JPH02229118A - 抗ウイルス作用と免疫賦活作用を有する組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗ウィルス作用と免疫！ＩＯ（活作用を併せ有
する組成物に関し、詳しくは特定の免疫活性多糖体１１
ＯＮの硫酸化物を有効成分として含有する組成物に関す
る。

〔従来の技術、発明が解決しようとする課題〕後天性免
疫不全症候群（エイズ）は１９８１年に米国において発
見された疾患で、その原因はエイズウィルス（ＩＩＩＶ
）テあるとされ、ＩＩＩＶはヒｌ−しｌ−＋：ｒウィル
スに属するとされる。エイズはこのウィルスによりヘル
パーＴリンパ球が破壊され、その結果細胞性免疫不全と
なり、原虫を含む種々の微生物による日和見感染、悪性
腫瘍などが発生ずる極めて死亡率の高い疾患である。

＋１１ＶはＨＩＶ感染者の血液、精液、唾液中に存在し
、輸血その他の原因によって感染することが知られてい
る。

従来、この疾患に対する治療剤として提案されているも
のの多（はＨＩＶ中に含まれている逆転写酵素活性を抑
制する作用をもつものであり、例えば３−アジド−デオ
キシチミジン、スラミン。

）ＩＰＡ−２３などがある。しかし、これら治療剤は副
作用が強いためキャリアの発症予防用の長期投与は不可
能である等の欠点がある。そのため、さらに有効で完全
な薬剤の開発が熱望されている。

また既存のデキストラン、　　グルカンなどの多糖体に
硫酸を反応させて得た硫酸多糖体に抗ウィルス作用が、
あることが知られているが、既存のデキストランのよう
に元の多糖体が免疫活性を持たなかったり、硫酸化した
ことにより本来の免疫賦活作用が消失してしまうという
欠陥が指摘されており、抗ウィルス作用と免疫賦活作用
の両方を同時に有する物質が特にエイズ予防治療薬とし
て求められている。また既存のデキストラン等は血液凝
固阻止作用が強く、血友病患者等への投与や長期投与に
は不適とされるなど問題点か多い。

〔課題を解決するための手段］ そこで、本発明者らは先に開発した免疫賦活作用を有す
る新規多糖体ＲＯＭに硫酸を反応させて硫酸多糖体を製
造し、この硫酸多糖体について抗うイルス活性及び免疫
賦活能の有無を調べたところ、１１１Ｖに対する強い増
殖抑制効果を有していることを見出し、しかも本来の免
疫賦活作用をも併せ保持していることを知見して本発明
に到達した。

すなわち本発明は、少量のＬ３，６位分岐を有しα＝１
，６　　結合を主鎖としたα−グルカンで下記の一般式
で表わされる基本骨格を有する免疫活性多糖体ＲＯＮの
硫酸化物を有効成分として含存する抗ウィルス作用と免
疫賦活作用を併せ有する組成物に関する。

ｍとｎの和は１００以下の整数を表す。）本発明に使用
する多糖体ＲＯＮは特許第１．．４０４，２０１号明細
書等に記載された方法で製造することができる。本物質
は上記一般式で表されるように少量の１．３．６位分岐
結合を有するα−１，６結合を主鎖とするα−グルカン
である。

多糖体ＲＯＮの硫酸化は常法により行えばよく、出来れ
ば反応は高温よりも低温下で行う方が好ましく、得られ
たＲＯＭ硫酸は反応中酸分解され低分子化するので、そ
のまま本発明の有効成分としても使用できるが、限外濾
過等の操作により得られる分子量１万以上ｌＯ万以下の
ｌｌ０Ｎ硫酸底分子画分を用いる方が好ましい。ＲＯＮ
物質の硫酸化により、α−Ｄ−グルコビラノース１個当
り１〜３個、好適には２〜３個の硫酸基が導入されるべ
きである。このＲＯＭ硫酸は、必要に応してナトリウム
塩など医薬として許容される塩としたり、医薬として適
当な担体、賦形剤と組合せて用いることができる。

ＲＯＭ硫酸を有効成分とする組成物は注射剤、経口剤、
生布等いずれの形態の薬剤としても投与することが可能
である。

投与量は、患者の症状３投与目的、投与方法年令等で決
められるが、通常は経口投与で１〜５００ｍｇ／　ｋｇ
が適当である。

〔実施例〕

次に、本発明を実施例により詳しく説明する。

装造例１　（ＲＯＮ硫酸ナトリウムの製造）ＲＯＮ２．
０Ｉ！、二酸化イオウ・トリメチルアミン複合体（アル
トリンチ社り５ｇおよびジメチルスルホキシド５０雁よ
りなる混合物を１２０°Ｃで２時間攪拌後、５０°Ｃに
冷却し、さらに２４時間撹拌した。室温δこ冷却後、１
０％水酸化ナトリウム溶液５０滅を加え、５ｐｅｃｔｒ
ａ／ρｏｒ２（スペクトラム　メディカル・インダス１
〜り一社製）中で流水中２昼夜逍村した。

内液を５０雁に減圧濃縮後、凍結乾燥して淡褐色粉状物
質３．１ｇを得た。この物質の理化学的性質を以下に示
す。

元素分析値［：（ＣＪＩｏＳＪ／／Ｎａｚ）ｎに対する
〕ＣＨＳ　　　　　　Ｎａ 計算値　　１９．．６７　２．２０　１７．５＋、　　
１２．５５実測イ直　　　　１９．、ＩＱ　　　　２．
１１　　　１７．６９　　　１２．７１旋光度 〔α〕町　−１−６３，３（Ｃ＝０．１５．１１゜０）
３Ｃ−Ｎ淋（２２，５旧１．） ９６．６０（Ｃ１）　、７８．７２〜７４．５０（Ｃ−
０−３ｏＪＮａ）製造例２ 製造例１で得られたＲＯＮ硫酸ナトリウム１．ｈを水２
０滅に溶解し、ｆｌｅａｋｅｒ（スペクトラム　メディ
カル・インダストリー社製）により限外２！ｌ過し、さ
らに水１０滅で２回洗浄した。濾液と洗液を合わせ、凍
結乾燥してｌｌ０Ｎ硫酸すトリウム低分子画分（分子量
１万〜１０万）　３５７　ｍｇを淡褐色粉状物質として
得た。

一方、残渣を水２０雁に溶解後、凍結乾燥してＲＯＮ硫
酸ナトリウム高分子画分（分子量１０万以上）５８２ｍ
ｇを淡褐色粉状物質として得た。

製造例３ ＲＯＮ４．ｆ）ｇをジメチルスルホ４’ｌ”　１００　
ｍｌに懸濁した後、三酸化硫黄・ピリジン複合体（アル
トリンチ社製）２５ｇを加えて、−１５°Ｃで７日間攪
拌しながら反応させた。反応液を透析ＩＦＪ　（２４Ａ
、ユニオンカーバイド社製）に入れ、５％重炭酸す［・
リウム液中で１２時間、流水中で２０間透析した後、５
０ｒｏβに濃縮して凍結乾燥し、ＲＯＮ硫酸すトリウム
の白色粉末６，３ｇを得た。

実施例１ 下記のとおりＲＯＮ硫酸ナトリウムの旧Ｖ増殖抑制効果
の有無について検討した。材料の細胞はＭｏ１ｔ−４ク
ローンＮｏ、　８を用い、ウィルスはＭｏ１ｔ４、／１
ｌＴ１．Ｖ−Ｉｌｌ産生＋ＬＪ、す＋’Ｊり。

感染細胞の変性抑制実験 ２Ｘ１０５個のＭｏ１ｔ−４細胞に６Ｘ］、０２個の旧
Ｖを感染させ、これに種々の濃度のｌ１ＯＮ硫酸ナトリ
ウム低分子画分く製造例２）をカロえて、抗生物質と１
０％胎児ウシ血清を含むＲＰＭＩｌ、６４０培養液にて
４日間培養した。次に、−ト記培養液と種々の濃度の上
記ＲＯＮ硫酸低分子画分を加えてさらに２日間培養した
。一方、対照として非感染Ｍｏ１ｔ−４細胞を同様にし
て培養した。

培養終了後、トリバンブルー排除法によりそれぞれの生
細胞数を測定し、Ｉ？ＯＮ硫酸ナトリウムの影己を調べ
た。結果を第１図に示す。Ｖ中、白色棒は＋１１１’非
惑染細胞、黒色棒は旧Ｖ感染細胞を表わしている。第１
図から明らかなように、ＲＯＮ硫酸ナトリウｊ、低分子
画分は１５．６〜２５０）ｓ　／雌の濃度においてＩＩ
ＴＶ感染細胞の変性が抑制され、増殖する。一方、ＨＩ
Ｖ非感染細胞に対するｌｌ０Ｎ硫酸す１〜リウム低分子
画分の細胞変性効果は１ｍｇ／雌で認。

められた。

実施例２ ＲＯＮ硫酸すトリウムの免疫賦活作用即ち、生体防御機
構に対する亢進作用の有無を調べるため、以下の条件に
よりマウスのカーホン粒子捕食能を指標として網内系機
能に対する作用を検討した。

被験薬物 製造例１で得たＲＯＮ硫酸すｌ−ＩＪウム１製造例２で
得たＲＯＮ硫酸す１〜リウム低分子画分、　ＲＯＮ硫酸
すトリウム高分子画分、　ＲＯＮを用いた。

供試動物 ＩＣＲマウス（ＩＡｒ、、６週令）を１週間予備飼育し
た後、７週令で実験にイバした。薬物投与時の平均体重
は３１．１．９±１．０７ｇであった。

カーボン粒子捕食能の測定 被検薬物はＰｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒ　５ａｌ
ｉｎｅ（ＰＢＳ　、　ｐＨ７，２）に溶解し、マウス復
腔内に１回（０，１ｍ＋！／１．ｏｇ体重）投与した。

薬物投与４０後にＦｏｕｎｔ　Ｉｎｄｉａ　Ｉｎｋ（ペ
リカン社製）をＰＢＳで５倍に希釈し、マウス尾静脈に
０，０８ｍ１　／　１０　ｇ体重注入した。

３０秒後と１０分後に眼窩静脈叢より毛細ガラス管で２
０ｄ採血し、１　、９８　ｍｌｌの０．１％Ｎａ２ＣＯ
，溶液に加えて溶血させた後、分光光度計（日立社製、
スペクトロツメトメ−ター　モデルＩＪ−３２００）で
６７５ｎｍ波長での吸光度を測定した。

Ｇｒａｎｕｌｏｐｅｃｔｉｃ　Ｉｎｄｅｘ（Ｋ値）は下
に示したＢｉ。

ｚｚｉ　ら（１９５３）の式で求めた。

ｌｏｇ　Ｃ，−１ｏｇ　Ｃ２１ｏｇ（ＯＤｌ−ｂ）−１
ｏｇ（ＯＤＣ２１ｏＴＩ　−Ｔｚ　　　　　　　　　Ｔ
Ｉ　　７２Ｃ：カーボン濃度　　Ｔ：採血時間（分）Ｏ
Ｄ＝吸光度（実測（ｉ）　ｂ　：　１００倍希釈標準血
液の吸光度 ＲＯＭ硫酸ナトリウム（製造例１）についての実験結果
を第１表に示す。表から明らかなように、ｌｌ０Ｎ硫酸
ナトリウムもＲＯＮ　と同様に強いカーボン粒子捕食能
を有している。

ＲＯＮ硫酸す１−リウムにも網内系亢進作用が認められ
たので、次の実験ではＲＯＭ硫酸ナトリウムの分子量の
差の影響を調べた。結果を第２表に示す。

表から明らかなように、ＲＯＭ硫酸ナトリウムとしては
低分子画分の方に強いカーボン粒子捕食能が認められた
が、高分子画分には活性の低下が観察された。

［発明の効果］ エイス治療には、ＩＩＩＶを不活性化するｌ、ｉ’ｊ　
１１１１１作用と共に、ＩＩＩＶによる免疫能の低下を
防止する免疫賦活作用の両面からの効能を有する薬剤が
求めれており、この点から本発明に用いるＲＯＮ硫酸ナ
トリウムは抗ＨＩＶ活性などの抗ウィルス作用と色情作
用を併せて保有している上、経口投与が可能で、抗血液
凝固作用も少ないので、エイズ患者の治療の他、ＩＩＴ
Ｖキャリアの発症防止用としても長期間投与することか
できる利点があり、エイズ発症予防治療薬として極めて
有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図はＭｏ１ｔ−４生細胞に対するｌｌ０Ｎ硫酸ナト
リウムの影響を示すグラフである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の一般式で表わされる基本骨格を有する免疫
   活性多糖体ＲＯＮの硫酸化物を有効成分として含有する
   抗ウィルス作用と免疫賦活作用を併せ有する組成物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、Ｇはα−Ｄ−グルコピラノースを示し、ｍと
   ｎの和は１００以下の整数を表す。）
2. （２）免疫活性多糖体ＲＯＮの硫酸化物がα−Ｄ−グル
   コピラノース１個当り１〜３個の硫酸基が導入されたも
   のである請求項１記載の組成物。