JPH02501268A - トロンボゲンを形成しない基質の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 トロンポゲンを形成しない基質の製造方法本発明は、物理的配合、表面への付着 および（または）化学的手段により、ペプチド結合形又は遊離形としてのトロン ボケン非形成性内皮細胞表面多糖類（ＨＳＩ）を合成ポリマーあるいはバイオポ リマー（基質）に配合し、付着させあるいは両者を変血液親和性基質を製造する 方法に関するものである。これらのポリマーは繊維、中空繊維、膜、器官代替部 、カニユーレ、シリンジ、管、血液容器等の形であって良く、又これらは別の材 料から作ることも出来る。

非生理的ポリマーはこれに何らかの補助的手段を施こさない限り多少なりとも即 座に血液を凝固させてしまうことが知られている。更に又、血液の流動状態（こ れは基質の形状、表面状態および弾性に特に影響される）も又血液の凝固プロセ スに影響を与えることも知られている。ルかしながら、例えばＨＰ−コポリマー 、セルロース、ぶつ化ポリエチレン、ポリエーテルウレタン、ポリエーテルカー ボネートあるいは例えばポリアクリルアミドのヒドロゲルの様な適当なポリマー を選択すれば、該ポリマーとの接触後も血液の凝固をかなり抑制することが出来 る。

又血液の凝固をより効果的に抑制する別の方法としては、疎水性ポリマーをアル ブミンで被覆する方法がある。血液凝固を抑制する更に又別の可能な方法として は、スルホン化又は硫酸化物、例えば硫酸化ポリエチレン又はビニルスルホン酸 を含有するコポリマーを使用しても良い、最良の抗血液凝固効果を得るのには、 例えばヘパリンやヘパリノイドの様な抗血液凝固性物質をポリマー中に導入する かあるいは該物質でポリマー表面を変性すれば良い、ヘパリンを微孔性プラスチ ック材料に導入して（この場合、ヘパリンはそのプラスチック材料から容品に拡 散し得る）゛、抗凝固効果を得ることはすでに行なわれている。

又より良い効果が、例えばスチレンを表面変成しそしてひき続きヘパリンとの塩 様結合を行うことにより達成された。しかしながらこれまでに作成されたものは どれも、例えば血管の管腔壁上の内皮細胞表面自体に相応する様な血液親和性を 保有するものではなかった。

本発明の目的は、血液親和性ポリマー基質の製造方法を提供することである。

本発明の主題は、生物学的に不活性な内皮細胞表面多種類を、特にその凝固生理 学的見地から、遊離形又はペプチド結合形として適当なポリマー中又はその表面 に沈着、吸着又は結合させる方法にある。この沈着、吸着又は結合ファンデルク ールス相互作用、塩架橋、キレート形成又は共有結合により行なうことが出来る 。この様に変成したポリマーの血液親和性は、これまでに知られたあらゆるポリ マーに比べてより強力に改善されている。

上記の様にして変成したポリマーは人工器官、膜、中空繊維、酸素添加装置、シ リンジ、管、容器あるいは繊維含有材料等に１、ＨＳＩが、酵素の不動化、膜の 形成、可塑性処理ならびにファンデルクールスか、疎水性相互作用、キレート形 成あるいは塩様結合等によるポリマー化学的方法等の公知の方法に従って合成ポ リマー又はバイオポリマーの表面に付与されあるいは不動化されあるいは一体化 されている。

２．８ＳＩがペプチド、たん白、糖およびポリマーにおける化合により一体化さ れている。

ここでｒ）ＩｓＩＪとは内皮細胞表面たん白多糖類を意味するものであり、これ は約１９５．０００の分子量を有し、そしてその多糖部は１分子につき３〜４個 の多糖部から成って分子量３５，０００を有していて５５．０００のペプチド部 に相当する。この分子のサブユニットである多糖部（こればたん自分解やアルカ リ分解により入手可能である）は、例えば下記の点に関する全ての生物学的凝集 ならびに作用試験において完全に不活性であることが示されている。

・凝固因子との相互作用。

・抗トロンビン■との相互作用。

・例えば血小板由来生長因子やＥＧＦ等の様なヘパリン結合生長因子との相互作 用。

・例えばコラーゲンＩ〜■、ラミニン、フィブロネクチン、ニドゲンおよびエン タフチンの様な結合組織の構成ポリマーとの相互作用。

・血小板との相互作用。

この物質は、血液親和性基質の製造のためにポリマーと結合させる際に残りのペ プチド部と一緒にあるいはそれとは別個に多糖部として使用することが出来る。

別の種由来のＨＳＩを使用する場合に、血漿たん白を残りのペプチド部に結合さ せるかあるいは免疫の付与によりペプチド結合Ｈ５Ｉ多糖類の長期にわたる耐性 を抑制することが出来る。その様な場合に、ペプチド部は更にたん自分解するこ とにより短鎖化するか、あるいは所望によっては０．５Ｍ　ＮａＯＨの作用によ り完全に除去しても良い。

）１５１は、塊状培養した内皮細胞の調整培地から、あるいは内皮細胞自身から 、その分子量、疎水性ならびに電荷に従って単離される。

例えば、ウシ大動脈内皮細胞又はその他の種や組織（例えば角膜や液腔等）由来 の内皮細胞を、コラゲナーゼでの処理、機械的除去、例えばヘパリン結合および （又は）へバリチナーゼの様なその他の処理剤での処理、トリプシン又はその他 のプロテアーゼでの処理、あるいはＥＤＴＡ、　ＥＧＴＡ又はその他のキレート 剤の作用等により組織から単離し、そしてこれを大量に通常の組織培養しん、ぺ ）　ＩＪ皿、中空繊維潅流培養装置、ビーズ、円筒状じん容器を使用して、ある いはその他の種々の方法により培養する（１回の培養につき２Ｘ１０”個の細胞 ）、この培養は通常の組織あるいは細胞培養法に従って行なう。

上記の様にして細胞を採取し、くり返し凍結および解凍を行うことにより、ある いは超音波処理し、あるいは陶器肉処理したりあるいはその他の種々の方法によ りホモジナイズし、そして１０．　ＯＯＯｘｇで遠心分離し、その上ずみを洗浄 剤、好ましくは２％ＳＤＳと一緒に溶解する。

内皮細胞の調整培地はＨＳＩＯ別の起源としても使用することが出来る。この目 的のためには、まず最初に培地をキレート剤（例えばＥＤＴＡ）の存在下にコン ドロイチナーゼＡＢＣと一緒に培養し、回転蒸発器中で蒸発させ、そして次いで 細胞を起源とするものについて上記したのと原則的に同様の方法により処理する 。

）１５１含有物質をセファロースＣＬ−４Ｂによるクロマトグラフ処理する。使 用カラムの大きさは、直径と高さとの比がｌ：１０な０．１３Ｍ　）　’Ｊ　ス ／ＨＣＩ、　０．１Ｘ　ＳＤＳ　（ｐＨ７，４）すらびニソノ他の適当な溶出用 化合物を使用出来る。定性段階でのＨＳＩの検出は、クロマトグラフィー画分か ら採ったアリクオツドを、糖の検出法（例えばオルシン反応）の形で、あるいは ウロン酸の検出法（例えばカルバゾール反応）の形で、又あるいはセファロース クロマトグラフィーの前に少量の放射性標識したＨＳＩを添加する方法やあるい はその他の種々の方法の形で反応させることにより行なうことが出来る。

こうして固定した）ＩＳｌを含有するクロマトグラフィー画分を回転蒸発器を使 用してｌ／１０に蒸発させ、セファデックスＧ−２５でのクロマトグラフィー、 透析および限外ろ過膜による限外ろ過により脱塩し、８０％エタノール中あるい はその他の種々の方法により沈でんさせ、そして次いで３〜７Ｍ尿素中、又は洗 浄剤（例えば０．１！）リドンＸ−１００）中、又は緩衝塩（例えば０．１１’ ｌ　ＮａＡｃ。

ｐＨ６，５）中に吸収させる。この溶液を７Ｍ尿素、洗浄剤および緩衝塩の存在 下に陰イオン交換カラム（例えばＤＥＡＥ−セルロース）に供給し、そしてその 後に塩傾斜法（例えばＯ−Ｉ　Ｍ　ＮａＣＺ）によりカラムから溶出する。

これを更に精製するのに次の様な方法を使用することが出来る。

・好ましくは１．４ｇ／−の媒体濃度でのＣｓＣ１傾斜法による密度超遠心分離 。

・ゲル−クロマトグラフィー／イオン交換クロマトグラフィーのサイクル反復。

・親油性ゲル（例えばオクチル−セファロース）によるクロマトグラフィー。

・イオン交換カラム、シリカゲルカラム、逆相カラムならびにゲルカラムによる ＨＰＬＣ。

ＨＳＩ　Ｍｉ成物の均質性試験には下記の基準を使用する。

（１）加水分解生成物中にガラクトサミンが検出されないことは、硫酸コンドロ イチンの汚染のないことを示す。

（２）　２８０　ｎｔａにおいて極大吸収、２６０ｎｍにおいて極小吸収を示す 場合はＲＮＡまたはＤＮＡ汚染のないことを示す。

（３）　ＮＶ−篩アガロースゲル電気泳動における単一バンドおよびＳＯＳゲル 電気泳動における単一バンドを示す場合ばたん白汚染のないことを示す。

（４）　０．５Ｍ　ＮａＯＨで１２時間４℃で培養すると高分子多糖が検出組成 物を変成することによっても又、未処理細胞から、あるいは未処理媒地からＨ５ Ｉ多糖又はペプチド多糖をアルカリ分解（例えは０．５Ｍ　ＮａＯＨ中、１２時 間４°Ｃで培養）により、あるいはたん自分解（例えばパパイン又はプロナーゼ を使用）により、又あるいは各製造工程中の別の方法により遊離することが出来 るようになり、そしてこれはゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラ フィー、密度勾配超遠心分離あるいはゲル透過カラム、シリカゲルおよび（又は ）逆相カラムを使用したＨＰＬＣにより精製することが出来る。そして上記第（ ３）項を除いて、上記の全部の均質性基準はこれらの組成物にも適用出来る。

ここで「合成ポリマーおよびバイオポリマー」とは、現在マでに知られた全ての 天然ポリマーならびに現在までに作られた全ての合成ポリマーを意味するもので あって、種々の配列、種々の分子量および統計的なそして（又は）代替的な配列 を有する分子の種々の配列順序の種々のホモポリマーならびにコポリマー、更に は配列長さが種々の分布状態にあるブロックコポリマー、トリブロックコポリマ ー、イオノマー、グラフトコポリマー、種々の架橋結合度のポリマーならびにポ リマーｆｆ（１反応により変成した変成ポリマー等を包含する。以下に記載のポ リマーは本発明において使用可能な°ポリマーの具体例を例示す条ものである。

これらは更に共重合、グラフト反応あるいはポリマー類似反応により変成するこ とが可能であり、従って本発明において適当に使用可能な合成ポリマーおよびバ イオポリマーの選択範囲は更に拡大したものとなる。

ポリオレフィン、ポリエチレン（）ＩＤＰＥ％ＬＤＰＥ、、ＬＬＰＥ）　、ふっ キセンー（１）とのコポリマー、エチレンとプロピレンとのコポリ例えば、ジシ クロペンタジェン、エチリデンノルボネン、メチレンエンドメチルへキサヒドロ ナフタレン、シス−シス−シクロオクタジエン−１，５−ヘキサジエン−１，４ ）、ヘキシン（１−ヘキセンメチルへキサジエン）；エチレン−酢酸ビニルコポ リマー、エチレン−メタクリル酸コポリマー、エチレンＮ−ビニルカルバゾール 、エチレントリフルオロ−モノクロロエチレン、ポリプロピレン、ポリブテン− （１）、ポリ−４（メチルペンテン−（１））、ポリイソブチンコポリマー、イ ソブチン−スチレンコポリマー、ブチルゴム、ポリスチレンおよび変成スチレン 、クロロメチル化スチレン、スルホン化スチレン、ポリ（４−アミノスチレン） 、スチレン−アクリロニトリルコポリマー、スチレン−アクリロニトリル−ブタ ジェンコポリマー、アクリロニトリル−スチレン−アクリルエステルコポリマー 、スチレン−゛ブタジェンコポリマー、スチレン−ジビニルベンゼンコポリマー 、シス−トランス、１−２および３−４配置のポリジエン、ポリブタジェン、ポ リイソプレン、精製天然ゴム、クロロブレン、ポリスチレン、ブタジェンコポリ マー（ＳＢＲ）　、）リブロックポリマー（ＳＢＳ）　、ＮＢＲ−アクリロニト リル−ブタジェンコポリマー、ポリ−（２，３−ジメチルブタジェン）、脂環式 第２アミン又はベンジル−し−グルタメート又はポリペプチド又はＮ−カルボベ ンズオキシリジン末端を有するポリブタジェンのトリブロックコポリマー、ポリ −（アルケナマー）−ポリペンテナマレン、ポリ−（Ｐ−キシレン）、ポリ酢酸 ビニル、酢酸ビニル−ステアリン酸ビニルコポリマー、酢酸とニル−ピバリン酸 ビニルコポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルホルマール、ポリビニル ブチラール、ポリビニルエーテル、ポリ−（Ｎ−ビニルカルバゾール）、ポリ− Ｎ−ビニルピロリドン、ポリ−（４−ビニルピリジン）、ポリ−（２−ビニルと リジンオキシド）１．ポリ−（２−メチル−５−ビニルピリジン）、ブタジェン −（２−メチル−５−ビニルピリジン）コポリマー、四ふっ化ポリエチレン、テ トラフルオロエチレン−へキサフルオロプロピレンコポリマー、テトラフルオロ エチレン−パーフルオロプロビルビニルエーテルコポリマー、テトラフルオロエ チレン−エチレンコポリマー、テトラフルオロエチレン−トリフルオロニトロソ メタンコポリマー、四ふっ化エチレン−パーフルオロメチルビニルエーテルコポ リマー、四ふっ化エチレン−（パーフルオロ−４−シアノブチルビニルエーテル ）コポリマー、ポリ−（トリフルオロモノクロロエチレン）、トリフルオロモノ クロロエチレン−エチレンコポリマー、ぶつ化ポリビニリデン、ヘキサフルオロ イソブチレン−ぶつ化ビニリデンコポリマー、ポリぶつ化ビニル、ポリ塩化ビニ ル、ＡＢＳ、　ＭＢＳ、　ＮＢＲ。

塩化ＰＥ、　ＥＶＡＣ又はポリアクリレートを付加した耐衝撃性ｐｖｃ。

軟ＰｖＣ１後塩化ｐｖｃ　、塩化ビニル−酢酸ビニルコポリマー、塩ニルー塩化 ビニリデンコポリマー、塩化ビニリデン−アクリロニトリルコポリマー、ポリア クリル酸、アクリル酸−イタコン酸コポリマー、アクリル酸−メタクリル酸コポ リマー、アクリルエステル−アクリロニトリルコポリマー、アクリルエステルジ ヒドロパーフルオロブチルアクリレート）、ポリ−（３−パーフルオロメトキシ −１，１−ジヒドロパーフルオロブチルアクリレート）、ポリスルホン、ポリア クロレインポリアクリルアミド、アクリル酸−アクリルアミド−コポリマー、ア クリルアミド−マレイン酸コポリマー、アクリルアミド−ヒドロキシメチルメタ クリレートコポリマー、アクリルアミド−メチルメタクリレートコポリマー、ア クリルアミド−メチルアクリレートコポリマー、アクリルアミド−無水マレイン 酸コポリマー、アクリルアミド−無水メタクリル酸コポリマー、アクリルアミド −アニリノアクリルアミドコポリマー、アクリルアミド−（Ｎ−アクリロイル− ４−カルボキシメチル−２，２′−ジメチルチアゾリン）コポリマー１．ポリメ タクリルアミド、メタクリルａ−メタクリロニトリルコポリマー、メタクリル酸 −３−フルオロスチレンコポリマー、メタクリル酸−４−フルオロスチレンコポ リマー、メタクリル酸−３−フルオロアニリドコポリマー、メタクリル酸とメタ クリル酸−３−フルオロアニリド又はフルオロスチレンとのニトロ化コポリマー 、又はメタクリル酸と３．４−イソチオシアナトスチレンとのコポリマー、又は Ｎ−ビニルピロリドンと無水マレイン酸とのコポリマー、又はポリビニルアルコ ールおよびポリアリルアルコール、ポリアクリロニトリル、アクリロニトリル− ２−ビニルピリジンコポリマー、アクリロニトリル−メタリルスルホネートコポ リマー、アクリロニトリル−Ｎ−ビニルピロリドンコポリマー、水酸基含有ＰＡ Ｎ、アクリロニトリル−酢酸ビニルコポリマー、アクリロニトリル−アクリルエ ステルコポリマー、ポリアリル化合物、ポリジアリルフタレート、ポリ−トリス アリルシアヌレート、ポリ−α−シアノ−アクリレート、ポリジメチルアミノエ チルメタクリレートおよびアクリロニトリルとのコポリマー、メチルメタクリレ ート−ラウリルメタクリレートコポリマー、バラーアセタミノフェニルエトキシ メタクリレートーメチルメタクリレートコポリマー、グリコールジメタクリレー ト−メタクリレートコポリマー、ポリ−２−ヒドロキシエチルメタクリレート、 ２−ヒドロキシエチルメタクリレート−メチルメタクリレートコポリマー、グリ コールメタクリレート−グリコールジメチルメタクリレートコポリマー、ＨＥＭ Ａ−スチレンブロックおよびグラフトコポリマー、ポリーＮ、Ｎ’−Ｐ、Ｐ’− オキシジフェニレンメライトイミド、ポリジフェニレングリコールビスアリルカ ーボネート、脂肪族ポリエーテル、ポリオキシメチレン、ポリオキシエチレン、 ポリフルオラール、ポリクロラール、ポリエチレンオキシド、ポリテトラヒドロ フラン、ポリプロピレンオキシド、エチレンオキシド−プロピレンオキシドコポ リマー、プロピレンオキシド−アリルグリシジルエーテルコポリマー、ポリエピ クロルヒドリン、エチレンオキシド−エピクロルヒドリンコポリマー、ポリ−１ ，２−ジクロロメチル−エチレンオキシド、ボＩＪ−２．２−ビスークロロメチ ル−オキサシクロブタン、エポキシ樹脂、ビスフェノールＡ−ジグリシジルエー テル、フェノールホルムアルデヒド樹脂、クレゾールホルムアルデヒド樹脂、炭 素無水物との架橋結合体、ジエチレンジアミン、イソホロンジアミン、４．４′ −ジアミノジフェニルメタンとしてのアミン、芳香族ポリエーテル、ボリフェニ レンオキシドニボリフェノール、フェノキシ樹脂、脂肪族ポリエステル、ポリエ チレン、ポリグリコリド、ポリ−β−プロピオン酸、ポリーβ−Ｄ−ヒドロキシ ブチレート、ポリピポラクトン、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリエチレングリ コールセバケート、ポリエチレングリコールアジベート、無水マレイン酸、無水 フタール酸、イソフタール酸、テレフタール酸又はＨＥＴとエチレングリコール 、１゜２−プロピレングリコール、ネオペンチルグリコール、オキシエチル化ビ スフェノール又はシクロドデカンジオールとからの不飽和ポリエステル、不飽和 ポリエステルとスチレン、メタクリレート、ビニル七ツマー１酢酸ビニル又はメ タクリル酸メチルとの共重合による不飽和ポリエステル樹脂又はビニルエステル 樹脂の架橋結合体、ビスフェノールＡおよびその誘導体からのポリカーボネート およびポリエーテル、ビスフェノールＡおよびその誘導体からのセグメント含有 ポリカーボネート、および脂肪族ポリエーテルおよび脂肪族ポリエステル（上記 参照）、表面変成ポリエチレングリコールテレフタレー）（ＰＥＴ）、アクリル 酸でグラフトしたＰＥＴ又は表面を部分加水分解したＰＥＴ、ポリブチレングリ コールテレフタレート、ポリエチレングリコールテレフタレート、ポリエチレン グリコールテレフタレート−アジベート、ポリエーテルブロックおよび脂肪族ポ リエステルブロックおよびポリヒドロフランブロックでセグメント付与したポリ エチレングリコールテレフタレート、ポリーＰ−ヒドロキシベンゾエート、ヒド ロキシ安息香酸−イソフタール酸コポリマー、ヒドロ、キシ安息香酸−ヒドロキ ノンコポリマー、ヒドロキシ安息香酸−テレフタール酸コポリマー、ヒドロキシ 安息香酸−ｐ、ｐ’−ジフェニルエーテル−コポリマー、ポリビニルピロリドン 、ポリビニルピロリドン−無水マレイン酸−コポリマー、グリセリン、トリメチ ルプロパン、ペンタエリスリトール、ソルビトールとフタール酸、こはく酸、マ レイン酸、フマール酸、アジピン酸およびあまに油、ひまし油、大豆油、やし油 の脂肪酸とのアルキド樹脂、脂肪族ポリスルフィド−（Ｒ−５，−）　（ここで Ｘはいおう化度である）、芳香族ポリスルフィド、ポリチオ−１，４−フェニレ ン、フェノールおよびチオフェンの芳香族ポリスルフィドエーテル、ポリエーテ ルスルホン、ポリスルホ−１，４−フェニレン、ポリ−ｐ−フェニレンスルホン 、ポリイミン、ポリエチレンイミン、分枝ポリエチレン、イミン、ポリアルキレ ンイミン、ポリアミド、ポリヘキサメチレンアジピンアミド、ポリヘキサメチレ ンセバシンアミド、ポリへキサメチレンドデカンジアミド、ポリトリデカンブラ シルアミド、植物油とジアミンおよびトリアミンとのベルサミド（シｅｒｓａａ ＋１−ｄｅ）　、ω−アミノカルボン酸とα、β、Ｔ、δ−アミノカルボン酸又 はラクタムとのポリアミドζテレフタールｉｄ　−ｍ−アミノベンゾヒドラジド とのポリアミドヒドラジド、例えばフマール酸とジメチルピペラジンとのポリピ ペラジンアミド、テレフタール酸とテトラミノベンゼン（置換体）、又はジアミ ノフェニルエーテルとジクロルフェニルスルホン（置換体および環状体）、又は ｍ−フェニレンイソフタールイミドおよびテレフタールアミドとのポリベンズイ ミダゾール、例えばピロメリット酸２無水物とメトキシ−ｍ−フェニレンジアミ ンとのポリイミド、例えばピロメリット酸２無水物とジアミノベンジジンとのピ ロン、芳香族ポリアミド、ポリ−ｍ−フェニレンイソフタ−ルアミド、ポリ−ｐ −ベンズアミド、ポリ−ｐ−フェニレンテレフタラミド、ｍ−アミノ安息香酸− Ｐ−フェニレンジアミンーイソフタール酸コポリマー、テレフタール酸およびヘ キサメチレンテトラミン、テレフタール酸およびトリメチルへキサメチレンジア ミンおよび２．４．４−　）ジメチルへキサメチレンアミンからの、あるいはテ レフタール酸、ジアミノメチレンノルボネンおよびカプロラクタムからの、ある いはイソフタール酸およびラウリンラクタムからの、あるいはイソフタール酸お よびジー４−（シクロヘキシルアミノ−３−メチル）−メタンからの、あるいは １．１２−デカンジアミドおよび４，４′−ジアミンジシクロヘキシルメタンか らのポリ−４，４′−ジフェニルスルホンテレフタラミド、例えばジカルボン酸 ジクロリド、テレフタール酸およびイソフタール酸の様な複素環や、オキシダゾ ール、トリアゾール、ビチアゾールおよびベンズイミダゾール構造を存するジア ミン複素環との芳香族ポリアミド、３−（ｐ−アミノフェニル）−７−アミノ− ２，４−（ＩＨ，３Ｈ）−キナゾリドン＋イソフタール酸、ポリアミノ酸、ポリ ーＬ−メチルーＬ−ダルタメート、ポリーＬ−グルタミン酸糖、例えばグルタミ ン酸とロイシン、グルタミン酸とフェニルアラニン、グルタミン酸とバリン、グ ルタミン酸とアラニン、リジンとロイシン、Ｐ−二トロー〇ルーフェニルアラニ ンとロイシン等からのコポリペプチド、ジイソシアネートとジアミンおよび尿素 とからのポリ尿素、脂肪族および芳香族ジイソシアナートと２官能性および３官 能性ヒドロキシル含有ポリエステル（上記参照）および脂肪族ボリエーテル（上 記参照）、およびこれらの２官能性アミノ基含有、ヒドロキシル基含有ならびに カルボキシル基含有物質（例えばヘキサメチレンジイソシアネート、ジフェニル メタンジイソシアネート、トリレンジイソシアネー）、２．４−および２．６− ）ルイジンジイソシアネート、キシリレンジイソシアネート、グリセリン、エチ レングリコール、ペンタエリスライド、３４−ジメチルアミノ−１，２−プロパ ンジオールおよび炭水化物、脂肪族および芳香族ジカルボン酸およびその誘導体 、０−５ｍ−１ｐ−フェニレンジアミン、ベンジジン、メチレン−ビス−０°− クロルアニリン、ｐ、ｐ’−ジアミノジフェニルメタン、１．２−ジアミノプロ パン、エチレンジアミン）による変成体からのポリウレタン、尿素および環状尿 素、メラミン、チオ尿素、グアニジン、ウレタン、シアナミド、酸アミドおよび ホルムアルデヒドならびに長鎖アルデヒドおよびケトンからのアミノ樹脂、シリ コーン、ポリジアルキルシロキサン、ジメチル−、ジエチル−、ジプロピル−、 ジフェニル−、フェニルメチルシロキサンとしてのジアリールシロキサンおよび アルキル−アリールシロキサン、例えばアリル基の欅な官能基を含有するシリコ ーン、例えばアミノプロピルトリエトキシシロキサン、２−カルボキシルプロピ ルメチルシロキサンの梯なアミノ基およびビニル基を含有するＴ−置換フルオロ シロキサン、ジメチルシロキサン単位とポリスチレン又はポリカーボネートブロ ックとのブロックコポリマー、スチレン、ブチルアクリレートとα、ω−ジヒド ロキシーポリメチルシロキサン、３．３．３−　）ルフルオロブロピルメチル１ ０％シロキサン）とのトリブロックコポリマー、シリコーンとポリカーボネート とのブロックコポリマー、セルロースおよびセルロース誘導体、例えばアセチル セルロース、パー゛フルオロブチリルエチルセルロース、パーフルオロアセチル セルロース、セルロースナイトレート、カルボキシメチルセルロース、再生セル ロース、ビスコースからの再生セルロースおよびその他のセルロース誘導体、ア ガロース、カラギーナン、デキストラン、マンナン、フルクトサン、キチン、ペ クチン、グリコサミノグリカン、でん粉、グリコーゲン、アルギン酸としての多 糖類、および全てのデオキシ多糖類およびハロゲノ−デオキシ多ｔｉｌｌ、アミ ノ−デオキシ多糖類又はスルフヒドリル−デオキシ多ＦＬＩおよびその誘導体、 ムレイン（ｍｕｒｅｉｎｅ）　、たん白質、例えばアルブミン、ゼラチン、コラ ーゲン■〜Ｘ■、ケラチン、フィブリンおよびフィブリノーゲン、カゼイン、血 漿たん白、乳たん白、動物および植物組織からの構成たん白、大豆たん白、食品 分野のたん白。

上記のポリマーは、これまでに知られたあらゆるモノマーを（モノマーについて はｒＦｕｎｃｆｉｏｎａｌ　Ｍｏｎｏｓ＋ｅｒｓ　Ｊ　、Ｒ，Ｈ，Ｙｏｃｕｔａ およびＥ、Ｂ、Ｎｙｇｕｉｓｔ　［、第１〜■巻、Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ （Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）社、１９７４年発行に記載されている。）更に又、上記ポ リマーはグラフト付加、ポリマー祿反応あるいは又更に別のブロックコ全に変成 することが出来る。ポリマー混合物、混和物、被覆ポリマーならびに複合体とし てのポリマー等も又合成することが出来る。これらのポリマーは更に又、高エネ ルギー放射線照射、光照射、酸化、加水分解、光化学反応、ハロゲン化、スルホ クロル化、クロルメチル化やあるいは有機溶媒中でのラジカル形成体Ｎａ、　Ｌ ｉ又はＫとの反応等により表面変成させても良い。

ポリマー誘導体は又、ペプチド、たん白、多糖類およびポリマー化学の分野にお いて反応性ポリマーを製造するのに使用するものとして知られている２官能性又 は多官能性の架橋剤の使用により作成することも出来る。以下にポリマー誘導体 を作成するのに使用出来る官能基又は架橋剤分子を挙げる０本発明においてはこ れから選択使用することが出来る。

ホスゲン、ホルムアルデヒド、グリオキザール、アクロレイン、ゲルタール　ジ アルデヒド、アジド、活性エステル、無水物、酸塩化物、エステル、混合無水物 、プロモシアノーゲン、ジフルオロニトロベンゼン、チオイソシアネート、エポ キシド、イミド、イソシアネート、ウレチオン基、ジイソシアネート、トリイソ シアネート、マレインイミド、ジシクロへキシルジイミド、Ｎ、Ｎ’−ビス−（ トリメチルシリルサルファージイミド）、パーオキシド、ビニルケト基、芳香族 ジアゾ化合物、ビニルスルホン、トリクロロトリアジン、モノクロロトリアジン 、ジクロロトリアジン、ブロモクロロトリアミド、ブロモアクリルアミド、ジフ ルオロモノクロロピリミジン、トリクロロピリミジン、ジクロロキノキサリン、 クロロアセチルアミノ基、クロロアセチル尿素、β−ハロゲノプロピオンアミド 、α、β−ジハロゲノプロピオンアミド、β−４級アンモニウムプロピオンアミ ド、β−スルファトプロピオンアミド、β−スルホニルプロモノカルボキシレー ト、置換シクロアルカンカルボキサミド、アルケンモノカルボキサミド、アリー ルアミド、クロトンアミド、置換了り−ルアミド、モノ−、ジーおよびトリーハ ロゲノアリールアミド、置換クロトンアミド、アルキンカルボキサミド、環状ハ ロゲノマレインイミド、アルキンカルボキサミド、置換脂肪族ケトン、置換脂肪 族スルホン酸のアミド、置換メタンスルホンアミド、置換エタンスルホンアミド 、β−スルファトエチルスルホンアミド、β−チオスルファトエチルスルホンア ミド、四級アンモニウムエタンスルホンアミド、ビニルスルスルホン酸のエステ ル、β−置換エチルスルホン、β−チオスルファトエチルスルホン、β−ハロゲ ノビニルスルホン、β−置換エチルアミン誘導体、β−スルファトエチルアミン 、β−ハロゲノエチルピラゾロン、Ｎ−゛（β−ハロゲノエチル）−アミド、Ｎ −（β−スルフ７トエチル）−アミド、β−置換エチルアンモニウム化合物、β −置換エチルアミド、Ｎ、β−ハロゲノエチルスルホンアミド、スルホン酸のβ 、Ｔ−ジハロゲノプロピオニルアミド、エチレンイミンおよびエチレンイミン化 合物、アリル基、プロパルギル基、ジアリルフタレート、トリアリルシアヌレー ト、ベンジル誘導体、２−置換チアゾールカルボン酸、クロロスルホニルピリジ ン、４−置換−３，５−ジシアノ−２，６−ジクロロピリジン、２．６−ビス− （メチルスルホニル）−ピリジンー４−カルボニルクロリド、クロロピラジジン 、ジクロロピリダゾン、１−アルキル−４，５−ジクロロ−６−ピリダジン、ク ロロ−およびプロモーピリミジン、３−（２’、４’、５”−トリクロロピリミ ジル−（６°−アミノ）−アニリン、４．５．６−　）ジクロロビリミジン−２ −カルボニルクロリド、トリフルオロピリミジン、トリフルオロモノクロロピリ ミジン、２−クロロトリアジニル誘導体、２−クロロ−４−アルキル−５−（） ＩＪアジニル−２−アミノカルボンａ）、２−クロロベンゾチアゾールカルボニ ル、６−アミノ−２−フルオロベンゾチアゾール、２−メチルスルホニル−６− アミノベンゾチアゾール、２．３−ジクロロキノキサリン−６−カルボニルクロ リド、１，４−ジクロロフタラジン−６−カルボニルクロリド、３−クロロ−１ ，２，４−ベンゾトリアジン−１−Ｎ〜オキシド−７−カルボニルクロリド、フ ルオロ−２−二トロー４−アジドベンゼン、スルホン酸エステル、Ｎ−スルホニ ル尿素、チオ−スルファト−８−アルキルエステル、Ｎ−メチロール尿素、Ｎ、 Ｎ”−ジメチロールグリオギザールモノウレイン、テレフタールジアルデヒド、 メシチレントリアルデヒド、イソチウロニウム基、トリアジルホルマール。

上記の合成ポリマーおよびバイオポリマーならびにこれらから作成し゛たポリマ ー誘導体は本発明に従って使用して、上記した各架橋剤あるいは架橋剤の官能基 と共にあるいはポリマーの表面変成法に従ってＨＳＩと一体化することが出来る 。又これと同様にして本発明に従っ゛て、ＨＳＩを上記の各架橋剤分子や架橋剤 の官能基と一緒に使用して、あるいは表面変成法により変成してポリマーと一体 化しても良い、　ＨＳＩ　とポリマー基質との共有結合は「０」の架橋長ををし て（すなわち、自己架橋あるいはポリマー基質又はＩ’ｌＳＩの官能基のみが関 与している架橋）、あるいは「０」より大きな架橋長を有して行なわれている１ 種々のスペーサー、例えば０．２〜９ｎｍの親水性、疎水性、両親媒性、帯電し たあるいは非帯電の、可撓性のあるいは嵩高のスペーサーを使用することも出来 る。

又Ｈ５Ｔとポリマー又はポリマー誘導体との一体化は次の様にして行なわれてい ても良い。

（１）ポリマーの陽帯電基、例えば四級アンモニウム基およびホスホニウム基と の塩形成架橋。

（２）巨大分子の官能基と金属との間のキレート結合を形成する公知方法による キレート生成。

（３）公知の官能基を有する、飽和および（又は）不飽和の長鎖炭化水素（８〜 ３０個のメチレン基から成る長さを有する）で、あるいは環状の飽和又は不飽和 炭化水素（その炭素数は６〜５０である）でＨＳＩおよび（又は）ポリマー表面 を変成させることによる疎水性相互作用。

更ε又、Ｉ（ＳＩとポリマーとの一体化は、プラスチック工業分野での方法に従 って、ＨＳＩをポリマー網状構造中へ吸着させる的に混合することにより行なう ことも出来る。

本発明による血液親和性基質は、繊維、中空繊維、膜、器官代替部、カニュール 、シリンジ、管、血液容器あるいはその他の形態として使用され、そしてここで 使用しあるいは合成するポリマーはそれぞれの必要とされる物理的、画械工学的 ならびに化学的見地から選択される。゛ ｍ殊 下記の実施例は本発明を説明するためのものである。最初に本発明によりポリマ ー基質と一体化するための）１５１の製造について記載する０次にそのいくつか の例としてポリマー基質との共有結合による一体化について記載する。尚ここで は容易に理解出来るように専ら同類のポリマーを使用した。

１旌■上 ボッマー　−るためのＨＳＩのｉ”　シ■ｍが丘夏立底 屠殺したばかりのウシから大動脈を採取する。これらを脂肪組織から分離し、そ して大動脈肋間をクリップでくくる９次いで大動脈を５０ｊ１！の滅菌ＰＢＳで ３回洗浄する。一方の端をクリップでくくりつけて、１　ｄ　ＥＤＴＡ／ＰＢＳ 中の０．１χウシバンクレアストリプシンＣＢｏｅｈｒ５ｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈ ｅｉｍ製）の滅菌溶液を上部から大動脈中に注ぎ、次にもう一方の端を（くりつ ける、こうして大動脈を３７℃の水浴中で７．５分間培′養する。

最後の大動脈結紮糸の１つをとり除いて液体を滅菌ピペットを使って除去する。

溶液中にけん濁した細胞を８００ｘｇ　、３７℃で遠心分離し、そしてｉｏ、ｏ ｏｏｖのペニシリンと、１０．０００Ｖのストレプトマイシンを含有する滅菌ダ ルベツコ変成必須培地（ＤＭＥＭ）＋１０％ウシ胎児血清（内皮細胞培地）中に ３７℃でけん濁させる。

７５ｃｔａの滅菌組織培養フラスコ中に２０ｄの内皮細胞培地を入れて３７°Ｃ で１時間培養する。遠心分離した細胞を１１！！ｌの内皮細胞培地中にけん濁さ せてこのフラスコ中に加える０次いでこれを細胞を培養する。

細胞を形態学的にかつ抗つシ因子■ａ抗体（Ｄｉａｎｏｖａ社、ハンプルグ）で の染色法により特性決定する。

細胞を培養合流し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、１ｍのＥＤＴＡ／ＰＢＳ中の２ｄの０ ．１χトリプシンを使用して３７°Ｃで３分間培養することにより基材から除き 、５ｄの内皮細胞培地と混合し、８００ｘｇで遠心分離し、９ｍの内皮細胞培地 中に再けん濁し、そしてこのけん濁液３ｄを新しい３個の７５ｃ＋ｆｉの組織培 養フラスコ（上記と同じ）に播種する。

大量培養するために、７５ｔｄのフラスコ中で培養するのに上記したのと同様の 方法で細胞を円筒形のびん中に播種する。１回の）ＩｓＩ組成物を作るのに約１ ０９個の細胞を使用する。　Ｈ３Ｉ組成物を作成するために、ＰＢＳ中の１ｒｄ のＥＤＴＡを使って基材から細胞を分離し、超音波処理を３回（１回につき３０ 秒間でそれぞれ１分間中断する）０°Ｃで行なって均質化し、１０，０００χｇ で遠心分離し、そして上ずみを２％ＳＤＳに調整する。この溶液（約５ｄ）０． １χ５０５．０．１Ｍ　）リス／ＨＣＩ、１ｍＭ　ＰＦＩＳＦおよび１　＋ｓＭ 　ＥＤＴＡ（ｐＨ７，５）で溶出する。２０ｉずつの画分を流速１００ｄ／時で 取り出す。

クロマトグラフィーカラムボイド（画分３５〜５０）を８０％エタノール中に沈 でんさせ、　１０．ＯＯＯｘｇで遠心分離し、真空乾燥し、ル）−ジメチルアン モニオ）−１−プロパンスルホネート）、０．１Ｍ）リス／ＩＣ！、１＋ａＭ　 ＰＭＳＦおよび１　ｍＭ　ＥＤＴＡ　（ｐＨ７，３、緩衝液）中に溶解し、そし てＤＥＡＥ−セルロースカラム（２，５Ｘ５α）にかける、このカラムを前記の 緩衝液で平衡化し、そして次いで該緩衝液（２５０＋　２５０ｍ）を基準として ０〜ＩＭのＮａＣ１の直線傾斜により溶出する。　０．４５〜０．６ｈのＮａＣ Ｚの間に溶出した画分を集め、８０％エタノール中で沈でんさせ、１０．０００ ｘｇで遠心分離しそして真空中で乾燥する。

この物質を１２．８−の０．１Ｍ　）リス／ＨＣＩ、４Ｍ塩酸グアニジニウムお よび１．４ｇ／−の密度の塩化セシウム中に溶解し、そして５Ｗ４０ローター（ Ｂｅｃｋａ＋ａｎｎ社）中、３５０００ｒｐｍで６０時間遠心分離する。遠心分 離管を地上でバンクさせてｌｄづつの両分を集める。

１．４ｇ／ｍより大きい密度の両分を集め、８０％エタノール中で沈でんさせ、 １０．０００ｘｇで遠心分離しそして真空乾燥する。

この物質を２−の０．１Ｍ）リス／ＨＣＩ、１　＋ｎＭ　ＰＭＳＦおよび１ｍＭ ＥＤＴＡ　（ｐＨ７，５）中に溶解し、そして１■コンドロイチナーゼＡＢＣお よびＩＱＱＶ　ＲＮＡマーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｂｅｉｍ社）を 使用して３７°Ｃで１時間培養する０次いでこの物質を上記したのと同じセファ ロースＣＬ−６Ｂのクロマトグラフィーに付与する。収量は平均１０”個の内皮 細胞につき約１４ｍｇであった。

１施１ ヒ　２　！　立±　）゛のＨＳＩ　の 溶液を使用して３７℃で５分間潅流する。この細胞を３７℃、８００ｘｇで５分 間遠心分離する。

ヒト血液を凝固させ、そして２．０００ｘｇで遠心分離してヒト血清を抽出する 。これらは５ｌＩＡ−１２プロフイールにおいて病理学的数値を示すものであっ てはならない。

１０頭の屠殺したばかりのウシの視床下部をホモジナイズしそしてアセトン／ク ロロホルム（２／１）に抽出して精製ウシ生長因子を得る。脱脂剤に不溶の残分 を培地ｉＩ２あたり１５〜５０■使用する。

ヒト血漿からヒトフィブロネクチンを抽出する。まず１０ｇのゼラチン（Ｓｉｇ ｍａ社）を６５°Ｃで５０ｄの０．２Ｍ　ＮａＡｃに溶解する。

２００　ｄのセファロースＣＬ−２Ｂを使用して１０．５のｐＨで１０分間１０ ｇのプロモシアノーゲンと反応させる０次いでこのゲル１０！の０．２Ｍ　Ｎａ Ａｃで洗浄し、そしてゼラチン溶液と４°Ｃで２４時間振とうする。５−のアミ ノエタノールを加えてから、溶液を再び７時間振とうする。このゲルを４と塩化 グアニジウムで次いでＰＢＳで洗浄する（それぞれｉＩ２づつ）、１２のヒト血 漿をこのゲルと一緒に４°Ｃで２４時間振とうする０次いでこれをフィルター上 で５ｉのＰＢＳで洗浄しそして２００ｉのＩＭ　ＮａＣ１で溶出する。溶出物を ５１のＰＢＳで３回透析しそして０．２−フィルターでろ過して滅菌する。

ヒト内皮細胞を１０．０ＯＯＶのペニシリンと１０．０ＯＯＶのストレプトマイ シンと生長因子とを含有する２０ｄＤＭＥＭ　＋１０％ヒト血清中にけん濁させ る。２ｄのフィブロネクチン溶液を７５ｃｉｌｌの組織培養フラスコ中に入れて 室温で３時間培養する。この溶液を除去し、フラスコをＰＢＳで洗浄し、そして 細胞を加える。フラスコを細胞培養用培養器（上記参照）中に入れる。

上記と同様の培地および培養装置ならびに培養技術を使用して円筒びん中で継代 的大量培養を行なう。

採集した調整培地（約２５りをｉｏＭ　ＮａＯＨないし０．５Ｍ　Ｎａ０）Ｉで 調整して４　’Ｃで１２時間培養する０次いで培地をＩＯＭ　ＨＣＺを使って４ °ＣでｐＨ１，５に調整しそして１０．０００ｘｇで遠心分離する。上ずみをＩ ＯＭ　ＮａＯＨで中和し、そしてアミコンＰｆｌｌＯ膜で限外ろ過して１００　 ｄとする。この溶液を８０％エタノールに調整し、１２時間４゛Ｃに放置し、そ して１０，０００ｘｇで遠心分離する。沈でんをＰＢＳ中に溶解し、ＩＯＶのコ ンドロイチナーゼＡＢＣと一緒に５６°ＣＴ：１時間培養し、そしてダウエック ス１ｘ２カラム（２０ｄゲル）にかける、このカラムを各２０１ｄのＥ　ＮａＣ Ｚと４ＭＮａＣＺで洗浄する。　４ＭＮａＣ１での溶出液を水で透析し、そして 凍結乾燥する。収量は約１．２■であった。

皇施旦主 ｔ＋ｓｒ　シ１コーン　の　ム 遊離ＯＨ基を有するシリコーン１ｇを１８ｍの蒸留水および２ｄのγ−アミノプ ロピルトリエトキシシラン（１０％ν／Ｖ）を混合し、そして６ＨＨＣＩを使っ てそのｐＨ値を３〜４の間に調整する。こうしてｐＨｔＦＪ！ｆｆＬだ後に、こ の溶液を７５°Ｃに２時間加熱し、洗浄しそして乾燥する。アミノ基含有シリコ ーン１ｇを０．０５ＦＩ　りん酸ナトリウム緩衝液中で２．５χのゲルタールジ アルデヒド水溶液と混合しそしてｐ）１７．０に調整する０反応時間は６０分間 である。こうして活性化したシリコーンをＨＳＩの１％溶液を２〜４時間攪拌す ることにより反応させる。洗浄は６Ｍ尿素を使用して行なう。

１隻■土 １（Ｓｒ　とシ１コーン　のイソチオシア　−ト　人アミノ基含有シリコーン１ ｇをクロロホルム中の１０％（ｖ／ν）チオホスゲン溶液と反応させる。この反 応混合物を少なくとも４時間、好ましくは１２〜１５時間還流させる。これを乾 燥クロロホルムで洗浄しそして真空乾燥する。１％Ｈ５Ｉ水溶液をこのイソシア ネートシリコーンにゆっくりと加える（シリコーン１ｇあたり５０〜１００■の ＨＳＩ）、　ｐＨ値を８．５に調節して反応を２時間行ない、次いでこれを６Ｍ 尿素溶液で洗浄する。

５０ｄの０．０３Ｍりん酸（ｐＨ４，０）を１ｇのアミノ基含有シリコーンに加 える０次いで１００〜２００■の水溶性カルボジイミドと５０〜１００■のＨＳ Ｉ　とをこの混合物に加えて２４時間反応させる。これを上記と同様にして洗浄 する。

実施■旦 ０．２７のトリエチルアミンを含有するベンゼン１０ｄと０．３ｇの１．３−ジ クロロ−５−メトキシトリアジンとを１ｇのアミノ基含有シリコーンに加える０ 反応混合物を２〜４時間４５〜５５°Ｃに保持する。　）ＩＳＩ（５０〜１００ ■）との結合反応を４℃、ｐＨ８において０．０５Ｍりん酸緩衝液中で一晩行な う、これを上記と同様にして０．１〜１０ｄの希ジアルデヒド溶液（０，１〜５ ％）を、１ｇのアミノ基含有ポリマーとこれに分散又は含浸したｌＯ■のＨＳＩ 　として加えて、ｐＨ７，４で０．５〜２分間反応させる０次いでこれを速やか に冷水で洗浄する。

皇旌■工 ＨＳＩのポｉマー　への軌・お　び　８・１１ｇのフルオロ−２−二トロー４− アジドベンゼンを０．０５Ｍはう酸ナトリウム緩衝液中、最高ｐ）１値１０６５ で５０″Ｃで１６〜６４時間暗所で１０ｇの）１５１　と反応させる０反応生成 物とろ過し９５％エタノールで洗浄する。水銀ガス灯を使用して２００〜３００ ワツトで数時間ポリマーを光学的に不動化（固定）させる０次いでこれを上記の 様にして洗浄する。

皇旅■工 ＨＳＩ　ビロキシルおよびアミノ　ボ！マーとのオキシーン　の− ２％の洗浄アガロースゲル１０ｇを５ｄの２．５Ｍ　ＮａＯＨ溶液中に次いで１ ．４−ブタンジオールジグリシドエーテルを激しく攪拌しながら滴下する０反応 を室温で６時間続ける０次いで５０ｍアセトンをそしてその後で水を加える。こ のオキシランゲルを２５−の０．５？１重炭酸ナトリウム中にけん濁させて、５ ０ｇの１（ＳＩを加える０反応を５時間続ける。生成物を上記の様にして洗浄す る。

実施■土立 ＨＳＩ　ボ１マー　のア１−ルアミン　し　ア°　Ａｌｇのアミノ基含有シリコ ーンを、５％（Ｖ／Ｖ）のトリエチルアミンと１ｇのｐ−二トロベンゾイルクロ ライドを含有する２５〜３０ｍのクロロホルム中にけん濁させる０反応混合物を 少なくとも４時間還流させる。これを乾燥クロロホルムで洗浄し、そして５％亜 ユニチオン酸ナトリウム溶液中還流させる。水浴中で２０−の２ＮＨＣＩを加え ることにより、Ｉｇのアリールアミンシリコーンとアゾ結合が起る。　１０ｒ■ の個体亜硝酸ナトリウムを加えて３０分間ジアゾ化する０次いでこれを氷水で洗 浄する。

１００■のＨＳＩをＰＦＩ８．５で０．０５？　りん酸ナトリウム中に）容解し 、そして１ｇのジアゾ化ポリマーを加える。２〜１８時間でカンプリングを行な われる。生成物を上記した様にして洗浄する。

１呈■上上 アルキル　およびアシル　モノマーとの此　八によるポ１マーに　人したＩ（Ｓ ｒＯ訓°告 ３．４−エポキシブテン、アクリル酸２．３−エポキシプロピルエステル、アク リル酸２，３−チオグリシジルエステル、１−アリルオキシ−３（Ｎ−エチレン イミン）−２−プロパツール、アクリル酸ｏ−スクシンイミドエステル又はアク リル酸クロライド、無水マレイン酸、無水クロロマレイン酸、マレインアジド又 はベロモブロペンをＨＳＩと等モル割合で反応させ、そして次いで通常の方法に より重合又は共重合体させる。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成１年　５月１６日

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．ＨＳＩをポリマーに、そして（または）本文中上記したこれまでに知られた その全てのコポリマーおよび誘導体ならびに反応性誘導体を含めた、これまでに 知られた全てのバイオポリマーおよび合成ポリマーの表面上に固定することによ る、膜、器官代替部、カニューレ、シリンジ、可撓性管、管、血液容器その他の 作成用の、あるいは医学の分野で使用する血液容器に適用するための、トロンボ ゲンを形成しない物質の製造方法。 ＨＳＩは内皮細胞によってのみ生成される特異性内皮細胞表面たん白多糖として の特徴を有する。これは各々３５，０００の分子量を有する３〜４個の多糖側鎖 、および約５５，０００の分子量の中心部たん白とを有する。この物質の多糖部 は、血液凝固因子と相互作用を示さず、又これまでグリコサミノグリヤン、特に ヘパリンやヘパランの硫酸塩において観察される様な生物学的活性（詳細は本文 上記した）を示さないことから、これまで知られた全ての構成多糖類やグリコサ ミノグリヤン、特にこれまで知られた全てのヘパリンやヘパランの硫酸塩とは異 なる。
2. ２．１Зｃｍ２のポリマー表面につき約０．０１〜１００μｇのＨＳＩが共有結 合しており、そしてＨＳＩとポリマーとの間には１〜８０個の共有結合部又は架 橋結合部が存在する、請求の範囲第１項に記載の方法。
3. ３．ＨＳＩのポリマー基質上又は中への固定を、１〜１０００μｇ／ｃｍ２の濃 度で、塩架橋、疎水相互作用、水素結合、ならびにファンデルワールスカ、吸着 、マイクロカプセル化あるいは網状内包により行なうものである、請求の範囲第 １項に記載の方法。
4. ４．ＨＳＩのたん白核を利用してＨＳＩをポリマー基質に固定するものである、 請求の範囲第１〜３項に記載の方法。相互に種の相異するものへの生体内適用の 場合には、ＨＳＩのたん白核の長さおよび構造は一切の免疫的又はその他の不適 合が起らない様に構成しなくてはならない。
5. ５．ＨＳ１多糖鎖をポリマー基質に共有結合するものである、請求の範囲第１〜 ３項に記載の方法。
6. ６．ＨＳＩをポリマー表面に固定するための共有結合を形成するあらゆる公知の 架橋剤あるいは架橋方法、例えば染料のポリマーへの固定、たん白質のポリマー への固定、たん白質又は炭水化物のポリマーへの固定あるいはバイオポリマー相 互の固定（詳細については本文上記参照）に使用するものが使用可能である、請 求の範囲第１，２，４および５項に記載の方法。
7. ７．ＨＳＩおよび（又は）ポリマー基質を公知のたん白化学法および酵素固定法 ならびに多糖化学およびポリマー化学的方法により活性化する、請求の範囲第１ ，２および４〜６項に記載の方法。
8. ８．ＨＳＩのポリマー基質への共有架橋が、架橋剤「０」（自己架橋又はポリマ ー基質の官能基とＨＳＩとが関与しているだけの架橋）か、あるいは０．２〜５ ｍｍの大きさの親水性又は疎水性、両親媒性又は帯電した又は非帯電のスペーサ ーを使用しての「０」より長い架橋長さを有して行なわれているものである、請 求の範囲第１，２および４〜７項に記載の方法。
9. ９．ＨＳＩのポリマー基質への塩様結合が帯電官能基の直接作用か、又は０．１ ５〜２００ｎｍの大きさの、例えば双性イオン物質やポリマー、たん白質の、Ｈ ＳＩとポリマー基質との間に存在する帯電物質が関与することにより行なわれて いるものである、請求の範囲第１および３〜５項に記載の方法。
10. １０．帯電基がポリマー基質又はＨＳＩの骨格に直接結合しているものであるか 、あるいはポリマーの側鎖を０．１５〜５００ｎｍの大きさに拡げることにより それぞれポリマー基質およびＨＳＩと該帯電基との間の距離を拡大させて結合し ているものである、請求の範囲第１，３〜５および９項に記載の方法。
11. １１．ＨＳＩが最初に疎水性基を有する物質の部分である陽帯電基に結合するこ とによりポリマー基質への疎水結合が形成されるものである、請求の範囲第１お よび３〜５項に記載の方法。
12. １２．ＨＳＩを塩様結合、水素結合、疎水相互作用ならびにフアンデルクールス カによりポリマー基質に吸着させ、しかる後に請求の範囲第６および８の記載の 反応剤および方法により架橋結合か形成されるものである、請求の範囲第１〜５ 項に記載の方法。
13. １３．ＨＳＩをまず、尚可溶性である様に作成されたポリマー基質と予備重合さ せることにより固定し、そしてしかる後にＨＳＩを架橋剤と一緒にあるいはこれ を使用することなく不溶性ポリマー基質に加えて重合させるものである、請求の 範囲第１および３項に記載の方法。
14. １４．ＨＳＩを界面重合法、流体乾燥法、ユアセルベーション法、相化学法なら びにリポリーム形成技術によりポリマー基質中にマイクロカプセル化する、請求 の範囲第１および３項に記載の方法。
15. １５．ＨＳＩとまずビニルモノマーの反応性側鎖と反応させ、そしてしかる後に これを常法により他のモノマーと共重合させるものである、請求の範囲第１およ び２項に記載の方法。