JPH02200655A - 新規物質ｕｃｔ−１００３ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、新規物質１１ｃＴ−１００３およびその製法
に関する。ｔｌｃＴ−１，００３は抗腫瘍作用を有し、
抗腫瘍剤として有用である。

従来の技術 従来、抗腫瘍抗生物質としてアンスラサイクリン系化合
物、アンスラキノン系化合物、マイトマイシン系化合物
など多くの化合物が報告されている。

［ＩＣＴ−１００３に類似した構造を有する抗癌抗生物
質としては放線菌の生産するアンスラサイクリン系化合
物であるシクラシジン、ビスアンハイドロアクラビノン
、η−ロドミシノン、η−イソロドミノ シン、η−ピロミシノンなどがあげられる。〔ジアール
シー　ハンドブック　オフ　アンタイバイオティック　
コンパウンダ、シーアールシープレス　ニーニスＩ−（
ＣＲＣＨａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
［ｏｍｐｏｕｎｄｓ、ＣＲＣｐｒｅｓｓ　Ｕ、Ｓ、Ａ、
）　１９８１）。

これら公知文献には、ＵＣＴ−１００３と同じ構造を有
するものはなく、ＵＣＴ−１００３は新規化合物である
。

発明が解決しようとする課題 既存の薬剤が効かない癌、あるいは薬剤耐性の問題など
からさらに優れた抗腫瘍作用を有する物質は常に求めら
れている。

課題を解決するだめの手段 本発明者らは、天然界より多くの微生物を人手して、そ
れらの性質を検討した。その結果、山梨県下の土壌から
採取分離した微生物（以下、５ＰＣ１３７８０株という
。）を培地に培養し、得られた培養物中から抗腫瘍活性
を有する物質が生産されることを見出した。

この物質を単離精製し、理化学的性質を調べた結果、新
規物質であることがわかり、ＵＣＴ−１００３と命名し
た。

本発明は、式 で表わされる抗菌および抗腫瘍活性を有する新規物質１
１ＣＴ−１００３およびペジロマイセス属に属し、該新
規物質生産能を有する微生物を用いて該新規物質を製造
する方法に関する。

以下に［ＩＣＴ−１００３の理化学的性質を示す。

■分子式　　Ｃｌ８Ｈ１ｏＯ７ ■分子量　　３３８ ■ＨＲ−ＢＩＭＳ　　実測値　３３８．０４２２計算値
　３３８．０４２５ ■融　点　　徐々に黒変し、３００℃まで明確な融点を
示さない。

■紫外線吸収スペクトル　　第１図に示す。

■赤外線吸収スペクトル　　（ＫＢｒ法により測定）３
４００、３２５０．２９３０．　１６１５．１６００．
１５８０１４００、１３７０．１３３０．１２’１５．
１１６０ｃｍ■’ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ
−ｃ１６）主なスペクトルδ６．４１（ＬＨ，ｂｒｓ）
、　６．４９（ＩＨ，ｄ。

Ｊ＝２．５＞、　６．７１（１ｆｌＪｒｓ）、　７．０
３（１）１．ｄ、Ｊ＝２．５）。

７．６３（Ｅ、ｓ）、　１０．４３（１８，ｂｒ）、　
１１．０１（ＩＨ，ｂｒ）。

１２、６８　（１）１．　ｂｒ） ■”ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ、　ＤＭＳＯＪｓ＞主なス
ペクトルδ　１０４．３（ｄ＞、　１０５．５（ｓ＞。

１０５．７（ｄ）、　　１０７．５（ｄ）、　　１０８
．０（ｄ）、　　１１０．０（ｓ）。

１１０．５（ｓ）、　　１２０．０（ｄ）、　　１２８
．８（ｓ）、　　１３５．６（ｓ）。

１３８．９（ｓ）、　　１６０．９（ｓ）、　　１６１
．７（ｓ）、　　１６４．２（ｓ）１６４．３（ｓ）、
　　１６８．０（ｓ）、　　１８１．３（ｓ）、　　１
８６．３（ｓ）■溶剤に対する溶解性 口ＭＳＯ、ピリジン、メタノール、エタノールおよびア
セトンには易溶。クロロホルムおよび酢酸エチルには可
溶。水およびｎ−へキサンには難溶。

［相］物質の色・形状　　濃赤紫色粉末衣にＩＩＣＴ−
１００３の生物学的活性について説明する。

（Ａ）抗菌作用 各種細菌に対する最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）を第１表
に示す。抗菌作用はバクト・トリプトン（デイフコ社製
）３ｇ／β、肉エキス３ｇ／β、酵母エキス１ｇ／ｌ、
グルコース１ｇ／Ｉ１１寒天１６ｇ／Ｉｌの組成からな
る培地（ｐＨ７）を用いて寒天希釈法で測定した。

第 表 （Ｂ）７２４細胞に対する抗腫瘍作用 ＦＩＯ培地（ＧＩＢＣＯ社製）、０゜Ｉｇ／ｍｌ牛脂児
血清、Ｉ　ＯＯ１ｌｎｉｔ／　ｍＲペニシリンおよび１
００μｇストレプトマイシンの組成からなる培地に２×
１０４細胞／ｍｌに調製したＴ２４細胞を０．１ｍｌづ
つ９６穴マイクロタイタープレートの各式に分注した。

該プレートを炭酸ガス細菌培養器内で３７℃、２０時間
培養後、これに培地へにより適宜希釈した検体０．０５
ｍｆｆずつを加え、炭酸ガス細菌培養器内で３７℃、７
２時間培養した。培養上清を除去後、残渣に培地Ａおよ
び０．０２％ニュートラルレッドの組成からなる培地を
０．１ｍｌずつ加え、３７℃で１時間炭酸ガス細菌培養
器内で培養し、細胞を染色した。培養上清を除去後、残
渣を生理食塩水で１回洗浄した。

ついで０．００１Ｎ塩酸／３０％エタノールで色素を抽
出後、マイクロプレー）　ＩＪ−グーにより５５０ｒｕ
ｎの吸光度を測定した。無処理ＮＪ胞と既知濃度の検体
で処理した細胞の吸光度を比較することにより細胞の増
殖を５０％阻害する検体濃度ＮＣ３゜）を算出した。そ
の結果を第１表に示す。

（Ｃ）ＨｅＬａＳ３細胞に対する抗腫瘍作用ＭＥＭ培地
（日永製薬社製）および２ｍＭグルタミンの組成からな
る培地で３Ｘ１０’個／ｍｌに調製したＨｅＬａ５．細
胞をＯ，１ｍｌ！ずつ９６穴マイクロタイタープレート
の各式に分注した。以下前出した。その結果を第１表に
示す。

第　　　　１　　　　表 上記（Ｂ）、　　（Ｃ）　の結果よりＵＣＴ−１００３
は癌細胞の生育を阻害することが明らかになり有効な抗
腫瘍剤となり得る。

次に［Ｉ［’Ｔ−１００３の製造法について説明する。

ＵＣＴ−１００３は、ペジロマイセス属に属し、口ＣＴ
−１００３を生産する能力を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にＵＣＴ−１００３を生成蓄積させること
により、該培養物から得ることができる。

使用する微生物としては、ペジロマイセス属に属し、［
ＩＣＴ−１００３を生産する能力を有する微生物であれ
ばいずれも用いられる。代表的菌株としては本発明者ら
が分離した５ＰＣ−１３７８０株があげられる。

５ＰＣ−１３７８０株の菌学的性質を以下に示す。

■　肉眼的観察 麦芽エキス寒天培地を用いて、２５℃で培養したとき、
集落の直径は培養７Ｓ−で２２〜２４ｍｍに達する。集
落は灰色がかった桃色あるいは肌色を呈する。

バレイショ・ブドウ糖寒天培地を用いて、２５℃で培養
したとき、集落の直径は培養１０日目方３１〜３２ｍｍ
に達する。集落は淡いライラック色あるいは灰色がかっ
た桃色を呈し、培地中に黄緑色の可溶性色素の溶出が認
められる。

本菌の至適生育温度は、１５〜３０℃で、２５℃付近で
最も良好に生育する。生育しうるｐＨは、３〜１０であ
る。

■　光学顕微鏡的観察 菌糸は隔壁を有し、平滑でよく分岐する。分生子柄は菌
糸から立ち上がり、その上部で輪生状あるいは不規則に
分枝する。各々の分枝先端にライアライドを２〜４個形
成する。ライアライドは、無色、平滑で、フラスコ形を
呈し、先端になるにしたがい細くなる。フィアランドの
長さは６．５〜１２μｍで、幅は１．５〜２．５μｍで
あり先端は細く、幅０．２〜０．４μｍである。分生子
の個体発生様式は内生出芽型である。フィアロ型分生子
は、単細胞、紡錘形あるいはレモン形を呈し、黄金色、
長さ３〜５μｍ１幅１．５〜２．５μｍで、表面は圧伏
あるいは刺状を呈する。分生子は、ライアライド先端よ
り長く連鎖状に形成される。本菌株は、上述したアナモ
ルフのみ観察され、テレオモルフは観察されない。

以上の菌学的性質から、本閑の分類学上の位置を「ザ・
ジェネラ・オフ・ファンジャイ・スポルレイティング・
イン・ピュア・カルチャー第２版（Ｔｈｅ　　Ｇｅｎｅ
ｒａ　　ｏｆ　　Ｆｕｎｇｉ　　Ｓｐｏｒｕｌａｔｉｎ
ｇ　　ｉｎ　　ＰｕｒｅＣｕ１ｔｕｒｅ、　　２ｎｄ　
ｅ＋ｊ、Ｃｒａｍｅｒ、　　Ｖａｄｕｚ、Ｊ、　　Ａ、
　　ｖｏｎＡｒｘ、　　１９７４年）」に従って検索し
た結果、本菌株は、ベジロマイセス・エスピー（ｐａｅ
ｃ　ｉ　ｌｏｍｙｃｅｓｓｐ、　）に属することが認め
られた。本発明者らは、本菌株ヲ“ペジロマイセス・エ
スピー５ＰＣ−１３７８０”と命名し、微工研条寄第２
２９に号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２２ｔ＆）として、工業技
術院微生物工業技術研究所に平成元年　１月　２４日付
で寄託した。

本発明で使用する菌の培養においては通常のカビの培養
法が一般に用いられる。培養培地としては炭素源、窒素
源、無機物などを程よく含有する培地ならばいずれの培
地も用いることができる。

炭素源としてはブドウ糖、澱粉、グリセロール、マンノ
ース、フラクトース、シュークロース、糖蜜などを単独
または組み合わせて用いることができる。さらに菌の資
化能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸なども
用いることができる。

窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素などの無機も
しくは有機の窒素含有化合物、またペプトン、肉エキス
、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、
大豆粉、カザミノ酸などの天然物含有窒素源を単独また
は組み合わせて用いることができる。無機物としては食
塩、塩化カリウム、硫酸第一鉄、硫酸亜鉛、硫酸マンガ
ン、硫酸銅、炭酸カルシウム、燐酸塩などの無機塩類を
用いることができる。そのほか必要に応じてＵＣＴ−１
００３の生産を促進する有機物や無機物、たとえばビオ
チン、ビタミンなどを適当に添加することができる。

培養法としては液体培養法でも固体培養法でもよいが、
通常は液体培養法、とくに深部攪拌培養法が用いられる
。培養温度は２０〜３５℃、特に２３〜２８℃が最適で
、培地のｐＨはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶液な
どを添加して、ｐＨ４〜１０１特に５〜７で培養をおこ
なうことが望ましい。液体培養で通常１〜７日培養をお
こなうと、目的物質が培養液中に生成蓄積する。培養液
中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、培養液
中から目的物を精製単離する。

培養液からの［ＩＣＴ−１００３の精製単離には、微生
物代謝生産物を、その培養液から単離するためにふつう
用いられる分離、精製の方法が利用される。

たとえば、まず培養生産物の培養液体と菌体とをｐ過、
遠心分離などによって分離する。菌体はクロロホルム、
アセトンなど本物質溶解性溶剤で抽出し、抽出液を減圧
下に濃縮して溶媒を除き、ついで水に溶解して水溶液と
する。前述の菌体を除去した液と菌体を処理して得られ
た液を非イオン性多孔性樹脂たとえばＨＰ’−２０（三
菱化成工業社製）などで処理して、活性成分を吸着させ
た後、メタノール、アセトンなどを用いて溶出させる。

この溶出液を濃縮し硫酸などの酸を用いてｐＨを２〜４
に調整するとＵＣＴ−１００３を含む沈殿が生じる。

沈殿として得られた［ＩＣＴ−１００３を酢酸エチル、
トルエンなどに溶解し、シリカゲルなどを用いる各種ク
ロマトグラフィーなどの処理に付して純度を高め、さら
にクロロホルム−酢酸エチルなどにより結晶化させるこ
とにより純品とすることができる。

培養、精製における［ＩＣＴ−１００３の動向は薄層ク
ロマトクラフィーなどにより追跡することができる。

すなわち、シリカゲルプレート　（メルク社製、Ａｒｔ
５７１５）　、およびｎ−ヘキサン：酢酸エチル；メタ
ノール：酢酸（５０：５０：１０：１）の展開溶媒を用
いる薄層クロマトグラフィーにおけるＵＣＴ１００３の
Ｒｆ値は０．４９である。

以下に実施例を示す。

実施例１ 種菌としてはペジロマイセス・エスピー　５ＰＣ１３７
８０（微工研条寄第　２２ｒ１号）を用いた。

該菌株の１白金耳を３００ｍ１容量の三角フラスコ中の
下記組成の種培地５０ｍｆ！に植菌し、２５℃で４８時
間振盪培養した。

種培地組成：ペプトン５０ｇ／β、グリコース１０ｇ／
矛、乾燥酵母（エビオス＞５ｇ／ＣＶ８野菜ジュース（
日本キャンベル社製）２００ｍｌ、Ｍｇ５（ＰＯ＜）２
　・８Ｈ２００，５ｇ／ｊ２゜（ｐＨ６，０） 種培養液を３０Ａ容量の培養槽中の下記組成の発酵培地
ＩＥ［に５％（容量）の割合で移し、２５℃で通気攪拌
方式（回転数３５０　ｒ、ｐ、ｍ、通気量１８　ｆｆｌ
／ｍｉｎ＞により培養を行った。

発酵培地組成：シュークロース５０ｇ／β、乾燥酵母１
５ｇ／ｊ！、ＫＨ２ＰＯ１０，５ｇ／ｊｌ！、Ｍ　ｇ　
Ｓ　Ｏ＋　　・７Ｉ−１２００，５ｇ／Ｉ！、　Ｍｇ、
＜ＰＯ，＞２・８８２０　０．５ｇ／ｊ！、（ｐＨ７，
０にＮ　ａ　ＯＨで調整）。

培養中、培地のｐＨは制御しないで９０時間培養した。

培養終了後、メタノール１５１を加えて３０分間攪拌し
た。

菌体を戸別し、ｐ液３０Ａを得た。得られたＰ液を２１
の非イオン性多孔性樹脂ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱
化成社製）に通塔して活性物質を吸着させた。水５Ｉ１
５０％メタノール溶液５１で不純物を溶出後、メタノー
ル５Ｉｌで活性物質を溶出させた。

メタノール溶出画分を濃縮し、硫酸を用いてｐＨを３に
調整すると沈殿物が得られた。得られた沈殿物をエタノ
ール：水（８：　２＞からなる混合溶液７００ｍ１に溶
解後、ＤＥＡＥセファロース（ＣＨ３ＣＯＯ−型）カラ
ムに通塔し活性物質を吸着させた。その後エタノール：
水（８：　２）からなる混合溶液に徐々に０〜ＩＭの酢
酸アンモニウム緩衝液を含むエタノール：水（８：２）
からなる混合溶液を加えてグラジェント溶出をおこなっ
た。

活性画分を濃縮し、２０ｍ１のエタノール溶液とした後
、セファデックスＬ　Ｈ２０カラムに通塔した。

その後、２ｍＭの酢酸アンモニウムを含むエタノール：
水（８：２）からなる溶液で溶出した。得られた活性画
分を濃縮後、酢酸エチルで抽出した。

酢酸エチル層を濃縮、乾燥すると［ＩＣ’ｌ’１００３
の赤色粉末２８＋ｎｇが得られた。

実施例２ 実施例１に用いた発酵培地組成を次のものに代えておこ
なう以外は実施例１と同様におこなった。

その結果、ＩＪｃＴ（００３は１２ｍｇ得られた。

発酵培地組成：グリセロール５０　ｇ／Ｃ乾燥酵母１５
ｇ／Ｌ　ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ／Ｉｌ、Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ
＜・７Ｈ２００，５ｇ／Ｒ，Ｍｇ５（ＰＯｓ＞２・８Ｈ
２００，５ｇ／ｊ！、（ｐＨ７，０にＮ　ａ　ＯＨで調
整）。

発明の効果 本発明により抗菌作用および抗腫瘍作用を有する新規物
質ＵＣＴ−−１００３を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＵＣＴ−１００３の紫外線吸収スペクトルを示
す。なお、図中の実線は中性、点線は塩基性、破線は酸
性溶液中での紫外線吸収スペクトルを示す。 手続補正書（自発） 平成　元年　６月ｉ厘日

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる新規物質ＵＣＴ−１００３。
2. （２）ペジロマイセス属に属し、ＵＣＴ−１００３を生
   産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に
   ＵＣＴ−１００３を生成蓄積させ、該培養物からＵＣＴ
   −１００３を採取することを特徴とするＵＣＴ−１００
   ３の製造法。