JPH02262527A - ヒトのエイズ感染検出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 ヒトの免疫不全ウィルス１型Ｄ（ＩＶ−１）は免疫シス
テムにおける重大な病状を伴う全身的な感染症を惹起す
るレトロウィルスの一種である。

ＨＩ　Ｖ　−１の１症的単離物はまたＬＡＶ（リンパ腰
痛併合ウィルス、ＨＴＬＶ−ｍ　（ヒトＴ−細胞リンパ
性つィルス■型）、またはＡＲＶ　（エイズ併合レトロ
ウィルス）として知られている。ＨＩＶ−１感染は獲得
免疫不全症（ＡＩＤＳ）を惹起す。この病気に対しては
有効な治療法はない。今日までこの病気は例外なく致命
的なものであり、そして文章で与かれた治療法もなかっ
た。

ＨＩＶ−１に感染した人はおちに′ｒ４リンパ球がなく
なるために免疫機能の段階的な消失を示す。

Ｔ４リンパ球は機能的には補助／誘引細胞として定義さ
れ、抗原の認知と、それに続く体液的そして細胞的免疫
応答の調整において本質的な役割を果している。進行し
たエイズにかかっている人は強力なマイトゲンに対して
応答する能力の喪失を伴う完全な免疫性不全症になるで
あろう。

Ｔ４リンパ球はＣＤ４分子をそれらの表面に有するため
にＣＤ４細胞とも呼ばれている。この分子はＴ４リンパ
球の中へ侵入するためのメカニズムを備えているＨ　Ｉ
　Ｖ　−１の受容体であると信じられている。それらの
表面のこの分子により神経細胞もまたＨＩＶ−１に感染
する。

エイズの潜伏期は極端に長い。ＨＩＶ−１感染から臨床
的徴候の始まりまでには多部片を要する。

ウィルスに冒されてから血清転換の間の典型的な期間は
６ないし８週間であると見積もられているが、この期間
は大きく変動するしいくらかの個体ではＨＩ　Ｖ　−１
感染の後多くの月の間血清陰性が続くと云う報告もある
。

ＨＩＶ−１感染の臨床的発現は日和見感染症、種々な腫
瘍、そして神経的併発症を含む。ひとつのグループとし
て、日和見感染症は最終的にはエイズの診断の目安とな
りそしてエイズ患者の死のもっとも一般的な原因となる
もっとも一般的に発現される臨床的症状である。これら
のもっとも重要な感染症状はニューモジステイスカリニ
肺炎、トキソプラズマ症、結核症、単純性庖疹ウィルス
、帯状庖疹ウィルスあるいはサイトメガロウィルスによ
る感染症、クリプトコック病（特に髄膜炎）。

口内および食道のカンジダ症、そして潜伏性小生予病を
含む。

本発明の一つの目的は人がＨＩＶ−１またはエイズに感
染しているかどうかを検出するために有用に用いられ得
る安価な皮膚テストを提供するものである。

更に本発明の他の目的は人がエイズに感染しているかど
うかを検出するための、そしてもしあるとしても比較的
小さい側面的影響しかもたらさないような人体テストを
提供することにある。

本発明のこれらおよびその他の目的がいかに達成される
かは下記の開示にもとづいて明らかになるだろう。

〔発明の要約〕

免疫原エイズウィルスエンベロープ蛋白質材料は本発明
の実際において、該材料をヒトの皮膚に対して皮内的に
投与してその投与または注射した部位に特有の赤味およ
びふくれのような免疫応答があるかどうか該投与または
注射した部位を観格することによって人がエイズに感染
しているかどうかを検定するために用いられる。該投与
または注射した部位の免疫応答が観察されることは人が
ＨＩ　Ｖ　−１またはエイズに感染していることを示す
。

本発明の実際においては、合成または昆虫の細胞におい
て遺伝子工学的に生産されるＨＩＶ−１エンベロープ蛋
白質から誘導されることが望ましい、ＨＩＶ−４エンベ
ロープ遺伝子、ｅ　ｎ　ｖの一部を含んでいる一つのバ
キュロウィルス表現ベクトルは合成ＨＩＶ−１エンベロ
ープ蛋白質を生産するためにプログラム培養された昆虫
細胞に有用に用いられる。合成ｇｐ１６０抗原（ＨＩＶ
−１ｇｐ１６０）は約ｉ６０，０００の分子量を有する
糖蛋白質である。遺伝子工学的に生産された組換え免疫
原エイズウィルスエンベロープ蛋白質材料の調整は同一
出願人にか＼る１９８６年１０月１６日出願の米国特許
出願第９２０，１９７号および１９８８年５月４日に公
開された対応ヨーロッパ特許出［（ヨーロッパ特許公開
第０２６５７８５号）中に開示されている。上記開示は
本願の開示に組入れられその一部となっている。

該ＨＩＶエンベロープ蛋白質はレピドプテラン（昆虫細
胞）の培養物を組換えバキュロウィルスベクトルに曝露
された後にそれから採取しそして精製される。該蛋白質
はそれから得られた精製蛋白質製品または調薬が５％よ
り多くない昆虫およびバキュロウィルス蛋白質を含有し
そしてヒト血液または血液生産物を同伴しないように精
製される。

ＨＩＶ−１ウイルスによって感染されたヒトＴ−細胞か
ら回収された免疫原エイズまたはＨＩＶ−１ウイルスエ
ンベロープ蛋白質材料はまた有用であるが、しかし現在
では本発明の実際においては望ましいものとは云えない
。ＨＩＶ−１によって感染されたＴ−細胞からの免疫原
物質の製造については１９８８年２月１６日に特許され
た米国特許第４，７２５，６０９号を参照のこと。この
米国特許の開示は二＼に組入れられ本開示の一部となっ
ている。

上、記免疫原エイズウィルス蛋白質材料は遅延型過敏症
（Ｄ　Ｔ　Ｈ）皮膚テストまたはテストされる人がエイ
ズまたはＨＩＶ−１に感染しているかどうかの検定にお
ける本発明の実際に有用に用いられる。

ＤＴＨ皮膚テストはこのような悪性の病気にかかってい
るために免疫不全になっているのではないかと疑われて
いる人における免疫システムの細胞学的な武器を評価す
ることにおいて用いられて来た。またＤＴＨ皮膚テスト
はガンおよび外科的患者における病的状態の予測にも用
いられて来た。

これまでに、しかし、なから免疫原エイズウィルスエン
ベロープ蛋白質材料がエイズ感染に対するＤＴＨ皮膚テ
ストにおいて用いられたことはなかった。本発明におけ
る免疫原エイズウィルスエンベロープ蛋白質材料を用い
るＤＴＨ皮膚テストはＨＩＶ−１の特有な細胞免疫核的
応答の評価における助けとして用いられ、そしてエイズ
またはＨＩＶ−１に感染している人におけるこの物質の
皮内的投与は注射部位における特有なリンパ挙動と単一
核細胞浸透作用の解放による特徴的なりＴＨ応答（局部
的な赤味およびしこり）を示すであろう。

本発明による皮膚テストの実施は免疫性を与える投薬を
意図するものではないけれども、本発明の免疫原エイズ
ウィルスエンベロープ蛋白質材料。

特にｇｐ１６０蛋白質の投与はすべてエイズまたはＨＩ
Ｖ−１エンベロープ抗原に対して血清変換を行なうであ
ろう。

本発明の実際はエイズまたばＨＩＶ−１に感染している
人における病気の臨床的な段階づけまたは予測における
助けとして有用である。示されるように、本発明の皮膚
テストは免疫性を与える投薬を意図されるものではない
。しかしながらこのテストの実施は結果として免疫性を
与える効果を促進するワクチン注射になる。しかしなが
ら、エイズまたはＨＩＶ−１の長い潜伏期間のために、
テスト時に存在する未確認ＨＩＶ−１感染に対して例え
ばｇＰ１６０蛋白質の皮内的投与が行なわれ得ると云う
ことは留意すべきである。

本発明の実際において、免疫原エイズウィルスエンベロ
ープ蛋白質材料の皮下的投与はＨＩＶ−１血清陽性の人
においては避けられるべきである。

しかしながら、陽性の人にテストするためには皮下的に
結核菌が投与された時に、正常には反応が起らないけれ
ども、高敏感個体においては古い結核部位の回りに一般
的な発熱反応および／または烈しい炎症が起ると云うこ
とに留意すべきである。

更に血清陰性の人は、本発明の皮膚テストの実施の後で
はエイズまたはＨＩＶ−１エンベロープ蛋白質に対する
抗体の、ために血清陽性になるであろうことは注目され
る。

〔発明の詳細な説明〕゛ 本発明のエイズまたはＨＩＶ−１ウィルス感染テストｇ
ｐ１６０溶液の０．１！ｌ１１をシリンジと針により皮
内的に注射することによって行なわれ、テスト結果は紅
斑およびしこりの最大広がりを測定するか、または生検
法のような他のテストによって検出される。特に本発明
の免疫原エイズウィルスエンベロープ蛋白質材料の投与
は次のように行なわれる。

１、テストの位置は通常ひじから約４インチ下の前腕の
屈筋または背面部である。他の皮膚部位も使用されるが
、前腕屈筋表面がより好ましい。

２、注射部位の皮膚は７０％アルコールで清拭され乾燥
せしめられる。

３、テスト材料は短い（１／２インチ）２６または２７
ゲージ針を取付けたツベルクリンシリンジ（０，５ｍｌ
または１　、０　ｍｌ）により投与される。

４、該シリンジと針は無菌で一度使用したら廃棄するタ
イプのものであるべきである。テストされる各々の人に
対しては別の無菌ユニットを用いるべきである。

５、ガラス瓶ストッパーのしきりは７０％アルコールで
清拭されるべきである。

６、針はさかさにされたガラス瓶のストッパーしきりを
通して挿入される。正確に０．１ｍｌが気泡を排除すべ
く注意してシリンジ中に満たされそして針の内部にまで
満たされた状態を維持する。

７、針の先は上向きの角度で皮膚のもっとも表層へ挿入
される。溶液が注射される時に、６がら１ｏＩＩＩｍサ
イズ（約１／４から１／２インチ）の薄い水泡が針の刺
った個所を含んで生ずる。これは早期に吸収され通常は
手当は必要とされない。

注射が皮下的にされた場合（即ち水泡は形成されない）
または薬剤の可成りの部分が注射の個所から漏れてしま
った場合、テストは少なくとも５■（２インチ）離れた
他の個所で直ちに繰返されるべきである。テスト蛋白質
材料は３ケ月まで２〜８℃で貯蔵され得、そしていがな
る非経口的な薬剤製品と同様に、投与に先立って該テス
ト材料は粒子状物体や変色があるかどうが目で詳細に調
べられる。

人から人へＨＩＶ、血清肝炎、そして他の伝染源が伝染
することを防止するために、各々の患者に対して別個の
無菌・シリンジと針とを用いることが重要である。シリ
ンジが用いられる場合、防黴材、防腐剤および洗浄剤が
付着していない無菌のシリンジと針とを用いてびんがら
す＼められる量吸い上げる。

標準手法を用いて、ＤＴＨ反応の検出は注射した後４８
から７２時間そして指示されている付加時間の間にされ
るべきである。紅斑としこりの最大広がりを生ずる範囲
をボールペンで軸郭づけしてそれからテープに移すと云
うことが提案される。

垂直径の総計の１倍半が反応サイズとして用いられるべ
きである。５ｍｍ（標準）より大きな反応は陽性と考え
られるであろう。紅斑およびしこりの一つの直径は前腕
の長軸方向を横切って測定されるべきである。例えば生
検法や単一核細胞浸透に対する組織学的検査のような更
なるテストはまた行なわれる。

例えばｇｐ１６０のような抗原材料に対する反応性は非
ＨＩＶ−１ウィルス感染、生ウイルスワクチン（即ちは
しか、天然痘、ポリオ、風疹、および耳下腺炎）によっ
て、あるいは副腎皮質ホルモンの投与によって非特異的
に抑制されるであろうし、栄養不良もまた同様な効果を
示すと云うことは留意されるべきである。

例えばｇｐ１６０のような免疫原エイズウィルスエンベ
ロープ蛋白質材料は望ましくは一つのビンに対して約１
．１ｍｌの抗原調薬が入っている２■〕容器中の多投薬
量ビンとして供給される。材料には防腐剤は入っていな
いので、テスト材料はシールされた容器を開いた後は２
４時間以内に使用せられるべきである。シールされた容
器またはビンは望ましくは２〜８℃で貯蔵され、そして
指示されるように使用されなかった中味は開いてから２
４時間後に廃棄されるべきである。上記指示されす＼め
られた温度以上またはそれ以下の温度での貯蔵は効力を
減少させそして凍結は効力を破壊してしまうから抗原材
料または溶液は凍結させるべきではない。

免疫原エイズウィルスエンベロープ蛋白質テスト材料は
望ましくは一個またはそれ以上の２．０ｍ１ピンと例え
ば抗原溶液の２ｍｌビンの各々に対して１０個のシリン
ジと針と云うように２１１１１ビンの各々から０．１ｍ
ｌの投薬量を採取するに適当な個数の無菌シリンジと針
とを一緒にしたキットの形で提供される。

上記されたように本発明の実際においてはｇｐ１６０抗
原材料、望ましくは例えば前記関連米国特許出願第９２
０，１９７号中に記載される昆虫細胞中のバキュロウィ
ルスを介して表現されるエイズウィルスエンベロープ遺
伝子から表現され誘尋されたｇｐ１６０を用いることが
望ましい。本発明の実際に有用に用いられるｇｐ１６０
または２４以外にエイズウィルスエンベロープ蛋白質材
料の他の免疫原フラクシ玉ンはｇｐ１２０蛋白質、ｇｐ
４０蛋白質、およびそれらの免疫原フラクションやエン
ベロープ蛋白質の免疫原フラクションを含むものである
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、免疫原エイズウィルスエンベロープ蛋白質をヒトの
   中へ皮内的に導入すること、そして注射部位で例えば特
   有の赤味およびふくれのような免疫応答を観察すること
   からなるヒトのエイズ感染検出方法 ２、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質はエイズウィ
   ルスに感染したヒトＴ細胞から回収される特許請求の範
   囲１に記載のヒトのエイズ感染検出方法 ３、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質は遺伝子工学
   的に得られるかまたは組換えエイズウィルスエンベロー
   プ蛋白質である特許請求の範囲１に記載のヒトのエイズ
   感染検出方法 ４、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質は組換え昆虫
   ウィルスから表現されたものである特許請求の範囲１に
   記載のヒトのエイズ感染検出方法 ５、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質は昆虫細胞中
   の組換え昆虫ウィルスから表現されたものである特許請
   求の範囲１に記載のヒトのエイズ感染検出方法 ６、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質はｇｐ１６０
   である特許請求の範囲１に記載のヒトのエイズ感染検出
   方法 ７、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質はｇｐ１２０
   である特許請求の範囲１に記載のヒトのエイズ感染検出
   方法 ８、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質はｐ２４であ
   る特許請求の範囲１に記載のヒトのエイズ感染検出方法 ９、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質は組換え昆虫
   バキュロウィルスから表現される特許請求の範囲１に記
   載のヒトのエイズ感染検出方法 １０、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質は昆虫細胞
   の組換え昆虫バキュロウィルスから表現される特許請求
   の範囲１に記載のヒトのエイズ感染検出方法 １１、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質はｇｐ４０
   である特許請求の範囲１に記載のヒトのエイズ感染検出
   方法 １２、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質はレピドプ
   テラン（昆虫）細胞をエイズウィルスエンベロープ蛋白
   質に対するエイズウィルス遺伝子を含んでいる組換えバ
   キュロウィルスベクトルに対して曝露した後で、該細胞
   の培養物から採取されそして精成されたものである特許
   請求の範囲１に記載のヒトのエイズ感染検出方法 １３、該遺伝子はｇｐ１６０エイズウィルスエンベロー
   プ蛋白質に対するものである特許請求の範囲１２に記載
   のヒトのエイズ感染検出方法 １４、該遺伝子はｇｐ１２０エイズウィルスエンベロー
   プ蛋白質に対するものである特許請求の範囲１２に記載
   のヒトのエイズ感染検出方法 １５、該遺伝子はｐ２０エイズウィルスエンベロープ蛋
   白質に対するものである特許請求の範囲１２に記載のヒ
   トのエイズ感染検出方法 １６、該エイズウィルスエンベロープ蛋白質は該エイズ
   ウィルスエンベロープ蛋白質を含んでいる溶液または組
   成物の約０．１ｍｌの量で皮内的に導入される特許請求
   の範囲１に記載のヒトのエイズ感染検出方法 １７、免疫原エイズウィルスエンベロープ蛋白質を含み
   、該蛋白質は無菌の防腐剤の入っていない水溶液の中に
   含まれているエイズウィルスエンベロープ蛋白質組成物 １８、該蛋白質はｇｐ１６０である特許請求の範囲１７
   に記載のエイズウィルスエンベロープ蛋白質組成物 １９、該蛋白質はｇｐ１２０である特許請求の範囲１７
   に記載のエイズウィルスエンベロープ蛋白質組成物 ２０、該蛋白質はｐ２４である特許請求の範囲１７に記
   載のエイズウィルスエンベロープ蛋白質組成物 ２１、本質的に無菌の防腐剤の入っていない水性組成物
   または溶液中の免疫原エイズウィルスエンベロープ蛋白
   質からなるヒトのエイズ感染の有無をテストするために
   ヒトに皮内的注射を行なう上で有用なエイズウィルスエ
   ンベロープ蛋白質組成物 ２２、防腐剤の入っていない免疫原エイズウィルス蛋白
   質の水性溶液または組成物が入っているシールされた容
   器と、少なくとも一個の無菌で廃棄可能なシリンジと針
   とからなるエイズ感染の検出を行なう皮内的投与のため
   に有用なテストキット ２３、更にエイズ免疫原ウィルス蛋白質材料の皮内的注
   射に先立って皮膚を清拭するための少なくとも７０％濃
   度のエチルアルコールを含む特許請求の範囲２２に記載
   のテストキット