JPH02494A - 抗イデイオタイプ抗体を使用する腫瘍の免疫治療法 - Google Patents

抗イデイオタイプ抗体を使用する腫瘍の免疫治療法

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JPH02494A
JPH02494A JP63224877A JP22487788A JPH02494A JP H02494 A JPH02494 A JP H02494A JP 63224877 A JP63224877 A JP 63224877A JP 22487788 A JP22487788 A JP 22487788A JP H02494 A JPH02494 A JP H02494A
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JP
Japan
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antibody
antigen
idiotype
cells
monoclonal
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Ingegerd Hellstrom
インジガード　ヘルストローム
Karl E Hellstrom
カール　エリック　ヘルストローム
Maria S Kahn
マリア　エス　カン
Donna Francine Beat
ドナ　フランシス　ビートン
Victor K Lee
ビクター　ケイ　リー
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Bristol Myers Co
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 不発明は腫瘍の免疫治療および免疫予防のために抗イデ
イオタイプ抗体を利用する方法に関する。本発明は治療
上の利点のために免疫系のイディオタイプ・ネットワー
クを使用する方法、たとえばＭＱに対する免疫のために
、肺癌抗原に対するイデイオトープを発現する抑制Ｔ細
胞もしくは抑制因子によって伝達される免疫抑制の防止
のために、採用する免疫治療に使用するり／パ細胞の活
性化などのために、腫瘍に対する免疫用の抗イデイオタ
イプ抗体を使用する方法に関する。特足の具体例におい
て、自己分化抗原たとえばオンコフエタルまたは分化抗
原を決定する抗体のイディオタイプに対して生じたモノ
クローナル抗イデイオタイプ抗体は、オ／コフエタル抗
原をもつ腫瘍に応答する免疫を誘発させるために生体内
で使用することができる。
不発明の抗イデイオタイプのモノクローナル抗体は腫瘍
の免疫￥Ｉ僚Ｚよび免疫予防に有用で６９、ヒトの医療
に一般に重要である。本発明の分子を工ＥＬＩＳＡ試験
のような免疫分析および放射免疫分析（これらの免疫分
析は抗腫瘍抗体または腫瘍抗原の検出のための診断道具
として有用である〕における試剤として及び抗腫瘍抗体
の単離と同一性確認に有用な免疫吸着における試剤とし
て使用することもでざゐ。ヱた、こｎらの試削（工Ｊ厘
腸瘍発達と生育を理解する上での価値ある道具である。
〔従来の技術〕
抗イデイオタイプ抗体もしくは抗イデイオタイプは別の
抗体分子の抗原結合性領域もしくは可変領域（イディオ
タイプと呼ばれる）に対する抗体である。理論的に、イ
ディオタイプの関係のＪｇｒ％−のネットワーク・モデ
ルにもとづゝ゛て（Ｊ　ｍｒｓｇ　、ｔ’ｉ、に、　１
９７４　＋　Ａｎｎ、ｌｍｍ５ｔｎｏ　ｔ　（ｉ＜”）
　）１２５　ｃ　：　３７３　；　Ｊａｒｎａ、Ｎ、に
、等、１９８２　　ＥＭＢｏｌ：２３４）、ある抗原の
パラトープ（抗原結合性の場）を発現する抗体分子によ
る免疫は一群の抗体を生ずべきでおり、そのうちの若干
はバラトープに対する補形構造を抗原と分は合う。抗イ
デイオタイプ抗体の１位集団による免疫はまた最初の抗
原に対して反応性のある抗体の下位集団もしくを工免投
細胞下位セットを生ずべきである。
ィディオトープおよび抗イデイオトープのネットワーク
は免疫規制を説明するために提起され、通常のもしくは
関連のある抗体のイディオトープ、Ｂ−１）：ｙパ細胞
、およびＴＩＪ／パ細胞の種々の下位セット、ならびＫ
それらの可溶性生成物は抗イデイオトープと相互する（
Ｊａｒ％＃　、ＮＸ。
１９７４、上記文献：Ｕｒｂａｉｎ、１０等、ｌ　９７
７　、　Ｐｒｏｅ。
Ｎａｔｌ　、Ａｃａｄ、Ｓｅｉ　、Ｕ、Ｓ、Ａ、７４　
＊　５１２６　：Ｒａｊａｗａｋｉ。
Ｒ＆　ＴａｋａｍｏｒｉＪ、ｐ１９８３　、Ａｎｓ、Ｒ
ｇ＊、Ｉｔｎｍｓｎｏｌ　。
１：５６９）。ハプテＺおよびウィルス抗原の双方に対
する免疫につい℃なされた研究は、Ｂ細胞誘動の抗イデ
イオタイプ抗体はＴｍ胞応答を誘発しうろことを示して
いる（　ＲａＤｗａｋｉｌＲ＆　Ｔａｋｇｔｎｏｒｔ、
Ｔ　１上記文献；　Ｕｒｂａ鴎Ｊ等、上記文献：Ｂ１５
（Ｂ１１　＆ＩＩ’ｉｇｔｇ１１＋Ｈ，＋１９７８゜Ｊ
、Ｅｚｐ、Ａｈｄ、１４７　：　６３　）。たとえは、
Ｅｒｔｌ　等はセンダイ・ウィルス特異性Ｔ細胞クロー
ンでマウスを免疫させ、センダイ・ウィルスに対するＤ
ＴＨ応答を規制する抗イデイオタイプｍＡｂ　を生産さ
せた（　Ｅｒｔｌ、ＩＩ、Ｃ０Ｊ、等、１９８２　、　
Ｐｒｏａ　、ＮａＬｌ　、Ａｅａｄ、Ｓｃｉ　、Ｕ、Ｓ
、Ａ、　７９　ニア４７９）。Ｔ細胞イディオトープに
応答して生ずるＢ細胞抗体の証拠として、Ｋｇｓｔｓｇ
ｄｙ等は腫瘍排除を観察したが、５Ｖ４ＱＴ抗原に関連
する抗イデイオトープ抗体で処理したマウムには抗藷躬
抗体を観察しなかっｆｃ（Ｋａｎｓｇｄｙ＊Ｒ，Ｃ’０
等、１９８５．Ｊ、Ｅｘｐ、Ａｂｔｉ、１６１：１４３
２）。
外生り抗イデイオタイプ抗体の投与は他の可変因子の中
でも抗体の蛍に依存して増強あるいは抑制の影辱を及ぼ
しうる（　Ｒａ　ｔ　Ａ　＋Ｍ０等、　１９８１　、Ｎ
ａｔｕｒｅ（Ｃ１７ド７）２９０：２５７）。
ｆ’Ｊ々の腫瘍付随抗原（ＴＡＡ）が発表された。ＴＡ
Ａの１種は腫瘍特異性移植型の細胞表面抗原（Ｔ、Ｓ７
’、４）でろり、このものは腫瘍移植実験における免疫
応答のｄ発によって認識された。
別の種類のＴＡＡはオノコフエタルもしくは分化抗原で
ある。オンコアエタル抗原は胎児細胞生産物であり、胎
児遺伝子の抑制解除による悪性細胞によって発現される
。ヒトのオンコアエタル抗原の一例は結腸の発筋胎生抗
原（ＣＥＡ）である。このセットの抗原は胎児の胃腸系
から訪導されるｍ織上に、Ｓよび胃腸系のＭ瘍に見出さ
れる。
α−フェト蛋白は別の周知のオンコアエタル抗原でろり
、肝臓癌細胞、ならびに悪性卵巣腫Ｑおよび胎児肝臓細
胞、および成人肝臓細胞の増殖留分によって分泌される
。
第３の種類のＴＡＡにはウィルス誘発朦瘍抗ｇが包含さ
れる。これらはＤＮＡ腫瘍ウィルス、およびＲＮＡ腫瘍
ウィルスの二ンビロープ抗原を包含する。
イ１々のヒト細胞表面ＴＡＡがマウスのモノクローナル
抗体によりてヒトの腫瘍中に枚重された（　Ｈａ１１ｚ
ｔｒｏｍｒＫ、Ｅ、等、　１９８２　＋　Ｈｕｍａｎ　
　Ｔａｍｅｒ−Ａａｘｏｔ＝ａｔａｄＡｓｔｉｇｍ＊ａ
　　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　　ｂｙ　Ａｌｏｓｏｃｌｏ
ｎａｌＡｓｔｉｂｏｄｓａｍ、Ｉｎｔｓｐｒｉｎｇｇｒ
　　Ｓｅｍ１ｎａｒｓ　　ｉｎＩｍｍｕｎｏｐａｇルｏ
ｌｏｇｙ　：　　Ｍｇｅｈａｎｔｓｍ　　げ　Ｅａｓｔ
Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　　　ｉｓ　　（、’ａｎｃｇｒ
＋Ｓｐｒｉｔｂｇｇｒ、Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ。
ｐｐ　１２７　１４６　：１ｈｒｌｙｓ、ｔＳｌ、等、
１９８４．ｉｎ。
Ｃ’ｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ　　ｔｏ　　Ｏｘｃｏｌ
ｏｇｙ＋Ｋａｒ（Ｈｒ＋Ｂａ５ａｌ。
Ｓｗｉｔｔｇｒｌａｓｄ＊〆ａｔ　、　１９　、　ｐｐ
、　１６０−１７０　：Ｒｒｔｓｆｔｌｄ。
Ｒ，Ａ、ａｎｄ　５ｇ１１．Ｓ、、ｍｄａ、１９８５．
Ｍｏｎ＠ｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　　ａｎｄ
　Ｃａｓｃｇｒ　Ｔｈｅｒａｐｙｓ　ＵＣＬＡ５°ｙｍ
ｐｏａｉａ　　ｏｎ　Ｍｏｌｇｅｕｔａｒ　ａｔｓｄ　
（、’ａ１１ｓｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ＊Ｎｇｗ　Ｓｒｒ
ｉｇａ、Ｖｏｌ　、２７　、ＡｊＩＳｓ　　Ｒ＋Ｌｉｚ
ｓ。
Ｉｎｃ　、　、Ｎｔｗ　Ｙｏｒｋ）。　これらの抗原の
多くのものはオノコフエタルと呼はれる。そｎらは腫瘍
およびある櫨の胎児細胞によって強く発現され、そし℃
成人からの通常の細胞によってずつと弱く発現されるか
らである。他のａ瘍付随抗原はヒトの癌における宿主細
胞医療免疫（ＣＡｆｌ）を刺戟するそれらの能力によっ
て（Ｈａ　ｌ　ｌ　ｚ　ｔｒｏｍ、に、Ｅ　、＆１１ｍ
１１ｓｔｒｏｒｎ＋１．．１９６９．Ａｄｖ、Ｃａｎｃ
ｇｒ　　Ｒａｇ、　　１２：１６７−２２３　：ｌ１ａ
ＬＬｉｄａｙ、Ｗ、！、＆Ｍａ１ｍｉｚｈ、Ａ、Ｅ。
１９８２　、ｉｎ、Ａｓａａｍｇｎｔ　　ｏｆ　ｌｍｍ
５ｔｙ　５ｔａｔｓａ　　ｂｙＬｇｘｋｏｅｙｔａ　　
Ａｄｈｅｒｅｎｃｅ　　７％んｉｂｉ百ｏｎ　　’Ｉ’
ａａｔ。
Ａｃａｄｇｔｎ４ｅｐＮａｖ　　Ｙｏｒｋ＊ｐｐ、１−
２６　；Ｈｍｒｂｇｒｍａｔｓ、Ｒ。
Ｂ、、　ｌ　９７４　、　Ａｄｖ、Ｃａｎｃｇｒ　Ｒｇ
ｇ、１９　ｇ　２０７−２６３＊Ｔｈｏｍａｏｓ、Ｄ、
ｋｆ−Ｐ、、１９８０　、　Ｃａｎｃ−ｒ　Ｒａｇ、　
２９　：６２７　６２９：ＭａｌＬｉｄａｙ、Ｗｊ、等
、１９７５　、Ｉｎｔ。
Ｊ、Ｃａｎｃｇｒ　　１６　ａ　６４５−６５４　）。
および腫瘍をもっ動物における宿主細胞医療免疫（（：
’Ｍ７）を刺戟するそれラノ能力によツ”’Ｃ（Ｔａｒ
ａｎｇｇｒｒＬ、Ａ、等、１９７２゜Ｓａｉ４ｎｅｇ　
　１７６：１３３７　１３４０：ｌ１ａ１１ｉｄａｙ。
ＩＦ’、Ｊ、等、１９７４．Ｃａ１ｌ　　Ｉｍｔｎｓｔ
ｎｏｌ、ＩＯ：４６７−４７５　：　５ｔｅａｌｓ、Ｇ
、等、１９７５　、　Ｊ　、Ｎａｔ　Ｌ　、Ｃａｎｃａ
ｒＩｎｓｔ、５４：９５９　９６７）検出された。これ
らの抗原の若干もオンコフエタルであるが、マウスのモ
ノクローナル抗体によって決定された抗原に対するそれ
らの分子の性質および関係は明らかでない。
マウス膀胱癌によって分けられた抗原に対するラットの
モノクローナル抗体が最近えられｆＣ（ｔｌｇ　ｔ　ｔ
　ｓ　ｔｒａｍｓ　ｌＩ　。
等、１９８２．　Ｉｎｔ、ＬＣａｎｃａｒ　２９：１７
５　１８０　：Ｈｇ１１ｓｔｒｏｍａ、Ｉ　、等、１９
８５．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｇｓ、４５：２２１０−２２１
８）。これらの抗体のうちの１つ６．１０は膀胱腫瘍オ
ンコフエタル抗原に特異であることが示された（　Ｈａ
１１ｓｔｒｏｍ、Ｉ、等、１９８５　、　Ｃａ％ｃｇｒ
　Ｒａｍ。
４５：２２１０−２１８８）。
変性していない腫瘍抗原Ｃｕｏｏｖｇｒ、Ｈ，Ｃ，等、
１９８５゜Ｃａｎｃｅｒ　　５５　：　１２３６−１２
４３　：ＡＩｃｌＬＬｍｓｒｒａｙ＊Ｍ、Ｂ、等、　１
９７Ｂ、Ｂデ０Ｍｇｄ、Ｊ、１　　：　　５７９　　５
８０）および生きたウィルス組換え体ウィルス（Ｅαｒ
１．Ｐ、Ｌ。
等、１９８６，５ｃｉｅｎｃｅ　　２３ニア２８−７３
１　：Ｌａｔｈｍ。
Ｒｏ等、１９８７．＃ａｅｓｒｇ２３６：８７８　８８
０）を工治僚上有利な抗腫瘍免疫応答を誘発させる試み
において使用された。
腫瘍免疫についての若干のイディオタイプ操作が報告さ
れた。ＮｍｐｏｔＩ＆等（１９８４、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
ｌ、Ａｃａｄ、Ｓａｉ。
Ｕ、ｂ、、４．８１：２８６４−２８６７）はオンコフ
エタル抗原を異種発生宿主に導入する腫瘍免疫の誘発を
記述している。ヒトのメ２ノーマ抗原Ｐ９７のＰ９７′
エピトープに対するマウス抗体上のイディオタイプ決定
因子を認識するポリクローナル抗イデイオタイプ抗体が
製造された。このポリクローナル抗血渭はマウスにおい
てＣＨＩとＰ９７に対するＡｈ、　　応答との双方を誘
発しうる。Ｆｏｒｓｔｒｏｍ等Ｃｌ９８３．Ｎａｔｕｒ
ｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３０３：６２７　６２９）は抗イデ
イオタイプ抗体を使用して同時発生の化学的に誘発され
た肉腫に対するｔ’ＭＩをマウスに誘発させた。この研
究において、抗イデイオタイプ抗体は＠瘍に対する過度
免疫によって生じる自動抗体であり、腫瘍抗原は決定さ
れた分子でを工なかった。Ｆｌｏｏｄ等の研究（１９８
０、Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、７７：２２
０９　２２１３）およびＢｉｎｔ等の研究（１９８２、
Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｔｇｒ２９：４１７−４２３）は同
時発生系における腫瘍免疫のイディオタイプ操作を発表
したが、抗原分子は未確定であつた。ＦＪｏｏｄ等はネ
ヅミ科動物の抗イディオタイプＴリンパ細胞が巌維肉腫
特異Ｔリンパ細胞に対する自動免疫反応において沈殿し
、腫瘍に対する個々の免疫応答に悪影響を及ぼしうる証
拠を示した。Ｂｉ％１１等は抗イデイオタイプ抗体を使
用してラットの肉Ｍ胞に対して特異的に細胞毒のあるＴ
ＩＪンパ測胞の増殖を生体内で誘発させた。
追加の研究は腫瘍成長に及ぼす抗イデイオタイプ抗体の
影響に注目した。Ｔｉ１ｋｉｎ等（１９８１、Ｐｒｏｅ
、Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、７８：１８０９　１８
１２）は未確認肉腫に敏感なリンパ結節細胞によるマウ
スの免疫が腫瘍の排除と生育の阻止ケもたらすことを示
した。Ｋａ％％ａｄｙ等（１９８５，／Ｊ’ｊｐ、Ａ／
ｇｄ、１６１：１４３２−１４９９）はＳＶ４０変態細
胞で誘発させたマウスの腫瘍形成の、ＳＶ４０抗涼に関
連のあるポリクローナル抗イデイオタイプ抗体を注射し
た後の、抑制を記述した。
Ｋｏｐｒｔｗｒａｋｉ等（１９８４、Ｐｒｏｅ＋Ｎａｔ
１．Ａｃａｄ。
Ｓｅｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ、Ｂ１：２１６−２１９）ｔエヒト
の胃腸系の癌に対するモノクローナル抗体を投与した後
に癌が軽減した患者における抗イデイオタイプ抗体の存
在を示した。
４、抑制体細胞および抑制体因子 抑制体細胞／因子のカスケードが腫瘍およびモデル系に
おいて認識された（　Ｎｇｐｏｍ、　Ｇ、　Ｔ、等、　
１９８３、Ｅｚｐｍｒｉｇｓｔａ　３９：２３５：Ａｓ
ｈａｒｚｏｓ、Ｇ、Ｌ、等・１９８４　、１ｍｔｎｓｓ
ｏｌｏｇｙ　５３　：　４９１　：Ｄｏｒｆ、Ｍ、Ｅ。
＆　　Ｂｇｎａｃａｒｒａｆ＊Ｂ−＋　１９８４　、Ａ
ｔ５ｓ、Ｒｇｔｔ、ｌｍｍ５ｎｏ１．２　　＊１２７）
。抑制体細胞は腫瘍免疫を調節する上で重要な役割を演
じる（　Ｇｒ＃ａｎｓ、Ａｆ、Ｉ　、等、１９７７、Ｐ
ｒｏｃ、Ｎａｔｌ。
Ａｅａｄ　、Ｓｅｔ　、Ｕ、Ｓ　、Ａ、　７４　：　５
ＨＢ　”、Ｈａ　ｌ　ｌ　ｓｔｒｏｆＩＩｇ、ＫＪ。
等、１９７８　、　Ｊ、Ｅｚｐ、Ｍａｄ、１４Ｂ：　７
９９　：Ｎａｐｏｍ。
Ｇ、Ｔ、等、１９８３　、　Ｅｚｐｍｒｉｇｓｔｉａ　
　３９　：　２３５　；Ｎ６，１五、Ｒｊ、、１９８２
　、Ｊ、Ｅｚｐ、Ｍａｄ、　　　１５５　：１０６３　
；　Ｙａｍａｕｃｈｉ、に、等、ｌ　９７９　、Ｊ、ｌ
ｍｍ５ｎｏｌ。
１２３：１６５３）。これらの細胞は抑制体因子（ＳＦ
）を生産しくＮａ１ａｏｎ、に＋等、１９７５　、　Ｉ
ｎｔ、Ｊ、Ｃａ５ｃａｒ１６　：　５３９　；　Ｇｒｏ
ａｎｓ、Ｍ、１．等、１９７７、／。
ｌｍｍ５ｎｏ１．１１９　：　７５９　：Ｋｏｐｐｉ、
Ｔ、Ａ、＆　Ｈａ１１イｄａｙ。
１Ｆ’、Ｊ、、　１９８３　ｊＣｇ１１　　Ｉ濯ｍ５ａ
ｏＬ７６：２９）、この抑制体因子（ＳＦ）は細胞医療
免疫（ＣＡｉｌ）の試験管内発現の抑制（ブロッキング
）を介して腫瘍をもつ動物およびヒト患者からの血清中
に検出することができる＜Ｈａｌｔａｔｒ−０％、に、
Ｅ、等、１９７８　、Ｊ、Ｅｚｐ、Ｍｇｄ、Ｌ４８ニア
９９：Ｈａ１１ａｔｒｏｎ、Ｉ、等、　１９６９　、Ｐ
ｒｏｏ、Ｎａｔｌ、Ａｅａｄ。
５　ｃ　ｓ　−Ｕ−Ｓ−Ａ−６２：　３６２　；　Ｂａ
　ｌ　ｄｗｓ％＋Ｒ−１”　−＋　１９７３　＋Ａｄｆ
、（−’６％ｅ　８　ｒ　ノイａｓ、　　１　８　　：
　　１　　：１ｉａＨｉｄａｙ、／ｉ’、Ｊ、　等、１
９７４　、　Ｃａ１１．Ｉｔｎｍｓｓｏｌ、　１０　：
　４６７　’、ＳｔｇａｌｓＧ０等、１９７５　、　Ｊ
、Ｎａｔｌ　、Ｃａｎｃａｒ　１％ｓ１．５４　ａ９５
９　：Ｍｇ１ｌａ＊ｒｏｔｎ、に、Ｅ、等、１９７７　
、　Ｂｉｏｃｈｉｍ。
Ｈｉｏｐｈｙａ、Ａｅｔａ　４７３　：　１２１　：　
Ｈａ１１ｉｄａｙｒｆｌ’Ｊ。
等、１９８０　、Ｊ、Ｎａｔｌ、Ｃａｓｅｇｒ　ｌ５ａ
ｔ、６５：３２７：Ｋｏｐｐｉ、Ｔ、Ａ、＆　１１ａ１
１ｉｄａｙ、Ｗ、Ｊ、、Ｉ　９８１　、　　Ｊ−Ｎａｔ
ｌ、Ｃａｎｃａｒ　Ｉｎ５ｔ、６６　ａ　１０８９　、
Ｋｓｃｈｒｏｏ。
Ｖ、に、等、１９８３．（、’ａｓｅｇｒ／？ａａ、４
３．１３２５＋Ｋｏｐｐｉ＋Ｔ、Ａ、等、１９８１　＊
　／　、Ｎａｔｌ　、Ｃａｎｃｇｒ　１ｆＬｓｔ。
６６：１０９７）。若干のＳＦは腫瘍特異性をもち、そ
れぞれの腫瘍または肺癌関連抗原を用いる吸収によって
血清から除くことができるが、異なった抗原Ｚ発現する
腫瘍を用いている吸収によっては血清から除くことがで
きない（Ｋｕｃｈｒｏｏ、Ｖ、に、等、１９８３　、　
Ｃａｎｅｇｒ　Ｒａｓ、４３：１３２５　；　Ｈａｌｄ
ｗｉ＊＊Ｒ，Ｗ−＋　１９７３　、　Ａｄｖ、Ｃａｎｃ
ｇｒＲａａ、１８　：　１　；　Ｈｍ１１ａｔｒｏｒｎ
、に、Ｅｏ等、１９７７゜Ｅｉｏｅｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈ
ｙａ、Ａｅｇａ　　４７３　＃　Ｉ　２１　：Ｋｏｐｐ
ｔ−Ｒａｙｓｔｓｌｄｓ、Ｔ、Ａ、＆　１ＩａＥ（ｉｄ
ａｙ＊１１’、Ｊ　、＊　１９８４　＊ｌｍｍ１ｓｎｏ
１．Ｌｍｔｔ、８　：　２１９　）６　　これは、腫瘍
抗原決定因子に対する補形であるＳＦ分子上に結合性の
場もしくはイデイオトープが存在することを示唆してい
る（Ｎａｐｅｓ。
Ｇ、Ｔ、等、１９Ｂ３．Ｅｚｐａｒｉａｓｔｔａ　３９
：２３５　：Ｈａ１１ｓｔｒｏｍ、に、Ｅ、等、Ｉ　９
７７　、　Ｂｉｏｅｈｉｍ、Ｂｉｏｐんｙｓ。
ＡｅＬａ　　４７３：１２１）。腫瘍細胞で過度に免疫
されたマウスからの抗体に循環性ＳＦが結合することが
報告されたが、これは抗体がＳＦ上のイディオタイプ決
定因子に対して補形でめることを示唆している（　ＩＩ
ａＨａｔｒｏｒｎ、Ｋ。
Ｅｏ等、１９７７　、　Ｂｉｏｅｈｉｔｎ、Ｂｔｏｐｈ
ｙｔｒ、Ａｃｃａ　４７３　：１２１　；　Ｎａｐｅｓ
、Ｇ、Ｔ、等、１９７７　、　Ｐｒｏｅ、Ｎａｔｌ　。
Ａｅａｄ、Ｓｅｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ、７４　：　４６。２５
）。これらの研究において、抗体と抑制体細胞の応答は
ポリクローナルであると推定される。腫瘍の除去もしく
は退化の後にえられるある橿の免疫血清は生体内で棚足
される腫傷担持血清の抗体ｔＰ！ｊ異性抑制（プロツキ
フグ）活性を取り消′″ｆ（アンプロックする）。（ｌ
１ａｌ　Ｌ　１ｄａｙＪＰ’、Ｊ　１等、１９７４．Ｃ
’ａ１１。
１ｍｍ５ｓｏ１．１　０　　：　　４６７　　：　Ｈａ
１１ｓｔｒｏｍｅｌ　　＆　　Ｈａ１１ａｔｒ−ｏｍ、
に、Ｅ、、　１９７０　、１ｓｔ、Ｊ、Ｃａ５ｅａｒ　
５　：１９５　）。
この「アンプロッキング」効果は抗イデイオタイプ抗体
によって伝達されることが理論づけられた（　１ＩａＨ
ｓｔｒｏｔｎ＊に、Ｅ、等、１９７７　、Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ、ＩＪｉｏｐｈｙｍ、Ａｅｔａ４７３：１２１）。「
アンプロッキング」抗体は一次の又は移植したボリオマ
・ウィルス酵発雁瘍ンもつラットにおいて治療効果をも
つことが報告された（　Ｂａｎｇαｔ、Ｓ、Ｃ。
＆　Ｓｊｏｇｒｇｓ、Ｉｌ、Ｏ，＋　１９７２　、　Ｉ
ｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｅｇｒ　９：４９０　；　Ｓｊｏｇｒ
ｍｓ、１１．Ｕ、＆　Ｂａ５ａａｉ、Ｓ、Ｃ，、Ｌ　９
７１　。
ｉｎ　　Ｐｒｏｇｒａｍｓ　　ｉｎ　　Ｉｍｔｎｓｓｏ
ｌｏｇｙ＊Ａｔｎｏａ＋Ｂ、、ａｄ。
ＡｅｔＬｄｇｔｎイｃ　　Ｐｒａ＃ｓ、Ｎｅｗ　　Ｙｏ
ｒｋａｐ　９２１　　、Ｂａ５ａａｉ。
Ｓ、Ｃ，＆　Ｓｊｏｇｒｇｓ＊ｔ１．Ｕ、＊Ｌ　９７１
　、　Ｎａｔｕｒｅ（ＮｅｗＢｆｏｊ、）２３３ニア６
）。
〔発明が解決しようとする課題とその解決手段〕不発明
は腫瘍の免疫治療および免疫予防の九めに抗イデイオタ
イプ抗体、またはその断片を利用する方法に関する。
本発明は治療上の利点のために免疫系のイディオタイプ
・ネットワークを操作する方法に関する。特定の態様は
腫瘍に対する免疫のために、　：ｔｉ！合する免疫治療
に使用すべきリンパ細胞の活性化のために、及び腫瘍抗
原に対するイデイオトープを発現する抑制体Ｔ細胞もし
くは抑制体因子の介在する免疫抑制の阻止のために、抗
イデイオタイプ抗体を使用することを包含する。特定の
態様において、（５）腫瘍抗原←たとえばオンコフエタ
ルもしくを工分化抗りを決定する抗体のイディオタイプ
に対して提起された、且１ｂ）腫瘍特異性細胞を介する
免疫の誘発のような腫瘍特異性（櫨々の分析、たとえば
白血球癒着阻止分析または遅延型過多感度分析、によっ
て測定されるような特異性）を示すモノクローナル抗イ
デイオタイプ抗体、ま友はその断片、抗腫瘍抗体結合の
阻止等が同一性確認（ｉｄｇ％目ｆν）される。免疫能
力を示すモノクローナル抗イデイオタイプ抗体またはそ
の断片を患者の生体内で使用して腫瘍抗原をもつ腫瘍細
胞に対する免疫応答を誘発させる。抗イデイオタイプ抗
体またはその断片はまた、抗腫瘍抗体の投与によってｈ
ａ抗原に対する受動的免疫を受けている患者における抗
−抗体誘発ン検査するために使用することもできる。
別の態様において、抗イデイオトープを示す抗腫瘍抗体
または免疫細胞もしくは因子の投与によって生体内で抗
イデイオタイプ抗体を誘発させることは治療的に価値が
ありうる。
本発明はまた決定された抗原に対するイディオタイプを
ｇ識する、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体分子、
抗体断片、または化学的に変性させ次抗体または抗体断
片、に関する。本発明の分子は５業技術において知られ
ている任意の技術によって製造することができ、これら
の技術にはに、ｈｌ、デおよびＭｉｌｓｔｇｉｎＫよっ
てはじめに記述されたハイブリドーマ技術（１９７５、
Ｎａｔｓｒａ　　２５６　：４９５−４９７）、ヒトＢ
細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｔｒｇｂｏｒ　等、　１９
８３　、ｌｍｍ５＊ｏｌ　ｏｇｙ　　Ｔｏｄａｙ　　４
　ａ７２）、およびＨＢＶ変態技術（Ｃｏｌｔ等、１９
８５゜ＡｉｏｎｏｅｌｏｎａＬ　　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　
　ａｓｄ　　Ｃａｎｅｇｒ　　Ｔｈａｒａｐｙ＊Ａｌａ
ｎ　Ｒ，Ｌイａａ、Ｉｎａ、ｒｐｐ　７７−９６　）が
包含される。
本発明を実例をあげて説明すれば、ネズミ科動物の腺維
肉腫に関する抗イデイオタイプ抗体の注射によるマウス
の血清療法は移植肉腫の発現を遅らせ退化を生ぜしめる
。腺維肉腫に対するイデイオトープを発現する、そして
＋ＩＪ　ｍ肉腫に対する遅延型過度敏感性を移動させつ
る、Ｔ細胞巌が確立された。
本発明の別の実例において、ヒトのメラノーマに付随す
るＧＤ、ガングリオシード抗原をＤ！するイディオタイ
プに特異のマウス・モノクローナル抗イデイオタイプ抗
体が記述される。この抗イデイオタイプ抗体はその抗原
に対する抗ＧＤ３抗体の結合を妨げ、抗ＧＤ３抗体の補
形−および抗体−依存の細胞毒性の双方を阻止すること
が実証された。この抗イデイオタイプ抗体を探索子とし
て使用することによつ℃、治療またを工診断の目的のた
めに、仇ＧＤ３抗体を受入れる患者に：Ｆ＋５ケる抗Ｇ
Ｄ３抗体に対するヒトの抗体を検査する分析が開発され
た。
本発明の第３の実例において、ヒトのメラノーマに付随
するＰ９７抗原に対するイディオタイプを認識するマウ
スのモノクローナル抗イデイオタイプ抗体が記述される
。抗Ｐ９７抗体に対するＰ９をの結合を競合的に阻止し
うる、且つＰ９７に対する抗体を生体内で誘発させうる
モノクローナル抗イデイオタイプ抗体かえられた。
別の実例において、我々はヒトの癌の炭水化物抗原を決
定するモノクローナル抗体Ｌ６上のイディオタイプを認
識するネズミ科動物モノクローナル抗イディオタイプ抗
体を記述する。抗体Ｌ６によって決定される癌抗原と生
体内で反応性のある抗体を包含しうる抗イデイオタイプ
抗体かえられた。
本発明の抗体分子、該分子のイディオタイプを含む該抗
体分子の断片、またはこれらの分子の化学変性物は、抗
腫瘍抗体：競合分析による腫瘍抗原；ならびに免疫予防
および免疫治療の用途における細胞を介する腫瘍免疫の
誘発；の存在を分析するために使用することができる。
定義 明４−１１ＴＩＣは下記の略号が使用されているが、そ
れらの意味は下記に示すと８９でるる。
、４６１−抗体１；抗イデイオタイプ抗体カスケードの
始めの抗体 Ａｂ２−抗体２：、４ｂ１のイディオタイプに対する抗
イデイオタイプ抗体 Ａｂ３−抗体３：Ａｂ２のイディオタイプに対する抗−
抗イデイオタイプ抗体 眉兄で一抗体依存性細胞の細胞毒性 抗１ｄ−抗イデイオタイプ抗体 ＢＴＣＣ−膀胱転移細胞癌 ＣＤＣ−補形依存性細胞毒性 ＣＭＩ　−細胞を介する免疫 ＤＴＨ−遅延型過度敏感性 ＦＡ（、”Ｓ−螢光活性イ閃胞分類体 ｐｃｓ　−胎児子牛血清 ＦＩＴＣ−フルオレセイン・インチオシアネートＨＲＰ
−ホースラデイツシュｅパーオキシダーゼＩｔｔ＝イテ
イオトープ １、−免疫グロブリン ｉ、ｐ、−腹膜内 ｉ、ｖ、−静脈内 ｈＤα虐キロ・ダルトン ＫＬＥＩ−キイホール−リンペット−ヘモシアニンＬＡ
Ｉ−日皿５に癒着阻止 −ｂ＃＝モノクローナル抗体 ＭＣＡ幻３−メチルコラ／スレン ｏｐｎ−ｏ−フェニレン−ジアミン Ｐａｒ＝親の（ｐ９ｎｖａの）　（’　３　ＩＩ　／　
ＩＩ　ｍＮマウス・メラノーマ線に−１７３５−Ｍ２ ＰＢＳ−リン酸塩緩衝塩水 ｐｃ−腹膜細胞 ＳＣ−肺臓細胞 〔本発明の態様〕 本発明は腫瘍の免疫治療および免疫予防のために抗イデ
イオタイプ抗体を利用する方法に関する。本発明は治療
上の利点のために免疫系のイディオタイプ・ネットワー
クを操作する方法に関する。抗イデイオタイプ抗体（Ａ
２）による免疫は抗−抗イデイオタイプ免疫グロブリ／
の生成を誘発させることができ、それらの若干は抗イデ
イオタイプを誘導するのに使用した抗体（，４６１）と
同じ抗原特異性をもつ。これは免疫系の抗原特異性認識
を発生させ増幅する機構を提供することによって免疫応
答の操作の強力な模範を創生する。腫瘍に対する免疫応
答は腫瘍抗原のイディオタイプ特異性認識を含むように
思われる。本発明は治療上の利点を達成させることに向
けてこの認識を操作するための戦術に関する。本発明の
特定の態様は適合する免疫治療に使用するリンパ細胞の
活性化のためＫ、および腫瘍抗原に対するイデイオトー
ブを発現する抑制体ＴＭｄ胞もしくは抑制体因子によっ
て伝達される免疫抑制の阻止のために、腫瘍に対する免
疫用の抗イデイオタイプ抗体を使用することを包含する
。この抗イデイオタイプ抗体またはその断片は、抗腫瘍
抗体の投与によって腫瘍抗原に対する受動的免疫を受け
ている患者における抗−抗体を検査するために使用する
こともできる。
特定の態様において、抗腫瘍イディオトープを示す抗腫
瘍抗体または免疫細胞もしくは因子は、治療的価値があ
りうる。
本発明の別の態様において、自己分化抗原（たとえばオ
ンコフエタルもしくは分化抗原）を決定する抗体のイデ
ィオタイプに対して提起されるモノクローナル抗イデイ
オタイプ抗体またはその断片は、該オンコフエタル抗原
をもつ腫Ｑａｌ胞に対して特異の免疫応答を誘発させる
ために生体内忙投与するＣとができる。腫瘍をもつ患者
は本発明のモノクローナル抗イデイオタイプ抗体で免疫
治療的に処置することができ、また予め処置したと確認
される磨者は免疫予防的に処置することができる。
本発明はまた、腫瘍に対して特異の決定された抗原に対
するイディオタイプを認識する、抗イディオタイプｍＡ
ｂ分子、または該抗イディオタイプｍＡｂ分子の断片、
もしくはその変性物に関する。このような腫瘍抗原とし
て腺維肉腫の抗原、自己分化抗原Ｃｆｃとえばオンコフ
エタルもしくは分化抗原）、悪性細胞によって発現され
る抗原があり、例としてコロンの発癌性抗１ｇ、（（、
’ＥＡ）、α−フェト蛋白、転移細胞膀胱癌の１７５Ｋ
Ｉ）ａネズミ科動物抗原、メラノーマ付随抗原Ｐ９７ま
たはＧＤ３のようなオンコフエタル抗原；ならびＫ　Ｌ
　ｔ　ａおよびＬ２゜のようなヒト肺癌の分化抗原があ
げられるが、これらＫついては以下に詳細に述べる。
本発明のｍＡ＆分子には、決定された腫瘍抗原に対して
特異性をもつ別の抗体分子のイディオタイプに結合する
抗原結合用の場を含む全モノクローナル抗体分子および
その断片またはこれらの分子の化学的変性物が包含され
る。
ｍＡｂ分子のイディオタイプを含むモノクローナル抗体
断片は櫨々の技術によって発生させることができる。こ
れらの技術として仄のものがあげられるが、ごれらに限
定はされない。ペプシンを４つ抗体分子を処理すること
によって発生させることのできるＦ（ａｂ′）２断片；
Ｆ（ａｂ′）２断片のジサルファイド架橋を還元するこ
とによって発生させることのできるＦａｂ’；ｓよび抗
体分子をパパイ／および還元剤で処理してジサルファイ
ド架橋を還元することによって発生させることのできる
２１”ａｂまｆｃはＦａｂ０意図する用途に応じ℃、本
発明の分子は５業技術において知られているカップリン
グ技術を使用し℃種々の化合物のうちの任意のものの付
属物によって化学的に変性することができる。これには
酵素的手段、酸化置換、キレ−ショア等、免疫分析用の
放射性同位元素の取付けに使用される手段が包含される
が、これらに限定はされない。
本発明の分子へのある化合物の化学的結合もしくはカッ
プリングは、イディオタイプ結合において沈殿を生成さ
せない場、たとえば該分子のＦｅ領域に向けることがで
きる。
これはカップリング反応を行なう前に該分子の結合性の
場を保護することによって達成されつる。たとえば、眼
分子はカップリング反応の前に、イディオタイプに結合
させることができる。カップリングの完了後に、錯体な
分裂させて、該分子の結合性の場に最小の効果を及ぼす
変性分子を発生させることができる。
本発明の抗体分子、または抗体分子の断片は、特異性の
細胞伝達腫瘍免疫を誘発させ、変性し、又は規制するた
めの免疫源として使用することができる。これは同時発
生腫瘍に対する免疫におけるこれらの分子の使用を包含
するが、これに限定されない。
本発明の方法は記述の目的のためにのみ次の諸段階に分
けることができる：（α）　腫瘍の決定抗原に結合する
イディオタイプに対する抗イデイオタイプｍＡ６（ｇ）
（自動抗イデイオタイプでありうる）の製造；（リ　た
とえば、特異のヘルパーＴ細胞の、腫瘍抗原に対する抗
体の結合の阻止の、腫瘍抗原に対する抗体の細胞毒性の
阻止等の、特異性抑制体Ｔ細胞または抑制体因子の誘発
による免疫能力の実証によっての、抗イディオタイプｒ
ｐ＋Ａｂ分子またはその誘導体断片の腫瘍イディオタイ
プ特異性の評価と実証；および（Ｃ１免疫予防、免疫治
療、および免疫診断の療法の作成。
本発明の特定の態様において記述されるモデル系におい
て、腺維肉腫抗１ｉＫ対する自動抗イデイオタイプ抗体
によるマウスの治療は、確立された肉腫の生育を特異的
に減少させることが示された。本発明の別の態様におい
て、ヒトのメラノーマのＧＤ３ガ／グリオシード抗原に
対するイディオタイプを認識するネズミ科動物モノクロ
ーナル抗イディオタイプ抗体が記述される。この抗体は
抗原を認識するイディオタイプを含む抗体の結合性と細
胞毒性をブロックすることができた。本発明の第３の態
様にＳいて、ヒトのメラノーマに付随するＰ９７に対す
る不ズミ科動物モノクローナル抗イディオタイプ抗体が
記述される。この抗体は抗Ｐ９７抗体へのＰ９７の結合
を競合的に阻止することができ、Ｐ９７に対する抗体を
生体内で誘発させることができる。本発明の更に別の態
様において、我々はヒトの肺癌の炭水化物に原を決定す
るモノクローナル抗体Ｌ６上のイディオタイプを認識す
るネズミ科動物モノクローナル抗イディオタイプ抗体の
発生と特徴づけを記述する。これら抗体の若干は抗体Ｌ
６によって決定される肺癌抗原に対する抗体を生体内で
誘発させうろことが示された。然し記述する方法はメラ
ノーマまたは腺維肉腫あるいは癌の抗原に限定されず、
任意の特異性腫瘍抗原に対する抗イデイオタイプｔｎＡ
ｂの生産と使用に適用することができる。
腫瘍に対する免疫応答を誘発させるための抗イデイオタ
イプ抗体の使用は、２つの別々の組織としてゐることが
できる。第１に、このような抗体は予め存在する抗腫瘍
レパートリ−を選択マ友は増幅するために、すなわち、
イディオタイプ選択を介して、腫瘍抗原に特異性のＴお
よび／またはＢ細胞を補充するために、使用することが
できる。第２に、抗イデイオタイプ抗体は抗−抗イデイ
オタイプでありその一部が通常の腫瘍抗原に対向するも
のである一次免疫応答を誘発させる友めの抗原の「内部
像」として使用することができる。後者の場合には、免
疫特異性は抗原に対してではなく抗イデイオトープに対
してである。
抗イデイオタイプ抗体を使用して免疫を誘発させること
によって、通常は抑制されている免疫応答の再規制の結
果として或いは応答の始めての（ｄａ　ｎｏｖｏ　）誘
発による結果として、自然に生ずる抗腫瘍応答に参加す
るものとは異なるＴおよびＢ細胞をえらぶことかできる
。治療上特に重要なのを１他の場合にはこのような反応
性をもつことのできない宿主に有効な抗腫瘍反応性を誘
発させる能力である。
〔実施側〕
ａ瘍抗原のイディオタイプ認識の治療上の操作を行なう
ために、成長しつつるる同時発生腫瘍に対する自然に生
ずるイディオタイプ応答の性質を考察しなげればならな
い。
それ故、抗原による刺激に対する応答のイディオタイプ
のレパートリ−の性質について述べる。
抗原によって誘発させることのできる４つの可能なイデ
ィオタイプおよび抗イデイオタイプの応答を第１図に示
す。
第１図のＩＡは誘発された補形体の遂次的進行を示す。
この種のイディオタイプのカスケードにおいて、抗原に
よる免疫は異なったイディオタイプ類をはこぶ免疫グロ
ブリン集団（こｎらの合計はイディオタイプもしくはＡ
ｂｌの応答として知られている）に導く。次いでＡｂｌ
の存在は抗イデイオタイプ応答を誘発させる。この応答
はＡｂ２として知られる不均一な抗体集団によって特徴
つげられ、Ａｂｌ果団における種々のイデイオトープに
対して特異性をもつ。
抗原によって誘発される応答の方向性は第１図中に矢印
で示してろる。ＡｂｌによるＡｂ２の誘引は抗原には無
関係である（Ｕｒｂａｉｎ、Ｊ−等、１９８２　、　Ａ
ｓｘ、Ｉｒｎｍ５ｓｏｌ　。
１３３Ｄ：１７９−１Ｂ９：Ｒｏｄｋａｙ、Ｌ、Ｓ、、
１９７４゜Ｊ、Ｅｚｐ、Ａｆａｄ、　ｌ　３９　：　７
１２　：Ｋａｌｓｏｚ、Ｇ、＆　Ｃａｒｘｙ。
Ｊ　、＋　１９７９　ｒ　）Ｖａ　ｔ　ｗｒｓ　　２７
９　：　３３３　）　ｏ　ｉＪ瘍免疫におけるこのモデ
ル（第１図のＩＡ）の裏付けが存在する（Ｌａｇ、Ｖ、
に、等、１９８６　、　Ｂｉｏｅｈａｒｎ、Ｂｉｏｐｈ
ｙｘ。
Ａｃｔａ　　８６５：１２７−１３９；以下に述べる実
例を参照）。
イディオタイプのカスケードをｌ１た第１図のＩＢに示
す径路に従ってＡｂ２の発生に導く。腫瘍抗原の認識は
抗原特異性”１１細胞を誘発させる。Ｔ１１細胞は、恐
らくその抗原受容体分子上に、特定のイテイオトーブ乞
もつ。これらのＴｍｔＪ胞は次いでＡｂ２集団の形体の
抗イディオタイプ免疫グロブリ／応答の発生を刺激する
。
交互の抗体とＴ細胞要素を介してイディオタイプのカス
ケードが進行するモデルの意味は何か？。ＭＣＡ誘発の
マウスの肉腫Ｉたは癌に対する応答に付随するイデイオ
トープの分析（Ｌｅｅ、Ｖ、に、等、１９８６　、　Ｂ
ｉｏｅｈｔｍ、Ｂｉｏｐｈｙａ。
Ａｃｔａ　８６５：１２７−１３９：　後記の実施例Ｂ
−１〜Ｂ−７、Ｃ−１〜ｃ−２、およびＤ−１〜Ｄ−３
参照）、モノクローナルＡｂ２による免疫ｋ”ＬＡｂｌ
のような特異性をもつＡｂ３を発生させなかったが、抗
＠務Ｔ１１は容易に誘発された。この観察は、自然に生
じる抗腫筋応答におけるイディオタイプ隣性Ｔ）ｌの発
見と組合せて、Ｉｄ＋Ｔ　、ｌ胞と抗イディオタイプＢ
＃！Ａ胞（およびＡ６２）との間に直接の規制相互作用
がありうるモデルを支持している（／ＶｇＪｏｓ＋Ａ、
＆　　Ｎｇｐｏｔｎ、Ｇ、Ｔ、＋　１９８６　　、ｊｓ
　　Ｐａｒａｄｏｘｅｓ　　ｉｓＩｍｍｓｎｏｌｏｇｙ
＊Ｈｏｆｆｍａｎ＊Ｇ−等著、ＣＲＣＰｒｅｓｅｔＢｏ
ｅａ　　ＲａｔｏｎＪｌｏｒｉｄａ＊ｐｐ、Ｉ７７　１
８５：Ｊ＜ｓｍｕｔＡ。
Ｇ、等、１９８４　、Ｅｍｒ、ＪＪｍｍｓｎｏｌ、１４
　：　５０３　：Ｔｈｏｍａｓ、ｊＦ、Ｒ，等、１９８
３，１．ｌｍｍ５ｓｃＪ、１３０：２０７９）。生体内
において、Ｉｄ＋Ｔ　、Ｉ１１胞は抗イデイオタイプの
生産のためのＩｖＩＩ激を与えることができる。
ある場合におけるＩｄ十Ｂ細胞の認識の欠如は免疫グロ
ブリン分子上に抗腫瘍イデイオトーブ？発生させる遺伝
的能力の欠陥を及腰しているかも知れず、めるいを工ま
た腫瘍をもつ宿主の規制状態がＩｄ＋Ａｂｌを有効に抑
制しているのかも知れない。以下に述べるよ５に（実施
例Ａ−２の第１ＪＪｉ＃照）、Ｃの兄掛けの欠陥はＩｄ
＋抗体応答を通常は発展させない宿主においてｆｊ３僚
的に計−１の裏をかかれたことにな９うる。
腫瘍排除に導くＴ１１応答をもたらすイディオタイプ相
互作用に加えて、種！ｑ抗原（または抗原−抗体結合体
）への露出は抗原特異性抑制体Ｔ細胞（Ｔｓ）の発生に
導きうる（第１図のｌＣ参照）。いくつかの腫瘍系にお
いて、抑制体Ｔ＃Ｉ胞は誘発剤細胞として腫瘍抗原特異
性抑制体の発生のきっかけとなってこれを増幅させる機
能を果すことが示された（Ｎｔｐｏｍ、Ｇ、Ｔ、等、Ｉ
　９８３　、　Ｅｚｐｅｒｉｇｎｔ　１ａ３９：２３５
−２４２）。第１図のＩＣに示すモデルのように、Ｉｄ
＋Ｔｓが抗原刺激によって直接に誘発されるならば、こ
れらの細胞は第１図のｌＢのＴＨと同様に抗イデイオタ
イプＡｂ２の発生のための刺激として役立ち５る。
イディオタイプＴｓが抗原による刺激につづいて発生す
るならば、別の径路を考えることもできる。第１図のＩ
Ｄに示すように、Ｉｄ＋Ｔｓは抗イデイオタイプ刺激の
結果として生じうる。ハプテンでろるアゾベンゼンアル
ンネートに対するＩｇＨ制限Ｔ細胞の応答についての最
近の分析において、免疫グロブリ／・イデイオトープの
性質はＴｓイデイオトープの発達を決定することが見出
された（ＨａｙｇＥａｓａｅＫｌ等、１９８６．／Ｊｇ
ｐＪｇｄ、１６４：３６　４９：１１ａｙｇＥａｓｓ＋
に、等、１９８６　、　Ｉｍｍｘｎｏｌ　、Ｔｏｄａｙ
ｒ７：１７９−１８３）。Ｉ、Ｈ同種遺伝子マウス中に
発達しつつあるＴｄＪ胞は宿主のイディオタイプのレパ
ートリ−を獲得し、モしてμ免疫グロブリン鎖に対する
抗体くよる新生児動物の治療は機能的Ｔ細胞イディオタ
イプの通常のレパートリ−の確立を撤廃させた。すなわ
ち、免疫グロブリン区画は補形Ｔ細胞認識要素の発達を
決定しうるものである。
以下に述べる実施例に示すように、第１図のＩＤＶｃ示
すイディオタイプの径路は腫瘍抗原α域の関係において
も実在するように思われる。Ａｆ　ＣＡで誘発された肉
腫または膀胱鴫のいづれかをもつマウスについての我々
の研究において、単一の主要なｒ４胞イデイオトープは
Ｔｓと可溶性因子の双方によって伝達される抑制体応答
に普及していることが見出された（　Ｋｓｃｈｒｏｏ、
Ｖ、に、等、１９８７、Ｃｅ１１１＆ｌａｒＩｍｍｓｎ
ｏ１．１０４：１。２５−１１４：および後記の実施例
Ｂ−１−Ｂ−７参照）。すなわち、イディオタイプの不
均一混合物の代りに、ある棟の共有された「一般的な」
イデイオトーブが優勢である。これは、モノクローナル
ｆたはポリクローナルのいづれかの抗イデイオタイプ抗
体から作った親和吸収体を使用して抑制体因子を除去す
ることによって行なわれた。我々の発見は任意の特定の
腫瘍抗体に対する抑制体応答における見掛けのイディオ
タイプ特異性のｔ’ｈとんとか共有されていることを示
した。
モデル系において、「一般的なＪイディオトーブの存在
はネットワークに重要な規制イディオトーブに寄与した
（　Ｂｏｓａ、Ｃ，！！Ｊ、　　１９８２　、　Ｊ、Ｅ
ｚｐ、、＜ｆｅｄ、　　１５６　：９８６）。抗腫瘍免
疫におけるこのような推定の規制イデイオトープの存在
はイディオタイプＴ８の発生にＳける遺伝的選択が、Ｔ
ｓ　レパートリ−の発生にＳげる免疫グロブリンの選択
のＥＶかのいづれかを反映しているかも知れない。後者
がそうであるとすると、Ａｂ２がＴｓの性質に影響を与
えるＩＤ（第１図）Ｋ示す径路を含むことができる。
抗イデイオタイプ抗体を使用して治療上の利点のために
腫瘍抗原に対する免疫応答を操作する実質的に２つの試
みがある。１つはＴおよびＢ細胞のレパートリ−の中に
予め存在する抗腫瘍イティオトーブを選択し４幅するこ
とにもとづくものであり、他の１つは腫瘍抗原の内部ｔ
Ｓとして働く抗イデイオタイプを使用する始めての（ｄ
ａ　ｔｌｏｖｏ　）応答の誘出を公安とするものである
。
予め存在する抗腫瘍イデイオトープ表示の変化にもとづ
く仇イディオタイプ抗体の治療的生産において、治療の
努力は第１図に示す径路の反転にもとづき、この場合Ａ
ｂ２区画をイディオタイプ相互作用の開始剤として使用
する。
Ａｂ２が腫瘍抗原特異性免疫を誘発させ５る３つの径路
が第２図に示しである。第２図の２ＡｄＡｂ２による免
疫が抗原特異性ＴＨの発達に導きうろことを示す。この
結果は感染剤に対して達成され、疾患からの保護を与え
ることが見出された（　５ａｃｋｓ、Ｄ、等、１９８２
、Ｊ　、Ｅｚｐ　、Ｍａｄ。
１５５：１１０８；５Ａａｒｐ、、（、等１９Ｂ４，１
．Ｅｚｐ。
、Ｇｆｇｄ、１６０：１１９５　１２。２５：Ｆｏｎｊ
、Ｇ、等、１９８５、／、ｌｍｍ５ｓｏｌ１３４：１２
２５　１２２９）。
同様の発見はいくつかの化学的Ｒよびウィルス的誘発の
腫瘍について行なわれた（Ｋｇｎｎｇｄｙ、Ｒ，（、’
、等、１９８５゜Ｊ、Ｉｋｐ、Ａｂｄ、　１６１　＊　
１４３２　；　Ｂｉｎｊ、１ｆ、等、１９８２゜Ｉｎｔ
、Ｊ、Ｃａｎｅａｒ　１９　：　４１７　４２３　：Ｔ
ｉ１ｋａｎ、Ａ。
Ｆｌ等、　ｌ　　９８　１　　、Ｆｒｅｅ　、Ｎａｔ　
ｌ　−Ａａａｄ−５ｃｉ−Ｕ−５，Ａ。
７８　　：　　１　８０９　　；　Ｆｌｏｏｄ、ｐ、等
、　１９８０．Ｐｒｏｅ。
Ｍａｉｌ、Ａｃａｄ、Ｓｅｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　７７　：
　２２０９　２２１３）。
使用するＡｂ２は抗原誘発イディオタイプ・カスケード
の結果として生じうるか、あるいは抗Ｉｇ、特異性Ｔ細
胞を用いる免疫によって誘発させつる（後記の実施例Ａ
−３参照）。
抗イデイオタイプ抗体はまた「沈黙の」クロンすなわち
遺伝的に適性の個体においてさえ通常は抑ｍすされてい
るクローンを刺激することができる（Ｂｏ％α、Ｃ，Ａ
ｏ等、１９８１゜Ｊ、Ｆ、ｚｐ、１ｓｈｄ、　ｌ　５３
　：　９５１　）。すなわち、抗イデイオタイプ抗体は
他の場合には作られない抗体を発生させるように免疫系
を再プログラムすることができるように思われる（第２
図の２Ｂ参照）。従って、イー・コリのカプセルに包ま
れた多糖類に対する抗イデイオタイプ抗体による免疫は
カプセルに包まれた多糖類に対する抗体を通常は発達さ
せない保護免疫を新生児マウスに生ぜしめる（Ｓｔａｉ
ｎ。
Ｋ、等、１９８４　、Ｊ、Ｅｚｐ、Ｍｇｄ、１６０：１
００１）。
ｉｔｔ”Ｂ　　と７’Ｍ胞のクローンの双方を選択し刺
激するＡｂ２にとって、ＢとＴの細胞受容体の間に共有
イディオトープが存在するに違いないと思われ（Ｒａｊ
ｇｗｚｋｉ、ｆ。
＆　　ＴａｋｇｍｏｒｉＪ、ｅ　　１　９　８　３　　
、Ａｎ％、Ｒｅｖ、Ｉｖｎｍｘｎｏ（。
１　：　５６９　６０７　；Ｅｒｔｌ、Ｈ，ＣＩ　、等
、１９８２゜Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ　、Ａｃａｄ、Ｓｅｉ
、Ｕ、Ｓ、Ａ、　７９　：　７４７９　：Ｎａｊｌａｒ
、Ｐ、１．等＋　１９８２　、　Ｅｘｒ　、Ｊ　、ｌｍ
ｍ５ｎｏ　１　。
１２：１１３）、そし１これはＢ細胞とＴ細胞の双方に
同じ抗原特異性を与える抗原特異性受容体に相当すると
思われる。本発明の好ましい態様において、Ｔ＃ｌ胞免
疫を誘発するＡｂ２を免疫に使用するためにえらぶこと
ができ、所望の応答を伝達するＴ細胞の下位セットが刺
激される。使用するのに適当なＡｂ２をえらぶ１つの技
術は、抗原特異性Ｔ＃Ｉ胞を用いる免疫によって災験的
にＡｂ２を提起することである（ＩＳｆａｎｔａ、Ａｊ
、等、１９８２　、Ｊ、Ｅｚｐ。
Ｊ／ｓｄ、１５５：１１００）。本発明のこの好ましい
慇様において、Ｔ＃ｌ胞受客受容体激イディオタイプと
して使用してＡｂ２集団を選択するＴ細胞に対して特異
的に標的にする。このようなＡｂ２による免疫は次いで
免疫性細胞と受容体イディオトープを共有するＴｌａ胞
クコクローン択し刺激する。
数人の研究者は腫瘍検査または外科的試料から回収した
腫瘍浸透性ｆ　＋）ンバ＃Ｉ胞の成功したクローニング
を報告した。これらのリンパ細胞は、生体内でＩＬ−を
で培養した後に、宿主べの再注入の際の抗腫瘍応答を誘
出させるのに有効でろる（Ｒｏａａｎｂｍｒｇ、Ｓ、Ａ
、等、ｌ　９８６　、５ｃｉｅｎｃｅ２３３：１３１８
）。本発明の好ましい具体例において、このような細胞
はこのような抗腫瘍クローンに付随する特定のイデイオ
トープに対するＡｈ２を提起するための理想的な免疫原
でおるべきである。これらのＡｂ２は次いで、同様の抗
腫瘍特異性をもつＴａＩ胞を有力に選択し増幅する抗イ
デイオタイプとして役立つ。
前述の如く、腫瘍免疫したマウスの抗イデイオタイプ特
異性はＴＨに対する補形であるのみならずＴ８および可
溶性抑制体因子に対しても補形であるように思われる（
　ＨｇＨｍｔｒｏｍｒＫ−Ｈ−等、　１９７７　、Ｂｉ
ｏｐｈｙｘ。
Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ａｃｔａ　Ｒａｖｉｇｓｏｓ　　ｏｓ
　Ｃａｎｃｅｒ　　４７３　：１２１−１４８；後記の
実施例１ｉ−１〜Ｉ）−３参照：１ｉｉｎｔｒＥ、等、
１９８２，１ｓｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｇｒ　　　１９：４１
７−４２３　：　Ｔｔｌｋａｎ、Ａ、Ｆ、等、１９８１
　、　Ｐｒｏｃ、ＮａＮ　。
Ａｔａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、７８　：　１８０９　
；　Ｆｌｏｏｅｉ、Ｐ、等、１９８０　、　Ｐｒｏｅ、
Ｎａｔｔ　、Ａｅａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　　７７
　：２２０９−２２１３）。抗イデイオタイプ抗体かｍ
−誘発の因子上の主要な一船釣イディオトープを認識す
るという証拠はｉｄ　　細胞区画とＡ６２　区画との間
に規則的な関係があることを示唆している（後記の実施
例Ｂ−１〜実施例Ｂ−７参照ｒｉｓｅみｃｏｏ、Ｖ、に
、等、Ｌ　９８７　、　（１’＃Ｊ　１ｗｌａｒＩｔｗ
ｍ＊ｎｏ１．　１０４　：　１。２５−１１４　：Ｎａ
ｌｓａｍ、に、　　＆Ｎａｐｍｍ、Ｇ、Ｔ、、１９８６
　　、ｉｓ　　Ｐａｒａｄｔｓｚａａ　　ｆｓＩｓｓｓ
ｓ＊ｌｏｇｙ、ｆｆｏ／／５ｓｓｓ、Ｇ、等編集、ＣＲ
ＣＰｒｅｓｓ。
Ｂｅａｍ　Ｒａｇｅｓ、Ｆｌｏｒｉｄａ、ｐｐｌ　７７
−１８５）。従って、（第２図の２Ｃに示すような）抗
イデイオタイプ抗体の投与の際のＴ３区画の優先的活性
化を避けるためには、そして治療上有効な結果を達成す
るためには、癌の抗イデイオタイプ治療はイディオタイ
プのネットワークの適切な操作を使用すべきである。適
切な操作は３つの項目の考察を伴なう：すなわち抗イデ
イオタイプとＴ細胞区画との間の遺伝的制限；抗イデイ
オタイプ投与のルート：およびイデイオトープ特異性の
選択である。
（ＩＪ）遺伝的制限 ２種の遺伝的制限、すなわちＭＭＣ制限およびＩＱＨ制
限、が注入抗イデイオタイプによる細胞補充に対しての
潜在的に存在する障害でありうる。ＭＭＣ制限は抗原特
異性応答におけるＴＩＩＪＪ胞活性化の遺伝的制御の要
素を与える。
抗イデイオタイプが認識過程の抗原を擬態する限度まで
、組織混和性の可能な要件を考察することは論理的であ
る。
事実、抗原誘起Ｔ細胞が特異の抗原認識についてのみな
らず、試験管内での細胞結合抗イデイオタイプを認識す
る能力についてもＭＭＣ制限をうける実例が報告された
（Ｅｒｔｌ。
Ｈｏ等、１９８６　、　Ｉ＊ｔ、Ｒｅｖ、　Ｉｔｐｃｔ
＊５ｓｏ１．　１　；　６１−６６）。
抗イデイオトープの生体内投与についてのこれらの発見
の意味するものは何であるのかＴ０抗イディオタイプを
使用して抗ウイルス免疫を発生させ始める研究において
、遺伝的に１ｂｌＪ限を受けない応答が観察された（ｉ
ｄ、）。　これは後に他のＴ細胞区画を活性化するソ直
接の補充によるものだったかも知れない。すなわち、抗
１ｄ表示のＡ（ＨＣ制限要素がたとえ名目上の抗原表示
のそれと異なっているとしても、Ｔ細胞補充は依然とし
て起る。適切な投与ルート（後述）を用いると、抗・イ
ディオタイプ抗体は抗原表示細胞によって免疫系に、そ
れらが正しい制限要素の関係において“見られ”うるよ
うに、導入されうる。事実、名目上の抗原に対して遺伝
的な非応答体である宿主は、非応答を保持する機構に依
存して、抗イデイオタイプによる誘発に想像上は応答し
うる。従ってＭＨＣｒがｊ限は細胞結合抗イデイオタイ
プを使用する場合を除いて重要性は小さいように思われ
る。本発明の好ましい態様において、抗イデイオタイプ
投与はＭＭＣ非混和性の場合でさえ、宿主免疫系に対す
るＡ６２免疫原の発現を最適するように努めるべきであ
る。
本発明の好ましい態様において、ＩｇＨ制限の発現すな
わち免疫グロブリン遺伝子に付随するアロタイプ・マー
カー　（ａｌ　１ｏｔｙｐｉｃ　ｗ＋ａｒｋａｒ）７）
遺伝的一致の必要性が考慮されるべきである。価値ある
区域抗体遺伝子は一定の区域の遺伝子に結合しているの
で、特異性のイディオタイプ決定因子の遺伝的能力はＩ
、アロタイプ・マーカーに結合している。ＩｇＨ制限は
イディオタイプ・カスケードにおける多くの工程を支配
していると思われる（Ｂａｅｋ、Ｂ、Ａ、等、１９７９
　、Ｊ、Ｅｚｐ、Ｍａｄ、１４９　：　１０８４；Ｎａ
ｄｌｇｒ。
Ｐ、１．　　等、　１９８２　　、Ｅｓｒ、Ｊ、Ｉｍｎ
ｈｓ悴ｏ１．　　１２　　：１１３　；　ｌ’ａｓａｍ
ｏｔｏ、　Ｈ，等、１９８３　、　Ｊ　、　Ｅｚｐ、　
Ｍａｄ。
１５Ｂ　：　６３５−６４０　：Ｆｏｒａｔｒｏｔｎ、
Ｊ、Ｗ、　　等、１９８３　、Ｎａｔｕｒｅ　　３０３
　：　６２７−６２９　）。要するに、それはイディオ
タイプ・抗イデイオタイプのｍのために、適切なＶ遺伝
子および結合したアロタイプ・マーカーの存在を必要と
する。
Ａｂ２に対する免疫応答の厳密なＩｇＨ制限はネットワ
ークＶ遺伝子の直接の紹識についての要件を反映してい
るらしい。これは［真のイディオタイプ」の相互作用と
呼ばれｆｔ（Ｎｉａｏｎｏｆｆ、Ａ、　　＆　　Ｌａｍ
ｏｙ、Ｅ、　＃　　１９８１　ｔＣｌｉｎ、ｌｍｍ５％
ｍｌ　、　Ｉｍｔｎｓｓａｐａｔｈｏｌ　、　２１　：
　３９７　）。
この要件は抗イデイオタイプ免疫原として使用しうる抗
体の種類を宿主中で補形ｙ遺伝子を引き出丁ものに限定
する。
すなわち、本発明の特定の好ましい態様において、実験
的に誘導されろ抗イデイオタイプ抗体は宿主に合ったＩ
ｇＨであるべきである。
抗イデイオタイプ投与のＩＱＨの一致が必要でないのは
いつか？。名目上の抗原の内部像として働く抗イデイオ
タイプ抗体は抗原によるこの免疫の代りになりつる。こ
のような始めての（ｄａ　ｔｓｏｖｏ）免疫は、ネット
ワークＶ遺伝子の特異な選択にもとづ（ものではないの
で、内部像免疫原は一般には制限されたＩｇＨではなく
、従って宿主のＩＱＨに一致させる必要はない。。
（１，２”）免疫のルート 抗イデイオタイプによる免疫のルートも免疫応答の性質
に影響を及ぼしうる。投与のルートに依存して、抗イデ
イオタイプ抗体は免疫応答を増大させるか、または抑制
することが見出されｆＣ（Ｅａｊａｗｓｋｉ、に、＆　
　Ｔａｋｅｖｍｏｒｉ＊Ｔ、、　　１９８３　＊　Ａｔ
５ｔｓ、Ｅａｖ、ＩｆＩｗＬｓｎｏｌ、　　１　：　５
６９　＋Ｕｒｂａｉｓ＋Ｊ、　　等、　１９８２　　ｔ
　Ａ％ｎ、Ｉｍｔｐ＋５ｎｏｌ　、　　１　３３Ｄ：１
７９）。たとえば、ウィルス系において、レオウィルス
特異性免疫はイディオタイプ決定因子に対する免疫に従
って確立させることができ、セしてＤＴＨ，４３胞分解
のＴ＃ｌ胞、および抗原結合性抗体が観察された。可溶
性Ａｂ２を免疫原として使用すると、ＤＴＨ応答のみが
みられるのに対して、ハイブリドーマ生産性Ａｂ２の形
体での細胞付随抗イデイオタイプによる免疫は細胞分解
のＴ細胞も誘発させた（ＥｒＮ、Ｈ，等、１９８６　、
　Ｉｎｔ　、Ｒａｖ、ｌｍｍ５ｎｏｌ。
１：６ｌ−６６）。Ａｂ２を（レオウィルス系における
ように）内部１′Ｊ！免疫原として使用するとぎ、それ
は実質的に始めのプライミングにおける抗原の代りとな
り；抗原応答性を容易にする免疫操作の多くはまたＡｂ
２に対する免疫を増大ざぜ、そして本発明の徨々の！ｌ
！４様において使用することができる（後述の実施例Ａ
−３の（２）参照）。
多くの方法を使用して免疫用処方を導入することができ
る。これらには皮膚内、筋肉内、腹膜内、静脈内、皮下
、および鼻内のルートがあげられるが、これらに限定さ
れない。特定の態様において、抗イデイオタイプ抗体に
よる免疫の誘発Ｆｉ裡々の補薬の存在下での抗体の皮下
（Ｓ、Ｃ，）または筋肉内の注射を使用することができ
る。
公称の抗原免疫の場合Ｋ、補薬を含むハプテン化蛋白、
５．（’／）投与は激しいｔ応答を生ずることがわかっ
たが、これに対して同じ抗原の静脈内（（、υ、）投与
ｌ′ｉ、優先的にＴｓ　を誘発させた（　Ｇｒａａｎａ
＋Ｍ、等、１９８２．．４ｄｔ。
ｌｍｍ５ｓ％ｏｌ　　３２：２５３）。然しなから、モ
ノクローナル抗腫瘍抗体を治療に使用したとき、反対の
立場がＫｏｐｒａｗｓｋｉ等によって報告された（　Ｋ
ｏｐｒｏｗｓｋｉ、Ｈｌ等、１９８４゜Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８２：２１６−
２１９）。
Ｋｏｐｒｏｗｘｋｉ　　等はヒトの胃腸糸の癌に対して
系統的に注射されたマウス抗体に対する抗イデイオタイ
プ応答を述べており、これは明らかに患者における重速
効果によって達成されたものである。
Ａｂ２が、抗体依存性の細胞毒性を伝達する又は補形の
存在下で顧瘍則胞を殺すＡｂｌの能力を有効に阻止しう
ろことを示す証拠もめる（後記の実施例Ｄ−２の（４）
参照）。
Ａｂ２投与のルートならびに使用調剤量は誘発させる応
答の種類にＭ要なｔｉ撃をもつらしいので、本発明の好
ましい面において、調剤量および投与効果についての予
備研究を行なうべきである。これらの研究はマウス、ラ
ット、霊長類のような動物のモデルに？いて行なうこと
ができる。
たとえば、特定の態様において、メラノーマ抗原Ｐ９７
に対する抗イデイオタイプ抗体の種々の投与ルートはＰ
９７抗原を発現するマウス・メラノーマ腺（クローンさ
れたＰ９７遺伝子による感染に従ってえられる；　Ｂｒ
ｏｗ％等、１９８１　、　Ｊ、１ｍｍ％＊ｏＪ、１２７
：５３９５４６参照）を用いての誘発の際に生じる生体
内Ｚよび試験管内での応答について試験することができ
る。
（１，３）　　イデイオトーブ特異性 腫瘍抗原を包含する複合抗原は多重エピトープを含む。
それらが呼び起す免疫認識はそれ故に多くのイデイオト
ープを含べこれらのイディオトープはエピトープの不均
一性によって決定されるのみならず、宿主におけるｌ、
およびｒＨＢ胞のうちからえらばれるＶ遺伝子によって
も決定される。これらのイディオトープはこれらが誘発
する抗イデイオトープによって大きく定義される。すな
わち、個々のイデイオトーブは特定のＡｂｌに対して独
特であるＡｂ２応答を引き出し、一般のイディオトープ
は多くの、（６１によって共有される特異性に対してＡ
ｂ２を引き出し、そして内部像タイプは抗原に対して補
形のＡｌＨ１上の抗原結合性構造に対して誘発される（
ＵｒｂａｉｎＪ−等、１９８２゜Ａｓｎ、Ｉｔｎｍｓｎ
ｏｌ、１２５Ｃ：３７３　３Ｂ９：Ａ％ｇｓｓｔｉｎ。
Ａ８等、　１９８３．５ｕｒｖ、ｌｍｍ５ｎｏｌ　、Ｒ
ａｓ、２　：　７８　　：Ｈｏ５ｉｅｒ、Ｄ＋＆　Ｊ”
ａｓｓａｙ　Ａ、４９８４　、　ｆｙｓ　ＴｈｅＢｉｏ
ｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｉｄｉｏｔｙｐｇ＋Ｇｒｇａｓａ、／
ｒｆ、＆Ｎ１ａｏｎｏｆｆ。
Ａ１編集＊　Ｐ　１ａｎｓｔｒｃ　Ｐｒｇｓａ＋Ｎｇｗ
　Ｙｏｒｋ＊ｐｐ、４０３−４１６）。
本発明の特定の態様において、イディオタイプのレパー
トリ−中の同様のシフトは所望のイディオタイプ応答を
達成させる試みにおいて操作しうる。たとえヲ寂　イデ
イオトープの選択は免疫原として使用するＡｂ２に大き
な部分で依存する。すなわち、好ましい態様において、
免疫原として使用するＡｂ２は治療上望ましいイデイオ
トープの発現を恐らく生せしめるように決定されるもの
である。たとえ＋Ｌ　ＴＨとＴｓ　の双方の細胞上の主
要な一般のイデイオトープをもつ系において、抗イデイ
オタイプ抗体は補薬と共に皮下投与する場合、Ｔｌ１ｌ
を呼び出すことができ、あるいはこのような抗体は可溶
性Ｔ８因子と相互作用しうる。例示として、パブテンに
対して免疫のあった且つ一般のイデイオトープを認識し
ていたマウスの研究において、共有の一船釣イデイオト
ープをもつ主たるＡｂ１応答はＩｇ１１競合性の変形の
マウスにおいて強い抗１ｄ応答を引き出す。抗ｌｅｔが
新生児に静脈投与されたならば、あるいは抗１ｔｔＴＢ
が移動せしめられたならば、−船釣、４６１イデイオト
ーブは抑制され、そしてこれは抗原特異性Ａｂｌ上の別
のイデイオトープの発現を生ぜしめたＣＫｇｋｏａ、Ｇ
、等、Ｉｍｔｎｓ＊ｏＬ　、Ｒｍｖ、５２　：　７５　
）。抗１ｄ　による免疫を腫瘍治療に利用する場合、イ
ディオタイプのレパートリ−の同様のシフトが起りつる
。
主たる一船釣イデイオトープを欠く系において、または
Ａｂｌの確認が行なわれていないとき、イデイオトープ
選択法の適合性は有力な別法を提供する。本発明の特定
の具体例に−Ｊ６いて、Ａｂ２の投与は交互のイディオ
タイプ応答をえらぶことかできるので、腫瘍をもつ宿主
には自然に生じることのないイディオトープ罠対する抗
体を腫瘍応答に向げるよ５にえらぶことができる。換言
すれば、腫瘍抗原への霧出によってはえらぶことのでき
ない”ＩＩ　　レパートリ−をえらぶＡｂ２により免疫
を行なうことができる。たとえば、異種発生抗腫瘍抗体
に対して誘発されるモノクローナル内部像Ａｂ２を用い
て免疫を行なうことができる。実在するモノクローナル
抗腫瘍抗体の多くは事実、腫瘍をもつ宿主において免疫
原ですらないかも知れない抗原に対して特異性でろり（
ＩｌｅｌｉｓｔｒｏｍｒＫ、Ｅ、＆　Ｈｇ１１ｓｔｒｏ
ｍ＋７、＋１９８５．　ｉｎ　ｋｌｏｓｏｅＥｏ％ａｌ
　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｆｏｒＴｓｍｏｓｒ　　Ｄｍ
ｔｔｒｃｔｉｏｎ　　ａｎｄ　　ｌ）ｒｕｇ　　Ｔａｒ
ｇｅｔｉｎｇ＋Ｂａ１ｄｓｎｉｎ、Ｒ，Ｉｌ’、＆　Ｂ
ｙｇｒａ　ｒＶ、ｓ　、　ｒ　ｍ集、　Ａｃａｄｅｍｉ
ｃＰｒｇａｓ＋Ｌｏｎｄｏｎ、ｐｐ　　ｌ　７　５１　
）、本発明のこの態様において使用することができる◇ （２）内部像抗体 Ａｈ２免疫は、Ｉ＃異性ｒ遺伝子ネットワーク相互作用
を介してのみならず内部像擬態によっても、Ａｂ３誘い
出しに導くことができる（ＵｒｂａｉｎＪ−等、１９８
２．Ａｓｓ。
Ｉｍｔｎｓ＊ｏ１．１３３Ｄ　：　１７９−１８９　：
Ａｕｇｘａｔｔｎ、Ａ。
等、１９８３　、５ｓｒｖ、Ｉｎｍ５％ｏ１．Ａｍａ、
　２　：　７８　）。すなわち、抗イデイオタイプか抗
原の適合性鏡像を表わすとき、それは公称の抗原の代り
をすることができ、Ａｂｌ様の応答を誘い出すことがで
きる（　Ｎｉｇｏｎｓｆｆ−”Ｌａｍｏｙｉ＊Ｅ、＋１
９８１．Ｃｌ１ｎ、ｌｍｍ５舊ｏ、ｌｍｍ５ｎｏｐａｉ
五ｏＬ。
２１　：　３９７）（第３図参照〕。それ故、好ましい
態様において、このような抗イデイオタイプ抗体はＩｇ
Ｈ不適合宿主における腫瘍治療用の免疫原として使用す
ることができる。
モノクローナル抗イデイオタイプを使用する本発明の態
様において、適切なＡｂ２を注意深くえらぶべきである
。
ある特定のＡｂ２が抗イデイオタイプの内部像型である
ことの実験的証明は抗原の認識を決定する適合性特性を
擬態する能力によってきまる。内部像抗イデイオタイプ
はイディオタイプ陽性Ａｂ１への結合について抗原と試
験管内で競合し、且つ、４６１を擬態するＡｂ３を生体
内で誘発させ、そしてこの誘発がＩ、Ｈ非制限形を生ぜ
しめる（＃ｆｓａｓａｆｆ＆　Ｌａｍｏｙｉ＋　　上記
文献）。
抗原へのｓｄ＋結合の阻止に加えて、内部像Ａｂ２は免
疫認識という意味で抗原の代りをなしうる。たとえば、
Ａｂ２は抗原の不在下で試験管内にｇいて抗原特異性ク
ローンを刺激するＣとができ、あるいはＡｂ２”ｍ胞は
抗原特異性ＣＴＬの標的として役立つことができる（Ｅ
ｒｃｌ。
１１、Ｃ，Ｊ、等、１９８２　、　Ｐｒｏｅ、Ｎａｔｌ
　、Ａｅａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ。
Ｓ、Ａ、７９　：　７４７９　）。Ａｂ２は抗原適合性
の代りをなしつつあるので、Ａｂ２Ｆ−１ＭＩＩｃ分子
の関係でのこれらの分析においてＴ細胞に「提供」させ
ることができ、それ故に応答は抗原特異性応答（１ｄ）
の場合と全く同様に、制限されたＭＨＣであるとみるこ
とができる。
内部像免疫原が望まれる本発明の態様において、異種発
生抗イデイオタイプ抗体を使用することができる。内部
像免疫原は抑制細胞を刺激しないが然し同時にＴｆ（を
訪発さぜるとい５ことが可能である。この推察は主たる
Ｖ遺伝子の発現によって代表される規制イディオトーブ
がＡｂ２と１８　　との間の連絡を決定するという、及
びこの特定のイデイオトープを欠くけれども依然として
１“Ｈを誘発′：！−ぜる内部像特性を保持するという
、第１図のＩＤおよび第２図の２Ｃに概要の示される概
念にもとづく。
本発明の特定の態様において、腫瘍抗原活性をもつ内部
像抗体は特異性腫瘍免疫の誘発に対する腫瘍「ワクテ／
」として使用することができる。たとえば、このような
ワクチンは一次腫瘍は除かれたが転移の発達の危険があ
る患者に対して治療上有効でありうる。
Ａｂｌへの結合について抗原と競合する内部像Ａｂ２の
能力（およびその逆のＡｂ２と競合する抗原の能力）は
それらの挙動の内部の一部である。然しなから、内部像
として機能しないＡｂ２は、立体障害（および恐らく他
の機構）により、依然として競合しうる。本発明の好ま
しい面において、有力な内部像としてのその特性の一部
として実験動物中のＩｇＨ（−ｂよびＡ１１１Ｃ）障害
を越えて免疫応答を誘発さぜるＡｂ２の能力を探求すべ
きでるる。
時として、内部像抗１ｔｔ　と「真の」抗１ｔｔ　との
間の相違は不鮮明になるので、内部像特異性をもたない
抗イデイオタイプ抗体は依然として内部像付随の性質を
示すことがあり、治療上価値あるものでありうる。たと
えば、ネズミ科動物の膀胱癌抗原に付随するモノクロー
ナル抗体に対して誘発さｎるモノクローナル抗イデイオ
タイプについての我々の研究において、抗イデイオタイ
プによる免疫は検矧しうる抗原結合性を欠く激しいＡｂ
３応答を誘い出したＣＬａｇ、Ｖ、に８等、Ｂｉｏｅｈ
ｉｍ、Ｂｔｏｐｈｙｚ、ＡｅＬａ　８６５：１２７−１
３９）。特定の抗１ｔｔ　に対して誘発されたＡｂ３は
明らかに、抗イデイオタイプに付随する「個の」（プラ
イベート）！￥ｆ異性に対して向けられたものである。
抗イディオタイプ抗体１−ＩＡｂｌによる抗原結合を阻
止することが示されたけれども、これは立体的阻止によ
ると推足され、我々はこれらのデータをＡｂ２が内部像
抗体ではなかったことを意味するものと一時的に解釈し
た。然しなから驚くべきことに、これらのモノクローナ
ルＡｂ２はマウスの抗＠瘍応答を誘発させることができ
、そして腫瘍特異性Ｔ細胞抑制体因子に結合させること
もできた（　Ｌａｇ、Ｖ、に０等、１　９８５　　、Ｐ
ｒｏｅ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｅ４．Ｕ、Ｓ、Ａ、ｆ
３　を　　：６２８６　　６２９０　；Ｋｘｅｈｒｏｏ
、Ｖ、に、等、　１９８７゜Ｃａ１ｌｓｌａｒ　Ｉｍｔ
ｎ＊ｎａ１．１０４　：　ｌ　。２５−１１４　）。こ
れらの実験における抗イデイオタイプのモノクローナル
抗体はマウスにおいて誘発されたものであり、ラットに
誘発された異種発生の抗腫瘍モノクローナル抗体に対し
て向けられたものであったので、Ａ６２免疫によってマ
ウス中に誘い出された抗腫瘍応答Ｆｉ特異性ｒ遺伝子選
択にもとづくものであるとは予想されなかった、そして
その代りＫある梅の内部像Ａｂ２に寄与されうるものと
考えられた。
第２の実例はＴＭ〆付随の抗原に対するイディオタイプ
応答を分析する実験から生じる。これらの実験において
、「個の」（プライベート）ラビットのイディオトープ
について特典性のラビット抗イデイオタイプ抗体により
マウスを免疫させた（　Ｆｒａｎｃｏｔｔｇ、Ｍ、＆　
Ｕｒｂａｉｔｓ＊！、、１９８４゜Ｊ、Ｅｚｐ、Ｍａｄ
、　１６０　：　１４８５　）ｏ　’Ｘ＜べぎことに、
これらのマウスはラビットのイデイオトープとイディオ
タイプ的に又追及応性のある抗ＴｋｉＶ抗体を作った。
すなわち、刺激性の抗イデイオタイプは「内部像」特異
性ではなかったけれども、それにもかかわらずそれは見
掛けのＶ遺伝子非混和性の面において抗原特異性情報を
誘い出した。
本発明の特定の態様において、決定された腫瘍抗原を認
識するイディオタイプに対して特異性の抗イデイオタイ
プ・モノクローナル抗体の製造は、決定された腫瘍抗原
を認祿する抗体による宿主の免疫を必要とする。前述の
如く、このよ５な腫瘍抗原はオノコフエタル、または分
化抗原たとえばＣＥＡ、α−フェト蛋白、転位細胞膀胱
癌の１７５ＫＤａのヒト抗原機能性均等物、メラノーマ
付随抗原Ｐ９７（Ｂｙｏｗｎ等、１９８１　、　Ｊ、ｌ
ｍｍ５ｎｏ１．１２７：５３９−５４６参照）、ヒト肺
癌の分化抗原たとえばＬ１６およびＬ２０　（Ｉ１１ｌ
ｓｔｒｏｍ等、１９８６　、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒａｍ。
４６：３９１７−３９２３）、およびヒトのメラノーマ
に付随する分化に涼、ＧＤ３ガ／グリオシード、腺維肉
腫の抗原などを包含するが、これらに限定されない。
可能な宿主の種はマウス、ラビット、チ／パッジ−のよ
うな実験動物を包含するが、これらに限定されない。宿
主の独に依存して、種々の補薬を使用して抗体に対する
免疫学的応答を増強することができる。これらの補薬は
鉱物質ゲルたとえは水酸化アルミニウム；表面活性剤た
とえばリゾレシチン；種々のポリオール；ポリアニオン
；ペプチド類、オイル乳化物：および潜在的に有力なヒ
ト補薬たとえばＢＣＧｉ６よびコリネバクテリウム・パ
ルパムを包合するが、これらに限定されない。Ａｂ２は
また免疫原キャリヤーに結合′：！−ぜることもできる
。免疫原キャリヤーはＬＰＳ、またはゲルタールアルデ
ヒドで又差結合させたＬＰＳ＜Ｐｒ１ｔｐｈｔ、Ｃ，Ｄ
ｌ等、１９８２　、Ｊ、ｌｍｍ５ｖｓｏＬ、１２９：１
１２４−１１２９）を包含するが、これらに限定されな
い。免疫原はまたリポゾームにくみ入れることもでき、
るるいは多糖類および／または他りポリマーに結合させ
ることもでき、あるいｉｉまた使用のために化学的に変
性することもできる。Ａｂ２分子それ自体の上にあるア
ロタイプ決定因子を使用して免疫原性能を増強すること
もできる。レオウィルス系において、Ａｂ２による免疫
がアロタイプ障害と反差したとき、すなわち宿主が１ｇ
１１に遇合しなかったとき、激しいＡｂ３応答がみられ
たＣＥｒｔｔ、ＩＩ、等、１９８６、前記文献）。この
結果は抗イデイオタイプ上の１．アロタイプ決定因子が
免疫応答を増大させる方向に向５ヘルパー決定因子とし
て働いたことを示唆している。従って、特定の具体例に
おいて、ＩｇＨ不一致は免疫原の性能を増大ざぜるため
に使用することができる。
抗イデイオタイプ抗体、または抗イデイオタイプ抗体の
断片、あるいは化学的に変性した断片もしくは抗体は、
免疫用に使用することができる。また、ｍｏｂ　　分子
のイディオタイプを含むｍＡｂ断片も使用することがで
き、これらは周知技術によって発生させうるＦｖ、Ｆａ
ｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、またはＰ’（ａｂ′）２断片を
包含するが、これらに限定されない。
モノクローナル抗体は培養物中の遅続細胞腺による抗体
の生産を与える任意の技術を使用することによって製造
することができる。これらの技術はＫｏｈｌａｒおよび
Ｍｉｌｓｔａｉｓによって始めに記述されたハイブリド
ーマ技術（１９７５゜Ｎａｔｓｒａ　　２５６：４９５
−４９７）、および更に最近のヒトＢ細胞ハイブリドー
マ技術（ｆｏ廖ｂａｒ等、１９８３゜ｌｍｎｌｘ％ｏｌ
ｏｇｙ　Ｔｏｄａｙ　　４　＊　７２　）、およびＨＢ
Ｖ変態技術（Ｃｏｌ−等、１９８５　、　Ｍｏ５ｏａｌ
ｏ＊ａ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａ％ｄ　Ｃａｎｃｅｒ　
ＴｈａｒａｐｖｒＡｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ＋Ｉｎｃ、＋
ｐｐ７７−９６）を包含するが、これらに限定されない
。ノ・イブリドーマの選択は多数の分析法のうちの任意
のもの、たとえばＡｂｌへの結合の分析、または腫瘍細
胞へのＡｂ１結合の阻止の分析ＣＮｇｐｏｑｎ、Ｇ、Ｔ
９等、１９８４．Ｐｒｏｅ。
Ｎａｔｌ、Ａｔａｄ、Ｓｅｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８１：２８
６４　２８６７：Ｈｏｌｂｍｃｋ、Ｓ、Ｌ、＆　Ｎｇｐ
ｏｍ＋Ｇ、Ｔ、ｔ１９８３　、　　ノ。
Ｉｍｔｐｈｓｎｏｌ、Ｍｇｔｈ＠ｄｍ　　６０　：　４
７−５２　：後記の実施例ｃ−１の（７）参照）によっ
て行なうことができる。
本発明の別の特定の悪峠において、腫瘍抗原に関連する
、且つ腫瘍抗原を認誠するＴ細胞に付随するイディオト
ーブに対する、抗体が製造される。このイディオトーブ
は腫瘍抗原に対するイデイオトーブを示す抑制体因子に
付随することもある。このような腫瘍抗原は上記（１）
にあげたものを包含するが、それらに限定されない。１
つの態様（後記の実施例Ｂ−１−Ｂ−７）において、抗
イデイオタイプ抗体は腫瘍抗原による免疫、ハイブリド
ーマの生成、および自動仇イディオタイプ・モノクロー
ナル抗体の選別によって製造することができる。該選別
法は腫瘍！異性ＤＴＨ１腫逼特異性ＬＡＩ、腫瘍抗原に
対するモノクローナル抗体への結合、などの分析法を包
含するが、これらに限定されない。特定の態様において
、自動抗イデイオタイプ抗体の製造に使用する腫瘍抗原
は腺維肉腫、転移性細胞膀胱癌でありうる。それはメラ
ノーマ抗原Ｐ９７もしくはＧＤ３、またはヒト肺癌抗原
Ｌ６またはＬ２０でありうる。あるいはまたＴ細胞（Ｔ
ＨまたはＴｓ）または抗原を結合させる抑制体因子を使
用して抗イデイオタイプ抗体の生産のために宿主を免疫
させることもできる。特定の１様において、腺維肉腫、
転移性細胞膀胱癌、Ｐ９７メラノーマ抗原、ＧＤ３メラ
ノーマ抗原、Ｌ６よたはＬ２０の肺癌抗原に対して特異
性の抗体によって決定されるイデイオトープを発現さぜ
るＴ細胞を免疫用に使用することができる。Ｔｓ細胞の
注射は治療上有害なので、ＴＨ細胞による免疫が好まし
い。免疫に使用するＴ細胞は、たとえは腫瘍をもつ患者
自身から、又は腫ゼ抗原に免疫系を露出させた通切な（
好ましくは組織混和性の）提供者から得ることができる
。ＴＪｍ胞は次いで、当条技術において知られている性
々の技術、たとえば螢光標識モノクローナル抗腫瘍抗体
結合？よびＦＡＣ５（後記実施例Ｂ−４参照）によって
注射用に単離することができる。免疫用の抑制体因子は
当業技術において卸られている多くの技術によって単離
することができる。これらの技術は免疫親和性クロマト
グラフ（腫瘍抗原被覆カラムに対して）、腫瘍をもつ宿
主からのＴ＃ｌ胞を融合することによるＴ−Ｔノ・イブ
リドーマの発生ＣＮｇｌｓｏｓ、に、Ａ、等、１９８０
　、Ｐｒｏｃ、ｌ’１ａｔｔ、Ａｃａｄ、Ｓａｉ、Ｕ、
Ｓ、Ａ、７７　：２８６６）とそれにつつく例えば腫瘍
抗原に対するＤＴＨの抑制の、腫瘍抗原に対する！異性
結合性などの、選別（仮配実施例Ｃ−５参照）を包含す
るが、これらに限定されない。
不発明の抗イデイオタイプ抗体を腫瘍に対する免疫に使
用のために想定する場合（後記の実施例１１−６の（１
）参照）、好ましい態様におい℃、抗体の免疫能力を試
験すべきである。抗イデイオタイプ抗体またはその誘導
体断片による免疫の際に肺癌特異性Ｃ７Ｗ　Ｉの誘発を
示すことによって抗イデイオタイプ分子の免疫能力を実
証することのできる任意の方法が、抗イデイオタイプｍ
Ａｂの免疫能力の検査のための本発明の範囲内にある。
このような分析法はＤＴＨ（ＤＴＨ分析法の記述につい
てはＦｏｒｓｔｒｏｍ　　等、１９８３゜Ｎａｔｓｒａ
（ＬｏｎｄｏｆＬ）　３０３　：　６２７　６２９参照
）および／またはＬ　Ａ　Ｉ　（１ｌａｌ　１１ｄｔＬ
ｙＪＩ’、Ｊ　、＆　Ｍａｌｓｉ　ａｈ　Ａ。
Ｅ、　、　１９８２　、　ｉｓ　Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ
　ｏｆ　Ｉｒｎｍ５＊ａ　Ｓｔａｃｗａｂｙ　ｔｈｅ　
Ｌｇｗｋｏｃｙｔｇ　Ａｄｈｇｒａｎｃａ　Ｉｎｈｉｂ
ｉｔｉｏｎＴａａｔｒＡｃａｄｇｍｉｃ＊Ｎａｗ　　Ｙ
ｏｒｋｒｐｐ　　１　　２６　　：Ｋｏｐｐｉ。
Ｔ　、Ａ、＆　ｌ１ａｌ　ｌ　１ｄａｙ、ＩＩ’　、／
　、　、　１９８２　、　ＣａＬＬ、ｌｍｍ５ｎｏｌ。
６６　：　３９４　４０６　：Ｋｏｐｐｉ、Ｔ、Ａ、＆
　Ｈａ１１ｉｄａｙ。
Ｗｊ、、１９Ｂ１．Ｊ、Ｎａｔｌ、Ｃａｎｃａｒｌｎａ
ｔ、　　６６：１０８９−１０９６）を包含するが、こ
れらに限定されない。更なる特異性試験として抗体と補
形による腹膜細胞の免疫吸収分析と処理をあげることが
できるが、これに限定されない。
抗イデイオタイプ抗体の特異性を更に決定するために、
Ａｂｌ結合性分析および／またはＡｂｘ　−Ｎ瘍結合性
抑制分析を行なうことができる。このような分析は当業
技術において知られている任意の方法（たとえば後記の
実施例Ｃ−１８よひｃ−２に記載されている方法ンによ
って行なうことができる。実施しうる２つの追加の方法
としてＡｂｌの（＋Ｉｉ形依存性細胞毒性または抗体依
存性細胞毒性の抑制試験がめげられる（後記の実施例Ｃ
−１の（１，３）および（１，４）参照）。
実施例Ａ−６゜ 本発明のこの実施例の目的は本発明の抗イデイオタイプ
抗体分子または該抗体分子の断片（これらは化学的に変
性されていてもよく、または変性されていなくてもよい
）を医療の分割に使用する例を述べることにろる。
腫瘍をもつ患者は本発明の抗イデイオタイプ・モノクロ
ーナル抗体による免疫によって治療することができ、ま
た腫瘍を除いた患者はこのような免疫によって免疫予防
的に治療することができる。腫瘍ワクチン処方物中の抗
糸を使用するよりもすぐれた抗イデイオタイプｍＡｂの
便用による利点は、大量の同じ材料が免疫源として使用
するために得られることである。ごれは抗原が脂糖類ま
たは炭水化物（これらは純粋な形体で及び十分な量で得
ることが困媒である）である場合に特に価値がある。ま
た、抗原が蛋白質である場合、抗イデイオタイプ抗原の
入手容易性は、ワクチンに使用するに十分な量の抗原を
得るために抗原用にクローンされた遺伝子をもつ必要性
を避ける。抗イデイオタイプ抗体、または該抗イデイオ
タイプ抗体の断片、あるいは化学的に変性されたまたは
抗体を使用して腫瘍に対する免疫を行なうことができる
。ｍＡｂ分子のイディオタイプを含む任意のｍＡｂ断片
を使用することができ、これらの断片には周知技術によ
って発生させることのできるＦｖ、Ｆａｂ、　Ｆａｂ’
または／’（１Ｓ６’）！の断片が包含されるが、これ
らに阻害されない。抗イデイオタイプ抗体分子またはそ
の誘導体断片は免疫学的応答を増大させるために好適な
補薬と共に配合することができる。これらの補薬として
鉱物質ゲルたとえは水酸化アルミニウム；表面活性剤た
とえばリゾレシチン、多数のポリオール類：ボリアニオ
／類：ペプテド類；オイル乳化物、および強力に有用な
ヒト補薬たとえばＢＣＧおよびコリネバクテリウム・パ
ルバムがめげられるが、これらに限定されない。免疫原
はまた、リボゾーム中に配合することができ、または多
糖類および／または他のポリマー類に結合させることが
でき、あるいはまた使用のために化学的に変性すること
もできる。
多くの方法を使用して免疫用処方物を導入することがで
きる。これらは皮膚内、筋肉内、腹膜内、静脈内、皮下
、鼻内のルートが包含するが、これらに限定されない。
本発明の特定の具体例において、腺維肉腫をもつ宿主に
は腺維肉ｗｖＬ原を認識するイデイオトープに特異性の
抗イデイオタイプ・モノクローナル抗体を腹膜内注射す
ることができる。
試験動物の免疫は、抗イデイオタイプ抗体もしくは関遅
訪導体分子を注射し、次いで同時発生腫瘍細胞または化
学的癌発生源のような腫瘍発生剤により誘発させ、そし
て腫傷の発達と進行を観察することによって分析するこ
とかできる。
本発明の別の態様に？いて、腫瘍抗原（前記実施例Ａ−
３の（１）に記載のものでありうるが、これに限定され
ない）を４８するイデイオトープを発現するＴ＃ｌ胞（
好ましくはＴＨ）を免疫予防または免疫治療のために宿
主に導入することができる。このような細胞は腫瘍成長
中の宿主自身からえられ、試験管内で発展させられ（発
展の前または後のいづれかで）迩切なイディオタイプ特
異性が選択され、そして宿主に再導入される（後記の実
施例Ｂ−４参照）。あるいはまた、ＴＡａ胞は適切な（
好ましくは組織混合性の）提供からえられる。
別の試みにおいて、腫瘍特異性リンパ細胞を試験管内で
活性化し、そしてこの活性化した腫瘍特異性白血球で患
者を治療することも可能である。最近になって、腫瘍を
もつ宿主へのリンパ球活性化キラー細胞（ＬＡＫ）の投
与を包含する通合性免疫治療処置に対する応答において
、腫瘍の退化が観察された（　Ｒｏａａｎｂａｒｇ　　
等、１９８５．＃Ｐｔｃ＋Ｅｎｇ１．Ｊ、ｋｆｇｄｉｅ
ｉ＊ａ　　３１３：１４８５　１４９２）。
然し、この治療は、ひどい毒性、肺浮腫、および呼吸困
難を包含する望ましくない多くの副作用をもたらした。
これとは対照的に、本発明のこの実施例の方法は腫瘍付
随抗原（前記の実施例Ａ−３の（１）に記載の抗原であ
りうるがこれに限定されない〕に対してｖｆ異注でろり
且つ更にｑ！ｊ１１ｅ注の治療と副作用の少ない刺激さ
れたリンパ細胞を患者に投与することを包含する。たと
えば、周囲のリンパ細胞を患者またはＭｉ繊織混和提供
者（腫瘍抗原に露出させたか、あるいは前述のように腫
瘍抗原を決定する抗体のイデイオタイブに対して訪発さ
れるモノクローナル抗イデイオタイプ抗体に蕗出させた
者）から引き出すことかでざる。このリンパ細胞を次い
で不発明の腫瘍特異性の抗イデイオタイプ抗体の存在下
で試験管内で刺激することができる。このような′＃異
性刺激はＢｉｎｇ等によって記載された方法（１９８２
゜Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａ５ｅａｒ２９：４１７　４２３）の
よ５な方法で本発明のモノクローナル抗イデイオタイプ
抗体を使用して行なうことができる。活性化Ｔ細胞は次
いで細胞培養物中で発展させることができる。この発展
はＩＬ−２を伴なって又は伴なわずに本発明の抗イデイ
オタイプ抗体によりＴ細胞の刺激をくりかえすことによ
って、るるいはＩＬ−２単独を含む媒質中での生育によ
って、行なうことができる。
Ｔｉｄｌ胞培養の他の方法（たとえばリンパキン、生育
因子、または他のバイオ活性分子を用いる方法→を使用
することもできる。活性化り／パ細胞は次いで細胞伝達
抗腫瘍免疫反応性の試験がなされる。所望ならば、Ｔ細
胞のような活性化りンバ細胞の強度の確認を、該細胞を
ＴおよびＨの細胞マーカーの細胞表面発現に関して試験
することによって行なうことができる。これは、たとえ
ば、ＴおよびＢの細胞抗原に対するフルオレセイン結合
モノクローナル抗体を使用する免疫分析によって行なう
ことができる。周知のＴ細胞マーカーの発現、たとえば
ＣＤ４およびＣＤ８抗原はＴ＃ｔ８胞のような活性化リ
ンパ細胞の同一性（アイデンティティ）を確認する。
次いで活性化Ｔ細胞の抗腫瘍反応性を試験する。これは
特異性細胞伝達免疫を分析するだめの当某技術において
仰られているいくつかの技術のうちの任意のものによっ
て達成されうる。たとえば、試験管内で腫瘍細胞を殺す
刺激されたＴ細胞の能力を測定する細胞＠性分析は、ｉ
Ｉ　Ｃ，標誠腫瘍細胞および非感染標＃！細胞によりり
／パ細胞を培養し、そして分解の際の５ｌＣｆ−放出を
測定することによって達成させることかでざる。このよ
うな分析は記載されている（たとえばＺａｒｌｉｎｇ、
Ｊｏ、Ｍ、等、１９８６　、／　、ｌｍｍ５ｎｏｌ　。
１３６：４６６９参照）。活性化リンパ細胞はまた、刺
激後のｓＨ−デミ２フ組み入れによって及び／又は外因
発生性ＩＬ−２の不在下での刺激の際のＩＬ−７：また
はインターフェロンのようなリンパキンを生ずる能力を
測定することによって示されるように、プロリンパレー
トに対する能力を測定することによってＴヘルパー活性
の試験をすることができる。当業技術において知られて
いる特異性細胞伝達免疫の他の分析（Ｔ五ｏｍａｏｎ、
１）、Ｍ、Ｐ、（纒ｙ４）、１９８２゜Ａｇｍｍｍａｍ
−％’　　Ｏｆ　Ｉｒｎｍｕ％−５ｔａｔｔｔｓ　　ｂ
ｙ　　ｔｈｅＬｇｗｋｏｃｙｔｇ　Ａｄｈｇｒｇｎｅｇ
　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　Ｔｅ５ｔ。
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　も
使用することができる。えらばれたリンパ細胞は次いで
患者に接触することができる。活性化Ｔ細胞の接種は組
織への投与により行なうのが好ましいが、他の投与方法
（たとえば動脈中への直接の注入）も使用することがで
きる。Ｔ／ａ胞は中心静脈カテーテルを介して又は大き
い周辺静脈中に静脈投与することができる。好筐しい態
様において、約ｌＸｌ０’　　個の細胞を始めに注入し
て、残余を次の数時間にわたって注入する。
ある患者においては、組換え体のヒト１Ｌ−２を使用し
てもよく且つＴａ胞圧注入時間から始ｆつて８時間毎に
静脈注入することができる。ＩＬ−２の注射は癌患者に
従来使用されていたように（Ｒｏｌ−％ｂａｒｇ、Ｓ−
Ａ―等、１９８５゜Ｎ、Ｅ％ｇｔ、Ｊ、ｂｈｄ、　３１
３　：　１４８５　）、１０，０００〜１００．０００
単位／匈体重の調剤量でおるのが好ましい。
ＩＬ−２ａ″人Ｆｉ患者が耐えられるならば、活性化Ｔ
ｄＪ胞注入後数日間＃にけることかでざる。
本発明の別の態様において、抑制体Ｔ細胞および／また
は抑制体因子上にあり且つ仇腫瘍抗原に対するイデイオ
トープを特異的に認識する抗イデイオタイプ抗体は、生
体内に投与して抗腫瘍反応性の抑制を阻止させることが
できる。
特定のり様において、このような腫瘍抗原は前記の実施
例Ａ−３の（１）にあげたものを包含するが、これらに
限定されない。
本発明の抗イデイオタイプ抗体または関連分子は、決定
された。１ＩＪｉ瘍抗原に対する抗体を単離するために
使用することができる。これを達成しつる、当業技術に
おい℃知られている技術は免疫親和性カラムｊ６よび免
疫吸収の反応を包含するが、これらに限定されない。抗
イデイオタイプ抗体または関連分子は腫瘍の免疫治療の
価値める道具でらり５る。
（５）免疫分析 本発明の別の態様において、本発明の抗イデイオタイプ
抗体または関連分子は免疫分析における抗原として使用
しうる。これらの免疫分析は動物または患者における抗
ｎｆ３抗体の検出を可能にする。本発明の分子はまた、
抗腫瘍抗原の存在を試験するための競合免疫分析に使用
することもできる。
本発明の分子は当業技術に知られている免疫系（放射線
免疫分析、ＥＬＩＳＡ、サンドインチ分析、沈殿反応、
ゲル拡散沈殿反応、免疫拡散分析、膠着分析、補形固定
分析、蛋白Ａ免疫分析、螢光免役分析、および免疫放射
能分析を包含するが、これらに限定されない）に使用す
ることができる。
特定の態様において、腫瘍抗原を決定する抗体１“のイ
デイオトープに対する、本発明の抗イデイオタイプ抗体
は治療または診断の目的で、抗体１が投与されている患
者における抗体の存在を侠査するための競合免疫分析に
使用することができる（後記の実施例Ｃ−１の（１，５
）および実施例Ｃ−２の（５）参照）。別の態様におい
て、抗イデイオタイプ抗体はｆ＋”ｆ製操作中の抗ｍ瘍
抗体を確認するために使用することができる。
実施例Ｂ ネットワーク理論（Ｊｇｒｎｇ、Ｎ、に、、１９７４　
、Ａｎｎ。
Ｌｎｍｔｔｎｏｔ、　　１　２　５Ｃ：　　３　７　３
　　；　　）（ａｊａｗｓｋｉｒＫ、　　＋３と１’ａ
ｋａｒｎｏｒｉ、Ｔ、＋１９８３　、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、
Ｉｍｔｎｓｎｏｌ、　　１　ａ５６９　；　Ｕｒｂａｉ
ｎ、！　、等、１９８２　、　Ａｎｎ、Ｉｍｍｘｎｏｌ
。
１３３／Ｊ：　１７９）ｌ／（よれは、同時発生肉腫に
応答する免疫を形成するマウスは応答するリンパ細胞の
イデイオトープに対する抗体をもつべきである。以下の
実施例に述べるように、この予見をもとにして我々ｆ−
ＩＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ／Ｃマウスを２つの同時発生の、移植
腺維肉腫、および生成）・イブリドーマ（腫瘍特異性Ｄ
ＴＨの同時発生マウスを誘発させるモノクローナル抗体
を生産した）のいづれかに対して免疫させた。これらの
自動抗イデイオタイプ・モノクローナル抗体の１つは、
抗腫瘍活性をＴ細胞上に、及びこの活−道阻止するＴ抑
制体細胞の生成物上に、存在するイデイオトープを決定
することが示される。我々ｔ−１ｆた、２種のモノクロ
ーナル抗イデイオタイプ抗体のいづれかによるマウスの
治療が確立された肉腫の成長を著るしく減少させたこと
、ｇよび迩切なｍＡｂ腫瘍腫瘍せに特異であった効果を
示す。
実施例Ｂ−１゜ 材料Ｒよび方法 （１）マウス Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ／Ｃマウスを米国ワシントン州シアトル
のフレッドｅハツテンソンーカンサー・リサーチ・セン
ター（ＦＨＣＲＣ）のザ・デイビジョン・オブ・アニマ
ルφヘルス・リノーシズで飼育し、それぞれの実験にお
（・て年齢と性をマツチさせた。２週間より古い雌をえ
らんだ。それがパイロット試験において最適の応答を与
えたからである。
ナショナル・インスチチュート・オブ・ヘルスのミツシ
ェル・ボタ−博士ρ・らえた飼育中のペアからｔ’　Ｈ
ＣＲＣにおいてＣＢ−２０マウスをとりあげた。
（２）　腫瘍 トリオクタニオｙ甲の３−メチルコランスレ／の筋肉内
圧射によってＨＡＬＢ／Ｃマウスに腺維肉腫ＭＣＡ−１
４９０、ＡｆＣ，４−１５１０およびｋｉＣＡ−１５１
１を誘発させ、そして第２世代中の凍結された組織の継
続的共発生移植によって保持した。それらはＬＢＨ，七
／ダイ・ウィルスおよび先天性四肢欠損ウィルスがなく
、且つミコプラズマもなく、そして他の化学的に誘発さ
れたマウス腺維肉腫と同様に、個々に独特の腫瘍特異性
移植抗原を発現することがボされた。ＢＩＴ’　５１４
７　・Ｇ、　１．４　ｏｓａ　・１は薬剤市場のＡＫＲ
チモマ（胸腺腫瘍）であり、ザ・サルク・インステイチ
ュートのザ・セル・ディストリビューション−センター
から入手したものである。ＮＳＩ厄１］胞はインジエジ
エルド・へルストローム博士の研究所から入手した。Ｂ
ＩＰ’　５１４７とＮＳｘの双方はミコプラズマがない
ことが示された。
（３）遅延型過度敏感性の分析 Ｔｈｙ　１　　、Ｌｙｔ　１　１Ｊｙバ細胞によって伝
達される遅延型過度敏感性（ＤＴＨ）を測定する分析を
使用し、Ｄ　Ｔ　Ａ反応の代表的な形態的証明による特
徴づけを行なったＣＦｏｒｘｔｒｏａｃ、Ｊ、Ｉｌ’、
等、　１９Ｂ３．Ｎａｔｕｒｅ　　３０３：６２７：（
：’６ｒｙ、／、等、１９８１　、　ｉｎ　Ｍｏｎｏｃ
ｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　Ｃａ１
ｌ　ＨｙｂｒｉｄｏｔｎａＪＩａｍｍａｒＬｉｎｇ＋Ｇ
、Ｊ　、等、輪果＊　Ｅｌ　５ａｖｉｏｒ／Ｎｏｒｔｈ
−Ｈｏｔ　ｌａｎ認識ｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｅａｓ
＊ｐ、　５０３　）。マウスを、合計１ｘ１０６　照射
（１５，０００ラド）腫瘍細胞を２つｆ）ｆａｃそれぞ
れの脇腹に１つ）に筋肉内汗射することによって、また
は３〜１０ｐｇのｍＡｈ　　（リン酸塩緩衝塩水ＰＢＳ
中で希釈）を４つの皮下の場において注射することによ
って、免疫させた。材料を分析してＤ　Ｔ　Ｈ（１）抑
制を求めるとき、それは常に訪発相の抑制について分析
した。これらの実験に？いて、免疫直後に推定の抑制材
料をＰＨ５中に１００μｔＫ希釈して趨部静脈に注射し
た。
ＤＴＨのそれぞれの試験において、治療グループまたは
対照標準グループは５匹のマウスから成り、それらを常
にコード付けした。免疫後５日目、５Ｘ１０’　　腫瘍
細胞を２本の後足の一方に注射することによってＤＴＨ
を誘い出した。２４時間後に、注射した及び注射しなか
った足の双方の厚さをダイアル会マイクロメータを使用
して漬：１足した。
それぞれの処理グループについて、注射した足の厚さの
増加（すなわち″はれ″）の平均増加としてデータを示
した。
処理グループと対照標準グループとの間の相違の有意性
をトウ・ティルト・ステニープント試験を使用して測定
した。
（４）自動抗イデイオタイプモノクローナル抗体の発生
ＢＡＬＢ／ｃマウスをＩ　Ｘ　１０’個のトリパン・ブ
ルー非汚染の培養したＡｆＣＡ−１４９０またはＭＣｌ
−１５１１細胞の皮下注射によって、及び次いで３週間
後に生成腫瘍結節の切除によって、免疫させた。史に２
ａ１間にこれらのマウスにそれぞれの腫瘍からの２　Ｘ
　１０’個の照射した（１５，０００ラド）ｆＩＪＡ胞
を注入し、且つそれから２週間後にも５１度同じｉ／ｉ
剤童を注射した。肺臓細胞を最後の注射から７日後に得
て、公知技術（Ｙｇｈ、−’ｄ、Ｙ、等、１９７９゜Ｐ
ｒｏｃ、Ｎａｔｌ　、Ａｅａｄ、Ｓｅｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、
７６　：　２９２７　）を使用してＮ５−ｘミエローマ
細胞に融合させた。
放射性免疫競合分析（Ｂｒｏｗｎ、Ｊ　、Ｐ、等、１９
８０．／。
Ｅｉｏｌ　、Ｃｈａ悔、２５５：４９８０）を使用して
ノ・イブリドーマをまずＩｇＧ抗体復造用に選別し、４
μｇ　ＩｇＧ／Ｉ１１より大きいものを発達させた。培
養物の上澄液をプールした。
それぞれのプールは５つのハイブリドーマからの上澄液
から成っていた。セファロースＣＬ−４Ｂに共有結合し
たニス・アウレウス蛋白Ａ上での親和クロマトグラフに
よってそれぞれのプールから抗体をｔｎ製した（米国ミ
ズリー州セントルイスのシグマ会ケミカルーカンパニー
）（Ｂｒｏｗｎ。
Ｊ、Ｐ、等、　１　９８０　　、Ｊ、ＢｉｏＬ、Ｃルー
ｍ、２５５：４９８０）。
クロマトグラフ前に抗体醇液のｐＨを８．５に副筒して
ＩｇＧＩの分離を容易にした。ＢＡＬＢ／ｃマウスを上
記のプールした抗体の注射により免疫させ、そし１５日
後に遍切な腫瘍細胞（ＭＣＩ−１４９０またはＭＣＡ−
１５１１細胞）で誘発してＤＴＨを誘い出した。プール
試験陽性の個々の上ひ液を分析してＭＣＡ−１４９０お
よび＃ＣＡ−１５１１に対するＤＴＡの誘発を求めた。
２種の腫瘍のうちの１つは対照標準として役立てた。そ
れぞれの融合物からの井戸の２〜４％は所望の活性をも
つ抗体を含むことが見出された。腫瘍特異性ＤＴＨを誘
発するハイブリドーマ生産性抗体を限定希釈によって２
倍にクローンし、その後に陽のクローンを発達させプリ
スタン誘発Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウス（Ｔｇｈ、Ｍ
−Ｙ−等、　１９７９　　ｒ　Ｐｒｏｃ、ＮａｔＬ　、
Ａｅａｄ、Ｓｅｉ。
Ｕ、Ｓ、Ａ、　　７６：２９２７）Ｋｊ、ｔｆｆる腹水
ＪＩＪＬ！：Ｌテｉ長させた。モノクローナル抗体を蛋
白Ａセファロース上の親和クロマトグラフによって腹水
流体から￥ｆ！製した。ｍＡｂ４、’１２（ＭＣＡ−１
４９０に関連）および溝Ａｂ５．９６←ＭＣＡ−１５１
１に関連）をこの研究に使用した。それらは共に、若干
の実駐において対照標準として使用したｍＡｈ８．２と
四球にＩＱＧ　ｌアイソタイプのものであった。
（５７Ｔ細胞ハイブリドーマ 従来記述されていたようにして（Ｎｇｌｍｏｎ、に、Ａ
、等、１９８０　、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、
Ｓｅｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　７７　：２８６６　：　Ｎｇｌ
ｓｏｎ、に、等、１９８５　、　ｉｓ　Ｔ−Ｃａ１１Ｈ
ｙｂｒｉｄｏｔｎａａ、Ｔａｓｓａｉｇ＋Ａｆｊ、　、
編集、　ＣＲＤ　　Ｐｒａｓａｒｐ、１２９）、ＢＷ　
５１４７ｒＹＪＪＪＭＦｌをＭＣＡ−１４９０ｆｉ瘍を
もつマウスのチモサイ）　（ｔｈｙｍｏｔｙｔａａ）と
融合させることによっていくつかのハイプリドーマ腺を
得た。この研究に使用した４つのハイブリドーマは、＊
　Ｉ　Ｃｒ　ｗ出分析（Ｎａ１ｓｏｎ＋に、等、１９８
５．前述の文献）において試験したように特異性免疫Ｔ
、１４１１ＩＱ！、によるＭＣｌ−１４９０細胞の分解
を抑制する因子（覆数）を生産した。これらのハイブリ
ドーマの及びＢＷ５１４７融合パートナ−の培養物を新
生光子牛血（１５０ｐｔ／ｌｎり、ベニシリ：／（１０
０単位／！ＩＬｔ）、ストレプトマイシン（１００μｇ
／酊）およびＬ−グルタミ７　（２９０ｐｇ／ｍｔ）を
補充した、且つ重戻酸ナトリウムで緩衝したダルベコ−
の変性イーグル媒質（米国ニューヨーク州グランド・ア
イランドのグランド・アイランド・バイオロジカル・カ
ンパニー）中で生育した。約２×１０６細胞／ｍｌが存
在するときのログ（！ｏｃｒ）相生育中の細胞から使用
済み媒質をとった。このＩｓ′Ｋを濾過しく０．４ミク
ロ／、ミリボア）、分析する迄−７０℃で貯蔵した。
（６Ｊ　　ｒｎＡｂを用いる親和クロマトグラフによる
抑制体因子の分離 ｍＡｂ４．７２またｔｉ５．９６を対照標準前Ａ＆　８
．２と共に使用した。後者もＩ、Ｇｌアイソタイプであ
り、ヒト・メラノーマ抗Ｐ９７に対して特異性がめる（
ＢデＯＷ％、〕、ＢＷ０．１９８１、Ｊ、Ｉｒｎｍ５ｔ
ｎｏ１．Ｉ２７：５３９）。これら−ｂをＰＢＳ中でｒ
ｒｕｙ　／ｌｕｔに希釈してから４℃での一夜の培養に
より等Ｓｔのアフイ・ゲル１０（米国カリフォルニア州
すッチモンドのバイオ−ラド・ラボラトリーズ）に結合
させた。このゲルを洗浄し、０．１Ｍのエタノールアミ
ンで培養してカラム製造に使用した。このカラムをＰＢ
Ｓで十分に洗浄し、使用前に３ＭのＮａＳＣＭで予め溶
離させこ。　Ｔ雁胞ハイブリドーマ（抑制体因子の資源
として）またはＢＷ　５１４７ＭＨ胞（対照標準として
）の使用ずみ培養媒質をＰＥＳ中で１：１０に希釈し、
その後にこの希釈した媒ＩＲＱ、２ｍｌをゲルＱ、２ｒ
ｎｌのカラムに通した。これらのカラムを２ｒｎｌの流
出液が果まるまでＰＢＳで抗浄し、その後に流出液をＰ
ＢＳ中で１＝１０に希釈して分析し、ＤＴＨの誘発用の
抑制を調べた。
ＭＣＡ−Ｌ４９０または＃Ｃ，４−１５１１の腫瘍のい
づれかを移植した、またこのような処理を行なっていた
いＥＡＬＥ／ｃマウスからの血清を用いても実験を行な
った。
これらの血清をＰＢＳ中で１：１０に希釈し、その後に
この希釈した血清のＱ、　５　Ｒ２をゲル０．５ｔｎｌ
Ｏカラムに通した。
これらのカラムをＰＢＳで洗浄した。はじめの１．５ｄ
を流出液として集め、追加の５１を捨てた。矢いて結合
蛋白を３ＭのＮａ　Ｓ　ＣＭの添加によりカラムから溶
離させ、溶離液をＰＢＳで平衡させたセファデックスＧ
−２５０カラムに通すことによって脱塩した。溶離液お
よび流出液をＰＢＳ中で希釈してもとの血清に対して１
：１００の希釈液をえた。これを次いで試験してＤＴＨ
の誘発用の抑制を調べた。
（７）ＭＣＡ−１４９０ｄ胞への抑制体因子Ｋ　５４　
Ｓ　／の結合 粘着性培養ＭＣＡ−１４９０細胞をエチレンジアミン四
酢酸（５ｍ＃）中で瑞養し、ＰＢＳで抗浄し、そして０
．１チのゲルタールアルデヒド溶液中で４℃において１
０分間培養した。これらの細胞を次いで０．５％牛血清
アルブミンによりＰＢＳ中でＪ＠養し、次いでＰＢＳで
洗浄した。Ｔノ・イブリドーマｌ−５４または対照標準
ＢＷ５１４７の細胞の使用済み媒質をｍＡｂ４．７２ま
たはｍＡｂ　８．２　（対照標＠）ＣＩ）イづれかを１
ｏｐｃｔ含むＰＢＳ中で１　：　Ｚｏｏに希釈し、氷上
で３０分間培養した。次いでこれらを、１００μｔの充
てんａ筋細胞に加え、これらを懸濁させ、室温で１０分
間そして氷上で更に３０分間培養した。１つの実験にお
いて、腫瘍細胞を抗体による培養によって予め処理し、
そしてＩ−に５４またＦｉＢＷ５１４７の細胞からの希
釈した使用済み媒質の６″江加前に、ＰＢＳで３回洗浄
した。氷上での培養後に、Ｍ筋細胞を１５ｔｎｔＯ）Ｐ
ＢＳで５回洗浄し、グリシン−〃ＣｔＦｙｊ、衝液（ｐ
Ｈ３，０）　０．５＋＋＋を中に懸濁させた。水上で更
に１０分間培養した後、細胞を遠心分離（２００ｘＧ）
によってペレット化した。Ｉ）　Ｂ　Ｓで平衡化させた
セファデックスＧ−２５を通すことによって上澄液を直
ちに５３節した。解離液をＰＥＳ中で１：１０に希釈し
、ＤＴＨの誘発用の抑制を分析した。
ｍＡｂ４．７２と反応性のｒＨ３胞を、漸進的に成長す
る移植ＭＣＡ−１４９０肉腫の場を排出するリンパ結節
から得た。これらの細胞をパーコル勾配（Ｐｈａｒｔｎ
ａｅ　ｉα）上の遠心分離によって分離し、ビオチンと
結合したｍＡｂ４．７２またｔｉｍＡｂ　８．２と混合
した。次いで、これらを洗浄し、アミンｙ・フルオレセ
イン・インチオシアネー）　（ＦＩＴＣ）で処理し、丹
び洗浄し、そして螢光活性化細胞ソーター（ペクトン・
デツキンソ／、ＦＡＣ５−１ｌ）上で分析した。
ｍＡｂ　４．７２で処理した試料にのみみられ且つ試料
の１％禾膚を表わす明るく色づいた細胞を集めた。これ
らの細胞（９０，３と呼ぶ）をコンカナバリン（ｃｏｎ
ｃａｎαｖｃＬＪｊｓ）Ａで刺激したラット肺臓細胞の
培養物からの２５％媒質を袖なったクリック（Ｃ’１ｉ
ｔｋ）の媒質中で２４時間培養した。
２５日後に故しい成長が観察され、そし”（７２時間毎
に新鮮な媒質中に培養物を発達させることによって激し
い生成が保持された。別の細胞腺（ｉｉ），２）を、Ｍ
ＣＡ−１５１１ｎ瘍の場を排出する結節から得たＬｙｔ
−１陽性り／パ則細胞ら確立した。それは腺（９０，３
）と同様な方法で保持された。これらの細胞を腺（９０
，３）または腺（ｉｉ），２）の確立後６週と８週との
間で分析した。腫瘍のないマウスのリンパ結節からの正
常なＴ細胞を４８時間培養し、その後にこれらの細胞を
分析のいくつかについて対照標準として使用した。
継続径路からの腫瘍細胞の注射後１４〜２１日のマウス
から腫瘍ｆｆ１ｍをえた。機械的分裂およびトリプシン
による短い処理によって懸濁液を製造した。トリパン−
ブルーの排除によつ℃生存能力を検査した。第４図に示
す実験において、腫瘍細胞を培養Ｔ細胞と１＝１０の比
で混合し、この混合物を皮下注射した。治療グループ毎
に１０匹のマウスを使用した。成長しつつある腫瘍結節
の２つの垂直測定によって腫瘍の成長を２〜４日の間隔
で検査した。０．２ｃｍ”より大きい面積をもつ腫瘍は
非処理の対照標準において容易に退化し、確立された腫
瘍でるると考えられた。
ｔｐｃＡｂ処理の効果を測定する実験において、腫瘍細
胞をマウス当り１個の場所で皮下注射した。ｍＡｂはＰ
Ｈ５中で希釈され、１０μｇ／注射で腹膜内＜１−ｐ）
に注射された。
腫瘍の成長を上記のようにして検査した。ツー・ティル
ト・スチューデントを試験を使用して神々の処置グルー
プ間の有意差を求めた。
富Ａｂ４．７２またＶｉ鴇、４６５．９６の皮下投与（
よる）１ノＣＡ−の誘発 我々は涌Ａｂ４．７２が皮下注射されたときＡｆＣＡ−
１４９０に対するＤＴＩＩを誘発しうろこと及びそれは
腫瘍特異性細胞上のイデイオトープと反応すること、す
なわちそれは自動抗イデイオトープ（Ｆｏｒｓｔｒｏｍ
、ＪＪＰ’、等、１９８３゜Ｎａｔｓｒｅ　　３０３ａ
６２７）であることを既に報告した。
我々は今や抗原的に異なった肉腫ＭＣＡ−１５１１（ｊ
ｄ）に対して増感されたマウスからのリンパ細胞を使用
して類似０）ｍＡｂ　５．９６を開発した。これに我々
がｍＡｂ　４．７２′ｉ６よび５．９６を平行に試験す
ることによってＤＴＨ効果の免疫学的特異性を検査する
ことを可能にする（表１）。
表■に示すように、ｍＡ　ｂ　　４．７２で誘発された
ＢＡＬＢ／ＣマウスはＭＣＡ−１４９０細胞による次の
誘発に対してＤＴＥで応答したが、ＶＣＡ−１５１１細
胞による誘発に対しては応答しなかった。悔Ａｈ　５．
９６ＦｉそれがＭＣＡ−１５１１に対してＤＴＩＩにつ
いてＢＡＬＢ／ｃマウスを誘発したがＭＣＡ−１４９０
に対してはそうでなかったという点で同様に挙動した。
ＤＴＨの特異性は異なったイデイオトープがノＫＣＡ−
１４９０とＭＣＡ−１５１１に対する免疫応答に包ずれ
たことを示している。
ｍＡｂ　４，７２についての従来のデータ（Ｆｏｒａｔ
ｒｏｍ。
Ｊ、Ｗ、等、１９Ｂ３．Ｎａｔｕｒｇ　　３０３：６２
７）に一致して、誘発はＩｇ−１７０タイプの場に結合
する遺伝子において同一性確認を必要とした（表Ｉ）。
２つのｍＡｂのいづれもＣＩＪ−２０マウスを誘発しな
かったからである。腫瘍細胞による免疫＃−ｔｃｕ−２
０マウスにおいてＩ）ＴＥを誘発しなかった。抗体結合
分析（Ｃ，、、、Ｊｏ等、１９８１゜ｉｓ　Ｍｏｎｏｅ
ｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　Ｃａ
１１Ｅｙｂｒｉｄｏｍａｓ、ＨａｍｍｇｒｌｉｎｌＢＧ
、Ｊ、等編集、Ｅｌｓａｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ−Ｅｏｌ
Ｌａ％ｄ　　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　　Ｐｒｍ５ａ＋ｐ
　　５０３）を用いて試験するとぎ、ｍＡｈ　５．９６
Ｆ’ｉそれが肉腫細胞に結合しなかったという点でｍＡ
ｂ　４．７２　（Ｆｏｒｓｔｒｏｍ、Ｊ。
Ｗｏ等、１９８３．Ｎａｔｕｒｅ　３０３：６２７）に
類似していた。
我々はｍＡ　ｂ　４．７２およびｍＡｂ　５．９６Ｆ′
ｉ機能的にはそれぞれルＩＣΔ−１４９０および、＜ｌ
０Ａ−１５１１に対する免役応答に対して抗イデイオト
ープ性でろると偕論した。
ＤＴＩＩの抑制 我々は慣Ａｂ４．７２または、１ｆＣＡ−１４９０細胞
のいづれか皮下注射によって免疫させた、あるいＦｉＭ
ＣＡ−１５１１細胞（対照標準として使用）を用いて免
疫させたマウスのＤＴＨ反応性に及ぼすｖｎＡｂ　４．
’ｙ　２の静脈投与の効果を試験した。皮下注射免疫の
直後に、マウスの足部静脈に約５μｌのｍＡｂ　　４．
７２またＦｉｍＡｂ　８．２　（対照標準）を注射した
。ＤＴＨ応答を５日後に測定した（表ＩＩ）。
表 ■ 慣Ａ　６８．２ なしく希釈斉ｊ） ＡｆＣＡ−１４９０ＡｉＣＡ−１４９０慣Ａ　ｂ　４．
７２Ｆ　ａ　ｂ　４．７２ 爲Ａ　６８．２ なしく希釈剤） なし　　　　　１ＶＣＡ−１４９０なしＭ（１’、４−
１５１１　　ｈｌｃＡ−１５１１惰Ａ　ｂ　４．７２Ｐ
’　ａ　ｈ　４．７２ 濯Ａ　６８．２ なしく希釈鄭Ｊ） １１Ｌ　　　　　　ＭＣＡ−１５１１なし１２．２±０
．７ １３．６±０．５ ６．８±１．６　ｔ ７．２±１．３’ １７．０±１，３ １９．８±０．７ ４．０±０．９ １５．０±２．６ １５．６±１．２ １４．８±２．１ １６．４±２．６ ４．６±１．３ 注） 傘　マウスを皮下注射によって免役させ、セしてＤＴＨ
を表■に述べたようにして測定した。ＤＴＨの抑制を分
析する材料を希釈し、免疫直後に１００μを静脈（ｉ、
ｗ、）注射した。それぞれのマウスは５μＶの全ｔｇＡ
ｂまたは３．５ｐＱのＦａｂ断片を受けた。
ｆ　これらのマウスの応答はスチューデ／ツを試験によ
る０、００１未満のＰにおいて希釈剤を受けるマウスの
応答よりも著るしく低かった。
表ｎに示すように、ｍＡｂ　４．７２の静脈注射（ｊ、
ｔ＋、）はＭＣＡ−１４９０に対するＤＴＨについてマ
ウスを誘発させるために皮下注射したｍＡｂ　４．７２
またはＡｉ　ＣＡ　−１４９０の能力を抑制した。更に
、ｍＡｂ　４．７２から作ったＦａｂの断片の静脈注射
ｌ−ＩＭＣＡ−１４９０細胞による免疫を抑制した。Ｍ
ＣＡ−１５１１，Ｊ胞は抑制されず、対照標準ｍＡｂ　
８．２は効果をもたたかっも我々は投与ルートがｍＡｂ
　４．７２を受けるマウスのＤＴＨ反応性に影響を及ぼ
し、ＤＴＨを含む皮下注射（前記の実施例Ｂ−２参照）
および静脈注射はこの効果を抑制すると結論する。
我々ｉｉｍＡｂ４．７２決定イデイオトープがＭＣＡ−
１４９０にＤＴＩＩを伝達するＴｄＪ胞上に存在するか
否かを研究した。成長しつつあるＭＣＡ−１４９０Ｍ瘍
を排出するリンパ結節からの単核細胞をビオチンおよび
アビジ／−ＦＩＴＣに結合さぞたｖｎＡｂ４．７２を使
用して螢光粘注化則胞ンーター（ＦＡＣ５）上で分析し
た。明るく着色した細胞が観察された。明るく着色した
細胞は単核細胞の全集団の１％未満を示したけれども、
それらは前じ調剤量で使用したビオチニル化制御モノク
ローナル抗体ｍＡｂ　８．２を用いて分析した試料中に
は見られなかった。着色した細胞を分離し、インタール
ーキン−２（ＩＬ−２）の存在下で培養した。このもの
から細胞線を確立し、これを９０゜３と呼んだ。この９
０．３ａｌ胞を６週間の培養後に表面フェノタイプにつ
いて分析したとき、それらはｖｈＡｂ　４．７２を結合
させていたが、螢光強度にもとの細胞のそれよりも低か
った。これらの細胞Ｖｉ、ｒｈｙ−１陽性であり、モし
てＬｔ、−１抗原を発現したが、Ｌｙｔ−２抗原を発現
しなかった。
次いで我々ｉｉＭｃＡ−１４９０に対するＤＴＨ応答に
及ぼすこの９０．３細胞の効果を検討した（表■）。
表 ■ ＭＣ４−１４９０正常Ｔ　　　　９．６±１．１　　４
．８±０．６ノ＞ＩＣＡ−Ｌ４９０　　　なしく希釈剤
）７．０十０．７　　　４．０±０．４Ｍ（１’、（−
１５１１９０，３９，４±１．０　　４．０±０．４Ｍ
Ｃｌ−１５１１１１，２１７，３±２，６　１０．７±
１．２１ＭＣｌ−１５１１正常Ｔ　　　　ｌ０９２±２
．３　　　３．０±０．３ＭＣｌ−１５１１なしく希釈
鄭ｊ）　　８．０±０．７　　３．０±０．４なしく希
釈剤）　　９０．３　　　　　　ｔＪ、４±１．２　　
０．２±０，４なしく希釈剤）　　１１．２　　　　　
２．６±０．６　　　１．２±０．６なしく希釈剤）正
常１　　　４．８±１．０　　　３．６±１．２ｅＥ） ネ　腺９０．３もしくＨ１１、２から又は純ＢＡＬＢ／
ｅマウスから誘導される効果Ａｄ胞をＭＣＡ−１４９０
またはＡｆＣＡ−１５１１の細胞（５）１０りと混合し
て純Ｅ　Ａ　Ｌ　Ｅ　／　ｃマウスの１本の足に注射し
た。各グループ当り５匹のマウスを使用した。２４時間
後、ＤＴＩＩを測定して表■に述べたように計算した。
Ｉｃれらのマウスの応答はスチューデ／ツを試験による
０、０２未満のＰにおいて希釈剤とＭＣＡ−１４９０を
受けるマウスの応答よりも著るしく大きかった。
表■に示すように、９０．３細胞とＭＣＡ−１４９０細
胞を純ＢＡＬＢ／ｅマウスの足部に注射したときＭＣＡ
　−１４９０に対するＤＴＨがあった。ＭＣＡ−１５１
１に対スルＤ　ＴＭｌ”１’ｒＬ　＜、９０．３ａａ胞
ｆ）−’ｐｊｔ９ｄｋｌｃ’Ａ　−１４９０細胞を受け
ていないマウスには足部の腫れはなかった。Ｔ細胞の第
２の腺１１．２Ｆｉ抗原的に異なる肉ＨＭｃＡ−１５Ｎ
を排出するマウスのリンパ結節から確立された。１１．
２腺はＭＣＡ−１５１１に対するＤＴＨを与えたがＭＣ
Ａ−１４９０に対するＤＴＨは与えなかった。純マウス
からのリンパ結節細胞を分析前にＩＬ−２を含む媒質中
で４８時間培養し、別の対照標準として使用したが、そ
れらはＭＣＡ−１４９０に対するＤＴＨを転写しなかっ
た。
９週間培養した９０．３細胞を試験してＭＣＡ−１４９
０腫嬉の生体内生育に及ぼすそれらの効果を調べた。純
マウスからの培養Ｔａ胞を対照標準として使用した。’
Ｚ’（ｉ１１胞をＭＣＡ−１４９０，ＭＣｌ−１５１０
またはＭＣＡ−１５１１の腫瘍細胞と混合し、それぞれ
の混合物を１０匹の純ＩＪＡＬＶ／Ｃマウスに皮下注射
した。腫瘍発現までの時間ならびに腫瘍の成長速度を検
査した。第４図に示すように、ＭＣＡ−１４９０と９０
．３細胞との混合物を受けた１０匹のマウスのうちの１
匹は、９０．３細胞ではな（て対照標準Ｔ？ａ胞を混合
した１０匹のマウスのうちの９匹に比べて、明瞭な（手
でされれる）腫瘍を発達させていた。９０．３細胞は２
つの抗原的に異なる肉腫ＭＣＡ−１５１（ＬｊたはＭＣ
Ａ−１５１０には影響をもたなかった。
ｌｒｔを、ｍＡｂ　４．７２カ肉ＰＩ１１ｋｌＣＡ　−
１４９０ヲモ：ｌマウスからのＴＨ胞の小集団と反応し
、そしてこのような細胞から誘導された細胞線９０．３
がＭＣＡ−１４９０に特異的に反応性があると結論する
。
我々は肉ｐＩＪ１ＭＣＡ−１４９０をもつマウスからの
Ｔ１１（Ｉ胞を融合させろことによるＴ−Ｔハイブリド
ーマの発生を既に述べた（Ｎｅｇｒｏ％、に、Ａ、等、
１９８０　、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。
Ａｅａｄ、Ｓｅｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ、７７　：　２８６６　
）ｏ　これらのバイブＩＪ　）”−−ｒ（Ｄ’）チノ４
８１−に５４．１ｔ−１５、Ｉｆ−３２および■−１２
２によって製造されたモノクローナル生成物（抑制体因
子）はＭＣＡ−１４９０に対するＤＴＨを抑制するがＭ
Ｃｌ−１５１１１１Ｃ対するＩ）ＴＨを抑制せず、セし
てＭＣＡ−１４９０ＩＩ４Ｂ胞に特異的に結合すること
が実証され友。然しそれらは抑制の機構訃よび遺伝的制
限に関して異なるものであった（ＮｇＬｓｏｎ、に、等
、１９８５．ｊｎＴ−Ｃａｌ　ｌ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
ｚ　、　Ｔａｓｔｚｚｉｇ、Ｍ、　Ｊ、編集、ＣＲＣｐ
ｒｅｓｓ、　ｐ１２９　）。
我々はこれら４種の抑制体因子のうちの１つに５４ＳＦ
をえらんでｍＡｂ　４．７２によって決定されるイデイ
オトープがＭＣＡ−１４９０に結合しうろ因子の部分に
付随しているか否かを試験した。Ｋ５４ＳＦＣ培養した
ｌ−に５４細胞の上溌液から得られる）とＭＣＡ−１４
９０細胞を一緒に培養し、その後に腫瘍細胞を洗浄し、
それらに結合したに５４ＳＦを溶離させた。この溶離液
をＭＣＡ−１４９０またはＡ／ＣＡ−１５１１の細胞に
よる皮下注射免疫の直後のマウスに静脈注射した後にＤ
　Ｔ　ＩＩ試験により分析した。
腫瘍特異性抑制活性が溶離物中に回収されｆＣ６ＭＣＡ
−１４９０へのに５４ＳＦの結合を阻止する倶Ａｈ４．
７２の能力を更に詳細に検討した。Ｋ５４ＳＦを含む媒
質をｍＡｂ４．７２またはｍＡｂ　８．２　（ｎ照標準
）のいづれかと混合し、その後にこれをＭＣＡ−１４９
０細胞に加え、そして細胞の溶離物を試験して抑制を調
べた（ｆｆｌＶ）。
注） 傘　１−５４−！たはＢＷ−５１４７Ｃ対照標準）の細
胞を１ずｍＡｂ４．７２またはｍＡｂ　８．２と混合し
、その後にそれらをＭＣＡ−１４９０細胞により培養す
る。実験２においては、１−５４媒質による培養前にＭ
ＣＡ　−１４９０細胞をＴＩ％ＡＭ８．２またはｔｎＡ
ｂ４．７２で培養したグループもあった。培養後に、腫
瘍細胞を洗浄し、それらに結合している物質を＃離ぎぜ
てＭＣＡ−１４９０に対するＤＴＨの抑制を分析した。
免疫していない（対照標準）マウスの足部のＩＭＩれの
平均は実験１において５．０±０．３であり、実験２に
おいて５．２±０．６であった。ＭＣＡ−１４９０で誘
発させた抗、ＭＣＡ−１４９０免疫マウスの足部の腫れ
の平均は実験１において１５．８±１．４であり、実験
２において１７．６±１．０であった。
寸　これらのマウスの応答はスチューデンツ！試ＭＫよ
る０、００１未満のｐにおいて希釈剤を受けるマウスの
応答よりも著るしく低かった。
表■に示すように、ｍＡｂ　８．２とに５４ＳＦとの混
合物で培養したＭＣＡ−１４９０細胞の６端物はＭＣＡ
−１４９０に対するＤＴＨを抑制した。対照的に、Ｋ５
４ＳＦとｍＡｂ４．７２との混合物で培養したＭＣＡ−
１４９０の俗離物は抑制性がなかった。この結果は、Ｍ
ＣＡ−１４９０に結合するに５４ＳＦの能力はｍＡｂ４
．７２へのその結合によって阻止されたことを示してい
る。ＢＷ５１４７（対照標準）およびｍＡｂ　８．２で
培養したＭＣＡ−１４９０！ｌｆＨ＠の俗離物は抑制性
がな（、従って抑制は溶離され友腫瘍抗原によるもので
はなかった。濯Ａｂ４．７２によるＭＣＡ−１４９０細
胞の予備処理はそれらかに５４ＳＦに結合するのを阻止
しなかソた（後記の表Ｘｖの６行目参照）ので、Ｋ５４
ＳＦをｍＡｂ４．７２で培養するときに見られた阻止は
ＭＣＡ１４９１１１胞上の抗原に結合するｍＡ　６４．
７２とＫ　５４　ＳＦとの間の競合によるものではなβ
１つだ。これらの結果は、惰Ａｈ　　４．７２罠よって
認識されるイデイオトーブが・）／　ＣＡ−１４９０に
結合するに５４ＳＦの場において、あるいは少なくとも
その場に密に接近する砺において発現さｎろことを示唆
している。同様の結果はＴ細胞・・イブリドーマによっ
て生産されろ抑制体因子１ｔ−３２についてもえられた
。
Ｋ５４ＳθりＷＣ，４−１４９０に対するＤＴＩＪを抑
制するので、我々は９０３細胞の機能に及ぼすＫ　５４
　ＳＰ’の効果を分析した。これらの細胞は、ＭＣＡ−
１４９０に特異なｊ）　７’　ＩＩを秋与し５るからで
ろろ（ｍ記の実施例１３−４６照）。
マウスは９０．３Ｋからの細胞とＭＣＡ−Ｌ４９０腫瘍
からの細胞との混合物を１本の足に注射した。１時間後
に、Ｋ５４Ｓ／（１−に５４ハイブリド−マの上＆［と
してンを同じ足に注射した。ＢＷ５１４７上計液を対照
標準とじて使用した。衣■に示すように、Ｋ　５４５　
ＦＯ）Ｅｍｌ）　Ｔ　ＩｆをｌイＣＡ−１＋９ｏに伝達
する９０．３．’Ｆｌｉｔ胞の能力を抑制した。
衣 って抑制される１ ９０．３　なしく希釈剤） ｌ−に５４　　１．０μｔ ［−に５４　　０．１　／Ｉｔ Ｚ＃’５１４７　１ｆ：ＪＩｌｔ ＢＦ５１４７０．１１１を 正常Ｔ　なしく希釈剤） 希釈剤　なしく希釈剤） １９．２±１．６ ８２±０，８　ｔ ９．４±０．９ｆ ２０３±１．４ １９．６±１．６ ９．６±１．１ ７．０±０．７ １５．０±２，２ 行なわない ３．０±０．４　を 行なわＴ、ｃい １３．３±１．２ ・１．８±０．６ ４０±０，６ 注） ＊　　腺９０．３　Ｔ＃ｌｆＪｌｒｉＭｃ　Ａ　−１４
９０Ｊｌｆｌ胞と混合して純ＩＪＡＬＢ／ａマウスの足
部に注射し、表］において述べたよ５１ＣＬで分析した
。Ｉ　−に５４またＦ′１ＢＷ−５１４７（対照標準υ
の細胞の媒’Ｊ［に５ｐｔに布釈してＴ腫瘍細胞混合物
と同様にマウスの足部に注射した。各グループについて
５匹のマウスを使用した。
ｔ　これらのマウスの応答は、スチューデンッｔｔｔ、
験により０，０１未満のＰにおいて９０．３細胞、腫瘍
細胞および希釈剤を受けるマウスの応答よりも著ろしく
低かった。
９０．３有効体細胞とに５４抑制体細胞の双方はｍＡｂ
４．７２決定イデイオトープをはこぶと思われたので、
我々はｆ５４以外のＴｉ１ｌＪ胞ハイプリドーマによっ
て作られる抑制体因子にもこのイディオトーブが存在す
るか否かを検査しへ４種の異なったＴ細胞ハイブリドー
マから誘導される抑制体因子を不動化ｍＡｂ４．７２に
よる培養後の抑制活性について分析した。４橿の）・イ
ブリドーマρ・らの及びＢ１１７５１４７Ｃ対照標準）
細胞からの使用済み媒質を、アガロースニ共有結合させ
たｍＡｂ　４．７２またｔｉｍＡｂ８．２（対照標′Ｉ
＄）のいずれかのカラムに通した。流出液について、Ｍ
ＣＡ−１４９０に対して皮下注射で免疫させた直後のＢ
ＡＬＩ！／ｃマウスに該流出液を静脈注射することによ
って、ｋｌｃＡ−１４ｇｏに対するＤＴＨの抑制を分析
した（表■）。
表 ＶＴ ｒ７ＬＡ　ｂを吸着させた媒質を注射 したマウスの足部の腫れの平均 ＢＦ３１４７（対照標準）　　２４．２±１．８　　２
３．４±０．８ハイブリドーマ１−ｆ５４　　　７．８
±１．０　　　２２．９±１，２ハイブリドーマＩｔ−
１５９，６±２．８　　　１８．４±２．２ハイブリド
ーマ１１−３２１０，８±２．０　　　２４．８±２．
４ハイブリドーマ［１−１２２１１，０±１．２＋　　
２３．６±２．０ＥＥ） 傘　Ｔ細胞ハイブリド−マｌ　−ｆ５４、Ｉｔ　−１５
，■−３２およびｎ　−１２２の及びＢＦ３１４７（対
照標準）の使用済み媒質を、アガロースに共有結合した
ｍＡｂ　４．７２またＶ１８．２０カラムに通した。流
出液を表■に記載したようにして分析してＭＣＡ−１４
９０に対するＤＴＩＩの誘発用の抑制を調べた。希釈剤
を受ける対照標準マウスに比べての、足部の腫れの統計
的有意差をステニーデフ　）　１試験によって推定した
。
＋　　０．００１より小さいＰ 傘ネ　　０．０１より小さいＰ 表看に示すよう（，４種のＴ）・イブリドーマから誘導
され（ｍ、４ｂ８．２）の対照標準カラムを通った媒５
！！、はＭＣＡ−１４９０に対するＤＴＨの誘発を抑制
したが、この抑制ＶｉｍＡｂ４．７２カラムを通過さぜ
るＣとによって除ρ・れた。
従って４桟の抑制体因子のすべてはｍＡｂ　４．７２に
よって決定されるイデイオトーブを発現させるようにみ
えた。
この結果はｍＡｂ　４．７２によって決定されるイデイ
オトーブがＭＣＡ−１４９０に対する抑制体応答を規制
する上で優勢であることを示唆した。然し、僅か４ｄの
ハイブリドーマによって作られた因子を研究したので、
我々は次に、底長じつつある。’ｄＣＡ−１４９０肉腫
をもつマウスにおける恐らくポリクローナルな抑制体因
子の応答を分析した。
この実験はＭＣｌ−１４９０またｆ−ｊ−ＭＣＡ−１５
１１０肉膝をもつマウスからの血清がそれぞれの腫瘍に
対するｔｙｒｎの誘発しうろことの実証をもとに行なわ
れた（表■）。
表■ ＭＣＡで免疫させ誘発させ たマウスの足の腫れの平均 ＭＣＡ−１４９０屓０易をもつマウス ＭＣオー１５１ＩＩｌ！１ｆ瘍をもつマウス純マウス なしく希釈剤） ６．７±１．３ｔ １５．９±２．６ １７．５±４，５ １５．０±１．４ ２０．０±０４４ １０．４±２．３＋ ２２．２±２．６ ２１．０±１．４ 注） 車　漸増して成長するｋＩｃＡ−１４９０または、ＷＣ
Ａ腫瘍をもつマウスからの又は対照標準のマウスからの
血清を希釈し、１００μｔを、ＭＣＡ−１４９０または
ＭＣＡ−１５Ｉｌへの免疫直前のマウスに静脈注射した
。ＤＴＨを衣１に記載したようにして誘い出し、測定し
た。免疫していないマウスの足部の腫れの平均はＭＣＡ
−１４９０で誘発させた後に５．３±１．２であり、Ｍ
ＣＡ−１５１１で誘発させた後に６．３±０．３であっ
た。
十　これらのマウスの応答はステニーデフッを試験によ
り０、Ｏ１禾満のＰにおいて希釈剤を受けるマウスの応
答より著るしく低かった。
腫瘍をもつマウスからの血清をｒｎＡｂ　４．７２また
は−ｂ８．２（対照標準）のカラム上でクロマトグラフ
処理し、カラムに結合した物質を浴離し、 そして流出液をＤＴＩＩの抑 制について分析した（表１）。
注） ＊　　ＭＣＡ−１４９０またにＭＣＡ−１５１１腫瘍を
もつマウスからの血清をアガロースに共有結合させた惧
Ａ６４．７２またはｍＡｂ　８．２の免疫吸着剤カラム
に通した。これらのカラムを洗浄し、結合Ｍを３ＭのＮ
ａ５ＣＮでｄ離させ、ＰＢＳで平衡化させたセアフデツ
クスＧ−２５上で脱塩した。それぞれのカラムの流出液
を表Ｘ■およびＸｖＩに述べているようにＤＴＨの訪発
相の抑制について分析した。
ｔ　これらのマウスの応答はスチューデンツを試験によ
る０、０１未満のＰにおいて希釈剤を受ける免疫マウス
の応答よりも着るしく低かった。
表■に示すように、ＭＣＡ−１４９０をもつマウスから
の血清は（ｍＡ６８．２の）対照標準カラムを通した後
にＭＣＡ−１４９０に対するＤＴＨを抑制したが、惰Ａ
ｈ４．７２０カラムを通した後には抑制しなかった；そ
し℃ＭＣＡ−１４９０に対してＤＴＩｉを抑制する物質
は後者のカラムの俗離液中に回収された。ｍＡｂ４．７
２による免疫吸着は異なった腫瘍をもつマウスからの血
清の、該腫瘍に対するＤＴＩｉを抑制する北方を除かな
かった。
我々の結果はＭＣＡ−１４９０に対するＤＴＨの抑制は
ｍＡｂ４．７２によって認識されるイデイオトープに付
随すること、ＳよびＡ１（’、４−１５１１に対するＤ
　Ｔ　Ｉｆの抑制はばイデイオトープを含まないことを
示している。
我々ＦｉｔｎＡｂ　４．７２＃よびｙ＋ｔＡ６５．９６
の注射が適当な腫瘍（それぞれＭＣＡ−１４９０またけ
ＭＣＡ−１５１１）による誘発に対してマウスを保躾す
るか否か及びその注射が確立された腫瘍に治療効果をも
つか否かを検討した。
ｍＡｂは腹膜内注射した。静脈のルートニそのように注
射したマウスが腫瘍抗原に対するＤＴＨ反応性を減少さ
せるという証拠（前記の実施例Ｂ−３参照）にかんがみ
えらばなかった。
第１の組の実験において、マウス（グループ当り２０匹
）に％Ａｂ４．７２または〜４ｂ８．２Ｃ対照標準）の
いづれかを注射した。パイロット試験により受は入れ体
の約９０チに漸進的腫瘍成長を生ぜしめた投与量に８い
て、マウスは５日後にＡｆＣＡ−１４９０により誘発さ
れた。ｍＡｂ４．７２による誘発は対照標準に比べて５
〜９日だけ移植Ｍ　ＣＡ　−１４９０肉膝の発現を遅延
させたが、＃退的に成長する腫瘍のため死んで行くマウ
スの伜には有意Ｍはなρ）つた。抗原的に関係のないＭ
（：’、４−１５１１肉腫の成長は影τ１ｇを受けなか
った。−６４，７２の注射蓋を変えても結果は改善され
たかつた。むしろ、ＤＴＨ″＋：誘発しうるｍ／１ｂ４
．７２の社の１０倍をマウスが受ける１つの実験におい
て、ＭＣＡ−１４９０の成長は対照標準マウスと対照標
準腫瘍の双方と比べて加速された。抗イデイオタイプ抗
体を使用するウィルス抗原に対する免疫の操作において
二元効果も報告された（　Ｋａｎ％ｇｄｙ＋Ｒ，Ｃ、＆
　Ｄｔｓａ　ｇ　ｓｍａｎ＊Ｇ、Ｒ，＋　１９８４　、
　／。
Ｅｚｐ−Ｍａｄ、　　１５９　：　６５５　：　Ｋａ％
％ａｄｙ、−Ｒ，Ｃ，等、１９Ｂ４．Ｊ、Ｖｔｒｏｌ、
５０：９５１）。
第２の組の実験において、マウスにまず、’ｄＣ，４−
１４９０を皮下注射し、７〜８日後に１００μσのｍＡ
ｂを腹膜内注射した。この時点でマウスのＦＪ５０％に
？いて腫瘍が辛うじて崩れる程度になった。抗体注射を
全４回にわたって４〜５日おきにくりかえした。ｍＡ　
ｂ　４．７２を与えた１０匹のマウスのすべてにおいて
、始めの小さい腫瘍結節は実験が６週間後に終ったとぎ
退化した。この時点で、対照標準％Ａｂ８．２を与えた
１０匹のマウスの５ちの６匹は漸増して成長するｕｙｔ
ｒをもっており、その六回ａｒｉ０．２０２以上であっ
た。２つのグループの間のこの相違は０．。２５イ／チ
以下のＰにおいて顕著であった。
この治療形体の限界を試験するために、腫瘍細胞の投与
址を、受入れ体の１００％が生成するに必要な量の２倍
をａ筋細胞に与えることによって増加した。２つの抗原
的に異なる肉）厘ＭＣｌ−１４９０％よびＡｆＣＡ−１
５１１を適切な抗イデイオタイプｆｌＬ／４ｂ（それぞ
れ４．７２および５．９６　）で平行して治療した。マ
ウスのすべてが辛うじて手に触れる腫瘍（０，２α２以
上）をもつ、移植後９日目に出発して、１０匹のマウス
の各グループに−ｂ４．７２　（）ＳｆＣ，４−１４９
０に関連）、ｆｌＬＡｂ５．９６（）ＫＣＡ−１５１１
に関連）、ｍ１ｂ８．２（対照標準）、または希釈剤（
別の対照標準つを注射した。第５図に示すように、ｍＡ
ｂ４．７２を用いる治ｆｉはＭＣＡ−１４９０の成長を
限定した力昂ＩＣＡ−１５１１の成長は限定せず、そし
て−ｂ５．９６を用いる治療は同様にＭＣＡ−１５１１
を阻止したがＭＣｌ−１４９０は阻止しな力・つた。適
切な抗イディオタイプ−ｂを受けるマウスと３櫨の対照
様＊（不適切な抗イデイオタイプ−６、ｍＡｂ８．２ま
たは希釈剤）のいづれかを受けるマウスとの間の差異は
０００１以下のＰにおい℃統計的に有意である。第６図
は−ｂ４．７２またＦｉシ４ｂ５．９６で治療した各グ
ループのＭｕをもつマウスの数を示すことによってこれ
らのデータを更に詳細に示している。適切な抗イデイオ
タイプ抗体を受ける２つのグループのそれぞれにおいて
、１０匹の治療したマウスのうちの５匹または７匹に８
いて腫瘍が退化し、そして（この２つのグループのそれ
ぞれにおける）これらのマウスのうちの３匹は最後の抗
体ａ射後の２週間、腫瘍のない状態を保った。この時点
において、対照標準グループのマウスのすべては１．５
ｃｒｎ”以上の表面積の＆ｉをもち、そし℃これらのマ
ウスのうちの若干ｔ−を腫瘍により既（死んだ。
我々は確立された肉腫ＭＣｌ−１４９０およびＭＣＡ−
１５１１をもつマウスの、適切な抗イデイオタイプｍＡ
ｂの腹膜内注射を用いる治療は、著るしい抗腫瘍活性を
もっと結論した。
実　施　例　Ｂ−７，（討議と実験） 我々は、成長しつつある肉腫をもつ或いはこのような腫
瘍に対する免疫を行なったマウス中にＴ細胞および抗イ
ディオタイプＢＭＢ胞が発生された証拠をここに述べる
。同じイデイオトープをもつＴ細胞Ｆｉ腫瘍特異性ＤＴ
Ｈを伝達する細胞および可溶性のａ瘍特異性抑制体因子
を作る細胞を含んでいた。抗イデイオタイプｍＡｂを使
用することによって、我々Ｆｉ適切な腫瘍抗原を発現す
る確立された共遺伝子肉腫の成長を限定するよう抗腫瘍
応答を操作することができた。
２つのｆＩＩＡｈ４．７２と５．９６を使用した。それ
らはそれぞれ肉腫ＭＣＡ−Ｌ４９０またはＭＣＡ−１５
１１に対して免疫されたＢ　Ａ　Ｌ　Ｈ／　６マウスか
ら単離された。我々はこの２つのｍＡｂを、それらの機
能に関する３つの発見にかんがみ抗イデイオトープであ
ると見做す。第１Ｋ、それぞれのｍＡｂは腫瘍抗原の不
在下に共遺伝子マウス中に腫瘍特異性ＤＴＩＩを誘発さ
ぜた。第２に、この誘発は制限されたアロタイプであっ
た。第３にいづれのｍＡｂも免疫用腫瘍に結合しなかっ
た。
ｍＡｂ４．７２によって次定されるイデイオトーブは、
Ｉｆ　ＣＡ−１４９０に対するＤＴＨを伝達するＴ細胞
上で確認された。これは、ｍＡｂ４．７２を使用してＭ
ＣＡ−１４９０に応答するマウスのリンパ結節から、４
．７２決定イデイオトーブを発現し且つそこから７’ｙ
Ｊ胞腺９０．３を確立しうるリンパ細胞の小首分を分離
した。９０．３細胞を受ける純マウスは、’ｄＣＡ−１
４９０に対するＤＴＨを示したがＭＣＡ−１５１１に対
するＤＴｆｌは示さず、そして９０．３細胞は肉腫Ａｉ
ＣＡ−１４９０の増殖を阻止したが肉腫Ｍ　ＣＡ　−１
５１０またＶｉＭＣＡ−１５１１の増殖は阻止しなかつ
？Ｑ、　Ｃｈａｇｖｇ等（１９Ｂ６．Ｊ、ＥｚｐＪｆａ
ｄ、１６３：１１００）ｔｉネズミ科動物白血病の進行
を限定するＬｌ　１＋２″″　Ｔ細胞の能力を実証した
。然しそのプロトコールは抗原ならびにＩＬ−２による
培養Ｊ１１ｔｌ胞の刺激を含む。９０．３細胞のａ瘍特
ｉ毒性はそれらがリンパキンＴ重任化キラー細胞である
ことに反対して−じらｎている。
ＪＩＣＡ−１４９０に対するＤＴＨＴ答を抑制するＴ細
胞の生成物ｔユ％Ａｂ４．７２によって決定されるイデ
イオトープを発現することが見出された。これは成長し
つつめるＭＣＡ−ｌ　４９０腫１をｔをもつマウスから
のチモサイト（ｔｈｙｍｏｃｙ−ｔ＃＃）をＢｉＰ’５
１４７細胞と組合させることによってえられた４独のＴ
細胞−・イブリドーマについての研究に８いて示された
（　Ｎｍ１ｓｏ勧に０等、１９８５．　ｉｎ　Ｔ−Ｃａ
１１Ｈｙｂｒｉｄｏｔｎａａ、Ｔａｓｃｚｓｉｇ＊Ｍ、
Ｊ、　１ｌｉｉｌ果、　ＣＲＣＰｒｅｓｓ。
ｐ１２９）。これらのハイブリドーマの生成物は特異的
に免疫ノ５ｔｔｌ胞分解性Ｔ　７４１胞によるＳｔ　Ｃ
，標ｆＪｔ、ＡｆＣＡ−１４，９０細胞の分解を抑制す
るものであることが既に見出されて２つ（Ｎａｌｓｏｎ
、に、Ａ、等、１９８０　、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ　、
Ａｔａｄ。
Ｓｅｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　７７　：　２８６６　）、セし
てＭＣＡ−１４９０に対するＤ　Ｔ　ＩＩの誘発を抑制
するＣとも既に見出されていた（　Ｃｏｒｙ、Ｊ−等、
　１９８１　　、ｉｎ　　ＡｌｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎ
ｔｉｂｏｄｉａｓ　ａｔｓｄ　Ｔ　Ｃｅ１ｌ　ＩＩｙｂ
ｒｉｄｏｍａａ＋Ｈａｍｔｎｇｒｉ−％、、Ｇ、Ｊ１等
、編集ｅ　Ｅｌ　５ａｖｉｏｒ／Ｎｏｒｔｈ−１ｉｎｔ
　ｌａｎ認識ｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｇａｓ、ｐ、５
０３　）。この抑制はＩｆ　ＣＡ−１４９０に対する応
答について特異的であり且つ制限されたアロタイプであ
った。更に、これらの抑制体因子は、溶離によって回収
しうるＡｉＣＡ−１４９０ＭＢ胞に結合するコトが見出
された（　Ｎｇ　ｌ　ａ　ｏｘ、Ｋ　、Ａ、等、１９８
０．前記文献）。ここに述べた実施例にｇいて、我々は
ｒｙ４　ｂ　４．７２がＭＣＡ−１４９ＯＮ胞への４つ
の抑制体因子のすべての結合を阻止することを実証した
。このことは、−ｂ　４．７２がＭＣＡ−１４９０１ｍ
胞上０腫瘍抗原に結合する抑制体因子の場に付随してい
ることを示唆するものである。ｍＡｂ４．７２によって
決定されるイデイオトーブをもつＴ抑制体因子は％Ａｂ
４．７２によるＤＴｔｌの誘発と腺９ｔ１．３（前述の
如く、ｔｔｖ４ｂ４．７２決定イディオトーブを発現す
る）からのＴ細胞によるＭＣＡ−１４９０に対するＤＴ
ＩＩの転写の双方を抑制し５るものでありえた。
これらのデータをもとにして、我々は次のモデルを示唆
する：　ｍＡｂ　４．７２は、腫瘍特異性の規制Ｔ　Ａ
、ＩＪＪ胞上に生じ且つＭＣＡ−１４９０に対するＢＡ
ＬＢ／ｃマウスの免疫応答において優勢であるイデイオ
トープを決定する。この応答中、同一の又は又追及応性
のイデイオトープはＢ細胞クローン生産性抗イディオタ
イプ抗体を活性化する。後者の抗体は抑制体Ｔｄ胞とＤ
ＴＩＩ反応性ＴｉＪＡ胞の双方を規制すると想定される
。我々のモデルは、種々の研％Ｒｔｘｊａｍｋｉ＋に、
　＆　Ｔａｋａｔｎｏｒｉ＋Ｔ　リ１９８３　、　Ａｎ
ｎ、Ｒｅｖ、Ｉｔｎｍｓｎｏｌ。
１　　：　　５６９　　：Ｕｒｂａｉｎ、Ｊ、等、　Ａ
ｎｎ、ＩｍｔｎｓｎｏｌＡ３３Ｄ：１７９　：　Ｂ１５
ｚ、Ｈ，＆　ｆＶｉｇｔｇＬｌｒＨ１１９７８、Ｊ。
Ｅｘ　ｐ　０Ｍ　ｇ　ｄ　、１４７　＊　６３　；　Ｅ
ｒ　ｔ　ｌ　＋Ｈ−Ｃ−／　、ｔ　等、１９８２゜Ｐｒ
ｏｅ、Ｎａｔｌ　、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、７
９　：　７４７９　）によって支持されているように、
Ｔ細胞とＢ細胞がイディオタイプ・ネットワークで相互
作用Ｔると仮定する。我々のモデルはまたＢ細胞誘導抗
イディオタイプ抗体（我々の実施例におけるｍＡｂ　４
．７２　）がＴ細胞イデイオトーブに応答して生ずるが
平行セットのイディオトーブ陽性Ｂａ＠に応答しては生
じないと仮定する。これを裏付けるに際して、我々はＭ
Ｃｌ−１４９０に対するマウスの応答における腫瘍細胞
結合性抗体の証拠をもたず、また我々ＦｉｍＡｂ４．７
２を用いる免疫によりこのような抗体を誘発させること
もできなかった。これは、イディオトープ陽性の抗原反
応性Ｔ細胞を実証することの谷易さと対照的である。こ
れらのデータはＴ細胞イディオトープがＢ細胞区画にお
いて抗イデイオタイプ応答を誘発することができ、また
Ｔ細胞応答を上方とＦ方の両刀向に規制することができ
るという仮説を支持している。
別のモデルは５．ｒ、Ａｂ４，７２決定イデイオトープ
がｋＩｃＡ−１４９０Ｍ瘍抗原の内部像を示すことを仮
定する。然し、このモデルをｔｎＡｂ４．７２によるＤ
ＴＨの誘発のアロタイ７’（Ｉｙｋ−１）制限と酸１和
させることはＥｆｉ建である。
現在の研究において、我々は、Ｍ（、’Ａ−ｔ　４９０
をもつマウスからの血清の抑制活性を除くための成功裡
の試みにおいて抗イデイオタイプｍＡｂ　４゜７２を使
用した。ＭＣＡ−１４９０に対するＩ）ＴＨの抑制を測
定することにより検出されうる循環血清因子のすべては
４．７２決定イデイオ）　−ブを発現するようにみえた
。
前述の如く、我々は次に抗イデイオタイプｍＡｂを使用
することによって腫瘍に対する免疫応答を操作すること
の容易性を試１ａシた。ｍＡｂ　４．７２と５．９６を
えらんだ。これらは両者とも純マウスのＤＴＩＩ反応注
〜胞’に９発させることができ、セしてｍＡｈの１つで
ある４、７２によって決定されるイデイオトープが免疫
マウスのＤＴＨ反応性＋ｒＪｌ胞上に発現されるからで
ある。我々の第１の組の実験は膝瘍郡植前にｍＡｂを与
えることによるｒａｉ：４ｍ止の疑問の解明に関し、そ
して第２の組の実験は既に確立された腫瘍の治療に関す
る。マウスがＭＣＡ−１４９０細胞による誘発前にｍＡ
ｈ　４．７２を受けたとき、腫瘍の増殖は通常数日だけ
遅延された。これらの抗腫瘍効果はｍＡｂ投与曾の増加
によって改良されず、事実、ｎａＡｂの１００倍増加を
用いる１つの実験は加速された腫傷成長を示した。
第２の組の実験において、我々は確立された肉腫をもつ
マウスに適切な抗イデイオタイプｍＡｂを腹膜内注射す
ることの治療効果を検討した。慣Ａｌ）４．７２の注射
（ｍＡｂ５．９６の注射ではない）は肉腫ＭＣＡ−１４
９０の成長を限足し、更にｉｓなことｒこはこのような
肉腫の１０例のうち３例について退化が誘発され、治療
マウスの生存が延はされた。鴇Ａｂ５．９６の注射（ｍ
Ａｂ４．７２の注射ではない）は肉腫ＭＣＡ−１５１１
をもつマウスに同様の効果をもち、同様に肉腫の１０例
のうち３例について退化が誘発された。
実施例Ｃ 体 マウスのモノクローナル抗体（ｍＡｂ　）　ＭＧ　−２
１（Ｉｌｇ１１ａｔｒｏｔｇ等、１９８５　ｅ　Ｐｒｏ
ｃ　、Ｎａｔ　ｌ　、Ａｃａｄ。
Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８２：１４９９　１５０２）＄１
はとんどのヒト・メラノーマからの細胞表面に発現され
る且つ正常細胞に痕跡量存在するＧＤ３ガングリオシー
ド抗原を認識する（　ＩＢｐｐｏｌｄ、ＩＩ’、Ｇ９等
、１９８０　、　Ｐｒｏａ　、Ｎａｔ　ｌ　。
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　　７７：６１１４　
６ＨＢ：Ｎｓｄａ１ｍａｎ＋Ｅ−等、１９８２　、　Ｊ
、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｇｍ、２５７：１２７５２　１２７５
６：Ｙａｈ、Ｍ、Ｙ、等、１９８２゜Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａ
ｎｃａｒ　　２９：２６９−２７５）。ｒｎＡｂＮＧ−
２１は原料補形としてのヒト血清によりＧＤ３陽注細注
細胞する補形依存性細胞＠（（、’ＤＣ）を示し、且つ
ヒト・リンパｌ−胞によりＧＤ３陽性訓胞に対する抗体
依存性細胞毒（ＡＤＣＣ）を示す（Ｈ＃１ｌｚｔｒｏｔ
ｎ等、１９８５゜上記文献几ＮＧ−２１が結合するＧＤ
３抗ｙｉ、は受動投与マウスｍＡｂ、Ｒ２４の標的とし
て使用され若干の成功をおさめたＣＨｏｕｇｈｔｏｎ＊
Ａ、Ｎ３等、１９８５　、　Ｐｒｏａ、Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８２＝１２４２　１２
４６）。Ｒ２４の特異性および生物学的活性はＭＧ−２
１のそれと同様でめる。後記の実施例に述べるように、
我々はＡｆＧ−２１（Ａｂｌ）をマウス会モノクローナ
ル抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２）を発生させるだめの
免疫原として使用し、これを２Ｃ１と名づけた。このｍ
、４ｂ　（ＩｇＧ２ａ）ＦｉＧＤ３陽性メラノーマ細胞
腺へのＡｆＧ−２１の結合を阻止する能力によってえら
ばれた。ｔｐ＋Ａ　ｂ　２　（：’　Ｉ　Ｆｉ高い活動
性でＭＧ−２１に結合することが見出されたが、他の６
穂のマウスｔｐｈＡｂのいづれに対しても結合しなかっ
た。それはＧＤ３閤注メラノーマ細胞への並びに精製Ｇ
Ｄ３へのＭＧ−２１の結合を見金に廃止さぜることがで
き、またそれは投与量依存型でＣ１）ＣおよびＡＩ）Ｃ
Ｃの性質を阻止しｔら悔Ａｈ２（？１を探査剤として使
用することによって、治療または診断の目的で、ｍＡｂ
　　ＭＧ−２１を受ける患者のｍＡｂＫＧ−２１に対す
るヒト抗体を検知するための分子［が開発された。本発
明のこの態様のそれぞれの工程についての詳＃ｌな記述
を以下に示す。
材料と方法 （ｉｉ）マウス 生後８〜１２週のＢＡＬＢ／６マウス（雌）をザ・アニ
マル・ファシリテイーズ・オブーザΦフレンド・ハツテ
ンン７・力／サー・リサーチ・センター（米国ワシ７ト
／州シャトル）から購入した。
（２）標的細胞 ヒト・メラノーマ細胞腺Ｍ−２６６９クローン１３を使
用した。簡単のため、ここでＦ−ＩＭ　−２６６９と呼
ぶ。このものは転移メラノーマから確立され且つクロー
７された（ＢａａｓｍｉｇｒｅＲ−Ｌ−等、１９８６　
、　Ｊ、Ｎｘｃ　ｌ　、Ｍｇｄ　。
２７：８２４−８２８）。このクローンからの細胞Ｆｉ
結合分析によつ℃測定してｍＡｂ　　ＭＧ−２１によっ
て決定されるＧＤ３抗原を強く発現する（＜ｄ、）。こ
のメラノーマ細胞を１５％の熱不活性化胎児子牛血清（
米国ユタ州ローガンのハイクローン−ラボラトリーズ・
インコーホレーテッド）を宮み、ＮａＨＣＯ，で緩衝さ
れ、ペニシリン（１００μ／ｉｉ／）、ストレプトマイ
シン（１００■／ｗＬｔ片およびＬ−グルタミｙ（２９
０η／１）のｆ＋Ｍ充されたＩＩＰＭ１１６４０培養媒
質（米国ニューヨーク州グランド・アイラ／ドのギブコ
）中で空気中６％ＣＯ２に８いてｇ長させた。
（３）循脂質 ＧＤ３ガングリオシード抗原が上述のＡＩ　−２６６９
クローン１３メラノーマ細胞からｆ＋￥製され（Ｎｓｄ
ｇ１ｍａ外、Ｅ　。
等、１９Ｂ２．Ｊ、ＢｉｏＥ、Ｃｈａｍ、２５７＝１２
７５２−１２７５６）、そしてフレッド−ハラチント／
・力／サー−リテーテ・センター（米国ワシントン州）
のセンイチロ−・ハコモリ博士から提供を受けた。
（４）モノクローナル抗体 ＭＧ−２１（１１ａ１１ｘｔｒｏｍｒｌ　、等、１９８
５．Ｆｒｏｇ。
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　８２　：
１４９９−１５０２）ｕＦＪｓｏ〜９０％のヒト・メラ
ノーマ上で強く発現するＧＤ３ガングリオシード抗原に
結合するＩＱＧ３抗体でろる（　ｔｈｕｄｓ　１ｍａｎ
、Ｅ、等、１９８２　、　Ｊ、ＢｉｏＬ　、Ｃｈｇｒｎ
、２５７：１２７５２−１２７５６；ＹｓｈＪｉ−）’
、　１９８２．Ｉｎｔ。
Ｊ、Ｃａｘｅｇｒ　　２９　：　２６９−２７５　）。
ＭＧ−２１Ｖｉヒト血清の存在下でＣＤＣを伝達し、そ
してヒト・周囲血液リンパ細胞（ＰＢＬ）の存在下でＡ
ＤＣＣを伝達し、セし℃ありのま筐のマウス中でのヒト
・メラノーマ・異種接合（ｚｅｎｏｇｒａｆｔ）の増殖
を阻止する（　Ｈａ　ｌ　ｌ　ａ　ｔｒｏｔｎ、　Ｉ　
。
等、１９８５　、　Ｐｒｏｅ、Ｎａｔｌ　、Ａｅａｄ、
Ｓｅｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ。
８２：１４９９−１５０２）。
ｍＡｂ　２Ａ−１４ｎＧＤ３ガングリオシード抗原に結
合するが、交差ブロッキング実験によって７１７Ｇ−２
１により認識されるものとｒｉ４なると思われるエピト
ープには結合しない１ｇＧ３である。
ｍＡ６９６．５はＰＯ２（メラノーマ付随細胞表面砧蛋
白）に結合するＩｇＧ２ａでるる（Ｂｒｏｗｎ、Ｊ、Ｐ
、等、１９８１゜Ｊ　、　Ｉ　ｍｍ％％ｏＪ、１２７：
５３９　５４６）。
ｒＩＬＡｈＬ６＃−１はとんどのヒトの癌からの然しメ
ラノーマからのではない細胞上に強く発現する炭水化物
抗原に結合するＩｇＧ２ａである（　Ｉｂ　ｌ　ｌ　ｇ
　ｃｒａｓ、Ｉ　、等、１９８ｂ。
Ｃａｎｃｅｒ　Ｒａｓ、４６：３９１７　３９２３）。
惰ＡｂＬ２０Ｆ’Ｌはとんどのヒトの癌からの然しメラ
ノーマからのではない細胞上に発現する１１０．１’（
ｄ蛋白を確認するＩｇＧ１である（ｉｄ、）。
ｍＡｂ７Ｔ１．ｌは多くのヒトの癌に強く発現する血ｌ
ｉＡ型抗原に特異のＩＱＧ３免疫グロブリ／である。
ｍＡｂ　　ＩＯ３，ＩＯは多くのヒトの癌に発現される
皿ｇｊ、Ａ類似抗原に特異のＧＱＧ　３抗体である。
惧Ａｈ　　２６．８（Ａｂ２対照標準として使用）はＰ
９７メラノーマ抗原に特異のｍＡｂ　９６．５上のイデ
イオトープに結合する１ｇＧ１でろる。ＭＡｂ２６．８
はＰＯ２への惧Ａｈ９６．５の結合を阻止しつる。
Ｐｌ、１７ｔ’ｉアメリカンΦタイプ・カルチャー・コ
レクションから入手したＩ　ｇＧ　２　ａマウス骨髄腫
蛋白である（ＡＴＣＣ受理番号／＃６ＴＩＢ１０）。
これらの抗体はＥ、等（１９７８、ｌｍｍ５ｂｎｏａ五
ａｍｔｓｔｒｙ１５：４２９−４３６）が述べているよ
うに蛋白ＡセファロースＣＬ−４Ｅ上の親和クロマトグ
ラフによって使用済み培養媒質からまたは腹水流体から
ｖＩ’ｘされた。
（５）　　抗体とキーホール・リンペット・ヘモシアニ
ンとの結合 抗体ＭＧ−２１をＥＯｎａ等の方法（１９７９、ｔ２．
、。
Ｍａｄ、１４９：８１５　８２３）に従つ℃ゲルタール
アルデヒドの存在下での化学的交差結合によってキーホ
ール・リンベット−ヘモシアニアｖｃ結合させた。簡単
にいうと、１ｍｌのｍＡｂ　ＭＧ−２Ｉｆｆ液（３，６
ｍｐ／ａ／）をＱ、１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，５）
中のＫＬＨ溶液（３〜／ゴ）の１ｍどと混合した。ゲル
タールアルデヒド（米国ミズリー州セントルイスのシグ
マ・ケミカルンの０．２５％浴液１ｍｚの添加によって
結合を開始させｔム混合物を室温で１時間搗とうさせた
。１Ｍのグリシン２５０μｔを加えることによって反応
を停止させた。抗体−ＡＬＨ結合体を使用前に一２０℃
で凍結貯蔵した。
生後８週の２匹のＢＡＬＢ／ｅマウス（雌）を完全７０
インド補薬中のＭＧ−２１−ＫＬＨ結合体１００μｇで
腹膜的注射して免役させた。２週間後に同景の結合体を
不完全フロイント補薬中で腹膜的注射した。更に８週後
に、これらのマウスに食塩中の結合体を再び補給した。
最後の免疫の４日後に、膵臓を除き、その収集した細胞
をポリエチレングリコールの使用によって＃Ｓ−１マウ
ス・ミエロ−マ細胞と融合させた。ＭＧ−２１に特異の
抗イデイオタイプ抗体を分泌するノ・イブリドーマをえ
らび、ＨＡＴ媒質中で成長させ、そして確立された方法
（Ｙａｈ、Ｍ、　−Ｙ、等、１９７９　、　Ｐｒｏｅ、
Ｎａｔｌ　、Ａｃａｄ−５ｅｉ−Ｕ、Ｓ、Ａ、　７６　
：２９２７−２９３１）を使用してクローンした。
抗体結合の酵素結合免疫吸収分析（ＥＬＩＳＡ）を使用
して抗イデイオタイプ抗体を分泌するノ・イブリドーマ
の初期の選別を行なった。この分析において、ノ・イブ
リドーマ培養物の上溌液を試験して、抗イデイオタイプ
抗体（“Ａｂ２つの存在の証拠として、Ｊ／−２６６９
細胞へのＭＧ−２１（“、（６１”）の結合の阻止を副
べた。ポリ塩化ビニル−ブレー）（ｉ０Ｊ、Ｉｔｌ胞／
井戸）中に棟付けして０．５％ゲルタールアルデヒドで
固定したＭ−２６６９メラノーマ細胞を標的として使用
した。情ＡｂＭＧ−２１＜５μσ／　１１１　）の１０
０μｔを等容量の−・イブリドーマ上澄液と混合し、４
℃で２〜４時間培養してから上記の標的細胞に加えた。
３７℃で１時間更に培養した後、これらのプレートをＰ
ＢＳ中の０．。２５％トウイーンー２０　（ＰＢＳ−ト
ウイー７緩衝叡で３回洗浄した。これらの細胞を次いで
ＰＢＳ−トウイーン緩衝液中でＸｏ、。。０に希釈した
ヤギ抗マウスＩ、Ｇ抗体・パーオキシダーゼ結合体（米
国インジアナ州インジアナポリスのボーリンガ−・マン
ハイム・バイオケミカル）の１００μｔを用い３７℃で
３０分間培養し、再び洗浄した。
クエン酸塩／リン酸塩（ｐ／７５．０）中に０．０１５
％１１．Ｕ。
を含むオルソ−フェニレンジアミン＜ｏｐｎ）の１００
μｔをパーオキシダーゼの基質としてそれぞれの井戸に
分配した。約３〜５分後に、１．３ＨのＩＩｔ　Ｓ０４
　　の１００μｔを加えて酵素−基質の反応を閉鎖した
。それぞれの井戸についてＧＳＣマイクロプレート・リ
ーダー（米国ワシ７トン州シアトルのジエ不テイツク・
スイステム・コーポレーション）中で吸収を４９２　ｎ
ｍ／　６３０ｎｎｈ　２元波長で測定した。
細胞およびＧＤ３抗原に対する。ｙａ−２１（Ａｂｌ）
の結合に及ぼす抗イデイオタイプ抗体の阻止効果の投与
量依存性を検討するために、固定濃度（５μｃｔ／ｒｉ
ｄ：）のＭＧ−２１の１００μｔを種々の濃度の適切な
抗イデイオタイプのまたは対照標準の抗体１００　ＩＩ
ｔと混合し、次いでｉ’ｐｆ　−２６６９１Ｊｌ胞（１
０’／井戸）まりｔ−１ＭｍＧｌ）　３［Ｊｊｉ　（２
０Ｏｆｓｇ１５０μｔ／井戸）を予め被覆した井戸に加
えた。その他の操作法は上記と同じである。
行異櫨類のマウス免疫グロブリンに対するヤギ抗血法（
米国アラバマ州バーミ／トンのサウザン・バイオテクノ
ロジー−アンシエーシエン〕を使用した。このよ５な抗
血清のそれぞれ５０μｔをＰｌｕｓ中で希釈しく１μｔ
／ＩＬｔ　）、９６井戸のプレート（米国バージニア州
アレキサ／ドリアのダイナ・チック）中に入れ、４℃で
一夜培養した。これらのプレートをＰＢＳ−トウイー７
緩衝液で一度洗浄し、次いで１５％胎児子牛血清（Ｆｅ
２）を含むＲＰＭＩ１６４０媒質の１００μｔ／＃戸で
室温にｇいて１時間培養した。洗浄後、５０μｔの−・
イブリドーマ使用済み培養液を加え、次いでこれらのプ
レートを室温で１時間培養し、ＰＢＳ−トウイー７緩衝
液で１回洗浄した。次に、ＰＢＳ−トウイーン緩衝液中
で〆。、。。。に希釈したヤギ抗マウスＩｇＧ抗体の５
０μｔをそれぞれの井戸に加えた。これらの井戸を３７
℃で３０分間培養し、ｐＢｓ−トウイー７緩ｗ１ｇで５
回洗浄し、その後に１００ｐｔｏ）ＯＰＤ基質をそれぞ
れの井戸に加えた。５分後に、１．３＃の１１．Ｓ　Ｏ
，の１００μｔを加えて反応を停止さぞ、吸収なＧＳＣ
マイクロプレート・リーダーで６川定した。
（９３抗イデイオタイプ抗体（Ａｂ２）結合分析結合分
析を使用して、ＮＧ−２１ＣＡｂ１）の結合を阻止する
Ａｂ２の能力が特異性であるか否かを決定した。
０．５μｆ／１００Ｐｔｆ）精製ＮＧ−２１を加えて９
６井戸のポリ塩化ビニル・プレート（米国マサチェーセ
ツツ州ケンブリッジのコースタ−）のそれぞれを被覆し
、その後に１５％ｐｃｓを含むＲＰＭ１１６４０媒質２
００μｔ／＃戸をプラスチックへの抗体の結合を阻止す
るための「封鎖剤」として加えた。洗浄後に１００μｔ
の精製Ａｈ２もしくは対照標準免疫グロブリンＰ１．Ｉ
７をｄ々の濃度で加えた。これらのプレートを３７℃で
３０分間培養してから、ＰＢＳ−トウイーン緩衝液で３
回洗浄した。次いで、同じアイソタイプをもつパーオキ
シダーゼ結合ラビット抗マウスＩ、Ｇの１００　ｐｌを
Ａｂ２として、ＰＢＳ−トウイーン緩衝液中の希釈後に
加えた。３７℃で３０分間培養し次いで十分に洗浄した
後に、１００　ｐｌのＯＰＤを加えて暗所で３〜５分間
層養した。最後に、１００　ｐｔの１．３ＮのＩｆ、Ｓ
ｏ。
を加えた。これらのプレートｆ５ＣＧ５マイクロプレー
ト・リーダーで読んだ。
（１０）抗体の放射性沃素化と直接の１！’Ｉ−Ａｂ２
結合分析１００μｔの情製憔Ａ６を５００μｔのＰＢＳ
中の５００μ−ＣｉのＮｔＬＩ！ＳＩ（米国イリノイ州
アーリ／トン・ハイツ（７）７？−ジャム崇コーポレー
ション）と４０　ｐｏのクローラミンＴにより４℃で３
分間培養した。セファデックスＧ−２５０カラム上のゲ
ル濾過によって標ｇｍＡｂ　を遊離１１！７から分離し
た。比活性は約４　ｘ　１０’　　ｃｐｍ／μｇであっ
た。この標識ｍ　Ａ　ｂを使用前にＰＢＳ中の１５％Ｆ
Ｃ’Ｓ中で希釈した。
Ｍ接（’）’　！’　Ｉ　−Ａ　６２　＆Ｔ合分析（７
）？、：メｒｃ、１５　ｍＪＳＩ　１７）ＮｔＪ　Ｃ。
２５Ｈ（ｐＨ９）中のイｙ々のＮ製ｍＡｂ（５０μｙ／
ｍｌ）のｌ　００　ｐｔを４℃で９６井戸プレート（米
国バージニア州アレキサンドリアのダイナチック）に入
れて一夜培養した。洗浄ｆＫ、１５％ｐｃｓを含むＲＰ
ＭＩ　Ｉ　６４　ｏｉｉ質２００　ｐＬ　Ｋより４℃で
一夜培養することによって井戸を封鎖した。これらのプ
レー）＋１／’ＢＳ−トウイー７ＵｍＫで３回洗浄し、
３０％ＦＣ５ｆ）１００ｐｔ中（’）２ｘ１ｏｓｃｐｔ
ｎの標ＨＡｂ２をそれぞれの井戸に加えて室温で１時間
培養した。十分に洗浄した後に、結合放射能を１００ｐ
ｔの２ＭのＮａＯＨにとかし、試験管に移してガンマ・
カウンター（米国カリフォルニア州アーと／のベックマ
フ）中でカウ／トシた。
（９）抗体−ＦＩＴＣ結合 フルオレセイン・イソチオシア４−ト（ＦＩＴＣ）をＧ
ｏｄｉｎｇの方法（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｊ、ＩＶ、１９７６
　、Ｊ、ｌｍｍ５ｎｏＥ　。
Ｍｅｔｈｏｄｓ　１３：２１５　２１６）によＱｍＡｂ
　　Ｋ結合さぜた。簡単に述べると、２ｍ９の精製Ａｆ
Ｇ−２１をＱ、２ｋｌの炭改塩／Ｍ炭ｔＲ，塩緩衝Ｍ、
（ｐＨ９，５）中で一夜透析した。
ｐｌＴｃ　（米国オレゴン州ジャンクンン市のモレキュ
ラー〇プローブ自インコーポレーテツド）をジメチルス
ルホキシド（１ダ／ｍｌ　）　Ｋとかしたものを４０μ
ｇＦＩＴＣ／■抗体の割合で加えた。混合物を３７℃で
４５分間培養し、その後に結合ｍＡｂを、Ｑ、１％ＮＧ
Ｎ、を含むＰＥＳで平衡化したＧ〜２５セファデックス
・カラムに通すことによって遊離ＦＩＴＣから分離しも
フルオレセイン／抗体の結合比は約３．５〜４．０でろ
った。結合ｍＡｂを、１％生血貨アルブミン（ＢＳＡ）
を含むＰ　Ｂ　Ｓ中で一２０℃で貯峨した。
（功螢’に活性化細胞ンーター分析 螢尤活注化細胞ソーター（ＦＡＣ５）を使用して結化甫
止分析を行なうために、１００μｔのＦＩＴＣ結合、４
／　Ｇ　−２１を、１０％正常マウス血清中の種々の一
度の精製Ａｂ２または対照標準抗体σ月００μｔにより
３７℃で３０分間培養した。次いで抗体混合物を、１ｏ
ｏｐｔのＰＢＳ中にｌ　Ｘ　１０’パラホルムアルデヒ
ド固定Ａ（−２６６９Ｍ１１胞を含む試験管に加えた。
３０分間の培養後に細胞をＰＢＳで２回洗浄し、次いで
カウルター・エピツクスＣ螢光活性化細胞ソーター（米
国フロリダ州〕・イアリーのカウルター−コーポレーシ
ョン）を用いて分析した。データは、相対螢光強度を表
わす訴状螢光当世（ＬＦＥ）として示された。
ＭＧ−２１に特異なＡｂ２がｍＡｂ　ＭＧ−２１の補形
依存性細胞毒性（ｃｌ）ｃ　）を阻止しうるか否かを試
験するために、４時間−″Ｃデ放出分析（／７．目ｓｔ
ｒｏｍ、１．等、１　９８５　　、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ
　、Ａｅａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　　８２　：１４
９９−１５０２）を使用した。簡単に述べれば、１０’
個の標的細胞を１００μＣｉの５ＩＣ，により３７℃で
２時間標識し九標識後に、これらの細胞を３回洗浄し、
１５％ＦＣ５を含むＲＰＭＩ　１６４０媒質中に再懸濁
させ、そして２０，０００個の￥ｉ諏細胞を４５μｔの
ＲＰＡ（ｉｉ）６４０媒質に懸濁させてマイクロタイタ
ーＶボトムプレート（米国バージニア州アレキサンドリ
アのグイナテツク［株］ラボラトリーズ）のそれぞれの
井戸に棟付けした。桟々の濃度の精製ＭＧ−２１を独々
の濃度の精製Ａｂ２（または対照憚１％　ｍＡ　ｂ　）
と結合させてＣＤＣの阻止を試験した。それらを９０μ
ｔ／＃戸の割合で加え、次いで非希釈・非加熱のヒト血
清乞６５μｔ／＃戸の割合で加えた。３７℃で４時間の
培養後に、これらのル−トを４００Ｇで遠心分離し、そ
れぞれの井戸から１００μｔの上Ｕ液を除き、そして放
射能水準をガンマ・カウンター（米国カリフォルニア州
アービノのベツクマ／）により決定した。自然放出を、
抗体または補形に露出されなかった標的細胞から媒質中
に放出されたｃｐｎｔと定４し；そして全放出を、浸透
的に分解された標的ホｄ胞から放出されたｃｐｍと見積
った。細胞毒性（％）は次式によって計算された。
Ａｂ２がｍＡｂ　ＭＧ−２１の抗体依存性ｍ胞の細胞毒
性（ＡＤＣＣ）を阻止しうるか否かを試験するためＫ、
４時間放出分析を使用した。健康なヒトの人体からのＰ
ＢＬを効果体細胞として使用した。それらをフイコルー
ハイペイク（Ｆｉｃｏ１１ＪＩｙｐａｑｓｇ）上で分離
し、低い自然キラー（Ａ’　Ｋ　）　１ＩＩＩＩ胞活性
を予め選別した。低ＮＫ活性（４時間にわたってｌＯ％
禾（−１の５ＩＣ，放出）をもつリンパ細胞のみを使用
した。標的細孔の標識後、それらをＣＤＣ分析について
のマイクロタイタープレートに入れた（２ｘｌＯ’ｆＪ
Ｕ胞／　５０　／Ｉｔ）。５ｏｐｔの槓裏ＭＧ−２１お
よび５０μｔの精製Ａｂ２（または対照標準）を種々の
晩夏で加え、次いで媒質５０ｐｔ中の２ＸＩＯをＪンパ
細胞／井戸を加えた。リンパ細胞：標的ｄｔＢ胞の比は
１００：１でめった。この混合物を空気中に６％のＣＯ
ｌの雰囲気中、３７℃で４時間培養した。次いでプレー
トを遠心分離し、１００μｔの上澄腹をそれぞれの井戸
から移して放射能測定を行なった。ＣＤＣ分析のように
して卸１胞毒性（％）を計算した。
（１５）患者餌清中の抗ＭＧ−２１抗体を検出するため
の競合分析 モノクローナル抗イデイオタイプ抗体（，４ｂ２）を探
査剤として使用する競合分析を、ｍＡｂ　ＭＧ−２１で
処置した患者の血清中の抗ＭＧ−２１抗体を検出するた
めに開発した。簡単に述べると、１５ｙｘＪ／のＡ’　
ａＨＣＯｓ　緩衝液＜ｙ／１９）中のＡｈ２（５μｒｒ
／ｌｎ！　）の１００μｔをファルコン予備結合分析プ
レート（米国カリホルニア州オクスナードのペクトン・
デイツキンン／）のそれぞれの井戸に加え、室温で１時
間培養し、次いでＰＢＳ−トウイー／緩衝液で洗浄した
。７５μｔのｍＡｂＭＧ−２ｘ（１μｇ／ｒｎｔ　）を
等容量の患者からの血清または貯蔵しておいた正常ヒト
血清と共！を４５分間予備培養した。血清はＰＢＳ中で
１：２．５．１：５Ｂよび１：１０に希釈しも次いでこ
の混合物１ＯｐｔをＡｂ２予備被覆プレートに加えた。
室温で更に３０分間培養した後に、プレートなｐｓｓ−
トウイー／緩衝液で２回洗浄した。ＰＢＳ−トウイー／
緩衝液中で１：１．０ＯＯＫ希釈したラビット抗マウス
ＩＱＧ３抗体−パーオキシダーゼ結合体（米国カリフォ
ルニア州すウス・す／フラ／シスコのジムドーラボラト
リーズ・インコーホレーテッド）の１００μｌを加えて
、室温で３０分間培養した。
ｐＢｓ−トウイー７緩衝液で３回洗浄した後に、クエ７
岐塩−リン酸塩（ｐＨ５，０）中０．０１５％Ｈ２０，
を含むＯＰＤ基質１００　ｐＬを井戸洗充てんした。５
分後に、１．３Ａ’のＩＩ！Ｓ０４　の１００μｔを加
え、プレートをＣＳＣマイクロプレート・リーダーで絖
んだ。ｍＡ　ｂ　２　Ｃ１へのＭＧ−２１結合の阻止（
％）を次式により計算した。
雷４ｂ　ＭＧ−２１の相■試験に登録された進行したメ
ラノーマをもつ８人の患者のうちの３人からの血清をこ
の分析によって試験しｔム簡＊に述べれば、５％のヒト
皿漬アルブミン中のＭＧ−２１をこれらの患者に４〜６
時間にわたって注入し、注入を７日間にわたって毎日く
りかえした。
処置前に及び処理後の櫨々の時間において血液試料をと
り、これらの血液試料を分析まで一８０℃で貯快した。
実施例Ｃ−２゜ 結果 ＮＧ−２１で免疫させたマウスからの肺臓細胞をＮＳ−
１ｘａ胞と融合させて、ＭＧ−２１上のイディオタイプ
決定因子に対するｍＡｂを生産しうるハイブリドーマを
発生させｔム後者のｔｍＡｂをＡｈ２と呼ぶ。融合の２
週間後に、ハイプリドーマ上溌欣を試験してＭ−２６６
９細胞へのＭＧ−’１１の結合を阻止する抗体を調べた
。このような活性をもつ１つのハイブリドーマでろる２
Ｃ１をクローンして増殖させた。第７図に示すように、
２Ｃ１ハイブリドーマの上澄液はＭ−２６６９への、４
ｆＧ−２１の結合を阻止したがＭ−２６６９へのそれ自
体の結合Ｆｉｌｔ止しなかった。
ＭＳ−１ミエローマを対照標準として使用したがＮＧ−
２１の結合を阻止しな力・つた。
ハイブリドーマ２Ｃ１は、プリスタン誘発ＢＡＬＢ／ｌ
マウスの腹膜内に接種したとぎ、腹水腫瘍として成長し
た。
ｍＡｂ　２ＣＩはヤギ抗マウスＩｇ特異性の抗血清によ
る固相＃累免疫分析によってＩ、Ｇ２αであることがわ
かった。
第８図に示すように、ｍＡｂ　２ＣＩ　！’１０．０８
μｍ／ｒｕｔ〜２μｇ／ｍｔの間の濃度においてＥＬＩ
ＳＡ中で試験したときＭＧ−２１への強い結合を与え、
かなりな結合Ｆｉ６，４ｎｇ／Ｖにおいても依然として
観察された。’ＱＧ２ａ　ミエローマ蛋白でめる／’１
．１７への結合はみられなかった（第８図）。
（２１、、Ａｈ　−２Ｃ１ｔｄＭＧ−２１に対して特異
性であるＭＧ−２１に対する２Ｃ１の付μ件の程度を決
定するために、′ｔｓ　１−４Ｒ２Ｃ１を使用して結合
分析を行なった。
４１々のヒト腫瘍に対して発生した６徳のマウスｍＡｂ
を対照仏準として官のｔム第９図に示すように、ｍＡｂ
　２ＣＩは、＋ＩＧ−２１に強く結合したが６（１の対
照標準のいづれにも結合せず、そしてこれら６種のうち
の２種（２Ａ−１４および９６．５）はＭＧ−２１によ
って認識されたエビ）　−ブとは異なるメラノーマ付随
抗原に対して特異性であった。
これら２イ１のｍＡｂのうち２Ａ−１４はＭＧ−２１に
よって認識されたものとは異なるＧｌ）３抗原のエピト
ープと反応する。
ｍＡｂ ２６．８とＰｌ、１７はめだった阻止を与えなかった。
結合分析を使用して、Ｍ−２６６１Ｆ＃ＪＪ孔へのＭＧ
−２１（Ａｂｌ）の結合を阻止するのにどれだけの輩の
ｍＡｂ　２（？１がＡｂ２として必要であるかを逸足し
た。表■に示すように、ｍＡ６２（：’１はＭＧ−２１
の濃度に等しいか又はそれより大ぎい０度で存在すると
きＭ−２６６９へのＭＧ−２１の結合を阻止した。２種
の対照標準の免疫グロブリン注） （ｉｉ）データは平均士ＳＥとして示しである。
（２）　　対照僚卒 ＡｂＱなしの対照標準からの統計的有意差ネ　０．０１
未、４のＰ　　本市　０．０２５未７角のＰ平行して行
なった研究にＺいて、ＭＧ−２１によって認識される抗
原である精製ｃｎ３をＡＩ　−２６６９＾ｄ孔の代りに
使用した。ｍＡｂ２ｃ１は投与蛍依存の様式で積装ＧＤ
３ガングリオシードへのＡＩＧ−２１の結合ｔｔｈ止し
たＣ表Ｘ）。
Ｍ　−２６６９細胞へのＭＧ−２１ｆ）結合に及ぼす溝
Ａｈ２Ｃ１の阻止効果をＦＩＴＣ結合ＭＧ−２１を使用
するＦＡＣ５分析によって確認した。ＦＩＴＣ結合ＭＧ
−２１の４０μｙ／ＲＩＣ飽和濃度にほぼ相当する）を
用いて出発し、過剰量のｍＡｂ２ｃＬまたは対照標準を
Ｍ−２６６９細胞に加えた。第４０図Ｆ１２Ｃ１が腫瘍
細胞へのＦＩＴＣ結合ｎＧ−２１の結合を完全に阻止す
るのに対して、対照標準の抗体はそのような阻止効果を
もたないことを示して（・る。
験し７４表℃に示すように、ＮＧ−２１の濃度より大き
い濃度でｍＡ６２Ｃ１を加えることＫよってＭＧ−２１
のＣＤＣｆ−４完全になくなったが、２つの対照標準抗
体（ｍＡｂ２６．８また１ｉＰｌ、１７）のいづれかを
加えることによってはなくならなかった。
従来の実験ｔ’ＬＭＧ−２１がＧＤ３陽性メラノーマ細
胞について強いＣＤＣ−ＭよびＡＤＣＣを与えることを
示した（ｌ１ｇ１１＊ｇｒｏｍ、１．等、　１９８５．
Ｐｒｏｅ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。
Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８２：１４９９　１５０２）。我
々は２０１がこれらの活性になんらかの効果をもつか否
かをここに試ｎに−２１（５μｇ／紅） ＭＧ−２１Ｃ５μｇ／Ｉ１１ｔ） ＭＧ−２１（５μｇ／Ｒｔ） ！ｄＧ−２１（５μｇ／廚） ＭＧ−２１Ｃ５ＰＱ／ｒｄ：） ＭＧ−２１（５μσ／１ｕｌ） ｉｒＧ−ｚｌ（５μｇ／１１ｌｊ） ＭＧ−２１（５μｙ／ｒｔｌ　） ＮＧ−２１Ｃｏｐｙ／ｎｔ） Ｍ（、’−２１（１μｒｔ／ｒｔｔｌ）ＭＧ−２１（１
μｇ／ν） ＭＧ−２１（１μｇ／ｘＬｔ） ＡｆＧ−２１（１μｇ／就） ＭＧ−２１（ｌｐｙ／ＩＩＪｌ） ｌｄＧ−２ｘ（ｌｐグ趣） ＭＧ−２１（ｌＰｔ／ｒｄ−） 衣 ■ なし ｍＡｂ　２Ｃ１（１０μｇ／−） ｖｔＡｂ　２Ｃ１（μｙ／９噂 ｔｙｖｉｂ　２Ｃを　（０，１ｐｇ／Ｒ１）鴇、（６２
６，８＜１ｏｐｙＡ芝をン シ４ｂ　２６．８（ｌμσ／ｒａｔ） Ｐｌ、１７　　（ｌｏμｙ／ｄ） Ｐｌ、１７　　（１μσ／就） なし ｎｉｂ　２ＣＩ　Ｃｌ０１’ｇ／１１１１）Ｗｖｇｂ　
２Ｃ１（１μｇ／Ｉｊ　） ｍｏｂ　２Ｃ１（０，１μｇμ） ｔｐｖ４ｂ　２６．８　（１０μｙ／ｍ１）ｖｎＡｂ　
２６．８　（１μｇ次） Ｐ　１．１７　　（１ｏｐｙ／ｒｔｖ：）Ｐ　Ｌ、１７
　　（１ｆｌｒｔ／ＩＬｌ）１００（対照標憔） ２＊ ６４（対照標準） ０＊ 注） （１）　　細胞会性に補形炙源として正常のヒト血清を
使用して４時間５１Ｃ’、放出分析において決定した。
ヒト血ｆＲ率独については細胞も性はみられなかった。
抗体単独＃ｉ細胞毒性を与えなかった。有怠差はステユ
ーデンツｔｙ４験によって決定し、＄Ｆｉ０．０１未満
のＰを示す。
抗体２Ｃ１も、その−肌がＭＵ−２１の濃度よりも大き
いときＭ−２６６９細胞に対するＡＤＣＣ活住を完全に
阻止したが、２つの対照標準抗体については有意な；更
正はみられなかった（表ｘＩｌ）。
ス Ｘ［［ 注） 、４７Ｇ−２１Ｃ３ｐｒｔ／ｒｔｕ：）ＡｆＧ−２１＜
５μｇ／ｌｓｌ） ＭＧ−２１（５μｇ　／ｌｎｔ　） ＭＧ−２１（５μｇ　／１１ｔ） ｒｓｉｃ−２１Ｃ５ｐｃｔ／ｍｔ＞ 、＋ｉＧ−２ｉ　（５μｇ〜） 、ｙＧ−２１ｃ５ｐｙ／ｒｒｔｔ） ＭＧ−２１Ｃ５ｐｙ／ｍｌ） ＭＧ−２１ＣＩｐＱ／ｍｅ） ＭＧ−２１（１μｇ／ＩＭ） ＭＧ−２１（ＩｐＱ／ｍｌ） ＭＧ−２１（１μｇ次） ＭＧ−２１Ｃ１μｇ／紅） ＮＧ−２１（ｉｉＩＱ／ＦＩＬＥ） ＃に−２１（１μｙ／Ｉ１１） ＭＧ−２１（１μｇ／就） なし ｍｏｂ　２ＣＩＣＩＯｆ’ｔ／’） ｍＡｂ　２Ｃ１（１／’ｇμ） ｍｏｂ　２Ｃ１（０，１／’ＩＦ／Ｉ’）ｒｒｕ４ｂ　
２６．８（ｌｏｐｇ／”）ｍｏｂ　２６．８（ｌｐｇ／
紅） Ｐｌ、１７　　（１０μｍ元） Ｐｌ、１７　　ＣＩμｇ／ｌｎｔ　） なし ｔｙａＡｂ　２Ｃ１（１０μｇ／ｌｄ：）ｍｏｂ　２Ｃ
１（１μｇ／ｒｒｔｔ） ｍｏｂ　２Ｃ■ＣＯ，ｌｐＱ廓） ｒＩＬＡｂ　２６．８（１０μｙ／Ｉｎｔ）ｒｓＡｂ　
２６．８（１μｇ／ｘｔｔ）Ｐｌ、１７　　（１０μｇ
次） １１．１７　　（１μｇ／ＩＩＬｔ） （１）細胞毒性は効果剤（ｅｆｆａｅｔｏｒｘ）として
正常ヒト周囲血液リンパ細胞を使用して４時間５ＩＣｒ
放出分析によって行なった。効果剤細胞と徐的細胞との
比はＩｏｏ：１であった。抗体単独は壽性細胞を与えず
、す／パ細胞単独Ｆｉ６．９％の細胞毒性を与えた。Ａ
ｂＱなしの対照標準と比較した有意差をスチューデンツ
を試験によって計算した。
＊ｆｉＯ１０１未満のＰである。
ｍＡｂ　ｚ（：をはＭＧ−２１に対して特典性でろるの
で、それはＭＧ−２１で処置した患者の血清中のヒト抗
Ｍ　Ｇ　−２１抗体を検出するための試剤として使用す
ることができる。我々は競合分析を開発しく実施例Ｃ−
１の（１５）参照）、それによってｋｌＧ−２１を注射
した患者３人のうちのいずれかからの血清がｍＡｂ２ｃ
１へのＭＧ−２１の結合を阻止したか否かを試験した。
表Ｘ［［［に示すように、これら３人の患者のすべてか
ら、ＭＧ−２１の投与後それぞれ１７日、１８日または
２１日（あるいはそれ以後）にえた血清はｍＡｂ　２Ｃ
１へのＭＧ−２１の強く阻止した（２０〜８３％）。予
備処理血清は貯蔵した正常ヒト血清に比べて１３％禾満
の阻止を与えた。
１　　５ｙｒｔｙ／）ｆ”７日 ２　　５１ｎ９／Ｉｆ”７日 表 Ｘ■ ３　５０Ｌ１９／ｌｄ’７日 注）＊　患者は上記の投与址で７日間毎日ＡｆＧ−、２
１０４〜６時間注入を受けた。処置の開始後、徨々の時
間に飢・て血清試料を抜き出した。牢傘　　血清試料を
ＰＨ５中で１：２．５．１　：　５おＪ：びＪ：　１０
に希ｆｅＬ、り。
我々がここに述べる抗イディオタイプｍＡｂ抗体２Ｃ１
はヒト・メラノーマ付随ＧＤ３ガングリオシード抗涼に
対して特異性のイディオタイプを認２する。ｔ１％Ａｈ
　２Ｃ１は低濃度（ｏ、　ｏ　ｓ　ｐｙ／ｒｎｔ）にお
いてさえ−Ａｈ　ＡｉＧ−２１に結合するが同一または
異なったアイソタイプの曲のｔｎＡｂに＃：ｔＭ合しな
いことが示された。それは投４准依存江の球式で、ＧＤ
３ガングリオシード抗原への並びにＧＤ３陽注Ｍ−２６
６９メラノーマ細胞へのＭＧ−２１の結合を阻止した。
更に、ｍＡｂ　２Ｃ１は、その濃度が＃Ｇ−２１の濃度
より大きい限り、渇ＡｂＭＧ−２１のＣＤＣ活性および
ＡＤＣＣ活性を完全になくした。
ｍＡ　ｂ　ＭＧ　−２１を探査剤として使用して、我々
はＭＧ−２１で治療した患者の血滑中のヒト抗Ｍに−２
１抗体の分析を開発した。同様の分析を他の種類の抗肺
長抗体について開発することができる。Ｍ　Ｇ　−２１
に結合するヒト抗体は、このような抗体が腫瘍排除に導
く免疫応答を誘発させるに十分に扁〈なければ、ＮＧ−
２１による患者の治療後に短い期間（１４〜２１日）し
か存在しないので、このよりな抗体の発達を最小にする
方法は、投与した抗ＦＪＬ瘍抗体による患者の長期間の
治療が望ま！ＬるＪａ合に使用するＣとが想定されうる
。
実施例Ｄ Ｐ９７メラ／−マ抗原に関連するモノクローナル抗イデ
イオタイプ抗体 我々はヒト・メラノーマのＰ９７Ｖｃ原に関連する七ツ
クローナル抗イディオタイプ抗体を作った。これはエプ
トー７’Ｐ９７”Ｋ特異なモノクローナル抗体（ｍｏｂ
）ｒあるｍＡｂ　９６．５を用いてＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／
　６　マウスを免疫させ、このマウスの牌ｇ細胞をＮ５
−１ミエローマｄ胞でハイブリダイズし、モしてｍＡｂ
　９６．５から作られたＦａｂ断片（Ｆａｂ９６．５　
）　ｋ結合する抗体を作るハイプリドーマをえらぶこと
Ｋよって行なわれる。このＡｈ２を、ｖｎＡ　ｂ　９６
．５への及びＰ９７抗原の他のニブトープを決定するＷ
Ｌ１６への結合九ついて、ならびＫｔｎＡｂ　９６．５
とＰ９７との間の結合を阻止する能力について試験した
。Ｐ９７とｍＡｂ９６．５との間の結合を競合的に阻止
する３８！のモノクローナルｍＡ　６２が確認された。
Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｅマウスまたはＣ３Ｈ／ＩＩ、Ｎ
　　マウスのいづれかに注射するとぎ、これら３種のｆ
ｌＬＡ６２のうちの２棟が、ｍＡ　ｂ　９６．５と同じ
イディオタイプを発現する且っＰ９７に対して特異性の
あるＡｈ３を誘発した。すなわち、これら２種のＡｈ２
はＰ９７の「内部鐵」として挙動した。
実施例Ｄ−１゜ 材料と方法 （１）　　動物 生後約６〜８週の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス２よびＣ３Ｈ
／ＨａＮマウスをこの研究を通して使用した。
（２７ヒト・メラノーマ細胞 腺ＳＫ−ＭＥＬ−２８をＰ９７抗原−陽性の標的細胞の
資源として使用した。それぞれの５Ｋ−ＡｆＥＬ　−２
８ａＩＪ４にその表面ににいて約４００，０００分子の
Ｐ９７を発現した。
Ｐ９７遺伝子を移植したＢ１０（Ｃ５７ＨＬ）マウｙ、
−メラノーマヵ）らの細胞（Ｐｔｏｖ凛α外、Ｇ、Ｉ）
、、　１９８６　。
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　　ａｎｄ　　ｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ　　ｏｆ　　ｔルｅｍａｌａｎｏｔｒ
ａｎａｆｇｒｒｉ＊＜Ｐ９７）ｇａｎｇｒＰｈ、Ｉ）。
ｔｔ＜ａｚｇｒｔａｔｓｏｓ、Ｕｎｉｖａｒａ＜ｔｙ　
　ｏｆｔＰ’ａｓ五ｉｎｇｔｏｎ）を使用して可溶性Ｐ
９７抗原を製造した。我々はまた、Ｃ３８／ＩＩＪ　？
　’ｙ　ス・）　ラ／　−マｌ１％ｔＫ　−１７３５−
Ｍ　２カらの細胞腺（２Ａ　）　（Ｆｉｄｌｇｒ、１．
Ｊ、＆　１ｌｅＬｒｔ、１．Ｒ。
１９８１　、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒａｇ、　４１　：　３
２６６−３２６７）を使用した。このものはＰ９７の遺
伝子を移殖した後に約１０６個／細胞のＰ９７分子を発
現する。完全にＰ９７を欠（ｆ−１７３５−Ｊ／２ｆ、
Ｂ胞を親細胞と呼ぶ。２Ａ腺はこれらから誘導されたも
のだからである。
（４）抗体 ヒト・メラノーマ付随−抗原Ｐ９７に対する７櫨の抗体
（Ｂｒｏｗｎ、Ｊ、Ｐ、等、１９８１　、Ｊ、ｌｍｍ５
ｎｏ１．１２７：５３９−５４６）をこの研究に使用し
た。これらの抗体を競合結合阻止分析に使用することに
よってＰ９７の３種のエピトープすなわちＰ９７’（風
Ａ６９６．５Ｍよび４．１による）、Ｐ　９７ｂ（ｍＡ
ｂ　ＨＢ．１．１３３．１および１３３．３による）お
よびＰ　９７’　（ｍＡｂ　８．２および１３３．２に
よる）を製造した。ＭＳ−１ミエローマ細胞により免疫
させたＢＡＬＢ／ｅマウスからの牌Ｆ？Ａ細胞を融合さ
ぜることＫよってエピトープＰ９７ａに対するｍＡｂを
生産するハイブリドーマを得た（前記文献）。バパイ／
消化によってｍＡｂ　９６．５７り）らＦａｂ断片を作
り、これをＦａ６９６．５と呼ぶ（前記文献）。ｍＡｂ
Ｐ’６Ｖ′ｉヒト・メラノーマ細胞上のプロテオグリカ
ン抗原に特異のＩｇＧ２ａである。
これを使用してＦａｂ断片（Ｆａｂ　Ｆ　６と呼ぶ）を
作り、こｎらＦａｂ断片を対照標準として使用した。
抗ｌｅｔを出現さぜるために、ＢＡＬＥ／ｃマウスに積
装ｔｎＡｂ　　９６．５　［キーホール・リンペット・
ヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合させ、次いでフロイント
の完全油薬（米国ミシガン州デトロイトのデイフコ・ラ
ボラトリーズからのＢａｃｔａ　　Ｈ３７Ｒａ）と混合
したもの〕の１００ｐｃｔ　を皮下注射した。１ケ月後
に、これらのマウスにアロインドの不充全輛桑（ディス
コ製品）中のＫＬＨｆｊ合ｔｎＡｈ　９６．５の同量を
腹膜内注射した。次いでこれらのマウスに塩水中のｍＡ
ｂ９６．５を２週間の間隔で１回または２回以上注射し
た。最後の注射後３日して、これらのマウスを殺して牌
ＢｉＡ＃ｌ胞懸濁液を作り、標準技術（Ｋｏｈｌｅｒ、
Ｇ、＆　Ｍｉｌｘｔｅｉｎ＋（−’−＃１９７５　、Ｎ
ａｔｕｒｅ　　２５６　：４９５−４９７）’ｉ使用し
てＭＳ−１マウス・メラノーマ細胞と融合させた。
１次選別をＥＬ　Ｉ　Ｓ　Ａ　（Ｋｏｈｈｔｇｒ、Ｇ、
＆　Ｍｉｌａｔｇｉ＊＋Ｃ，ｅ１９７５．Ｎａｔｕｒｅ
　　２５６：４９５　４９７）にょって行なった。ｔ°
α６９６．５をリンｒｉ／塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中４
μｇ／ｊｌｊの濃度でイムノロン・プレート（米国バー
ジニア州チャ／テイリイのダイナチック・ラボラトリー
ズ）に入れた。次の日にプレートを、０．。２５％のト
ウイーン２０を含むＰＢＳで洗浄し、そして０．。２５
％のトウイー７とｌチの胎児子牛血清（１／Ｃ５）を含
むＰＢＳで１時間培養することによって封鎖（ブロック
）した。成長しつつあるハイブリドーマ細胞を含むそれ
ぞれの井戸からの上澄液（５０μＬ）を塀えた。１時間
後に、ホースラデイツシュ・パーオキシダーゼ（ＨＲＰ
）とｋｅさせたヤギ抗マウス１ｇＧ１〔米国力リホルニ
ア州すンフランシスコのジム）’　Ｃｌｙｎｇｄ）　Ｅ
、０．。２５％トウイーン２０、および１％ＦＣ５′を
ＰＢＳ甲に言む混合物を加えた。１時間の培養後に、プ
レート処理Ｆａｂ　９６．５に結合している抗体ヲ襄造
者（ジムド）の指針とにリオルソフェニレン書ジアミン
（ＯＰＤ）を加えることによって恢出した。これらのプ
レートを４９２　ｎｍ／６３０ｆｉｍの吸収において自
動マイクロプレート・リーダー（米国ワシントン州シア
トルのジエネテイツク・スイテムズ・コーポレーション
）中で読んだ。ｍＡ　ｂ　Ｆ　６からのＦｃＬｂ断片を
対照標準として使用し、Ｆａｂ９６．５に結合するがＦ
ａｂＦ６には結合しない−Ａｈ＠作るハイブリドーマの
みを更なる試験用に保持しｔム 上澄液の活性を更に試験するために、分析を行ないこの
分子ｒＩｃ　ｉｃ３いて上澄液を２倍に希釈し、慣Ａｂ
９６．５の一部と結合さぜ、そしてＦａ６９６．５をプ
レート処理したイムノロ／井戸に加えた。ヤギ抗マウス
Ｉ、ＧおよびＯＰＤを添加した後、プレート処理Ｆａｂ
への上Ｕｅ、の結合を阻止する添加ｍＡ６９６．５の１
ｉヒカを検量した。Ｃの分析もＰ９７″以外のＰ９７エ
ピトープを決定するｎ＋Ａｂへの結合について抗Ｉｄを
試験するのに使用した。
Ｆａｂ９６．５に結合するがＦａｂＦ６には結合しない
抗体を作るハイブリドーマを限定希釈によって２回クロ
ーン、し、その後にそれらｔｍ殖して腹水生産用にプリ
スタンープライムドＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した。
（６）精製−抗イデイオタイプ抗体の研究飽和硫酸アン
モニウムによる沈殿によってＡｂ２をｆ＃ＩＭした（Ａ
ｆｉｓｈ＠１１、Ｂ、＆　Ｓｈｓｉｇｉ＋Ｓ、、１９７
９　ｖ　ｉ％Ｓａ１ｇｃｔ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ　
Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　ＩｒＩｒｎｍ５ｔｎｏｌｏ。
Ｗ、１１．Ｆｒｇａｍｍ％＆　Ｃｏ、、ｐｐ　２７８−
２８１　）ｏ　Ｂ９７へのｍＡｂ　９６．５の結合ｔｌ
−阻止しうる抗１ｄを確認するために、ＳＫ　　ＭＥＬ
−２ｆ３メラノーマ細胞を１０’細胞／井戸でプレート
処理した。精製Ａｂ２をｍＡｂ　　９６．５　（１μｒ
ｔ／Ｍｌ）と混合し島メラノーマ細胞へのｍＡｂ９６．
５の結合の阻止を前記のようなりギ抗マウスＨ１？Ｐ結
合体の添加によって検出した。この桟のいくつかの試験
も−・イブリドーマ上澄液について行なつｔム 精製Ａｂ２がＦｃＬ６９６．５の抗原結合性の場を封鎖
しうるか否かを研究するために、Ｆａｂ９６．５を入れ
たイムノロン・プレートの井戸に禎々の濃度のＡｂ２を
加えた。移植したＢ１６マウス・メラノーマ細胞から分
離したＰ９７抗原を放射能沃素化した（Ｒｏａａ、Ｔｏ
Ｍ−等、１９８６゜Ｐｒｏａ　、Ｎａｔ　ｔ　、Ａａａ
ｄ、Ｓｅｉ　、Ｕ、Ｓ、Ａ、　８３　：　１２６１−１
２６５）。２Ｘ１０”ｅｐｔｎの標識Ｐ９７を加え、井
戸当りの結合カウント数を求めた。
櫨’ｅのｒｌｋ度ｃＤｆ＃ｇＡｂ　２　ｔｉｅ−足置ｒ
Ｄ”’　Ｉ　（ｆｌｔ、Ｐ　９７に原と混合し、その混
合物をＦａｂ５Ｊ６．５を被覆したプレートに加えた。
１時間後に、プレートを洗浄し、２ＮのＮａ　ＯＨを加
え、井戸の内容物をガンマ・カウンター中でカウントし
た。
（８）生体内でのＡＢ３の研究 生後６〜８週間ｏ）ＢＡＬＢ／　ｅ：Ｍヨヒ（：’　３
１１／ＩＩ、Ｎ１７）マウス（雌）にＫＬＨに結合した
且つ見金な補薬を混合したＡｂ２の５０　ｐｇを腹膜内
（ｉ、ｐ、）注射した。５日後に、これらのマウスに不
児全桶桑中のＡｂ２を注射し次いで５目間隔で食塩水の
Ａｂ２を注射した。合計４回２よび６回の免疫処理の後
に、これらのマウスの血液をとった。２適間隔でＶ、週
間この操作を続けた。ある場合には、この免疫プロトコ
ールを２適間隔で４〜５回行なった。
これらの免疫処理したマウスからの血清を滴定してＡｂ
２に結合する抗体（Ａｂ３と呼ぶ）の存在を調べた。こ
ｆ′Ｌｒｉ、希釈血清にＡｂ２を混合し、Ｆａｂ　９６
．５Ｌ４６１として）を被覆したイムノロ／・プレート
にこの混合物を加え、その後にヤギ抗マウスＩｇＧ１％
よびＯＰＤを加えろことによって行なった。データをＡ
ｂｌへのＡ６７ｆ）結合の阻止チとして表示した。ごれ
らのデータＦ′１（Ａｂ３＋Ａｂ２）のｏＷ。
（光学密度）値を決定し、それをＡｂ２単独のｏ、Ｄ、
値で割り、そしてその商をｌＯＯから差引くことによっ
て計算した。
Ｐ９７へ結合するＡｂ３についても血清を試験した。精
製Ｐ９７をＰＥＳ中５μｙ／Ｍｌの濃度でイムノロン・
プレートに入れて一夜放置した。封鎖後に、希釈面ｉ’
＊を加え、次いでヤギ抗血清をマウス免疫グロブリン（
ＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＩ、Ａと反応さぜたもの）に加
え、ＩＩＲＰと反応させた。
固相阻止分析を使用し、マウス血清を２Ａマウス・メラ
ノーマ細胞（細胞表面でＰ９７ｔ−発現する）またはｐ
ａｒマクスーメラノーマ細胞（細胞表面でＰ９７を発現
しない）と混合した。この混合物を１時間培養し、次い
でＰ９７抗原を被覆したイムノロン・プレートに加えた
。前述のようＫして、抗マウスＨＲＰ結合体の存在下Ｖ
ＣＯＰＤを加えることによって結合を検出しへ 結果 Ａｂ２の発生 前述のようにして、ＢＡＬＢ／ｃマウスをｍＡｂ９６．
５で免疫させ、その膵臓細胞を融合し、そしてハイブリ
ドーマ上面ｇを選別してｍＡｂ９６．５に対するＩＱＧ
　１抗体を得た。約３０００８のハイブリドーマを８種
の異なった融合から得た。これらのハイブリドーマのう
ちの７０橿からの上泄液はＦａｂ９６．５に結合するが
対照標準ＦａｂＦ６には結合しないことがわかった。そ
れ故、それらが誘導されるハイブリドーマのほとんどＦ
１Ａｂ２ｆ作るものと想定された。これらのハイブリド
ーマの７種がクローンされ、そしてそれらを作るｔｐｈ
Ａｂが精製され、Ｆａｂ９６゜５への結合が試験された
。第４１図に示すように、７種のハイブリドーマのすべ
てによって作られるｍＡ　ｂ　ｒｉＦ　ａ　ｂ　９６．
５　Ｋ結合したが、高い抗体濃度において観察される結
合値にはＡｂ２間に変動があった。これらのｍＡｂのい
づれもＦａｂＦ６には結合しなかつｔム 異性の試験 我々Ｖｉｉｌ１図にデータの示されている７櫨のＡｂ２
のいづれかが惧Ａｂ９６．５の抗原結合性の場を確認す
るか否かを検討した。第１Ｋ、我々ｆ−ＩｓＫ　　ＭＥ
Ｌ−２８細胞によって発現されるＰ９７抗原へのｙにＡ
ｂ９６．５の結合を阻止するｍＡｂの能力を６１１１足
した。くれは実施例Ｄ−ｘの（６）Ｋ述べたようにして
行なった。７種のＡｂ２のうちの３徨（＃３、＃５およ
び＃７）はこの結合を強く阻止したが、２棟の、４６２
　（＃４および＃６）は弱い阻止を示し、そして残りの
２ｆｆｌ（＃１および＃２）は阻止を示さなかった（第
１２図）。
第２に、我々はｍＡ６９６．５に結合する可溶性Ｐ９７
に競合する７種のＡｂ２の能力を研究した。それぞれの
Ａｂ２の種々の希釈液を放射性沃素化Ｐ９７と混合し、
そしてＦａ６９６．５へのＰ９７の結合を固相分析Ｋｇ
いて測定した（第１３図）。抗１ｄ＃３、＃５および＃
７は放射性沃素化Ｐ９７と競合したが、４桟の他の抗−
１ｄＣ＃１、＃２、＃４、＃６）は競合しなかった。こ
れらの結果は第１２図に示すものと類似であった。
第３に、我々はＰ９７について競合する能力をもつ３櫨
のＡｂ２すなわち＃３、＃５および＃７がＦａｂ　９６
゜５の抗原結合性の場を封鎖してＦａｂ９６．５への放
射線沃素化Ｐ９７の結合の５０〜６０％を減少さぞうろ
ことを実証した（第１４図〕。ｌ複のＡｂ２　（＃２）
ｄこの結合の２５チ阻止を示し、残りの３種のＡｂ２　
　（＃１、＃４、＃６）は０〜１０％の阻止を示しｔム 従ってこれらのデータＦ′１３ｉ１１１の、４ｂ２（＃
３、＃５および＃７）が「内部像」としてＰ９７αエピ
トープを擬態しうろことを示唆した。然し、立体障害が
この観察された効果の原因である可能性が依然として存
在する。それ故、我々は生体内でＡｂ３応答を誘発させ
るＡｂ２の能力を下記の（４）で述べるように試験した
。
Ｐ９７に対する７櫨のｒｎＡｂを研究用にえらんだ。Ｐ
９７陽性細胞に結合するｍＡｂの競合的阻止を測定する
分析によれば、７種のｍＡｂがＰ９７抗原上の３種の異
なったエピトープすなわちＰ９７″（ｍＡｂ　４．１お
よびｔｎＡｂ　９６．５）、Ｐ９７”（惰／ｆ６ＨＢ．
１、慣、４６１３３．１、倶Ａｈ　　１３３．３および
惰Ａｂ８．２）ＭよびＰ９７’（倶Ａｂｘ３３．２）を
確認する（　Ｂｒｏｓｎｎ、Ｊ、Ｐ、等、１９８１　、
　Ｊ、Ｉｍｒｎｘｎｏ　ｌ　。
１２７：５３−５４６）。ｍＡｂ　１３３．３ｕ１ｇＧ
２　ｂであり、ｍＡｂ　４．１とｔｙｔＡｂ　８．２は
Ｉ、Ｇ　ｌであり、そしてＭａｂ４．１とＭａｂ８．２
（これらはＩＱＧ２１でおる）以外のｍｏｂＦｉ１ｇＧ
２ａである。
第５図に示す実験にＲいて、５種のＩｇＧ２ａのそれぞ
れを試験すべきＡｂ２と混合し、Ｆａｂ９６．５を被覆
したプレートに加え、次〜・でヤギ抗マウスＩ、Ｇ１−
ＨＲＰを加えてＦａｂ９６．５へのそれぞれのＡｂ２の
結合を検出した。
第１５図に示すように、ｍＡｂ　　１３３．３ｔ’ｉ試
験したＡｂ２（＃ｌ、＃３、＃４、＃５、＃６および＃
７）のＦａｂ９６．５への結合を阻止した。この阻止は
ｍ１ｉ６９６．５についてみもれたのとほぼ同程度であ
った。他のＡｂ２と同様にｍＡｂ９６．５への結合のた
めにえもばれた＃２の結合は２止されなカッた。ｍＡｂ
　ＨＢ．１．１３３．１ｊ、ｆよび１３３．２は試験し
たＡｂ２のいづれの結合も阻止しなかった。
異なった分析を使用して、Ａｂ２とＩ、Ｇ１アイソタイ
プの種々の抗９７ｍＡｂとの間の結合度、および抗Ｐ９
７ｔｎＡｂによる放射能標識Ｐ９７のその後の結合に及
ぼす上記結合度の影響を分析した。２種の７．Ｇｌ抗Ｐ
　９７　ｔｎＡ　６（４，１と８．２）をｍＡｂ　　９
６．５のように試験した。それぞれのＡｂ２をプレート
に入れ、棟々の濃度のｍＡｂ　８．２、ｍＡｂ　４．１
またＶｉｆＡＡｂ　９６．５を加え、そして放射腺沃累
化Ｐ９７への抗Ｐ　９７　　ｔｎＡｂ　ｏ）結合を測定
した（第１６図）。３ｔ＊の、４６２（＃３、＃５Ｒよ
び＃７）はＰ９７へのｍＡｂ　　９６．５の結合を妨害
した（上記（２）に述べた結果と一致した）が、４橿の
他の、４６２（＃１、＃２、＃４および＃６）は妨害し
なかった。Ａｂ２のどれ１つとしてｍＡｂ８．２またＢ
ｆＰＬＡｈ　４．１に結合しなかった。実験をくりかえ
し、ｎ＊Ａｂ　　１３３．１′Ｊ６よびｍＡｂ　　１３
３．３をｍＡｂ９６．５と共に平行に試験した。第」５
図のデータｔｉｍＡ　ｂ　ｌ　３３．３（ｍＡｂ　　１
３３．１ではない）がＡｂ２に結合しうろことを示して
いるからである。第１７図は試験した７橿のＡｂ２のす
べてが慣Ａｂ　９６．５とｍＡｂ　　１３３．３の双方
に結合したことを示している。これとは対照的に、これ
らのＡｂ２のどれ１つとしてｍＡｂ１３３．１には結合
しなかった。
これらのＡｂ２のうちの６種（＃２を除く）　ｔｒｙ　
ＴルＡｌ）１３３．３がＳＫ　　ＡｉＥＬ−２８メラノ
ーマ細胞に結合するのを阻止することを実証する分析を
行なった。また、これらのΔｂ２のどれ１つとして溝Ａ
ｂ　４．１またハ８．２がＳＫＭＥＬ−２８細胞に結合
するのを阻止しなかった。またＣれら７種のＡｂ２のど
れ１つとしてＰ　１．１７　（ＩｇＧ２ａミエローマ蛋
白）に、対照標準として使用した２柚のｔｎＡｂ（Ｌ６
　（ＩｇＧ２ａ抗癌抗体〕またＦ′ｉ、ＭＰＧ２４（メ
ラノーマ付随プロテオグリカンに対するＩｇＧ２ｎ抗体
）に、あるいはマウスＩｇＧ２ｂに対するヤギ抗血７Ｎ
に、結合しなかった（光ＸＩＶ　）。
表　　ＸＩＶ 注） ＊　　８０　ｐｙ／ｍｔ　　の種々の阻止剤を、４１１
２（０，４ｐｙ／ｍｌ）と混合してＦａｂ９６．５で被
覆したプレートに加えるＥＬＩＳＩＡによって検出した
。ＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩＱＧｌｆこれらのプレート
に加えて１時間培養し、次いでＯＰＤを加えた。ＯＤを
４９２　ｎｍで測定した。
０．９６１ １．０７４ ０．６５５ ０．６４９ ０．５５５ ０．４４７ ０．１２５ ０．５１４ ０．０８４ ０．０６６ ０．０６１ ０．０９１ ０．０７４ ０．９４　Ｉ Ｑ、９４２ ０．５８６ ０．６２９ ０．５２１ ０．４３６ ０．５１５ ０．９９３ １．０６４ ０．６７４ ０．５５７ ０．４４３ ０．５７７ ０．８７６ ０．９５３ ０．５６７ ０．６１１ ０．５０６ ０．４１８ ０．５０４ １、υ２６ １．０４９ ０．５４１ ０．６２７ 以上のことを考慮して、我々の発見は７種のＡｂ２が＃
２を除いて、恐らく抗原結合性の場において、ｍＡｂ１
３３．３に結合しうろこと、及び＃２は抗原結合性の場
に１６いてｍＡｂ　　１３３．３には結合しないことを
示している（然し＃２は明らかに抗原結合性の場以外の
場でｍＡｂ１３３．３に結合している：第１７図参照）
。
（４）Ａｂ３応答の誘発 ７捜のＡｂ２をマウス中でＡｂ３抗体の応答を誘発させ
る七の能力について試験した。°第４の組の実験におい
て、共遺伝性（ＢＡＬＢ／ｃ）マウスをＡｂ２で免疫さ
ぜた。
これらの実験の大部分について、Ａｂ２をＫＬＨと結合
させた。
Ａｂ２による免疫の後に、マウスの血清をＡｂ２への結
合能力によって検出しうるＡｂ３の存在について試験し
た。
マウス血清の数種の希釈液をそれぞれのＡｂ２と混合し
、Ｆａｂ　　９６，５（Ａ６１として）を被覆したイム
ノロ／・プレートに加えた。次いでヤギ抗マウスＩ、Ｇ
ｌ−ＨＲＰを使用してＦａ６９６．５へのＡｂ２の結合
を検出した（表Ｗ）。
＃１ ＃２ ＃３ ＃４ ＃５ 表 ｖ 阻止チ ＃６ ＃７ 注）ネ　血清を１＝１０に希釈した。マウスへの注射前
にそれぞれのＡｂ２をＫＬＦＩに結合させた。２匹のマ
ウス／グループのそれぞれについて及び２回の継続して
のマウス採血についてデータを示した。
表ｘｖに示すように、第１回の採血から専ら誘導された
血清がＦａ６９６．５へのＡｂ２の結合を阻止した。阻
止活性のｔ＃ｉ第２回の上昇後に増大した。
我々は次に、免疫マウスからの血清がＰＯ２（、（６１
と同様）Ｋ結合しうるか否かを試験した。可溶性Ｐ９７
抗原をプレートに入れ、希釈マウス血清を（封鎖後に）
加え、次いでヤギ抗マウスＩｇＧ−１１ＲＰ６加えた。
２櫨のＡｂ２（＃３または＃７）の〜・づれかで免疫さ
せたマウスからの血ＭはＰ９７ＶＣ結合したが、他の５
９のＡｂ２Ｖｉ＃１５を含めてＰ９７ＶＣ結合しなかっ
た（第１８図）。１場の対照Ｊａ準として、ｍＡ＆９６
．５またはマウス抗Ｐ９７血清のいづれかのＰＯ２への
結合を滴定し、Ａｂ２の＃３または＃５のいづれかで免
疫させたマウスからの血清を使用してみられる結果と比
較した。データは後者の血７ｎがＰ９７特異性Ａｂ３を
約１〜５μｇ／ｍｌ　　の濃度で含んでいたことを示し
た。、４６１様のＡｂ３応答を誘発させるＡｂ２　（＄
３または＃７）の能力は従ってこれらのＡｂ２が内部像
抗体であることを示した。
ＰＯ２に対するＡｂ３の特異性を更に試験するために１
Ａｂ２免疫マウスからの血清をＰ９７陽性マウス・メラ
ノーマ腺からの、ある（・はそのＰ９７陰性の親からの
１×１０６個の細胞に吸収させ、その後に血清をＰＯ２
（プレート上に被覆したＰＯ２）に加えた。ＰＯ２への
Ａｂ３の結合を次〜・でヤギ抗マウスＩ、Ｇ−ＨＲＰ　
　結合体を使用して検出した。第１９図（パネルＡおよ
びＢ）に示すように、Ａｂ２の＃３または＃７のいづれ
かで免疫させたマウスからの血ｆＰＩはＰＯ２に結合し
たＡｂ３ｆ、含んでいた。そしてこのＡｂ３活性ｕ２Ａ
ｍ３胞による吸収によって除かれたが、親細胞による吸
収によっては除かれなかった。Ａｂ２の＃４または＃５
のいづれかで免疫させたマウスからの血清によるＰＯ２
への低量の結合があり、この結合も２Ａ細胞による吸収
によって阻止される（第１９図のパネルＣおよびＤ）。
正常なマウスからの血清またはＰｌ、１７（対照標準と
して）で免疫させたマウスからの血ｆＲｈいづれもＰＯ
２に結合する抗体を含んでいなかった。ＰＯ２への精製
】Δｂ９６．５の結合は２／ｆａ胞による吸収によって
完全になくしうるけれども（第２０図）、ＰＯ２で免疫
させたマウスからの血清抗体は、Ａｂ２の＃３または＃
７のいづれかで免疫させたマウスからのＡｂ３活件のよ
うに、部分的にのみ阻止された。
Ａｂ３応答はＫＬＥに結合させたＡｂ２による免疫後の
Ｃ３Ｈ／ＩＩａＮマウス中にも検出された。免疫Ｃ３１
１／Ｈａｔマウスからの血清は固相ＥＬＩＳＡ中の可溶
性Ｐ９７抗原に結合した（第２１図、第２２図）。可溶
性Ｐ９７への結合を試験する前の２Ａ細胞または親細胞
のいづれかによるマウス血清の吸収は、結合がＰＯ２に
対して行なわれたことを実証した。
ＢＡＬＥ／ｃマウスおよびＣ３Ｈ／ｌＩｇＮマウスを、
ＫＬＩＩに結合させていないＡｂ２で免疫させる実鼓も
行なった。
これらのマウスの血清はノ？αｂ９６．５に結合した抗
体を含んでいることが見出された。これらの抗体が循環
中に依然として残るＡｂ２であるか否か、あるいはＡｂ
４が誘発されたか否かを決定するために、Ｉ（ＩＧＩＣ
Ａｂ２のアイソタイプ）のみでなくＩｇＧ２ｂおよびＩ
ｇＧ１をも確認しうるＨ／？Ｐ結合体を用いてＥＬＩＳ
Ａを行なった。えられた知見Ｆ′１Ａｂｌに結合するこ
とができ且つＩｇＧ２ｂおよびＩＱ　Ｇ３のクラスに属
するＡｂ４をマウス血清が含んでいることを示唆した。
討議と実験 我々はＰ９７メラノーマ抗原のエピトープであるＰ９７
αを決定する。ｎＡｂ９６．５上のイテイオタイプに対
する一連のマウスｍＡｂを作り、それらを特異性および
マウス中にＡｂ３応答を誘発させる能力に関して分析し
た。これらのＡｂ２の４種は結合性Ｐ９７に包含される
ｍＡｂ９６．５の領域を確認するものとは思われなかっ
た。それらはｍＡｂ９６．５とＰ９７との間の結合を目
だって阻止せず、また、ＩＡｂ９６．５へのそれらの結
合も町だ性Ｐ９７によって阻止されなかったからである
。然しζこれらＡｂ２のうちの３種（それぞれ＃３、＃
５Ｓよび＃７と呼ぶ）は可溶性Ｐ９７抗原とｍＡｂ　９
６．５との間の結合を阻止し、そして可溶性Ｐ９７抗原
１−Ｊ、、Ｆａｂ９６．５とこれらＡｂ２との間の結合
を阻止した。
ｍＡｂ　１３３．３１Ｃ７ａｌのＡｂ２を用いて結合分
析において試験したとぎｍＡｂ　９６．５と同様の挙動
を示したがシ０４．１ハ示さなかった。これは予想外の
ことであった。ｍｏｂ１３３．３は情Ａｂ９６．５とに
異なったエピトープ（Ｐ９７ｂ）を確認することが報告
されていたが、ｍＡｂ　４．１はｍＡｂ９６．５と同じ
エピトープ（Ｐ９７”）Ｋ′＃異性があると報告されて
いた（８１０１１１１％、Ｊ、Ｐ、等、１９８１，７．
Ｉ雪原ルＯＩ。
１２７：５３９−５４６）からである。標的細胞への％
、（６の結合の競合的阻止の分析を使用してえられた結
果（同上の文献）と、ＡｂｌとＡｂ２との間の結合を測
定する分析を用いてえられた我々の発見、との間の矛盾
の理由は知られて〜・ない。
抗原結合性阻止データは、我々のＡｂ２の３３（＃３、
＃５、および＃７ンが「内部像」型であるという見解と
一致した。然しこれらのデータは立体障害のような別の
説明を排除している。それ故に我々は、これら３棹のＡ
ｂ２のいづれかがマウス中に免疫応答を誘発させうるか
否かを検討した。体液抗体の応答は細胞伝達応答より容
易かつ正確に一般には研究しうるので、我々はＰ９７に
結合しうるＡｂ３について研究した。
２種のＡｈ２（＃３および＃７）はＢ　Ａ　Ｌ　Ｅ　／
　６　？ウスオよびＣ９Ｈ７ＮｍＮマウスの双方におい
てＡｂｌ球のＡｂ３応答を誘発し、従ってそれらが内部
像抗体であることを示した。第３のＡｂ２　　（＃５）
は試験管内で試験したときには＃３および＃７と同様の
挙動を示したけれども１．（６１様のＡｂ３応答は示さ
なかった。Ｐ９７へのＡｂ３の結合ＦｉＦ９７を発現す
る２Ａ細胞による吸収によって競合的に阻止されたが、
Ｐ９７陰性の親の腺からの細胞によってはそうならなか
った。アロジエネイツクＣ３Ｈ／ＨａＮ種においても応
答が観察されたという事実は、この応答がＴｈ遺伝子に
よって制御されたのではなくて、もつと確からしくはＰ
９７抗原の内部像として作用するＡｂ２によって誘発さ
れた（Ｌｅｇ、Ｖ、に、等、１９８６　、　Ｂｉｏｃ、
ｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｚ。
Ａｃｔａ　８６５：１２７　１３９）ことを示している
。
Ａｂｌ様の応答のみを生体内で得るためには、ＫＬＩＩ
へのＡｂ２の結合が必要であった。ＫＬＨを使用しなか
ったとき、免疫マウスの血清はＡｂ２のＩσＧｌアイソ
タイプの抗体と、池のアイソタイプ（ＩｇＧ２ｂ％Ｉ、
Ｇ３）の抗体であり且つＡｂ４であったかも知れない抗
体、の双方を含んでいた。Ａｂ４が実際に発生したとす
ると、Ａｂ３応答はある点で起ったかも知れない。
ネズミ科動物モノクローナル抗体（ｍＡｂ　）　Ｌ　６
　（Ａｂｌ）は多くの異なったヒト癌からの細胞表面に
見出される腫瘍付随炭水化物抗原に対して特異性のＩｇ
Ｇ２ａである（ｌｆａＬｌａｔｒｏｒｐ＜＋１−等、　
１９８６　、　ＣａｆＩｔ：ａｔ　　Ｒａｓ　。
３９１７−３９２３）。Ｌ６に対する抗イデイオタイプ
ｍＡｂ　　（Ａｈ２　）を作った。Ｌ６から作ったＦａ
ｂ断片には結合するが対照標準’ｆＪＧ２ａから作った
Ｆａｂ断片には結合しない２４種のＡｈ２を得た。これ
ら２４種の？）Ｌ、４６のうちの８種は高濃度にＺいて
、独立に誘導されたものであるがＬ６と同じ特異性をも
つ２種のｍＡｂのうちの１種に結合しうるものであった
。これら２４種のＡｈ２のうちの１４槌は細胞上の抗原
に対するＬ６の結合を阻止しうるものであつへこれら１
４橿のＡｈ−２のうちの６種はＬ６から作った且つＬ６
抗原陽性細胞に既に結合しているＦａ　ｂ断片に結合す
ることができなかった。クローンした可変領域遺伝子セ
グメントを使用して、これらｆ４ｆ）Ａｈ２のうちの２
橿が不適切な軽い鎖に付随するＬ６の重い鎖の可変領域
ｔｌ−ｔＦ！ｊ！４的に認識するのに対して、残りの４
役はＬ６の重い鎖どよび軽い鎖の町変領域を付随させる
必要のある組合せの決定因子を認識する、ということが
見出された。対照的に、細胞に取付けられているＬ　６
　Ｆ　ａ　ｂに結合する８種の試験したＡｈ２のすべて
は、分離された軽い鎖の町変領域にも結合することがで
きた。細胞に取付けられているＬ６Ｆ’ａｂ断片に結合
しない６種のＡｈ２をＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ／　ｅ　？ウスお
よびＣ３Ｈ／ＩｒａＮマウスに注射した。これらのうち
の２種（恐らくそれ以上）ｆｉＬ６と同じイディオタイ
プを発現するポリクローナル抗体（、（６３）を誘発し
、Ｌ６陽性腫瘍細胞に結合し、そしてその抗原結合性の
場についてＬ６と競合した。
（１）動物 生後６〜８週間のＢＡＬＢ／ｃおよび（？　３　Ｈ／／
７　ａｆｉ／のマウス（Ｍ）を７レツド・ハッチンソン
・カンサー・リサーチ・センターのアニマル・ファシリ
ティから入手した。他に特別の記載のない限り、これら
のマウスをこの研究を通して使用した。
（２）細胞腺 ヒト結腸細胞腺Ｈ−３３４７（Ｈａ１１ｓｔｒｏｍ、１
．等、１９８６　、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ　、Ａｃａｄ
、Ｓｃｔ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　　８３　ニア　。２５９−７
０６３　）はＬ６によって決定される抗原の高濃度を発
現する。Ｌ６に結合しないＣＦＭヒトＴ細胞腺を陰の対
照標準として含めた。
モノクローナル抗体Ｌ　６　（ＩｇＧ２ａ）をこの研究
において抗腫ｊ％ｍＡｂ　　（Ａｈ　１　　）として使
用した。その発達と特徴つけは文献に記載されている（
　ＨｍＬＬｇＬｒｏｍ＋１．等、１９８６、（：’ａｓ
ｃ＃ｒ　Ｒｇｓ、４６：３９１７−３９２３　；１１ｇ
　ｔ　Ｌ　ａ　ｔ　ｒｏｒｎ＊　１．等、１９８６　、
　Ｐｒｏｅ、ＮａｔＬ、Ａｔａｄ。
Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８３＝７。２５９　７０６３）。
癌組織で免疫させたＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスから
の膵臓細胞からえられたハイブリドーマによってｍＡｂ
　Ｆ　２６　（ＩｇＧ１　）および０．１２７２８−２
４　（ＩｇＧ２ａ）を製造した。バイブリド化と選択は
Ｌ６をもたらしたものと同掃であった。この２桟のｍＡ
ｂは癌細胞への結合についてＬ６と競合する。
ｍＡｂ　９６．５　（Ｂｒｏｗｎ、Ｊ、Ｐ、等、Ｊ、Ｉ
ｍｍｘｎｏ　ｌ　、　１２７　：５３９−５４６）およ
びミエローマ蛋白Ｐｔ、＋７（アメリカン・タイプ・カ
ルチュアー・コレクション受理番号、ＫＴＩＢ　　１０
）は共にＩ、Ｇ２．であるが、これらを対照標準として
使用した。Ｆ　ａ　ｂ断片をパパイン消化（同上文献）
によってＬ６ＭよびｍＡｂ　９６．５から製造し、これ
らをそれぞれＦａｂＬ６ＭよびＦｉ６９６．５と名付け
た。
（４）抗イデイオタイプ抗体（、（ｂ２）の発生具なっ
た腫瘍抗原Ｐ９７ＶＣ関するＡｂ２を発生させるので成
功裡に採用されたプロトコール（前記の実施例り参照）
を使用しｔム文献（５ｔｒｅｔｃｈｅｒ、ＩＩ、Ｚ、等
、１９８６゜Ｊ、１１ｎｔｎｕｎｏ１．１３６：１００
７　１０１４）に記載されているようにキイホール・リ
ンペット−ヘモシアニー、（ＫＬＥ）に結合させたＬ６
の１００μσによりＢＡＬＥ／ｃマウスを免疫させた。
第１の免疫Ｆ１児全Ｈ３７１？α補薬（米国ミシガン州
デトロイトのデイ７コ社）中で皮下注射により与え、第
２の調剤ｆｉ−Ｆｉ、４週間後に不完全フロイント補薬
中で腹膜内注射で与えた。２〜４回の逐次の免疫を２週
間隔で食塩水中の腹膜内注射で与えた。
最終の注射から３回後に膵臓を除き、この膵臓細胞をポ
リエチレングリコールと共に遠心分離することによって
ＭＳ−１ミエローマ細胞と融合させた。１０日後に、Ｌ
６から作ったｔｙαｂ断片（Ｌ６　　Ｆａｂと呼ぶ）に
対するＥＬＩＳＡによってハイブリドーマを選別し、９
６個の井戸のあるイムノロ／■プレート（米国バージニ
ア州チャｙテイリーのダイナチック社）に被覆した。３
種の異なった試剤、すなわちホースラデイツシュ−パー
オキシダーゼ（ｉｉＲＰ）に結合させたマウスＩｇＧｌ
（ＩｇＧ１−１１ＲＰと呼ぶ）に対するラビット抗血清
、マウスＩＱ０３に対するＨＲＰ結合ラビうト抗血ｉ’
ｉ￥（抗マウスｂｔＧ３−ｆｌＲＰと呼ぶ）ま７：はＩ
ＩＲＰＴ／Ｃ結合させた蛋白Ａ（蛋白Ａ−１１ＲＰと呼
ぶ）、のそれぞれを別々に使用することによってＬ６Ｆ
　ａ　ｂへの結合を検出した。これらの試剤はジムド社
（米国カリフォルニア州すウスーサンフランシスコ）か
ら得た。
ＦａｂＬ６に結合する抗体を試験してＦＩＬ６９６．５
に結合する抗体を求め非特異性結合剤を排除した。Ｌ６
のイディオタイプに対するｍＡｂｔ−作ると思われるハ
イブリドーマを限定希釈によって２回クローンし、次い
ですべてのサブ・クローンについて試験を行なった。
（５１，（６２の精製 生後４〜６週間のＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウス（雌）
をプリスタンを誘発させた。１０日後に、これらのマウ
スに５　Ｘ　１０’個のＡｂ２生産性−・イブリドーマ
の細胞と腹水を３〜８週間遂次集め？Ｑ）　Ｉ　（Ｆ　
Ｇ２　（ＬおよびＩｔＧ２ｂ抗体を含む腹水を蛋白Ａカ
ラム（Ｂｒｏｗｎ、Ｊ、Ｐ、等、１９８１　、　Ｊ、Ｉ
ｍｔｔｔｒｔｎｏ　ｌ　。
１２７：５３９−５４６）上で情製し、１ｇＧ１含有の
腹水を硫酸アンモニウム沈殿により、次いでＤＥＡＥ−
セファセル（スエーデン国つプサラの７フ一マシア社）
のクロマトグラフ処理により精製した。精＠Ａｂ２をＦ
ａｂＬ６への結合について並びに〃−３３４７細胞（後
述）へのＬ６の結合の阻止について試験した。
（６）Ｌ６のパラトープ領域に結合するＡｂ２を検出す
るための阻止分析 Ｐ９７系において予め使用した分析（前記の実施例り参
照）と同様の分析を使用した。Ａｂ２を含有する上溌液
または精製Ａｂ２をｍＡｂｔ６と混合し、最終濃度を０
．１〜０．４μＱ／Ｌ　６／ｒｎｌとした。この混合物
を９６個の井戸をもつ組織培養プレート（米国カリホル
ニア州オクスナード・ベクトン・デイクソンのファルコ
ン社〕中で室温において３０分間培養し、その後にこれ
を、９６井戸プレートの壁に固着させたゲルタールアル
デヒド固定Ｚ／−３３４７癌細胞に加えた。Ｒ−３３４
７細胞へのＬ６の結合を、ＨＲＰに結合させたマウスＩ
、ＧもしくｆｉＨＲＰに結合さぜた蛋白、４に対するヤ
ギ抗血清を使用してＥＬＩＳＡＫよって検出した。デー
タＦｉＡｈ２の存在下でのこれら細胞へのＬ６の結合の
抑止チとして示した。
３０　／７１Ｆ／ｒｎｌのＦａｂ　Ｌ６をプロピレン管
中の５　Ｘ　１０’個の＃−３３４７癌細胞に加えた。
４℃で３０分間培養した後、細胞を洗浄して非結合Ｆａ
ｂを除いた。ｆｆ！Ｉ製Ａｂ２をフルオレセイ／・イン
チオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識した。種々の濃度の
標ＲＡｂ２をプロピレン管に加え、次いで４°Ｃで３０
分間培養してから洗浄した。前述のように（Ｈａ　ｌ　
ｌ　ｚ　ｔｒｏｔｍＪ−等、１９８６　、　Ｃａ％ｃｅ
ｒ　Ｒａｇ。
４６：３９１？−３９２３）、ＥＰＩＣ型フルオレセイ
ン活注化活性ンーター（ＦＡＣ５）を使用してＡｂ２結
合を検出した。この実験を非標識Ｌ５Ｆａｂ断片の代り
にフィコエリスリン（ＰＥ）標識Ｌ６１１Ｃついても行
なった。
（８）Ｌ６の重質および軽質鎖可変領域遺伝子セグメン
トのクローニング Ｂ１１ｎおよび５ｔａｆｆｏｒｄによってＩｆ！、埋的
に記述され（１９７６、Ｎｘｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ
、　　３　：２３０３−２３０８）、そしてＬｇｄｂｇ
ｔｔｇｔ−らによって更に詳ｍＫ記述されている（１９
８７．Ｍｏｔ、ｌｍｍ５ｎｏ１．　２４：１２５５−１
２６１）ようＫして、ＤＮＡを単離した。このＤＮＡを
ＥｅｏＲｌまたは１１１ｎｄｆｆＪのいづれかで消化し
、そしてサクロース勾配（ＭａｎｉａｔｉｓＪ、等、１
９８２゜Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｅｔｎｉｎｇ、Ａ　
ＬａｂｏｒｔｚＬｏｒｙ　Ｍａｎｔｃａｌ。
Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙｒＮａｗ　Ｙｏｒｋ）上で大きさを分級した。
特異性可変（り領域を含む勾配留分はサウザーン・プロ
ット分析（５ｏｘｔんａｒｍ、Ｅ、Ｍ、。
１９７５、ＬＭｏｌ、Ｂｉｏｌ、　　９８：５０３　５
０７）によって同一性確認された。発現された対立遺伝
子は非生産性Ｌ６支腺のサウザーン・プロット分析に？
ける検出の欠如によって確認された。発現されたＬ６重
質鎖ｒ領域遺伝子セグメントを含むＥｃｏＲ（消化ＤＮ
Ａを、Ｇｔｇａｐａｃｋパッケージ／グ・エキス（米国
力リホルニア州うジョラのストラードジーン社）Ｋより
ＥＭＢＬ３ラムダ・ファージ−ベクター（米国クィスコ
ンシン州マジソ／のプロメガ拳バイオチック社）中にク
ローンし、プレート処理し、そしてネズミ科動物重質鎖
増強剤を含むＸα６１／ＥｃｏＲＩ断片を使用して選別
した。
ネズミ科動物重質鎖増強剤〈広がる２、３Ｋｂ　ｌ１ｉ
ｎｄ　ｔｆｆ断片を、ＥＧ３７アージ・クローン（Ｅｌ
　ｌ　ｔｅｏｆＬ、Ｊ−Ｗ、等、１９８２　、　Ｎ５ｃ
１．Ａｃｔｄｓ　Ｒａｇ、１０：４０７１−４０７９）
から誘導されるＩ　Ｏ，５Ｋｂ　Ｂａｍ１ｌ　ｌ　Ｆ！
ｆｒ片としてヒトー〇−エクソ／を含む、ｐｓＶ２−ｙ
ｐｔベクター（Ｎｕ１１すα箕。
Ｒ，Ｃ，＆Ｉ３ｇｒ（ＢＰ−１１９８０，ＳｃｉｍｆＬ
ｃａ　　　２０９：１４２２−１４２７）Ｋクローンし
た。発現された可変重質類遺伝子セグメントを次いで１
０．５Ｋｂ　ＥｃｏＲ（断片として該ベクター中に移し
た。
発現さｎたＬ６軽買頚をもつ互りす■ｆ白化１＃Ａ２含
む勾配留分をラムダＺａｐ（Ｓｔｒａｔａｇｇｎｇ　）
Ｉ）Ｘｂａｌ（Ｄ場にクローンした。これはｇｉｓｄ　
［１中に、ジヌクレオチドＡＧ金もつ懸垂物？よびＣ’
　１２％１っ為αＩ懸垂物金元てんしてクローン用の相
浴性懸垂物を残すことによって行なわれる。生成するラ
イブラリーをイントロンからのｘＫｂ／’＃　ｔ　Ｉ　
／　Ｈｉｎｄ　ＩＩＩ　１ｅｆｒ片ｔ”用イテ遺別しテ
ＭＰ　Ｃ１１（Ｋｍ　ｌ　ｌ　ａｙ、Ｄ、Ｅ　、等、１
９８２．Ｃｅ１ｌ　　２９：６８１−６８９）からの発
現に遺伝子をもつ９．５ＫｂＢαｍＢ（断片’ｉ言むｐ
ＢＲ３２２クローン中のＪＩＣとｃ゛Ｋを分離する。
想像上の軽質鎖発現構成概念のために、ネズミ科動物に
増強剤（＃ＰＣ１ｌから）を含む１Ｋｂ１１ｉ％ｄ　ｆ
ｉｌ／Ｘ倶外■断片を、ヒトｔ’にエクソンをコードし
ている２、７Ｋｂ　Ａ’６６Ｒ１断片（Ｈｅ１ｔａｒ＊
Ｐ、Ａ、等、１９ｇ２　、Ｊ、Ｂｉｏｌ。
Ｃｈａｍ、２５７：　１５１６−１５２２）の上流でｐ
ＵＣ−ｇｐｔベクター中にクローンした。発現６メＸ遺
伝子セグメント金次いでこのベクター中に、独特のＰｓ
ｔ　ｌの場に結合したＥｃａ　Ｒｌ　−Ｎｏｔ　Ｒｌ断
片として、移した。
想像上の軽質類Ｒよびｌ質類の遺伝子構造体を、Ｂｉｔ
ｙＲａｄエレクトロボレータを使用して製造者の指示ど
おりに、マウス・ミエローマ細胞腺ＡＱ　８．６５３に
移植し、次いでミコフェノール＊Ｏ，５ｐｙｅ１１上で
選択した。想像上の軽質類遺伝子構造体と５Ｐ２１０マ
ウス・ミエローマ細胞腺を使用して、おるいは想像上の
重質鎖構造体と１５８８Ｌネズミ科動物ミエローマ（ネ
ズミ科動物うムダ■軽′Ｊ鎖を発現する）を使用して、
同様の移植を行なつへ想像上の蛋白全発現する細胞腺は
ＥＬＩＳＡによって確認された。
想像上のＬ６抗体ｆＡセファロース上で精製し、そして
文献（Ｐｏｈｌｉｔ、Ｈ，Ｍ、等、１９７９　、　（ｓ
　ＩｔｎｍｓｎｏｌｏｙｉｃａＬＭｅｔｈｏｄｓ、１．
Ｌげｋｏｖｉｔａ　＆　Ｂ、Ｐｇｒ％ｉｚ編集−Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ　ＰｒａｇｓｒＮａｗ　Ｙｏｒｋｒｐｐ　　
１８１　１８４　）に記載されているようにビオチニル
化した。
（９１Ｌ６抗イディオタイプ可変領域特異性の分析イム
ノｏ：ｙｒｉＫｌｏＯｐＬｆ）ｍＡｂ　　１８７．１（
ｆ−ルーイニルトン博士によって提供）を被覆し、次い
で３回洗浄してからＬ６抗イディオタイプｍＡｂの培養
液からの上澄液を入ｎることによって競合分析を行なっ
た。次いでプレートを再び洗ってから１００μｔの非標
識競合反応体を６μｇ／成の濃度で加えた。非標識競合
反応性は、Ｊ５５８Ｌ軽質頌を付随さぜるＬ６の想像上
の町変東買鎖を発現する移植物からの培養上澄液である
か、あるいはＬ６の想像上の町変轡質鎖の＆であるか、
ある（・は精ｉ！ｌＬ６　ｍｏｂ　もしくはＰ＃Ｖ　／
’３２８１Ｂ８（対熱標準：不適切なヒトＩりＧ１抗体
）を加えた媒質であるか、そのいづれかであった。３０
℃で３０分間培養後、精製ビオチニル化の想像上のＬ６
抗体の１μｒｔ／ｍｌ浴液の５０μｔを、井戸に既に存
在する１００μを容量に加えた。これを３７°Ｃで更に
培養してｆＪｌらプレートを洗浄し、Ａｇｌｄｉ％−／
１ＲＰ（米国カリホルニア州バーリンゲームのＴＡＧＯ
社）培養しく室温で３０分間、１：１０００の希釈）、
再び況浄し、そして緩衝した基質（米国ワシントン州シ
ャトルのジエネテイツクス・システム社）甲のＴＭＢ色
原体で発色させた。データを阻止うとして示した。競合
体のない場合を１００％とし、背景値（ＡｂＺなし）を
差し引いた。
（１０）ＡＢ３応答の誘発 生後６〜８週間のＢＡＬＢ／６およびＣ３／　ＨａＮの
マウス（雌→に、ＫＬＨを結合させたＡｂＺの５０μｇ
で免疫さぜた（　５ｔｒａｉＣん−ｒ、ｔ１．Ｚ＋等、
　１９８６　、　Ｊ、Ｉｍｔｎｓｓｃｒｌ。
１３６：１００７−１０１４）。第１図の免疫から１週
間後に同様の第２回の免疫を行ない、次いでリン酸塩緩
衝食塩水（ＰＢＳ）中のＡｂＺで第３回２よび第４回の
免疫を１週間隔で行ない、次いでＰＢＳ中のＡｂＺによ
る免疫を２週間隔で行なった。すべての免疫は腹膜的注
射で行なった。４週間後に、マウスから周期的に採血し
、それらの血清を試験して（ポリクローナル）Ａ６３の
存在を調べた。
（ｉｉ））ポリクローナル、４　ｂ　３　ノ精製Ａｂ２
で免疫させたマウスからの血清を第１回の免役後６〜２
０週間のろいだ集めて貯蔵した。それぞれのＡｂＺの１
０Ｉｎ９をシアノーゲン・ブロマイド活性化セファロー
ス４Ｂ（米国ニューシャーシー州ビス力タウエイのファ
ーマシア社）の１ＩＬｊに結合させ、セして１！！！造
者の指示に従ってクロマトグラフ処理を行なって、それ
ぞれのＡｂＺに結合しうるＡｂ３の濃度を高めた。
測定 前述の分析を使用した（前記の実施例１）参照）。Ａｂ
３を試験するための血清または精製Ａｂ３を固定濃度（
２，。
μσ／　ｆｆ１ｔ　）の精製Ａｂ２と混合し、井戸をＦ
ａｂ　Ｌ６　で被覆したイムノロン■プレートに加えた
。ｍＡｂＬ６およびＰＢＳをそれぞれ陽および陰の対照
標準として使用した。
３０分間の培養後に１Ｆａｂ　　Ｌ６へのＡｂ２の結合
をラビット抗マウスＩｇＧｌ−ＨＲＰ／蛋白Ａ−ＨＲＰ
のカクテルを使用してＥＬＩＳＡによって検出した。デ
ータはＡｂ３血清によるＦａｂＬ６へのＡｂ２の結合の
阻止チとして示した。
（助細胞へのＡｂ３の結合の分町 Ａｂ３または精製ポリクローナルＡｂ３について試験す
べきマウス血清の希釈液（５０μｔの量で）をポリプロ
ピレン管中で５Ｘ１０’個のｄ−３３４７ｍ胞により４
℃で３０分間培養した。培養媒質、ｍＡｂ　　９６．５
またはＰｌ、１７で免疫させたマウスρ・らの血清、お
よび正常のマウス血清を隙の対照標準として使用した。
卸Ｉ胞を媒質中で２回況浄した。標的細胞へのＡｂ３の
結合をｔ″ＩＴＣで標課したヤギ抗マウスＩｇＧ（米国
力リホルニア州バーリンゲームのタボ社）によって検出
した。５０μｔをマウス血清と腫瘍細胞との混合物に加
え、３０分間培養した。媒質中で２回流ｒトシた後に、
細胞をＦＡＣ５を使用して分析した。Ｌ６によって決定
される抗原を発現しないＣＥｌｄ？Ｍ胞を、隙の標的細
胞対照標準として使用した。
実施例Ｅ−２゜ 結果 ＋１１　　Ｌ６（，４６１）に対する抗イディオタイプ
犠Ａｈ（Ａｂ２）の発生 Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ａマウスをＬ６で免疫さぜ、その
膵臓細胞をミエローマＮＳ二１と融合させ、次いでＦａ
ｂ　Ｌ６　に結合性のハイブリドーマ上澄液を選別する
ことによって、−・イブリドーマ生産性抗イディオタイ
プｒｎＡｂを得た。ＦａｂＬ６に結合する上澄液を有す
る井戸からの細胞を２回クローンし、そしてごれらのク
ローンを試験して、Ｆａｂ　　Ｌ６に結合しＦｅＬ６９
．６５（Ｋの対照標準として使用）には結合しないｍＡ
ｂを作るそれらの能力を調べた。８種の融合物から、Ｆ
ａｂに対するｍＡｂを作る２４種のノ・イブリドーマを
分離し、安定化し、そして腹水生ＭＫ使用した。それら
は数種の異なったアイソタイプを示した（表ＸＶＩ）。
注）申　ｇＰＬＡ　ｂ　Ｌ　６が〃−３３４７癌細胞上
の標的抗原に結合するのを阻止する能力として決定。
腹水から精製したＡｂ２を使用して更に試験を行なった
（下記参照）。
（２）Ｌ６のイテイオトープに結合するＡｂ２の特性記
述はじめの選別により、試験した２４徨のハイブリドー
マのうちの１４種が癌細胞へのＬ６（０，２〜０．４μ
ｙ／ｌｎｌで試験）の結合の９　ｏ＝ｘ　ｏ　ｏ％を阻
止するＡｂ２を作ることを確認した。更に試験を行なっ
て細胞上の標的抗原へのＬ６の結合を阻止する能力を調
べた。このような阻止はＡｈ２がＬ６のイデイオトーブ
領域と反応すれは起ると想定される。この目的のために
、抗原の資源としてゲルタールアルデヒド固定Ｈ−３３
４７細胞を利用するＥＬＩＳＡを使用した。第２３図に
示すように、癌細胞へのＬ６（０，２μｇ／ｒｔｌ　）
の結合は、Ａｂ２がｏ、５ｐｒＪｒＬｔおよび５μｇ／
ＴＩＬＥの濃度で加えられたときに阻止された。阻止性
Ａｂ２のうちの２ａＩはｔ、Ｇ２ａでめり３檀はＩｇＧ
２ｂでめり残余はＩＱＧＬであったが、７棟のＩｇＧ１
または２桟のＩ、Ｈの抗体のどれ１つとして阻止性はな
かった。
上記の固相分析においてＬ６の結合を阻止しうる１４徨
のＡｂ２をＦＩＴＣで標識して分析した。それぞれの結
合体をＥＬＩＳＡによって分析して、ＦａｂＬ６への結
合の北方ならびに抗原陽性癌細胞へのＬ６の結合を阻止
する能力を調べた。これは標識抗体が非標識抗体と全く
同様に挙動することを確かめるために行なった。ＦＩＴ
Ｃ標、ａ１１ｂ２を１ｉ−３３４７＠Ｊ細胞に対するＦ
ａｂ　Ｌ６　　（ａ相役４ｔで添加）に加えたとき、１
４橿のＡｂ２のうちの８独はＦａｂＬ６に依然として結
合しえたが、残り６捌のＡｂ２の結合は完全に阻止され
たことが児ｄされた（第２４自）。この分析においてＦ
ａｂＬ６の代りＫＰＥ標ｆｌＬ６を使用すると、Ｆ６は
細胞への結合を保持し、６種の非結合性Ａｂ２の存在に
おいて置換されなかった（第２５図）。
標的抗原へのＦ６の結合を阻止した且つ既に結合したＦ
ａｂＬ６もしくは細胞へは結合しえなかった６ｓのＡｂ
２をえらんで更に試験を行なった。以下の項において報
告する研究はこれら６種のＡｈ２の試料について行なっ
たものであり且つＬ６決定抗原の「内部像」として作用
しうるＡｂ２を確認することを主たる目的とするもので
ちる。
（３１Ｆ６で発生されるＡｂ２の特異性競合結合阻止分
析においてＦＡＣ５について試験するとぎＦ６と同じ特
異性をもつ２橿のｆｌＬＡｂ　　（Ｆ　２−６と０１２
／２８−２４）がある。これら２ｄのｍＡｂを徨々の濃
度のＡｂ２と混合して、Ａｂ２が癌細胞への２種の（Ｆ
６様の）ｔｐｈＡｂの結合を阻止しうるか否かを試験し
た。試験した１４ｇのＡｂ２のどれ１つとして、第２６
図におけるＦ６について示したのと同様に分析したとき
、Ｌ６決定抗原への０１２／２８−２４の結合を阻止す
るものはなかつこ。試験した１４棹のＡｂ２のうちの８
種は高−度（２０〜２００μｇ／ＩＩＬｔ）において１
２６（１μｇ／１Ｌｔ）の結合を阻止することができた
。Ｃれは、０１２７２８−２４がＦ６のイディオタイプ
とは異なるイディオタイプをもつこと及びＦ２６とＦ６
はオーバーラツプするイデイオトープをもつことを示唆
している。
（４）Ａｂ２エピトープの特異性 Ｌ６抗イディオタイプ・モノクローナル抗体のエビトー
１特異性を競合実験において実証した。これらの実験に
お（・て、Ｆ６、Ｊ５５８Ｌネズミ科動物ラムダ１軽質
鎖を付随させた想像上のＬ６重重質鎖遊離の想像上のＬ
６軽質鎖、または不適切なヒト１ｇＧ１のいづれかを試
験して、ビオチニル化した想像上のＦ６に対するそれぞ
れの抗イデイオタイプ抗体の結合についてのその競合能
力を調べた（第２７図）。１４檀のＡｂ２のそれぞれは
、ビオチニル化した想像上のＬ６分子に結合する能力に
よって、クローンしたＦ６　　Ｖ領域を特異的に認識す
ることを示した。この結合は非標識の想像上のＦ６によ
って阻止しうるが、不適切なヒトＩｙＧＩＶＣよっては
阻止しえないことが示された。８糎の、４６２（＃１、
＃２、＃４、＃６、＃７、＃８、＃９、および＃１５）
は遊離の想像上の軽質鎖によっである程度阻止すること
ができたが、マウス・ラムダ１を付随させた想像上の重
質鎖によっては阻止することができなかった。
それ故、これら８４１［のＡｂ２はＬ　６　ｏＴＫｆｉ
＊Ｍ付随決定因子をｇ決定する。これら８種は細胞に結
合したＦ６１”ａｈに結合しうるＡｂ２である。これら
Ａｂ２のうちの２種（＃１２および＃１３）は／　５５
８　Ｌ＠’Ｘ＠を付随させたＦ６の想像上の重質鎖によ
って阻止されたが、遊離の想像上の軽質鎖によっては阻
止されず、従ってそれらはＦ６　Ｖ付随決定因子をｇ識
する。残余のＡｂ２　（＄３、＃ｌＯ１＃１１、および
＃１４）はクロー／したｒ領域のいづれかによって別々
に阻止されなかったので、それらは適切なＶ領域の組立
てによってのみ生成する組＠−ぜの決定因子に特異性で
あるに違いない。これらの結果はまた直接の結合研究を
通しても確認された。
（５１Ａｂ３の訪発 結合性の５１４に関連すると思われた６種のＡｂ２のう
ちの５種をＫＬＩＩに結合させて、実施例Ｅ−１の（４
３で述べたようにしてＢＡＬＢ／ａマウスおよびＣ３ｊ
！／　／　ｆ／　ａＮ　ｗ　’７　スを免疫させるため
に使用した。これらのマウスから周期的に採血し、それ
らの血清を分析しｔム 結合阻止分ｌ′ｒをまず行なって免疫マウスがＡｂ３　
（Ａｂ２に特異的に結合する能力によって確立されうる
）を作るように思われるか否かを決定した。マウスから
の血清の種々の希釈液を、４６２（１，０μｇ　／　Ｊ
ｔｊ）と混合し、この混合物をＦａｈ　Ｌ６を被覆した
プレートに加えて、ＦｅＬ６Ｌ６への、４６２の結合を
ＥＬＩＳＡによって定した。結果を、与えられたマウス
血清の存在下でのＦａｂ　Ｌ６へのＡｂ２の結合の附止
チとして示した。第２８図に示すようｆＣ，Ｆａｂ　Ｌ
６への、４６２（１，０μｇ〜）の結合は数種の免疫マ
ウス血清の１　：　２００希釈において９０％以上阻止
された。親和精製抗血清は同じ分析においてＡｂ２の結
合を阻止することが見出された。これは試験したＡｂ２
のすべてについてみられ、Ａｂ３がＡｂ２パラトープ領
域に対して生産さｎたことを示している。Ａｂ２に対す
るＡｂ３抗イディオタイプの誘発はＢＡＬＢ／ｃマウス
およびＣ３Ｈ／ＨａＮマウスにおいて同様であった。
Ａｂ２がＬ６抗原の「内部像」として作用するならば、
それはＬ６（Ａｂｌ）によって決定さｎる抗原に特異的
に結合するＡｂ３を刺戟しうるものであるべきである。
Ａｂ２で免疫させたマウス中に発生するＡｂ３の抗ＪＱ
特異性を試験するために、親和精製免疫マウス血清の種
々の希釈ｇをＬ６陽性癌細胞腺／／−３３４７７３’ら
の細胞への結合について試験した。Ｌ６が結合しないＣ
ＥＭａ胞を陰の対照ｅＡ準として使用した。、４６２（
＃１１と＃１２）で免役すぜたＣ　３　Ｈ／ＨａＮマウ
スからの血清←第２９図）およびＡｂ２（＃１４）で免
疫させたＨＡＬＢ／ｃマウスからの血清（弔３０図）を
１癌細胞に結合した＠ （３１討議と実験 我々は多くのヒト癌上に発現される炭水化物（７ｉ、Ｊ
ｆＸ、に結合するマクス湛Ａ６　　（Ｌ　６　）に対す
るモノクローナル仇イテイオタイプ抗体（Ａｂ２　）を
発生させた。これらのＡｂ２をまずＦａｂ　Ｌ６断片へ
の結合について選別し、次いで癌細胞上の標的抗原への
Ｌ６の結合を阻止する能力について選別した。ＦａｂＬ
６への結合についてまずえらばれた合計２４種のＡｂ２
のうち、１４種のＡｂ２が抗原陽性癌細胞へのＬ６の結
合を阻止した。後者（１４Ｊｎ）のＡｂ２のうちの６種
は細胞上の抗原（既に結合したＬ６　　Ｆａｂ断片に結
合することができなかった。このことはそれらが抗原結
合性の場に付随するＬ６の領域を確認することを示唆し
ている。これら６ａ１のＡｂ２を、クローンしたＬ６軽
質および重質類の可変領硫について試験すると、４種の
Ａｂ２は適切なｒ領域の組合せのみＫｍ合したのに対し
て２１のＡｂ２は不適切な可変軽質銀を付随させた可変
重質類を認識した。そしてこれらのうちのどれ１つとし
て軽質類を結合させることはできなかった。対照的に、
細胞に付いている遊離の想像上のＦａｂＫ結合した８種
の試論したＡｂ２のすべては、想像上のＬ６＠質鎖忙結
合することができた。
生体内での、４６１様の応答は、細胞に何いているＦ、
ｂＬ６に結合しなかった且つ組合せの又は可変の重質類
付随決定因子のいづれかに結合したＡｂ２を使用したと
ぎにのみ得られた。対照的に、癌細胞に付いているＦａ
ｂ　Ｌ６　に結合した且つ単離された想像上のＬ６軽質
鎖ＫＮｒｊ合したＡｂ２につ（・て、それらのすべては
マウス中にＡｂｌ様のＡｂ３応答を誘発させなかった。
Ａｂ２　（＃１１．＃１２、および＃１４）は数種の異
なった型の分析において、「内部像ＪＡｂ２としての挙
動を示しへ ２ＢのＡｂ２　（＃１１．＃１２）はマウス中鎖Ａ６１
様Ａｂ３　ｉ答を誘発させることができた。これらのＡ
ｂ２のいづれかで免疫させたマウスρ１らの血清はＬ６
と同じ特異性で癌細胞に結合することができた。Ａｂ３
はアロジエネイックＣ３Ｈ／ＩＩａＮマウス中に誘発さ
れたので、それはＡｂ２が免役レギュレーター（Ｌａｊ
、〆、に１等、１９８６゜Ｂｔｏｔｈｉｍ、１Ｊｔａｐ
ｈｙａ、Ａｃｔａ８６５：１２７　１３９）として働く
ならば期待されたであろうような、アロタイプ制限を受
けなかった。むしろ、これらＡｂ２はＬ６抗涼の「内部
像ＪＣＵデｈａｉｎ、Ｊ、等、１９８２　、　Ａｎｘ　
、ｌｍｍ５ｎｏｌ。
１３３Ｄ：１７９−１Ｂ９：Ｌａｇ、Ｖ、に、等、１９
８６゜Ｂ４０ｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｇ、Ａｃｔａ８６
５：１２７　１３９）として挙動した。Ｉｆ（１のＡｂ
２　（＃１４）は共遺伝系においてＡｂｘ６ＰのＡｂ３
応答を訪発しうろことも発見された。
「倣庄物の寄託〕 ここに示したモノクローナル抗体を生産する下記ノ・イ
ブリドーマ細胞腺が米国メリーランド州ロックビルのア
メリカンΦタイフ・カルチャー・コレクショｙ　（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ　ＣｓＨｕｒｇ　ＣｏＨｇｃｔｉ
ｏｎ　）に寄託され、下記の受理番号が付与された。
本発明は寄託された細胞腺によって範囲を限定されるべ
きではない。寄託された細胞腺は本発明の一面の単一の
説明のためのものであり、機能的に均等な細胞腺は本発
明の範囲内にあるからである。事実、ここに示し記述し
たものの他に本発明の櫨々の変形が上記の記述および添
付図面から当業者にとって明らかになるであろう。この
ような変形は本発明の範囲に入ると解釈されるべきであ
る。
また、ヌクレオチドについて与えられたすべての基材の
対の大きさはおおよその値であり、記述の目的に使用さ
れるものであることも理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
第１図は抗原刺激によって開始される４種のイテイオタ
イプおよび抗イデイオタイプの応答の図式ダイヤグラム
である。抗イデイオタイプ抗体生産の刺激ＫｇいてＡｂ
ｌの代りをするＴＨ（ＩＢ、ＩＤ）または７’！５（１
（’）が示しである。 第２図はＡｂ２が抗腫瘍免役を誘発しうる３つの経路を
示す。２ＡはＡｂ２　Ｋよる免疫の際の抗原特異性ＴＨ
の誘発を示す。２Ｂは通常はサイレントであるＡｂｌの
特異性＋ の誘出を示す。２ＣはＩｄＴ５の開始を示す。 第３図は内部像抗イデイオタイプ抗体による免疫により
抗−抗原応答を誘い出す図式でおる。 第４図は腺９０．３（◆で示す）のＴ細胞がＭ　Ｃ’　
Ａ　−１４９０の成長を阻止する（パネルＡ）が、ＭＣ
Ａ−１５１０またはＭＣＡ−１５１１の成長は阻止しな
い（パネルＢおよびＣ）ことを示す。対照標準Ｔ細胞（
−ｏ−で示す）を混付した腫瘍の成長を比較のために使
用した。 第５図は腫瘍をもつマウスの自動−抗イデイオタイプｓ
Ａｈによる治療が腫瘍の成長を阻止することを示す。 ｍＡｂは８．１３．１７および２１日目に腹膜内投与し
た。 腫瘍の大きさはそれぞれの処理グループの１０匹のマウ
スについての腫瘍の平均面積として示す。マウスは惰Ａ
ｈ４．７２　（−ｅ−）、惧Ａｈ　５．９６　（（）−
）、惰Ａｈ　８．２（−ｏ−）またはｐＢｓ　（−−−
）で処理した。＊ｔ１．。２５未満のｐｌ　＊　輯’ｚ
ｏ、ｏ　１未満のｌ’、申＊＊は０．００１禾満のＰ、
の有意差である。 第６図は腫瘍をもつマウスの自動抗イデイオタイプ・モ
ノクローナル抗体が成長しつつある肉朧の退化を誘発す
ることを示す。ｍＡｂ　４．７２　（＋）または、に、
４Ｍ５．９６（÷）で治療した後の０．２Ｃｆｆｌ！以
上の腫瘍をもつマウスの数をＭＣＡ　−１４９０（上部
の図）またはｒ’ｄ　ＣＡ　−１５１１（下部の図）に
ついて示す。 第７図は抗イデイオタイプ抗体生産性ハイブリドーマ２
Ｃ１の培養上澄液によるｎ−２６６９クローン１３細胞
へのｔｎＡ　６　Ｍ　Ｇ〜２１の阻止を示す。 第８図はｍＡｂ　　ＭＧ−２１へのモノクローナル抗イ
デイオタイプ抗体の直接結合を示す。種々のｖＩｋ度の
ｍＡｂ２ｃ１（十）または対照標準免疫グロブリン／’
１．１７（÷）を、ｍＡｂ　　ｉ’ｄＧ−２１を予め被
覆したポリ塩化ビニル井戸に加えた。 第９図は種々のｍＡｂに比べての、ＮＧ−２１に対する
抗イデイオタイプｍＡｂ　　２Ｃ１の特異性を示す。 第４０図はｍＡｂ　　２Ｃ１の存在下または不在下での
Ｍ−２６６９細胞に対するＦＩＴＣ結合ＭＧ−ｚｌの細
胞分類プロフィルを示す。腫瘍細胞をＦＩＴＣ結合ｙａ
−２ｘ単独（４０μｇ　／酊、パネルａ）で着色するか
又は着色しないままで背景レベル（パネルｂ）を得た。 パネルｅ　−ｆは種々の濃度（パネルＣ１１６０Ｐｆ／
ｒｔｔｔ”、パネルｔ、８０ｐｙ／μ：パネルー、４Ｑ
ｐｇ／ｍｅ：パネル八２０ｔｔＱ／ｕ）の慣Ａｈ　　２
Ｃ１の存在下でのＦＩＴＣ結合Ｍｃ−２１による着色の
阻止を示す。パネルクおよびルは惰Ａｂ２６．８（１６
０μσ／紅）および／’１．１７（１６０μｇ／１１１
りの存在下でのＦＩＴＣ結合Ｍ−２１の着色を示す。 第４１図は抗Ｐ　９７　ｍＡｂ　９６．５のＦａｂ断片
への精製抗イデイオタイプ抗体（Ａｈ　２　）の結合を
示す。ｔｎＡ　ｂ　９６．５のＦａｂ抗体断片をプレー
トに入れて封鎖し、種々の希釈度のＡｂ２を加え、そし
てＡｂ２の結合を実施例Ｄ−１の（５）に記載の如（Ｈ
Ｒ，、Ｐ標識ヤギ抗マウスＩＱＧ　の添加によって検出
した。 第１２図はＡｂ２がＳＫ　ＭＥＬ−２８細胞への惧Ａｈ
９６．５の結合を阻止しうろことを示す。仇Ｐ９７ｍＡ
ｈ９６．５　（０，３３μｇ／ａｇ）を精製抗４デイオ
タイプ抗体（Ａｂ２）（ｉ０ｐｃｔ／ｍｌ）と混合し、
ＳＫＭＥＬ２８細胞（細胞当りＰ９７０分子約４００，
０００個を発現する且つイムノロン・プレートの井戸に
入れた）に加えた。細胞へのｍＡ　ｂ　９６．５の結合
をＥＬＩＳＡによって検出し、Ａｂ２によるこの結合の
阻止を肘算した。 第１３図は抗Ｐ　９７　ｍＡｂ　９６．５のＦａｂ断片
への＋ｔｓＩ標識Ｐ９７抗原の結合の抗イデイオタイプ
抗体（、ｏ　２　）による競合的阻止を示す。それぞれ
のＡｂ２の瀉々の希釈ｇを放射性沃素化Ｐ９７と混合し
、ｒｎＡｂ　９６．５のＦｃＬｂ断片へのＰ９７の結合
を固相分析で決定した。 第１４肉は抗イデイオタイプ抗体（Ａｂ２）が放射性標
識Ｐ９７への抗Ｐ９７　ｍＡｂ　９６．５のＦａｂ断片
の結合を阻止しうろことを示す。ｍＡｂ９６．５のＦａ
ｂ断片をイムノロ／・プレートの井戸に人ｎ５Ａｂ　２
　（ｌｏ　ｐａ／１ｕｔ）を加えた。 Ａｂ２を試験して、Ｆａｂ断片上のＰ９７結合性の場を
封鎖することによって、ＦｅＬｂｗｌ、覆井戸への放射
性標識Ｐ９７の結合を減少さぜろＡｂ２の能力を副べた
。 第１５図はＰ９７抗原の種々のエピトープを認識して抗
Ｐ９７惰Ａｂ９６．５のＦａｂ断片へのＡｂ２の結合を
阻止するｍＡｂＯ能力の分析をボす。それぞれの抗Ｐ　
９７　ｍＡ　ｂを試験すべぎＡｂ２と混合し、ｍＡｂ　
９６．５のＦａｂ断片を被覆したプＶ−）に加え、次い
でヤギ抗マウスＩ（ＩＧｌ−ＨＲｌ）を加えてＦａｂ断
片へのそれぞれのＡｂ２の結合を検出した。与えられた
Ａｂ２の結合を単独で試験するか（＋）、またはＰｌ、
１７免疫グロブリンの存在下で試験して（ｘ　−−ｘ’
−）、Ｐ９７に特異性の櫨々の慣Ａ６を加えた後に見ら
れる結合（−０−）と比較した。 第１６図は異なった抗Ｐ９７ｍＡｂへのプレート処理抗
イデイオタイプ抗体（Ａｂ　２　）の結合、および矢に
Ｐ９７に結合する抗Ｐ９７ｍＡｂの能力４及ぼす該Ａｂ
２の効果を示す。それぞれのＡｂ２をプレートに入れ、
種々の濃度の抗Ｐ９を惧Ａｂ８−２．４．１または９６
．５を加え、放射北天素化Ｐ９７への結合抗Ｐ９７ｍＡ
ｈの結合を測定した。 第１７図は異なった１％Ａｈへのプレート処理抗イデイ
オタイプ抗体（Ａｈ　２　）の結合、２よび仄にＰ９７
に結合する抗Ｐ９ＶｒｎＡｂの能力に及ぼす該４４ｂ２
の効果を示す。それぞれのＡｂ２をプレートに入れ、１
々の濃度の抗Ｐ９７ｍＡｂ　９６．５　（パネルＡ、５
１Ｊ＠　）　、　ｓＡ　ｂ　１３３．１　（パネルＡ、
４ｉ１．線）、またはｒｎＡｂ　　ｌ　３３．３　（パ
ネルＢ）を加え、結合抗Ｐ９７ｍＡｂの放射性沃素化Ｐ
９７への結合を測定した◇ 第１８（２）のパネルＡはＡｂ３を含むマウス血情のプ
レート処理／’９７への結合を示す。血清はＫＬＩＩに
結合した抗イデイオタイプ抗体により免疫さぜたＢＡＬ
Ｄ／ｃマウ２から誘導された。第１８図のパネルＢはｍ
Ａｂ　９６．５の及びＰ９７に対して免疫させたマウス
から貯蔵した血清の、プレート処理Ｐ９７への結合を示
す。 第１９図は２ｇ７陽性細胞による（然しＰ９７陰性細胞
によってではない）Ａｂ３へのＦ９７の結合の阻止を示
す。 Ｐ９７陽性２Ａ（Ｐ９７遺伝子移植マウスメラノーマに
−１２３５−Ｍ２腺）細胞は免疫ＢＡＬＢ／ｅマウスか
らのＡｂ３のプレート処理Ｐ９７への結合を阻止しえた
が、Ｆ９７−陰性（親のに−１７３５−Ｍ２）細胞は阻
止しえなかった。パネルＡはＡｂ２＃３により免疫させ
たマウスからのデータを示し、パネルＢ、Ｃ，およびＤ
はそれぞれ＃７、＃４、および＃５により免疫させたマ
ウスからのデータを示す。 第２０図はプレート処理Ｐ９７に結合する抗体を、Ｐ９
７陽性２Ａ細胞（２α）、／’９７隘注の親のＸ−１７
３５−Ｍ２細胞（ｐｃＬｒ）による該抗体の吸収後に、
または抗体単独について試験した結果を示す。パネルＡ
は２Ａ細胞による憔Ａｂ９６．５の吸収がプレート処理
Ｐ９７への倶Ａ　ｂ　９６．５の結合を阻止することを
示す。パネルＢはＦ９７で免役させたマウスからの血清
抗体（α−Ｐ９７）の、２Ａ細胞による吸収がプレート
処理Ｐ９７への血清抗体の結合を阻止することを示す。 パネルＣはｐｌ、１’ｒで免疫さぜたマウスからの血清
抗体（α−ＰＬ、１７）がＦ９７に結合しないことを示
す。パネルＤは正常のマウス血清（ＮＭＳ）がＦ９７に
結合しないことを示す。 第２１図は免疫マウスの血清中のＡｂ３のプレート処理
Ｐ　９７　ヘ（ＱＭ合ｆ示”ｆ。Ｃ３Ｈ／Ｈ＃７ｖ？　
’７　スｆＫ　Ｌ　ＨＫＭ合の抗イデイオタイプ抗体に
より免疫させた。免疫マウスからの血清中のＡｂ３の、
Ｐ９７抗原への結合を固相ＥＬＩＳＡによって分析した
。 第２２図は惧Ａｂ９６．５のプレート処理Ｐ９７への結
合を示す。抗Ｐ９７　ｍＡｂ　９６．５のプレート処理
Ｐ９７抗原への結合ン固相ＥＬＩＳＡによって分析した
。 第２３図はＡｂ２による、Ｈ−３３４７癌細胞への％Ａ
ｈの結合の阻止を示す。Ａｂ２の濃度は次のとおりであ
る。 ％圀５０　Ｐｃｔ／ν：　　圏躍　５．０μｇ／威；口
０．５μｇ／ば　　　■　０．。２５μｒｔ　／Ｉ１１
惰Ａｈ　　Ｌ６は１６０μｇ／ＩＬｔの濃度で使用した
。 第２４図−工ＦａｂＬ６飽相＃−３３４７細胞へのＦＩ
ＴＣ〆 椋ｔＲＡｂ２の結合を示す。２４Ａ図は次のＡｂ２　Ｋ
ついての結果を示す。＋１：＋３：番７：４−９：＋ム
／′ １１；モ丑１３；÷　１５゜　２４Ｂ図は次のＡｂ２に
ついての結果を示す。暑２：＋　４；→ト　６；↓　８
：モ）１０；÷′１２：÷１４゜ＬＦＥ（線状螢光当量
）比は試料螢光と背景螢光との比に等しい。 第２５図はＰＥ標識Ｌ６飽和＃−３３４７細胞へのＦＩ
ＴＣ標１１Ａｂ２の結合を示す。試験したＡｂ２をそれ
ぞれのグラフにボ丁。略号は次のとおり；　　−ＦＩＴ
Ｃ標識Ａｂ２：一−−フィコエリスリン標識ｍＡｂ　　
Ｌ６　（約１ｒＮｉ／Ｍ溶液の１：２５希釈において使
用）。ＲＦＬ　　ＬＦＥ比−試料螢光とフィコエリスリ
ンの背景螢光の比：ＧＲＦＬ　　ＬＦＥ比−緑色螢光線
状螢光当量（試料螢光とＦＩＴＣの背景螢光との比）。 第２６図はＬ６　Ａｂ２　Ｋよる、Ｅ−３３４７細胞へ
のｍＡｂ　　Ｆ２６の結合の阻止を示す。Ａｂ２の濃度
は次のとおりである。　　￥ＩＦＺ；Ｊ　２００　ｐｇ
／１１１：Ｉｎ　２０１ｔｇ／ＩＬｔ：旺コ２−０１’
ｔ／”ｏ　ｍＡ　ｂ　　／’　２６は１．０μｙ／ＩＬ
Ｉの濃度で使用した。 第２７図はＡｂ２エピトープの特異性を示す。Ｌ６抗イ
ディオタイプ可変領域特異性の競合分析は実施例Ｅ−１
の（９）に述べたようにし１行なった。ビオチニル化し
た想像上のＬ６抗体の添加の０，５時間前に競合体を６
μｙ／１１１の濃度で加え、該抗体を４μｇ／ＩＲＩＩ
Ｑ最終濃度になるよう加えた。 競合体は仄のとおりであった。１想揮上のＬ６ｍＡｂ：
回想像上のＬ６ｍＡｂの可変重質類プラスＪ５５ＢＬう
ムダ■軽質鎖；口想像上の１６ｍＡｂの可変軽質鎖：ロ
不適切なヒトＩＱＧ１（ＰＩＶ　Ｐ３２８１Ｂ８）不適
切なヒＢ、、Ｇ１はいづれのＡｂ２に対しても阻止を示
さなかった。直接の結合研究は想像上のＬ６重重質につ
いてＶ−カッパＡｂ２のいづれのｇｉｖも示さなρ・つ
た。そして逆もまた同様であった。 第２８図はＡｂ３を含むＢＡＬＢ／ｅマウス血清＠２８
Ａ図）またはＣ’　３　Ｅ／ｊ！／　ａＮ　マウス血、
ｆｆ（第２８Ｂ図）の存在下での、４６１へのＡｂ２の
結合の阻止を示す。Ａｂ３含有血清の希釈は次のとおり
であった。Ｉ＆　１　：　２０　；　ｍｌ　：　２００
０　；　！ｍｌ　１　：　２０００　；■１：２０，０
００゜Ａｂ２は１．０μｒｔ／Ｉｎｌの濃度で使用した
。 第２９図はＡｂ２で免疫させたＣ　３　Ｈ／Ｈ−Ｎマウ
スからの親和精製血清の、Ｈ−３３４７癌細孔への結合
をホす。 第１図の免疫後６〜２０週間、血清をとった。抗血清は
次のとおりであった。−抗／’１．１７：番抗Ａｂ２＃
３：ｅ仇Ａ６２＃１１：◆仇、４６２＃１２；÷仇Ａｂ
２＃１３；　各抗Ａｂ２＃１４：　　↓抗Ａｂ２　＃１
５゜０．０１６μｇ／ａの濃度でのｔｎＡｂＬ６の結合
も示した（　−−−）。 ＬＦＥ（線状螢光当ｔ）比は試料螢光と背景螢光との比
に等しい。 第３０図はＡｂ２で免疫させたＢＡＬＤ／ｅマウスから
の親和ｆｎａ皿清血清Ｈ−３３４７癌細胞への結合を示
す。 第１図の免疫後６〜２４週間、血清をとった。抗血清は
次のとおりであった。−抗Ｐ１．１７：＋抗、（６２＃
３：＋仇Ａｂ２　＃１１ニー９−　ＶＣ，Ａｂ２　＃１
２；−Ａ−仇Ａｂ２＃１３；番抗Ａｂ２＃１４ニーｆ；
；ゴ抗Ａｂ２　＃１５゜０．０８μｔ／ＩＬＩの濃度で
のｔｔｔＡｂ　Ｌ６の結合も示した（　−−−−）。 ＬＦＥ（ｉ状螢光当ｔ）比は試料螢光と背景螢光との比
に等しい。 Ｃ Ａ９　　　　　Ａｂｌ　　　　　　Ａｂ２Ｑ　　　　Ｔ
ＨＩ　−Ａｂ２ Ａｙ　　　　　Ｔｓｌ　　　　　Ａｂ２２Ａ　　Ａｑ　
　　　　Ｔｙｌ　　　　　Ａｂ２ＦＩＧ、３ すザ（１＝＋−■４零背 ４’？　Ｚ　ｒｌｔｎ　／６３６　ｎｗ＋　　Ｉ：　　
Ａ”Ｔｓｏｈ恢ＦＩ６．２ ２．０　　０．４　　０，０８　０．０１６０．００３
２０．０Ｏ０６４オプ己　イ＋　　　’ｔＸ　　ノ’（
、−／’３／ｗ＋Ｌ）Ｅｌ（、、／θ 蛍　も汁、克 ｂ２ Ｆ／（。 ／Ｌｆ 結合しｒ：　Ｐ’ｒ’１ｆｆ−１２ｓ（ＣＰ’ｎ）２６
．６ ８．８ ２．９ 七／２０− 力１し抗イ本（μＳ　／７７１１　） 七／ −１−ｔｔ／−ｖＬｄ本（７−ｃ＞　／ｄ）Ａ’ｏ３含
育マウス五・情〉布滝（ Ｆ／　６−。 ＝２１ １　０．３　　　０．０Ｂ７　　０．００４ｒｎＡｂ　
９６．５　（ｐｇ／ｍｌ　）オた　イ岑Ｃ？害／ｍｊＬ
） 血清・右 級 Ａｂ３皿ｊ亙３蓮家 朔 江− 咄 ＼９ ＬＦＥ　とヒ ←φ十 ？ ＬＦＥ　　ヒと 引 〈 （ｆぐ　ニア、４ Ｆ″１６　　パｇ ０１、Ｉ”ｌ　　　　　ｏ　　　　０ 口　　　〜　　　ロ　　　１”− ビ］ に） 咄 ＼Ｓ −；１′≦　ユ９ ［Ａｂ　３］ ｕｇ／ｍｌ 手続補正書（方式） 平成１年４月５日 特許庁長官　吉　１）文　毅　殴 １事件の表示 昭和６３年特許願第２２４８７７号 ２発明の名称 抗イデイオタイプ抗体を使用する腫瘍の免疫治療法３補
正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　ブリストルーマイヤーズ　カンパニー４代理人 手続補正書 平成１年４月ぢ日 特許庁長官　吉　１）文　殺　殴 １事件の表示 昭和６３年特許願第２２４８７７号 ２発明の名称 抗イデイオタイプ抗体を使用する！［！Ｉ！瘍の免疫治
療法３補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　　ブリストルーマイヤーズ　カンパニ４゜代理人 平成１年１月３二日 ６補正の対象 ７補正の内容 明細書の図面の簡単な説明の欄 ６補正の内容 （１）明細書２７３頁５〜１１行を次のとおり補正する
。 ［第２４図はＦａｂ　Ｌ６飽和Ｈ−３３４７細胞へのＦ
ＩＴＣ標ｆｉＡｂ２の結合を示す。Ａｂ２ば次のとおり
であった。＋１；　÷３；　　−１１−？；　　−、ｙ
　　９；−１−１１；−８−１３；→１−１５；　　−
１１−２；　　−Ａ−４；　　−４−６；　　↓８；イ
±　１　ｏｉ　　−ｅ−１２；　　＋　１４゜　ＬＦＥ
　（線状螢光当ゝ（

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトのメラノーマに付随するＧＤ３抗原を決定する
    第２抗体に存在するイデイオタイプを特異的に認識する
    モノクローナル抗体から成ることを特徴とするモノクロ
    ーナル抗イデイオタイプ抗体。 ２、ＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ９４８４を付与さ
    れたモノクローナル抗体２Ｃ１から成る請求項１記載の
    モノクローナル抗体。 ３、ヒトのメラノーマに付随するＰ９７抗原を決定する
    第２抗体に存在するイデイオタイプを特異的に認識する
    モノクローナル抗体から成ることを特徴とするモノクロ
    ーナル抗イデイオタイプ抗体。 ４、ＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ９４９８を付与さ
    れたモノクローナル抗体＃３から成る請求項３記載のモ
    ノクローナル抗体。 ５、ＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ９４９７を付与さ
    れたモノクローナル抗体＃７から成る請求項３記載のモ
    ノクローナル抗体。 ６、ヒトの肺癌抗原を決定する第２抗体に存在するイデ
    イオタイプを特異的に認識するモノクローナル抗体から
    成ることを特徴とするモノクローナル抗イデイオタイプ
    抗体。 ７、第２抗体がＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ８６７
    ７を付与されたモノクローナル抗体Ｌ６から成る請求項
    ６記載のモノクローナル抗イデイオタイプ抗体。 ８、ＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ９５４４を付与さ
    れたモノクローナル抗体＃１１から成る請求項７記載の
    モノクローナル抗体。 ９、ＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ９６８１を付与さ
    れたモノクローナル抗体＃１２から成る請求項７記載の
    モノクローナル抗体。 １０、ＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ９６８０を付与
    されたモノクローナル抗体＃１４から成る請求項７記載
    のモノクローナル抗体。 １１、請求項１記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 １２、請求項２記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 １３、請求項３記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 １４、請求項４記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 １５、請求項５記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 １６、請求項６記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 １７、請求項７記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 １８、請求項８記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 １９、請求項９記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆａ
    ｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（αｂ′）＿２の断片。 ２０、請求項１０記載のモノクローナル抗体のＦｖ、Ｆ
    ａｂ、Ｆａｂ′、またはＦ（ａｂ′）＿２の断片。 ２１、決定された腫瘍抗原に対してイデイオタイプを発
    現する抗腫瘍抗体を投与された又は現在投与されつつめ
    る腫瘍患者に誘発される抗イデイオタイプ抗体の水準を
    検査する方法であつて；該腫瘍抗体のイデイオタイプを
    特異的に認識するモノクローナル抗体イデイオタイプ抗
    体を用いる競合免疫分析の使用によつて，患者の血清中
    の抗イデイオタイプ抗体の水準を測定することを特徴と
    する方法。 ２２、腫瘍抗原がオンコフエタル抗原から成る請求項２
    １記載の方法。 ２３、オンコフエタル抗原がメラノーマ抗原から成る請
    求項２２記載の方法。 ２４、メラノーマ抗原がＰ９７から成る請求項２３記載
    の方法。 ２５、自動−抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣに寄託さ
    れ受理番号ＨＢ９４９８を付与されたモノクローナル抗
    体＃３から成る請求項２４記載の方法。 ２６、自動−抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣに寄託さ
    れ受理番号ＨＢ９４９７を付与されたモノクローナル抗
    体＃７から成る請求項２４記載の方法。 ２７、メラノーマ抗原がＧＤ３から成る請求項２３記載
    の方法。 ２８、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣ
    に寄託され受理番号ＨＢ９４８４を付与されたモノクロ
    ーナル抗体２Ｃ１から成る請求項２７記載の方法。 ２９、オンコフエタル抗原が肺癌抗原から成る請求項２
    ２記載の方法。 ３０、肺癌抗原がＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ８６
    ７７を付与されたモノクローナル抗体Ｌ６との反応性を
    もつものとして特徴づけられる糖脂質抗原である請求項
    ２９記載の方法。 ３１、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣ
    に寄託され受理番号ＨＢ９５４４を付与されたモノクロ
    ーナル抗体＃１１から成る請求項３０記載の方法。 ３２、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣ
    に寄託され受理番号ＨＢ９６８１を付与されたモノクロ
    ーナル抗体＃１２から成る請求項３０記載の方法。 ３３、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣ
    に寄託され受理番号ＨＢ９６８０を付与されたモノクロ
    ーナル抗体＃１４から成る請求項３０記載の方法。 ３４、腫瘍抗原が腺維肉腫抗原から成る請求項２１記載
    の方法。 ３５、腺維肉腫、メラノーマ、および肺癌から成る群か
    らえらばれる腫瘍に特異の決定された抗原に対する第２
    抗体イデイオタイプを特異的に認識するモノクローナル
    抗イデイオタイプ抗体、またはその断片もしくは変形物
    の治療有効調剤量を患者に投与することを特徴とする生
    体内の腫瘍を治療または予防する免疫治療方法。 ３６、ヒトのメラノーマに付随するＧＤ３抗原を決定す
    る第２抗体に存在するイデイオタイプを特異的に認識す
    るモノクローナル抗イデイオタイプ抗体を製造する方法
    であつて；（ａ）（ｉ）ＧＤ３抗原あるいはＧＤ３抗原
    を認識するイデイオタイプをもつ抗体もしくはＴ細胞で
    免疫させた動物の脾臓から誘導される抗体生産性細胞を
    （ｉｉ）ミエローマ細胞と融合させることによつてハイ
    ブリドーマを生成させ、（ｂ）工程（ａ）のハイブリド
    ーマを増殖させ、そして（ｃ）このハイブリドーマによ
    つて生産されるモノクローナル抗体を収集する、 ことから成ることを特徴とする方法。 ３７、ハイブリドーマがＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ９４８４か
    ら成る請求項３６記載の方法。 ３８、ヒトのメラノーマに付随するＰ９７抗原を決定す
    る第２抗体に存在するイデイオタイプを特異的に認識す
    るモノクローナル抗イデイオタイプ抗体を製造する方法
    であつて；（ａ）（ｉ）Ｐ９７抗原あるいはＰ９７抗原
    を認識するイデイオタイプをもつ抗体もしくはＴ細胞で
    免疫させた動物の脾臓から誘導される抗体生産性細胞を
    （ｉｉ）ミエローマ細胞と融合させることによつてハイ
    ブリドーマを生成させ、（ｂ）工程（ａ）のハイブリド
    ーマを増殖させ、そして（ｃ）このハイブリドーマによ
    つて生産されるモノクローナル抗体を収集する、 ことから成ることを特徴とする方法。 ３９、ハイブリドーマがＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ９４９８か
    ら成る請求項３８記載の方法。 ４０、ハイブリドーマがＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ９４９７か
    ら成る請求項３８記載の方法。 ４１、ヒトの肺癌抗原を決定する第２抗体に存在するイ
    デイオタイプを特異的に認識するモノクローナル抗イデ
    イオタイプ抗体を製造する方法であつて； （ａ）（ｉ）肺癌抗原もしくは肺癌抗原を認識するイデ
    イオタイプをもつ抗体もしくはＴ細胞で免疫させた動物
    の脾臓から誘導される抗体生産性細胞を（ｉｉ）ミエロ
    ーマ細胞と融合させることによつてハイブリドーマを生
    成させ、（ｂ）工程（ａ）のハイブリドーマを増殖させ
    、そして（ｃ）このハイブリドーマによつて生産される
    モノクローナル抗体を収集する、 ことから成ることを特徴とする方法。 ４２、第２抗体がＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ８６７７によつて
    生産されるモノクローナル抗体Ｌ６から成る請求項４１
    記載の方法。 ４３、ハイブリドーマがＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ９５４４か
    ら成る請求項４２記載の方法。 ４４、ハイブリドーマがＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ９６８１か
    ら成る請求項４２記載の方法。 ４５、ハイブリドーマがＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ９６８０か
    ら成る請求項４２記載の方法。 ４６、ハイブリドーマを生体内で増殖させる請求項３６
    記載の方法。 ４７、ハイブリドーマを生体内で増殖させる請求項３８
    記載の方法。 ４８、ハイブリドーマを生体内で増殖させる請求項４１
    記載の方法。 ４９、ハイブリドーマをプリスタン飼育マウスに注射し
    て腹水腫瘍を成長させることによつて増殖させ、そして
    腹水中に分泌されるモノクローナル抗体をタンパクＡセ
    フアローズ上の親和クロマトグラフによつて又は硫酸ア
    ンモニウム沈殿によつて精製する請求項３６記載の方法
    。 ５０、ハイブリドーマをプリスタン飼育マウスに注射し
    て腹水腫瘍を成長させることによつて増殖させ、そして
    腹水中に分泌されるモノクローナル抗体をタンパクＡセ
    フアローズ上の親和クロマトグラフによつて又は硫酸ア
    ンモニウム沈殿によつて精製する請求項３８記載の方法
    。 ５１、ハイブリドーマをプリスタン飼育マウスに注射し
    て腹水腫瘍を成長させることによつて増殖させ、そして
    腹水中に分泌されるモノクローナル抗体をタンパクＡセ
    フアローズ上の親和クロマトグラフによつて又は硫酸ア
    ンモニウム沈殿によつて精製する請求項４１記載の方法
    。 ５２、決定された腫瘍抗原に対してイデイオタイプを発
    現する抗腫瘍抗体を投与された又は現在投与されつつあ
    る腫瘍患者に誘発される抗イデイオタイプ抗体の水準を
    検査する方法であつて；該抗腫瘍抗体のイデイオタイプ
    を特異的に認識するモノクローナル抗イデイオタイプ抗
    体を用いる競合反応の使用によつて患者の血清中の抗イ
    デイオタイプ抗体の水準を測定することを特徴とする方
    法。 ５３、腫瘍抗原がオンコフエタル抗原から成る請求項５
    ２記載の方法。 ５４、オンコフエタル抗原がメラノーマ抗原から成る請
    求項６３記載の方法。 ５５、メラノーマ抗原がＰ９７から成る請求項５４記載
    の方法。 ５６、自動−抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣに寄託さ
    れ受理番号ＨＢ９４９８を付与されたモノクローナル抗
    体＃３から成る請求項５５記載の方法。 ５７、自動−抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣに寄託さ
    れ受理番号ＨＢ９４９７を付与されたモノクローナル抗
    体＃７から成る請求項５５記載の方法。 ５８、メラノーマ抗原がＧＤ３から成る請求項５４記載
    の方法。 ５９、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣ
    に寄託され受理番号ＨＢ９４８４を付与されたモノクロ
    ーナル抗体２Ｃ１から成る請求項５８記載の方法。 ６０、オンコフエタル抗原が肺癌抗原から成る請求項５
    ３記載の方法。 ６１、肺癌抗原がＡＴＣＣに寄託され受理番号ＨＢ８６
    ７７を付与されたモノクローナル抗体Ｌ６との反応性を
    もつものとして特徴づけられる脂糖類抗原である請求項
    ６０記載の方法。 ６２、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣ
    に寄託され受理番号ＨＢ９５４４を付与されたモノクロ
    ーナル抗体＃１１から成る請求項６１記載の方法。 ６３、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣ
    に寄託され受理番号ＨＢ９６８１を付与されたモノクロ
    ーナル抗体＃１２から成る請求項６１記載の方法。 ６４、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体がＡＴＣＣ
    に寄託され受理番号ＨＢ９６８０を付与されたモノクロ
    ーナル抗体＃１４から成る請求項１８記載の方法。 ６５、腫瘍抗原が線維肉腫抗原から成る請求項５２記載
    の方法。 ６６、線維肉腫、メラノーマ、および肺癌から成る群か
    らえらばれる腫瘍に特異の決定された抗原に対する第２
    抗原イデイオタイプを特異的に認識するモノクローナル
    抗イデイオタイプ抗体、またはその断片もしくは変形物
    の治療有効調剤量からなることを特徴とする生体内の腫
    瘍を治療または予防する免疫治療剤。
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