JPS62275617A - クロツカス・サテイバスｌ．の雌ずい及びその生産方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 （産業上の利用分野） 本発明はクロ、カス・サティペスＬ、　（Ｃｒｏｃｕｓ
ｓａｔｉｖｕｓ　Ｌ、）の雌ずい又はそれに相当する器
官を生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で生産する方法及び生
産された器官に関する。

クロッカス・サティペスＬ、はアヤメ科の多年性草本で
、その雌ずいをつみとって乾燥させたものはサフランと
呼ばれ、古来より薬用Ｋ、香辛料Ｋ、着色料にと尊ばれ
、用いられてきた。少くとも８０１７００年以前より用
いられ、現在もなお億胃、強壮、鎮痛などの薬用として
、各種の料理の添加物として、ペター、チーズ、リキュ
ール、アイスクリーム等の賦香や染色のために％また口
紅の着色用として、広く用いられ、きわめて有用かつ高
価なものである。

（従来の技術） クロッカス・サティバスＬ、は南ヨーロ、パや小アノア
の原産といわれ、温帯および亜熱帯に生育するが、サフ
ランの製造はかなり限られた地域で行われ、主生産地は
スペインである。その理由は主として製品の品質に依存
するものと考えられ、流通に政治的な障害のあった時代
には自給自足のため、欧州からインド、中国と広範囲に
栽培され念。

サフランの製造法は開花後数日中に雌ずいを摘みと９、
乾燥させるというもので、シーズンは年１回のみであり
、かつ全て手作業で行われている。

このように生産性の低い農業であることがサフランを高
価にしている原因と考えられる。また生産量の増大をは
かろうとすると、植物体の大量増殖が必要であるが、ク
ロ、カス・サティパスし、の球根の増殖は容易ではない
。種子は形成されず増殖は球根によっている。このよう
な増殖力の低さもサフランが高価な原因と考えられる。

近年、クロ、カス・サティ・シスＬ、の細胞組織培養に
よりカルスを形成させ、このカルスから黄色色素である
クロ７ンを生産する研究が行なわれている（特開昭５７
−１１５１８１）。しかし、この方法で得られるカルス
からは香気又は香味を得るのは困難であり、このカルス
はサフランの代替物とはなりえない。

（本発明が解決しようとする問題点） このようにサフランは有用な物であるが、農業的に生産
を拡大することは容易ではなく、別種の方法が開発され
るべき状況にある。

（問題点を解決するための手段） ところで近年植物の器官、組織、細胞の培養技術は大き
く進歩しており、種々の植物について有用物質ｆ　ｌｎ
　ｖｉｔｒｏで工業的に生産させることが可能となって
きている。そこで我々は、この古代より重用されてきた
サフラン（クロ、カス・サティ・ぐスＬ、の雌ずい）の
ｉｎ　ｖｌｔｒｏの増殖生産を試み、ついにその可能性
を実証して本発明全完成した。

すなわち、クロ、カス・サティパスし、の醪の中から摘
出した雌性器官又は人工培養基で増殖せしめた雌ずい様
器官を固体または液体の植物組織培養用人工培養基に植
付け、暗所もしくは明所、ろるいは明暗が交互する場所
で、１５〜４０℃の温度に保つと、ホルモンの組合せと
濃度の適当な条件下で多数の雌ずい機器官の増殖又は著
しい成長、肥大、成熟がみられる。ホルモンの添加がも
っとも重要な要件であるが、著効を示すためにはオーキ
シンとサイトカイニンのほどよい濃度の組合せが必要で
ある。

クロッカス・サティ・マスＬ、の雌ずい又はそれに相当
する器官を人工培養基にて生長、肥大、成熟せしめるた
めには人工培養基中にサイトカイニンｆ　０．０１　ｐ
ｐｍ以上添加することが望ましい。

クロ、カス・サティイスＬ、の雌ずい又はそれに相当す
る器官を人工培養基にて発生増殖せしめるためには人工
培養基中にサイトカイニン及びオーキシンを各々０．０
１　ｐｐｍ以上添加することが望ましい。ここでオーキ
シンとして用いられる物質は、インドール酢酸、インド
ールグロピオン酸、インドール酪酸、α−ナフタレン酢
酸、β−す７トキシ酢酸、インドール酢酸メチルエステ
ル、４−クロロフェノキシ酢ｆｉ、　２．４−ジクロロ
フェノキシ酢酸（２，４−Ｄ　）、２−メチル−４−ク
ロロフェノキシ酢酸、２，３．６−　）ジクロロ安息香
酸、シス−桂皮酸、２，４．５−　トリクロロフェノキ
シ酢酸（２，４，５−Ｔ）などがあ）、サイトカイニン
として用いられる物質は、シス−ゼアチン、トランス−
ゼアチン、リボシルゼアチン等のゼアチン類、カイネチ
ン、セニルアミノブリン、ペンノルアミノブリン等のカ
イネチン類、ベンノルアミノベンズイミダゾール、６−
ベンジルアデニン、Ｎ−４−ビリツルーＮ′−フェニル
ウレア、Ｎ−２−クロロ−４−ピリジル−Ｎ′−７エニ
ルウレア等のビリゾルフェニルウレア類などがある。こ
れらはオーキシンとしてもしくはサイトカイニンとして
単独もしくは複合して添加される。

これらのホルモン類を添加して用いる人工培養基は、通
常の植物組織培養用の培地（市販されているものもある
）でよい。たとえばＭｕｒａｓｈｉｇｓａｎｄ　Ｓｋｏ
ｏｇの培地、Ｗｈ　ｉ　ｔ　ｅの培地、Ｇａｍｂ　ｏ　
ｒ　ｇらの培地、Ｎ１ｔｓｃｈの培地、Ｈｅ１ｌｅｒの
培地、Ｓｃｈ＠ｎｋ　ａｎｄＨｌｌｄｓｂｒａｎｄｔの
培地、Ｎ１ｔｓｃｈ　ａｎｄ　Ｎ１ｔｓｃｈの培地、Ｋ
ｏｈｌｅｎｂａｅｈ　ａｎｄ　Ｓｃｈｍｌｄｔの培地、
Ｋｎｏｐの培地、Ｌｌｎｓｍａｉｅｒ　ａｎｄ　Ｓｋｏ
ｏｇの培地、その他蔗糖、プドク糖以外の炭素源や、ア
ンモニウム塩や硝酸塩以外の窒素源を用いた培地を用い
ることが可能で６９、さらに、酵母エキス、カブミノ酸
、ペグトン、アミノ酸末、ココナツミルク、アスコルビ
ン酸、クロッカス・サティバスＬ、の草体（球根、茎葉
など）の抽出物等を添加する場合もある。

サイトカイニンを添加した人工培養基で得られた新生の
雌すい機器室は、同一の培養条件、もしくはさらに該器
官の肥大、成長および成熟に適した培養条件で培養する
ことができる。サイトカイニン及びオーキシンもしくは
サイトカイニンのみを添加した人工培養基で得られた雌
すいもしくはそれに相当する器官は、その−２ま乾燥し
たり、もしくは有用物質を抽出したりするために用いる
ことが可能であり、また必要であれば、さらに移植等に
より熟度を高めることも行ない得る。

以下に実施例を説明し、本発明の理解に資する。

実施例１ クロッカス・サティパスＬ、のサフラン製造用栽培種の
球根（約３’ｏｐ重）を発芽させ、１１ｔ−切シ出し、
ｌチ次亜塩素酸ナトリウム溶液で外囲を殺菌し、水洗の
のち、無菌的に切開して雌性器官もしくはそれらを含有
する部分を切り出した。雌性器官は雌すい及び子房を含
み、これらを雌ずいおよびもしくは子房としてペンジル
アデニントＱ／１を加えたＬｉｎ５ｍ１＠ｒ　ａｎｄ　
Ｓｋｏｏｇの固形培地（Ｖ（５゜８、寒天１％）Ｋ植え
つけ、２０℃、暗所にて培養し、１ダ月後、生重量約３
０倍に生長肥大した雌ずいを得九。これらの雌ずいは黄
色〜紅褐色に着色し一部おり、薬用、香辛料、着色料と
して用いうることを示していた。

なおＬｉｎ５ｍ１＠ｒ　ａｎｄ　Ｓｋｏｏｇの培地組成
は、ＩＪｅ中Ｋ　ＭｇＳＯ４４Ｈ２０３７０Ｑ、Ｃａ　
Ｃ７０’　２ＨｚＯ４４０”ｆｉ’、ＫＮＯ，ｔ、９０
０．ｑ、ＮＨ，Ｎｏ、　１，６５０ｍ？、Ｋ）（２ＰＯ
４１７０’！、Ｐｅ５ｏ４’７Ｈ２０２７，８ｒｎ９、
Ｎａ　２ＥＤＴＡ　３７．３　ν、Ｍｎ　ＳＯ４・４Ｈ
２０２２，３ダ、　Ｚｎ５Ｏ４・７Ｈ２０８，６＋ｆ、
　　Ｃｕ５Ｏ４’５Ｈ２００，０２５〜、Ｃｏ　Ｃ７０
・６Ｈ２００−０２５Ｗ、ＫＩｏ、８３／’ＩＰ、Ｈ３
Ｂ０．６．２＃、Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２００，２５Ｉ
ｎ９、蔗糖３０，０００マ、ミオイノシトール１００・
夕、および塩酸チアミン０．４Ｉｎ９を含んで贋る。

実施例２ 実施例１と同様にして無菌的に摘出し次雌性器官の一部
である子房をオーキシンとサイトカイニンを含む培地す
なわちα−ナフタレン酢酸１０＃／１．カイネチンｌｅ
ａり／ｌｔ含むＬｉｎｓｍａｉｓｒ　ａｎｄＳｋｏｏｇ
の培地に培養し、３０〜６０日で多数の雌ずい機器室を
形成せしめた。これらの新生器官をＬｌｎｓｍａｌｅｒ
　ａｎｄ　Ｓｋｏｏｇの培地にカイネチン５ｍ９／１３
を加え之培地に移植し、さらに２ダ月培養して約３０倍
に成長、肥大、成熟せしめた。

実施例３ 実施例２と同様にして得た雌すい様新生器官を、カイネ
チン５η／！、α−ナフタレン酢酸０．１ｒｎ９／Ｊを
加えたＬｉｎ５ｍ１＠ｒ　ａｎｄ　Ｓｋｏｏｇ培地で、
さらに２ダ月培養して約２０倍に成長、肥大、成熟させ
之。

実施例４ 実施例１と同様の実験のうち、オーキシンをα−ナフタ
レン酢酸０．１　ｌｎ９７ｍ１、サイトカイニンをカイ
ネチン５７Ｑ／ｌとしたところ、６０日頃に１個の子房
と雌ずいから約１０個の雌ずい機器室が形成された。

実施例５ 実施例１と同様の実験のうち、オーキシンをα−ナフタ
レン酢酸１ｍ９／１．サイトカイニンをカイネチン５ｍ
９／ｌとし九ところ、６０日頃に１個の雌ずい（先端は
３本に分離）から４個の雌ずい機器室の発生をみた。

実施例６ 実施例１と同様の実験のうち、オーキシンをα−ナフタ
レン酢酸１０□ｎ９／ｌ　、サイトカイニンをベンジル
アデニン１ｍ９／ｌとしたところ約６０日で１個の子房
から約３０個の雌ずい機器室が得られた。

実施例７ 実施例１と同様の実験のうち、オーキシンをα−す７タ
レン酢酸１０■／ｌ、サイトカイニンをベンジルアデニ
ン５ダ／１３としたところ、約６０日で１個の子房と雌
ずいから約１０個の雌すい機器室が得られた。

実施例８ 実施例１と同様の実験のうち、オーキシンをインドール
酪酸１０．Ｑ／Ｊ、サイトカイニンをベンジルアデニン
５ダ／！としたところ、約６０日で１個の子房から３個
の雌ずい機器官が得られた。

実施例９ 実施例１と同様の実験のうち、オーキシンをα−ナフチ
ル酢酸１ｎ９／ｌ、サイトカイニンをカイネチン１η／
ｌとしたところ雌ずいの分岐後の１本から１０個の雌ず
い様新生器官を得た。

実施例１０ 実施例１と同様の実験のうち、α−ナフタレン酢酸Ｌｍ
９／ｌ、カイネチンＩＬＮｉ／ｉｔ含むＮ１ｔｓｅｈの
培地で培養し、３０〜６０日で多数の雌ずい機器官を形
成せしめた。Ｎｉｔａｅｈの培地の組成は、第１表に示
す通りである。

第１表 Ｎ１ｔｓｃｈの培地 ’　　（Ｎｉｔａｅｈ、Ｊ、Ｐ、：Ｚ、Ｐｆｌａｎｚｅ
ｎｚｕｅｈｔｇ　６７　＊　３（ダ／り ＮＨ４Ｎｏ３７２０ ＫＮＯ，ｇ　５０ ＣａＣ１２”　２Ｊ（２０１６６ Ｍｇ５０４・７Ｈ２０１８５ ＫＨ２Ｐ０４６　Ｂ Ｆ　ｅ　Ｓ　Ｏａ　・７Ｈ２０２７，８５Ｎａ　２−　
ＥＤＴＡ　　　　　　　　３７．７５Ｍｎ５０４’　４
Ｈ２０２５ Ｚ　ｎ　Ｓ　Ｏ４・７Ｈ２０１０ ＣｕＳ０４”　５Ｈ２００，０２５ Ｎａ２Ｍｏｂ４”　２Ｈ２００，２５ Ｈ３ＢＯ５１０ ｍｙｏ−Ｉｎｏｓｌｔｏｌ　　　　　　１０ＯＮ１ｅｏ
ｔｉｎｉｃ　　ａｃｉｄ　　　　　　５Ｔｈｉａｍ１ｎ
＠・ＨＣｔ　　　　　　Ｏ，５Ｐｙｒｉｄｏｘｉｎｅ−
ＨＣｔ　　　　　Ｏ，５Ｂｉｏｔｉｎ　　　　　　　　
　　　　Ｏ，０５ｆｏｌｉｃ　　ａｃｉｄ　　　　　　
　　　　Ｏ，５Ｇｌｙｃｉｎｅ　　　　　　　　　　　
　２Ｓｕｅｒｏｓａ　　　　　　　　　２０００ａｆａ
ｒ　　　　　　　　　　　１００００声　　　　　　　
５．８ 実施何重１ 実施例１と同様の実験のうち、α−ナフタレン酢酸１０
ｍ９／ｌ、カイネチ：／ＩＩＶ／ｌを含むＧａｍｂｏｒ
ｇＢ５の培地で培養し、３０〜６０日で多数の雌ずい機
器官を形成した。Ｇａｍｂｏｒｇ　Ｂ　５培地の組成は
、第２表に示す通りである。

第２表 Ｇａｍｂｏｒｇ　Ｂ　５培地 ＣＩ９／１） ＣａＣ２２’　２Ｈ２０１５０ ＣｏＣ１２”　６Ｈ２００，０２５ Ｃｕ　ＳＯ４・５Ｈ２００−０２５ ＦｅＮｌｌ　ＥＤＴＡ　　　　　４０．００Ｈ３Ｂ０．
　　　　　　　　　　３．００ＫＩ　　　　　　　　　
Ｏ，７５ ＫＮｏ、　　　　　　　　　３０００ Ｍｇ５０４−７Ｈ２０２５０ ＭｎＳＯ４’　４Ｈ２０１３，２ ＮａＨ２ＰＯ４’２Ｈ２０１６９，６ Ｎａ２Ｍｏ０４−２Ｈ２００，２５ （ＮＨ４）２Ｓｏ４１３４ ＺｎＳＯ４２，００ Ｉｎｏｓｉｔｏｌ　　　　　　　　　　１００Ｎｉａｏ
ｔｉｎｉｃ　　ａｃｉｄ　　　　　　　１．００Ｔｈｌ
ａｍｉｎ＠　ＨＣｔ　　　　　　　１０．００Ｐｙｒｉ
ｄｏｘｉｎａ　　ＨＣｌ　　　　　　１．００Ｓｕｃｒ
ｏｓ＠　　　　　　　　　２０００ａｇａｒ　　　　　
　　　　１００００声　　　　　５．８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）クロッカス・サティバスＬ．の雌ずい又はそれに相
   当する器官をサイトカイニンを含有する人工培養基にて
   生長、肥大、成熟せしめる方法。 ２）クロッカス・サティバスＬ．の雌ずい又はそれに相
   当する器官をサイトカイニンを含有する人工培養基にて
   生長、肥大、成熟せしめて成るクロッカス・サティバス
   Ｌ．の雌ずい又はそれに相当する器官。 ３）クロッカス・サティバスＬ．の雌ずい又はそれに相
   当する器官をサイトカイニン及びオーキシンを含有する
   人工培養基にて発生、増殖せしめる方法。 ４）クロッカス・サティバスＬ．の雌ずい又はそれに相
   当する器官をサイトカイニン及びオーキシンを含有する
   人工培養基にて発生、増殖せしめて成るクロッカス・サ
   ティバスＬ．の雌ずい又はそれに相当する器官。