JPH024714A - 乳酸菌培養物を有効成分とする抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 皮果よ立肌朋立夏 本発明は、莢膜性粘質物を産生ずる乳酸球菌、ストレプ
トコッカス・クレモリス及び／又はストレプトコッカス
・ラクチスとゲオトリクム・カンディダムとの培養物を
有効成分とする抗！［剤に関する。

及五負宣旦 これまで、発酵乳や乳酸菌のガン細胞増殖抑制効果につ
いては多くの報告がある。

乳酸菌にガン細胞増殖抑制効果のあることは、ブルガリ
アの［ｌｏｇｄａｎｏｖによりはじめて報告され（Ｉｌ
ｏｇｄａｎｏｖ　Ｉ、Ｇ、　ｅｔ　ａｌ、　ＦＦＢ５　
Ｌｅｆｔ、　、５７．２５９−２６１　（１９７５））
　、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌ、　ｂｕｌｇａ
ｒｉｃｕｓ）細胞壁のグルコペプチドが、作用物質とし
て単離された。

その後、米国の５ｈａｈａｎ　ｉらは、スイスマウス（
Ｓｗｉｓｓ　ｍ１ｃｅ）にヨーグルトを経口投与してエ
ーリッヒ（［１ｈｒｌｉｃｈ）腹水ガン細胞増殖への影
響を検討している。また、ラクトバチルス・アシドフィ
ルスＣＬ、　ａｃ　１ｄｏｐｈｉ　Ｌｕｓ　）やラクト
バチルス・ブルガリクスＣＬ、　ｂｕＬｇａｒｉｃｕｓ
）、ラクトバチルス・ブルガリクスとストレプトコッカ
ス・テルモフィルス（Ｓｉｒ、　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉＬ
ｕｓ）を併用して発酵したウシ初乳でも１６〜４０％の
ガン細胞増殖抑制効果を認めている（Ｓｈａｈａｎｉに
、Ｍ、　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、Ｆｏｏｄ　Ｐｒｏｔ、、４
６．　（５）。

３８５−３８６　（１９８３））。

Ｔａｋａｎｏらはラクトバチルス・ヘルベチクス・サブ
スピーシーー１−グルティＣＬ、ｈｅＬｕｅｔｉｃｕｓ
　ｓｓ。

）ｕｇｕｒｔｉ　Ｌ［ｌ　）とカンディダ・ユチリス（
Ｃａｎｄｉｄａｕｉｉｌｉｓ　Ａ６）をスクータ−とし
てつくった酸乳をラットに与え、大腸ガンの発生数を検
討した。その結果、２６週後、酸乳を与えた群では対照
群に比べ、大腸腫瘍の発生数が有意に少ながったＣＴａ
ｋａｎｏ　Ｔ。

ｅｔ　ａｌ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ　Ｍｉｃｒ
ｏｆｌｏｒａ４．（１）、３１〜３７（１９８５））　
。

５ｈａｃｋｅｌｆｏｒｄらはラクトバチルス・デルブル
ッキイ・サブスピーシー・ブルガリクス＜Ｌ、ｄｅＬｂ
ｒｕｃｋｉｉｓｓ、　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）あるいは
ストレプトコンカス・サリバリウス・サフ゛スピニシー
・テルモフィルスＣＳ．ｓａＬｉｖａＬｉｕｓ　ｓｓ．
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉＬｕｓ）でつくった発酵乳の効果を
検討している．そして、発酵乳を与えた群では実験中の
死亡率が少なく、また、ストレプトコッカス・テルモフ
ィルスでつくった発酵乳では、悪性Ｍ！１瘍の発生が少
ながったという報告がなされている（Ｓｈａｃｋｅｌｆ
ｏｒｄ　Ｌ．Ａ．　ｅｔ　ａｌ．　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
　ａｎｄ　ＣａｎｃｅｒＳ５，（３／４）、　　１５９
〜１６４（１９８３）　）　。

Ｅｓｓｃｒらも、腹腔内にＰ−３３８細胞を移植したマ
ウスにラクトバチルス・ブルガリクスを用い乳で培養し
た上ｔ？ｔをイオン交換して得た両分を腹腔内に投与し
て、延命効果のあることを認めている（Ｅｓｓｅｒ　Ｐ
．　ｅｔ　ａｌ．　Ｍｉｌｃｈｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆ
ｔ　、　３Ｂ＋（５）２５７〜２６０（１９８３）　） 荒井らは、ラクトバチルス・ヘルベチクス・サブスビー
シー・ニーグルティを含むスクータ−でつくった殺苗酸
乳をＩＣＲマウスに経口投与してエーリッヒ（Ｅｈｒｌ
ｉｃｈ）腹水ガン細胞の増殖への形容を検討して４２％
の増殖抑制を認めた〔荒井幸−部ら、腸内フローラ−と
発癌；学会出版センターｐｐ　１０５〜１２３（１９８
１）　）。

また、島田らは、マウスのＳａｒｃｏｍａ−　１８０固
形腫瘍を用いて、１４種２８株のラクトバチルス（Ｌａ
ｃｔｏｂａｃｉＬｌｕｓ’）の中から抗腫瘍活性の高い
菌株をスクリーニングした〔馬用工夫、Ｊａｐ．Ｊ．Ｄ
ａｉｒｙ　＆　ＦｏｏｄＳｃｉ．３０、（６）、２０５
　〜２１７（１９８１）　）。

Ｋａ　ｔｏらは、こうして選抜されたラクトバチルス・
カゼイＣＬａｃｔｏｂａｃｉＬＬｕｓ　ｃａｓｅｉ　Ｙ
ＩＴ　９０１Ｂ）　（ＬＣ９０１Ｂ）が同種（Ｓａｒｃ
ｏａ＋ａ−１８０）および同系１１ｆｆｉｉ（Ｌ　１２
１０　ＬｅｕｋｅｍｉａおよびＭＣＡ　Ｋ−１　ｔｕｍ
ｏｒ）に対して高い抗腫瘍活性を有することを見出した
〔にａｔ。

Ｌ．　　ｅｔ　　ａｌ．　　Ｇａｎｎ　　７２，（１）
　　４１７〜５２３（１９８１）　　）　　。

腸内乳酸菌であるビフィドバクテリウム（Ｂげｉｄ。

ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）でも抗腫瘍効果が認められている
．Ｋｏｈｗｉらは、Ｍｅ　ｔｈ−＾細胞を皮下や腹腔内
に移植したマウスにバチルス・インファンテスＣＢ．　
ｉｎｆａｎｔｉｓ）の菌体を腫瘍移植部位に投与して、
腫瘍の退縮や抑制を認めた〔にｏｈｗｉ　Ｙ．　ｅｔ　
ａｌ．　［ｌｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ　Ｍｉｃｒｏ
ｆｌｏｒａ　１．（１）、６１〜６８（１９８２）３　
−乳酸菌の産生ずる多ｔＩ！類についての効果も報告さ
れている．神道、小川らはＳ−１８０，　Ｅｈｒｌｉｃ
ｈ（Ｉｌｌ腔内）　、Ｉ　ＭＣ（ｓｏｌｉｄ）を移植し
たマウスに、Ｌ。

ｈｅＬｖｅｔｉｃｕｓ　ｖａｒ．ｊｕｇｕｒｔｉの産生
する多ＩＩ！　頚を腹腔内に投与して、延命効果が認め
られることを報告している〔神道道雄、Ｊａｐ．Ｊ，Ｄ
ａｉｒｙ　＆　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ．、３０、（６）、２
１９　〜２２５（１９８１）　）、　ＣＯｄａ　Ｍ．　
ｅｔ　ａｌ．　Ａｇｒ。

１１ｉｏ１．　　ｃｈｅｗ．　　４７，（７）、１６２
３〜１６２５（１９８３））。

Ｓｈｉｏｍｉらは、Ｓ−１８０　、、［！ｈｒｌｉｃｈ
を移植したマウスにケフィール粒から抽出した多糖を経
口投与することにより、Ｉ！！ｉ瘍細胞の増殖を抑制し
たとしている（Ｓｈｉｏｍｉ　Ｍ．　ｅｔ　ａｌ．　Ｊ
ａｐ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｂｉｏｌ．、亜，（２）７
５〜８０（１９Ｂ２））　。

しかしながら、乳酸球菌に屈するストレプトコッカス・
クレモリスＣＳｔｒ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ　）およびスト
レプトコッカス・ラクチス（Ｓｔｒ．　ｌａｃｔｉｓ）
の抗腫瘍活性に関する報告は殆どなされていない。

一方、スカンジナビアにはロングフィル（ｌａｎｇｆｉ
＋）、つ゛イリー（ｖｉｉｌｉ）　、ピーマ（ｐｉｉｎ
＋ａ）　、チッチ（　ｔａｅ　ｔ　ｔｅ）などの伝統的
な粘質発酵乳がある。それらの製゛造には、スターター
として莢膜産生球菌を用いるのが特徴で、他に類を見な
い。

この粘質発酵乳のうちヴイリー（ｖｉｉｌｉ）は、スト
レプトコッカス・クレモリスＣＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ
ｕｓｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ストレプトコッカス・ラクチ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　Ｌａｃｔｉｓ）、ス
トレプトコアカス・ジアセチラクチスＣ３ｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ　ｄｉａｃｅｔｉＬａｃｔｉｓ）、びロイ
コノストック・メセンテロイデス・サブスピーシー・ク
レモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ　ｍｅｓｅｎｔｅｒ
ｏｉｄｅｓ　５ｕｂｓｐ、ｃｒｅｍｏｒｉｓ）からなる
混合スターターを用いて製造され、発酵乳の表面を覆う
乳脂肪層にゲオトリクム・カンディダムＣＧｅｏｔｒｉ
ｃｈｕｍ　ｒ、ａｎｄｉｄｕｍ）が生育しているのも見
受けられる。

日が”ンしようとする課題 本発明者らは、上記スカンジナビアの伝統的な粘質発酵
乳に抗腫瘍活性が認められることに注目し、その製造に
用いられる莢膜性粘質物を産生ずる乳酸球菌を分離して
抗腫瘍活性を測定したところ、ストレプトコッカス・ク
レモリス及びストレプトコッカス・ラクチスの国体に抗
Ｈ１ｔｋ活性を見出し、また、ストレプトコッカス・ク
レモリス及び／又はストレプトコンカス・ラクチスをス
ターターとして用いることにより、培養物中の抗腫瘍活
性を高めることも見出した。そして、ストレプトコッカ
ス・クレモリス及び／又はストレプトコアカス・ラクチ
スをスターターとして用いて乳を発酵させる際に、ゲオ
トリクム・カンディダムを共存させることにより、培養
物中の抗腫瘍活性を−［高めることを見出し、本発明を
なすに至った。

したがって、本発明は、莢膜性粘質物を産生ずる乳酸球
菌、ストレプトコッカス・クレモリス及び／又はストレ
プトコアカス・ラクチスとゲオトリクム・カンディダム
とをスターターとして用い、乳又は加工乳を発酵させて
得られた培養物を有効成分とする抗腫瘍剤を提供するこ
とをｆｆ題とする。

以下本発明の詳細な説明する。

１・　を”ンするための 本発明の特徴は、粘質発酵乳から分離した莢膜性粘質物
を産生ずる乳酸球菌ストレプトコッカス・クレモリス及
び／又はストレプトコンカス・ラクチスとゲオトリクム
・カンディダムとをスターターとして用い、乳又は加工
乳を発酵させて得られた培養物を有効成分とする抗腫瘍
剤にある。

本発明において用いる上記微生物は下記受託番号により
寄託されている。

本発明において用いる乳又は加工乳は、獣乳であればな
んでもよく、粉乳を溶解した還元乳を用いてもよい、ま
た、ゲオトリクム・カンディダムの生育には脂肪分が不
可欠なので、脱脂乳を用いる際には脂肪分を添加するこ
とが必要である。

本発明において用いるゲオトリクム・カンディダムは、
バターなどの乳製品から分離されたもの、市販の菌体な
どを用いることができる。勿論、粘質発酵乳のヴイリー
から分離されたものを用いてもよい。

なお、ゲオトリクム・カンディダムは、表面の乳脂肪層
にビロード状に発生し、酸素消費によって内部を嫌気的
条件に保っていることから、乳酸球菌のスライム形成能
を高める環境を形成していると思われる。

本発明において用いる莢膜性粘質物産生菌は、粘質発酵
乳ヴイリーからホエートリブチケースペプトン寒天培地
を用いて分離した菌株を培養して得られる培養液から沈
澱させて得られる。

上記粘質発酵乳ヴイリーからの菌株の分離および同定は
、下記手順に従って行った。

■莢膜性粘質物産生菌の分離 （培地） ２０％還元脱脂乳（Ｗ／Ｖ）を透析膜（３６／３２）で
透析後、透析外液にトリブチケースペプトン（Ｂ　Ｂ　
Ｌ）を１％（Ｗ／Ｖ）添加し、さらに寒天（ＯＸＯＩＤ
、＾ｇａｒ　ＢａｃｔｅｒｉｏｌｏＲｉｃａｌ、＾ｇａ
ｒｍｌ）を１％（−ハ）添加し、ｐｉ＋を６．８に調製
し培地（ホエートリブチケースペプトン寒天培地）とし
た、培地を１１５℃、１５分間高圧滅菌後、シャーレに
注ぎ平板を作製した。

（分離法） １０％還元脱脂乳中で活性化させたヴイリー（Ｖ社、フ
ィンランド）　Ｉｇを光間の方法によって得られた希釈
液を用いて順次希釈し１０−ｈおよび１０−１希釈液を
調製し、これらの希釈液をシャーレ１枚当りＯ，１ｓＩ
ｌずつ塗抹した。シャーレは２０および３０℃で３〜６
日間嫌気培養（ガスバンク、ＢＢＬ）Ｌ。

た、生じたコロニーのうち粘性を有するものを採取し墨
汁染色法により莢膜菌であることを確認した。莢膜性粘
質物産生菌は、ホエートリブチケスペプトン寒天培地、
カビサイジン添加ホエートリプチケースペプトン寒天培
地に順次塗抹釣菌し、純粋にした。分離された莢膜性粘
質物産生菌は１０％還元脱脂乳に十分分散させ急速凍結
し一８０℃の冷凍庫に保存した。

■莢膜性粘質物産生菌の同定 試験は全て２重に行った０分離菌の培養は分離した温度
で行った。

（染色方法） Ｍ１７培地で２０および３０℃で７２時間培養した菌体
を用いｌ１ｕｃｋｅｒの変法によるダラム染色を行った
。

（カタラーゼ活性） スライドグラスに３％過酸化水素水を採る。これにＭ１
７培地で２０および３０℃で７２時間培養した菌を一白
金耳加えよく混合し気泡の有無により判定した。

（運動性および酸素要求性） ｌｌａｒｒｉｇａｎらの方法によりＹｅａｓｔ　Ｇｌｕ
ｃｏｓｅ　Ｌｅｍｃ。

Ａｇａｒを用いて２０および３０℃で７２時間培養後閑
の広がりの有無および苗の生育の有無を観察し、運動性
および酸素要求性を調べた。

（グルコースからのガスの発生） Ｇｉｂｓｏｎ’ｓ　Ｓｅｍ１−５ｏｌｉｄ　Ｔｏｍａｔ
ｏ　Ｊｕｉｃｅ　Ｍｅｄｉｕｍを用いて２０および３０
℃で７日間培養後培地に生じる亀裂の有無により判定し
た。

（生育温度） １０．３９．５および４５℃で１〜７日間培養し苗の生
育を観察した。

（アルギニンからのアムモニアの産生）Ｍ１７培地を用
い菌を２０および３０℃で７２時間培養後ネスラー試薬
を添加してアムモニアの検出を行った。

（耐塩性試験） Ｍ１７培地に２．４および６．５％（Ｗ／ν）のＮａＣ
ｌを加え、２０および３０℃で７２時間培養後培養液の
濁度を５２０ｎｍで測定し、さらにｐｉを測定すること
で生育の有無を判定した。

（生成乳酸の旋光性） Ｍ１７培地で菌を２０および３０℃で７２時間培養後培
地中のＤ−およびＬ−乳ＨｉｔをＦ−キラ１−Ｌ−乳酸
（製品番号１３９０８４　、ベーリンガー・マンハイム
、山之内）およびＤ　（−）−乳酸脱水素酵素（製品１
号１０６９４１　、ベーリンガー・マンハイム、山之内
）を用いて定量した。

（ｐＨ９，２での生育試験） Ｍ１７培地で２０および３０℃で４８時間培養した。

（クエン酸からのガスの発生） Ｓｅｍｉ−ｓｏｌｉｄ　Ｃ１ｔｒａｔｅ　Ｍｉｌｋ　Ａ
ｇａｒを用いて２０および３０℃で７２時間培養し寒天
中の亀裂の有無でガスの産生を判定した。

培養終了後、ホエートリプチケースペプトン寒天培地上
に生じたコロニーのうち粘性を示すものを白金耳で拾っ
た。ヴイリーの２０および３０℃培養寒天培地から菌株
を採り、それぞれＶＣＳ−１、ＶＣＳ−２およびＶＣＳ
−３と記号を与えた。墨汁染色の結果、全て莢膜性粘質
物生産菌であることが判明した。

上記の分離菌は全て通性嫌気性、ダラム陽性で無芽胞の
運動性のない連鎖球菌でカタラーゼ活性はなかったこと
から、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ）属に分類された。さらに、グルコースからの炭酸ガ
スの産生もないことから、Ｉｌｏｍｏ型乳酸菌であり、
生育温度をみると、１０℃では全ての菌が生育し、４５
℃では全て生育せず、３９．５℃ではＶＣＳ−２および
ＶＣＳ−３は生育しなかった。耐塩性を見ると、２％Ｎ
ａＣｌ　では全て生育したが、４％ＮａＣ１ではＶＣＳ
−１のみ生育した他、６．５％Ｎａ１ｌでは何れも生育
しなかった。アルギニンからのアムモニアの産生および
ｐｌ＋　９．２における生育はＶＣＳ−１で認められた
。

以上の結果からｖｃｓ−ｔは（ＳｔｒｅｐＬｏｃｏｃｃ
ａｓ　Ｌａｃｔｉｓ）、ＶＣＳ−２およびＶＣＳ−３は
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｃｒｅｍｏｒｉｓ）と
同定した。

以上の結果を表１に示した。

表　　１ −・−・−アルギニンからアムモニアを生産しない。

０１−・−クエン酸からガスを生産しない。

次に、粘質発酵乳から分離した莢膜性粘質物を産生ずる
乳酸球菌ストレプトコンカス・クレモリス及びストレプ
トコッカス・ラクチスの抗腫瘍効果について説明する。

粘質発酵乳ヴイリーから分離したストレプトコッカス・
クレモリスＶＣ５−２及びシＣ３−３株及びストレプト
コッカス・ラクチスＶＣＳ−１株の各菌株を予め脱脂乳
中で培養したものを、２０％（Ｗ／Ｖ）還元脱脂乳を透
析膜（３６／３２）で透析して得られた透析外液にトリ
プチケースペグ１−ン（ＢＩ３Ｌ）を１％添加してρ１
１を６．８に調整した培地（オートクレーブにて１１５
℃、１５分間滅菌）に５％（Ｖ／Ｖ）宛それぞれ接種し
た０次イテ、ＶＣＳ−１株及びＶＣＳ−２株は２０℃で
、ＶＣＳ−３株は３０℃でそれぞれ４８時間培養した。

得られた各培養液は１２．００Ｏｒｐｍで３０分間遠心
分離し、沈澱した菌体を蒸留水で数回洗浄後、無閑的に
凍結乾燥することで菌体乾燥粉末を得た。乾燥粉末は抗
ｌｌｆｆ１蕩Ｖ：験まで一８０℃の冷凍庫に保存した。

痙且廣挫四来 次に、上述のようにして得られた各菌体乾燥粉末につい
て、下記手順に従って抗腫瘍性試験を行った。

（抗ＩＩ！ｉ瘍性試験） （イ）　５ａｒｃｏｓ＋ａ−１８０１１ｆｆｉ瘍細胞ｌ
Ｘｌ０’個をマウス腋下部皮下に移植（０日）、２４時
間後（１日日）より滅菌生理食塩水０．１ｍ　ｌに懸濁
した試料を、腹腔内に１日１回連続９日間投与した。投
与量は還元脱脂乳の場合２、ｌ０５５０．１００ｍｇ／
ｋｇ　（対照群ｒＩ５あるいは２０匹、試験群：各１０
匹）、また、熱安定性および不安定性画分の場合、投与
量は１０ｎ＋ｇ／ｋｇ（対照群＝８匹、試験群：各６匹
）とした。対照群では生理食塩水のみを投与した。腫瘍
移植後２１日０に腫瘍を摘出しその湿重量を秤量し以下
の式より平均＋１！Ｉ！瘍増殖抑制率を求めた。

ｊＪ（験期間中定朋的に腫瘍の径およびマウスの体重を
秤量すると共にマウスの状態も観察した。

（統計分析） Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ−ｔｅｓｔを用いた。

上記による試験の結果は表２に示すとおりである。

表２ 注）　　　Ｐ　＜　０．０５　、。Ｐ　＜　０．０２（
対照区からの有意差、５ｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔｅｓｔに
よる）表２にみられるとおり、ＶＣＳ−１はＩＯ及び５
０ｍｇ投与群で４６％（Ｐ＜０．０５）および５２％（
Ｐ＜０．０５）、また、ＶＣＳ−２は２および５０ｍｇ
投与群で４６％（Ｐ＜０．０５）および４８％（Ｐ＜０
．０５）　、さらニＶＣＳ−３は２及び１０ｎｔｇの投
与群で５４％（ｐ＜０．０２）および４８％（Ｐ＜０．
０５）と何れも対照群と比べ有意に腫瘍の増殖を抑制し
た。このことから、粘質発酵乳の抗１１！ｉｍ活性の発
現には莢膜性粘質物産生５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉが寄
与していると考えられる。

（ロ）上記ｖｃｓ−を及びＶＣＳ−３株の菌体をマウス
に投与してＳａｒｃｏｍａ−１８０腹水腫瘍に対する延
命効果の試験を下記により行った。

ｒｃＲマウスの腹腔内にＳａｒｃｏｍａ−１８０１ｉＴ
ｉ瘍細胞ｌＸｌ０６個を移植、２４時間後から各試料を
生理食塩水に）！！濁（１０〜１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａ
ｙ）　Ｌ　１日１回連日９０間腹腔内に投与した。対照
群には生理食塩水のみを投与した。平均生存日数から以
下の式により延命率を求めた。

結果は表３に示すとおりである。

表３ 表３にみられるとおり、ＶＣＳ−１及びＶＣＳ−３のＳ
ａｒｃｏｍａ−１８０腹水腫瘍に対する延命効果を調べ
た結果、前者で１４２％、後者で１８２％の延命率が得
られた。このことがら粘質発酵乳のＳａｒｃｏｍａ−１
８０腹水腫瘍に対する抗１１ｆｆｌ瘍効果には、莢膜性
粘質物産生５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉが寄与していると
考えられる。

以下実施例を示して本発明に係る抗腫瘍剤の調製及びそ
の抗腫瘍効果を具体的に説明する。

実施例 久又二又二重里盟 牛乳を９０℃で６０分間保持して殺菌した後、約２０℃
に冷却した培地に、粘質発酵乳ヴイリーから分離したス
トレプトコッカス・クレモリスＳＲＴ　０４９５（ＦＩ
ＥＲＭ　Ｐ−１００５３）、ストレプトコッカス・ラク
チス５ＩＩｒ　１２０９（ＦＥＩＩＭ　Ｐ−８３０８）
及びゲオトリクム・カンディダムＳ［ｌＴ　７０５３（
ＦＥＲＭ　Ｐ−７０５３）の各菌株を５重油％接種し、
１８．５±０．５°Ｃで２０±２時間培養して、乳酸酸
度０．８５±０．１％、ｐＨ４，５０＋０．１のものを
スターターとして用いた。

なお、ストレプトコッカス・クレモリス（Ａ）及びスト
レプトコッカス・ラクチス（Ｂ）の菌数は５Ｘ１０’〜
５　ｘｌＯ”／ｇ　、ゲオトリクム・カンディダム（Ｃ
）の菌数はＩ　Ｘ　１０’　−１ｘ　１０’／ｇであっ
た。

光Ｍ源料液ミックスの調装 配合表に従って各成分を配合し、９０〜９５℃で５〜１
０分間保持して殺菌した後、約２０’Ｃに冷却して発酵
原料液ミックスとした。

発酵原料液の配合： 牛乳　　　　　　９４．０　（ｇ） 脱脂乳　　　　　０．５ 生クリーム　　　０．５ スターター　　　５．０ 竺１」υす」袈 上述のようにして調製した、発酵原料液ミックスにスタ
ーターを５±２重景％添加し、１８．５±０．５℃で２
０±２時間培養して、乳酸酸度０．８５±０．１％、ｐ
Ｈ４，５０±０．１となった時点で培養を終了、７℃以
下に冷却して培養物を得た。

この培養ものを凍結乾燥して粉末状の培養物を得た。

塵墨立曵坑腫簾血 上述のようにして得られた本発明による培養物と、比較
例としてのストレプトコッカス・クレモリス（Ａ）及び
ストレプトコッカス・ラクチス（Ｂ）をスターターとし
て用い、同様にして調製した培養物との抗ｌｌｆｆ１ｍ
性を下記により調べた結果を表４に示す。

（抗ＩＩ！ｉ蕩性試験） Ｓａｒｃｏｍａ−１８０腫瘍細胞をＩＣＲマウス腋下腋
下上皮下植後、２４時間から発酵乳を１日１回連日９日
間腹腔内に投与し、２１日後のｍｓを摘出した。

表４ 表４にみられるとおり、平均ＩＩ！Ｉｉ瘍重量は、（Ａ
＋Ｂ）のグループの試験群（比較例）に比べて本発明に
より、さらにゲオトリクム・カンディダムを添加した（
Ａ’＋　Ｂ　＋　Ｃ）のグループ試験群は有意に小さか
ったことがわかる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）莢膜性粘質物を産生する特性を有するストレプト
   コッカス・クレモリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｃ
   ｒｅｍｏｒｉｓ）及び／又はストレプトコッカス・ラク
   チス（ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓＬａｃｔｉｓ）とゲ
   オトリクム・カンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａ
   ｎｄｉｄｕｍ）とをスターターとして用い、乳又は加工
   乳を発酵させて得られる培養物を有効成分とする抗腫瘍
   剤。