JPS6089425A - 抗腫瘍性血清または血漿 - Google Patents
抗腫瘍性血清または血漿Info
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- JPS6089425A JPS6089425A JP58197590A JP19759083A JPS6089425A JP S6089425 A JPS6089425 A JP S6089425A JP 58197590 A JP58197590 A JP 58197590A JP 19759083 A JP19759083 A JP 19759083A JP S6089425 A JPS6089425 A JP S6089425A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（発明の技術分野）
本発明は抗腫瘍作用の強い血清に関する。
（従来技術とその問題点）
先進国にお番ノる死亡原因の第一は癌によるものである
が、現在のところ、感染症に対する抗生物質のような強
力な制癌剤は見い出されていない。
が、現在のところ、感染症に対する抗生物質のような強
力な制癌剤は見い出されていない。
グラム陰性菌細胞壁由来のリボ多糖体は菌体内毒素、エ
ンドトキシンあるいはパイロジエンとも呼称されている
物質であって、発熱作用、シュワルツマン活性、致死毒
性などの有害な作用を示すことで知られているが、一方
、悪性腫瘍に対する抗腫瘍効果を示ず物質としても知ら
れている。
ンドトキシンあるいはパイロジエンとも呼称されている
物質であって、発熱作用、シュワルツマン活性、致死毒
性などの有害な作用を示すことで知られているが、一方
、悪性腫瘍に対する抗腫瘍効果を示ず物質としても知ら
れている。
悪性腫瘍に対づ−る特効薬のない現在、抗腫瘍作用を有
する物質は注目に値するが、該リボ多糖体の場合は、そ
の致死■と最小右効抗師瘍作用量とが近いため、安全に
使用しえない。
する物質は注目に値するが、該リボ多糖体の場合は、そ
の致死■と最小右効抗師瘍作用量とが近いため、安全に
使用しえない。
（発明の目的）
本発明はかかるリボ多糖体の抗腫瘍作用を利用して、強
力な抗腫瘍作用を持ち、かつ、毒性のない物質を作るも
のである。
力な抗腫瘍作用を持ち、かつ、毒性のない物質を作るも
のである。
（発明の構成）
（１）新鮮血清または血漿をグラム陰性菌細胞壁由来の
リボ多糖体を結合せる不溶性担体と接触さけた後、濃縮
して得た抗腫瘍性血清または血漿。
リボ多糖体を結合せる不溶性担体と接触さけた後、濃縮
して得た抗腫瘍性血清または血漿。
（構成の説明）
本発明でいう、グラム陰性菌細胞壁由来のリボ多糖体く
以下リボ多糖体という）とは、Ｎ ｃｉｓｓｅｒｉａ
ｇｏｎｏｒｒｂｏｅａｅで代表されるグラム陰性球菌、
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ 、
Ｂ ｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ １Ｂ ｏｒｄｅ
ｔｅｌ ｌａ ｐ ｅｒｔｕｓｓｉｓなどで代表される
グラム陰性好気性桿菌、Ｅｓｃｂｅｒｉｃｌｌｉａ ｃ
ｏｌｉ １Ｓａ１ｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｌ＋ｉ 、
Ｓ＋＋ｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｃｎｔｅｒｉａｅ 、 Ｋ
ｌｅｂｓｉｅ１１ａ ｐｒｌｅＬｌｍｏｎｉａｅ、５
ｅｒｒａｔｔａ ｌｌ１ａｒｃｅｓｃｅｎｓＳｐｒｏｔ
ｅｕｓ ｖｕｔｇａｒｔｓ 、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎ
ｔｅｒＯｃＯｌｉｔｉＯａ、Ｖ １ｂｒｔｏ ｃｌｌｏ
ｌｅｒａｅなどで代表されるグラム陰性通性嫌気性桿菌
等のグラム陰性菌のＩｌ］１壁の外層に局在する脂質・
多糖類の複合体、および、脂質・多糖類と牛用のタンパ
ク質の複合体を意味する。該リボ多糖体は、グラム陰性
菌から既知の方法により抽出することができる。その方
法の代表例として、フェノール水で抽出する方法［Ｖａ
ｎ ＱｔｔｏＷｅｓｔｐｂａｌ ｅｔ ａｔ 。Ｚ、
Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｌ＋１Ｃｏｍｐ、Ｒｅｎｄ、３ｏ
ｃ、３ｉｏ１．、 １２８ ５（１９３８）］、ブタノ
ールで抽出する方法［Ｄ、 ＣｏＭｏｒｒｉｓ。
以下リボ多糖体という）とは、Ｎ ｃｉｓｓｅｒｉａ
ｇｏｎｏｒｒｂｏｅａｅで代表されるグラム陰性球菌、
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ 、
Ｂ ｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ １Ｂ ｏｒｄｅ
ｔｅｌ ｌａ ｐ ｅｒｔｕｓｓｉｓなどで代表される
グラム陰性好気性桿菌、Ｅｓｃｂｅｒｉｃｌｌｉａ ｃ
ｏｌｉ １Ｓａ１ｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｌ＋ｉ 、
Ｓ＋＋ｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｃｎｔｅｒｉａｅ 、 Ｋ
ｌｅｂｓｉｅ１１ａ ｐｒｌｅＬｌｍｏｎｉａｅ、５
ｅｒｒａｔｔａ ｌｌ１ａｒｃｅｓｃｅｎｓＳｐｒｏｔ
ｅｕｓ ｖｕｔｇａｒｔｓ 、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎ
ｔｅｒＯｃＯｌｉｔｉＯａ、Ｖ １ｂｒｔｏ ｃｌｌｏ
ｌｅｒａｅなどで代表されるグラム陰性通性嫌気性桿菌
等のグラム陰性菌のＩｌ］１壁の外層に局在する脂質・
多糖類の複合体、および、脂質・多糖類と牛用のタンパ
ク質の複合体を意味する。該リボ多糖体は、グラム陰性
菌から既知の方法により抽出することができる。その方
法の代表例として、フェノール水で抽出する方法［Ｖａ
ｎ ＱｔｔｏＷｅｓｔｐｂａｌ ｅｔ ａｔ 。Ｚ、
Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｌ＋１Ｃｏｍｐ、Ｒｅｎｄ、３ｏ
ｃ、３ｉｏ１．、 １２８ ５（１９３８）］、ブタノ
ールで抽出する方法［Ｄ、 ＣｏＭｏｒｒｉｓ。
ｎ ａｎｄ Ｌ、 Ｌ ｅｉｖｅ、、Ｊ、 Ｂｉｏｌ、
Ｃｂｅｍ、２５０ ２９１１（１９７５）］、ｔｊよび
、エチレンジアミン−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−テトラ酢酸水で
抽出する方法［１，１−ｅｉｖｅ他、 Ｊ 、 Ｂ ｉ
ｏｌ、Ｃｈｅｍ、。
Ｃｂｅｍ、２５０ ２９１１（１９７５）］、ｔｊよび
、エチレンジアミン−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−テトラ酢酸水で
抽出する方法［１，１−ｅｉｖｅ他、 Ｊ 、 Ｂ ｉ
ｏｌ、Ｃｈｅｍ、。
２４３ ６３８４（１９６８）］などをあげることがで
きる。該リす多糖体のタンパク含量は、固定化の容易さ
の点から、０．１〜５０％とりわ番プト２０％であるこ
とが好ましい。該リボ多糖体は会合性があるので、その
分子間は測定の方法および条件により異なり、通常、数
千〜数百万として観察される。
きる。該リす多糖体のタンパク含量は、固定化の容易さ
の点から、０．１〜５０％とりわ番プト２０％であるこ
とが好ましい。該リボ多糖体は会合性があるので、その
分子間は測定の方法および条件により異なり、通常、数
千〜数百万として観察される。
本発明でいう不溶性担体とは、実質上不溶性で、かつ、
リボ多糖体を固定することのできる担体を意味する。該
不溶性担体の形状は球状、繊維状、膜状のいずれでも良
いが、リボ多糖体を高密度で固定化できるためには表面
積の大きい形状が好ましい。血清からの分離の際の被捕
捉性の良さや表面（ｉの大きさの点から＃！維の形状が
最良である。
リボ多糖体を固定することのできる担体を意味する。該
不溶性担体の形状は球状、繊維状、膜状のいずれでも良
いが、リボ多糖体を高密度で固定化できるためには表面
積の大きい形状が好ましい。血清からの分離の際の被捕
捉性の良さや表面（ｉの大きさの点から＃！維の形状が
最良である。
本発明に用いる不溶性担体の一例をあげると、（１）
ポリスチレンまたはスヂレン・ジビニルベンゼン共重合
体に、アミノ基、カルボキシル曇、活性ハロゲン暴、オ
キシラン基、活性１ステル基またはイソシアン酸基等の
リボ多糖体と結合しうる官能基を芳香族置換基として導
入したもの、（２） ＜１＞のポリスチレンの代りにメ
チレン架橋またはスルホン架橋したポリスチレンを用い
たもの、（ａ）Ｎ−（Ｎ′−ジメチルアミノプロピル）
アクリルアミド・メチレンピスアクリルノ′ミド共重合
体、 （４） ジエチルアミノエチル化セルロースなどがある
が、これらの中でも、ビニルポリマを幹ポリマどする担
体が、耐酸性や耐アルカリ性などに富むので、特に好ま
しく用いられる。
ポリスチレンまたはスヂレン・ジビニルベンゼン共重合
体に、アミノ基、カルボキシル曇、活性ハロゲン暴、オ
キシラン基、活性１ステル基またはイソシアン酸基等の
リボ多糖体と結合しうる官能基を芳香族置換基として導
入したもの、（２） ＜１＞のポリスチレンの代りにメ
チレン架橋またはスルホン架橋したポリスチレンを用い
たもの、（ａ）Ｎ−（Ｎ′−ジメチルアミノプロピル）
アクリルアミド・メチレンピスアクリルノ′ミド共重合
体、 （４） ジエチルアミノエチル化セルロースなどがある
が、これらの中でも、ビニルポリマを幹ポリマどする担
体が、耐酸性や耐アルカリ性などに富むので、特に好ま
しく用いられる。
本発明で用いるリボ多糖体を結合せる不溶性担体く以下
固定化リボ多糖体と略称する）は、リボ多糖体を不溶性
担体表面上に化学的に結合せしめたものであって、固定
化リボ多糖体中のリボ多糖体の密度が低すぎると、血清
の活性化が小さいため、活性の低い抗腫瘍血清しか得ら
れない。従って、該固定化リボ多糖体のリボ多糖体密度
は０゜１１１ｇ／９以上、より好ましくは１．０１（１
／ｇ以上であることがのぞましい。固定化リボ多糖体の
調製は、不溶性担体をリボ多糖体の溶液と混合するか、
あるいは、さらに。この混合物にペプチド合成用縮合剤
を添加することにより達成される。
固定化リボ多糖体と略称する）は、リボ多糖体を不溶性
担体表面上に化学的に結合せしめたものであって、固定
化リボ多糖体中のリボ多糖体の密度が低すぎると、血清
の活性化が小さいため、活性の低い抗腫瘍血清しか得ら
れない。従って、該固定化リボ多糖体のリボ多糖体密度
は０゜１１１ｇ／９以上、より好ましくは１．０１（１
／ｇ以上であることがのぞましい。固定化リボ多糖体の
調製は、不溶性担体をリボ多糖体の溶液と混合するか、
あるいは、さらに。この混合物にペプチド合成用縮合剤
を添加することにより達成される。
本発明で用いる新鮮血清または血漿とはタンパク質ｌｌ
疾６〜９９／ｄｉで、かつ、溶血補体価（ＣＩ−１５０
）が１０Ｕ／ｍ１以上である哺乳動物の血清または血漿
を意味する。ここで、溶血補体価（Ｃｌ−１５０）ＩＬ
Ｊ／ｍｌとは７．５ｍｌの反応液中に存在するヒツジ赤
血球５Ｘ１０８コの５０％を溶血さＵるに必要な補体ｍ
を意味し、通常人の血清では３０〜４５Ｕ／ｍｌ、モル
モットの血清では２００Ｕ／１１１１前後である。
疾６〜９９／ｄｉで、かつ、溶血補体価（ＣＩ−１５０
）が１０Ｕ／ｍ１以上である哺乳動物の血清または血漿
を意味する。ここで、溶血補体価（Ｃｌ−１５０）ＩＬ
Ｊ／ｍｌとは７．５ｍｌの反応液中に存在するヒツジ赤
血球５Ｘ１０８コの５０％を溶血さＵるに必要な補体ｍ
を意味し、通常人の血清では３０〜４５Ｕ／ｍｌ、モル
モットの血清では２００Ｕ／１１１１前後である。
本発明にお（）る新鮮血清と固定化リボ多糖体との接触
は、補体の失活やｃｏｌｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎの起
こらない２５〜４５℃の温度で行なわれるのが好ましく
、接触時間には特に制限はないが、通常１０〜１８０分
間行なわれる。また、血清の濃縮は分画分子量が５４〜
２万の半透膜を用いて、加圧または常圧下で行なわれる
。新鮮血清と固定化リボ多糖体の混合比はリボ多糖体１
ｍｇに対し、通常１〜５０１の血清を用いる。血清が少
な１ぎると担体に吸着される血清の割合が多くなりすぎ
、血清が多すぎると血清の活性化の割合が少なすぎる。
は、補体の失活やｃｏｌｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎの起
こらない２５〜４５℃の温度で行なわれるのが好ましく
、接触時間には特に制限はないが、通常１０〜１８０分
間行なわれる。また、血清の濃縮は分画分子量が５４〜
２万の半透膜を用いて、加圧または常圧下で行なわれる
。新鮮血清と固定化リボ多糖体の混合比はリボ多糖体１
ｍｇに対し、通常１〜５０１の血清を用いる。血清が少
な１ぎると担体に吸着される血清の割合が多くなりすぎ
、血清が多すぎると血清の活性化の割合が少なすぎる。
もらろん血清の活性化が大きければ濃縮せずにそのまま
用いても抗腫瘍効果はあるが、何ら活１！ｌを損うこと
なく濃縮することが可能であり、しかも効果はより確実
である。
用いても抗腫瘍効果はあるが、何ら活１！ｌを損うこと
なく濃縮することが可能であり、しかも効果はより確実
である。
血清の濃縮の程度は用いる血清と固定化リボ多糖体の量
比、リボ多糖体の固定化密瓜により異なるが、通常、タ
ンパク濃度が１０ ｇ／ｄ１以上、より好ましくは２０
ｇ／ｄ１以上になるまで濃縮される。血漿の場合はヘ
パリン化した後、血清と同様に処理される。全血液の使
用も可能である。
比、リボ多糖体の固定化密瓜により異なるが、通常、タ
ンパク濃度が１０ ｇ／ｄ１以上、より好ましくは２０
ｇ／ｄ１以上になるまで濃縮される。血漿の場合はヘ
パリン化した後、血清と同様に処理される。全血液の使
用も可能である。
本発明の抗腫瘍性血清または血漿は人の癌の治療のほか
、哺乳動物の癌治療の薬剤として用いられる。その使用
方法は、静脈、腹腔内、筋肉内、皮下、皮肉投与のほか
、腫瘍内への直接投与で行なわれる。
、哺乳動物の癌治療の薬剤として用いられる。その使用
方法は、静脈、腹腔内、筋肉内、皮下、皮肉投与のほか
、腫瘍内への直接投与で行なわれる。
（発明の作用機構）
本発明の抗腫瘍血清または血漿は、固定化リボ多糖体に
より、補体または補体同様の易熱性タンパク賀が活性化
を受【ノ、腫瘍を出血壊死させる因子に変化するか、ま
たは、他の成分をして該因子に変化せしめるものと考え
られる。
より、補体または補体同様の易熱性タンパク賀が活性化
を受【ノ、腫瘍を出血壊死させる因子に変化するか、ま
たは、他の成分をして該因子に変化せしめるものと考え
られる。
（発明の効果）
本発明の抗綬瘍血清はリボ多糖体同様の抗腫瘍性を示す
とともに、致死作用を示さず、濃縮しＩこことにより、
投与量および回数を少なくすることができ、かつ、より
大きな抗腫瘍効果が１ｑられ、さらに、少量で効果があ
り腫瘍内に投与できる１寺徴を有する。
とともに、致死作用を示さず、濃縮しＩこことにより、
投与量および回数を少なくすることができ、かつ、より
大きな抗腫瘍効果が１ｑられ、さらに、少量で効果があ
り腫瘍内に投与できる１寺徴を有する。
実施例１
ポリプロピレン（三井゛ノーブレン” Ｊ ３ ）Ｉ
Ｇ ＞５０部を島成分とし、ポリスチレン（゛スタイロ
ン”６６６）４６部、ポリプロピレン（住友゛ノープレ
ン”ＷＦ−７２７−Ｆ）４部の混合物を海成分とづる海
島型複合Ｉｌｉ帷（島数１６、単繊維繊１哀２．６デニ
ール、引張強度２．９０／ｄ、伸１褒５０％、フィラメ
ント数４２）５０ ｇを、Ｎ−メチロール−α−クロル
アセトアミド５０ｇ、二１−口ベンゼン４．００ｇ、９
８％硫酸４００ （Ｉおよびパラホルムアルデヒド０．
８５０からなるｆｌ’Ｍ合溶液中に浸漬し、２０℃で１
時間反応さけた。繊維を反応液から取り出し、０℃の氷
水５Ｑ中に投じて反応停止させた後、水で洗浄し、次に
、繊維に付着している二１−〇ベンゼンをメタノールで
抽出除去した。この繊維を５０℃で真空乾燥して、クロ
ルアセ１〜アミドメチル化繊維７１ ｇを得た。次に、
この繊維４０９を１５℃のエチレンジアミン中に浸し、
１５〜２０℃の温度で２４時間反応させて、■ヂレンジ
アミノアセトアミドメヂル化繊組を得た。この繊維は１
．８ミリモル／ｇのエチレンジアミン中を有し、１級ア
ミン基と２級アミン基を持つが、３級および４級アミノ
基を持たない。また、ｐＨ７，４における含水率は乾燥
繊維１．０ｇ当り１．Ｏｏであり、この状態における単
糸の直径は４０〜４４μｍであった。
Ｇ ＞５０部を島成分とし、ポリスチレン（゛スタイロ
ン”６６６）４６部、ポリプロピレン（住友゛ノープレ
ン”ＷＦ−７２７−Ｆ）４部の混合物を海成分とづる海
島型複合Ｉｌｉ帷（島数１６、単繊維繊１哀２．６デニ
ール、引張強度２．９０／ｄ、伸１褒５０％、フィラメ
ント数４２）５０ ｇを、Ｎ−メチロール−α−クロル
アセトアミド５０ｇ、二１−口ベンゼン４．００ｇ、９
８％硫酸４００ （Ｉおよびパラホルムアルデヒド０．
８５０からなるｆｌ’Ｍ合溶液中に浸漬し、２０℃で１
時間反応さけた。繊維を反応液から取り出し、０℃の氷
水５Ｑ中に投じて反応停止させた後、水で洗浄し、次に
、繊維に付着している二１−〇ベンゼンをメタノールで
抽出除去した。この繊維を５０℃で真空乾燥して、クロ
ルアセ１〜アミドメチル化繊維７１ ｇを得た。次に、
この繊維４０９を１５℃のエチレンジアミン中に浸し、
１５〜２０℃の温度で２４時間反応させて、■ヂレンジ
アミノアセトアミドメヂル化繊組を得た。この繊維は１
．８ミリモル／ｇのエチレンジアミン中を有し、１級ア
ミン基と２級アミン基を持つが、３級および４級アミノ
基を持たない。また、ｐＨ７，４における含水率は乾燥
繊維１．０ｇ当り１．Ｏｏであり、この状態における単
糸の直径は４０〜４４μｍであった。
上記アミノ基含有ポリスチレン繊維３２ ｇを３００ｍ
１の水中に一昼夜膨潤させたのち、［３ｏｌ＋ｅｒｉｃ
ｌ＋ｉａ Ｃｏ１１ Ｏ５５： Ｂ ５のリボ多糖体（
トリクロル酢酸抽出法、ディフコ・ラボラ］〜リーズ社
製造）の０．４ ｍｇ／ｍｌ水溶液５００ｍ１と混合、
次に、１Ｎ−塩酸および１Ｎ−水酸化太トリウムでｐｌ
−１を４．５〜６．０に保ちながら、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル ジイミド５．Ｏ ａを少しずつ加え、溶解した。この混
合物を室温で２日間振とうしたのち、繊維を取り出し、
１αの沸騰水中に３０分間’＆ ｔｒｉ ｉる操作を３
回行なったのち、０。０７モルのリン酸緩衝液（ｐｉ−
４７．４）で洗液のｐＨが７．４になるまで洗浄して、
リボ多糖体固定化繊維を１５１だ。上記固定化樹液おに
び洗液中のリボ多糖体の濃度をフェノール・硫酸法（試
料１１と５９６フ工ノール水１ｍｌの混合液にｆｌ！硫
１１５ｍｌを加え、４８５ ｍμの吸光度を測定する。
１の水中に一昼夜膨潤させたのち、［３ｏｌ＋ｅｒｉｃ
ｌ＋ｉａ Ｃｏ１１ Ｏ５５： Ｂ ５のリボ多糖体（
トリクロル酢酸抽出法、ディフコ・ラボラ］〜リーズ社
製造）の０．４ ｍｇ／ｍｌ水溶液５００ｍ１と混合、
次に、１Ｎ−塩酸および１Ｎ−水酸化太トリウムでｐｌ
−１を４．５〜６．０に保ちながら、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル ジイミド５．Ｏ ａを少しずつ加え、溶解した。この混
合物を室温で２日間振とうしたのち、繊維を取り出し、
１αの沸騰水中に３０分間’＆ ｔｒｉ ｉる操作を３
回行なったのち、０。０７モルのリン酸緩衝液（ｐｉ−
４７．４）で洗液のｐＨが７．４になるまで洗浄して、
リボ多糖体固定化繊維を１５１だ。上記固定化樹液おに
び洗液中のリボ多糖体の濃度をフェノール・硫酸法（試
料１１と５９６フ工ノール水１ｍｌの混合液にｆｌ！硫
１１５ｍｌを加え、４８５ ｍμの吸光度を測定する。
）でめた。この場合、２回目以降の洗液については５０
倍にｉｌｆｉｌ縮したのら、定ｍに供した。
倍にｉｌｆｉｌ縮したのら、定ｍに供した。
上記リボ多糖体固定化■は５．０ｍＭ（ｌであった。こ
のリボ多糖体固定化！ａｌｌ（Ｃ０． ６ ｏを２００
ｍ１の局方生理的食塩水で洗浄後、５０ｍ１の生理的食
塩水に浸し、３８℃で３時間温めたのら、その生理的食
塩水中のリボ多糖体の存在量をリムラス・プレゲル法で
めたところ、１ナノグラム／ｍｌ以下であった。
のリボ多糖体固定化！ａｌｌ（Ｃ０． ６ ｏを２００
ｍ１の局方生理的食塩水で洗浄後、５０ｍ１の生理的食
塩水に浸し、３８℃で３時間温めたのら、その生理的食
塩水中のリボ多糖体の存在量をリムラス・プレゲル法で
めたところ、１ナノグラム／ｍｌ以下であった。
実施例２
ＢＡＬＢ／Ｃマウスにメチルコランスレンを接腫さＶる
ことにより誘発さＬ ７Ｃ繊維肉１ｆｆｉＭｃ−Ｂ１の
腫瘍細胞を５Ｘ１０Ｓ個とり、ＢＡＬＢ／Ｃマウスの背
部皮下に接腫することにより担癌マウスを調整した。腫
瘍は接ｌｉ後５日後に２．１ｍｍ。
ことにより誘発さＬ ７Ｃ繊維肉１ｆｆｉＭｃ−Ｂ１の
腫瘍細胞を５Ｘ１０Ｓ個とり、ＢＡＬＢ／Ｃマウスの背
部皮下に接腫することにより担癌マウスを調整した。腫
瘍は接ｌｉ後５日後に２．１ｍｍ。
１０日後に６．３ｍｍ、 １２日後に８．９ｍｍの直径
になった。
になった。
新鮮と］−血清２００ｍ１に実施例１で調整したリボ多
糖体固定化ＩＩ維２．Ｏｇ（リポ多糖体１ 、、Ｏｍｇ
〉３７℃で１８０分間浸漬したのち、この血清をセルロ
ース半透膜チューブ（ｖｉＳｋｉｌｌ（］ Ｃ０Ｉｌｌ
ｌｌａＩＩ Ｖ製、品！２０／３２、分１ｉ１）１ｆｔ
１〜２万、膜厚０．０２０ｍｍ）内に入れ、チューブの
外側にポリエチレングリコール（分子量２万）粉末を１
５１りか（ｊて、血清邑が四分の−になるまで濃縮した
。
糖体固定化ＩＩ維２．Ｏｇ（リポ多糖体１ 、、Ｏｍｇ
〉３７℃で１８０分間浸漬したのち、この血清をセルロ
ース半透膜チューブ（ｖｉＳｋｉｌｌ（］ Ｃ０Ｉｌｌ
ｌｌａＩＩ Ｖ製、品！２０／３２、分１ｉ１）１ｆｔ
１〜２万、膜厚０．０２０ｍｍ）内に入れ、チューブの
外側にポリエチレングリコール（分子量２万）粉末を１
５１りか（ｊて、血清邑が四分の−になるまで濃縮した
。
このｍ縮血清０．６ｍｌずつを上記担癌マウスに、癌細
胞接腫後１１日日（Ｉｆ！瘍直径７ｍｍ）と１３日日日
尾静脈から投与したところ、１４匹中６匹に腫瘍内の出
血が認められ、内５匹に腫瘍の完全消失が認められた。
胞接腫後１１日日（Ｉｆ！瘍直径７ｍｍ）と１３日日日
尾静脈から投与したところ、１４匹中６匹に腫瘍内の出
血が認められ、内５匹に腫瘍の完全消失が認められた。
コントロールとして、５６℃で３０分間処理したヒト血
清１００１について上記と全く同じ実験を行なったが、
腫瘍内の出血、壊死は全く認められず、完全治癒例もな
かった。
清１００１について上記と全く同じ実験を行なったが、
腫瘍内の出血、壊死は全く認められず、完全治癒例もな
かった。
実施例３
実施例１の未反応複合繊維の代りに、ポリスチレン粉末
（直径０．０５〜１．０ｍｍ）２５ Ｑを実施例１と同
様に反応させ、クロルアｔｅ１〜アミドメチル化ポリス
チレン粉末５２（＋を得た。この粉末４．０ｇを１５℃
のエチレンジアミンに浸し、１５〜２０℃の温度で２４
時間反応させて、エチレンジアミノアセトアミドメチル
化ポリスチレンビーズ（エチレンジアミノ基３．６ミリ
モル／Ｑ ）を得た。この粉末４０（１を３００ｍ１の
水中に一昼夜浸して膨潤させたのら、Ｅ ５ｃｈｃｒｉ
ｃｈｉａ Ｃｏ１ｔ０５５ ： Ｂ５のリポ多糖体（１
ヘリタロルｆ１１ｆｉ！抽出法、ディフコ・ラボラトリ
ーズ社製造）の０．４ｍ１１／ｍｌ水溶液５００ｍ１と
混合、次に、１Ｎ−ｊ＝酸および１Ｎ−水酸化ナトリウ
ムで ｐＨを４゜５〜６．０に保ちながら、ｉ−Ｉチル
−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミ
ド５．０９を少しずつ加え、溶解した。この混合物を室
温で２日間振とうしたのち、遠心分離（３０００ｐｐｍ
、３０分間）によって粉末を取り出し、１（２の水で３
回洗浄・遠心分離する操作をくり返した。さらに、１ａ
の沸騰水中で３０分間浸漬しｌこのも、遠心分離する操
作を３回行なった。０゜０７モルのリン酸緩衝液（１）
８７．４）で洗液のｐｌ−１が７．４になるまで洗浄し
て、リボ多糖体固定化粉末を得た。上記固定化１１液Ｊ
５よび洗液中のリボ多糖体のｍ瓜をフェノール・硫酸法
（試料１１と５％フェノール水１１の混合液に濃硫酸５
１を加え、４８５ ｍμの吸光度を測定する。）でめ
ｌこ 。
（直径０．０５〜１．０ｍｍ）２５ Ｑを実施例１と同
様に反応させ、クロルアｔｅ１〜アミドメチル化ポリス
チレン粉末５２（＋を得た。この粉末４．０ｇを１５℃
のエチレンジアミンに浸し、１５〜２０℃の温度で２４
時間反応させて、エチレンジアミノアセトアミドメチル
化ポリスチレンビーズ（エチレンジアミノ基３．６ミリ
モル／Ｑ ）を得た。この粉末４０（１を３００ｍ１の
水中に一昼夜浸して膨潤させたのら、Ｅ ５ｃｈｃｒｉ
ｃｈｉａ Ｃｏ１ｔ０５５ ： Ｂ５のリポ多糖体（１
ヘリタロルｆ１１ｆｉ！抽出法、ディフコ・ラボラトリ
ーズ社製造）の０．４ｍ１１／ｍｌ水溶液５００ｍ１と
混合、次に、１Ｎ−ｊ＝酸および１Ｎ−水酸化ナトリウ
ムで ｐＨを４゜５〜６．０に保ちながら、ｉ−Ｉチル
−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミ
ド５．０９を少しずつ加え、溶解した。この混合物を室
温で２日間振とうしたのち、遠心分離（３０００ｐｐｍ
、３０分間）によって粉末を取り出し、１（２の水で３
回洗浄・遠心分離する操作をくり返した。さらに、１ａ
の沸騰水中で３０分間浸漬しｌこのも、遠心分離する操
作を３回行なった。０゜０７モルのリン酸緩衝液（１）
８７．４）で洗液のｐｌ−１が７．４になるまで洗浄し
て、リボ多糖体固定化粉末を得た。上記固定化１１液Ｊ
５よび洗液中のリボ多糖体のｍ瓜をフェノール・硫酸法
（試料１１と５％フェノール水１１の混合液に濃硫酸５
１を加え、４８５ ｍμの吸光度を測定する。）でめ
ｌこ 。
上記リボ多糖体固定化石は０．５ｍｇ／ｇであった。こ
のリボ多糖体固定化粉末０．６ ｉｌｌを２００ｍ１の
局方生理的食塩水で洗浄後、５０１の、生理的食塩水に
浸し、３８℃で３時間温めたのら、その生理的食塩水中
のリポ多糖体の存在量をリムラス・プレゲル法でめたと
ころ、１ナノグラム／ｍｌ以下であった。
のリボ多糖体固定化粉末０．６ ｉｌｌを２００ｍ１の
局方生理的食塩水で洗浄後、５０１の、生理的食塩水に
浸し、３８℃で３時間温めたのら、その生理的食塩水中
のリポ多糖体の存在量をリムラス・プレゲル法でめたと
ころ、１ナノグラム／ｍｌ以下であった。
実施例４
実施例３で調整したリボ多糖体固定化わ）未２０９を新
鮮ヒト面漬２００１と混ぜ、３７°Ｃで１８０分間振と
うしたのち、遠心分１ｉｅｔ （３００ｒｌ＋ｍ、３０
分間）し、上澄を取り出し、実施例１と同４系に４倍に
濃縮した。この血清０．６ｍｌずつを実施例１で得た担
癌マウスに、ＩＷＪ州胞接腫後１１日目日日３日日日尾
静脈から投与したところ、１４四中５匹に腫瘍内の出血
が認められ、内３匹に腫瘍の完全消失が認められた。
鮮ヒト面漬２００１と混ぜ、３７°Ｃで１８０分間振と
うしたのち、遠心分１ｉｅｔ （３００ｒｌ＋ｍ、３０
分間）し、上澄を取り出し、実施例１と同４系に４倍に
濃縮した。この血清０．６ｍｌずつを実施例１で得た担
癌マウスに、ＩＷＪ州胞接腫後１１日目日日３日日日尾
静脈から投与したところ、１４四中５匹に腫瘍内の出血
が認められ、内３匹に腫瘍の完全消失が認められた。
特許出願人 東 し 株 式 会 社
Claims (1)
- （１）新鮮血清または血漿をグラム陰性菌細胞壁由来の
リボ多糖体を結合せる不溶性担体と接触させた後、濃縮
して得た抗腫瘍性血清または血漿。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58197590A JPS6089425A (ja) | 1983-10-24 | 1983-10-24 | 抗腫瘍性血清または血漿 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58197590A JPS6089425A (ja) | 1983-10-24 | 1983-10-24 | 抗腫瘍性血清または血漿 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6089425A true JPS6089425A (ja) | 1985-05-20 |
| JPH0472808B2 JPH0472808B2 (ja) | 1992-11-19 |
Family
ID=16377014
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58197590A Granted JPS6089425A (ja) | 1983-10-24 | 1983-10-24 | 抗腫瘍性血清または血漿 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6089425A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009132728A (ja) * | 1995-06-07 | 2009-06-18 | Cerus Corp | 血液製剤からソラレンを除去するための方法およびデバイス |
-
1983
- 1983-10-24 JP JP58197590A patent/JPS6089425A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009132728A (ja) * | 1995-06-07 | 2009-06-18 | Cerus Corp | 血液製剤からソラレンを除去するための方法およびデバイス |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0472808B2 (ja) | 1992-11-19 |
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