JPH0242982A - 安定なペルオキシダーゼ組成物及び安定な抗体組成物 - Google Patents
安定なペルオキシダーゼ組成物及び安定な抗体組成物Info
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は免疫測定に用いる組成物に関する。
近年、臨床検査、診断分野において、免疫反応、酵素反
応を利用した測定法が広く行われてきている。
応を利用した測定法が広く行われてきている。
ペルオキシダーゼは、過酸化水素を水素受容体として種
々の物質を酸化する反応を触媒する酵素であり、色原体
を酸化し色素に変換する呈色反応に利用できる事から、
たとえば目的生体成分に対応酸化酵素を反応させ生成す
る過酸化水素を酵素反応により検出する測定に用いられ
たり、酵素免疫測定法における標識酵素として用いられ
るなど、近年その重要性が増大してきている。しかしな
がらペルオキシダーゼは溶液状態における安定性に乏し
く、実際の使用に際して用いられる数μｇ／ｓＱ以下の
低い濃度においては特に不安定であり、室温での長時間
保存においてその活性を維持する事が極めて困難である
。また、凍結乾燥を行った場合も、ペルオキシダーゼ活
性が相当低下する事が知られている。
々の物質を酸化する反応を触媒する酵素であり、色原体
を酸化し色素に変換する呈色反応に利用できる事から、
たとえば目的生体成分に対応酸化酵素を反応させ生成す
る過酸化水素を酵素反応により検出する測定に用いられ
たり、酵素免疫測定法における標識酵素として用いられ
るなど、近年その重要性が増大してきている。しかしな
がらペルオキシダーゼは溶液状態における安定性に乏し
く、実際の使用に際して用いられる数μｇ／ｓＱ以下の
低い濃度においては特に不安定であり、室温での長時間
保存においてその活性を維持する事が極めて困難である
。また、凍結乾燥を行った場合も、ペルオキシダーゼ活
性が相当低下する事が知られている。
また、免疫測定に用いる抗体も、特に低濃度の場合、経
時的に活性が低下する事が知られている。
時的に活性が低下する事が知られている。
また、この傾向は、溶液の温度が高いほど著しい。
それ故、ペルオキシダーゼ及び抗体は長期保存が難しく
、これらを測定用試薬もしくは診断用試薬として使用す
るには品質保証の点からも不充分なものであり、その安
定化が強く要望されていた。
、これらを測定用試薬もしくは診断用試薬として使用す
るには品質保証の点からも不充分なものであり、その安
定化が強く要望されていた。
また、特に、ペルオキシダーゼと抗体とが結合したペル
オキシダーゼ標識後退を使用する診断用試薬の場合、一
方の安定化が他方の活性を阻害するコトがないように、
ペルオキシダーゼ及び抗体を同一方法で同時に安定化す
る事が最も強く望まれていた。
オキシダーゼ標識後退を使用する診断用試薬の場合、一
方の安定化が他方の活性を阻害するコトがないように、
ペルオキシダーゼ及び抗体を同一方法で同時に安定化す
る事が最も強く望まれていた。
前記の状況に照し、本発明の第１の目的は安定化された
ペルオキシダーゼを含有するペルオキシダーゼ組成物を
提供する事であり、また、第２の目的は安定化された抗
体を含有する抗体組成物を提供する事である。
ペルオキシダーゼを含有するペルオキシダーゼ組成物を
提供する事であり、また、第２の目的は安定化された抗
体を含有する抗体組成物を提供する事である。
本発明者らはペルオキシダーゼ及び抗体の活性低下を抑
制する方法を鋭意検討した結果ある種のベンゼン誘導体
を安定化剤として含有させる事により所期の目的を達成
できる事を見い出し、本発明を完成した。
制する方法を鋭意検討した結果ある種のベンゼン誘導体
を安定化剤として含有させる事により所期の目的を達成
できる事を見い出し、本発明を完成した。
本発明の１つの形態は、（１）ペルオキシダーゼと、ベ
ンゼン環に、ハメットシグマ値σρが−０，２０以下も
しくは＋０．２４以上の基、またはアミド基のうちの、
少くとも１つの基、および水酸基を有する化合物を含む
ペルオキシダーゼ組成物であり、該ペルオキシダーゼが
免疫活性物質との結合体であることは有用である。
ンゼン環に、ハメットシグマ値σρが−０，２０以下も
しくは＋０．２４以上の基、またはアミド基のうちの、
少くとも１つの基、および水酸基を有する化合物を含む
ペルオキシダーゼ組成物であり、該ペルオキシダーゼが
免疫活性物質との結合体であることは有用である。
また他の形態は、（２）抗体と、ベンゼン環にハメット
シグマ値σρが−０，２０以下もしくは＋ ０．２４以
上の基、またはアミド基のうちの、少くとも１つの基、
および水酸基を有する化合物を含む抗体組成物であり、
該抗体が標識物質との結合体であることは有用である。
シグマ値σρが−０，２０以下もしくは＋ ０．２４以
上の基、またはアミド基のうちの、少くとも１つの基、
および水酸基を有する化合物を含む抗体組成物であり、
該抗体が標識物質との結合体であることは有用である。
本発明に係るペルオキシダーゼとしては植物由来、動物
由来、微生物由来等、いずれの由来のものでもよい。そ
の例としてはホースラデッシュペルオキシダーゼ、ラク
トペルオキシダーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、
ミエロペルオキシダーゼ、チトクロームＣペルオキシダ
ーゼ等が挙げられるが、特にホースラデッシュペルオキ
シダーゼが好ましい。
由来、微生物由来等、いずれの由来のものでもよい。そ
の例としてはホースラデッシュペルオキシダーゼ、ラク
トペルオキシダーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、
ミエロペルオキシダーゼ、チトクロームＣペルオキシダ
ーゼ等が挙げられるが、特にホースラデッシュペルオキ
シダーゼが好ましい。
本発明に係るペルオキシダーゼは非結合型の単体でも良
く、また他の有用物質との結合体でも良い。また、ペル
オキシダーゼと抗ペルオキシダーゼ抗体より成る複合体
であっても良い。
く、また他の有用物質との結合体でも良い。また、ペル
オキシダーゼと抗ペルオキシダーゼ抗体より成る複合体
であっても良い。
本発明に係るペルオキシダーゼの結合体としてはペルオ
キシダーゼが他の有用な物質と結合したものであれば特
に限定されないが、免疫活性物質との結合体が好ましい
。免疫活性物質としては、抗原、抗体、ハプテン、プロ
ティンＡなどが挙げられる。抗原もしくはハプテンとし
ては、たとえば蛋白質、糖質、脂質、複合糖質、多糖類
、核酸、酵素、ホルモン、ハプテン、抗生物質、細菌抗
原、ウィルス抗原、癌抗原、アビジン、ビオチン等が挙
げられる。本発明の第２の形態に係る抗体又はペルオキ
シダーゼと結合可能な抗体としては、前記抗原もしくは
ハプテンを従来既知の方法でウサギ、ヤギ、マウス等の
哺乳動物やニワトリ等の鳥類に免疫する事によりその血
清中から得られる抗体や、細胞融合等により作製させた
ハイブリドーマやウィルスにより癌化させた形質細胞か
ら得られるモノクローナル抗体が挙げられ、またこれら
の断片、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）”等も含まれる。
キシダーゼが他の有用な物質と結合したものであれば特
に限定されないが、免疫活性物質との結合体が好ましい
。免疫活性物質としては、抗原、抗体、ハプテン、プロ
ティンＡなどが挙げられる。抗原もしくはハプテンとし
ては、たとえば蛋白質、糖質、脂質、複合糖質、多糖類
、核酸、酵素、ホルモン、ハプテン、抗生物質、細菌抗
原、ウィルス抗原、癌抗原、アビジン、ビオチン等が挙
げられる。本発明の第２の形態に係る抗体又はペルオキ
シダーゼと結合可能な抗体としては、前記抗原もしくは
ハプテンを従来既知の方法でウサギ、ヤギ、マウス等の
哺乳動物やニワトリ等の鳥類に免疫する事によりその血
清中から得られる抗体や、細胞融合等により作製させた
ハイブリドーマやウィルスにより癌化させた形質細胞か
ら得られるモノクローナル抗体が挙げられ、またこれら
の断片、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）”等も含まれる。
本発明の第２の形態に係る抗体はそれを用いる測定に有
用な物質、たとえば標識物質や免疫活性物質と結合して
いても良い。標識物質としてはラジオアイソトープ、ペ
ルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラ
クトシダーゼ等の酵素、蛍光物質、発光物質、ビオチン
、アビジン、キレート、金属コロイド、毒素等が挙げら
れ免疫活性物質としては、たとえば抗原、抗体、ハプテ
ン等が挙げられる。
用な物質、たとえば標識物質や免疫活性物質と結合して
いても良い。標識物質としてはラジオアイソトープ、ペ
ルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラ
クトシダーゼ等の酵素、蛍光物質、発光物質、ビオチン
、アビジン、キレート、金属コロイド、毒素等が挙げら
れ免疫活性物質としては、たとえば抗原、抗体、ハプテ
ン等が挙げられる。
ペルオキシダーゼと有用な物質との結合もしくは抗体と
有用な物質との結合は吸着等の物理的結合やイオン結合
、共有結合等の化学的結合などいずれでもよく、共有結
合が好ましい。その結合の方法としては種々の公知の方
法に従えばよく、たとえばグルタルアルデヒドを架橋剤
として用いアミノ基とアミノ基を結合させる方法やペル
オキシダーゼの糖鎖の過沃素酸処理により生成させたア
ルデヒド基と物質のアミノ基を結合させる方法などが例
として挙げられる。
有用な物質との結合は吸着等の物理的結合やイオン結合
、共有結合等の化学的結合などいずれでもよく、共有結
合が好ましい。その結合の方法としては種々の公知の方
法に従えばよく、たとえばグルタルアルデヒドを架橋剤
として用いアミノ基とアミノ基を結合させる方法やペル
オキシダーゼの糖鎖の過沃素酸処理により生成させたア
ルデヒド基と物質のアミノ基を結合させる方法などが例
として挙げられる。
本発明に係る安定化剤である置換ベンゼン環はハメット
シグマ値σρが−０，２０以下もしくは＋ ０．２４以
上の置換基アミド基のうち１種又は２種以上の置換基及
び水酸基で置換された誘導体である。特に好ましいハメ
ットシグマ値は、−０，９〜−０，２０もしくは＋０．
２〜＋０．８０である。
シグマ値σρが−０，２０以下もしくは＋ ０．２４以
上の置換基アミド基のうち１種又は２種以上の置換基及
び水酸基で置換された誘導体である。特に好ましいハメ
ットシグマ値は、−０，９〜−０，２０もしくは＋０．
２〜＋０．８０である。
ハメットシグマ値σｐの定義及び−覧表はたとえばＬａ
ｎｇｅ ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ （ＭｃＧｒａｗ−ＨｉｌｌＢｏｏｋ Ｃｏｍｐａ
ｎｙ）に示される。
ｎｇｅ ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ （ＭｃＧｒａｗ−ＨｉｌｌＢｏｏｋ Ｃｏｍｐａ
ｎｙ）に示される。
ハメットシグマ値ａｐが−０，２０以下の置換基として
はたとえば−ＯＲ，、ＮＨＲ＋、 ＮＲ＋Ｒｚ、−Ｏ
Ｈ等が例として挙げられ、＋ ０．２４以上の置換基と
しては、たとえば−ＣＯＲ＆−−〇〇ＯＲ＋１−ＣＯＮ
ＨＲ＋、 −ＣＯＮＲ＋Ｒｚ−−ＣＯＯＨ，−ＣＯＮＨ
２、−３ｏ ２ Ｒｒ、 −３ＯＲＩ、 −Ｓｏ ２
ＮＨ２、−３ｏ ３ Ｈ。
はたとえば−ＯＲ，、ＮＨＲ＋、 ＮＲ＋Ｒｚ、−Ｏ
Ｈ等が例として挙げられ、＋ ０．２４以上の置換基と
しては、たとえば−ＣＯＲ＆−−〇〇ＯＲ＋１−ＣＯＮ
ＨＲ＋、 −ＣＯＮＲ＋Ｒｚ−−ＣＯＯＨ，−ＣＯＮＨ
２、−３ｏ ２ Ｒｒ、 −３ＯＲＩ、 −Ｓｏ ２
ＮＨ２、−３ｏ ３ Ｈ。
ＮＯ□等が例として挙げられる。まＩ；、アミド基とし
ては−ＮＨＣＯＲ、が挙げられる。上記置換基としては
＝ＯＲ，、−ＣＯＲ，、−ＣＯＯＲ、、−ＣＯＯＨ，−
ＣＯＮＨＲ＋、−ＣＯＮＨ２及び−ＮＨＣＯＲ、が好ま
しく、特に−ＯＲ，が好ましい。
ては−ＮＨＣＯＲ、が挙げられる。上記置換基としては
＝ＯＲ，、−ＣＯＲ，、−ＣＯＯＲ、、−ＣＯＯＨ，−
ＣＯＮＨＲ＋、−ＣＯＮＨ２及び−ＮＨＣＯＲ、が好ま
しく、特に−ＯＲ，が好ましい。
ここでＲ８及びＲ２は脂肪族炭化水素残基、脂環式化合
物残基、アリール基又はヘテロ環残基を表す。ベンゼン
環に２つ以上の上記置換基が置換する場合、各々のＲ１
又は各々のＲ１は互いに異なったものであっても良い。
物残基、アリール基又はヘテロ環残基を表す。ベンゼン
環に２つ以上の上記置換基が置換する場合、各々のＲ１
又は各々のＲ１は互いに異なったものであっても良い。
Ｒ１及びＲ８で表される脂肪族炭化水素残基としては飽
和のもの不飽和のもののいずれでもよく、また直鎖のも
の、分岐のもののいずれでもよい。そして好ましくはア
ルキル基（例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イ
ンプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基
、ドデシル基、オクタデシル基の多基）アルケニル基（
例えばアリル基、オクテニル基等の多基）である。
和のもの不飽和のもののいずれでもよく、また直鎖のも
の、分岐のもののいずれでもよい。そして好ましくはア
ルキル基（例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イ
ンプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基
、ドデシル基、オクタデシル基の多基）アルケニル基（
例えばアリル基、オクテニル基等の多基）である。
Ｒ１及びＲ３で表される脂環式化合物残基としては５乃
至６員のもの、例えばシクロペンチル基、シクロヘキシ
ル基が挙げられる。
至６員のもの、例えばシクロペンチル基、シクロヘキシ
ル基が挙げられる。
Ｒ１及びＲ２で表されるヘテロ環残基としてはピリジニ
ル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、キノリル基、ピ
ロリジル基、フラリル基、チエニル基、ピペリジル基、
ピロリル基、ピロリニル基、テトラゾリル基、チアゾニ
ル基、イミダゾリル基、モルホリル基、フリル基、オキ
サシリル基、チアゾリル基、ベンツイミダゾリル基、ベ
ンツオキサシリル基、ベンツチアゾリル基等の多基が代
表的である。
ル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、キノリル基、ピ
ロリジル基、フラリル基、チエニル基、ピペリジル基、
ピロリル基、ピロリニル基、テトラゾリル基、チアゾニ
ル基、イミダゾリル基、モルホリル基、フリル基、オキ
サシリル基、チアゾリル基、ベンツイミダゾリル基、ベ
ンツオキサシリル基、ベンツチアゾリル基等の多基が代
表的である。
Ｒ２及びＲ２で表されるアリール基としてはフェニル基
、ナフチル基が代表的である。
、ナフチル基が代表的である。
本発明に係る置換ベンゼン環は必要であれば上記の置換
基以外に他の置換基を有していても良く、またその２つ
の置換基が結合してベンゼン環ニ縮合する環を形成して
も良い。
基以外に他の置換基を有していても良く、またその２つ
の置換基が結合してベンゼン環ニ縮合する環を形成して
も良い。
前述の２つの置換基が結合して形成するベンゼン環に縮
合する非芳香族環としては５乃至６員のもの例えばシク
ロペンタン環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環が
挙げられる。
合する非芳香族環としては５乃至６員のもの例えばシク
ロペンタン環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環が
挙げられる。
前述の２つの置換基特にオルト位の置換基が結合して形
成するベンゼン環と縮合する芳香族環としては、５乃至
６員のものたとえば、フェニル基、ピリジニル基、ピラ
ジニル基、ピリダジニル基、ピロリジル基、フラリル基
、チエニル基、ピペリジル基、ピロリル基、ピロリニル
基、チアジニル基、イミダゾリル基、フリル基、オキサ
シリル基チアゾリル基等が挙げられる。
成するベンゼン環と縮合する芳香族環としては、５乃至
６員のものたとえば、フェニル基、ピリジニル基、ピラ
ジニル基、ピリダジニル基、ピロリジル基、フラリル基
、チエニル基、ピペリジル基、ピロリル基、ピロリニル
基、チアジニル基、イミダゾリル基、フリル基、オキサ
シリル基チアゾリル基等が挙げられる。
以上のＲ１及びＲ２で表される脂肪族炭化水素残基、脂
環式化合物残基、アリール基、ヘテロ環残基、並びに前
述の２つの置換基でベンゼン環に結合して形成する非芳
香族環、芳香族環はさらに置換基を有していてもよい。
環式化合物残基、アリール基、ヘテロ環残基、並びに前
述の２つの置換基でベンゼン環に結合して形成する非芳
香族環、芳香族環はさらに置換基を有していてもよい。
かかる置換基としては、例えばハロゲン原子（例えば塩
素原子、弗素原子）、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ
基、ケト基、カルボキシル基、スルホ基、アミノ基（例
えば、アミノ、アルキルアミノ、シアル午ルアミノ、ア
ニリノ、Ｎ−アルキルアニリノ）、アルキル基（例えば
、メチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、オク
タデシル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルアルキ
ル）、アルケニル基、アリール基（例えば、フェニル、
トリル、アセチルアミノフェニル、４−ラウロイルアミ
ノフェニル、エトキシフェニル）へテロ環残基、アルコ
キシ基（例えば、エトキシ、フェノキシ、メトキシ、テ
トラデシルオキシ）、アリールオキシ基（例えば、フェ
ノキシ、２．４−ジ−ｔ−アミルフェノキシ、ｐ−ｔ−
’チルフェノキシ、４−ドデシルオキシフェノキシ、４
−ヒドロキシ−３−ｔ−ブチルフェノキシ、４−ヒドロ
キシ−３−ブチルフェノキシ）、アリールチオ基、アミ
ド基（例えば、アセトアミド、メタンスルホンアミド、
ｐ−ドデシルベンゼンスルホンアミド）、カルバモイル
基（例えば、Ｎ−ｐ−カルボキシナトキシフェニルカル
バモイル ルバモイル、Ｎ−ベンジルカルバモイル、Ｎ−エチルカ
ルバモイル、Ｎ−メトキシエチルカルバモイル）、スル
ファモイル基（例えｉｆ、Ｎ，Ｎ−ジエチルスルファモ
イル）、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基
（例えば、ベンゼンスルホニル、■ークロルベンゼンス
ルホニル）、アシル基（例えば、アセチル、ｐ−クロル
ベンゾイル、ベンゾイル）、アシルオキシ基（例えば、
アセチルオキシ、ｍ−クロルベンゾイルオキシ）、アシ
ルオキシカルボニル基及びアルコキシカルボニル基（例
えば、Ｎ−メトキシエチル力ルバモイルメトキシ力ルポ
ニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、トリ
エトキシカルボニル）、アリールオキシカルボニル基（
例えばフェノキシカルボニル、ｐ−ニトロフェノキシカ
ルボニル）、アリールチオカルボニル基（例えば、フェ
ニルチオカルボニル）、イミド基（例えば、サクシンイ
ミド、オクタデシルサクシンイミド）が挙げられる。
素原子、弗素原子）、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ
基、ケト基、カルボキシル基、スルホ基、アミノ基（例
えば、アミノ、アルキルアミノ、シアル午ルアミノ、ア
ニリノ、Ｎ−アルキルアニリノ）、アルキル基（例えば
、メチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、オク
タデシル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルアルキ
ル）、アルケニル基、アリール基（例えば、フェニル、
トリル、アセチルアミノフェニル、４−ラウロイルアミ
ノフェニル、エトキシフェニル）へテロ環残基、アルコ
キシ基（例えば、エトキシ、フェノキシ、メトキシ、テ
トラデシルオキシ）、アリールオキシ基（例えば、フェ
ノキシ、２．４−ジ−ｔ−アミルフェノキシ、ｐ−ｔ−
’チルフェノキシ、４−ドデシルオキシフェノキシ、４
−ヒドロキシ−３−ｔ−ブチルフェノキシ、４−ヒドロ
キシ−３−ブチルフェノキシ）、アリールチオ基、アミ
ド基（例えば、アセトアミド、メタンスルホンアミド、
ｐ−ドデシルベンゼンスルホンアミド）、カルバモイル
基（例えば、Ｎ−ｐ−カルボキシナトキシフェニルカル
バモイル ルバモイル、Ｎ−ベンジルカルバモイル、Ｎ−エチルカ
ルバモイル、Ｎ−メトキシエチルカルバモイル）、スル
ファモイル基（例えｉｆ、Ｎ，Ｎ−ジエチルスルファモ
イル）、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基
（例えば、ベンゼンスルホニル、■ークロルベンゼンス
ルホニル）、アシル基（例えば、アセチル、ｐ−クロル
ベンゾイル、ベンゾイル）、アシルオキシ基（例えば、
アセチルオキシ、ｍ−クロルベンゾイルオキシ）、アシ
ルオキシカルボニル基及びアルコキシカルボニル基（例
えば、Ｎ−メトキシエチル力ルバモイルメトキシ力ルポ
ニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、トリ
エトキシカルボニル）、アリールオキシカルボニル基（
例えばフェノキシカルボニル、ｐ−ニトロフェノキシカ
ルボニル）、アリールチオカルボニル基（例えば、フェ
ニルチオカルボニル）、イミド基（例えば、サクシンイ
ミド、オクタデシルサクシンイミド）が挙げられる。
これらＲ．及びＲ２で表される残基としては低級アルキ
ル基が好ましい。
ル基が好ましい。
ハメットシグマσρが−０．２０以下の置換基としテハ
、−０ＣＨ３ （ ａ Ｐ ＝ ０．２７） Ｃ以
下（ ）内はａｐ値を表す。） ＯＣＪｓ （
０．２４） 、ＱＣｓす。
、−０ＣＨ３ （ ａ Ｐ ＝ ０．２７） Ｃ以
下（ ）内はａｐ値を表す。） ＯＣＪｓ （
０．２４） 、ＱＣｓす。
（−０．３２） 、−ＯＨ （−０．３７） 、−ＮＨ
ＣＨ３ （−０．８４）、Ｎ（ＣＨ３）！ （ ０−
４４）ｆｊ： トカ好マシく、＋ ０．２４以上の置換
基としては、− ＣＯＣＨ３ （ ＋ Ｏ−５０）、−
〇〇〇，Ｈ。
ＣＨ３ （−０．８４）、Ｎ（ＣＨ３）！ （ ０−
４４）ｆｊ： トカ好マシく、＋ ０．２４以上の置換
基としては、− ＣＯＣＨ３ （ ＋ Ｏ−５０）、−
〇〇〇，Ｈ。
（＋０．３６） 、−ＣＯＯＣＲ， （＋０．３９５）
、−ＣＯＯＣ．Ｈ。
、−ＣＯＯＣ．Ｈ。
（ ＋ ０．４５）、− ＣＯＯＨ （ ＋ ０．４１
）、− ＣＯＮＨ，（ ＋ ０．３６）、− ＳＯｚＣ
Ｈｓ （ ＋ ０．６８） 、 −ＳＯＣＨ３ （
＋ ０．４９） 、ＳＯｚＮＨｚ （ ＋ ０．６２
） 、−ＳＯｓＨ （ ＋０．５０） 、−Ｎｏ□
（ ＋ ０．７８）等が好ましい。
）、− ＣＯＮＨ，（ ＋ ０．３６）、− ＳＯｚＣ
Ｈｓ （ ＋ ０．６８） 、 −ＳＯＣＨ３ （
＋ ０．４９） 、ＳＯｚＮＨｚ （ ＋ ０．６２
） 、−ＳＯｓＨ （ ＋０．５０） 、−Ｎｏ□
（ ＋ ０．７８）等が好ましい。
またアミド基としては一ＮＨＣＯＣＨ，が挙げられる。
本発明に係る置換ベンゼン環は塩でもよく、たとえばナ
トリウム塩やカリウム塩の様なアルカリ金属塩、カルシ
ウム塩、マグネシウム塩の様なアルカリ土類金属塩、ア
ンモニウム塩、ピリジニウム塩の様な有機塩、硫酸塩、
塩酸塩等の酸塩が挙げられる。
トリウム塩やカリウム塩の様なアルカリ金属塩、カルシ
ウム塩、マグネシウム塩の様なアルカリ土類金属塩、ア
ンモニウム塩、ピリジニウム塩の様な有機塩、硫酸塩、
塩酸塩等の酸塩が挙げられる。
本発明に係る安定化剤として、２種以上の上記置換ベン
ゼン環を用いても良い。
ゼン環を用いても良い。
本発明の置換ベンゼン環の例としては、たとえば以下の
構造をもつ化合物が挙げられる。
構造をもつ化合物が挙げられる。
ここでＲ．は前に述べたものと同じである。置換基と水
酸基の位置はバラ位が好ましい。
酸基の位置はバラ位が好ましい。
以下に本発明の置換ベンゼン環の代表的具体例を示す。
例示化合物
ハイドロキノン七ツメチルエーテル
ハイドロキノン七ノエチルエーテル
ハイドロキノンモノフェニルエーテル
０−メトキシフェノール
０−エトキシフェノール
２．６−シメトキシフエノール
ハイドロキノン
Ｎ−メチル−ｐ−ヒドロキシアニリン
Ｎ、Ｎ−ジメチル−ｐ−ヒドロキシアニリンＮ−（ｐ−
ヒドロキシフェニル）グリシンｐ−ヒドロキシアセトフ
ェノン ２．４−ジヒドロキシアセトフェノン ｐ−ヒドロキシベンゾフェノン ｐ−ヒドロキシ安息香酸 ｍ−ヒドロキシ安息香酸 ０−ヒドロキシ安息香酸 ２．３−ジヒドロキシ安息香酸 ２．４−ジヒドロキシ安息香酸 ２．５−ジヒドロキシ安息香酸 ２．６−ジヒドロキシ安息香酸 ３．４−ジヒドロキシ安息香酸 ３．５−ジヒドロキシ安息香酸 ２．３．４− ！−リヒドロキシ安息香酸２．３．５−
トリヒドロキシ安息香酸３．４．５−トリヒドロキシ
安息香酸 ４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸４−ヒドロキシ
−３，５−ジメトキシ安息香酸４−ヒドロキシフタル酸 ２−ヒドロキシテレフタル酸 ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル ３．４−ジヒドロキシ安息香酸エチル ｐ−ヒドロキシベンズアミド ｐ−ヒドロキシベンゾイルニチルアミンｌ−メフトール
−２−カルボン酸 ３−メツトール−２−カルボン酸 ｐ−ヒドロキシアセトアニリド ｐ−ヒドロキシベンゼンスルフィニルメタンｐ−ヒドロ
キシベンゼンスルホニルエタンｐ−ヒドロキシベンゼン
スルホンアミドｐ−スルホニルフェノール 本発明の組成物にはその効果を高めるため動物血清、た
とえば馬血清、牛血溝、羊血清、兎血清、人血清や血清
成分、たとえば牛アルブミン、ヒトアルブミン等と含有
させる事が好ましく、溶液状組成物の場合、その含有量
は血清ならば１〜５０（９八）％、血清成分ならば０．
１〜５ （”／Ｙ）％が好ましい。
ヒドロキシフェニル）グリシンｐ−ヒドロキシアセトフ
ェノン ２．４−ジヒドロキシアセトフェノン ｐ−ヒドロキシベンゾフェノン ｐ−ヒドロキシ安息香酸 ｍ−ヒドロキシ安息香酸 ０−ヒドロキシ安息香酸 ２．３−ジヒドロキシ安息香酸 ２．４−ジヒドロキシ安息香酸 ２．５−ジヒドロキシ安息香酸 ２．６−ジヒドロキシ安息香酸 ３．４−ジヒドロキシ安息香酸 ３．５−ジヒドロキシ安息香酸 ２．３．４− ！−リヒドロキシ安息香酸２．３．５−
トリヒドロキシ安息香酸３．４．５−トリヒドロキシ
安息香酸 ４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸４−ヒドロキシ
−３，５−ジメトキシ安息香酸４−ヒドロキシフタル酸 ２−ヒドロキシテレフタル酸 ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル ３．４−ジヒドロキシ安息香酸エチル ｐ−ヒドロキシベンズアミド ｐ−ヒドロキシベンゾイルニチルアミンｌ−メフトール
−２−カルボン酸 ３−メツトール−２−カルボン酸 ｐ−ヒドロキシアセトアニリド ｐ−ヒドロキシベンゼンスルフィニルメタンｐ−ヒドロ
キシベンゼンスルホニルエタンｐ−ヒドロキシベンゼン
スルホンアミドｐ−スルホニルフェノール 本発明の組成物にはその効果を高めるため動物血清、た
とえば馬血清、牛血溝、羊血清、兎血清、人血清や血清
成分、たとえば牛アルブミン、ヒトアルブミン等と含有
させる事が好ましく、溶液状組成物の場合、その含有量
は血清ならば１〜５０（９八）％、血清成分ならば０．
１〜５ （”／Ｙ）％が好ましい。
また、必要ならば他の物質、たとえば、ゼラチン、卵白
アルブミン、カゼイン等の蛋白質や、ポリアルキレング
リコール等の水溶性高分子、蔗糖等の糖類、チメロザー
ル等の防腐剤などを含有しても良い。
アルブミン、カゼイン等の蛋白質や、ポリアルキレング
リコール等の水溶性高分子、蔗糖等の糖類、チメロザー
ル等の防腐剤などを含有しても良い。
本発明の組成物は、任意の緩衝剤や塩化ナトリウム等の
塩類を含有しても良い。緩衝剤としてはトリス系、燐酸
系、炭酸系、酢酸基等通常用いられるものが使用可能で
あり、水溶液中のｐＨがペルオキシダーゼ組成物の場合
は４〜９、抗体組成物の場合は３〜１１を示すものが好
ましい。
塩類を含有しても良い。緩衝剤としてはトリス系、燐酸
系、炭酸系、酢酸基等通常用いられるものが使用可能で
あり、水溶液中のｐＨがペルオキシダーゼ組成物の場合
は４〜９、抗体組成物の場合は３〜１１を示すものが好
ましい。
溶液状組成物の調製時における各成分の添加の順序は特
に限定されるものではない。
に限定されるものではない。
本発明の組成物は固形状、粉末状、溶液状等、いずれの
状態のものであってもよい。溶液状のペルオキシダーゼ
組成物の場合、安定化剤の至適濃度はその種類及びペル
オキシダーゼ濃度によって多少異なるが、通常は０．０
０５〜５００ｍＭであり、好ましくは０．０１〜５０ａ
＋Ｍである。凍結乾燥により粉末状組成物を調製する場
合も上記至適濃度の溶液状組成物を用いる事が好ましい
。
状態のものであってもよい。溶液状のペルオキシダーゼ
組成物の場合、安定化剤の至適濃度はその種類及びペル
オキシダーゼ濃度によって多少異なるが、通常は０．０
０５〜５００ｍＭであり、好ましくは０．０１〜５０ａ
＋Ｍである。凍結乾燥により粉末状組成物を調製する場
合も上記至適濃度の溶液状組成物を用いる事が好ましい
。
抗体組成物の場合も安定剤の濃度、量はペルオキシダー
ゼ組成物の場合と同様である。
ゼ組成物の場合と同様である。
ペルオキシダーゼ活性の測定は、本発明のペルオキシダ
ーゼ組成物と過酸化水素及び基質たとえば０−フ二二レ
ンジアミン等の色原体を接触させ、その控訴反応の程度
を解析する事により行わせる。
ーゼ組成物と過酸化水素及び基質たとえば０−フ二二レ
ンジアミン等の色原体を接触させ、その控訴反応の程度
を解析する事により行わせる。
色原体を用いた場合は生成色素の吸光度を測定する事に
よりその解析は行われる。
よりその解析は行われる。
抗体活性の測定は一般の免疫測定法が利用できる。たと
えば、凝集法、競合法、サンドウィッチ法、ＥＬＩＳＡ
法などが可能である。−例としては被験標識抗体と担体
に固定化した対応抗原とを反応させ、担体に結合した標
識の量を測定する方法が挙げられる。
えば、凝集法、競合法、サンドウィッチ法、ＥＬＩＳＡ
法などが可能である。−例としては被験標識抗体と担体
に固定化した対応抗原とを反応させ、担体に結合した標
識の量を測定する方法が挙げられる。
ペルオキシダーゼまたは抗体の活性の安定性の評価は、
たとえば経時的な活性の変化の検討や４°Ｃ保持の場合
と３７℃保持の場合との活性の比較によって行なう事が
できる。
たとえば経時的な活性の変化の検討や４°Ｃ保持の場合
と３７℃保持の場合との活性の比較によって行なう事が
できる。
本発明のペルオキシダーゼの組成物は長期保存、室温、
保存及び凍結乾燥時におけるペルオキシダーゼの活性が
保持される。また、本発明の抗体組成物も同様に保存安
定性に優れる。本発明に係る置換ベンゼン環は、ペルオ
キシダーゼ及び抗体の双方にとって安定剤として有用で
あるため、ペルオキシダーゼ標識抗体の安定化剤として
特に有用である。これら本発明の組成物を適用した免疫
学的測定用試薬は経時安定性に優れる事から、臨床検査
、診断分野において有用性が極めて高い。
保存及び凍結乾燥時におけるペルオキシダーゼの活性が
保持される。また、本発明の抗体組成物も同様に保存安
定性に優れる。本発明に係る置換ベンゼン環は、ペルオ
キシダーゼ及び抗体の双方にとって安定剤として有用で
あるため、ペルオキシダーゼ標識抗体の安定化剤として
特に有用である。これら本発明の組成物を適用した免疫
学的測定用試薬は経時安定性に優れる事から、臨床検査
、診断分野において有用性が極めて高い。
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。
実施例１
１００ｍＭ塩化ナトリウムを含む燐酸緩衝液（ｐＨ７，
４） （以下ＰＢＳと略す）中にｌμｇ／ｍＱのホー
スラデッシュペルオキシダーゼと安定化剤として５ｍＭ
のハイドロキノン七ツメチルエーテルを含む溶液を調製
した。さらに、比較として安定化剤を含まないものを調
製した。各々を４°Ｃおよび３７°Ｃに保持し、時経列
的に各々のＰＢＳによる１０分の１希釈液の酵素活性を
測定した。
４） （以下ＰＢＳと略す）中にｌμｇ／ｍＱのホー
スラデッシュペルオキシダーゼと安定化剤として５ｍＭ
のハイドロキノン七ツメチルエーテルを含む溶液を調製
した。さらに、比較として安定化剤を含まないものを調
製した。各々を４°Ｃおよび３７°Ｃに保持し、時経列
的に各々のＰＢＳによる１０分の１希釈液の酵素活性を
測定した。
酵素活性の測定は、２ｆｆ１ｇ／ＩＩＩＱの濃度の０−
７二二レンジアミン及び０．０２％の濃度の過酸化水素
を含むくえん酸−燐酸緩衝液（ｐ Ｈ４，９）５００μ
αに２μＱの上記溶液を加え、３７℃にて３０分間の反
応の後、２■αのＩＮ硫酸を加え、４９２ｎｍの吸光度
を測定する事により行った。酵素活性の測定は以下の実
施例でも同様に行った。
７二二レンジアミン及び０．０２％の濃度の過酸化水素
を含むくえん酸−燐酸緩衝液（ｐ Ｈ４，９）５００μ
αに２μＱの上記溶液を加え、３７℃にて３０分間の反
応の後、２■αのＩＮ硫酸を加え、４９２ｎｍの吸光度
を測定する事により行った。酵素活性の測定は以下の実
施例でも同様に行った。
調製直後の酵素活性を１００％とし、時系列的な酵素活
性の変化を表１に示す。
性の変化を表１に示す。
以′下余白
表１
本発明に係る置換ベンゼン環はペルオキシダーゼの安定
化に極めて効果的である。
化に極めて効果的である。
実施例２
ＰＢＳ中にＩＯμｇ／ｍＱのホースラデッシュベルオキ
シダーゼ結合抗ガラクトシルトランスフェラーゼアイソ
ザイム■（以下ＧＴ−ｎと略す）モノクローナル抗体と
、安定化剤として５ＩＩＩＭのハイドロキノン七ツメチ
ルエーテルを含む溶液を調整した。
シダーゼ結合抗ガラクトシルトランスフェラーゼアイソ
ザイム■（以下ＧＴ−ｎと略す）モノクローナル抗体と
、安定化剤として５ＩＩＩＭのハイドロキノン七ツメチ
ルエーテルを含む溶液を調整した。
なお、ホースラデッシュペルオキシダーゼ結合抗ＧＴ−
１１モノクロ一ナル抗体は特開昭６２〜１７４１００号
に記載されたモノクローナル抗体３８７２ （寄託番号
ＡＴＣＣＨＢ８９４５）とホースラデッシュペルオキシ
ダーゼを（Ｊ 、 Ｉ＋ａ＋ｍｕ、Ｍｅ ｔｈ、３０
、２４６−２５５ 、１９７９年〕の方法により結合、
精製したものを用いた。
１１モノクロ一ナル抗体は特開昭６２〜１７４１００号
に記載されたモノクローナル抗体３８７２ （寄託番号
ＡＴＣＣＨＢ８９４５）とホースラデッシュペルオキシ
ダーゼを（Ｊ 、 Ｉ＋ａ＋ｍｕ、Ｍｅ ｔｈ、３０
、２４６−２５５ 、１９７９年〕の方法により結合、
精製したものを用いた。
各々を４°Ｃおよび３７°Ｃで１週間保持した後、ｌ（
”／ｖ）％のウシ血清アルブミン（以下ＢＳＡと略す）
、５％馬血清を含むＰＢＳにて２００ｎｇ／ｍ（２とな
る様に希釈し、これを２次抗体として用い以下の様に酵
素安定性、２次抗体安定性、抗体安定性を得た。
”／ｖ）％のウシ血清アルブミン（以下ＢＳＡと略す）
、５％馬血清を含むＰＢＳにて２００ｎｇ／ｍ（２とな
る様に希釈し、これを２次抗体として用い以下の様に酵
素安定性、２次抗体安定性、抗体安定性を得た。
ポリスチレンビーズとｌＯμｇ／１ｍＱの濃度の抗ＧＴ
−ＩＩモノクローナル抗体を４℃で１晩静置し固定化し
た後、１％ＢＳＡ−ＰＢＳにてブロッキングした。太腹
水と２１’Ｏ，１晩反応させ、ＰＢＳにて洗浄後、２次
抗体と２１’Ｏ２時間反応させた。反応終了後ＰＢＳに
て洗浄し、さらにビーズの酵素活性を測定し、２次抗体
活性とした。２次抗体の安定性は４°Ｃ保持の２次抗体
活性に対する３７℃保持の２次抗体活性の百分率で表し
た。また実施例４と同様に２次抗体の酵素活性を測定し
、酵素安定性を百分率で表した。抗体の安定性は酵素活
性安定性に対する２次酵素安定性の百分率で表した。
−ＩＩモノクローナル抗体を４℃で１晩静置し固定化し
た後、１％ＢＳＡ−ＰＢＳにてブロッキングした。太腹
水と２１’Ｏ，１晩反応させ、ＰＢＳにて洗浄後、２次
抗体と２１’Ｏ２時間反応させた。反応終了後ＰＢＳに
て洗浄し、さらにビーズの酵素活性を測定し、２次抗体
活性とした。２次抗体の安定性は４°Ｃ保持の２次抗体
活性に対する３７℃保持の２次抗体活性の百分率で表し
た。また実施例４と同様に２次抗体の酵素活性を測定し
、酵素安定性を百分率で表した。抗体の安定性は酵素活
性安定性に対する２次酵素安定性の百分率で表した。
結果を表２に示す。
ゝ＼
以下余白
表２
表３
実施例３
ＢＳＡ及び１００ａ＋Ｍ塩化ナトリウムを含むＰＢＳｉ
：： １１００ｎ／謙ａの濃度となる様ホースラデッシ
ュベルオキシダーゼを添加し、次いで安定化剤として表
３に示す量のハイドロキノンモノメチルエーテルヲ添加
した。各溶液を４°Ｃと３７６０に保持し、０．７．１
４日口の酵素活性を調べ、４°Ｃ保持のものの示す酵素
活性に対する３７℃保持のものの酵素活性の百分率によ
り酵素安定性を示した。
：： １１００ｎ／謙ａの濃度となる様ホースラデッシ
ュベルオキシダーゼを添加し、次いで安定化剤として表
３に示す量のハイドロキノンモノメチルエーテルヲ添加
した。各溶液を４°Ｃと３７６０に保持し、０．７．１
４日口の酵素活性を調べ、４°Ｃ保持のものの示す酵素
活性に対する３７℃保持のものの酵素活性の百分率によ
り酵素安定性を示した。
表３．ｌ：ｔ）ハイドロキノンモノメチルエーテルを含
有するペルオキシダーゼ組成物はその活性が安定化され
る事が明らかである。
有するペルオキシダーゼ組成物はその活性が安定化され
る事が明らかである。
実施例４
１％のＢＳＡを含むＰＢＳに２００ｎｇ／ｗ＋ｆｆの濃
度となる様にＧＴ−ＩＩモノクローナル抗体を加え、次
いで安定化剤としてｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルを添
加した。以下実施例３と同様に酵素活性測定を行った。
度となる様にＧＴ−ＩＩモノクローナル抗体を加え、次
いで安定化剤としてｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルを添
加した。以下実施例３と同様に酵素活性測定を行った。
結果を表４に示す。 −ｍ−〜、以下
余市 表４ 表４よりｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルを含むペルオキ
シダーゼ組成物はペルオキシダーゼが結合体である場合
もその酵素活性が安定化される事が明らかである。
余市 表４ 表４よりｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルを含むペルオキ
シダーゼ組成物はペルオキシダーゼが結合体である場合
もその酵素活性が安定化される事が明らかである。
実施例５
各種置換ベンゼン環を安定化剤として加え、実施例４と
同様に測定した。
同様に測定した。
結果を表５に示す。
表５
表５より、本発明に係る種々の置換ベンゼン環は、ペル
オキシダーゼの安定化に極めて効果的な事が明らかであ
る。
オキシダーゼの安定化に極めて効果的な事が明らかであ
る。
実施例６
各種置換ベンゼン環３ｍＭを安定化剤として加え、実施
例４と同様にペルオキシダーゼ結合抗体を用い、保持日
数ｌＯ日口の活性を測定し、酵素安定性を得ｌ二。
例４と同様にペルオキシダーゼ結合抗体を用い、保持日
数ｌＯ日口の活性を測定し、酵素安定性を得ｌ二。
結果を表６に示す。
表６
■
表６より本発明に係る置換ベンゼン環は、ベルオキシダ
ーゼの安定化に極めて効果的な事が明らかである。
ーゼの安定化に極めて効果的な事が明らかである。
実施例７
各種置換ベンゼン環３ｍＭを安定化剤として加え、実施
例４と同様にペルオキシダーゼ結合抗体を用い保持日数
１４日Ｈｏ活性を測定し、酵素安定性を得た。
例４と同様にペルオキシダーゼ結合抗体を用い保持日数
１４日Ｈｏ活性を測定し、酵素安定性を得た。
結果を表７に示す。
表７
表７より本発明に係る置換ベンゼン環は、ペルオキシダ
ーゼの安定化に極めて効果的な事があきらかである。
ーゼの安定化に極めて効果的な事があきらかである。
実施例８
各種置換ベンゼン環を安定化剤として加え、実施例３と
同様にペルオキシダーゼを用い保持ロ数７日目の活性を
測定し、酵素安定性を得た。
同様にペルオキシダーゼを用い保持ロ数７日目の活性を
測定し、酵素安定性を得た。
結果を表８に示す。
表８
表８より、本発明に係る置換ベンゼン環はペルオキシダ
ーゼの安定化に極めて効果的な事が明らかである。
ーゼの安定化に極めて効果的な事が明らかである。
実施例９
１％のＢＳＡを含むＰＢＳに２００ｎｇ／ｍＩ２の濃度
となる様にホースラデッシュペルオキシダーゼ結合抗Ｇ
Ｔ■モノクローナル抗体を加えｔ；。安定化剤としては
、ハイドロキノンモノメチルエーテルを添加した。さら
に、馬血清や蔗糖を加えたものも作成しｔこ 。
となる様にホースラデッシュペルオキシダーゼ結合抗Ｇ
Ｔ■モノクローナル抗体を加えｔ；。安定化剤としては
、ハイドロキノンモノメチルエーテルを添加した。さら
に、馬血清や蔗糖を加えたものも作成しｔこ 。
これらを０．５＋ｏＱずつバイアル瓶に分注し、−４０
°Ｃにて、凍結した後、減圧下溶媒を除去し凍結乾燥を
行った。凍結乾燥終了後、純水０．５ａ＋１２を加え、
実施例３と同様に酵素活性を測定した。凍結乾燥しなか
ったものの酵素活性に対する百分率で安定性を表した。
°Ｃにて、凍結した後、減圧下溶媒を除去し凍結乾燥を
行った。凍結乾燥終了後、純水０．５ａ＋１２を加え、
実施例３と同様に酵素活性を測定した。凍結乾燥しなか
ったものの酵素活性に対する百分率で安定性を表した。
結果を表９に示す。
表９
表９より本発明のハイドロキノンモノメチルエーテルを
含むペルオキシダーゼ組成物は、同置換ベンゼン環を含
まないものと比べ明らかに、安定性が向上している。馬
血清及び／または蔗糖を加える事はさらに効果的である
。
含むペルオキシダーゼ組成物は、同置換ベンゼン環を含
まないものと比べ明らかに、安定性が向上している。馬
血清及び／または蔗糖を加える事はさらに効果的である
。
実施例ＩＯ
ポリスチレンビーズと１０μｇ／ｍＱの濃度の抗ＧＴ−
Ｉ［モノクローナル抗体を４°Ｃ″ｃ′１晩静置し固定
化した後、１％ＢＳＡ−ＰＢＳにてブロッキングした。
Ｉ［モノクローナル抗体を４°Ｃ″ｃ′１晩静置し固定
化した後、１％ＢＳＡ−ＰＢＳにてブロッキングした。
太腹水と２１’Ｏ，１晩反応させ、ＰＢＳにて洗浄後、
２次抗体と２１’Ｏ２時間反応させた。なお、この２次
抗体はＰＢＳ中に２００ｎｇ／ｍｆｆのペルオキシダー
ゼ結合抗ＧＴ−ｎモノクローナル抗体、１％のＢＳＡ、
５％の馬血清、５ｍＭの本発明の置換ベンゼン環を含
んだものを４°Ｃ又は３７°Ｃで１週間保持したものを
用いた。
２次抗体と２１’Ｏ２時間反応させた。なお、この２次
抗体はＰＢＳ中に２００ｎｇ／ｍｆｆのペルオキシダー
ゼ結合抗ＧＴ−ｎモノクローナル抗体、１％のＢＳＡ、
５％の馬血清、５ｍＭの本発明の置換ベンゼン環を含
んだものを４°Ｃ又は３７°Ｃで１週間保持したものを
用いた。
比較として馬血清および／または置換ベンゼン環無添加
の場合も行った。反応終了後ＰＢＳにて洗浄し、さらに
ビーズの酵素活性を測定し、２次抗体活性とした。２次
抗体の安定性は４°Ｃ保持の２次抗体活性に対する３７
°Ｃ保持の２次抗体活性の百分率で表した。また実施例
４と同様に２次抗体の酵素活性を測定し、酵素安定性を
百分率で表した。
の場合も行った。反応終了後ＰＢＳにて洗浄し、さらに
ビーズの酵素活性を測定し、２次抗体活性とした。２次
抗体の安定性は４°Ｃ保持の２次抗体活性に対する３７
°Ｃ保持の２次抗体活性の百分率で表した。また実施例
４と同様に２次抗体の酵素活性を測定し、酵素安定性を
百分率で表した。
抗体の安定性は酵素活性安定性に対する２次酵素安定性
の百分率で表した。
の百分率で表した。
表
表１０より、本発明のベンゼン誘導体を含有する抗体組
成物はその抗体活性が安定している事が明らかである。
成物はその抗体活性が安定している事が明らかである。
前記総括して本発明に係る置換ベンゼン環を含有する抗
体組成物はその抗体活性が安定している事が明らかであ
る。
体組成物はその抗体活性が安定している事が明らかであ
る。
Claims (4)
- （１）ペルオキシダーゼと、ベンゼン環に、ハメットシ
グマ値σρが−０．２０以下もしくは＋０．２４以上の
基、またはアミド基のうちの、少くとも１つの基、およ
び水酸基を有する化合物を含むペルオキシダーゼ組成物
。 - （２）ペルオキシダーゼが免疫活性物質との結合体であ
る請求項１記載のペルオキシダーゼ組成物。 - （３）抗体と、ベンゼン環にハメットシグマ値σρが−
０．２０以下もしくは＋０．２４以上の基、またはアミ
ド基のうちの少くとも１つの基、および水酸基を有する
化合物を含む抗体組成物。 - （４）抗体が標識物質との結合体である請求項３記載の
抗体組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63-105168 | 1988-04-26 | ||
| JP10516888 | 1988-04-26 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0242982A true JPH0242982A (ja) | 1990-02-13 |
| JP2727112B2 JP2727112B2 (ja) | 1998-03-11 |
Family
ID=14400153
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1108409A Expired - Fee Related JP2727112B2 (ja) | 1988-04-26 | 1989-04-26 | 安定なペルオキシダーゼ組成物及び安定な抗体組成物 |
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| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5516672A (ja) |
| JP (1) | JP2727112B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05130866A (ja) * | 1991-02-19 | 1993-05-28 | Sanyo Chem Ind Ltd | 溶液中のペルオキシダーゼ安定化法 |
| WO2018101358A1 (ja) * | 2016-11-29 | 2018-06-07 | Ｓｐｉｂｅｒ株式会社 | タンパク質組成物、その製造方法及び熱安定性向上方法 |
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|---|---|---|---|---|
| WO2004033499A1 (ja) * | 2002-10-11 | 2004-04-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 細胞死誘導剤 |
| JPWO2005056605A1 (ja) * | 2003-12-12 | 2007-12-06 | 中外製薬株式会社 | ３量体以上の受容体を認識する改変抗体 |
| EP1757686A4 (en) * | 2004-04-09 | 2008-03-12 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | INDUCER OF CELL DEATH |
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| EP1900814A4 (en) * | 2005-06-10 | 2010-07-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | SCREED SC (FV) 2-MUTANTE |
| CN101262885B (zh) * | 2005-06-10 | 2015-04-01 | 中外制药株式会社 | 含有sc(Fv)2的药物组合物 |
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| US8071345B2 (en) * | 2006-03-31 | 2011-12-06 | Novozymes A/S | Stabilized subtilisin composition |
| PE20081004A1 (es) * | 2006-07-13 | 2008-09-18 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agentes inductores de muerte celular |
| WO2009064838A1 (en) * | 2007-11-15 | 2009-05-22 | Amgen, Inc. | Aqueous formulation of erythropoiesis stimulating protein stablised by antioxidants for parenteral administration |
| CN113203867B (zh) * | 2021-04-28 | 2022-03-11 | 北京美联泰科生物技术有限公司 | 一种适用于胰岛素检测试剂盒的缓冲液 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6178385A (ja) * | 1984-09-25 | 1986-04-21 | Toyobo Co Ltd | 安定なペルオキシダ−ゼ組成物 |
| JPS61212286A (ja) * | 1985-03-14 | 1986-09-20 | ベーリンガー・マンハイム・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 溶液中のペルオキシダーゼの活性を安定化する方法 |
| JPS6463380A (en) * | 1987-09-03 | 1989-03-09 | Teijin Ltd | Stabilized peroxidase composition |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4299916A (en) * | 1979-12-26 | 1981-11-10 | Syva Company | Preferential signal production on a surface in immunoassays |
| JPS61239890A (ja) * | 1985-04-15 | 1986-10-25 | Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk | 安定化ペルオキシダ−ゼ溶液 |
| US4921791A (en) * | 1986-06-26 | 1990-05-01 | Konishiroku Photo Industry Co., Ltd. | Method for measuring specific component using peroxidase enzyme reaction |
-
1989
- 1989-04-26 JP JP1108409A patent/JP2727112B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-08-23 US US08/109,985 patent/US5516672A/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6178385A (ja) * | 1984-09-25 | 1986-04-21 | Toyobo Co Ltd | 安定なペルオキシダ−ゼ組成物 |
| JPS61212286A (ja) * | 1985-03-14 | 1986-09-20 | ベーリンガー・マンハイム・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 溶液中のペルオキシダーゼの活性を安定化する方法 |
| JPS6463380A (en) * | 1987-09-03 | 1989-03-09 | Teijin Ltd | Stabilized peroxidase composition |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05130866A (ja) * | 1991-02-19 | 1993-05-28 | Sanyo Chem Ind Ltd | 溶液中のペルオキシダーゼ安定化法 |
| WO2018101358A1 (ja) * | 2016-11-29 | 2018-06-07 | Ｓｐｉｂｅｒ株式会社 | タンパク質組成物、その製造方法及び熱安定性向上方法 |
| US11142553B2 (en) | 2016-11-29 | 2021-10-12 | Spiber Inc. | Protein composition, method for producing same and method for improving heat stability |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5516672A (en) | 1996-05-14 |
| JP2727112B2 (ja) | 1998-03-11 |
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