JPH0242983A - 生体触媒の製法及びラセミ分割のためのその使用 - Google Patents
生体触媒の製法及びラセミ分割のためのその使用Info
- Publication number
- JPH0242983A JPH0242983A JP1143205A JP14320589A JPH0242983A JP H0242983 A JPH0242983 A JP H0242983A JP 1143205 A JP1143205 A JP 1143205A JP 14320589 A JP14320589 A JP 14320589A JP H0242983 A JPH0242983 A JP H0242983A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- water
- mixture
- alcohol
- lipase
- biocatalyst
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 13
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 32
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims abstract description 22
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 claims abstract description 10
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 24
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 19
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 19
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 19
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 19
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 13
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims description 12
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 8
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 6
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 6
- YLNSNVGRSIOCEU-UHFFFAOYSA-N oxiran-2-ylmethyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC1CO1 YLNSNVGRSIOCEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N diglycidyl ether Chemical compound C1OC1COCC1CO1 GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 229940043375 1,5-pentanediol Drugs 0.000 claims 1
- ALQSHHUCVQOPAS-UHFFFAOYSA-N Pentane-1,5-diol Chemical compound OCCCCCO ALQSHHUCVQOPAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 7
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 abstract 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 abstract 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000004328 sodium tetraborate Chemical group 0.000 description 4
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 3
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- HOSGXJWQVBHGLT-UHFFFAOYSA-N 6-hydroxy-3,4-dihydro-1h-quinolin-2-one Chemical group N1C(=O)CCC2=CC(O)=CC=C21 HOSGXJWQVBHGLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 2
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 2
- 241000179532 [Candida] cylindracea Species 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100011961 Caenorhabditis elegans ess-2 gene Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- HKRISXAEZZXVHO-UHFFFAOYSA-N OCC(O)CO.OCC(O)CO.CO Chemical compound OCC(O)CO.OCC(O)CO.CO HKRISXAEZZXVHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- CQEYYJKEWSMYFG-UHFFFAOYSA-N butyl acrylate Chemical compound CCCCOC(=O)C=C CQEYYJKEWSMYFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229940087248 metasol Drugs 0.000 description 1
- ZQXSMRAEXCEDJD-UHFFFAOYSA-N n-ethenylformamide Chemical compound C=CNC=O ZQXSMRAEXCEDJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- MJCYPBSRKLJZTB-UHFFFAOYSA-N trifluoroborane;dihydrate Chemical compound O.O.FB(F)F MJCYPBSRKLJZTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical group OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
- C12P41/004—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of alcohol- or thiol groups in the enantiomers or the inverse reaction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、親水化ポリオレフィン繊維を基礎とする粗製
膵臓リパーゼの固定化物の簡単で経済的な製法、この固
定化物自体及びラセミ体アルコールのエステルをラセミ
分割するためのその使用に関する。
膵臓リパーゼの固定化物の簡単で経済的な製法、この固
定化物自体及びラセミ体アルコールのエステルをラセミ
分割するためのその使用に関する。
リパーゼの固定化技術は公知である。US462974
2によれば、固定化のためにカンジダ・シリンドラセア
からのリパーゼが、そして担体として、きわめて費用の
かかる方法で製造された疎水性の微多孔質重合体が用い
られる。
2によれば、固定化のためにカンジダ・シリンドラセア
からのリパーゼが、そして担体として、きわめて費用の
かかる方法で製造された疎水性の微多孔質重合体が用い
られる。
EP−A210499などに膵臓リパーゼについても記
載されている酵素、ポリエポキシド及びボリアばンから
のゲル形成による固定化法は簡単であるが、その小さい
機械的安定性及び低い流体力学的特性(濾過性;これを
充填したカラム中での流れ抵抗性)のため、工業的使用
にはほとんど適しない。
載されている酵素、ポリエポキシド及びボリアばンから
のゲル形成による固定化法は簡単であるが、その小さい
機械的安定性及び低い流体力学的特性(濾過性;これを
充填したカラム中での流れ抵抗性)のため、工業的使用
にはほとんど適しない。
ラセミ体エステルを豚膵臓リパーゼにより実験室的規模
でエナンチオ選択的に分割することも公知である( W
、E、Ladner and ()、 M。
でエナンチオ選択的に分割することも公知である( W
、E、Ladner and ()、 M。
Whitesides 、 JAC81984+ 10
6 + 7250〜7251 )。
6 + 7250〜7251 )。
その際、粗製の固定化されていないリパーゼが用いられ
る。この方法は工業的実施には不適当であり、経済的な
方法は固定化を必要とする。
る。この方法は工業的実施には不適当であり、経済的な
方法は固定化を必要とする。
この種の普通の方法例えば前記の米国特許の方法では、
固定化物の比活性が低(、操作中に極めて急激に低下す
るので、目的はかなえられない。
固定化物の比活性が低(、操作中に極めて急激に低下す
るので、目的はかなえられない。
従って本発明の課題は、光学活性アルコールエステルの
ラセミ分割のための工業的規模に適する簡単で経済的な
方法を実施できるように、粗製豚膵臓リパーゼの固定化
物を容易に価格相応に製造することであった。好適な生
体触媒の重要な基準は、長い寿命及び高い空時収量であ
る。
ラセミ分割のための工業的規模に適する簡単で経済的な
方法を実施できるように、粗製豚膵臓リパーゼの固定化
物を容易に価格相応に製造することであった。好適な生
体触媒の重要な基準は、長い寿命及び高い空時収量であ
る。
この課題は、第1ないし第9請求項に記載の方法よって
解決される。生体触媒の製造は、親水化ポリオレフィン
繊維、リパーゼ及び水を、pH5〜9好ましくは5.5
〜8及び温度0〜400C好ましくは10〜30°Cで
混合し、1分ないし6日後好ましくは1〜24時間後に
涙過し、フィルターケーキを水、緩衝液又は水溶性有機
溶剤を用いて洗浄することにより行われ、その際、リパ
ーゼとしては粗製の、すなわち天然不純物(特に蛋白質
)を99重量%まで含有し、従って容易に安価に入手で
きる市販の豚膵臓リパーゼが用いられ、そしてこの水性
混合物に、リパーゼの安定剤(その活性の時間的延長の
ため)として、2〜6個の炭素原子及び2〜6個の水酸
基を有する水溶性脂肪族アルコールの少なくとも1種が
、場合により1〜4個の炭素原子を有する1価アルコー
ルと混合して添加される。
解決される。生体触媒の製造は、親水化ポリオレフィン
繊維、リパーゼ及び水を、pH5〜9好ましくは5.5
〜8及び温度0〜400C好ましくは10〜30°Cで
混合し、1分ないし6日後好ましくは1〜24時間後に
涙過し、フィルターケーキを水、緩衝液又は水溶性有機
溶剤を用いて洗浄することにより行われ、その際、リパ
ーゼとしては粗製の、すなわち天然不純物(特に蛋白質
)を99重量%まで含有し、従って容易に安価に入手で
きる市販の豚膵臓リパーゼが用いられ、そしてこの水性
混合物に、リパーゼの安定剤(その活性の時間的延長の
ため)として、2〜6個の炭素原子及び2〜6個の水酸
基を有する水溶性脂肪族アルコールの少なくとも1種が
、場合により1〜4個の炭素原子を有する1価アルコー
ルと混合して添加される。
ポリオレフィンとは、ポリエチレン、ポリプロピレン、
その混合物及び共重合体を意味する。
その混合物及び共重合体を意味する。
親水化(水ぬれ性の改善のため)は下記の方法により行
うことができる。
うことができる。
1、 できあがった繊維を親水化剤例えばポリビニルア
ルコール(DE−PS 2257306 )又はメラミ
ン−ホルムアルデヒド−重縮金物(DE−PS 254
3081又は2545727 )により処理する。
ルコール(DE−PS 2257306 )又はメラミ
ン−ホルムアルデヒド−重縮金物(DE−PS 254
3081又は2545727 )により処理する。
2、繊維の製造の際に、例えばDE−AS 21176
70により、ポリオレフィン溶液に親水化剤(例えば前
記のもの)を添加することができるので、これは機械的
に繊維内に組込まれる(例えばDE−O8220855
3参照)。
70により、ポリオレフィン溶液に親水化剤(例えば前
記のもの)を添加することができるので、これは機械的
に繊維内に組込まれる(例えばDE−O8220855
3参照)。
6、繊維生成オレフィンと親水性コモノマー例えば酢酸
ビニル(続いてけん化)、N−ビニルホルムアミド、N
−ブチルアクリレート、アクリル酸又はアクリルアミド
との共重合体(例えばUS4210615参照)。
ビニル(続いてけん化)、N−ビニルホルムアミド、N
−ブチルアクリレート、アクリル酸又はアクリルアミド
との共重合体(例えばUS4210615参照)。
SchwarzwKlder Texti1werke
社製のポリエチレン−合成パルプが特に好ましいことが
知られた。
社製のポリエチレン−合成パルプが特に好ましいことが
知られた。
ポリオレフィン繊維の平均長さは、それぞれの使用に応
じて0.05〜10闘好ましくは0.1〜4闘である。
じて0.05〜10闘好ましくは0.1〜4闘である。
その下限は、濾過可能性並びにこれを充填したカラムの
流体力学的抵抗性によって決められる。長さ対直径の比
は少なくとも5:1で、一般に10:1ないし2〇二1
である。水ぬれ性を改善するために用いられる親水化添
加物は、繊維重量に対して0.1〜10%好ましくは0
.4〜4%である。
流体力学的抵抗性によって決められる。長さ対直径の比
は少なくとも5:1で、一般に10:1ないし2〇二1
である。水ぬれ性を改善するために用いられる親水化添
加物は、繊維重量に対して0.1〜10%好ましくは0
.4〜4%である。
リパーゼ自体は水溶性であるが、粗製リパーゼの多くの
成分は水不溶性であり、反応混合物中に懸濁される。
成分は水不溶性であり、反応混合物中に懸濁される。
水溶性アルコールとは、20°Cで少なくとも10重量
%さらに良好には少なくとも20重量%が水に溶解する
ものを意味する。任意の割合で水と混合できるアルコー
ルが特に好まし℃・。
%さらに良好には少なくとも20重量%が水に溶解する
ものを意味する。任意の割合で水と混合できるアルコー
ルが特に好まし℃・。
アルコールの「価」は水酸基の数を意味する。
水溶性アルコールとしては、例えば下記のものが用いら
れる。
れる。
エチレングリコール、1,2−及び1,6−フロパンジ
オール、1.2− 1.3− 1.4=及び2.6−ブ
タンジオール、1,2−及び1,3−インブタンジオー
ル、1.2−及ヒ1.s−ヘンタンジオール、ジエチレ
ングリコール、グリセリン、エリスリット、ペンタエリ
スリット、アラビット、キシリット、ソルビット、マン
ニット、ズルシット及びこれらの混合物。これらの多価
アルコールの一部を1種又は数種の次の1価アルコール
により置き換えることもできる。メタツル、エタノール
、1−及び2−7’ロバノール、2−ブタノール及び三
級ブタノール。2〜6個の水酸基を有する水溶性多価ア
ルコールを単独で又は種々の価のアルコールとの混合物
として、特にグリセリン並びにグリセリンとメタノール
、エタノール、1,5−ペンタ/ジオール及び特に2−
グロパノールとの混合物を用いることが好ましい。
オール、1.2− 1.3− 1.4=及び2.6−ブ
タンジオール、1,2−及び1,3−インブタンジオー
ル、1.2−及ヒ1.s−ヘンタンジオール、ジエチレ
ングリコール、グリセリン、エリスリット、ペンタエリ
スリット、アラビット、キシリット、ソルビット、マン
ニット、ズルシット及びこれらの混合物。これらの多価
アルコールの一部を1種又は数種の次の1価アルコール
により置き換えることもできる。メタツル、エタノール
、1−及び2−7’ロバノール、2−ブタノール及び三
級ブタノール。2〜6個の水酸基を有する水溶性多価ア
ルコールを単独で又は種々の価のアルコールとの混合物
として、特にグリセリン並びにグリセリンとメタノール
、エタノール、1,5−ペンタ/ジオール及び特に2−
グロパノールとの混合物を用いることが好ましい。
pH価を5〜9好ましくは5.5〜8の範囲に調整する
ためには、普通の緩衝混合物例えば第1又は第2燐酸塩
、硼砂、トリス−(ヒドロキシメチル)−メチルアミン
とその塩酸塩との混合物、酢酸塩緩衝混合物を用いるこ
とが好ましい。
ためには、普通の緩衝混合物例えば第1又は第2燐酸塩
、硼砂、トリス−(ヒドロキシメチル)−メチルアミン
とその塩酸塩との混合物、酢酸塩緩衝混合物を用いるこ
とが好ましい。
全体の混合物は下記の組成を有する。
親水化ポリオレフィン繊維1〜50%好ましくは2〜3
0%、 粗製豚膵臓リパーゼ1〜30%好ましくは5〜25%、 少なくとも1種の前記の水溶性多価アルコール1〜68
%好ましくは20〜30%(その際、1%以上好ましく
は5%以上特に10%以上の量を、1〜4個の炭素原子
を有する水溶性1価アルコールにより置き換えることが
できる)、水30〜97%、 並びにpH価調整添加物(その重量はほとんど重要でな
い)。%はそれぞれ全体の混合物の重量に対する。
0%、 粗製豚膵臓リパーゼ1〜30%好ましくは5〜25%、 少なくとも1種の前記の水溶性多価アルコール1〜68
%好ましくは20〜30%(その際、1%以上好ましく
は5%以上特に10%以上の量を、1〜4個の炭素原子
を有する水溶性1価アルコールにより置き換えることが
できる)、水30〜97%、 並びにpH価調整添加物(その重量はほとんど重要でな
い)。%はそれぞれ全体の混合物の重量に対する。
各成分は任意の順序で混合でき、好ま−しくは粗製リパ
ーゼを水とアルコールの混合物に懸濁し、次いで繊維を
加える。
ーゼを水とアルコールの混合物に懸濁し、次いで繊維を
加える。
この混合物は1分間ないし6日間好ましくは1時間ない
し1日間、O〜400C好ましくは10〜30°Cで滞
留させることが有利であり、その際好ましくは運動状態
(例えば攪拌、揺動)に保持する。次いで濾過する。フ
ィルターケーキは直接に、洗浄するか又はせずに、含水
媒質中でエステル分割に使用できる。しかしリパーゼを
固定するため、あらかじめ架橋剤の水溶液又は水−アル
コール溶液を用いて、1分間ないし2時間好ましくは2
分間ないし1時間、室温(10〜30°C)で処理し、
即ち接触させることが特に有利である。好適な架橋剤は
、例えばジアルデヒド特にグルタルジアルデヒド及びグ
リオキサール、並びにEP−A 270499により2
〜6個の炭素原子を有する多機能性アルーール又はモノ
−もしくはジサッカライドの1当量(OH基に関し)当
り1〜30当世の一般式 (式中R1、R2及びR3は水素原子、メチル基又はエ
チル基を示す)で表わされるエポキシドを付加させ、得
られた付加物をOH1当量当り1モルのエピクロルヒド
リンと反応させ、次いでエポキシドに環化させることに
より製造される水溶性グリシジルエーテルである。
し1日間、O〜400C好ましくは10〜30°Cで滞
留させることが有利であり、その際好ましくは運動状態
(例えば攪拌、揺動)に保持する。次いで濾過する。フ
ィルターケーキは直接に、洗浄するか又はせずに、含水
媒質中でエステル分割に使用できる。しかしリパーゼを
固定するため、あらかじめ架橋剤の水溶液又は水−アル
コール溶液を用いて、1分間ないし2時間好ましくは2
分間ないし1時間、室温(10〜30°C)で処理し、
即ち接触させることが特に有利である。好適な架橋剤は
、例えばジアルデヒド特にグルタルジアルデヒド及びグ
リオキサール、並びにEP−A 270499により2
〜6個の炭素原子を有する多機能性アルーール又はモノ
−もしくはジサッカライドの1当量(OH基に関し)当
り1〜30当世の一般式 (式中R1、R2及びR3は水素原子、メチル基又はエ
チル基を示す)で表わされるエポキシドを付加させ、得
られた付加物をOH1当量当り1モルのエピクロルヒド
リンと反応させ、次いでエポキシドに環化させることに
より製造される水溶性グリシジルエーテルである。
架橋は初期活性をいくらか害するので、強すぎる架橋を
行うべきでないが、繰り返し使用における活性は比較的
安定に持続する(実施例1.2及び5)。
行うべきでないが、繰り返し使用における活性は比較的
安定に持続する(実施例1.2及び5)。
固定化物は普通の手段で例えばカラム中又は撹拌式反応
器内で使用できる。
器内で使用できる。
本発明方法によって初めて豚膵臓リパーゼは、反復使用
可能で濾過性が良好なカラム中での使用に適する、高い
比活性及び長い寿はを有する固定化物に変えられる。粗
製リパーゼの副成分が妨害しないという事実は、この方
法を特に経済的にする。
可能で濾過性が良好なカラム中での使用に適する、高い
比活性及び長い寿はを有する固定化物に変えられる。粗
製リパーゼの副成分が妨害しないという事実は、この方
法を特に経済的にする。
パンクレアチンの酵素活性の測定:
pH調節装置内で、硼砂/HCl−緩衝i(20mM、
pH7,5) 50m1及びグリシジルブチレート1m
l!を混合し、そして30℃で激しく攪拌する。適量(
通常1〜10m9)の粗製膵臓リパーゼ又は試験用の固
定化物(5ooi9)を添加したのち、0.5 N −
NaOH溶液を自動秤量添加することによりpHを一定
に保持する。比酵素活性As、は下記式により算出され
る。
pH7,5) 50m1及びグリシジルブチレート1m
l!を混合し、そして30℃で激しく攪拌する。適量(
通常1〜10m9)の粗製膵臓リパーゼ又は試験用の固
定化物(5ooi9)を添加したのち、0.5 N −
NaOH溶液を自動秤量添加することによりpHを一定
に保持する。比酵素活性As、は下記式により算出され
る。
△V−N
A =
sp △t−m
ここにΔV/Δtは反応開始までの苛性ソーダ液の消費
量(ml1分)、Nは苛性ンーター液(500μモルフ
ml)の規定度、モしてmは酵素又は固定化物の秤量を
意味する。
量(ml1分)、Nは苛性ンーター液(500μモルフ
ml)の規定度、モしてmは酵素又は固定化物の秤量を
意味する。
酵素活性のための通常の単位は1ユニツト(略称:u)
であり、これは1μモル/分のNaOH消費量に相当す
る。
であり、これは1μモル/分のNaOH消費量に相当す
る。
固定化に用いられるNordmark社製のパンクレア
チンの比活性は17 u/m9である。
チンの比活性は17 u/m9である。
下記実施例中の部及び%は重量に関する。エステル分割
のために常に酪酸−グリシジルエステルを用いた。
のために常に酪酸−グリシジルエステルを用いた。
固定化物の製造
実施例1
pH7の200mモル〜燐酸塩緩衝液8o部、グリセリ
ン10部及びイソプロパノール10部の混合物18g中
に、粗製豚膵臓リパーゼ2gを懸濁した。この懸濁液に
、ポリエチレン繊維(平均繊維長Q、 6mx 、ポリ
ビニルアルコール含量4%) 0.5 g及び水0.5
1からなるポリエチレン合成パルプSWP ESS 2
1F (SchwarzwKldsrText、ilw
erke 5chenkenzel1社製)1gを加え
た。混合物を1夜攪拌し、次いでグルタルジアルデヒド
(25%水溶1)5.4.!9を混合した。
ン10部及びイソプロパノール10部の混合物18g中
に、粗製豚膵臓リパーゼ2gを懸濁した。この懸濁液に
、ポリエチレン繊維(平均繊維長Q、 6mx 、ポリ
ビニルアルコール含量4%) 0.5 g及び水0.5
1からなるポリエチレン合成パルプSWP ESS 2
1F (SchwarzwKldsrText、ilw
erke 5chenkenzel1社製)1gを加え
た。混合物を1夜攪拌し、次いでグルタルジアルデヒド
(25%水溶1)5.4.!9を混合した。
さらに1時間攪拌したのち、濾過し、pH7の200m
モル−燐酸塩緩衝液80部、グリセリン10部及びイソ
プロパノール10部かラノ混合物で洗浄し、よく吸引し
た。固定化物2.0pが得られた。これを5回エステル
分割に用いた。
モル−燐酸塩緩衝液80部、グリセリン10部及びイソ
プロパノール10部かラノ混合物で洗浄し、よく吸引し
た。固定化物2.0pが得られた。これを5回エステル
分割に用いた。
その比酵素活性を次表に示す。
A s p =比活性
Are工=最初の活性に対する相対活性実施例2
実施例1と同様に操作し、ただしグルタルアルデヒドで
架橋しなかった。固定化物2.4gが得られた。
架橋しなかった。固定化物2.4gが得られた。
実施例3
実施例1と同様に操作し、ただし豚膵臓リパーゼを半量
用いた。固定化物1.9gが得られた。
用いた。固定化物1.9gが得られた。
4 91゜
5 9a1
実施例4
実施例1と同様に操作し、ただし豚膵臓リパーゼを1/
4だけ用いた。固定化物1.7gが得られた。
4だけ用いた。固定化物1.7gが得られた。
実施例5
実施例1と同様に操作し、ただしグルタルアルデヒドを
半量用いた。固定化物2.1gが得られた。
半量用いた。固定化物2.1gが得られた。
実施例6
pH8,0の50mモル−硼砂緩衝液65部、グリセリ
ン30部及びエタノール5部からの混合物189中に、
粗製豚膵穢リパーゼ1gを懸濁した。この懸濁液に、ポ
リエチレン繊維(平均繊維長1.6flll、ポリビニ
ルアルコ−k 含4i [1,4%)o、3gg及び水
0.659からなるポリエチレン−合成パルプSWP
E−780(実施例1に記載の会社)1gを加えた。こ
の混合物を3時間攪拌したのち、ツルピッ)−E○8o
−エポキシド(下記参照)2.5.9を混合し、さらに
1時間攪拌した。この固定化物を吸引濾過し、硼砂、グ
リセリン及びエタノールからの前記の混合物で洗浄した
。固定化物2.6gが得られた。これを3回エステル分
割に用いた。その比活性を次表に示す。
ン30部及びエタノール5部からの混合物189中に、
粗製豚膵穢リパーゼ1gを懸濁した。この懸濁液に、ポ
リエチレン繊維(平均繊維長1.6flll、ポリビニ
ルアルコ−k 含4i [1,4%)o、3gg及び水
0.659からなるポリエチレン−合成パルプSWP
E−780(実施例1に記載の会社)1gを加えた。こ
の混合物を3時間攪拌したのち、ツルピッ)−E○8o
−エポキシド(下記参照)2.5.9を混合し、さらに
1時間攪拌した。この固定化物を吸引濾過し、硼砂、グ
リセリン及びエタノールからの前記の混合物で洗浄した
。固定化物2.6gが得られた。これを3回エステル分
割に用いた。その比活性を次表に示す。
ソルビット−Eo8o−エポキシドは、エポキシ価1.
2mモル/Iを有し、下記のように製造された( DE
3527014 )。
2mモル/Iを有し、下記のように製造された( DE
3527014 )。
ソルビット−EO8o(ソルビット1モルとエチレンオ
キシド80モルの反応生成物、ホウペン−ワイル著メト
ーデン・デル・オルガニツルェン・ヘミ−14/2巻1
963年450頁参照)5705gにBF3−2水和物
14.8gを加える。
キシド80モルの反応生成物、ホウペン−ワイル著メト
ーデン・デル・オルガニツルェン・ヘミ−14/2巻1
963年450頁参照)5705gにBF3−2水和物
14.8gを加える。
次いで70℃で攪拌下にエピクロルヒドリン555gを
滴加する。さらに2時間70°Cで攪拌し、次いで20
〜65°Cで50%苛性ソーダ液528gを1〜2時間
かげて滴加する。苛性ソーダ液の約90%が消費される
まで、さらに攪拌する。苛性ソーダ液消費量を滴定によ
り追跡する。
滴加する。さらに2時間70°Cで攪拌し、次いで20
〜65°Cで50%苛性ソーダ液528gを1〜2時間
かげて滴加する。苛性ソーダ液の約90%が消費される
まで、さらに攪拌する。苛性ソーダ液消費量を滴定によ
り追跡する。
水の主要量を70°Cで水流真空中で留去し、残りを熱
時(70°C)吸引濾過する。
時(70°C)吸引濾過する。
こうしてエピクロルヒドリンとソルビット−EO8oと
の反応生成物6469g(as%)が得られ、これはエ
ポキシド滴定値1.2mモル/gを有する。
の反応生成物6469g(as%)が得られ、これはエ
ポキシド滴定値1.2mモル/gを有する。
実施例7
pH8の200mモル−燐酸塩緩衝液及びアルコールか
らの混合物(表参照)18g中に、粗製豚膵臓リパーゼ
2Iを懸濁した。この懸濁液に、ポリエチレン繊維(平
均繊維長1.6順、ポリビニルアルコール含i0.7%
) o、 s 、p及び水0,5gからなるポリエチレ
ン−合成パルプSWP E−790(前記の会社)1g
を加えた。この混合物を1夜攪拌し、グルタルアルデヒ
ド(25%水溶液)2.7gを混合し、1時間攪拌した
。
らの混合物(表参照)18g中に、粗製豚膵臓リパーゼ
2Iを懸濁した。この懸濁液に、ポリエチレン繊維(平
均繊維長1.6順、ポリビニルアルコール含i0.7%
) o、 s 、p及び水0,5gからなるポリエチレ
ン−合成パルプSWP E−790(前記の会社)1g
を加えた。この混合物を1夜攪拌し、グルタルアルデヒ
ド(25%水溶液)2.7gを混合し、1時間攪拌した
。
この固定化物を吸引濾過し、それぞれアルコルー燐酸塩
緩衝液で洗浄した。
緩衝液で洗浄した。
グリセリン
イソプロパノール グリセリン
1.5ベンタンジオール
グリセリン
メタノール グリセリン
実施例8
pH7,0の200mモル−燐酸塩緩衝液80部、グリ
セリン10部及びインプロノくノール10部からの混合
物540g中に、粗製豚膵臓す・(ゼロ0gを懸濁した
。この懸濁液に、ポリエチレン繊維(平均繊維長0.6
順、ポリビニルア化コール含量4%)15.!7及び水
15gからなるポリエチレン−合成パルプSWP ES
S 21F (前記の会社) 30gを懸濁した。この
混合物を1夜揺動し、次いでグルタルアルデヒド(25
%水溶液)81gを混合した。さらに1時間攪拌したの
ち、濾過し、燐酸塩緩衝液80部、グリセリン10部及
びインプロノ(ノール10部からの前記の混合物810
gで洗浄し、よ(吸引した。
セリン10部及びインプロノくノール10部からの混合
物540g中に、粗製豚膵臓す・(ゼロ0gを懸濁した
。この懸濁液に、ポリエチレン繊維(平均繊維長0.6
順、ポリビニルア化コール含量4%)15.!7及び水
15gからなるポリエチレン−合成パルプSWP ES
S 21F (前記の会社) 30gを懸濁した。この
混合物を1夜揺動し、次いでグルタルアルデヒド(25
%水溶液)81gを混合した。さらに1時間攪拌したの
ち、濾過し、燐酸塩緩衝液80部、グリセリン10部及
びインプロノ(ノール10部からの前記の混合物810
gで洗浄し、よ(吸引した。
30°Cにおける比活性2469 u/gの固定化物8
2gが得られた。この固定化物を使用例で用いた。
2gが得られた。この固定化物を使用例で用いた。
比較例1
粗製豚膵臓リパーゼ2gをEP−A 210499によ
り、pH8の50mモル−燐酸塩緩衝液50部及びグリ
セリン50部からの溶液8g中に懸濁し、ツルピッ)
−EOg(、−エポキシド(実施例6参照)6.5g及
びポリエチレンイミノ溶液(25%水溶液、HClでp
H8,0に調整)4.0gを混合した。24時間後に生
成したゲルを目幅1wnのふるいを通して押出した。
り、pH8の50mモル−燐酸塩緩衝液50部及びグリ
セリン50部からの溶液8g中に懸濁し、ツルピッ)
−EOg(、−エポキシド(実施例6参照)6.5g及
びポリエチレンイミノ溶液(25%水溶液、HClでp
H8,0に調整)4.0gを混合した。24時間後に生
成したゲルを目幅1wnのふるいを通して押出した。
比較例2
pH8,0の200mモル−燐酸塩緩衝液80部、グリ
セリン10部及びイソプロパノール10部からの混合物
18g中に、粗製豚膵臓リパーゼ2Iを懸濁した。この
懸濁液に、US−PS 4247498により製造した
多孔性ポリエチレン(Accurel■HDPE−粉末
、Enka AG ) 1 gを加え、1夜攪拌した。
セリン10部及びイソプロパノール10部からの混合物
18g中に、粗製豚膵臓リパーゼ2Iを懸濁した。この
懸濁液に、US−PS 4247498により製造した
多孔性ポリエチレン(Accurel■HDPE−粉末
、Enka AG ) 1 gを加え、1夜攪拌した。
グルタルアルデヒド(25%水溶液)5.4.9の添加
の1時間後に吸引濾過した。
の1時間後に吸引濾過した。
固定化物2.1gが得られた。
比較例6
実施例5と同様に操作し、ただしアルコールをpH8,
0の燐酸塩緩衝液により置き換えた。
0の燐酸塩緩衝液により置き換えた。
リゾープス・ヤポニクスからのリパーゼサイケン100
、大阪サイヒン研究所製 ムコール・リパーゼM−AP 10、大野製薬社製ムコ
ール・ご−ヘイからのビカンターゼーA、G15t−B
rocades社製 カンジダ・シリンドラセアからのリパーゼMY名糖産業
社製 最初の6種は、エステル分割において酵素活性を示さな
かった。リパーゼMyの比活性を次光に示す。
、大阪サイヒン研究所製 ムコール・リパーゼM−AP 10、大野製薬社製ムコ
ール・ご−ヘイからのビカンターゼーA、G15t−B
rocades社製 カンジダ・シリンドラセアからのリパーゼMY名糖産業
社製 最初の6種は、エステル分割において酵素活性を示さな
かった。リパーゼMyの比活性を次光に示す。
比較例4
実施例1と同様に操作し、ただし下記の4種の他のリパ
ーゼを用いた。
ーゼを用いた。
使用例
pH7,0に調整した0、05モル−緩衝a<Na2B
407−10H20、濃塩酸で調整)1.4−&を6°
Cに冷却した。ラセミ体グリンジルプチレート216、
1 g(1,5モル)及びpH7の緩衝液で洗浄された
実施例8の湿った固定化物10gを加えた。この混合物
を9〜100Cで激しく攪拌し、1ON−NaOH(合
計82.5m110.825モル、55%加水分解に相
当)のポンプ供給によりpH76付近に保持した。13
0分後に前記のNaOH量が消費された。一定化物を濾
過し、CH2Cl2で2回、pH8の緩衝液で1回洗浄
し、次いでpH7の緩衝液中に懸濁し、5〜8℃で保存
した。
407−10H20、濃塩酸で調整)1.4−&を6°
Cに冷却した。ラセミ体グリンジルプチレート216、
1 g(1,5モル)及びpH7の緩衝液で洗浄された
実施例8の湿った固定化物10gを加えた。この混合物
を9〜100Cで激しく攪拌し、1ON−NaOH(合
計82.5m110.825モル、55%加水分解に相
当)のポンプ供給によりpH76付近に保持した。13
0分後に前記のNaOH量が消費された。一定化物を濾
過し、CH2Cl2で2回、pH8の緩衝液で1回洗浄
し、次いでpH7の緩衝液中に懸濁し、5〜8℃で保存
した。
原液と洗浄液を一緒にし、振とうし、有機相を分離した
。水相をCH2Cl2でさらに3回抽出した。
。水相をCH2Cl2でさらに3回抽出した。
−緒にした有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転し
ながら真空中で蒸発濃縮し、蒸留した。
ながら真空中で蒸発濃縮し、蒸留した。
R(=)グリシジルブチレート78gが得られた( 0
.55モル、55%の加水分解において理論的に得られ
るR(−)グリシジルブチレート0゜67モルに対して
収率80%)。旋光度〔α120=30.00、沸点8
3°C/14mバール。
.55モル、55%の加水分解において理論的に得られ
るR(−)グリシジルブチレート0゜67モルに対して
収率80%)。旋光度〔α120=30.00、沸点8
3°C/14mバール。
この固定化物は何回も反復使用することができ、その際
活性は緩慢に低下し、約70%でかなり安定化した。
活性は緩慢に低下し、約70%でかなり安定化した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、(a)担体として親水化ポリオレフィン繊維及び(
b)リパーゼとして粗製豚膵臓リパーゼを用い、そして
(c)後記の水性混合物に、2〜6個の炭素原子を有す
る2〜6価の水溶性アルコールの少なくとも1種を混合
することを特徴とする、担体をリパーゼ及び水性緩衝液
とpH5〜9及び0〜40℃で混合し、1分ないし3日
後にろ過し、そしてフィルターケーキを洗浄することに
よる生体触媒の製法。 2、担体として親水化ポリエチレン繊維を用いることを
特徴とする、第1請求項に記載の方法。 3、水溶性アルコールとして、少なくとも1種の多価ア
ルコール又は1価及び多価アルコールの混合物を用いる
ことを特徴とする、第1又は第2請求項に記載の方法。 4、水溶性アルコールとして、グリセリン又はグリセリ
ンとメタノール、エタノール、イソプロパノール及び1
,5−ペンタンジオールから成る群から選ばれた少なく
とも1種の成分との混合物を用いることを特徴とする、
第3請求項に記載の方法。 5、水溶性アルコールとして、グリセリンとイソプロパ
ノールとの混合物を用いることを特徴とする、第3請求
項に記載の方法。 6、フィルターケーキを架橋剤で処理することを特徴と
する、第1ないし第5請求項のいずれかに記載の方法。 7、架橋剤として、グルタルアルデヒドを用いることを
特徴とする、第6請求項に記載の方法。 8、架橋剤として、2〜6個の炭素原子を有する多機能
性アルコール又はモノ−もしくはジサツカライドの1当
量(OH基に関し)当り1〜30当量の一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼( I ) (式中R^1、R^2及びR^3は水素原子、メチル基
又はエチル基を示す)で表わされるエポキシドを付加さ
せ、得られた付加生成物をOH1当量当り1モルのエピ
クロルヒドリンと反応させ、次いでエポキシドに環化さ
せることにより製造される水溶性グリシジルエーテルを
用いることを特徴とする、第6請求項に記載の方法。 9、各成分を、(a)親水化ポリオレフィン繊維1〜5
0%、(b)粗製豚膵臓リパーゼ1〜30%、(c)1
価又は多価の前記の水溶性アルコール1〜68%及び(
d)水30〜97%の量比で、並びにpH価調整添加物
を混合する(%はそれぞれ全混合物の重量に対する)こ
とを特徴とする、第1ないし第8請求項のいずれかに記
載の方法。 10、第1ないし第9請求項のいずれかに記載の方法に
より得られる生体触媒。 11、ラセミ体アルコールのエステルを水性媒質中でラ
セミ分割するために、第10請求項に記載の生体触媒を
使用する方法。 12、グリシジルブチレートのラセミ分割のために第1
0請求項に記載の生体触媒を使用する方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3819467.8 | 1988-06-08 | ||
DE3819467A DE3819467A1 (de) | 1988-06-08 | 1988-06-08 | Verfahren zur herstellung eines biokatalysators und dessen verwendung zur razematspaltung |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0242983A true JPH0242983A (ja) | 1990-02-13 |
Family
ID=6356101
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1143205A Pending JPH0242983A (ja) | 1988-06-08 | 1989-06-07 | 生体触媒の製法及びラセミ分割のためのその使用 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5102799A (ja) |
EP (1) | EP0345658A3 (ja) |
JP (1) | JPH0242983A (ja) |
DE (1) | DE3819467A1 (ja) |
DK (1) | DK277889A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013520226A (ja) * | 2010-02-19 | 2013-06-06 | テマセク ポリテクニック | 機能性物質を固定化するための基材、およびそれを作製するための方法 |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2039857A1 (en) * | 1990-04-26 | 1991-10-27 | Wilfred Po-Sum Shum | Process for producing epoxyalcohols of high optical purity |
JP3027442B2 (ja) * | 1990-10-30 | 2000-04-04 | 日東電工株式会社 | 光学活性エポキシアルコールの製法 |
AT398310B (de) * | 1991-08-30 | 1994-11-25 | Chemie Linz Gmbh | Immobilisierte lipase, verfahren zu ihrer herstellung sowie verfahren zur erhöhung der enantioselektivität einer candida lipase bei der veresterung chiraler alkohole |
US5445955A (en) * | 1992-05-25 | 1995-08-29 | The Nisshin Oil Mills, Ltd. | Immobilization of lipase on a polymer carrier containing epoxy and tertiary amino groups |
EP0958851B1 (en) * | 1996-07-25 | 2005-10-12 | Nikki-Universal Co., Ltd. | Air cleaning filter |
US6730144B2 (en) * | 1996-07-25 | 2004-05-04 | Nikki - Universal Co., Ltd. | Air purifying filter using modified enzymes |
DE19653730C2 (de) * | 1996-12-11 | 1999-06-24 | Schering Ag | Immobilisierte Proteine aus Rohextrakt und deren Verwendung zur Umsetzung von Estern |
DE19931847A1 (de) | 1999-07-09 | 2001-01-11 | Basf Ag | Immobilisierte Lipase |
JP4298658B2 (ja) * | 2002-10-16 | 2009-07-22 | 北越製紙株式会社 | 空気浄化用濾材およびその製造方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3209224A1 (de) * | 1982-03-13 | 1983-09-15 | Basf Ag | Verfahren zur herstellung von unloeslichen, nur wenig quellbaren polymerisaten von basischen vinylheterocyclen und deren verwendung |
JPS59183691A (ja) * | 1983-04-01 | 1984-10-18 | Sumitomo Chem Co Ltd | 固定化リパ−ゼの製造法 |
DK402583D0 (da) * | 1983-09-05 | 1983-09-05 | Novo Industri As | Fremgangsmade til fremstilling af et immobiliseret lipasepraeparat og anvendelse deraf |
US4732853A (en) * | 1984-11-21 | 1988-03-22 | President And Fellows Of Harvard College | Method of making chiral epoxy alcohols |
DE3527014A1 (de) * | 1985-07-27 | 1987-02-05 | Basf Ag | Verfahren zur immobilisierung von enzymen |
US4629742A (en) * | 1986-01-27 | 1986-12-16 | Akzo America Inc. | Hydrolysis of fats |
JPH0752328B2 (ja) * | 1986-03-12 | 1995-06-05 | 株式会社日立製作所 | 液晶表示装置 |
-
1988
- 1988-06-08 DE DE3819467A patent/DE3819467A1/de not_active Withdrawn
- 1988-11-04 US US07/267,373 patent/US5102799A/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-06-02 EP EP89110004A patent/EP0345658A3/de not_active Withdrawn
- 1989-06-07 DK DK277889A patent/DK277889A/da unknown
- 1989-06-07 JP JP1143205A patent/JPH0242983A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013520226A (ja) * | 2010-02-19 | 2013-06-06 | テマセク ポリテクニック | 機能性物質を固定化するための基材、およびそれを作製するための方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0345658A3 (de) | 1990-05-16 |
DK277889A (da) | 1989-12-11 |
DK277889D0 (da) | 1989-06-07 |
DE3819467A1 (de) | 1989-12-14 |
EP0345658A2 (de) | 1989-12-13 |
US5102799A (en) | 1992-04-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH01202296A (ja) | エステル交換による酵素的ラセミ分割法 | |
JP2707076B2 (ja) | 光学活性化合物の製造法 | |
JPH0242983A (ja) | 生体触媒の製法及びラセミ分割のためのその使用 | |
US4971909A (en) | Process for producing optically active compounds having pyridine skeletons | |
US5021345A (en) | Immobilzation of lipase for resolving racemates of esters of racemic alcohols | |
JP2542941B2 (ja) | 光学活性ヒドロキシラクトン類の製造方法 | |
JP3610600B2 (ja) | 光学活性エンド−2−ノルボルネオール類の製造方法 | |
AU619249B2 (en) | Process for the continuous biotechnological preparation of optical isomer s(+) of 2-(6-methoxy-2-naphthyl) propionic acid | |
US4980291A (en) | Process for the enzymatic separation of the optical isomers of racemic α-alkyl-substituted primary alcohols | |
US5278054A (en) | Process for the enzymatic hydrolysis of a carboxylic acid derivative | |
JPS6261597A (ja) | 光学的に活性なα−フエノキシプロピオン酸およびその誘導体の製造法 | |
US5539111A (en) | Process for resolution of racemates of 4-aryl-2-oxo-pyrrolidine-3-carboxylic acid esters | |
EP1733042B1 (en) | Chemo-enzymatic process for preparing escitalopram | |
CN102277348B (zh) | 一种用高碘酸钠氧化法固定化磷脂酶a1的方法 | |
CA2111595C (en) | Process for the enzymatic preparation of optically active transglycidic acid esters | |
WO1996020910A1 (en) | Method for optical resolution of (r,s)-1,2-phenylethanediol using enzymes | |
JP4017686B2 (ja) | ベフロキサトンの合成における中間体の酵素的な製造方法 | |
EP0474250A2 (en) | Enzymatic process for separating the optical isomers of racemic 1,2-diols | |
DE3737333A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines biokatalysators und dessen verwendung zur razematspaltung | |
US5232852A (en) | Process for the production of dioxolanes | |
DE4131546A1 (de) | Verfahren zur erhoehung der enantioselektivitaet einer candida lipase bei der veresterung chiraler alkohole und eine immobilisierte candida lipase | |
JP4475407B2 (ja) | 微生物を利用した光学活性3−クロロ−2−メチル−1,2−プロパンジオールの製造方法 | |
JPH05207881A (ja) | キラルアルコールのエステル化におけるカンジダリパーゼのエナンチオ選択性を高める方法、および固定化されたカンジダリパーゼ | |
JP3550688B2 (ja) | 光学活性化合物の製造法 | |
KR100657204B1 (ko) | 효소적 방법에 의한 광학활성 3-히드록시-감마-부티로락톤의 제조 방법 |