JPH02308795A - 発酵法によるピルビン酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、発酵法によるピルビン酸の製造法に間するも
のである。

ピルビン酸は生体代謝の重要な中間体であり、各種医・
農薬などの有効な合成原料であるのみならず酸素法によ
るＬ−トリプトファン、Ｌ−システィン、Ｌ−チロシン
などのアミノ酸合成の主要原料である。よって安価に製
造し得れば、種々の合成原料として有用である。

〈従来の技術〉 従来、発酵法によるピルビン酸の製造法としては、サツ
カロミセス属およびキャンディダ属などの酵母菌とその
変異株や担子菌類または特殊なバクテリアによる方法が
知られている（特公昭５７−７９６号公報など）。また
、トルロプシス属酵母によるピルビン酸発酵についても
野性株による方法（特開昭６２−２７５６８８号公報な
ど）が知られてい−る。

〈発明が解決しようとする課題〉 しかしながら、かかる従来方法はエタノール、α−ゲト
グルタル酸などの副生物が多かったり、または、収率・
収量が十分でなかっなりしたため工業的に有利な方法と
はいえなかった。

く課Ｕを解決するための手段および作用〉したがって本
発明者らは、上記問題点を解決することができ、さらに
生産性の高いピルビン酸の製造方法について鋭意研究し
た結果、トルロプシス属に属し、ピルビン酸生産能を有
する微生物に、２−デオキシグルコースに高い耐性を有
する性質を付与することにより、ピルビン酸の蓄積濃度
、生成収率が著しく向上することを見出し、本発明に到
達した。

すなわち、本発明の上記目的は、トルロプシス属に属し
、ピルビン酸生産能を有する微生物のうち、２−デオキ
シグルコース耐性株を培養することにより、培地中にピ
ルビン酸を生成蓄積させ、これを採取することにより達
成されるのである。

すなわち、本発明はトルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉ
Ｓ）属に属し、２−デオキシグルコース耐性を有し、か
つピルビン酸生産能を有する微生物を培養して培養液中
にピルビン酸を生成蓄積せしめ、前記培養液よりピルビ
ン酸を採取することを特徴とする発酵法によるピルビン
酸の製造法である。なかんずく、トルロプシス属に属す
るピルビン酸発酵生産菌に２−デオキシグルコース耐性
を付与し、ピルビン酸発酵性能を向上させた知見は今ま
で報告されていない。

次に本発明の詳細な説明する。

本発明に用いられる変異株は、ピルビン酸生産能を有し
、２−デオキシグルコースに耐性を有するトルロプシス
属に属する微生物であればいかなるものであってもよい
。

本発明に用いられる変異株の代表的なものとしては、た
とえば２−デオキシグルコース耐性変異株トルロプシス
・グラブラータＰ９５−２１（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１０６
５２）が挙げられる。

この変異株はトルログシス−・グラブラータＩＦ０　０
００５を親株として通常の変異処理方法によって誘導さ
れたものである。

このような変異株は、親株に紫外線照射、あるいはＮ−
メチル−Ｎ−一二トローＮ−二トロソグアニジン処理、
エチルメタンスルホネート（以下、ＥＭＳと略す）処理
などの通常の変異処理を施した後、親株が十分生育でき
ないような濃度の２−デオキシグルコースを含む固体培
地で、親株に比べて、有意に生育可能な菌株を取得すれ
ばよい。

本発明における２−デオキシグルコース耐性株とは、そ
の親株より強い耐性を有する菌株のことであり、好まし
くは親株の２４時間後の相対生育度が４０％以下になる
ような濃度の２−デオキシグルコースを含む培地で培養
した場合の最終相対生育度が５０％以上を示すようなも
のをいう。

ここでの相対生育度は、培養液の６６　Ｏｎ１１におけ
る吸光度を測定し、各菌株の２−デオキシグルコースを
添加していない培養液の吸光度を１００％として表わし
た場合の相対吸光度で示すものとする。

本発明で用いられる培地は発酵に通常使用される炭素源
、窒素源、無機塩類、ビタミン類などをほどよく含有す
るものであればよいが、炭素源としては、グルコースな
どの糖質、有機酸、エタノール、メタノールなどの使用
酵母菌が利用し得るものが使用される。窒素源としては
硫安、硝安、塩安、尿素、ペプトン、肉エキス、味液、
その他の有機および無機窒素化合物が使用されるが、望
ましくはアミノ酸をバランスよく含む有機窒素化合物が
よい、無機塩類としてはリン酸カリウム、硫酸マグネシ
ウム、鉄、マンガン、その他の無機塩類が用いられ、さ
らに必要に応じてチアミン、ナイアシン、ピリドキシン
、ビオチンなどの要求ビタミン、またはこれらを含有す
る酵母エキス、コーンスチープリカー、その他の天然物
を添加した培地を使用すればよい。

培養中はピルビン酸の生成蓄積にともない、ｐＨの低下
が起こるので炭酸カルシウム、苛性ソーダ、苛性カリな
どのアルカリでｐ　Ｈ３〜７に調節することがピルビン
酸生産には有効である。培養中の温度は２２℃〜３２℃
が適当である。培養終了後、系内に蓄積したピルビン酸
は常法により、単離採取することができる。

例えば、酸性エーテル抽出、フェニルヒドラシン化して
沈澱単離する方法なども採用することができる。

〈実施例〉 以下、実施例によって本発明を具体的に説明する。

実施例Ｉ Ａ、〈２−デオキシグルコース耐性株の分離）トルロプ
シス・グラブラータＩＦＯ０００５の菌体を常法により
ＥＭＳ処理（１１４／Ｖ％、３０℃で３時間）したのち
、この菌体を、ＢａＣ１ｏ　Ｙｅａｓｔ　Ｃａｒｂｏｎ
　Ｂａ５ｅ　（Ｄ　Ｉ　Ｆ　ＣＯｔｍ製、以下ＹＣＢ培
地と略す）に硫安５ｇ／ｌと２−デオキシグルコース４
０ｍＭを加えた寒天培地に塗布し、３０℃にて５〜７日
培養し、２−デオキシグルコース高耐性株トルロプシス
・グラブラータＰ９５−２１を取得した。

Ｂ、（２−デオキシグルコース耐性株の耐性度）下記第
１表に示す各菌株をＹＣＢ培地に硫安５　ｇ　／　ｊ！
を加えた液体培地に植菌し、３０℃で１６時時間上う培
養した。この生育した菌体を２−デオキシグルコースを
それぞれ０．１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ
の濃度で含む硫安５　ｇ　／　１を加えたＹＣＢ培地培
地５仁ｌ種し、３０℃で２４時間培養し、各菌体の生育
度を調べた。その結果を第１表に示した。

第　　　１　　　表 （注）：培養液の６６Ｏｎ１１における吸光度を測定し
、各菌株の２−デオキシグルコー スを添加していない培養液の吸光度を １００％として表わした。

以上より、本発明方法で使用する２−デオキシグルコー
ス耐性株トルロプシス・グラブラータＰ９５−２１は、
親株と比較し、２−デオキシグルコースに対して、より
高い耐性を獲得していることが明らかである。

実方鯉例　２ （ピルビン酸の生産） グルコース１０％、硫安０．３％、ポリベグトン０．５
％、ニコチン酸２■／２、ピリドキシン・塩酸塩４００
μｇ　／　１　、チアミン・塩酸塩２０μｇ　／　Ｉ　
、ビオチン５μｇ　／　１を含む発酵培地を１１のマイ
ヤーフラスコに４０ｍＩずつ分注し、滅菌後、別滅菌し
た炭酸カルシウム４％を添加し、親株トルロプシス・グ
ラブラータＩＦ０　０００５および２−デオキシグルコ
ース耐性株トルロプシス・グラブラータＰ９５−２１を
各々接種し、３０℃で６０時間培養した。培養液中に生
成したピルビン酸を高速液体クロマトグラフィーにて定
量した。

結果を第２表に示す。

第　　　　２　　　　表 なお、収率は消費グルコースに対するピルビン酸の重量
で表わした。

本発明例のトルログシス・グラブラータＰ９５−２１を
用いると、蓄積濃度、ピルビン酸収率ともいずれも親株
より顕著に向上している。

次に、トルロプシス・グラブラータＰ９５−２１の培養
液２００ｍ１を除菌後、上澄液に塩酸を加えｐ　Ｈ２，
Ｏとし、エチルエーテルで抽出し、次いで苛性ソーダで
ＰＨを５．５に中和した後、４０℃で減圧濃縮し５ｍｌ
程度とした。この濃縮液にエタノールを滴下させ、ピル
ビン酸ソーダ６．５９＋ｒ（純度９７．５％）を得た。

〈発明の効果〉 本発明方法によれば、ピルビン酸の蓄積量、収率が向上
し、より安価なピルビン酸の生産が可能になった。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）属に属し
   、２−デオキシグルコース耐性を有し、かつピルビン酸
   生産能を有する微生物を培養して、培養液中にピルビン
   酸を生成蓄積せしめ、前記培養液よりピルビン酸を採取
   することを特徴とする発酵法によるピルビン酸の製造法
   。
2. （２）ピルビン酸生産菌がトルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏ
   ｐｓｉｓ）属グラブラータ（ｇｌａｂｒａｔａ）種に属
   する特許請求の範囲第１項記載の方法。