JPS6393731A - 悪性腫瘍等の治療方法 - Google Patents
悪性腫瘍等の治療方法Info
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- JPS6393731A JPS6393731A JP24067686A JP24067686A JPS6393731A JP S6393731 A JPS6393731 A JP S6393731A JP 24067686 A JP24067686 A JP 24067686A JP 24067686 A JP24067686 A JP 24067686A JP S6393731 A JPS6393731 A JP S6393731A
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は、悪性腫瘍等の治療方法に関する。
(従来の技術)
悪性腫瘍の有効な治療方法のひとつとしてパンセル(B
ansal : 197B) 、ターマン(Tera+
an : 1980) 。
ansal : 197B) 、ターマン(Tera+
an : 1980) 。
レイ (Ray ; 1982)らにより、ブドウ状
球菌の一種のスタフィロコッカス オーレウス ツー9
フ1株(Staphylococcus aureus
Cohan I )の細胞膜成分であるプロティンA
(Protein A ) ’tr:不活性担体に担
持させたプロティンA担持体を用いる方法が報告されて
いる。このプロティンA担持体に例えば生体からの血液
を分離して得られた血泰を接触させ、接触後の血漿を再
び血液固形分と合わせて全血とし、生体に戻すと悪性腫
瘍細胞が速やかに壊死することが確認されている。
球菌の一種のスタフィロコッカス オーレウス ツー9
フ1株(Staphylococcus aureus
Cohan I )の細胞膜成分であるプロティンA
(Protein A ) ’tr:不活性担体に担
持させたプロティンA担持体を用いる方法が報告されて
いる。このプロティンA担持体に例えば生体からの血液
を分離して得られた血泰を接触させ、接触後の血漿を再
び血液固形分と合わせて全血とし、生体に戻すと悪性腫
瘍細胞が速やかに壊死することが確認されている。
Ban5alらは悪性腫瘍を有する生体内には、正常な
免疫機能を阻止する因子が増加し、生体にとっては異物
である癌細胞を認識する機能が働かないために悪性腫瘍
の増殖が助長されると考えた。このような阻止因子(血
清阻止因子)としては、悪性腫瘍細胞表面が特異抗原と
なり、この特異抗原により生成する抗体、抗原−抗体結
合物にさらに補体が結合して大きなマトリックスを形成
した免疫複合体、免疫抑制酸性糖蛋白質などが挙げられ
。
免疫機能を阻止する因子が増加し、生体にとっては異物
である癌細胞を認識する機能が働かないために悪性腫瘍
の増殖が助長されると考えた。このような阻止因子(血
清阻止因子)としては、悪性腫瘍細胞表面が特異抗原と
なり、この特異抗原により生成する抗体、抗原−抗体結
合物にさらに補体が結合して大きなマトリックスを形成
した免疫複合体、免疫抑制酸性糖蛋白質などが挙げられ
。
これらを除去することにより悪性腫瘍の増殖が阻止され
ると考えた。上記プロティンAは、はとんどの哺乳動物
の免疫グロブリン(Ig;主として免疫グロブリンG
(IgG))のFc部分と結合する性質を有する。その
ため、彼らはプロティンA担持体に血漿を接触させると
、上記血清阻止因子を包含するIgが吸着・除去され、
その結果、正常な免疫系が復活して腫瘍細胞が排除され
るものと考えた。しかし、 Termanらが用いたプ
ロティンAの量はわずか数■である。このような微量の
プロティンAに血清阻止因子が吸着することにより腫瘍
が急速に壊死することを説明することができない。
ると考えた。上記プロティンAは、はとんどの哺乳動物
の免疫グロブリン(Ig;主として免疫グロブリンG
(IgG))のFc部分と結合する性質を有する。その
ため、彼らはプロティンA担持体に血漿を接触させると
、上記血清阻止因子を包含するIgが吸着・除去され、
その結果、正常な免疫系が復活して腫瘍細胞が排除され
るものと考えた。しかし、 Termanらが用いたプ
ロティンAの量はわずか数■である。このような微量の
プロティンAに血清阻止因子が吸着することにより腫瘍
が急速に壊死することを説明することができない。
そのため、 Ray 、ベル°トラム(Bertram
)らは、上記プロティンAが原因となりγ−インターフ
ェロンやナチュラルキラー活性が誘導され、これらが悪
性腫瘍細胞に作用し急速にこれを壊死させる。
)らは、上記プロティンAが原因となりγ−インターフ
ェロンやナチュラルキラー活性が誘導され、これらが悪
性腫瘍細胞に作用し急速にこれを壊死させる。
という仮説をたてた。しかし、その詳細な機構は不明で
ある。
ある。
(発明が解決しようとする問題点)
本発明者は上記プロティンAの作用機構を解明し、より
効果的な悪性腫瘍等の治療方法を開発し本発明を完成し
た0本発明の目的は、効果的な悪性l@瘍等の治療方法
を捷供することにある。
効果的な悪性腫瘍等の治療方法を開発し本発明を完成し
た0本発明の目的は、効果的な悪性l@瘍等の治療方法
を捷供することにある。
(問題点を解決するための手段)
発明者らは、悪性腫瘍患者から、免疫複合体を多量に含
み濁度の大きな血清を得て、これをプロティンA担持体
と接触させたところ、血清が清澄化しかつ血清中に悪性
腫瘍特異抗原と強力な反応性を示すIgGが含有されて
いるのを確認した。このことから9発明者らは、悪性腫
瘍患者の血漿もしくは血清中には本来悪性腫瘍と特異的
に反応してこれを壊死させる悪性腫瘍特異抗体が存在し
。
み濁度の大きな血清を得て、これをプロティンA担持体
と接触させたところ、血清が清澄化しかつ血清中に悪性
腫瘍特異抗原と強力な反応性を示すIgGが含有されて
いるのを確認した。このことから9発明者らは、悪性腫
瘍患者の血漿もしくは血清中には本来悪性腫瘍と特異的
に反応してこれを壊死させる悪性腫瘍特異抗体が存在し
。
これが上記IgGに相当すると考えた。さらに、この悪
性腫瘍特異抗体は免疫複合体として存在するため、その
活性能がブロックされているが、プロティンAの作用に
より悪性腫瘍特異抗体が免疫複合体から遊離し、そのこ
とにより悪性腫瘍特異抗体の悪性腫瘍細胞に対する活性
能が回復するとの仮説をたてた。この仮説が正しいとす
れば、血漿もしくは血清から免疫複合体を分離し、この
免疫複合体を解離させて得られる悪性腫瘍特異抗体を投
与すれば悪性腫瘍等を効果的に治療しうる。この考えを
もとに種々の実験を重ねた結果、この発明を完成するに
至った。
性腫瘍特異抗体は免疫複合体として存在するため、その
活性能がブロックされているが、プロティンAの作用に
より悪性腫瘍特異抗体が免疫複合体から遊離し、そのこ
とにより悪性腫瘍特異抗体の悪性腫瘍細胞に対する活性
能が回復するとの仮説をたてた。この仮説が正しいとす
れば、血漿もしくは血清から免疫複合体を分離し、この
免疫複合体を解離させて得られる悪性腫瘍特異抗体を投
与すれば悪性腫瘍等を効果的に治療しうる。この考えを
もとに種々の実験を重ねた結果、この発明を完成するに
至った。
本発明の悪性腫瘍等の治療方法は、生体から得られた血
漿もしくは血清から悪性腫瘍特異抗体を単離し、これを
該生体と同一または同種の生体内に注入することを包含
し、そのことにより上記目的が達成される。
漿もしくは血清から悪性腫瘍特異抗体を単離し、これを
該生体と同一または同種の生体内に注入することを包含
し、そのことにより上記目的が達成される。
本発明によれば、血漿もしくは血清からの免疫複合体の
分離は1次の処理工程のうちの少なくとも一種により行
われる: ■Raji細胞法。
分離は1次の処理工程のうちの少なくとも一種により行
われる: ■Raji細胞法。
■水溶性ポリマーおよび/または液状多糖類を用いる処
理。
理。
■C1q法。
■プロティンAを用いる処理。
■プロティンGを用いる処理。
■色素結合法。
■シュークロース密度勾配分画法、および■ゲル濾過法
。
。
これらはいずれも免疫複合体の単離法として既知の手法
である。これらのうち■は、 Barkittリンパ腫
由来の培養株であるRaji細胞が補体成分に対するレ
セプターを有することを利用したものである。免疫複合
体は抗体のFc部分に補体を有するためRaji細胞に
結合して血漿もしくは血清から分離される。
である。これらのうち■は、 Barkittリンパ腫
由来の培養株であるRaji細胞が補体成分に対するレ
セプターを有することを利用したものである。免疫複合
体は抗体のFc部分に補体を有するためRaji細胞に
結合して血漿もしくは血清から分離される。
■の処理を行うには、血漿もしくは血清を水溶性ポリマ
ーおよび/または液状多wt類と混合する。
ーおよび/または液状多wt類と混合する。
水溶性ポリマーとしてはポリエチレングリコール。
ポリリジンなどが、液状多m類としてはデキストランな
どが用いられる。特にポリエチレングリコール(PEG
)が好適に用いられる0例えば、 PEG濃度が3〜1
0%となるように血漿もしくは血清にPEGを加えると
免疫複合体が沈澱する。
どが用いられる。特にポリエチレングリコール(PEG
)が好適に用いられる0例えば、 PEG濃度が3〜1
0%となるように血漿もしくは血清にPEGを加えると
免疫複合体が沈澱する。
■のC1qは補体の第1成分であり免疫複合体との結合
性が極めて高いため、これに免疫複合体を結合させて分
離する。
性が極めて高いため、これに免疫複合体を結合させて分
離する。
■および■のプロティンAおよびプロティンGはそれぞ
れ黄色ブドウ状球菌およびグループGストレプトコッカ
ス菌由来の蛋白質である。プロティンAおよびプロティ
ンGはいずれも免疫複合体。
れ黄色ブドウ状球菌およびグループGストレプトコッカ
ス菌由来の蛋白質である。プロティンAおよびプロティ
ンGはいずれも免疫複合体。
悪性腫瘍特異抗体などのFc部分を認識し免疫複合体や
悪性腫瘍特異抗体を吸着する能力を有し。
悪性腫瘍特異抗体を吸着する能力を有し。
他方、免疫複合体を解離させる能力をも有する。
免疫複合体を吸着するか解離させるかは、接触時の状況
により異なる0例えばプロティンAを固定化したカラム
に免疫複合体を含む血漿もしくは血清を流した場合は、
使用する緩衝液の種類、免疫複合体の濃度、流速などに
より該免疫複合体が吸着するか解離するかが決まる。こ
のように、特定の状況を設定することにより免疫複合体
を血奉もしくは血清から分離することができる。通常、
プロティンAやプロティンGはセルロース、アガロース
、ポリアミノスチレンなどの不活性担体に担持させて血
漿もしくは血清と接触させる。
により異なる0例えばプロティンAを固定化したカラム
に免疫複合体を含む血漿もしくは血清を流した場合は、
使用する緩衝液の種類、免疫複合体の濃度、流速などに
より該免疫複合体が吸着するか解離するかが決まる。こ
のように、特定の状況を設定することにより免疫複合体
を血奉もしくは血清から分離することができる。通常、
プロティンAやプロティンGはセルロース、アガロース
、ポリアミノスチレンなどの不活性担体に担持させて血
漿もしくは血清と接触させる。
■の処理に用いられる色素は1例えばシバコロンブルー
であり、この色素と例えば、ジエチルアミノエチル基と
を不活性担体に結合させ、血漿もしくは血清と接触させ
ると免疫複合体が選択的に吸着される。
であり、この色素と例えば、ジエチルアミノエチル基と
を不活性担体に結合させ、血漿もしくは血清と接触させ
ると免疫複合体が選択的に吸着される。
■および■はそれぞれ免疫複合体が所定の比重および分
子量を有することを利用する処理である。
子量を有することを利用する処理である。
次に、このようにして得られる免疫複合体を解離させる
。免疫複合体の解離は。
。免疫複合体の解離は。
■酸と接触させてpH5,0以下とすること。
■アルカリと接触させてpH9,0以上とすること。
00.56以上の有機もしくは無機塩溶液と接触させる
こと。
こと。
00.5M以上のカオトロピック性イオンを含む溶液と
接触させること。
接触させること。
■プロティンAと接触させること、および■プロティン
Gと接触させること。
Gと接触させること。
のうちの少なくとも一種により行われる。
上記■の酸との接触に用いられる酸としては。
塩酸、リン酸、酢酸、クエン酸などの通常の無機酸また
は有機酸水溶液が用いられ得、好ましくは各種酸性の緩
衝液が用いられる。酸性の緩衝液としてはグリシン−塩
酸緩衝液、クエン酸緩衝液。
は有機酸水溶液が用いられ得、好ましくは各種酸性の緩
衝液が用いられる。酸性の緩衝液としてはグリシン−塩
酸緩衝液、クエン酸緩衝液。
酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、硼酸緩衝液、フタル酸カリ
ウム−塩酸緩衝液などがある。上記酸性水溶液のpHは
血漿もしくは血清と混合したときに5.0以下、好まし
くは3.5以下となるように調整される。■のアルカリ
との接触に用いられるアルカリには、炭酸ナトリウム、
水酸化ナトリウムなど通常のアルカリ水溶液が用いられ
得、好ましくは各種アルカリ性の緩衝液が利用されうる
。アルカリ性の緩衝液としては、グリシン−硼酸緩衝液
、炭酸ナトリウム緩衝液、グリシン−水酸化ナトリウム
緩衝液、ジェタノールアミン−塩酸緩衝液などがある。
ウム−塩酸緩衝液などがある。上記酸性水溶液のpHは
血漿もしくは血清と混合したときに5.0以下、好まし
くは3.5以下となるように調整される。■のアルカリ
との接触に用いられるアルカリには、炭酸ナトリウム、
水酸化ナトリウムなど通常のアルカリ水溶液が用いられ
得、好ましくは各種アルカリ性の緩衝液が利用されうる
。アルカリ性の緩衝液としては、グリシン−硼酸緩衝液
、炭酸ナトリウム緩衝液、グリシン−水酸化ナトリウム
緩衝液、ジェタノールアミン−塩酸緩衝液などがある。
上記アルカリ性水溶液のpHは血漿もしくは血清と混合
したときに9.0以上、好ましくは9.0〜12.0と
なるように調整される。これら■および■の処理におい
ては酸やアルカリの濃度にもよるが2通常、血漿もしく
は血清1vplに対して酸またはアルカリ溶液が1〜1
00/!の割合で用いられる。酸またはアルカリ処理後
の血漿もしくは血清は生理食塩水で透析などを行い含有
される酸またはアルカリを除去する。免疫複合体を充分
に解離させるために上記酸またはアルカリ処理を繰り返
し行うことが推奨される。
したときに9.0以上、好ましくは9.0〜12.0と
なるように調整される。これら■および■の処理におい
ては酸やアルカリの濃度にもよるが2通常、血漿もしく
は血清1vplに対して酸またはアルカリ溶液が1〜1
00/!の割合で用いられる。酸またはアルカリ処理後
の血漿もしくは血清は生理食塩水で透析などを行い含有
される酸またはアルカリを除去する。免疫複合体を充分
に解離させるために上記酸またはアルカリ処理を繰り返
し行うことが推奨される。
■の塩溶液の接触に用いられる有機もしくは無機塩には
1例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネ
シウム、硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カ
リウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸水素カリウム、
クエン酸ナトリウム。
1例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネ
シウム、硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カ
リウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸水素カリウム、
クエン酸ナトリウム。
酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウムがある。これらの有機
もしくは無機塩は0.5M以上、好ましくは1〜4M程
度の水溶液(高張塩)とし、血漿もしくは血清l1m1
あたり1〜100mfの割合で用いられる。
もしくは無機塩は0.5M以上、好ましくは1〜4M程
度の水溶液(高張塩)とし、血漿もしくは血清l1m1
あたり1〜100mfの割合で用いられる。
■のカオトロピック性イオンとは、疎水性基の周囲に形
成される氷状の水分子の配列を破壊する性質を有するイ
オンであり、このようなイオンの働きにより免疫複合体
の抗原−抗体間の疎水性結合が切断される。このような
イオンには例えば。
成される氷状の水分子の配列を破壊する性質を有するイ
オンであり、このようなイオンの働きにより免疫複合体
の抗原−抗体間の疎水性結合が切断される。このような
イオンには例えば。
CC13COO−、5CN−、CF3CO0−、ドがあ
る。カオトロピック性イオンを含む化合物としてはチオ
シアン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、トリフロロ酢酸
ナトリウムなどがある。これらは0.5M以上。
る。カオトロピック性イオンを含む化合物としてはチオ
シアン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、トリフロロ酢酸
ナトリウムなどがある。これらは0.5M以上。
好ましくはIM〜4M程度の水溶液とし、血漿もしくは
血清Lralあたり1〜100 taβの割合で用いら
れる。
血清Lralあたり1〜100 taβの割合で用いら
れる。
■および■のプロティンAおよびプロティンGは既述の
ように免疫複合体を吸着する能力と解離させる能力とを
有するため、適宜条件を設定して免疫複合体の解離が効
果的に行われるようにする。
ように免疫複合体を吸着する能力と解離させる能力とを
有するため、適宜条件を設定して免疫複合体の解離が効
果的に行われるようにする。
免疫複合体から遊離した悪性腫瘍特異抗体の精製は。
■免疫複合体の解離物をプロティンAと接触させること
。
。
■免疫複合体の解離物ををプロティンGと接触させるこ
と。
と。
■免疫複合体の解離物をゲル濾過にかけること。
■免疫複合体の解離物をイオン交換クロマトグラフィに
かけること、および ■免疫複合体の解離物を抗イムノグロブリン抗体と接触
させること。
かけること、および ■免疫複合体の解離物を抗イムノグロブリン抗体と接触
させること。
のうちの少なくとも一種により達成される。
■および■のプロティンAおよびプロティンGは既述の
ように悪性腫瘍特異抗体を吸着させる能力を有する。例
えば、プロティンAをセファロースなどに固定化してカ
ラムに充填し、これに免疫複合体解離物を含む溶液を流
すと悪性腫瘍特異抗体が吸着する。このときにも使用す
る緩衝液の種類や流速などを悪性腫瘍特異抗体が効果的
に吸着されるように適宜設定する。
ように悪性腫瘍特異抗体を吸着させる能力を有する。例
えば、プロティンAをセファロースなどに固定化してカ
ラムに充填し、これに免疫複合体解離物を含む溶液を流
すと悪性腫瘍特異抗体が吸着する。このときにも使用す
る緩衝液の種類や流速などを悪性腫瘍特異抗体が効果的
に吸着されるように適宜設定する。
■のゲル濾過法および■のイオン交換クロマトグラフィ
法はそれぞれ、悪性腫瘍特異抗体が所定の分子量および
電気的特性を有することを利用するもので、それぞれ通
常の処理法が適用される。
法はそれぞれ、悪性腫瘍特異抗体が所定の分子量および
電気的特性を有することを利用するもので、それぞれ通
常の処理法が適用される。
イオン交換クロマトグラフィに用いられるゲルは。
ジエチルアミノエチル基などを有する陰イオン型のゲル
が好適に用いられる。
が好適に用いられる。
■は悪性腫瘍特異抗体と特異的に反応する抗Ig抗体を
利用する処理である。例えばウサギのIgGを投与して
得たヤギの血清(抗つサギIgG抗ヤギ血清)はウサギ
の抗体に特異的なりギの抗体を含む、この抗つサギIg
G抗ヤギ血清を不活性担体に担持させてカラムに充填し
、これに悪性腫瘍を有するウサギから得た免疫複合体解
難物を流すとウサギの悪性腫瘍特異抗体が得られる。
利用する処理である。例えばウサギのIgGを投与して
得たヤギの血清(抗つサギIgG抗ヤギ血清)はウサギ
の抗体に特異的なりギの抗体を含む、この抗つサギIg
G抗ヤギ血清を不活性担体に担持させてカラムに充填し
、これに悪性腫瘍を有するウサギから得た免疫複合体解
難物を流すとウサギの悪性腫瘍特異抗体が得られる。
本発明方法により治療を行うには9例えば、まず、悪性
腫瘍を有する生体から一定量の血液を抜きとって血漿も
しくは血清を得る。これを上記■〜■(免疫複合体の単
離工程)のうちのいずれかで処理すると免疫複合体が得
られる。この免疫複合体を次に、上記■〜■(免疫複合
体の解離工程)のうちのいずれかで処理する。免疫複合
体の解離により悪性腫瘍特異抗体、悪性腫瘍特異抗原、
免疫複合体の解離残金、低分子物質などを含む免疫複合
体解離物が得られる。これを上記■〜■(免疫複合体の
精製工程)のうちのいずれかで処理すると悪性腫瘍特異
抗体を高純度で含有するIgが得られる。これをもとの
生体と同一または同一種の生体に注入する(例えば静脈
注射を行う)と。
腫瘍を有する生体から一定量の血液を抜きとって血漿も
しくは血清を得る。これを上記■〜■(免疫複合体の単
離工程)のうちのいずれかで処理すると免疫複合体が得
られる。この免疫複合体を次に、上記■〜■(免疫複合
体の解離工程)のうちのいずれかで処理する。免疫複合
体の解離により悪性腫瘍特異抗体、悪性腫瘍特異抗原、
免疫複合体の解離残金、低分子物質などを含む免疫複合
体解離物が得られる。これを上記■〜■(免疫複合体の
精製工程)のうちのいずれかで処理すると悪性腫瘍特異
抗体を高純度で含有するIgが得られる。これをもとの
生体と同一または同一種の生体に注入する(例えば静脈
注射を行う)と。
悪性腫瘍特異抗体が悪性腫瘍細胞に作用してこれを壊死
させる。
させる。
(作用)
このように、従来技術のプロティンAの作用機構を検討
した結果、効果的な悪性腫瘍の治療方法を開発すること
ができた0本発明によれば、悪性腫瘍を有する生体の血
漿もしくは血清から免疫複合体を単離し、これを特定の
条件下で処理することにより免疫複合体が解離して悪性
腫瘍特異抗体が遊離する。これを精製すると純度の高い
悪性腫瘍特異抗体を含有するIg分画が得られる。この
Igは、悪性腫瘍特異抗原と特異的に反応する0例えば
、このIgと悪性腫瘍特異抗原とでゲル内沈降反応を行
うと沈降線が形成される。この悪性腫瘍特異抗体を含む
Igを生体にもどすと、悪性腫瘍特異抗体は悪性腫瘍細
胞に特異的に作用してこれを壊死もしくは縮小させる。
した結果、効果的な悪性腫瘍の治療方法を開発すること
ができた0本発明によれば、悪性腫瘍を有する生体の血
漿もしくは血清から免疫複合体を単離し、これを特定の
条件下で処理することにより免疫複合体が解離して悪性
腫瘍特異抗体が遊離する。これを精製すると純度の高い
悪性腫瘍特異抗体を含有するIg分画が得られる。この
Igは、悪性腫瘍特異抗原と特異的に反応する0例えば
、このIgと悪性腫瘍特異抗原とでゲル内沈降反応を行
うと沈降線が形成される。この悪性腫瘍特異抗体を含む
Igを生体にもどすと、悪性腫瘍特異抗体は悪性腫瘍細
胞に特異的に作用してこれを壊死もしくは縮小させる。
悪性腫瘍特異抗体を含む1gをもとの生体と同種の生体
へ注入しても同様の効果が得られる。悪性腫瘍特異抗体
の純度が高いため副作用も極めて少ない。
へ注入しても同様の効果が得られる。悪性腫瘍特異抗体
の純度が高いため副作用も極めて少ない。
(実施例)
以下に本発明を実施例につき説明する。
塞】l1上
生後6適齢の家兎の背部皮下に腫瘍細胞Vx2を5X1
0’個移植し、4週間後に耳介静脈から採血した。遠心
分離し、血球成分を除去して血清を得た。血清30s
1を7%ポリエチレングリコール(和光純薬社製; P
EG 6000)30m Ilに溶解し室温でゆるやか
に攪拌した。遠心分離後上清を除去し、沈澱物(免疫複
合体)を得た。これに3M塩化ナトリウムを含有する0
、01Mリン酸緩衝液(pH7,0)50calを加え
、室温でゆるやかに攪拌し免疫複合体の解離を行い、さ
らに0.01Mリン酸緩衝液(pH8,2)で透析を行
なった* 5 mlのセファローズ(ファルマシア社製
)に10■のプロティンA(牛丼化学社製)を担持させ
て不溶化し、カラムに充填した。これに上記透析後の免
疫複合体解離物をアプライした。プロティンA−セファ
ローズに吸着したものを0.1Mグリシン−塩酸緩衝液
(pH3,0)で溶出させ、 0.1Mグリシン−水
酸化ナトリウム(pH10,0)で直ちに中和した。こ
れを150mM塩化ナトリウム含有0.01Mリン酸緩
衝液で透析を行い。
0’個移植し、4週間後に耳介静脈から採血した。遠心
分離し、血球成分を除去して血清を得た。血清30s
1を7%ポリエチレングリコール(和光純薬社製; P
EG 6000)30m Ilに溶解し室温でゆるやか
に攪拌した。遠心分離後上清を除去し、沈澱物(免疫複
合体)を得た。これに3M塩化ナトリウムを含有する0
、01Mリン酸緩衝液(pH7,0)50calを加え
、室温でゆるやかに攪拌し免疫複合体の解離を行い、さ
らに0.01Mリン酸緩衝液(pH8,2)で透析を行
なった* 5 mlのセファローズ(ファルマシア社製
)に10■のプロティンA(牛丼化学社製)を担持させ
て不溶化し、カラムに充填した。これに上記透析後の免
疫複合体解離物をアプライした。プロティンA−セファ
ローズに吸着したものを0.1Mグリシン−塩酸緩衝液
(pH3,0)で溶出させ、 0.1Mグリシン−水
酸化ナトリウム(pH10,0)で直ちに中和した。こ
れを150mM塩化ナトリウム含有0.01Mリン酸緩
衝液で透析を行い。
Vx2特異抗体を含む約3511wのイムノグロブリン
溶液(30mjりを得た。
溶液(30mjりを得た。
他方、 Vx2腫瘍細胞10’個を3M塩化カリウム
を含有する0、OIM PBS (pH7,0)に加え
、4℃で16時時間中かに攪拌した。不溶部分を40.
000 cで30分間遠心処理して除去し、その上清を
0.01MPBS (pH7,0)で−晩透析にかけた
。これをさらに40.000 Gで30分間遠心分離し
、不溶部分を除去した。上清を減圧濃縮して1 rsl
のVx2表面抗原溶液を得た。
を含有する0、OIM PBS (pH7,0)に加え
、4℃で16時時間中かに攪拌した。不溶部分を40.
000 cで30分間遠心処理して除去し、その上清を
0.01MPBS (pH7,0)で−晩透析にかけた
。これをさらに40.000 Gで30分間遠心分離し
、不溶部分を除去した。上清を減圧濃縮して1 rsl
のVx2表面抗原溶液を得た。
このVx2表面抗原溶液と上記イムノグロブリン溶液と
でゲル内沈降反応を行なったところ沈降線が形成された
。上記免疫複合体を生理食塩水に溶解し、この溶液とV
x2表面抗原溶液とでゲル内沈降反応を行なったが沈降
線は形成されなかった。
でゲル内沈降反応を行なったところ沈降線が形成された
。上記免疫複合体を生理食塩水に溶解し、この溶液とV
x2表面抗原溶液とでゲル内沈降反応を行なったが沈降
線は形成されなかった。
実施■1
実施例1と同様にしてVx2特異抗体を含むイムノグロ
ブリン溶液を得た。この溶液をVx2担癌家兎に耳介静
脈より緩やかに注入したところ1時間で背部表面に形成
された潰瘍部の壊死が認められた。
ブリン溶液を得た。この溶液をVx2担癌家兎に耳介静
脈より緩やかに注入したところ1時間で背部表面に形成
された潰瘍部の壊死が認められた。
ス】11灸
生後6週齢の家兎の背部皮下に腫瘍細胞Vx2を5X1
0’個移植し、5週間後に心臓採血を行なった。これを
遠心分離し、血球成分を除去して血清約60+m j!
を得た。この血清30−lを10%ポリエチレングリコ
ール(和光純薬社製PEG6000) 30m lに溶
解し室温で緩やかに攪拌した。遠心分離後上清を除去し
、ペレット(免疫複合体)を得た。これに0.1Mグリ
シン−塩酸緩衝液(pH3,0) 100a+j!を加
え、4℃で30分間撹拌し、免疫複合体の解離を行なっ
た。さらに150mMの塩化ナトリウムを含有する0、
01Mリン酸緩衝液(pH7,0)で透析を行なった。
0’個移植し、5週間後に心臓採血を行なった。これを
遠心分離し、血球成分を除去して血清約60+m j!
を得た。この血清30−lを10%ポリエチレングリコ
ール(和光純薬社製PEG6000) 30m lに溶
解し室温で緩やかに攪拌した。遠心分離後上清を除去し
、ペレット(免疫複合体)を得た。これに0.1Mグリ
シン−塩酸緩衝液(pH3,0) 100a+j!を加
え、4℃で30分間撹拌し、免疫複合体の解離を行なっ
た。さらに150mMの塩化ナトリウムを含有する0、
01Mリン酸緩衝液(pH7,0)で透析を行なった。
セファローズに抗つサギIgG抗ヤギ血清(生化学工業
社製)を担持させて不溶化し、カラムに充填した。この
カラムに上記透析後の免疫複合体解離物をアプライし、
カラムに吸着したIgG成分をO,1Mグリシン−塩酸
緩衝液(pH3,0)で溶出させ、直ちに150mM塩
化ナトリウム含有0.01Mリン酸緩衝液(pH7,0
)で透析を行なった。このようにして、 Vx2特異抗
体を含む約30■のイムノグロブリン溶液(30mjり
を得た。この溶液をVx2担癌家兎に耳介静脈より緩や
かに注入したところ1時間はどで背部表面に形成された
潰瘍部が黒色化して壊死が観察され、翌日には注入前の
半分程度に潰瘍が縮小した。
社製)を担持させて不溶化し、カラムに充填した。この
カラムに上記透析後の免疫複合体解離物をアプライし、
カラムに吸着したIgG成分をO,1Mグリシン−塩酸
緩衝液(pH3,0)で溶出させ、直ちに150mM塩
化ナトリウム含有0.01Mリン酸緩衝液(pH7,0
)で透析を行なった。このようにして、 Vx2特異抗
体を含む約30■のイムノグロブリン溶液(30mjり
を得た。この溶液をVx2担癌家兎に耳介静脈より緩や
かに注入したところ1時間はどで背部表面に形成された
潰瘍部が黒色化して壊死が観察され、翌日には注入前の
半分程度に潰瘍が縮小した。
(発明の効果)
本発明によれば、このように、悪性腫瘍を有する生体の
血漿もしくは血清から免疫複合体を得。
血漿もしくは血清から免疫複合体を得。
これを処理することにより悪性腫瘍抗体を効果的に得る
ことができる。この悪性腫瘍抗体を投与することにより
悪性腫瘍等が速やかに壊死・縮小する。悪性腫瘍抗体は
精製されているために純度が高く、そのため副作用も極
めて少ない。
ことができる。この悪性腫瘍抗体を投与することにより
悪性腫瘍等が速やかに壊死・縮小する。悪性腫瘍抗体は
精製されているために純度が高く、そのため副作用も極
めて少ない。
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、生体から得られた血漿もしくは血清から悪性腫瘍特
異抗体を単離し、これを該生体と同一または同種の生体
内に注入することを包含する悪性腫瘍等の治療方法。 2、前記悪性腫瘍特異抗体が、血漿もしくは血清からの
免疫複合体を解離し、これを精製することにより得られ
る特許請求の範囲第1項に記載の治療方法。 3、前記免疫複合体が、 (1)Raji細胞法、 (2)水溶性ポリマーおよび/または液状多糖類による
処理、 (3)C1q法。 (4)プロテインAによる処理、 (5)プロテインGによる処理、 (6)色素結合法、 (7)シュークロース密度勾配分画法、および(8)ゲ
ル濾過法、 のうちの少なくとも一種により血漿もしくは血清から分
離される特許請求の範囲第2項に記載の治療方法。 4、前記免疫複合体の解離が、 (1)酸と接触させてpH5.0以下とすること、(2
)アルカリと接触させてpH9.0以上とすること、 (3)0.5M以上の有機もしくは無機塩溶液と接触さ
せること。 (4)0.5M以上のカオトロピック性イオンを含む溶
液と接触させること、 (5)プロテインAと接触させること、および(6)プ
ロテインGと接触させること、 のうちの少なくとも一種により行われる特許請求の範囲
第2項に記載の治療方法。 5、前記精製が、 (1)前記免疫複合体の解離物をプロテインAと接触さ
せること、 (2)前記免疫複合体の解離物をプロテインGと接触さ
せること、 (3)前記免疫複合体の解離物をゲル濾過にかけること
。 (4)前記免疫複合体の解離物をイオン交換クロマトグ
ラフィにかけること、および (5)前記免疫複合体の解離物を抗イムノグロブリン抗
体と接触させること、 のうちの少なくとも一種により行われる特許請求の範囲
第2項に記載の治療方法。 6、前記プロテインA、プロテインGまたは抗イムノグ
ロブリン抗体が不活性担体に担持された特許請求の範囲
第4項または第5項に記載の治療方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP24067686A JPS6393731A (ja) | 1986-10-09 | 1986-10-09 | 悪性腫瘍等の治療方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP24067686A JPS6393731A (ja) | 1986-10-09 | 1986-10-09 | 悪性腫瘍等の治療方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6393731A true JPS6393731A (ja) | 1988-04-25 |
Family
ID=17063047
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP24067686A Pending JPS6393731A (ja) | 1986-10-09 | 1986-10-09 | 悪性腫瘍等の治療方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6393731A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02157656A (ja) * | 1988-10-12 | 1990-06-18 | Biotest Ag | 固相法により赤血球抗体を探索し、同定する方法 |
-
1986
- 1986-10-09 JP JP24067686A patent/JPS6393731A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02157656A (ja) * | 1988-10-12 | 1990-06-18 | Biotest Ag | 固相法により赤血球抗体を探索し、同定する方法 |
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