウム塩０．０１■） アルカリ性ホスファターゼ原液の段階的希釈は試験管中
で次の最終酵素濃度となるように行った：ここで条件２
〜５のエンハンサ−成分（緩衝液以外の成分）は系全体
の０．１重量％存在する。
ポリ　〔ビニルベンジル（ベンジルトリメチル−アンモ
ニウムクロライド）〕も上記条件４のエンハンサ−成分
と同等の作用を有する。
１１ ４．１７ｘｌＯＭ　　　　１．８７Ｘ１０−１５Ｍ８．
３４ｘｌＯ−１２Ｍ　　　８．３４Ｘ１０−１６Ｍ１．
６７ｘｌＯ−１２Ｍ　　　４．１７ｘｌＯ−１６Ｍ３．
３４Ｘ１０−１３Ｍ　　　　２．０９ＸｌＯ”’　Ｍ６
．８８ｘｌＯ”　Ｍ　　　　１．０　Ｘｌ０−”　Ｍｌ
、３４ｘｌＯ”　Ｍ　　　　５．ＯｘｌＯ−’　Ｍ３．
３４ｘｌＯ−１５Ｍ　　　２．５　Ｘｌ０−’　Ｍ手順
： いろいろな条件において、上記各種濃度のアルカリ性ホ
スファターゼにり、４ｍＭ　　ＡＭＰＰＤを加えた２通
りの試験管を３０℃でインキュベートした。
条件１．４および５は２０分インキュベートし、条件２
および３は９０分インキュベートした。
インキュベーション後、ターナ−２０Ｅルミノメータ−
で３０秒間の発光積分歯を測定した。アルカリ性ホスフ
ァターゼの検出限界に対するＢＳＡ。
ＢＤＭＱおよびフルオレセインの効果を第１図および表
１に示す。第１図中−口−は上記条件１、−一一■−−
−は条件２、−−−０−−一は条件３、−−−・−−−
は条件４、−一一Δ−−−は条件５を各々示す。
表 ■ 添 加 バックグラウンドの ２倍のカウント量を　アルカリ性ホスファ示すアルカリ
性ホス　ターゼの最低検出濃度０．１％ＢＳＡ ０．１％ＢＳＡ： フルオレセイン ９．５ＸｌＯ”　Ｍ １．３刈０−ｔ５　Ｍ ８．３４Ｘ　ＩＱ”　Ｍ（１，０６） ４．１７Ｘ１０”　Ｍ（１，０４） ０．１％ＢＤＭＱ ０．１％ＢＤＭＱ： フルオレセイン ４．０刈０−１５　Ｍ ３．４ＸｌＯ”　Ｍ １、ｏＯＸ１０″″１６Ｍ（１，０７）２．０９ＸｌＯ
”　Ｍ（１，０６） １、かっこ内の数字は表示濃度でのバックグラウンドレ
ベルの倍数である。
【図面の簡単な説明】
第１図はウシ血清アルブミン、ＢＤＭＱおよび／または
螢光物質の存在下にアルカリ性ホスファターゼ検定を行
なった結果を示す図である。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）エンハンサーの存在下に光を発生させる方法であ
    って： （ａ）次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＲはＣ＿１−Ｃ＿４のアルキルであり、Ｍはアル
    カリ金属またはアンモニウムである）で表され、ホスフ
    ァターゼと反応して光学的に検出可能なエネルギーを放
    出し得るジオキセタン化合物を用意し； （ｂ）その安定な１，２−ジオキセタンをホスファター
    ゼにより分解する； ことから成る方法。 ２、Ｒはメチルである請求項１の方法。 ３、酵素がアルカリ性ホスファターゼである請求項１の
    方法。 ４、エンハンサーが蛋白質、螢光剤またはビニルベンジ
    ル四級アンモニウム塩ポリマーあるいはそれらの混合物
    である請求項１の方法。 ５、蛋白質がウシ血清アルブミン、螢光剤がフルオレセ
    イン、ビニルベンジル四級アンモニウム塩ポリマーがポ
    リ〔ビニルベンジル（ベンジルジメチルアンモニウムク
    ロライド）〕またはポリ〔ビニルベンジル（ベンジルト
    リメチルアンモニウムクロライド）〕である請求項４の
    方法。
JP2033599A 1987-12-31 1990-02-14 化学発光による酵素測定方法 Pending JPH03139298A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14019787A 1987-12-31 1987-12-31
US140197 1987-12-31

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63185319A Division JPH0731201B2 (ja) 1987-12-31 1988-07-25 化学発光による測定法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH03139298A true JPH03139298A (ja) 1991-06-13

Family

ID=22490169

Family Applications (9)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63185319A Expired - Lifetime JPH0731201B2 (ja) 1987-12-31 1988-07-25 化学発光による測定法
JP1501800A Expired - Lifetime JP3025280B2 (ja) 1987-12-31 1989-01-03 １，２‐ジオキセタン類およびその中間体の合成
JP2033599A Pending JPH03139298A (ja) 1987-12-31 1990-02-14 化学発光による酵素測定方法
JP2033597A Granted JPH0372489A (ja) 1987-12-31 1990-02-14 １，２―ジオキセタン化合物
JP2033598A Granted JPH03123791A (ja) 1987-12-31 1990-02-14 １，２―ジオキセタン化合物の製造方法
JP4324674A Expired - Lifetime JPH0651708B2 (ja) 1987-12-31 1992-11-11 １，２−ジオキセタン化合物の中間体
JP5026654A Expired - Lifetime JPH0733346B2 (ja) 1987-12-31 1993-02-16 １，２−ジオキセタン化合物製造用中間体
JP11234599A Expired - Lifetime JP3280342B2 (ja) 1987-12-31 1999-04-20 １，２−ジオキセタン類の中間体の合成
JP11112353A Pending JPH11335342A (ja) 1987-12-31 1999-04-20 １，２―ジオキセタン類の中間体

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63185319A Expired - Lifetime JPH0731201B2 (ja) 1987-12-31 1988-07-25 化学発光による測定法
JP1501800A Expired - Lifetime JP3025280B2 (ja) 1987-12-31 1989-01-03 １，２‐ジオキセタン類およびその中間体の合成

Family Applications After (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2033597A Granted JPH0372489A (ja) 1987-12-31 1990-02-14 １，２―ジオキセタン化合物
JP2033598A Granted JPH03123791A (ja) 1987-12-31 1990-02-14 １，２―ジオキセタン化合物の製造方法
JP4324674A Expired - Lifetime JPH0651708B2 (ja) 1987-12-31 1992-11-11 １，２−ジオキセタン化合物の中間体
JP5026654A Expired - Lifetime JPH0733346B2 (ja) 1987-12-31 1993-02-16 １，２−ジオキセタン化合物製造用中間体
JP11234599A Expired - Lifetime JP3280342B2 (ja) 1987-12-31 1999-04-20 １，２−ジオキセタン類の中間体の合成
JP11112353A Pending JPH11335342A (ja) 1987-12-31 1999-04-20 １，２―ジオキセタン類の中間体

Country Status (13)

Country Link
US (1) US6417380B1 (ja)
EP (2) EP0582317B1 (ja)
JP (9) JPH0731201B2 (ja)
AU (1) AU2945189A (ja)
CA (1) CA1341210C (ja)
DE (2) DE68929060T2 (ja)
ES (1) ES2012941A6 (ja)
GR (1) GR1000118B (ja)
IL (1) IL88798A (ja)
MX (1) MX14411A (ja)
NZ (1) NZ227525A (ja)
WO (1) WO1989006226A1 (ja)
ZA (1) ZA889659B (ja)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5004565A (en) * 1986-07-17 1991-04-02 The Board Of Governors Of Wayne State University Method and compositions providing enhanced chemiluminescence from 1,2-dioxetanes
US4956477A (en) * 1987-12-31 1990-09-11 Tropix, Inc. Synthesis of 1,2-dioxetanes
US4978614A (en) * 1988-10-26 1990-12-18 Tropix, Inc. Method of detecting a substance using enzymatically-induced decomposition of dioxetanes
US4952707A (en) * 1988-06-30 1990-08-28 Tropix, Inc. Enzymatically-cleavable chemiluminescent fused polycyclic ring-containing 1,2-dioxetanes
US4931569A (en) * 1988-09-14 1990-06-05 Tropix, Inc. Purification of stable water-soluble dioxetanes
US6022964A (en) 1989-07-17 2000-02-08 Tropix, Inc. Chemiluminescent 1,2-dioxetanes
US5362916A (en) * 1989-09-06 1994-11-08 Tropix, Inc. Synthesis of mercaptaryl or hydroxyaryl enol ether alkali metal salts
WO1991003479A1 (en) * 1989-09-06 1991-03-21 Tropix, Inc. Synthesis of stable, water-soluble chemiluminescent 1,2-dioxetanes and intermediates therefor
US5225584A (en) * 1989-09-06 1993-07-06 Tropix, Inc. Synthesis of stable water-soluble chemiluminescent 1,2-dioxetanes and intermediates therefor
WO1994003812A1 (en) * 1992-07-31 1994-02-17 Syntex (U.S.A.) Inc. Photoactivatable chemiluminescent matrices
KR0148439B1 (ko) * 1994-03-11 1998-11-02 마사까쓰 마쓰모또 1,2-디옥세탄 유도체
US5777135A (en) * 1995-07-31 1998-07-07 Lumigen, Inc. Di-substituted 1,2-dioxetane compounds having increased water solubility and assay compositions
US5631167A (en) * 1995-07-31 1997-05-20 Bayer Corporation Capsule chemistry analytical methods employing dioxetane chemiluminescence
US5783381A (en) * 1995-10-19 1998-07-21 Tropix, Inc. Chemiluminescent 1,2-dioxetanes
WO2000006164A1 (en) * 1998-07-28 2000-02-10 Tropix, Inc. Benzothiazole dioxetanes
US6660529B2 (en) * 1998-07-28 2003-12-09 Pe Corporation Heteroaryl substituted benzothiazole dioxetanes
EP1185710A2 (en) * 1999-04-16 2002-03-13 Zymetx, Inc. Viral detection method using viral encoded enzymes and chemiluminescent substrates
WO2002008754A1 (en) * 2000-07-26 2002-01-31 Chemometec A/S Spatially resolved enzyme-linked assay
EP1342724B1 (en) * 2002-03-08 2016-01-06 Tosoh Corporation 1,2-dioxetane derivates and reagents employing them
JP4259229B2 (ja) 2003-08-28 2009-04-30 東ソー株式会社 １，２−ジオキセタンの化学発光方法および化学発光用組成物
JP2012140330A (ja) * 2010-12-28 2012-07-26 Tosoh Corp 水溶性リン酸エステルの精製方法
AU2013312296B2 (en) 2012-09-10 2017-06-22 Principia Biopharma Inc. Pyrazolopyrimidine compounds as kinase inhibitors
JP6475401B1 (ja) 2017-10-13 2019-02-27 三菱エンジニアリングプラスチックス株式会社 ポリカーボネート樹脂組成物
JP7007862B2 (ja) * 2017-10-31 2022-01-25 アークレイ株式会社 化学発光試薬組成物及び化学発光試薬キット

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2909557A (en) * 1955-09-07 1959-10-20 Bayer Ag Thiophosphoric acid esters and their production
DE1810343U (de) 1960-02-29 1960-04-28 Mak Maschb Kiel G M B H Vorrichtung zum befestigen von achshaltertegen am rahmen von schienenfahrzeugen.
NL6716437A (ja) 1967-12-02 1969-06-04
US3711556A (en) 1968-06-13 1973-01-16 Du Pont 2-(bis(p-substituted phenyl)methylene)adamantanes
GB1497109A (en) * 1975-10-29 1978-01-05 Beecham Group Ltd Naphthalene derivatives
JPS57159499A (en) * 1981-03-26 1982-10-01 Fuji Photo Film Co Ltd Substrate for determining alkaline phosphatase and determining method
JPS62176941A (ja) * 1986-01-28 1987-08-03 Sumitomo Electric Ind Ltd 光フアイバ
JPS639377A (ja) * 1986-06-30 1988-01-16 Sony Corp マルチチヤンネル録画装置
US4983779A (en) 1986-07-17 1991-01-08 The Board Of Governors Of Wayne State University Process for the preparation of vinyl ethers
US5707559A (en) * 1986-07-17 1998-01-13 Tropix, Inc. Chemiluminescent 1,2-dioxetane compounds
JPH0521918A (ja) * 1991-07-11 1993-01-29 Nippon Cement Co Ltd セラミツクス回路基板用導電パターン形成用粉末組成物
JP3217396B2 (ja) * 1991-08-16 2001-10-09 オリンパス光学工業株式会社 顕微鏡の粗微動機構
JPH0723989B2 (ja) * 1992-08-03 1995-03-15 ビソーディスプレイ株式会社 スクリーン装置
JPH0733346A (ja) * 1993-07-20 1995-02-03 Hitachi Building Syst Eng & Service Co Ltd エレベータの着床制御装置
DE4423811C1 (de) * 1994-07-06 1996-01-18 Fraunhofer Ges Forschung Hydrolysierbare und polymerisierbare Silane, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung

Also Published As

Publication number Publication date
JP2000001450A (ja) 2000-01-07
EP0368946B1 (en) 1994-09-14
CA1341210C (en) 2001-03-27
EP0582317A3 (ja) 1994-02-23
NZ227525A (en) 1992-01-29
AU2945189A (en) 1989-08-01
DE68929060T2 (de) 1999-12-09
JPH02502916A (ja) 1990-09-13
WO1989006226A1 (en) 1989-07-13
MX14411A (es) 1994-01-31
DE68929060D1 (de) 1999-09-30
ES2012941A6 (es) 1990-04-16
US6417380B1 (en) 2002-07-09
JPH0521918B2 (ja) 1993-03-25
IL88798A (en) 1996-01-31
JPH0476997B2 (ja) 1992-12-07
JPH02724A (ja) 1990-01-05
EP0368946A4 (en) 1990-05-14
JPH0731201B2 (ja) 1995-04-10
JP3025280B2 (ja) 2000-03-27
JPH0733346B2 (ja) 1995-04-12
JPH0372489A (ja) 1991-03-27
JP3280342B2 (ja) 2002-05-13
IL88798A0 (en) 1989-07-31
EP0582317B1 (en) 1999-08-25
JPH11335342A (ja) 1999-12-07
JPH03123791A (ja) 1991-05-27
JPH0641158A (ja) 1994-02-15
JPH0640996A (ja) 1994-02-15
GR1000118B (el) 1991-06-28
DE68918230T2 (de) 1995-03-02
EP0368946A1 (en) 1990-05-23
EP0582317A2 (en) 1994-02-09
JPH0651708B2 (ja) 1994-07-06
ZA889659B (en) 1989-09-27
DE68918230D1 (de) 1994-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH03139298A (ja) 化学発光による酵素測定方法
JP5319714B2 (ja) 過酸化水素検出方法に用いるシグナリング化合物
JP2710155B2 (ja) １，２−ジオキセタン化合物及びそれを用いた発光方法
US4772563A (en) 1,10-phenanthroline derivatives and use in fluorescence immunoassays
JP4958388B2 (ja) 発光性化合物に関する組成物、方法並びにキット
US5089630A (en) Dioxetanes for use in assays
JPH0137694B2 (ja)
US6162610A (en) Xanthan-ester and acridan substrates for horseradish peroxidase
EP0348494B1 (en) Dioxetanes for use in assays
Nakazono et al. Acridinium ester chemiluminescence: Methyl substitution on the acridine moiety
Jiao et al. 4-Allyloxy-7-aminocoumarin as a fluorescent carrier for optical sensor preparation and indole-3-acetic acid assay
JP3551984B2 (ja) アクリジン誘導体
JP3692265B2 (ja) 化学発光試薬の製造方法
Janssen Development and perspectives of fluorescent receptor assays: A case study with benzodiazepines
IL44165A (en) Method for fluorescently labelling a material with a furanone derivative and products formed by reacting such a material with the furanone derivative