JPH02242695A - ヒトＩＬ―２受容体β鎖に対するモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 し産業上の利用分野］ この発明は、インターロイキン２（ＩＬ−２）受容体β
鎖（ｐ７５）に対するモノクローナル抗体に関するもの
である。

［発明の背景］ Ｔ細胞は、通常休止期の状態にあるが、Ｔ細胞抗原受容
体を介して抗原刺激を受けると、数時間以内にＴ細胞増
殖因子であるＩＬ−２の産生を開始するとともに、その
細胞表面に［Ｌ−２受容体を発現し、！Ｌ−２に反応し
て増殖する。ＩＬ２受容体としては、分子１１５５００
０のいわゆるＴａｃ抗原（ｐ５５　Ｔａｃ、　β鎖とも
いう）と分子型７５０００の蛋白（ｐ７５、β鎖ともい
う）が報告され、これらはともに単独でＩＬ−２に結合
できるが、ＩＬ−２のシグナル伝達においてはβ鎖か本
質的に重要な役割を果す。

［従来の技術および発明が解決しようとする課庶］α鎖
については、既にそれに対する抗体が得られているが、
β鎖は発現量が少ないのでまだそれに対するモノクロー
ナル抗体が得られていなかった。そのため、β鎖の発現
性の分布、作用等の研究の進歩が抑制されていた。

［課題を解決するための手段］ この発明者は、β鎖のみを発現している既知細胞株から
β鎖の発現能が高い細胞株の樹立に成功し、これを用い
て動物を免疫し、その抗体産生細胞を永久増殖性を有す
る細胞と融合させて抗体産生ハイブリドーマを得、その
産生ずる抗体を分離することにより、効率的にモノクロ
ーナル抗体を得ることに成功したのである。

［発明の構成］ すなわち、この発明は、 （１）インターロイキン２受容体β鎖の抗原決定基に対
して特異性を有するモノクローナル抗体、（２）β鎖を
発現する細胞株ＹＴＳで免疫した哺乳類（ひとを除く）
の抗体産生細胞と永久増殖性を有する細胞との融合によ
るハイブリドーマが産生ずるものであるモノクローナル
抗体、および（３）上記ハイブリドーマ を提供するものである。

以下、上記の発明の詳細な説明する。

（細胞株の樹立） β鎖は通常細胞表面に数千サイト／細胞しか発現されな
い。そこで、β鎖のみを発現している既存の樹立細胞株
から選別して、高発現能の細胞株を樹立する。選別には
、ビオチン化ＩＬ−２とアビジン・フルオレスセインイ
ソチオシアナート・コンジュゲートによる染色のような
受容体に特異的に結合する染色剤を用い、染色の強い細
胞を選択する。例えば、この発明で得られた細胞株ＹＴ
Ｓは約２万サイト／細胞のβ鎖を発現する。

（免疫） 免疫は、例えば次のように行なう。細胞を、牛胎児血清
（１０％ｖ／ｖ）、ペニシリン（ｌＯＯＵ／ｍ１）、ス
トレプトマイシン（１００μｇ／ｌ）を含むＲＰＭＩ−
１６４０培地（以下増殖培地と呼ぶ）の様な適当な培地
中で培養し、細胞が培養フラスコに一面に広がるまで増
殖後、上清を除去し、カルシウム及びマグネシウム不含
のりん酸緩衝液（ｐＨ７，２、以下ＰＢＳと呼ぶ）を加
えて洗い、ＰＢＳを細胞面にピペットで吹きつけること
により細胞を培養フラスコから剥がし取る。また別法と
して、トリプシンなどの蛋白分解酵素により細胞を剥が
し取ることができる。

遠心分離等の分離手段により細胞を集め、マウス、ラッ
ト等の哺乳類動物に免疫する。哺乳類動物は、細胞融合
する際の相手の永久増殖性細胞と同系統の動物の方が望
ましい。動物の退動は、例えばマウスでは５〜ｌＯ週齢
がよい。性は雌雄どちらでらよい。免疫に用いる細胞の
数は、例えばマウスの場合１匹あたりｌＸｌ０”〜１ｘ
ｉｏ’個か好ましい。細胞は、例えばＰＢＳに懸濁させ
るか、またはフロイントコンプリートアジュバントとｌ
：ｌの比で混合しエマルジジンにして動物の腹腔内、静
脈内、皮下等に投与するのが好ましい。

この免疫操作を１〜３週間隔で１〜５回行なう。

最終免疫は、例えば細胞をＰＢＳに懸濁させ、動物の静
脈内あるいは腹腔内に投与して行なう。このようにして
免疫した動物の体液または抗体産生細胞からは、ポリク
ローナル抗体が得られる。

（細胞融合） 上記のようにして細胞で免疫した動物から抗体産生細胞
をとり出す。抗体産生細胞は、膵臓、リンパ節、末梢血
等から得られるが、膵臓が好ましい。例えば、膵臓を最
終免疫の２〜５日後に無菌的に摘出し、ダルベツコ−Ｍ
ＥＭ培地中ではさみによって細切し膵臓細胞を浮遊させ
た後、遠心分離することにより膵臓細胞を集めて用いる
。

融合の相手の永久増殖性細胞としては、永久増殖性を有
する任意の細胞を用いることができるが、繁用されるの
は骨髄腫細胞である。永久増殖性細胞は抗体産生細胞と
同種の動物由来のらのが好ましい。例えばマウスの場合
、Ｐ３−ＮＳ−１−１系の細胞が用いられる。また、永
久増殖性細胞としては、８−アザグアニン耐性細胞株、
ヒボキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラ
ーゼ欠損細胞株のような、選別の際のマーカーとなり得
る特性を有するものが好ましい。これらの細胞は、例え
ばアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ
）から入手可能である。融合に際しては、これらの永久
増殖性細胞のいずれかを増殖培地中で培養し、融合の前
に例えばダルベツコ−ＭＥＭ培地で洗浄後遠心分離によ
り集める。

融合は、例えば次のように行なう。抗体産生細胞（例え
ば膵臓細胞）と永久増殖性細胞（例えば骨髄腫細胞）を
混合し、３７℃１ご保ちつつポリエチレングリコール等
の融合促進剤を徐々に加えて細胞融合を起させる。培養
液を加えることにより融合促進剤を希釈して融合を停止
させ、遠心分離により細胞を分離する。

（選別） 次に、例えば細胞をヒボキサンチン・アミノプテリン・
チミジン（ＨＡＴ）培地中に懸濁させ、マイクロテスト
プレートに分注し、３７℃、Ｃ０ｔ５％、湿度９５％の
ＣＯｔインキュベータ中で培養する。培養液は２目間隔
で半量ずつ新しいＨＡＴ培地と交換する。約１週間培養
後、交換する培地を増殖培地にヒボキサンチン及びチミ
ジンを添加したＨ　’ｒ培地に変える。

（スクリーニング） 次に、ＨＴ培地中で数日間培養し、ハイブリドーマのコ
ロニーがマイクロテストプレートのウェル中で広がって
きた時点でどのウェルのハイブリドーマがβ鎖に対する
モノクローナル抗体を産生じているかをスクリーニング
する。スクリーニングは、例えば次のように行なう。ハ
イブリドーマが増殖して来ているウェルの培養上清カ月
Ｌ−２受容体のβ鎖に対する結合を阻止するかどうかま
たはＩＬ−２とβ鎖の結合物を免疫沈降させ得るかどう
かで調べる。

（クローニング） 次に、例えば限界希釈法や軟寒天法等の公知の技術を用
いて、β鎖と反応するモノクローナル抗体を産生じてい
るハイブリドーマをクローニングして単一のモノクロー
ナル抗体を産生ずるハイブリドーマの集団を選択する。

クローニング及びスクリーニングは２回以上繰り返すこ
とが望ましい。

（モノクローナル抗体の製造） 上記のようにして得られたハイブリドーマをインビトロ
（培＃器具内または栄養培地中）及びインビボ（生体内
または動物組織中）で培養することによりモノクローナ
ル抗体を産生させる。培養は、例えば次のように行なう
。インビトロでの培養では、増殖培地の様な適当な培地
を用い、例えばＣＯ，インキュベータ中でハイブリドー
マを培養する。ハイブリドーマが増殖限度まで増殖した
時点で培養液を採取し、遠心分離のような固体分離手段
でハイブリドーマと培養上清を分離する。培養上清中の
モノクローナル抗体は目的によっては精製せずに用いる
ことも可能であるが、分離する場合には例えば硫酸アン
モニウムで塩近し、りん酸緩衝液で透析後、カラム等に
通して精製する。

培地上清から分離したハイブリドーマは、例えば１０％
ジメチルスルホキシド及び９０％牛脂児血清中に約２Ｘ
１０’個／１０＋＋＋１の細胞密度で懸濁させ、適当な
アンプルに入れて徐々に一８０℃以下に凍結させること
により、生きたままの状態で長期保存することが可能で
ある。

ハイブリドーマをインビボで培養する場合には、任意の
動物にハイブリドーマを移植するが、細胞融合に用いた
牌臓細胞を採取した動物と同種のものを使用するのが好
ましい。例えばＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスの場合に
は、１匹あたり２ｘｌＯ”個の７１イブリドーマを腹腔
内に注射する。！〜２週間後にマウスの腹腔内にモノク
ローナル抗体を高濃度に含んだ腹水が貯留し腹部が肥大
してくるので、腹水を採取し培地上清の場合と同様に精
製する。

（抗体の精製） ハイブリドーマの培養上清を、適宜予備精製した後、吸
着剤等の分離剤を充填したカラムに通して精製する。カ
ラムとしては、例えばプロティンＡ・セファロース０Ｌ
４Ｂを充填したものを用いる。上清をｐＨ約８．６に調
整し、上記カラムに通す。カラムをトリス緩衝生理食塩
水のような洗浄液で洗い、ｐＨを例えば７，０．５，５
．４，３．２゜３のように順次低下させて抗体を溶出さ
せる。抗体をピーク毎に集め、適当な緩衝液で透析する
。

（抗体の特性） 抗体の分子量は、例えば電気泳動法により測定すること
ができる。

抗体の免疫グロブリン（Ｉ　ｇ）クラスおよびサブクラ
スの決定は、抗免疫グロブリンクラス・サブクラス抗体
を用いた標識（例えば酵素）免疫測定法によって行なう
ことができる。

抗体の特異性は、α鎖またはβ鎖を発現する細胞に対す
る反応性および免疫沈降されるＹＴＳ細胞上の抗原の分
析により確認することができる。

［実施例］ 以下、この発明を実施例によりさらに詳細に説明する。

実施例！ （イ）細胞株 ＩＬ−２レセプターβ鎖の高発現株であるＹＴＳ細胞株
を、β鎖のみを発現するひとナチュラルキラー（ＮＫ）
様細胞株ＹＴＵ１４（京都大学医学部、淀井および多賀
谷博士から供与）の細胞選別により樹立した。ＹＴＵＩ
４細胞をビオチン化■Ｌ−２およびフルオレスセインイ
ソチオシアナート（ＦＩＴＣ’）コンジュゲート化アビ
ジンで染色し、強染細胞の上位５％をフルオレイセイン
活性化セルソーター（ＥＰＩＣＳ−Ｃ８１クールター）
により選別した。１！５Ｉ標識！Ｌ−２結合アッセイで
試験したところ、ＹＴＳ細胞は約２００００結合部位／
細胞を発現したか、これは元のＹＴＵ　Ｉ　４細胞の２
倍であった（Ｋｄ＝１．８ｎＭ）。Ｋｉｔ２２５細胞株
は、慢性Ｔリンパ球白血病患者由来の！Ｌ−２依存性Ｔ
細胞株である。

（ロ）ＩＬ−２結合アッセイ 種々の細胞株に対する…Ｉ標識ＩＬ−２結合アッセイは
文献記載の方法で行なった。ひと組換え体ＩＬ−２（武
田薬品工業株式会社）はエンザイ・モビード（Ｅ　ｎｚ
ｙａ＋ｏｂｅａｄ）で放射性よう素標識し、その特異活
性は４００００−７００００ｃｐｍ／ｎ９であった。

（ハ）モノクローナル抗体の産生 ＢＡＬＢ／ｃマウスを、１　ｘ　１０’ＹＴＳ細胞によ
る１−２週間隔の腹腔的注射で免疫した。４回目のブー
スター注射後の３日月に、ひ臓細胞をＰＡｌマウス骨髄
腫細胞とポリエチレングリコール４０００（メルク）を
用いて融合させた。１２日後、ハイブリドーマの上清を
２つの方法、すなわち…■標識ＩＬ−２結合阻害アッセ
イおよびβ鎖放射能標識ＩＬ−２コンプレックス免疫沈
降法により、抗β鎖の存否について試験した。前者のア
ツセイテハ、５０μ（浮ａｍの１ｘｌＯ”ＹＴＳ細胞を
５０μＱのハイブリドーマ上清と３０分間インキュベー
ションし、２５μａの５ｎＭ”Ｊ標識ＩＬ−２を加え、
１時間インキュベートした。ついで、細胞に結合した放
射能を文献記載の方法で分離し、ガンマカウンターで計
数した。後者のアッセイでは、まずβ鎖放射能標識！Ｌ
−２コンプレックスを作製した。低親和性条件（５ｎＭ
”’１標識ｆＬ−２）下でＹＴＳ細胞を２ｍＭ　　ジサ
クシニミジルスベラート（ピアス）により架橋し、溶解
緩衝液（１０膳ＭトリスＨＣｌ２、ｐＨ７，４，０，１
５ＭＮａＣＱ、１％ＮＰ−４０，２ｍＭフェニルメチル
スルホニルフルオリド）を用いて３ｘｔｏ’細胞／１１
（ｌで可溶化した。ｉウェル当り５０μＱの上清を６ウ
エルづつプールし、１００μｍ２（１００００ｃｐｓ）
のＹＴＳ溶解物とインキュベートし、免疫複合体を１０
μｇの家兎抗マウスＩｇＧ（キャベル）で被覆したプロ
ティンＡ・セファロース（ファルマシア）により沈降さ
せた。ビーズを溶解緩衝液で洗浄後、結合した放射能を
計数した。抗β鎖モノクローナル抗体（Ｍｉｋ−β１１
β２およびβ３）を産生ずるハイブリドーマ細胞株を得
、限界希釈により２回クローン化し、腹水中で培養し、
抗体をプロティンＡ・セファロース・クロマトグラフィ
ーにより精製した。上記ノモクローナル抗体Ｍｉｋ−β
１１β２およびβ３を産生するハイブリドーマをそれぞ
れマウスハイブリドーマβｌ、β２およびβ３と命名し
、微生物工業技術研究所に寄託して、受託番号それぞれ
微工研菌寄第１０４５３号、同第１０４５４号および同
第１０４５５号を得た。

（ニ）免疫沈降および電気泳動 ＹＴＳ細胞を、グルコースオキシダーゼ・ラクトペルオ
キシダーゼ法で放射性よう素標識した。

架橋実験では、高親和性（１００ｐＭ’″５Ｉ標識■Ｌ
−２）または低親和性（５ｎＭ”Ｊ標識ＩＬ−２）結合
条件を用いる以外は、文献記載の条件にしたがった。細
胞を溶解緩衝液で抽出し、抗体およびプロティンＡ・セ
ファロースで免疫沈降した。Ｍｉｋ−β３（ＩｇＧ１）
の場合、家兎抗マウスＩｇＧ（キャベル）を第２抗体に
用いた。連続免疫沈降法では、ＹＴＳ抽出物をＭｉｋβ
１またはβ３で５回吸収した後、それぞれＭｉｋ−β３
またはβｌで免疫沈降した。免疫沈降物を５％２−メル
カブトエタノール（２−ＭＥ）の存在下で煮沸し、８．
５％アクリルアミドを用いてドデシル硫酸ナトリウム／
ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）により分
析した。

（ホ）結果 ＋！Ｊ標識ＩＬ−２のＹＴＳ細胞ヘノ結合を、ハイプリ
ドーマ培養上清５０％最終層度で８０〜９５％阻止する
２種類のＭＡｂ、ＭＩＫ−βｌとＭＩＫ−β２（ともに
ＩｇＧ２ａ）を得た。ｒｌＬ−２をコーティングしたプ
レートを用いたＥＬＩＳＡでは、これらの抗体はｒｌＬ
−２とは全く反応しなかった。第１表に示すように、フ
ローサイトメトリーで調べたこれら２種の抗体の反応性
は全く同様で、その陽性細胞の分布はＩＩＪ標識ＩＬ２
架橋実験でみたβ鎖の分布と一致していた。

これらの抗体はＩＬ−２のβ鎖に対する結合を著明に抑
制した。これらの抗体によって免疫沈降されるＹＴＳ細
胞上の抗原は、ともに６８〜７２ＫＤの単一バンドとし
て現れた。これらの抗体は、ＤＳＳによって架橋された
１３５■漂識！Ｌ−２とβ鎖複合体を免疫沈降すること
はできなかった。

ＭＩＸ−βｌ、β２＋＋＋＋ の反応性 以上の結果から、ＭＩＫ−β１．ＭＩＫ−β２はともに
ＩＬ−２ｒｔ・β鎖まＩＬ−２結合部位を認識するＭＡ
ｂであると結論される。また、β鎖の分子量は６８〜７
２ＫＤであった。

第ｆａ図は、Ｍｉｋ−βＩおよびβ２を用いたＹＴＳ細
胞に対するＩＩＪ標識！Ｌ−２結合阻害実験の結果を示
すグラフである。

第ｉｂ図は、Ｉ　Ｌ−２を用いたＹＴＳ細胞に対するｌ
！Ｊ［識Ｍｉｋ−βｌの結合阻害実験の結果を示すグラ
フである。

Ｍｉｋ−β！およびβ２はＩＬ−２の結合をそれぞれ０
．６および３μ９／ＩｔＯ，で５０％阻害する。またＩ
Ｌ−２（２００モル過剰）はＭｆｋ−β１の結合を９０
％以上阻害する。

第２図は、Ｍｉｋ−β３を用いたＩＬ−２（Ｍｒ１５０
００）とβ鎖（Ｍｒ７５０００）の複合蛋白（Ｍｒ９０
０００）沈降実験の結果を示す。

Ｍｉｋ−β３はＩＬ−２とβ鎖の結合を阻害しないが、
この複合蛋白を沈降させる。

これらのことから、Ｍｉｋ−β１１β２およびβ３は、
ＩＬ−２受容体β鎖を認識することがわかる。

第３ａ図は、Ｍｉｋ−β１、β２およびβ３が沈降させ
たＩｔＪ標識ＹＴＳ細胞抽出物成分のドデシル硫酸ナト
リウム／ＰＡＧＥ泳動の結果を示す図である。

第３ｂ図は、Ｍｉｋ−βｌが沈降させたβ鎖の２次元ゲ
ル分析結果を示す。

第３ａ図の物質はＭｒ６８０００−７２０００で単一バ
ンドを示し、β鎖も単一スポットを示す。

第４ａ図は、Ｍｉｋ−β！の存在下（４０ｕ９／ｘ（１
）におけるＫｉｔ２２５細胞とＩＬ〜２の結合実験の結
果を示すグラフである。

Ｍｉｋ−βｌの存在下では、ＩＬ−２はα鎖のみに結合
することができる。

第４ｂ図は、Ｍｉｋ−β！存在下におけるＩＬ２用量依
存３ＨＴｄＲとり込み実験の結果を示すグラフである。

Ｍｉｋ−βｌは単独ではＴ細胞増殖を抑制しないが、抗
Ｔａｃ抗体の共存下では完全に抑制する。

第５ａ図は、Ｍｉｋ−βｌによって蛍光染色されるβ鎖
の細胞株間における分布をフローサイトメトリーで測定
した結果を示すグラフである。

第５ｂ図は、末梢リンパ球の２色フローサイトメトリー
を示す。

（試験方法） 第１ａ図−７５μ＆中２ｘ　１０’ＹＴＳ細胞を種々の
濃度の抗体と４℃で３０分間インキュベートした。４ａ
Ｍ”Ｊ標識ＩＬ−２を２５μｆｆ加え、さらに４℃で１
時間インキュベートした。細胞結合放射能を測定した。

非特異的結合は非標識ＩＬ−２の５００過剰存在下で測
定した。１′Ｉ標識１Ｌ−２結合％−１００ｘ（実験値
−非特異結合）／（無抗体対照−非特異的対照）であり
、対照は７９１０ｃｐｍ、非特異結合は７４９ｃｐＨで
ある。

第１ｂ図・・・７５μＣ中２Ｘ　Ｉ　Ｏ”ＹＴＳ細胞を
種々の濃度のＩ　Ｌ　−２と４℃で１時間インキュベー
トした。２ａＭ”’Ｉｌｌ識Ｍｉｋ−β１（特異活性３
００００　ｃｐｍ／ｎ９）を２５μｇ加えさらに４℃で
３０分間インキュベートした。無！Ｌ−２対照は１７７
５３ｃｐｍ、非特異結合（非標識Ｍｉｋ−β１３００倍
）は３４４５ｃｐＩ１１である。

黒丸はβ１、白丸はβ２、黒色はβ３を示す。

第２図・・・細胞をＩ−ＩＵＴ１０２の高親和性（１０
０ｐＭＩ″６１標識ＩＬ−２）またはＹＴＳ、Ｍ’ｌ’
１の低親和性（５ａＭ）条件下１″５夏標識ＩＬ−２で
架橋し、可溶化し抗体で免疫沈降した。レーン１．４．
７：家兎抗ひと組換え体ＩＬ−２、レーン２．５．８：
Ｍｉｋ−β３、レーン３．６．９：対照ＵＰＣＩＯモノ
クローナル抗体（ＩｇＧ２ａ、シグマ）。

第３ａ図・・・ＹＴＳ細胞を放射性よう素処理し、可溶
化し、抗体で免疫沈降した。沈降物を還元条件下ドデシ
ル硫酸ナトリウム／ＰＡＧＥ分析した。

レーンＩ：Ｍｉｋ−βｌル−ン２：Ｍｉｋ−β２、レー
ン３：Ｍｉｋ−β３、レーア４　：ＵＰＣＩ　Ｏ，レー
ン５：Ｍｉｋβ３による吸収後のＭｉｋ−βｌル−ン６
：ＭｉｋβＩによる吸収後のＭｉｋ−β３゜第３ｂ図・
・・放射性よう素処理ＹＴＳ抽出物からＭｉｋ−β１で
沈降したβ鎖を、非平衡ｐＨ勾配ゲルエレクトロフォー
カシング（１次）およびドデシル硫酸ナトリウム／ＰＡ
ＧＥ（２次）で分析した。

第４Ｒ図−・Ｋｉｔ２２５細胞に対すルＩｌｒ′１標識
！し〜２結合のスカッヂャードプロット分析。白丸は４
０μ９／ｊｇＭｉｋ−β１存在下、黒丸は不存在下。高
親和性結合部位は３４００／細胞、Ｋｄ１２ｐＭであっ
た。

第４ｂ図・・・２Ｘ　ｌ　Ｏ’細胞を９６ウエルプレー
ト中、３７℃で７２時間培養した。黒三角は４０μｇ／
ＪＩＣＭｉｋ−β１１黒丸は４０１１９／Ｍ（ｌ抗Ｔａ
ｃ、自四角は両者の存在下、白丸は不存在下を示す。増
殖は０．５μＣｉ’）Ｉ−デミジン（６、７Ｃｉ／ｓ＋
ｍｏｌ）のとり込み／ウェル（最後の４時間）で測定し
た。

第５ａ図・・・Ｍｉｋ−β１のフローサイトメトリー反
応性。Ｍｉｋ−β１（実線）または対照ＵＰＣＩＯ抗体
（ＩｇＧ２ａ、点線）、ついでＦＩＴＣコンジュゲート
やぎ抗マウスＩｇＧで染色した。細胞はエビックスＣＳ
で計数した。

第５ｂ図・・・末梢リンパ球の２色フローサイトメトリ
ー染色はＰＥ−Ｔ４、Ｔ８またはＬｅｕ−１９細胞、つ
いでビオチン化Ｍｊｋ−β１＋、アビジンＦＩＴＣで行
なった。典型的リンパ球スキャッターをもつ５００００
細胞をＥＰ　Ｉ　ＣＳ−ＣＳで分析した。

【図面の簡単な説明】

第１ａ図は、Ｍｉｋ−βｌおよびβ２を用いたＹＴＳ細
胞に対するｌ！Ｊ標識Ｉ　Ｌ　−２結合阻害実験の結果
を示すグラフである。 第１ｂ図は、ＩＬ−２を用いたＹＴＳ細胞に対するｌ″
′１標！ｌ　Ｍ　ｉ　ｋ−βｉの結合阻害実験の結果を
示すグラフである。 第２図は、Ｍｉｋ−β３を用いたＩＬ−２（Ｍｒ１５０
００）とβ１１（Ｍｒ７５０００）の複合蛋白（Ｍｒ９
００００）沈降実験の結果を示す。 第３ａ図は、Ｍｉｋ−β１１β２およびβ３が沈降させ
たｌ＊Ｊｉｌ識ＹＴＳ細胞抽出物成分のドデシル硫酸ナ
トリウム／ＰＡＧＥ泳動の結果を示す図である。 第３ｂ図は、Ｍｉｋ−βＩが沈降させたβ鎖の２次元ゲ
ル分析結果を示す。 第４ａ図は、Ｍｉｋ−β！の存在下（４０μｙ／ｘ１２
）におけるＫｉｔ２２５細胞と！Ｌ−２の結合実験の結
果を示すグラフである。 第４ｂ図は、Ｍｉｋ−β１存在下におけるＩＬ２用量依
存３ｌ−ＩＴｄＲとり込み実験の結果を示すグラフであ
る。 第５ａ図は、Ｍｉｋ−βｌによって蛍光染色されるβ鎖
の細胞株間における分布をフローサイトメトリーで測定
した結果を示すグラフである。 第５ｂ図は、末梢リンパ球の２色フローサイトメトリー
を示す図である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）インターロイキン２受容体β鎖の抗原決定基に対
   して特異性を有するモノクローナル抗体。
2. （２）β鎖を発現する細胞株ＹＴＳで免疫した哺乳類（
   ひとを除く）の抗体産生細胞と永久増殖性を有する細胞
   との融合によるハイブリドーマが産生するものである、
   請求項２記載のモノクローナル抗体。
3. （３）請求項１記載のハイブリドーマ。