JPH02192A - 新規合成基質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、細菌内毒素の検出測定法に用いることができ
る新規合成基質に関する。

カブトガ＝　（Ｈｏｒｓｅｓｈｏｅ　ｃｒａｂ）の血球
抽出液（アメボサイト・ライセード）が微量の細菌内毒
素と反応してゲル化する現象をもとに細菌内毒素の微量
検出法が開発され、すでに医学、薬学および環境衛生学
の分野で使用されている。

本発明は、先に本出願人が開示した「細菌内毒素の検出
測定法」　（特願昭５２−７０３３５号、特開昭５４−
１５７９７号）の発明の原理に基づき、当該発明の臨床
診断領域での実用化を目的とした改良法に使用しつる新
規合成基質に係る。

すなわち、先に開示した測定法の原理は、カブトガニの
アメボサイト・ライセードもしくはその中に含まれる酵
素前駆体（アミダーゼ前駆体）成分が、細菌内毒素を含
む検体と接触した場合、酵素前駆体が、内毒素により直
ちに化学量論的に活性化され、一定の化学構造を有する
合成基質を特異的に切断することを利用し、切断されて
遊離生成する残基を吸光光度法にて検出するものであっ
た。

ところで、この方法を用いて細菌内毒素を検出測定する
場合、検体の性質、性状に対応して、検出測定対象とな
る遊離生成残基の種類を適宜取捨進択しなければならな
い。

近年、エンドトキシン（細菌内毒素）の臨床病理面の研
究がさかんになり、従来から定着している感染巣の明ら
かな疾患に由来する外因性エンドトキシン血症及びエン
ドトキシンショックの病態杷握等を目的として、主とし
て外科領域に於てリムラス・アメボサイト・ライセード
・テストが利用されてきた。一方、内科領域においては
、肝障害に及ぼす腸管内ダラム陰性細菌内毒素の影響や
肝の細菌内毒素解毒排泄機能等の網内系処理機能の低下
と言った内因性の内毒素血症が問題となっており、血液
凝固線溶系、キニン系、循環系及び免疫反応系に於て臨
床的に内毒素を検出測定することが必須となって来てい
る。

このような臨床診断を目的として、上記細菌内毒素の測
定法を適用する場合、検体試料として患者体液特に血液
、腹水、尿、膵液、脳を髄液、胆汁等を用いる。しかし
、これら体液は、体液本来の着色を有していたり、疾病
に起因する色素（例えば、黄痕系濃黄色、溶血による赤
色等）を含むことがあり、これら色素の妨害により吸光
光度法による検出定量がしばしば困難となる。また、体
液中には、蛍光性を有する物質が多種存在しているため
１合成基質の測定用残基として蛍光性物質を選択しても
測定の妨害はさけられない。

本発明者らは、上述のごとく前記細菌内毒素の検出測定
法の適用が困難であった臨床診断用途にも適応可能な新
規合成基質の検索を鋭意検討した結果、前記難点を解決
し本発明に到達した。

すなわち、本発明の目的は、体液自体あるいは臨床症状
に対応して生ずる検体中の色素の光吸収に妨害されない
光吸収領域をもつ測定残基を生ずる新規合成基質を提供
することにあり、本発明の新規合成基質を用いることに
より臨床診断においてもより正確に細菌内毒素の検出測
定を行うことができる。

本発明は、一般式： （式中、Ｒ１は、Ｌ−アミノ酸残基又はＬ−アミノ酸が
ら成るペプチド残基であって、Ｎ末端に保護基を有する
残基を表わす、）で示される新規合成基質に関するもの
である。

本発明の新規合成基質を細菌内毒素の検出測定に用いる
には、本発明の新規合成基質とカブトガニのアメボサイ
ト・ライセード及び該ライセードより分離された酵素前
駆体成分から選ばれる１種又は２種以上とを細菌内毒素
を含む検体に接触させることにより生成したｐ−ＩＮ、
　Ｎ−ジエチルアミノ）アニリンを、ｌ−ナフトール−
２−スルホン酸と酸化カップリングさせることにより生
ずる縮合物を吸光光度法により検出定量すれば良く、か
がる測定法は、特に体液等臨床診断用途に好適である。

アメボサイト・クーＣセードは、カブトガニ血リンパ液
中に含まれるアメボサイトを、低張液で処理することに
より得ることができ、ＬＡＬ−Ｔｅｓｔ（リムルス・ア
メボサイト・ライセード・テスト）用の市販品を購入し
ても良い８例えば、プレゲル（帝国臓器）、パイロスタ
ット（ＷｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ、　ｃｏ
ｒｐ、ＵｓＡｌ　、パイロテスト（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂ
。

口ＳＡ）、パイロテスト（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ、
　Ｉｎｃ、　ＵＳＡＩ等の商品名のアメボサイト・ライ
セードが知られている。

酵素前駆体成分の分離は、アメボサイト・ライセードを
カラムクロマトグラフィー、電気泳動法、エレクトロフ
ォー力ッシング、アフィニティクロマトグラフィー等に
より、精製分離して得ることができる。

これらアメボサイト・ライセードもしくは該ライセード
より分離される酵素前駆体が細菌内毒素により活性化を
受は活性化酵素となり１式（Ｉ）で示されるペプチド性
化合物である本発明の合成基質に特異的に作用する０式
中、Ｒ１は、例えば次に示す構造を有するものが挙げら
れる。

すなわち、　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅ
ｕ−、Ｂｏｃ−３ｅｒ−。

Ｂｏｃ−Ｖａｌ−５ｅｒ−、Ｂｚ−Ｌｅｕ−、Ｈｚ−Ｖ
ａｌ−Ｌｅｕ−、Ｂｚ−Ｓｅｒ−。

Ｂｚ−Ｖａｌ−３ｅｒ−、（式中、Ｂｏｃはｔｅｒｔ−
ブトキシカルボニル基、Ｂｚ−はベンゾイル基を表わす
）等であ式（１）で表わされる合成基質はいずれも新規
物質であり、ｐ−（Ｎ、　Ｎ−ジエチルアミノ）アニリ
ンがＲ＋　−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−で示されるペプチド性残
基中のＡｒｇのＣ末端とアニリド結合により連結したも
のであるが、前記活性化酵素の作用を受けて、このアニ
リド結合が容易に酵素化学的に水解されてｐ−（Ｎ、　
Ｎ−ジエチルアミノ）アニリン（以下ＤＥＡＡと略記す
る）を遊離する。遊離したＤＥＡＡは５１０ｎｍと５５
０ｎｍの可視部に弱い吸収を有し、淡い桃色を呈するが
、体液の色調に妨害されるため、吸光分析の対象として
は好ましくない。

ＤＥＡＡはカップラーとしてｌ−ナフトール−２−スル
ホン酸を共存する系で酸化縮合させれば次式を主反応と
する縮合生成物の濃青色色調を呈す。

この縮合物は６７５ｎｍに最大吸収を有するので吸光光
度法により検出定量を行うことが出来る。また体液等に
は同類色調の吸収が無いので、細菌内毒素の存在を何ら
妨害されることなく、明瞭に検出測定出来る。

本発明の式（Ｉ）で示されるペプチド性新規基質を用い
ることにより、臨床検査に供される試料としての体液中
の細菌内毒素を、体液本来の色調や疾病の症状に応じた
黄痘系１黄色、溶血による赤色等の妨害色調を回避し本
来体液には無い青色系色調乃至これに対応する光吸収を
利用して測定するため、正確に細菌内毒素を検出測定出
来る。

以下調製例および実施例、試験例、比較例により本発明
をより具体的に説明する。

調製例１ アメボサイト・ライセードの調製 特公昭５１−４０１３１号に準じ日本産カブトガニＴａ
ｃｈｙｐｌｅｕｓ　ｔｒｉｄｅｎｔａｔｕｓ　（体重約
２ｋｇ程度）から厳重に汚染を避けて、約１０ロー程度
の血リンパ液を採取する。遠心分離によりアメボサイト
を分離し、３％塩化ナトリウム溶液で洗浄しアメボサイ
ト・ペレットを得る。このアメボサイト・ペレットに緩
衝液ｆｔ、ｒｉｓ−Ｈ（Ｊｌ、　０．０５Ｍ：ＣａＣ１
，、０，００１１１：ＮａＣ，１，０，１５Ｍ：　ｐＨ
７，２）を原血リンパ液のｌ／１０容加え、滅菌したホ
モジナイザーでよく撹拌し、凍結融解し、その後５００
０ｒｐｍで１５分間遠心して、上清を得た。これをアメ
ボサイト・ライセードＴａｃｈｙｐｌｅｕｓ　（以下Ａ
ＬＴと略称する）とする、このＡＬＴをヤングらの方法
［Ｎ、　Ｓ、　Ｙｏｕｎｇら；　Ｊ、Ｃ１１ｎＩｎｖｅ
ｓｔ、、　５１１７９０　ｆ１９７２１］に準じ５ｅｐ
ｈａｄｅｘＧ−５０（ファルマシア・ファインケミカル
社の商品名）を用いてゲル濾過を行い、アミグーゼ前駆
物質を含む分画（Ｆｒａｃｔｉｏｎ−１）　　（以下Ａ
ＬＴ−Ｆ＋と略称する。）を得た。

調製例２ 北米産カブトガニ　リムラス・ポリフェムス（Ｉ、ｉｍ
ｕｌｕｓ　ｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓｌの血リンパ液を調製
例１と同様に処理し、アメボサイト・ライセード・リム
ラスｆＡｍｏｅｂｏｃｙｔｅ　１−ｙｓａｔｅ　Ｌｉｍ
ｕｌｕｓ　：以下ＡＬＬと略称する）を得た。

実施例１ 本発明に用いる一般式（Ｉ） る。）で示される新規ペプチド性基質の調製方法につい
て述べ、各種新規基質の物性を表１に示す。

１　）　Ｈ−Ａｒｇ　（ＮＯｉｌ　−ＤＥＡＡＢｏｃ−
Ａｒｇ　（ＮＯａ１−ＯＨとｐ−（Ｎ、　Ｎ−ジエチル
アミノ）アニリンとを、水溶性カルボジイミド（ＷＳＣ
）にて脱水縮合して、Ｂｏｃ−Ａｒｇ　（ＮＯａ）−Ｄ
ＥＡＡを得る。この化合物のｔｅｒｔ−ブチルオキシカ
ルボニル基（Ｂｏｃ−１をＨＣＩ／Ａｃ０Ｅｔ　（Ａｃ
はアセチル基を、Ｅｔはエチル基を表わし、本明細書に
おいては以下同様に表わす）系で水解し、Ｈ−Ａｒｇ（
ＮＯｔｌ−ＤＥＡＡ　・＝　（１）を得る。

２　）　ＢｏＣ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＨＢｏｃ−Ｌｅｕ
−ＯＨとグリシンエチルエステルとを水溶性カルボジイ
ミドにて脱水縮合して、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＥ
ｔを得る。この化合物をＮａＯＨアルカリにてエステル
氷解を行い、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＨを得る。

３　）　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＤＥＡＡＢ
ｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＨとＨ−Ａｒｇ　（ＮＯｘ）
−ＤＥＡＡをブタノール中、水溶性カルボジイミドの存
在下脱水縮合を行い、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
　ｆＮＯｔｌ−ＤＥＡＡを得る。この化合物のパラジウ
ム触媒還元にて、−ＮＯ，基を切断しＩｌｏｃ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＤＥＡＡを得る。元素分析の結果（
ｆ）を下に示す、計算値（ｃ）は、　Ｃ＊ＪｓｏＯｓＮ
ａ　・Ａｃ０１ｉＨｔＯとして求めた。

４　）　　Ｂｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＨＢｚ−Ｌｅｕ−
ＯＨとＨ−Ｇｕｙ−ＯＥｔとをブタノール中、水溶性カ
ルボジイミドにより脱水縮合し、Ｂｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−ＯＥｔを得る。この化合物をＮａＯＨアルカリ性にて
エステル水解し、Ｂｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＨを得る。

５　）　Ｂｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＤＥＡＡＢｚ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−０１（とＨ−Ａｒｇ　（ＮＯｔｌ−
ＤＥＡＡとをブタノール中、水溶性カルボジイミドで脱
水縮合し、Ｂｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ　（ＮＯｚｌ
−ＤＥＡＡを得る。この化合物をパラジウム触媒還元に
より、−Ｎｏ２基を切断しＢｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ−ＤＥＡＡを得る０元素分析の結果（ｆ）を下に示す
、なお計算値（ｃ）は、Ｃ，、Ｈ４，０４Ｎ、−ＡｃＯ
Ｈ−ＨｉＯとして求めた。

６　）Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＨＢｏａ−
Ｖａｌ−ＯＨとＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＥｔとをブタノ
ール中、水溶性カルボジイミドで脱水縮合し、Ｂｏｃ−
Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＥｔを得る。この化合物を
ＮａＯＨアルカリ水解し、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｙ−ＯＨを得る。

７　）　　Ｂｏａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
ロＥＡＡＢｏａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＨとＨ−
Ａｒｇ　（ＮＯ２１−ＤＥＡＡとをブタノール中、水溶
性カルボジイミドで脱水縮合し、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ　１ＮＯｚ）−ＤＥＡＡを得る。こ
の化合物をパラジウム触媒還元により、−ＮＯ□基を切
断しＢｏｃ−Ｖａｔ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＤＥＡ
Ａを得る０元素分析の結果（ｆ）を下に示す。計算値（
ｃ）は、Ｃ５Ｊｓ、０ｓｌｔｅ’ＡＣ（１）Ｉ’Ｈ２０
として求めた。

８　）　ロｚ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＤＥ
ＡＡＢｚ−Ｖａｌ−ＯＨとＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ
を脱水縮合し、得られるＢｚ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−ＯＥｔをアルカリ水解し、次いでＨ−Ａｒｇ　（ＮＯ
ｆｆｉｌ−ＤＥＡＡと脱水縮合し、還元的に−Ｎ０２基
を切断し、Ｂｚ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｄ
ＥＡＡを得る。元素分析の結果（ｆ）を下に示す。なお
計算値（ｃ）は、Ｃ５ａＨｓｓＯｓＮ＊・ＡｃＯ旧１（
２０として求めた。

９　）　　Ｂｏｃ−５ｅｒ（Ｏ口ｚｌ　−Ｇｌｙ−０１
（Ｂｏｃ−３ｅｒ　ｆＯＢｚｌ−ＯＨとグリシンエチル
エステルとを脱水縮合し、Ｂｏｃ−３ｅｒ　（ＯＢｚ）
−Ｇｌｙ−ＯＥｔを得る。この化合物をアルカリ水解し
、ＢｏＣ−３ｅｒ　（ＯＢｚｌ　−Ｇｌｙ−ＯＨを得る
。

１０　）　Ｂｚ−３ｅｒ（ＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−ＯＨＢｚ
−３ｅｒ　（ＯＢｚｌ−ＯＨとグリシンエチルエステル
とを脱水縮合し、Ｂｚ−３ｅｒ　（ＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−
０εｔを得る。この化合物をアルカリ水解し、　Ｂｚ−
３ｅｒ　（ＯＢｚｌ　−Ｇｌｙ−ＯＨを得る。

１１　）　Ｂｏｃ−Ｖａｌ−３ｅｒ（ＯＢｚ）−Ｇｌｙ
−ＯＨＢｏｃ−５ｅｒ　（ＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−ＯＥｔを
酢酸エチル中、１ＩＣＩにてＢｏＣ基を脱離し、次いで
Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨと脱水縮合し、口ｏｃ−Ｖａｌ−
３ｅｒ　（ＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−ＯＥｔとする。この化合
物をＭｅＯＨ中、ＮａＯＨアルカリケン化し、Ｂｏｃ−
Ｖａｌ−３ｅｒ　（ＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−ＯＲを得る。

１２　）　Ｂｚ−Ｖａｌ−３ｅｒｌＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−
ＯＨＢｏｃ−５ｅｔ　（ＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−ＯＥｔを酢
酸エチル溶媒中、ＨＣＩにて水解し、Ｈ−３ｅｒ　ｆＯ
Ｂｚｌ−Ｇｌｙ−ＯＥｔを得る。この化合物とＢｚ−Ｖ
ａｌ−ＯＨとをブタノール・クロロホルム中、ＷＳＣに
て脱水縮合し、Ｂｚ−Ｖａｌ−３ｅｒ　（ＯＢｚｌ　−
Ｇｌｙ−ＯＥｔとし、ＭｅＯＨ中ＮａＯＨ氷解し、　Ｂ
ｚ−Ｖａｌ−３ｅｔｆＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−ＯＨを得る。

１３　）　　Ｂｏａ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−ＤＥＡＡＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ　（ＯＢｚｌ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨとＨ−Ａｒｇ　（Ｎｏｗ）　−ＤＥＡＡとをジ
メチルホルムアミド・ブタノール系溶媒中、ＷＳＣにて
脱水縮合し、ＢｏＣ−Ｖａｌ−３ｅｒ　（ＯＢｚｌ　−
Ｇｌｙ−Ａｒｇ　（Ｎｏ、）−ＤＥＡＡを得る。この化
合物を、パラジウム触媒下還元して−ＮＯ□基及び−Ｏ
Ｂｚ基を切断して、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−
Ａｒｇ−ＤＥＡＡを得る０元素分析の結果（ｆ）を下に
示す、なお計算値（Ｃ）は、Ｃｚ　＋　１１１１３０７
Ｎ９　・Ａｃ０ｔｌ’ｌ（ｇｏとして求めた。

１４　）　　Ｂｚ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
ＤＥＡＡＨｚ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ　（ＯＢｚｌ−Ｇｌｙ−
０■とＨ−Ａｒｇ　ｆＮＯｚｌ　−ＤＥＡＡ　　とをＤ
ＭＦ−＋１０Ｂｔ溶媒でＷＳＣにて脱水縮合し、　Ｂｚ
−ＶａｌＳｅｒ　ｆＯＢｚ）　−Ｇｌｙ−Ａｒｇ　（Ｎ
Ｏ２１−ＤＥＡＡを得る。この化合物をパラジウム触媒
下還元して、−Ｎ０２基及び−０Ｂｚ基を切断して、　
Ｂｚ−Ｖａｌ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＤＥＡＡを得
る。

元素分析の結果（ｆ）を下に示す、なお計算値（ｃ）は
、Ｃｓ５Ｈ＜ＪＪｓ４ＣＯＨ％’ＨＪとして求めた。

試験例１ 調製１９＋１１にて得られた日本産カブトガニ（Ｔａｃ
ｂｙｐｌｅｕｓ　ｔｒｉｄｅｎｔａｔｕｓｌライセード
、ＡＬＴ−Ｆ、にＭ、Ｎｉｗａらの方法ｆＪａｐａｎ、
　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｓｃｉ、　Ｂｉｏｌ、　２６゜２０
、１９７３）に準じて調製したサルモネラミネソタＲ５
９５の内毒素を作用させて生じたアミダーゼ様活性化酵
素を、実施例１で得た新規合成基質に作用させ、各基質
に対する内毒素活性化酵素の氷解速度を求めた。これら
の値を表２に示す。

各種基質は、０．２Ｍ　ｔｒｉｓ−１１ｃ：１　ｐＨ８
，０，０，００５ＭＣａ（：ｌ−含の２．５ｍＭ溶液も
調製して用いた。氷解速度は、基質溶液０．２−を３７
℃で２．５分間予備加温したのち、２０＃＋７の酵素液
を加え３０分後に基質より遊離するｐ−（Ｎ、　Ｎ−ジ
エチルアミノ）アニリン量を、■試薬０．６ｍＭ　ｌ−
ナフトール−２−スルホン酸ナトリウム塩、００５Ｍホ
ウ酸ナトリウムーＮａＯＨ緩衝液ｐ新液ＩＯ，Ｏｌｄ、
■試薬０．２％Ｎａｌ０．０．０５Ｍホウ酸緩衝液ｐＨ
８，６２−を用いて６７５ｎｍに於ける吸光度を測定し
、酵素たんば（吸光度（Ａ２．。）当りの氷解速度を算
出した。

表２ 試験例２　比較例１ 調製例２で得られた北米産カブトガニ（Ｌｉｍｕｌｕｓ
ｐｏｌｙｐｈｅｎ＋ｕｓｌのアメボサイト・ライセード
（ＡＬＬ）を用いて、患者血漿中のエンドトキシンの検
出を行なった。

０．２Ｍ？−リスー０．０２Ｍ　ＣａＣ１ｚ、ｐＨ８０
，１−にＡＬＬ２０μを加え、次いで濃度既知エンドト
キシンの生理食塩水溶液ｆＯ，ｌ−０，５ｎｇ／ｍｉ’
）　２０ｕ、基質として０．４ｍＭ　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＤＥＡＡ　Ｏ，１−を加え、３７℃に
３０分インキュベートしたのち、０．６Ｍ　　１−ナフ
トール−２−スルホン酸カリウム−（１，０５Ｍホウ酸
ｐ１（８，６１ｍｌと　ロ、２％過ヨウ素酸−０，０５
Ｍ　Ｂｏｒａｔｅ　ｐｌ（８，６２１Ｒ１を加えて、３
０分間の反応後、　６７５ｎｍにおける吸光度を測定す
ることによって、図１に示す検量線が得られた。

次に、同上の操作のうち、１度既知エンドトキシンの代
りに患者血漿を検液として加えて吸光度を測定し、検量
線により血漿中のエンドトキシン量を算出した。結果を
表３に示す。

比較例として、基質Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
ＤＥＡＡの代りにＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐ
ＮＡを用いて、同様の操作を行なったものを図２及び表
３に示した。

なお、血漿中には、アメボサイト・ライセード中のアミ
ダーゼ前駆物質の酵素活性を阻害する因子が存在するこ
とは周知のとおりで、阻害因子を除去する手段も種々考
案されているが、本例においては、血漿を３倍希釈した
のち、　１００℃に１０分間加熱することによって、阻
害因子を除去したものを用いた（Ｌａｎｃｅｔ、ランセ
ット、６月７日号１２７２頁１９７５年）。

表３においてみられるように、疾病によりあるいは、症
状によって、血漿の色は淡黄から淡黄まで差があり、こ
れをＰＮＡ基質ではかるときはブランク値が高くなり、
したがってサンプルの吸光度の読みも高くなり、そのた
めに比色計の読みの誤差が大きくなって好ましくない。

しかし、ＤＥＡＡ基質を用いれば、いかなる血漿でもブ
ランクは無視しつる程度にまで一様に小さくなり、検出
精度が上がることは明らかで、この点において、ＤＥＡ
Ａ基質の効果は顕著に示されている。

【図面の簡単な説明】

図１はエンドトキシン濃度に対する吸光度の検量線を示
す図で、図２はｐＮＡ残基を有する基質を用いた場合の
検量線を示す図である。 図１ エンドトキシン濃度（ｎｇ／ｍｊｌ ニンドトキシン濃度 （ｎｇ／ｍ１）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１は、Ｌ−アミノ酸残基又はＬ−アミノ酸
   から成るペプチド残基であって、Ｎ末端に保護基を有す
   る残基を表わす。）で示される新規合成基質。