JPH02268678A - サイコサポニンを含有するカルスの生産方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、生薬の薬効成分であるサイコサポニンを多量
に含有するカルスを、それらを産生ずるセリ科Ｂｕｐｌ
ｅｕｒｕｓ属植物の組織培養により、短時間で効率良く
生産する方法に関する。

〔従来の技術〕

Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ属に属するいわゆる柴胡類には、サ
イコサポニンが含有されており、その植物の根を従来よ
り生薬として利用してきた９国内では野生の柴胡類は殆
ど絶滅し、栽培法による数種が商品作物として出回って
いるが、非常に高価である。

ス、輸入品と°して中国産柴胡があるが、野生のもので
あり、異物の混入が多く品質は日本産柴胡より劣る。さ
らに柴胡類の特徴として、地理的変異とともに同一種内
で個体変異が大きい、そのため薬効成分であるサイコサ
ポニン含量のばらつきが大きく、この点が医薬品として
品質管理上問題になっている。

かかる問題点を解決するために植物組織培養によるサイ
コサポニンの生産を試みた例はいくつか報告されている
（特開昭５１−１２９８８、生薬学雑誌２８（２）１５
２−１６０（１９７４）　、Ｐａ　Ｊｅｎ、　Ｗａｎｇ
、　Ｐｌａｎｔ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　１
９８２７１−７２など）、シかし、植物体からのカルス
誘導によってサイコサポニンの生合成能は失われ、カル
スにサイコサポニンは含まれなかった。カルスを胚、根
、幼植物に再分化させることによって、サイコサポニン
の生産を確認しているが、その生産性は低いものであっ
た。

（発明が解決しようとする課題〕 本発明は、サイコサポニンを産生ずるＢｕｐｌｅｕｒｕ
＋ｓ属植物から、サイコサポニンを多量に含有するカル
スを生産する方法を提供することを目的とする０本発明
の方法により生産したカルスのサイコサポニン含量は非
常に多量でかつ安定しているので、従来の栽培における
サイコサポニンの医薬品としての品質管理上の問題を解
決することができる。

ｃｉｔａを解決するための手段〕 本発明者は、これらの課題を解決するため、人工的に制
御された環境下で、柴胡類より植物組織培養で一般に用
いられる２、４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ
）やナフタレン酢酸（ＮＡＡ）といったオーキシンの代
わりに、２−メトキシ−３，６−シクロロペンゾイノク
アシツド（ディカンバ）や４−アミノ−３，５，６−ト
リクロロビコリニンクアシッド（ビクロラム）を含有す
る培地でカルスを誘導、増殖させるとカルス中にサイコ
サポニンが多量に含まれることを発見し、本発明に到達
したものである。

すなわち、本発明はサイコサポニンを産生するＢｕｐｌ
ｅｕｒｕｍ属植物の組織を＆１１織培養してカルスを生
産する方法−において、植物生長促進物質として２−メ
１キシー３．６−シクロロヘンゾインクアシツド又は４
−アミノ−３，５，６−）リクロロビコリニックアシン
ドを含有する培地を組織培渓用培地に用いることを特徴
とする、サイコサポニンを多量に含有するカルスの生産
方法である。

サイコサポニンとしては５ａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎ　ａ
、　ｃｄ、　ｅ、　ｆが報告されており、本発明はその
いずれをも含むものである。抽出、分離によるサイコサ
ポニン画分には、中枢抑制（鎮痛、鎮静）、抗炎症、利
尿、解熱などの薬効が認められている。

このようなサイコサポニンを産生ずるＢｕｐｌｅｕｒｕ
Ｉｌ属植物には、ミシマサイコ、マンシュウサイコ、ホ
タルサイフ等がある。

本発明における植物組織の組織培養の方法は、公知の方
法で行えばよく制限されるものではない、例えば寒天培
地で培養する方法、液体培地で培養する方法がある。具
体的にはまず、以下のような培地を用いる。すなわち、
一般に植物組織培養で用いられているムラシゲ・アンド
・スクーグ（ＭＳ）培地、Ｂ５培地、ホワイト培地と呼
ばれるいずれかの培地の無機塩組成（窒素、リン、カル
シウム、カリウム、マグネシウム等）を基本としたもの
、あるいはそれらの基本培地の無機塩組成の一部を改変
したものに、ＩＮ（シュークロース、グルコース等）を
Ｏ〜６％程度、植物ホルモン（オーキシン、サイトカイ
ニン等）をＱ−１０ｐｐｍ添加し、必要に応じてビタミ
ン、アミノ酸等を添加した培地を用いる。寒天培地での
培養は、それらの培地に１％程度の寒天を添加し、試験
管、三角フラスコ等の中で固定させ、その上にカルスを
静置させて、人工気象器等の中で培養する。液体培地で
の培養は、寒天を加えない上述の培地を用いて、試験管
、三角フラスコ等の中で細胞を培養培地中に浮遊させ、
振盪培養器等を用いて培養する、いずれの培養方法の場
合も、培養温度は２５°Ｃ前後で、連続して数日〜数ケ
月培養し、細胞の増殖に応じてカルスおよび培養液の一
部を新しい培地に移植する継代培養を行う。

本発明におけるディカンバ及びピクロラムは、オーキシ
ン橿の活性を存する植物生長促進物質である。これらの
植物生長促進物質の培地中の含有量は特に制限されるも
のではないが、好ましくは０．５〜２．Ｏｐｐ票含有さ
せるとよい。

〔発明の効果〕 植物組織培養では、一般に培養期間が長くなり継代培養
を重なるにつれて、カルス中の二次代謝産物の含量は低
下し、数代継代後には殆ど検出されなくなる例が多いが
、本発明で誘導され、かつ継代培養されるカルスは４年
以上の長期間にわたってサイコサポニン生産能力を維持
することが可能である。このように安定してサイコサポ
ニンを含有するカルスを生産させることができ、該カル
スより得られるサイコサポニンは均一の品質のものであ
る。

〔実施例〕

以下に実施例として日本産ミシマサイコ（ＢｕｐＩｅｕ
ｒｕｍ　ｆａｌｃａｔｕｍ　）の例を挙げ、本発明の詳
細な説明するが、本発明はこの例に限定されるものでは
ない、評価項目は、カルス乾重量当たりの総サイコサポ
ニン含量（単位：ｐｐｍ）によった。

実施例１ 日本産ミシマサイコ（Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ　ｆａｌｃａ
ｔｕｍ　）の葉切片を切り出し、滅菌してムラシゲ、ア
ンド、スクーグ（ＭＳ）培地にシｇ糖３％、カイネチン
ｔ、ｏｐｐ−添加したものを基本培地として、表１のよ
うな種類と濃度の植物生長促進物質を含有させた寒天培
地に移植して、カルス誘導を行った。

得られたカルスを約１ケ月毎にカルス誘導培地と同一組
成の培地で継代培養を行った。継代３伏目のカルスにつ
いて、サイコサポニンの分析を行った。分析はカルスを
アルカリを含む８０％メタノールで抽出後、サイコサポ
ニン分画をＨＰ　Ｌ　Ｃにて測定することによって行っ
た。結果を表１に示す。

表１゜ 継代３伏目のカルスのサイコづポニン含量（ｔｒ・ ＠量 ＜１ｐｐ制未ａ） 〕 実施例２ 実施例１と同様に、 茎葉から誘導され約４年間 継代培養されたミシマサイコのカルスについて、サイコ
サポニンの分析を行った。

結果を表２に示 す。

実施例３ 実施例２で得られたカルスのうち、ムラシゲ・アンド・
スクーグ（ＭＳ）培地にディカンバを１．０ｐｐｍ含有
させて継代培養されたカルスの一部を実施例２の改変Ｍ
Ｓ培地を基本とした寒天を含有しない液体培地中で懸濁
培養を行った。細胞は微小な塊となって液体中に均一に
分散し、増殖した。細胞は１２日ごとに継代培養された
。液体培養で５〜８代目の細胞中のサイコサポニンの分
析を実施例１の方法で行ったゆ結果を表３に示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）サイコサポニンを産生するＢｕｐｌｅｕｒｕｍ属
   植物の組織を組織培養してカルスを生産する方法におい
   て、植物生長促進物質として２−メトキシ−３，６−ジ
   クロロベンゾイックアシッド又は４−アミノ−３，５，
   ６−トリクロロピコリニックアシッドを含有する培地を
   組織培養用培地に用いることを特徴とする、サイコサポ
   ニンを多量に含有するカルスの生産方法。