JPH0237989B2 - Birirubinsokuteiyohyojunbutsushitsu - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ビリルビン測定用の新規な標準物質
及び該標準物質を用いるビリルビンの測定方法に
関する。 血中のビリルビンは、ビリルビンそのままの遊
離ビリルビンとグルクロン酸と抱合した抱合ビリ
ルビンとに分けられる。遊離ビリルビンは、間接
型ビリルビンといわれ、抱合ビリルビンは直接型
ビリルビンといわれている。この２種のビリルビ
ンを測定するための試薬としては、総ビリルビン
測定用試薬と直接型ビリルビン測定用試薬とが用
いられる。間接型ビリルビン値は総ビリルビン値
から直接型ビリルビン値を差引いた値として得ら
れる。ところで、総ビリルビン値と直接型ビリル
ビン値を測定するためには、他の検査と同様に標
準物質をたてることが必要である。間接型ビリル
ビンの標準物質は簡単に入手できる。一方、直接
型ビリルビンの標準物質として最も望ましいもの
はグルクロナイドビリルビン（直接型ビリルビ
ン）であるが、このものの単離は極めて難かしく
いまだ実用化されていない。グルクロナイドビリ
ルビンの入手が不可能なため、直接型ビリルビン
測定用の標準物質としても間接型ビリルビンを用
いざるをえないのが現状である。 間接型ビリルビンは、ダイフイリン、安息香酸
ナトリウムカフエイン、界面活性剤、有機溶媒な
どの反応促進剤なしではほとんど反応しないた
め、直接型ビリルビン用試薬を用いても測定はで
きない。直接型ビリルビンを測定する方法として
は、一旦、間接型ビリルビンの標準物質を総ビリ
ルビン用試薬で測定し、ビリルビン量と吸光度の
関係を用いて、間接的に直接型ビリルビン値を求
めるという操作を行なう。この方法で、総ビリル
ビン用試薬で得られた感度を用いて、直接型ビリ
ルビンを測定することのできる前提条件として、
直接型ビリルビン標準物質を総ビリルビン用試薬
と直接型ビリルビン用試薬に反応させたときに感
度（mgあたりの吸光度）が一致していることが必
要である。しかし、高純度のグルクロナイドビリ
ルビンを用いて検討してみなければ、感度が一致
するかどうかは不明確なことである。従来の各種
の測定方法においては、反応促進剤を加える又は
加えないというだけでなく、総ビリルビン用試薬
と直接型ビリルビン用試薬の試薬組成が著しく異
なるものが見られる。試薬組成が大きく変われ
ば、総ビリルビン用試薬と直接型ビリルビン用試
薬の感度がたとえ一致しないとしてもそれは当然
とも考えられる。総ビリルビン用試薬と直接型ビ
リルビン用試薬の感度を合わすとしてもそれは大
変な作業である。総ビリルビン用試薬と直接型ビ
リルビン用試薬の感度を無理に合わせることより
も、間接型ビリルビンと直接型ビリルビンの性質
に最も適した試薬組成、反応条件を決めることが
大切なことである。このような観点からして、直
接型ビリルビンの標準物質を得ることは、正確な
測定及び最良の試薬設計のためにも欠かすことの
できないものである。 本発明者は、上記のごとき要求に応じて直接型
ビリルビンの標準物質を得るべく鋭意研究の結
果、本発明を完成するに至つたものである。 本発明は、ビリルビン測定用の新規かつ優秀な
標準物質及び該標準物質を用いてビリルビンを極
めて正確に測定することができるようにしたビリ
ルビンの測定方法を提供することを目的とする。 本発明の要旨は、ビリルビンコンジユゲートと
アルブミンとを添加した基剤を用いることを特徴
とするビリルビン測定用標準物質に存する。 ビリルビンコンジユゲートはビリルビンにタウ
リンを結合させたもので、下記の如き構造式を有
する。 ビリルビンコンジユゲートは、グルクロナイド
ビリルビンによく類似した性質をもち、水に易溶
性で、直接型ビリルビン用試薬で容易に反応す
る。ビリルビンコンジユゲートは、精製水、緩衝
液あるいは有機溶媒に溶解させて用いることがで
きるが、そのままでは、近時開発された安定化ジ
アゾニウム塩を用いたビリルビン測定法に適用す
ると、血清ビリルビンとの吸収特性が異なつて測
定できないものである。しかし、ビリルビンコン
ジユゲートにアルブミンを組み合わせることによ
つてビリルビンコンジユゲートの吸収特性が血清
ビリルビン（血清中に含まれているビリルビン）
の吸収特性にほぼ一致せしめることが可能となつ
たものである。 総ビリルビン用試薬と直接型ビリルビン用試薬
とで血清中のビリルビンの発色が異なる場合に
は、間接型ビリルビンだけを標準物質に用いるこ
とができず、間接型ビリルビンと直接型ビリルビ
ンの両方を標準物質として立てるか直接型ビリル
ビンだけを共通に標準物質として用いなければな
らない。このような場合でも、アルブミン添加ビ
リルビンコンジユゲートが極めて有効である。 アルブミンとしては牛由来のもの、人由来のも
の、その他の動物由来のもの、さらに卵白アルブ
ミンでも用いられ、又アルブミンそのもののかわ
りに血清（アルブミンを含有している）を用いる
こともできる。 ビリルビンコンジユゲートにアルブミンを配合
するもう一つの大きな特徴は、アルブミン無添加
のものよりも著しくビリルビンコンジユゲートの
安定化が増した点である。アルブミンにはビリル
ビンコンジユゲートの酸化を防ぐ作用があるもの
である。 なお、従来から用いられるアルカリアゾビリル
ビン法、エベリン−マロイ法、Jendrassik法の如
く、間接型ビリルビンを共通標準物質として用い
る方法においてもアルブミン添加ビリルビンコン
ジユゲートを適用することは可能で、その有用性
は高いものである。 本発明の基剤はビリルビンコンジユゲートとア
ルブミンを含有することのできるもの、例えば
種々の緩衝液をいい、具体的にはリン酸緩衝液、
EDTA、炭酸ナトリウム緩衝液、錯体形成能を
もつ緩衝液（コハク酸、クエン酸、EDTA、マ
レイン酸、ホウ酸緩衝液等）等を指称する。この
基剤には、ビリルビンコンジユゲートとアルブミ
ンの他にビリルビンが添加されていてもよいもの
である。 本願におけるもう一つの発明の要旨は、安定化
ジアゾニウム塩を発色剤として用いるビリルビン
の測定方法において、ビリルビンコンジユゲート
とアルブミンとを添加した基剤を標準物質として
用いることを特徴とするビリルビンの測定方法に
存在するものである。 ここで、安定化ジアゾニウム塩とは、特願昭57
−64190号にも記載される如く、２，４−ジクロ
ルフエニルジアゾニウム−１，５−ナフタレンジ
スルホン酸及びその塩類（例えばナトリウム塩、
カリウム塩など）、ｐ−スルフアニルベンゼンジ
アゾニウム−１，５−ナフタリンスルホン酸及び
その塩類、パラニトロベンゼンジアゾニウム四フ
ツ化ホウ酸及びその塩類、ジアゾ化スルフアニル
酸四フツ化ホウ酸及びその塩類、ジアゾ化スルフ
アニル酸四フツ化ホウ酸及びその塩類などをい
う。 以下に本発明の実施例を挙げる。 実施例 １ 比較例標準物質の調整 ビリルビンコンジユゲート14mgをリン酸緩衝
液（１／15M、PH7.0）100mlに溶解した。 ２ 本発明標準物質の調整 上記組成にウシアルブミンを５ｇ／dl添加
し、PH7.0に調整した。 ３ 総ビリルビン測定用試薬 安定化ジアゾニウム塩（第１表に示した３種
類） ……50mg Brij35（花王石鹸製） ……1.5ｇ 0.05NHCl ……100ml ４ 直接型ビリルビン測定用試薬 安定化ジアゾニウム塩（第１表に示した３種
類） ……50mg 0.05NHCl ……100ml ５ 測定方法 総ビリルビン測定用試薬又は直接型ビリルビ
ン測定用試薬３mlに対して、比較例標準物質、
本発明標準物質又は血清100μをそれぞれ加
え、37℃で10分間反応させた。それぞれの発色
状態と吸収ピークとを調べた。 ６ 測定結果 測定結果は第１表に示した。また、第１表に
示された如く、血清の発色は、本発明標準物質
についての発色と同じであつた。この結果か
ら、本発明の標準物質がビリルビン測定用の標
準物質として極めて優れていることがわかつ
た。 【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ビリルビンコンジユゲートとアルブミンとを
   添加した基剤を用いることを特徴とするビリルビ
   ン測定用標準物質。 ２ 前記基剤がビリルビンを含有していることを
   特徴とする特許請求の範囲第１項記載の標準物
   質。 ３ 前記アルブミンとして血清を用いることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項又は第２項記載の
   標準物質。 ４ 安定化ジアゾニウム塩を発色剤として用いる
   ビリルビンの測定方法において、ビリルビンコン
   ジユゲートとアルブミンとを添加した基剤を標準
   物質として用いることを特徴とするビリルビンの
   測定方法。 ５ 前記基剤がビリルビンを含有していることを
   特徴とする特許請求の範囲第４項記載の測定方
   法。 ６ 前記アルブミンとして血清を用いることを特
   徴とする特許請求の範囲第４項又は第５項記載の
   測定方法。