JPH0272875A

JPH0272875A - リグニンパーオキシターゼｆｌおよびその製造方法

Info

Publication number: JPH0272875A
Application number: JP22449988A
Authority: JP
Inventors: Masaaki Kuwabara; 桑原　正章; Yasuhiko Asada; 恭彦麻田; Kaede Shinogi; 楓凌; Masanobu Uchikoshi; 正延打越
Original assignee: Oji Paper Co Ltd
Current assignee: New Oji Paper Co Ltd
Priority date: 1988-09-09
Filing date: 1988-09-09
Publication date: 1990-03-13

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明はりゲニンパーオキシダーゼＦＩＪ−Ｊよびその
製造方法に関するものである。本発明の酵素はリグニン
に作用して、これを低分子化または分解する性質を有す
るため、木材等のりグツセルロース材料を原料とする紙
パルプ製造工程における種々の工程で利用できる。すな
わちパルプ化工程、パルプ漂白工程、排水処理工程など
におけるリグニンの低分子化または分解を行わせること
に利用できる。さらに木材の糖化において、糖化の前段
の処理としてリグニンを分解することによって、セルラ
ーゼ作用を高めるといういわゆるセルロース系バイオマ
ス利用の分野にも適用できる。

〔従来技術〕

木材等のリグノセルロース物質に白色腐朽菌を接種、培
養することによってリグニンを分解し、セルロースパル
プを製造する試みがなされている（特開昭５０−４６９
０３号公報参照）。しかし、この方法の白色腐朽菌は共
存する炭水化物をも分解してしまい、またセルラーゼ欠
損変異株を用いた場合には、本来のリグニン分解力が弱
まってしまうこと等の問題点があり、実用化されるに至
っていない。

一方、このような問題点を解決するため、白色腐朽菌の
リグニン分解酵素をリグノセルロース物質に作用させ、
リグニンのみを選択的に分解させようとする試みがなさ
れている（Ｓｃｉｅｎｃｅ、　２２１＋６６１−６６２
　（１９８３）　）。

この報告は、主としてリグニンモデル化合物を基質とし
たものであるが、世界で最初にリグニン分解酵素を単離
、精製したものである。この酵素はファネロケーテ・ク
リソスポリウムが生産する菌体外酵素であり、主な特徴
は鉄含有酵素であること、分子量が約４２，０００であ
ること、酵素作用に過酸化水素が必要であること、リグ
ニンモデル化合物の４位のフェノール性水酸基がメトキ
シル基になった化合物に対して作用することが確認され
ていること等である。さらにファネロケーテ・クリソス
ポリウムが生産する菌体外酵素としては、２つの酵素が
報告されている（ＦＢＢＳ　ｌ、ｅｔｔ、、　　１６９
゜２４７−２５０　（１９８４））。

これらの酵素の１つは分子量が４１，０００以下である
こと、もう１つの酵素は分子量が４６，０００以下であ
ること、さらにいずれの酵素も鉄含有酵素であると推定
されていること、酵素作用に過酸化水素が必要であるこ
と、リグニンモデル化合物の４位のフェノール性水酸基
がエトキシル基になった化合物に対して作用することが
確認されていること等である。

また、Ｌｅｉｓｏｌａらは、ファネロケーテ・クリソス
ポリウムの培養上清をクロマトフオーカシングによって
分離、分析しているが、４つの等電点の異なるリグニン
パーオキシダーゼを検出した。これらの酵素の等電点は
４．５．３．乳３．４．３．２であり、５以上、のもの
はな（、分子量は３９，０００〜４２．０００の間であ
った（Ｊ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、　２．３７９−３８
２　（１９８５）　）。

一方、カワラタケ属の担子菌が生産するリグニン分解酵
素（特開昭６１−９２５６８号）の主な特徴は銅含有酵
素であること、等電点が３．５付近であること、酵素作
用に酸素が必要であること、分子量が約５３，０００で
あること、リグニンモデル化合物の４位のフェノール性
水酸基がメトキシルになった化合物に対して作用しない
こと等であり、前記のファネロケーテ・クリソスポリウ
ムの生産する菌体外酵素とは全（性質が異なる酵素であ
る。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明では白色腐朽菌をリグノセルロース物質に作用さ
せるときに生ずるリグニンの分解の他に共存する炭水化
物の分解を起こすという問題点を解決することを意図す
るものであり、主としてリグノセルロース物質中のリグ
ニンを低分子化または分解する新規酵素およびその製造
方法を提供することにある。

リグニンを低分子化する酵素の供給を実用化する場合、
製造方法が容易であることが重要な要件となる。

本発明の目的はこのような要件を満たす新規酵素および
その製造方法を提供することにある。

〔課題を解決するための手段］本発明は新規なリグニンパーオキシダーゼＦＬおよびそ
の製造方法に関するものである。

本発明者らはリグニン分解菌としてよく研究されている
ファネロケーテ・クリソスポリウムのリグニン分解酵素
活性の強い変異株について鋭意研究を行った結果　該菌
株を増殖せしめ、その培養物から得た菌体外粗酵素をイ
オン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフ
ィーにより高度に精製し、従来知られたりゲニンパーオ
キシダーゼと異なる新規な該酵素標品を得て、本発明に
到達した。

すなわち、本発明は下記の性質を有する新規なりゲニン
パーオキシダーゼＦＬおよびその製造方法に関する。

（１）作用 ■　過酸化水素存在下でヘラトリルアルコールを酸化し
てヘラトリルアルデヒドを生成する。

■　過酸化水素存在下でジアリルプロパンを酸化的に分
解する。

（２）基質特異性ジアリルプロパンおよびベラトリルグリセロール−β−
グアヤシルエーテル等リグニンの２量体モデル化合物を
酸化的に分解する。

またベラトリルアルコール酸化する。

（３）至適ｐＨおよびｐＨ安定性ｐＨ３付近でベラトリルアルコールを酸化する作用が至
適であり、ｐＨ３，５ないし７の範囲で安定である。

（４）至適温度および熱安定性２５℃付近でベラトリルアルコールを酸化する作用が至
適であり、５５℃までの熱に安定である。

（５）等電点は４．８付近である。

（６）本酵素の分子量は約４２，０００である。

（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法による。）（７）本酵素はＦｅＳＯ４、ＣｕＳＯ４により弱く阻害
を受け、ＥＤＴＡ、　ＫＣＮ　、ジチオスレイトール、
ヒヒドロキシルアミン、ＮａＮ、、チオウレアで強く阻
害される。

（８）本酵素はヘム含有酵素であり、４０７ｎｍ付近に
極大吸収をもつ。

（９）本酵素の作用には過酸化水素を必要とする。

本酵素の力価測定はベラトリルアルコールを基質として
下記の第１表に示した反応液中３０’Ｃで酵素を作用せ
しめ。生成するベラトリルアルデヒドの紫外吸収値を３
１０ｎｍで経時的に記録測定して行う。１分間にｌｎｍ
ｏｌ生成せしめる酵素量を１単位とする。

第１表　酵素力価測定のための反応液組成５ｍＭ　　へ
ラトリルアルコール　　　　　　　Ｏ，Ｌｍｌｏ、５Ｍ
酒石酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３，０）　　　０．２　
ｍ１５．４ｍＭ過酸化水素　　　　　　　　　　　０．
１ｍｆｔ酵素液　　　　　　　０．６ｍ１本酵素はリグニンのモデル化合物としてよく用いられる
ベラトリルアルコール（Ｉ）、ジアリルプロパン（ＩＩ
）、β−０−４ダイマ一モデル化合Ｔｈ（［［［）に作
用して、ベラトリルアルコールをベラトリルアルデヒド
に酸化し、またジアリルプロパンおよびβ−０−４ダイ
マ一モデル化合物は以下に示したようにプロパンのα、
β炭素結合を酸化的に切断する。

以上のように本発明の酵素の作用機序は従来より知られ
ているリグニンパーオキシダーゼの作用機序となんら変
るものではない。

（ｎ） →印は切断部位を示す本発明の酵素はファネロケーテ属に屈するリグニンパー
オキシダーゼＦＬ生産菌を培地に培養することにより製
造されるが、好ましくはファネロケーテ・クリソスポリ
ウムに属し、高窒素条件下（６０ｍＭ）の培地で培養器
内の気相の酸素分圧を空気より高めることなく培養する
ことにより、培養液中にリグニン分解酵素を生産する能
力のある変異株を、上記の方法で培養し、培養物から該
酵素を採取することによって得られる。

本発明に用いる変異株は以下のようにして得ることがで
きる。

まず、ファネロケーテ・クリソスポリウムの胞子懸濁液
に紫外線を照射し、生存率が０．１〜ｌχとなるように
処理することによって変異の誘導を行う。次いで、第２
表に示すカークの培地に０．０５χのレマゾールブリリ
アントブルーＲ１および６０ｍＭの酒石酸アンモニウム
を含有させた培地に紫外線処理した胞子をまき、３７℃
で培養すると、野生株は色素を分解しないが、変異株は
色素を分解するためコロニーの周りがオレンジ色に変わ
る。この色素の分解速度の速いコロニーを拾うことによ
って、野生株では酵素生産できないような高い窒素濃度
の培地でリグニンパーオキシダーゼを生産する株を得る
ことができる。かくして得られた株を第２表に示すカー
クの培地で、培養容器に酸素を吹き込むことなしに静置
培養し、培養液のりゲニンパーオキシダーゼ活性の高い
株を選抜することにより、目的の変異株を得ることがで
きる。

本発明に用いる微生物としてはファネロケーテ・クリソ
スポリウムに属し、リグニンパーオキシダーゼＦＬを生
産する能力のある微生物であればいずれも用いることが
できるが、以下の菌学的性質を示すファネロケーテ・ク
リソスポリウムが特に適しており、ファネロケーテ・ク
リソスポリウムＭＥ４４６に由来する変異株であるファ
ネロケーテ・クリソスポリウムＰＬ−２１株が例示され
る。

なお、この微生物を工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託申請したが、その受託が拒否された。

（１）　　高濃度窒素源およびＯ−ジアニシジンを含む
培地で培養すると赤褐色色素を生成する。

（２）気相の酸素分圧を空気より高めることなく培養し
て、リグニンパーオキシダーゼＦＬを生産する。

（３）高濃度窒素源を含む培地で培養してリグニンパー
オキシダーゼＦＬを生産する。

本発明で使用する培地としては、下記第２表のカーク（
Ｋｉｒｋ）の培地が代表的である。

第２表　カークの培地（本頁以下余白）京Ｋｉｒｋ　　ｓ　　５ａｌｔｓＫ１１２Ｆ’０゜門ｇｓＯａ　　・７＋＋２０ＣａＣ］　２　　・２１１ｚＯ塩酸チアミンニトリロ三酢酸Ｍｇ５Ｏｎ　　・７＋１２０門ｎｓＯ，・Ｈ２ＯａＣＩＦｅＳＯ４・７１１ｚＯＣｏＳＯ。

ＣａＣＩｚ　　・２１１ｚＯｎ５０４ＣｕＳ０４Ｈ５１１ｚＯ八ＩＫ（Ｓ０４）Ｚ８３ＢＯ。

ａＭｏＯｎ（ｌｆｆｉ中）０ｇｇｇ０ｍｇ５０ｍｇ３０ｈ＋ｇ５０＋ｒ＋ｇ００ｍｇ０ｍｇ０ｍｇ１０ｎ＋ｇ０ｍｇ１ｍｇ１ｍｇ１ｍｇ１ｍｇ培地中に添加する各成分の種類や量は必ずしも上記の組
成に従う必要はないが、窒素源の濃度はアンモニア態窒
素として１０から６０ｍＭであることが望ましい。

リグニンパーオキシダーゼＦＬ生産のための培養は以下
のように行う。胞子を滅菌生理食塩水に懸濁し、窒素源
として例えば０．６２％ペプトン（Ｎとして６０ｍＭ）
含むカークの培地に接種する。培養容器は綿栓なと通気
性のある栓で蓋をする。

野生株の培養のように酸素で培養容器内の気相を置換す
る必要はない。培養は静置培養で４０℃以下で行うが、
３７℃程度が望ましい。３日目ないし８日目には培養ン
夜中にリグニンパーオキシダーゼＦ　Ｌを検出すること
ができる。変異株の活性は野生株に比べて最高約１００
倍高い。

本発明の酵素は主として培養液中に分泌生産されるので
、本酵素を採取するには培養終了後の培養物から菌体を
濾過、遠心分離等の方法で除去した培養上清から、通常
の酵素単離の方法により行うことができる。

例えば陰イオン交換体によるカラムクロマトグラフィー
、高速液体クロマトグラフィー、ゲル濾過等で行うが、
もちろんこれらの方法を繰り返すこと、他の常法の精製
手段を必要に応じ組み合わせて用いることもできる。

なお、本発明の酵素は従来より知られているファネロケ
ーテ・クリソスポリウムｈＥ４４６のリグニンパーオキ
シダーゼおよび特願昭６２−５３８４７に開示されてい
るリンゼニンバーオキシダーゼ４Ｆ−１とは以下の点が
異なっている。

１）等電点：野生株ＭＥ４４６の酵素は３以下であり、
＾ＴＣＣ２４７２５株では４．５以下特願昭６２−５３
８４７の酵素（ＭＰ−１’）は５．０−５．１であるが
、本発明の酵素は４．８である。

２）　温度安定性：野生株１４４６の酵素は、５５℃１
０分の処理で完全に失活し、特願昭６２−５３８４７の
酵素（ＭＦ−１）は６０℃でも１００％活性を維持して
おり、６５℃で完全に失活するが、本発明の酵素は５５
℃で８５％の活性を維持しており、６０℃では５０％の
活性が残っている。

３）　　ｐＨ安定性：野生株ＭＥ４４６の酵素はｐＨ４
６の範囲で安定であるが本酵素及び特願昭６２−５３８
４７号の酵素（ＭＦ−１）は、３．５−７の範囲で安定
である。

実施例１ファネロケーテ・クリソスポリウムＰＬ−２１株をマル
トアガー（Ｄｉｆｃｏ社製）のスラントに接種し、７日
以上３７℃に保温して胞子を充分に形成せしめた後、滅
菌生理食塩水を加えて胞子懸濁液を作成しく約１０７個
／ｃｃ）、６．２ｇ／　ｌのペプトンを含むカークの培
地に培地容量の０．５％の胞子懸濁液を添加し、紙栓を
して３７℃に静置した。培養開始後５日目に培養を止め
、以下の要領で酵素を採取した。

酵素活性は１３００単位／ｍＱであった。

菌体をガーゼで濾過除去し、更に濾紙により除菌した培
養液をエバポレーターにより３０℃で濃縮、更に限外濾
過（Ａｍｉｃｏｎ　ＰＭ　　１０）により濃縮し、２０
ｍＭコハク酸緩衝液（ｐＨ４，５）に対して透析した。

次いで２０ｍＭこはく酸緩衝液（ｐＨ４，５）で平衡化
したＤＥＡＥ−セファロースＣＬ−６８（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ社）カラム（径１ｘ４ｃ＋ｎ）に通した。野生株
のリグニンパーオキシダーゼはおおむねこのカラムに吸
着するのに対し、本発明の酵素は吸着せずに素通りした
。

続いてこの素通り画分を限界濾過により濃縮した後、ｐ
Ｈ４，５の２０１１１Ｍこはく酸緩衝液に対し一夜透析
し、該緩衝液で平衝化したＨＰＬＣカラム、ＴＳＫｇｅ
ｌ　ＤＥＡＥ−５ＰＷ　（東ソー社製）に通した。溶離
条件は流速１ｍｌ／１ＩＩｉｎとし、２０ｍＭこはく酸
暖衝液（ｐＨ４，５）を、試料５０−２００μ２を注入
後３分間流し、９０分かけて０−５００ｍＭ食塩濃度勾
配で溶出した。検出は２８０ｎｍおよびヘム蛋白質の特
異吸収４０７ｒ＋ｍで行った。

はぼ素通りの３．８分（ピーク１）および５．８分（ピ
ーク２）に活性のある２つの大きなピークかえられた。

これら２つのピークの酵素活性の和は全体の９割を占め
た。それぞれ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）で平衝化
したＨＰＬＣカラム、ＴＳＫ−ｇｅｌ　ＤＥＡＥ−５Ｐ
Ｗ（７，５ｍｍ　１．Ｄ、　Ｘ７．５　ｃｍ）にかけた
。溶離条件は流速０．８ｍｌ　／　ｍ　ｉ　ｎとし、試
料注入後６分間食塩を含まない２０戚リン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７）流した後４分で０から５００ｍＭの食塩の直線濃
度勾配をかけ更に７０分５００ｍＭを保持した。ピーク
１は２８．５分、ピーク２は２９分に溶出した。それぞ
れの活性画分を集め、ＳＯＳポリアクリルアミドゲル電
気泳動により単一の酵素に精製されていることを確認し
た。

アンホラインＰＡＧプレートｐＨ４−６，５（ＬＫＢ社
製）による等電点電気泳動の結果、ピーク１はｐ１５．
０１ピーク２はｐ１４．８０であり、ピーク１は特願昭
６２−５３８４７の発明酵素に相当するものであった。

ピーク２の酵素は従来知られていない新規酵素であった
。本酵素は１０Ｑｄの培養濾液から収率１９％で、０．
７９ｍｇを得た。比活性は２１．９Ｘ１０３単位／■で
あった。

以下に本発明の性質について調べた。

（１）　　作用機序本酵素の作用機序を確認するために、リグニンモデル化
合物として、ヘラトリルアルコール（■）、ジアリルプ
ロパン（１−（３’、４ジメトキシフエニル）−１，３
−ジヒドロキシ−２−（４”−メトキシフェニル）プロ
パン）　（ＩＩ）、およびβ−０＝４型ダイマー（１−
（４’−エトキ、シー３′−メトキシフェニル）−２−
（２’−メトキシフェノキシ）〜３−ヒドロキシプロパ
ンー１−オン〕（Ｉ［Ｉ）を用いて試験を行った。

酵素反応は力価測定法の項で述べた組成の反応液中で行
い、基質は終濃度が０．５ｍＭとして、ベラトリルアル
コールの代りに加えた。

反応は３０℃で５時間行い、反応終了後の反応液の酢酸
エチル抽出液を薄層クロマトグラフィーで分析した。

薄層は蛍光剤を含むシリカゲルの薄層板（Ｍｅｒｃｋ社
製、Ｎｏ、　５７４４）を用い、ジクロロメタン：メタ
ノール（２０：１　（ν／Ｖ））で展開した。

同時に構造の明らかな積率試料を展開し、分解産物を展
開し、分解産物を同定した。第１図に結果を示す。

ジアリルプロパンおよびベラトリルグリセロール−β−
グアヤシルエーテルが酸化的に分解した際生ずる分解産
物のスポットが観察できた。

またベラトリアルコールが酸化した結果生ずるヘラトリ
ルアルコールが観察できた。

（２）至適ｐＨおよびｐ、Ｈ安定性酒石酸ナトリウウム緩衝液（ｐＨ４以下）、こは（酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ４−６）、りん酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ７−８）を用いた。

至適ｐｕの結果は第２図に示す通りであって至適ｐＨは
３付近であった。

ｐＨ安定性は本発明の酵素を２０ｍＭの所定の緩衝液中
で４０℃１１０分間保持し、活性を測定した。結果は第
３図に示す通りであってｐＨ３，５−７で安定であった
。

（３）至適温度および熱安定性至適温度は温度条件を変えて本発明酵素の活性を測定し
た。その結果は第４図に示す通りであって、その至適温
度は２５℃であった。

熱安定性は２０ｍＭこはく酸緩衝液（ｐＨ４，５）中２
０〜７０℃の各温度で本発明酵素を１ｏ分間放置し、酵
素活性を測定した。その結果は第５図に示す通りであっ
て、本発明酵素は５５℃まで安定であった。

（４）等電点アンホラインＰＡＧプレートｐＨ４−６，５（ＬＫＢ社
製）による等電点電気泳動の結果４．８０であった。

（５）分子量ＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定し約
４２，０００であった。

（６）種りの物質の影客金属塩、阻害剤等種々の物質を反応液中にＩｎ＋？の濃
度で添加し、活性を測定した。結果は次に示す第３表の
通りであった。

（木頁以下余白）第３表（濃度１　ｍＭ）コントロールｉＣＩＣＩａＣＩｎＳＯ４ｎＣｌ２ＣａＣＩ□ ｇＳＯａ１１ｇｃｌ。

ＥＤＴＡＣＮａＮ３メルカプトエタノールチオウレアジチオスレイトールヒドロキシルアミン金属塩、＊特願昭６２５３８４７号の発明の酵素（７）本酵素はヘム蛋白質の特徴である４０７ｎｍ付近
の吸収があり、水溶液は褐色を呈する。

（８）本酵素の作用には過酸化水素を必要とする。

比較例１野生株の酵素は、ＭＥ４４６株を窒素源濃度を１．２ｍ
Ｍに聞えたカークの培地で３日置きに酸素ガスで培養容
器内の気相を置換しながら培養せしめ、６８日目の培養
上清を実施例１と同様の方法で処理し、イオン交換カラ
ムで精製した。培養濾液中の活性は８単位／　ｒｒｄｌ
であった。野生株の酵素は２０ｍＭこはく酸緩衝液（ｐ
Ｈ４，５）で緩衝化したＤＥＡＥ−セファロースＣＬ−
６８（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）カラム　（径１×４ｃｍ
）全て吸着し、Ｏ−０，５Ｍの食塩濃度勾配で溶出する
と、０．２Ｍ付近で溶出せしめられる主要画分が得られ
た。

該主要画分の酵素について実施例１と同様の方法でその
性質を調べ、比較した。

至適ｐＨ，ｐＨ安定性、至適温度、熱安定性の結果をそ
れぞれ第２図、第３図、第４図、第５図に示した。

〔発明の効果〕

本発明により、従来より知られた酵素に比べて、製造方
法が容易であり、マンガンイオンにより活性が促進され
るリグニンパーオキシダーゼが発明され、実用上有利な
酵素が供給できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明酵素の作用機序、第２図は本発明酵素、
野性株および特願昭６２−５３８４７号の酵素の至適ｐ
Ｈ３第３図は本発明酵素、野性株および特願昭６２−５
３８４７号の酵素のｐＨ安定性、第４図は本発明酵素、
野性株および特願昭６２−５３８４７号の酵素の至適温
度、第５図は本発明酵素、野性株および特願昭６２−５
３８４７号の酵素の熱安定性を示すグラフである。いずれの図においても、白抜き細線が本発明の酵素の結
果を示し、黒塗り破線及び白抜き太線は比較例として行
った野生株および特願昭６２−５３８４７号の酵素の結
果を示す。第図第４図温ご（’Ｃ）第３図 δ 温度（℃）

Claims

【特許請求の範囲】１）下記の性質を有するリグニンパーオキシダーゼＦＬ（１）作用［１］過酸化水素存在下でベラトリルアルコールを酸化
してベラトリルアルデヒドを生成する。［２］過酸化水素存在下でジアリルプロパンを酸化的に
分解する。（２）基質特異性ジアリルプロパンおよびベラトリルグリセロール−β−
グアヤシルエーテル等リグニンの２量体モデル化合物を
酸化的に分解する。またベラトリルアルコールを酸化する。（３）至適ｐＨおよびｐＨ安定性ｐＨ３付近でベラトリルアルコールを酸化する作用が至
適であり、ｐＨ３．５ないし７の範囲で安定である。（４）至適温度および熱安定性２５℃付近でベラトリルアルコールを酸化する作用が至
適であり、５５℃までの熱に安定である。（５）等電点は４．８付近である。（６）本酵素の分子量は約４２，０００である。（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法による。）（７）本酵素はＦｅＳＯ＿４、ＣｕＳＯ＿４により弱く
阻害を受け、ＥＤＴＡ、ＫＣＮ、ジチオスレイトール、
ヒドロキシルアミン、チオウレア、ＮａＮ＿３、で強く
阻害される。（８）本酵素はヘム含有酵素であり、４０７ｎｍ付近に
極大吸収をもつ。（９）本酵素の作用には過酸化水素を必要とする。２）ファネロケーテ属に属し、請求項１）記載のリグニ
ンパーオキシダーゼＦＬ生産能を有する微生物を培地に
培養し、培養物からリグニンパーオキシダーゼＦＬを採
取することを特徴とするリグニンパーオキシダーゼＦＬ
の製造方法３）ファネロケーテ属に属する微生物がファネロケーテ
・クリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃａｅｔｅ　ｃｈ
ｒｙ−ｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）属に属し、以下の菌学的性
質を有する変異株であることを特徴とする請求項２）記
載の製造方法。（１）高濃度窒素源およびｏ−ジアニシジンを含む培地
で培養すると赤褐色色素を生成する。（２）気相の酸素分圧を空気より高めることなく培養し
て、リグニンパーオキシダーゼＦＬを生産する。（３）高濃度窒素源を含む培地で培養してリグニンパー
オキシダーゼＦＬを生産する。