JPS6393729A

JPS6393729A - 悪性腫瘍等の治療方法

Info

Publication number: JPS6393729A
Application number: JP24067286A
Authority: JP
Inventors: Kenichi Kawamura; 河村　研一
Original assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Current assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Priority date: 1986-10-09
Filing date: 1986-10-09
Publication date: 1988-04-25

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、悪性腫瘍等の治療方法に関する。

（従来の技術）悪性Ｍｌ瘍の有効な治療方法のひとつとしてパンセル（
Ｂａｎｓａｌ　；　１９７Ｂ）　、ターマン（Ｔｅｒｍ
ａｎ　；　１９８０）　。

レイ　（Ｒａｙ　　；　１９８２）らによりブドウ状球
菌の一種であるスタフィロコッカス　オーレウス　ニー
９２１株（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕ
ｓ　Ｃｏｗａｎ　Ｉ　）の細胞膜成分であるプロティン
Ａ　（Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　）を不活性担体に担持させ
たプロティンＡ担持体を用いる方法が報告されている。

このプロティンＡ担持体に例えば生体からの血液を分離
して得られた血漿を接触させ、接触後の血漿を再び血液
固形分と合わせて全血とし、生体に戻すと悪性腫瘍細胞
が速やかに壊死することが確認されている。

Ｂａｎ５ａｌらは、悪性腫瘍を有する生体内には正常な
免疫機能を阻止する因子が増加し、生体にとっては異物
である癌細胞を認識する機能が働かないために悪性腫瘍
の増殖が助長されると考えた。このような阻止因子（血
清阻止因子）としては、悪性腫瘍細胞表面が特異抗原と
なり、この特異抗原により生成する抗体；抗原−抗体結
合物にさらに補体が結合して大きなマトリックスを形成
した免疫複合体；免疫抑制酸性糖蛋白質などが挙げられ
。

これらを除去することにより悪性腫瘍の増殖が阻止され
ると考えた。上記プロティンＡは、はとんどの哺乳動物
の免疫グロブリン（Ｉｇ　；主として免疫グロブリンＧ
　（ＩｇＧ））のＦｃ部分と結合する性質を有する。そ
のため、彼らは、プロティンＡ担持体に血清を接触させ
ると、上記血清阻止因子を包含するＩｇが吸着・除去さ
れ、その結果、正常な免疫系が復活して腫瘍細胞が排除
されるものと考えた。しかし、　Ｔｅｒｎａｎらが用い
たプロティンＡの量はわずか数■である。このような微
量のプロティンＡに血清阻止因子が吸着することにより
腫瘍が急速に壊死することを説明することができない。

（発明が解決しようとする問題点）本発明者は上記プロティンＡ担持体による悪性腫瘍壊死
の作用機構を検討し、より効果的な悪性腫瘍等の治療方
法を開発し本発明を完成した。本発明の目的は、効果的
な悪性腫瘍等の治療方法を提供することにある。

（問題点を解決するための手段および作用）発明者は、
悪性腫瘍患者から、免疫複合体を多量に含み濁度の大き
な血清を得て、これをプロティンＡ担持体と接触させた
ところ、血清が清澄化しかつ血清中に悪性腫瘍特異抗原
と強力な反応性を示すＩｇＧが含有されているのを確認
した。このことから２発明者らは、悪性腫瘍患者の血漿
もしくは血清中には本来悪性腫瘍と特異的に反応してこ
れを壊死させる悪性腫瘍特異抗体が存在し、これが上記
１ｇＧに相当すると考えた。さらに、この悪性腫瘍特異
抗体は免疫複合体として存在するため、その活性能がブ
ロックされているが、プロティンＡの作用により悪性腫
瘍特異抗体が免疫複合体から遊離し、そのことにより悪
性腫瘍特異抗体の悪性腫瘍細胞に対する活性能が回復す
るとの仮説をたてた。

これとは別に２発明者は、ターマンらが用いたプロティ
ンＡ担持体に使用される担体１例えばデキストランゲル
は、補体活性化経路のうち特に代替経路（第２経路）の
イニシエーターであるＣ３を活性化するという点に注目
した。通常、補体活性化経路においてＣ３はＢ因子、Ｄ
因子、Ｍｇ”、Ｐ因子などにより活性化され、Ｃ３ａお
よびＣ３ｂに分解する。このＣ３ｂは次に、　Ｃ５をＣ
５ａおよびＣ５ｂに分解する。Ｃ５ｂはＣ６およびＣ７
と結合して複合体をつくりある種の細胞膜に結合する。

これにさらにＣ８およびＣ９が結合すると細胞膜からイ
オンが流出する結果、細胞膜の内外で浸透圧の変化が起
こり。

膜に穴がおいて細胞内容物が排出され細胞が壊死するこ
とが知られている。このような補体の活性化に起因する
細胞膜の穴は、古くから電子顕微鏡により観察されてい
る細胞膜の穴と同様であることが報告されている。そし
て、このような細胞膜の穴は、悪性腫瘍やウィルス感染
細胞などを目標として、これに傷害を与えるＮＫ　（ナ
チュラルキラー）細胞やＫ（キラー）細胞が細胞膜に形
成する穴に類似している。ＮＫ細胞や、に細胞が放出す
る蛋白質はＣ９と免疫学的に類似しているという報告も
ある。このような事実から、上記ターマンらのプロティ
ンＡ担持体に使用されているデキストランゲルは、補体
活性化経路におけるＣ３を活性化してＣ９を誘導、つま
りＣ５ｂ　Ｃ６Ｃ７Ｃ８Ｃ９複合体を誘導し。

その結果、悪性腫瘍細胞を壊死させるのではないかと考
えられる。さらに、　Ｃ３の活性化により免疫複合体が
可溶化することも一般に知られている。

上記デキストランゲルの場合もＣ３の活性化により免疫
複合体が可溶化し、つまり免疫複合体が解離し、上記プ
ロティンＡの場合と同様に悪性腫瘍抗体が遊離する結果
、悪性腫瘍細胞が壊死すると考えられる。

発明者は、このような推論にもとづき、補体活性化経路
におけるＣ３を活性化しうる化学物質を用いれば効果的
に悪性腫瘍細胞を壊死させうると考え９本発明を完成す
るにいたった。

本発明の悪性腫瘍等の治療方法は、生体から得られた血
清もしくは血清を次の（１）〜（４）のうちの少なくと
も一種の化合物に接触させた後、同一または同種の生体
内に注入する工程を包含し、そのことにより上記目的が
達成される：■負電荷を形成しうる高分子化合物。

■分岐鎖を有する多Ｗ類。

■酸性多糖類。

■リボポリサンカライド、イヌリンおよびザイモザンの
うちの少なくとも一種。

本発明方法に用いられる上記■〜■の化合物は。

いずれも補体活性化経路におけるＣ３を活性化しうる物
質であり１例えば「免疫学」第３巻く山村雄−監修、中
山書店）に記載されている補体系の代替経路活性化因子
を包含する。■の負電荷を形成しうる高分子化合物は１
通常、水、血景、血清。

各種緩衝液などにＲ溶もしくは不溶のポリマーであり、
水などの溶媒中で分子側鎖が解離して負電荷を有するよ
うな化合物である。このような化合物としては、ポリア
クリル酸、ポリメタアクリル酸、ポリビニル硫酸、ポリ
スチレンスルホン酸。

スチレン−マレイン酸共重合体、ポリエチレンスルホン
酸、ポリ−α−メチルスチレンスルホン酸。

ポリビニル硫酸、ポリホスフェイトエステル、ポリスチ
レンリン酸、ジニトロフェニル基結合蛋白質、ポリ−し
一グルタミン酸などがある。

■の分岐鎖を有する多１！類としては、１・３−フロリ
ダデンブン、ｌ・４−フロリダデンプン。

１・４−（ロイコノストック）メセンテロイデス（１魯
４−Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ　＋ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉ
ｄｅｓ）のデキストラン、１°６−Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔ
ｏｃ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　のデキストラン、
グリコーゲン、アミロペクチン。

１・６−ベータバクテリウム　フェルミフォルミ（１・
６−Ｂｅｔａｂａｃｔｅｒｉｕ＋＋＋　ｖｅｒｍｉｆｏ
ｒｍｉ）のデキストラン、ネイセリア　パーツラバ（Ｎ
ｅｉｓｓｅｒｉａｐｅｒｆｌａｖａ）のデキストラン様
多糖類、酵母グルカン、１・３−カタツムリガラクタン
、１・６−カタツムリガラクタン、１・３−アラビナン
、１・５−アラビナン、１・２−アスパラゴサン、シニ
ストラン、グラミナン、クリテサン、２・６−フレアン
、セカラン、ポアン、ピロサン、レバン。

１．２−イリサン、２・４−イリサン、２・１−トリチ
カン、２・６−ドリチカン、１・２−酵母マンナン、１
・３−酵母マンナン、１・６−酵母マンナン、１・２−
フカンなどがある。

■の酸性釜ＷＩＩとしては、デキストラン、デキストラ
ン硫酸、コンドロイチン、コンドロイチンＴａ　Ｍ　Ａ
　、コンドロイチンＣ，ヒアルロン酸、アルギン酸、ア
ルギン酸ナトリウムなどがある。

■の化合物のうち、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）は
細菌の、イヌリンは酵母の、そしてザイモザンは原虫類
の細胞膜の成分として知られ、化学合成によっても得ら
れる。

本発明方法により治療を行うには９例えば、まず、悪性
腫瘍を有する生体から一定量の血液を抜きとって血漿も
しくは血清を得、これと上記■〜■の化合物とを接触さ
せる。血漿もしくは血清と■〜■の化合物を接触させる
には、カラム法、バッチ法などの通常の方法が採用され
うる。■〜■の化合物を使用するときに、その化合物が
血漿や血清あるいは必要に応じて使用される緩衝液に対
して全く不溶の物質であれば９例えば微粒子やビーズの
形状としてそのまま血漿もしくは血清と接触させること
が可能である。血漿や血清にある程度の溶解性を有する
化合物は、適当な架橋剤で架橋させて不溶性のゲル状物
とするか、適当な不活性担体に結合させて不溶化する。

架橋剤としては。

エビクロロヒドリン、グルタルアルデヒド、Ｎ、Ｎ’−
メチレンビスアクリルアミド、　Ｎ、Ｎ’−ポリメチレ
ンビスマレイミドなどが；不活性担体としては。

セルロース、アガロース、シリカゲル、ポリアクリルア
ミド、コロジオン被覆活性炭などが挙げられる。■の化
合物については、これらは細菌などの成分であり、生体
内へ取り込まれることが好ましくないため、上記と同様
の適当な不活性担体に担持させることが好ましい。

上記■〜■の化合物のうちのいずれかで処理された血漿
もしくは血清をもとの生体と同一または同一種の生体に
注入する（例えば、静脈注射を行う）と、悪性腫瘍細胞
の壊死が起こる。

このように、生体から一定量の血液を抜きとり。

この血液を処理した後に再び血管内へもどす（ｏｆｆｌ
ｉｎｅ）方法のほか、生体から連続的に血液を抜き取っ
て血〕だと血清とに分離し、この血漿を処理した後再び
血球成分とあわせて全血とし、連続的に生体内へ返血す
る（ｏｎ　１ｉｎｅ）方法も採用されうる。

このように、補体活性化経路の６３を活性化しうる化合
物を血漿もしくは血清に作用させて生体内へ戻すことに
より、悪性腫瘍細胞の壊死が生じる。

その詳細な機構は不明であるが１本項の最初の部分で説
明したように、　＋１）Ｃ３の活性化により最終的にＣ
９が誘導されること、および（２）Ｃ３の活性化により
免疫複合体が解離し悪性腫瘍抗体が遊離すること、の２
点が悪性腫瘍壊死の原因であろうと考えられる。

（実施例）以下に本発明を実施例につき説明する。

スｌ」０− 生後６週齢の家兎の背部皮下に腫瘍細胞Ｖｘ２を５Ｘ１
０’個移植した。４週間後に心臓採血を行い遠心により
血球成分を分離し、血清を得た。この血清を架橋デキス
トラン（ファルマシア製セファデフクスＧ−１００８）
充填カラム（２，６ｃｍφＸ５０ｃｍ）に０．１ｄ／分
の割合で通過させ、２−ずつ分画採取した。２８Ｏｎ＋
ｉの吸光度で最大の値を示す分画を中心に１５分画、３
０−をプールし、血清を回収した。

この血清を３匹のＶｘ２担癌家兎それぞれに３０−静脈
注射したものを投与群とした。対照群には、３匹のＶｘ
２担癌家兎それぞれに生理食塩水３０＋＋ｄを投与した
。その結果を表１に示す。

表１表１から、上記方法で処理した血清を投与した場合には
、腫瘍径が縮小していることが明らかである。

ス１１１１孔径４００人９粒径４０〜６３μｍのシリカゲル（和光
純薬社製）５ｇを３−グリシドキシプロビルトリメトキ
シシラン（信越化学社製）の２０％アセトン溶液１５〇
−中に加え、　５０℃で振盪しながら４０時間反応させ
た。これをアセトンで充分に洗浄後。

さらに蒸留水で洗浄し、　０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９
，８）で置換した。この活性化ゲルを担体として用いた
。

このゲルをアルギン酸ナトリウム（和光純薬社製）４０
０■（分子量３２０００〜２４００００）を含む０．１
Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９，８）　２００ｄ中に懸濁させ、
５０℃で２４時間攪拌した。これを室温で静置し、ゲル
を充分に水洗し、アルギン酸ナトリウム担持シリカゲル
を得た。

このアルギン酸ナトリウム担持シリカゲル１〇−を架橋
デキストランの代わりに使用し、実施例１の方法に準じ
て血清を処理し、家兎に投与（静脈注射）した。その結
果を表２に示す。

（以下余白）表２表２から上記方法で処理した血清を投与した場合には、
腫瘍径が縮小していることが明らかである。

去Ｗ生後６週齢の家兎の背部皮下に腫瘍細胞Ｖｘ２を５Ｘ１
０’個移植した。４週間後に心臓採血を行い遠心により
血球成分を分離し、血清５０−を得た。

この血清をポリアクリル酸（アルドリッチ社製；分子量
２５万、ガラス転移温度１０６℃）２０ｇを充填したカ
ラムに０．１ｍｆ／分の割合で通過させ、　　２ｍｇず
つ分画採取した。２８０ｒｕ＋＋の吸光度で最大の値を
示す分画を中心に２５分画、　５０−をプールし、血清
を回収した。この血清のうち２５−を別のＶｘ２担癌家
兎に投与（静脈注射）した。投与前の腫瘍径は４　ｃｒ
ａ　Ｘ　５　ｃｓであったが、投与後３日目には２ｃｆ
ｆｉ×３ｃｍと、著しく縮小しているのが認められた。

尖立但↓ 生後８週齢のｂａｌｂ／ｃマウス腹部に、　ＭｅｔｈＡ
腫瘍細胞２Ｘ１０’個を移植した。１遇間後に採血し。

血清８００μｌを得た。この血清をリポポリサッカライ
ド（ＬＰＳ　）固定カラム（ＬＰＳを５■固定化）に０
．１　ＴＲ１／分の割合で通過させ、０．５−ずつ分画
採取した。２８０ｎｍの吸光度で最大値を示す分画を中
心に３分画１．５−をプールし、血清を回収した。

別にＭｅｔｈＡ腫瘍細胞を背部皮下に移植したｂａｌｂ
／ｃマウスを準備し、これに上記処理血清を投与（静脈
注射）した、投与前の腫瘍径は７ｍＸ５ｍであったが、
投与後２日目には３ｆｌ×３ｆｌと、著しく縮小してい
るのが認められた。

（発明の効果）本発明方法によれば、このように、悪性腫瘍を有する生
体の血漿もしくは血清を特定の条件下で処理して生体に
投与することにより悪性腫瘍等を速やかに壊死・縮小さ
せることができる。血清もしくは血清の処理は容易であ
るため、簡単かつ確実に悪性腫瘍等に対する治療がなさ
れうる。

以上

Claims

【特許請求の範囲】１、生体から得られた血漿もしくは血清を次の（１）〜
（４）のうちの少なくとも一種の化合物に接触させた後
、同一または同種の生体内に注入する工程を包含する悪
性腫瘍等の治療方法：（１）負電荷を形成しうる高分子化合物、（２）分岐鎖を有する多糖類、（３）酸性多糖類、（４）リポポリサッカライド、イヌリンおよびザイモザ
ンのうちの少なくとも一種。２、前記リポポリサッカライド、イヌリンおよびザイモ
ザンのうちの少なくとも一種が、不活性担体に担持され
不溶化した特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。