JPH0213371A - ハイブリドーマ細胞系、モノクローナル抗体およびそのキメラ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ハイブリドーマ細胞の新規な系統およびそれ
から誘導され、活性化Ｔ細胞、インターロイキン−２受
容体に対する抗原を認識し、かつインターロイキン−２
に依存する増殖を阻害するモノクローナル抗体に関する
。

本発明は、また、治療および診断の目的でこのモノクロ
ーナル抗体を使用することに関する。

（従来の技術） 本来Ｔ細胞成長因子と呼ばれたインターロイキン−２（
ＴＣＧＦ：Ｌ、＾、Ａａｒｄｅｎ、Ｊ、ＩＩ１ｍｕｎｏ
１．１２３［１９７９］、２９２８）は、細胞の応答の
必須仲介体の１つである。

インターロイキン−２によって伝達される免疫応答は、
高い親和性の細胞表面受容体とのその相互作用から生ず
る。このインターロイキン−２受容体は２つの非共有結
合した従属単位：軽い成分（Ｍｒ＝５５ＫＤａ、　ｔａ
ｃ抗原）および重い成分（Ｍｒ−７５ＫＤａ）から成る
。軽い成分および重い成分の両者はインターロイキン−
２との結合の親和性を示す（軽い成分についてＫＤ”　
１０−８Ｍおよび重い成分についてＫＤ””　１０−９
Ｍ　）ことが立証された（Ｋ、Ａ、Ｓｍ１ｔｈ、Ｉｍｎ
＋ｕｎｏｌｏｇｙ　Ｔｄａｙ　９　［１９８８］。

３６）。両者の従属単位は１．１Ｇ−”　Ｈの結合定数
をもつ高い親和性のインターロイキン−２受容体を構成
する。

それより、より小さい従属単位またはより長い鎖との相
互作用によって、受容体へのインク−ロイキン−２の親
和性を抑制する、特異的物質は、インターロイキン−２
のその受容体への結合を阻害するために必要である。既
知の方法（Ｃ，旧１ｓｔｅｉｎ　＆　Ｇ、に６ｈｌｅｒ
、Ｎａｔｕｒｅ　２５８［１９７５コ、４９５）によっ
て調製できるモノクローナル抗体は、この目的に適当で
あることが証明された。このようにして得られたモノク
ローナル抗体は、インターロイキン−２受容体分子の特
異的エピトープを認識する。軽鎖上の３つのエピトープ
はこれまでに同定された（Ｔ、Ｄｌａｎ＋ａｎｔｓｔｅ
ｉｎ、　Ｂｅｈｒｉｎｇ　Ｉｎ５ｔ、旧ｔｔ、　８１　
［１９８７］、７３）。

ウチャマら（Ｊ、１ｍ５ｕｎｏ１．１２Ｂ　［１９８１
］、１３９８）は、ｔａｃ抗原（エピトープ）、インタ
ーロイキン−２受容体上の短鎖を認識する最初のモノク
ローナル抗体を記載している。

欧州特許出願第０２４１８１１号は、前述の方法によっ
て、また、得られる２つのモノクローナル抗体を記載し
ている。それらは活性化されたＴ細胞およびＢ細胞と特
異的に反応するが、休止のリンパ球に対して不活性であ
る。これらのモノクローナル抗体の一方、および抗ｔａ
Ｃ類似体は、ｔａＣ抗原、受容体分子の短鎖と相互作用
する。他方のモノクローナル抗体は、また、受容体のよ
り小さい従属単位と明らかに相互作用する。しかしなが
ら、それはｔａｃエピトープと異なる決定基を認識する
。それはインターロイキン−２依存性の増殖を阻害する
ばかりでなく、かつまたインターロイキン−２受容体へ
のインターロイキン−２の結合を阻害する。しかしなが
ら、このモノクローナル抗体の有効性は、臨床実験にお
いて、まだ立証されてきていない。

欧州特許出願第０２４０３４４号は、抗ＣＤ−４モノク
ローナル抗体および抗ｔａｃ類似体（ＣＤ２５＞に関す
る。免疫抑制に関するその活性および移植組織の拒絶の
防止に関する特異性は、マウスおよびラットについて試
験した。

しかしながら、その結果をヒトにおけるインターロイキ
ン−２依存性反応に転化することは不可能である。なぜ
なら、前述のモノクローナル抗体種はマウスインターロ
イキン−２受容体に対してのみ特異的かつ有効であり、
臨床的有効性を提示しないことを意味するからである。

Ｊ、Ｐ、’／ウリロウ（Ｓｏｕ　Ｉ　Ｉ　Ｉ　Ｉ　ｏｕ
）ら（Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ。

８／１３／８７．１３３９）は、腎移植拒絶の防除にお
いて、ヒトインターロイキン−２受容体に対するモノク
ローナル抗体の活性を記載している。このモノクローナ
ル抗体、３３Ｂ３１と呼ぶ、の相互作用の機構は知られ
ていない。さらに、比較的高い投与量が必要であり、そ
して有意な副作用（熱、不適合性、および抗体の形成）
は、異質タンパク質の量のために、しばしば起こる。

（発明が解決しようとする課題） したがって、本発明の目的は、ヒト免疫欠損におけるす
べてのインターロイキン−２依存の段階を阻害、抑圧ま
たは抑制するために、したがって異質物質として認識し
た組織の慢性の耐性を獲得するために適当であるモノク
ローナル抗体を提供することである。モノクローナル抗
体は、非常に弱い副作用が処置の間または後に起こるか
、あるいはまったく起こらないような、低い投与量で予
防的にかつ治療的に有効であるべきである。

（課題を解決するための手段並びに発明の効果）この目
的は、本発明に従い、Ｃ，マイルスティン（旧１ｓｔｅ
ｉｎ）およびＧ、ケラ−（Ｋ６ｈｌｅｒ）によって開発
された既知の方法に従って、ヒトインターロイキン−２
受容体に対する　ＩｇＧｔクラスのネズミモノクローナ
ル抗体を産生ずるハイブリドーマ細胞の系統よって調製
することによって達成される。この細胞系［ザ・フレン
チ・ナショナル・コレクション・オブ・マイクロオーガ
ニズム・カルチャーズ（ｔｈｅ　Ｆｒｅｎｃｈ　Ｎａｔ
ｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｌｏｎ　ｏｆ’　ＭＩｃｒ
ｏｏｒｇａｎｌｓｏ＋　Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＮＣＭ）
に受託番号！−７５２で受託されている］から、ネズミ
免疫グロブリンのクラススイッチバージョン＆Ｓ％例え
ばＩｇ（＋ｚ−と　ＩｇＧ２ｂ、Ｉｇ（ｉｉとＩｇＭ、
および他の免疫グロブリンのクラスを分類することがで
きる。

本発明によるモノクローナル抗体（以後Ｂ、Ｂ。

ＩＯと呼ぶ）は、ヒトＴ細胞上のインターロイキン−２
受容体へのインターロイキン−２の結合と対抗し、そし
て活性Ｔ細胞のインターロイキン−２誘発増殖を阻害す
る。これは、また、ヒト混合リンパ球反応の阻害を伴う
。また、モノクローナル抗体はｔａＣでないインターロ
イキン−２受容体のエピトープと結合することが立証さ
れた。したがって、このタンパク質は、全体として、超
免疫症候群、移植片対宿主の病気、および宿主対移植片
の病気のような病気の処置および予防に、骨髄、腎、心
臓、肺、膵臓、皮膚、肝臓などを移植するために、Ｔ細
胞依存性アレルギーおよび自己免疫の病気（心筋炎、糖
尿病、重傷無筋力症、エリテマトーテス、クローン病、
多発性硬化症、エイズ、脳を椎炎、関節炎など）のため
に、およびＴ細胞白血病のよようなインターロイキン−
２受容体発現腫瘍の病気のために適当である。

モノクローナル抗体は、そのままで、磁性ビーズ、放射
性物質または製剤と結合して、あるいはリポソーム中に
カプセル化して使用できる。

Ｂ、Ｂ、ｌＯモノクローナル抗体は、また、細胞の表面
上のあるいは体液中のヒトインターロイキン−２受容体
を検出するための診断試薬として適当である。本発明に
よるモノクローナル抗体は、インターロイキン−２受容
体を発現する細胞を同定するために使用できる。このよ
うな用途において、モノクローナル抗体は、好ましくは
、蛍光性物質または着色物質に、あるいは放射性物質に
結合するか、あるいはネズミ免疫グロブリンに対して特
異的な他の標識抗体を使用する。

また、他のインターロイキン−２受容体と組み合せて、
ＥＬＩＳＡまたはラジオイムノアッセイを開発して、体
液中の遊離および溶解したインターロイキン−２受容体
をｎｌ定することが可能である。

本発明によるモノクローナル抗体は、また、ヒト由来（
ヒト免疫グロブリン）の一定成分およびネズミ由来の可
変およびことに超可変の成分をもつキメラを産生ずるた
めに適当である。

キメラは、そのままで、あるいは磁性ビーズ、放射性物
質または製剤と結合して、あるいはリポソーム中にカプ
セル化して、ヒトにおけるインターロイキン−２依存性
の病気に対する処置または予防に、使用できる。

（実施例） 次の実施例を参照して本発明を説明する。

ヒト抹消血液リンパ球（ＰＢＬ）からのＴ細胞を、ヒツ
ジ赤血球ロゼッティングによって分離し、そしてインキ
ュベーター（５％のＣＯ２，９５％の湿度）内で培地（
ＲＰ１１６４０１０％の胎児仔ウシ血清［Ｆｅ２：Ｏブ
ト１２８０フ５、製造Ｆ　Ｉ　ｏｗｌおよびｌｈｇ／ｍ
１のフィトヘマグリチニン［ＰＨＡ］　）中で３７℃に
おいて４日間インキュベーションした。

このようにして培養した細胞を、以後、ヒトインターロ
イキン−２受容体ｉ（以後ＰＨＡ／ＰＢＬと呼ぶ）とし
て使用した。

よびモノクローナル抗体Ｂ、Ｂ、ｌＯの収穫酸ノＢＡＬ
Ｂ／ａマウスを２週の間隔で３回５Ｘ１０６のＰＨＡ／
ＰＢＬで腹腔内免疫化した。第３回目の免疫化は静脈内
であった。肺臓細胞を４日後に取り出し、そしてここで
説明するように融合した。

免疫化肺臓細胞をＡＧ　Ｈ５３マウス骨髄腫細胞と５：
１の比でポリエチレングリコールの存在下に融合した（
Ｋｅａｒｎｅｙら、Ｊ、１ｍｍｕｎｏｌ　、１２３　［
１９７８］、１５４８）。融合した細胞の懸濁液を選択
培地（ＲＰＭｌ　１８４０１０％の熱不活性化ウマ血清
、４ミリモルのグルタミン、ＨＡＴ：ハイポキサンチン
　１３゜ＢＩＩＩｇ／ｍｌ、アミノプテリン０．１７１
１ｇ／Ｊ２、および１０／ｍｌのインスリン）中で培養
した。融合から１０日後に、ハイブリドーマの増殖を示
した残留物を、ＰＩＩＡ／ＰＢＬおよびＰＢＬ（５０μ
ｌの１％のウシ血清タンパク質／　ＰＢＳ中の３Ｘ１０
’　）を１０ｕｌｆ）試験残留物または対照モノクロー
ナル抗体とともにインキュベーションすることによって
、抗インターロイキンー２受容体モノクローナル抗体産
生について試験した。この実施例および次の実施例にお
ける対照モノクローナル抗体は、抗ｔａＣ類似体モノク
ローナル抗体ＢＦ２およびＢＧ８（ＣＲＴＳ　５Ｂｅｓ
ａｎｃｏｎ）であった。結合したモノクローナル抗体は
、サイトフルオロメーター（Ｏｒｔｈｏ　５０Ｈ％　０
ｒｔｈｏ製）によりＦＩＴＣ標識抗マウス抗体で検出し
た。１１８７の試験した残留物のうちで、８つは休止の
Ｔ細胞へ結合しないで、活性化Ｔ細胞への有意の結合を
示した。

制限希釈法（播種密度０．２細胞／培養）を使用する４
クローニング工程に引き続いて、Ｂ、Ｂ。

ｌＯクローンを分離した。

Ｂ、Ｂ、ＩＯは、カッパ軽鎖をもつネズミ　ＩｇＧＩモ
ノクローナル抗体であり、そして活性化Ｔ細胞への有意
な結合を示した。

抗インターロイキンー２受容体モノクローナル抗体Ｂ、
Ｂ、１０を、生体内で大きい体積で、ＢＡＬＢ／Ｃマウ
スにＢ、Ｂ、１０ハイブリドーマ細胞を腹腔的注射する
ことによって産生された。ハイブリドーマ細胞の注射１
週前に、マウスを、ｌ−Ｏｍｌのブリスチンで腹腔内に
ブライミングした。ハイブリドーマ細胞の注射後８〜１
４日に、腹水を得ることができた。

次いで、モノクローナル抗体を腹水から硫酸アンモニウ
ム（４５％の飽和）で沈澱させ、０．０２ミリモルのト
リス、ｐＨ７，７で緩衝化し、そしてＱ−セファロース
カラム上に結合させた。モノクローナル抗体をこのカラ
ム上で０．０２ミリモルのトリスｐｌ＋−７．７中の１
％のトウイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０で洗浄し、モしてカ
ラムから０．３５モルのＮａＣ１（ｐＨ＝７．７）で溶
離した。

治療の目的で、モノクローナル抗体をＰＢＳ　緩衝液（
リン酸塩緩衝生理的塩類溶液）で再緩衝化した。

る阻害 ＰＨＡ活性化Ｔ細胞（５ＸＩＯ’　／培養）をＲＰ旧１
６４０１０％の胎児子ウシ血清中で２４時間培養した。

最初に、表１および２に示した量のインターロイキン−
２（ＩＬ−２：Ｌｙｍｐｈｏｃｕｌｔ−Ｔ”　、Ｂｉｏ
ｔｅｓｔ）、Ｂ、Ｂ、１０、対照のモノクローナル抗体
ＢＰ　２およびＢＧ　８、およびＨ３−チミジンを培地
に添加した。

ＤＮＡの合成は、標準の液体シンチレーションで放射能
を測定することによって、Ｈ３−チミジンの組み込みに
よって決定した。

表１および２ａは結果を要約する。

表　　１ Ｂ、８．１０　８Ｆ　２３Ｇ　８ ｔｏ　　３４ＺＭ±１４ｊ４１ｕｌｊ！　１４；Ｉ　４
６１Ｚ！　１００ｃｐ＋ｍ−崩壊７分、２回の測定平均
±標準偏差ｎ、ｎ−決定せず υ口板の国際参照（ｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌ　１ｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｒｅｆ’ｅｒｅｎｃｅ）によるイ
ンターロイキン−２への相対生物学的活性（Ｄ、Ｃ，Ｄ
ｕａ＋ｏｎｄｅ　＆　Ｂ、Ｗ、Ｐａｐｅｒｍａｓｔｅｒ
、　Ｌｙ＊ｐｈｏｋｉｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　３［１９
８４］、２２７）。

表　　２ａ 明らかなように、■３−チミジンの組み込みおよびそれ
ゆえＤＮＡ合成は、対照抗体で処置した細胞におけるよ
り、Ｂ、８．１０で処置した細胞培養物においてかなり
低かった。したがって、Ｂ。

Ｂ、１０抗体は、活性化ヒ）Ｔ芽細胞のＰＨＡ誘発増殖
を阻害した。

実施例４ｂ、活性化Ｔ細胞のインターロイキンる阻害 次いで、Ｂ、８．１０のｆ’ａｂ断片の活性を、前の実
施例におけるように、活性化Ｔ細胞のインターロイキン
−２誘発増殖の阻害に関して、完全なり、８．１０分子
と比較して試験した。ヤギ抗マウス血清（ＣＡＭ）の作
用をまた研究した。結果を下記表２ｂに要約する。前の
実施例におけるように、Ｈ３−チミジンの組み込みを、
培地の各試料に２単位のインターロイキン−２を添加し
て、異なる濃度の阻害剤［ｊｔ／カップ（ｃｕｐ）　］
において決定した（ｃｐｓ）。

明らかなように、阻害は全Ｂ、Ｂ、ｌＯを使用したとき
とちょうど同じように、ｆ’ａｂ断片を使用して成功し
、これはＢ、Ｂ、ｌＯモノクローナル抗体がインターロ
イキン−２受容体に一重結合で結合することを意味する
。したがって、そのｔａｂ断片は、そのより小さい大き
さがよりすぐれた拡散の挙動を保証し、それゆえなおよ
り大きい有効性を保証することができるかぎり、また、
臨床的処置のために使用できる。

３人の異なる供与体（供与体１．２および３）からの５
ＸＩＯ’のＰＨＡ／Ｔ細胞／カップを、最初に、２単位
のインターロイキン−２／カツプとともに３７℃におい
て４時間インキュベーションした。

細胞を含まない、表２０に記載する量のＢ、Ｂ、ｌＯを
、洗浄した。１８時間後、Ｈ’−チミジンの組み込みを
、前の実施例におけるように決定した（ｃｐｓ）。結果
を下記表２０に示す。

表　　２０ 明らかなように、Ｂ、８．１０はまた低い濃度で阻害す
る。これが意味するように、インターロイキン−２は３
７℃において２〜３分で内在化するので、細胞が活性化
された後でさえ、Ｂ、８．１０は増殖を阻害する。

実施例５ａ、混合リンパ球反応の阻害 １０’／ｍｌの抹消血液リンパ球（ＰＢＬ）を１０５／
ｍ１の照射した（　３５００ラド）異型ＦＢＩ、ととも
に５日間間時培養した。対照シンジエネイックリンパ球
反応であった。適当な濃度のモノクローナル抗体を第０
日および第４日に添加した。培養物を採取１８時間前に
Ｈ３−チミジンで標識した。

ＤＮＡ中の組み込みを実施例４におけるように測定した
。

Ｂ、Ｂ、ＩＯの使用量および関連する放射能を表３ａに
示す。

表　　３ａ 異　　型　　　　　　　０３４９±１８５　　９１２±
１５２明らかなように、モノクローナル抗体Ｂ、Ｂ、ｌ
Ｏは低い濃度においてさえ混合リンパ球反応を効果的に
阻害する。

活性化Ｔ細胞への次のモノクローナル抗体の有効性を、
実施例５ａにおけるように第０日および第４日に試験し
た。対照のモノクローナル抗体はｔａｃ類似体であった
。

Ｂ−Ｆ２：ＣＲＴＳ／Ｂｅ５ａｎｃｏｎ　（フランス）
３３Ｂ３−１：１ｎｓｅｒｕｓ　Ｕ　１１０、Ｍａｒｓ
ｅｉｌｌｅ（フランス）ＴＯ６９：ＢＩｏｔｅｓｔ　５
Ｄｒｅｌｅ１ｃｈ　（ドイツ）、およびＴＢ　３０：Ｃ
ＬＢ　５ＡＩＳｔｅｒｄａｌ　　（オランダ）。

結果を下記表３ｂに記載する。

表　　３ｂ これらの結果が立証するように、既知の抗ｔａＣ類似体
ＮＰ−２，３３Ｂ３．１％ＴＯ６９、およびＴＢ　３０
は、モノクローナル抗体を第４日まで添加しないとき、
Ｂ、Ｂ、ｌＯにおけるように低い投与量で増殖を阻害し
ない。

実施例６、スカッチャード分析二親相性定数の決定 ３０μｇの抗体精製したモノクローナル抗体を、１７０
μｌのＰＢＳ中のＮａ１２’　Ｉ（１ａ＋ＣＩ）ととも
にインキュベーションした。０．４　ｍｇ／　ｍｌのク
ロマチンＴを添加し、そして反応を１０μｍの重亜硫酸
ナトリウムの添加により１分で停止した。

標識したモノクローナル抗体を遊離ヨウ素からクロマト
グラフィーにより分離した［セファデックス（Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ）Ｇ−２５］　ｏその比放射能は２５０００ｄ
ｐｍ／ｎｇのタンパク質であった。

次いで、２．５Ｘ１０６抹消Ｐ）ＩＡ活性化ヒトＴ細胞
を、５ｍｌのＲＰＭｌ　１８４０５％のウシ血清タンパ
ク質中の種々の濃度の１２５１標識Ｂ、８．１０ととも
にインキュベーションした。

非特異的結合を防止するために、標識しないＢ、８．１
０モノクロ一ナル抗体を５００倍過剰で添加した。４℃
において３時間後、細胞をＲＰ旧１８４０１％のウシ血
清タンパク質で３回洗浄し、そして結合した放射能をＬ
ＫＢ　Ｗａｌｌａｃ（１２８０ＭｕＨ１ｇａｍＩＩａカ
ウンター）で測定した。

親和性定数を結果から決定した。

親和性定数、Ｋｄ：　ＩＸＩＯ−９Ｍ ＰＨＡ活性化ヒトＴ細胞（２，５Ｘ　１０６）を１　ｍ
ｌのＲＰＭｌ　１６４０１％中で４℃において３時間イ
ンキュベーションし、そしてインターロイキン−２を添
加した。

対照群は、インターロイキン−２を添加しない、前述の
培養物から成っていた。

次いで、１２５Ｉ標識Ｂ、Ｂ、１０を添加した。１時間
インキュベーションした後、細胞を洗浄し、そして結合
した放射能を実施例６におけるように測定した。

結果を表４に要約する。

表　　４ したがって、明らかなように、モノクローナル抗体を駆
逐するために非常に低いレベルのインターロイキン−２
を必要としく放射能レベルを減少し）、インターロイキ
ン−２に関するＢ。

１３．１０の高い特異性を確証する。

璽、モノクローナル抗体Ｂ、Ｂ、ｌＯの初期の臨床的実
験 移植片対宿主の病気（ＧｖＨ）および移植組織の拒絶（
ＨｖＧ）を処置することは、組織適合性および組織不適
合性の骨髄の移植の主要な問題である。

ポリクローナル動物抗リンパ球血清、供与体Ｔ細胞の骨
髄からの消耗、化学療法、または抗Ｔモノクローナル抗
体による、移植片対宿主病気を防止するより最近の方法
は、多くの場合において、強い副作用および移植組織の
拒絶に導いた。

モノクローナル抗体は生体内の移植組織に対する免疫応
答に影響を及ぼすために使用できる。

移植片対宿主の病気および移植組織拒絶反応を処置する
ためのモノクローナル抗体Ｂ、Ｂ、ＩＯの使用は、驚く
べきことには、適当であることが発見された。

これにより、抗リンパ球血清およびシクロスポリンＡの
ような免疫抑制剤、あるいはコルチコステロイド、アゾ
チオプリンおよびメトトレキセートのような化学物質（
これらは感染に対する感受性のような重大な副作用にし
ばしば導くことがある）を使用して、この臨床像をもつ
患者の補助的処置を減少するか、あるいは完全に排除し
て、細胞の免疫応答を抑制することは可能である。

次の臨床的突発事故に関連して、０．１〜２０ｍｇ。

好ましくは２．５〜５　ｍｇのモノクローナル抗体Ｂ。

Ｂ、　１０を患者に静脈内注入の形態で１日３０分間投
与した。投与量を選択して、患者において０．５〜５μ
Ｈ／ｍｌの血漿レベルを達成した。

インターロイキン−２依存性症候が止むまで、処置を３
〜３０日間、好ましくは７〜ＩＯ日間続けた。その期間
を越える処置は、驚くべきことには、不成功であること
が分った。

実施例８ 表５に記載する量のモノクローナル抗体Ｂ、Ｂ。

１０（ヒトタンパク質中で稀釈した）を、表５に記載す
る時間において、４人の患者、年令４．１１、２３およ
び４０才、の群に投与し、それらのうちで３人は移植片
対宿主の病気を有した。

患者、年令１．１１才、は、処置前に胃腸の機能不全を
伴う第３度の移植片対宿主の病気を有した。患者２およ
び３は第２度の移植片対宿主の病気を有した。患者４は
、組織不適合性骨髄が移植されており、そして胃損傷の
ためにシクロスポリンＡで処置することができず、移植
直後に、モノクローナル抗体Ｂ、Ｂ、ｌＯで予防的に処
置した。

表５は処方量および処置の長さを示す。

表　　５ ｎ、ｄ、−決定せず 結　　果 驚くべきことには、患者１〜３における移植片対宿主の
病気の急性症候は、モノクローナル抗体の処置の開始後
、最初の３日の間に止んだ。

患者１はちょうど２４日でそれ以上の症候は示さなかっ
た。症候の完全な不存在下に、処置は患者２において１
５日で、そして患者３は１４日で停止することが可能で
あった。予防的に処置した患者４は、処置を一旦中止し
たとき（１０日）、移植組織の拒絶の症候を発現しなか
った。

予測されなかったが、患者のいずれも処置に対して不利
になる副作用もたなかった。

実施例９ ３人の患者（５〜７）、年令５．７、および１２才、を
、骨髄の移植後、モノクローナル抗体Ｂ、８．１０で処
置して移植組織の拒絶を抑制した。

組織適合性の骨髄の移植はこれらの患者のうちの２人に
ついて実施し、そしてハブロイドの骨髄の移植を第３番
目の患者について実施した。

かれらの年令のために、モノクローナル抗体Ｂ。

Ｂ、ｌＯの投与量はわずかに２．５ｍｇ／日であった。

表６は投与量および処置の期間を示す。

表　　６ 結　　果 拒絶反応は、ハブロイド骨髄移植組織を受けた、患者５
において急速に抑制され、そして移植組織は受容された
。

表６は拒絶反応を示さなかった。移植組織は免疫系によ
って許容された。

自己由来の移植組織を受けた患者７において、移植組織
は取ったことが観察されなかった。

初期の緊急の臨床的応用およびモノクローナル抗体Ｂ、
Ｂ、１０の親和性および生物学的活性の試験の結果は、
本発明によるモノクローナル抗体を、移植組織の拒絶、
移植片対宿主の病気、および／または宿主対移植片の病
気のための予防および処置の両者について効果的に使用
でき、そしてすべての他の治療法より明確にすぐれてい
ることを示す。

モノクローナル抗体による前述の処置と対照的に、副作
用は起こらなかった。モノクローナル抗体は前に使用し
た量より低い濃度で使用できる（参照、Ｊ、Ｐ、ソウリ
ロウ（Ｓｏｕｌｌｌｌｏｕ）、ＴｈｅＬａｎｃｅｔ　１
３　［Ｊｕｎｅ　１３．１９１＋７１．ｔ３３９）　ｏ
　したがって、治療指数は相応して高い。緊急の適応へ
のその制限のために、これまで物質の臨床的効能を決定
することは不可能であったが、有効な投与量はこれまで
観察された量よりなお低くすることができる。

患者は全体として少ない異質タンパク質にさらされたの
で、インターロイキン−２抗体に対する抗体の形成の可
能性は、この物質の効能に影響を及ぼさないで、かなり
低い。

重度の副作用に関連する他の薬物による同時の処置は、
必要であることが分った。

実施例１Ｏ モノクローナル抗体Ｂ、８．１０の有効性は、また、骨
髄の移植に引き続いて高い第２度の急性移植片対宿主の
病気に悩まされかつコルチコイドによる処置に対して無
反応性である、２日人の患者に試験した。５ａ＋ｇ／日
の１３．８．ＩＯを患者の各々に１０日間投与した。処
置の間、副作用は観察されなかった。

この研究の結果は次のように要約される。

陽性応答 ２６人のうちで１８人（６９，２％）、それらのうちで
１２人は第２度の移植片対宿主の病気および６人は第３
度の移植片対宿主の病気をもっていた。

部分的応答 ２６人のうちで５人（１９，２％）、それらのうちで１
人は第２度の移植片対宿主の病気、２人は第３度の移植
片対宿主の病気をもち、そして２人は第４度の移植片対
宿主の病気をもっていた。

応答なし ２６人のうちで３人（１１，５％）、それらのうちで２
人は第３度の移植片対宿主の病気をもち、そして１人は
第４度の移植片対宿主の病気をもっていた。

移植片対宿主の病気の出現と処置の開始と間の期間は極
端に重要であることが発見された。

陽性反応のために、この期間は平均１３．７日であり、
そしてそれは陰性の応答の場合において平均７０日であ
った。

第１図〜第４図は、処置の期間の関数として４人の患者
のＢ、Ｂ、ｌＯのレベル（血清レベル）を示す。明らか
なように、Ｂ、Ｂ、ｌＯのレベルは全体の時間にわたっ
て一定（Ｂ、８．１０の循環）に止まり、これは他のモ
ノクローナル抗体について真実でない。

本発明の実施の態様は次の通りである。

■、ヒトにおけるインターロイキン−２依存性の病気の
処置、予防および診断のための請求項４〜６のいずれか
に記載のモノクローナル抗体の使用。

２、ことにヒトにおける骨髄の移植に関する、移植組織
の拒絶およびことに宿主対移植片および移植片対宿主の
病気を処置するための請求項４〜６項のいずれかに記載
のモノクローナル抗体の使用。

【図面の簡単な説明】

第１図乃至第４図は本発明モノクローナル抗体の血清レ
ベルに関する特性線図である。 特許出願人　サンドル　レジイオナル　トドランスフジ
イオン　サンギャン　。 代　　理　　人　　　北　　　村　　　欣　　　−外３
名・　。 第１図 第２図 閏焔　　　　　　　　　　　　　　　　　　処１の冬冬
９第３図 第４図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトインターロイキン−２受容体を認識し、そして
   ヒトインターロイキン−２のその受容体への結合を阻害
   および／または駆逐するモノクロナールネズミＩｇＧ＿
   １抗体を産生することを特徴とするハイブリドーマ細胞
   系。 ２、ＣＮＣＭ受託番号１−７５２を有する上記第１項記
   載のハイブリドーマ細胞系。 ３、それから分離することができ、そして抗体の主要ク
   ラスＩｇＧ＿２＿ａ、ＩｇＧ＿２＿ｂ、ＩｇＧ＿３、Ｉ
   ｇＭ、および他のクラスを産生する変異体によって特徴
   づけられる上記第１または２項記載のハイブリドーマ細
   胞系。 ４、上記第１または２項記載の細胞系から得ることがで
   き、そして該インターロイキン−２受容体を発現するヒ
   ト細胞との特異的相互作用によって特徴づけられるクラ
   スＩｇＧ＿１のモノクローナル抗体。 ５、該インターロイキン−２受容体の５５ＫＤａおよび
   ／または７５ＫＤａの従属単位との特異的相互作用によ
   って特徴づけられる上記第４項記載のモノクローナル抗
   体。 ６、一定成分はヒト免疫グロブリンから成り、そして可
   変およびことに超可変の成分はネズミ免疫グロブリンか
   ら成ることを特徴とする上記第４または５項記載のモノ
   クローナル抗体のキメラ。