JPH02124831A - 化学修飾ｓｏｄ凍結乾燥製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、？リオキシエチレンで化学修飾したスーｉ４
−オキサイドジスムターゼ（以下、化学修飾ＳＯＤと略
する。）を含有する凍結乾燥製剤に関する。

〔従来の技術〕

化学修飾ＳＯＤは、生体内で酸素に起因する毒性を除去
するための薬理活性を充分発揮し得る長い血流的寿命を
有しており、抗炎症剤、虚血性疾患治療剤、心筋便島治
療剤、放射ａ！障害治療剤など、医薬として有用でるる
（特開昭６１−２４９３８８号公報参照）。

化学修飾ＳＯＤ　ｉ医薬品として用いる際には、運搬時
、保存期間の安定性のため、凍結乾燥剤とすることが望
ましい。しかしながら、化学修飾ＳＯＤ単独を凍結乾燥
製剤とした場合、外観が好ましくなく、さらに長期保存
安定性を知るべく温度苛酷試験を行なったところ、化学
修飾８０Ｄ分子に高分子化が起こり、またあるいは不溶
化を起こす場合もめり、満足のいく凍結乾燥製剤は得ら
れにくい。

最近開発されてきた生理活性蛋白について、その安定性
の向上のために、種々の方法が開発されてきておシ、例
えば、インク−７二ａンの安定化法（１？ＩｉＦ開昭５
９−１８１２２３号公報参照）、インター７エａン製剤
の製法（特開昭５９−１８１２２４号公報参照）、イン
ターロイ中ンー２組成物（特開昭６０−２１５６３１号
公報参照）などに開示されているように、それぞれ、該
蛋白にブドウ糖、アミノ酸、還元性物質などの添加剤が
使用されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

変性物生成防止等の長期安定性に優れ、かつ、賦形効果
の良い化学修飾ＳＯＤ凍結乾燥製剤の開発が望まれてい
る。

〔課題全解決する丸めの手段〕

本発明者らは、上記昧題を解決すべく鋭意検討を重ねた
結果、化学修飾５ＯＩ）　Ｋ　ｍ類とりわけマンニトー
ル及びマルトースの少なくともＩｆ！ｉｔ″含有させた
凍結乾燥製剤とすることによ夕、優れた賦形効果および
長期安定性が得られることを見出し、本発明を完成する
に到った。即ち、本発明の凍結乾燥製鋒υンニトール及
びマルトースの少なくともＩｆｆ！全含有する化学修飾
ＳＯＤ凍結乾燥製剤でろる。

本発明で使用される化学修＃ＳＯＤは、例えば特開昭６
１−２４９３８８号公報に記載され九方法丁なわち、両
末端ｉＮＮ−ヒトミキシコークイはドで活性化したポリ
オキシエチレン２用いてＳＯＤ分子を化学修飾すること
によフ調製されたものでらフ、原料ＳＯＤにおいてはヒ
トヲはじめとする哨乳動物由来、大Ｂｋ５ｇ等微生物出
来、又は遺伝子工学的手法によって微生物等から産出さ
れたものなど、その由来に側鎖はない。

本発明の凍結乾燥製剤においては、化学修飾ＳＯＤ中の
ＳＯＤタンパク量ｌに対し、糖類を重量比で５〜４００
さらに好ましくは１０〜２００の割合で含有させること
が、賦形性、安定性の点から好ましり、同等の効果が得
られる限り、マンニド−／！／、　ｗ　／Ｉ／　）−ユ
や頑う＃５−姑福１゜糖類ア代替させてもよい。

更に、本発明の目的を逸脱しない限りにおいて、本発明
の凍結乾燥製剤に塩類、防腐剤等を添加してもよい。

本発明の凍結乾燥製剤は、例えば特開昭６１−２４９３
８８号公報記載の方法によフ調製し九化学修飾５ＯＤｔ
−１０，０５〜０．５弧の水溶液とし、この水溶液にマ
ンニトール、マルトース全それぞれ５〜ｌＯ％となるよ
うに混合した後、常法によシ凍結乾燥することにより、
凍結乾燥品として得ることができる。

なお、化学修飾ＳＯＤ水溶液とマンニトール、マルトー
スの混合、凍結は窒素ガス、アルゴン等の不活性ガス雰
囲気中で行うことが望ましく、また、凍結乾燥品の保存
も不活性ガス雰囲気中あるいは真空で行なうのが望まし
い。

〔実施例〕

以下、実施列により、さらに詳細に説明する。

実＃Ｉ列ｌ リコンビナントヒトＳＯＤ　３５００単位／り（活性測
ら 定はマツコードケの方法（Ｊ、Ｍ、Ｍａ　Ｃｏｒｄ　、
　１．　Ｆｒ１ｄｒｉｅｈ　：Ｊ、ＢＩｏｌ、　Ｃｈ＠
ｎ、　２４４６０４９〜６０５５（１９５９））にょる
）を原料とし、特開昭６１−２４９３８８号公報に記載
された方法に従い化学修飾ＳＯＤを詞製した。この化学
修＠　ＳＯＤ水溶液にマンニトール又はマルトースｔ＃
Ｓ加し次の３種の水溶液ｆｔ調製し九。

溶液囚ＳＯＤタンパク量５ダ／ｘｔｌ、マンニトール　
５０■／ｄ（Ｂ）　ｆ３０Ｄり：／ノ４り量５１１９．
〆ｎｌ　、　−ｒ　ｈ　）　−Ａ　　　１００　”９／
１ｔｔｌ（Ｃ）ＳＯＤタンパク量５〜／ｌＪ？　（対照
）この３種の混合溶液１ｊｌｊずつをバイプルに分注し
、−４０℃凍結後、棚温２５℃で１７時間乾燥させこれ
らの外観を調べた。又、さらに長期保存安定性を予想す
るべく、６０℃温度下にて２週間保存し、再溶解し、分
子量分布の変化について刺ヘタ、分子量の分析は「ＴＳ
Ｋ−Ｇｅｌ　Ｇ　３０００　ＳＷ　Ｊ　（東ソー！！り
カラムを用いたＨＰＬＣにて行った。結果を表１に示す
。

マンニトール及びマルトースを添加することにより添加
しないものに比べ外観に優れ、かつ保存安定性に優れた
化学修飾ＳＯＤ凍結乾燥製剤を得ることができたー 実施例２ 実施例１と同様に化学修飾ＳＯＤ全調製した。この化学
修飾ＳＯＤ水溶液にマンニトール！、マルトースを添加
して次の３種の水溶液’ｅｖ４ｇした。

溶液　　（４）ＳＯＤタンノぐり量５〜／１．マンニト
ール　５０ダメａ（Ｂ）ＳＯＤタンパクｉｔ　Ｆ３ｖ、
メｄ、−ｔルトースｘｏｏｍｐ、”ｕ明細書の浄書 （Ｃ）　ＳＯＤタンパク量５；ｇ／■！　マンニトール
２５ｍｇ／ｌａ　ｌ および マルトース ５０ｔｓｇ／ｍ　ｌ この３種の混合溶液１ｍｆずつをバイアルに分注し、実
施例１と同様に凍結乾燥を行い、外観を調べた。その後
、５０°Ｃ温度下にて４週間保存し再溶解後分子量分布
の測定を行った。結果を表２に示す。

実施例３ 市販のヒト赤血球ＳＯＤ　（シグマ社！ｌ！　２３００
単位／ダ（マツコードらの方法））をｒＴｓＫ−ｇ＠ｌ
　ＤＥＡＥ−５ＰＷＪ　　（東ソー製）ｔ−使用してＳ
ＯＤ活性を有する両分を集めヒト て精製したｆ＃製人ＳＯＤ、及び市販の牛血液由来ＳＯ
Ｄ　（東洋紡製３０００単位／叩（マツコードらの方法
））を原料とし、それぞれ上記の実施例２と同様にして
化学修飾ＳＯＤ　ｔ　ＩＸ製した。この化学修飾ＳＯＤ
水溶液にマンニトール、マルトースを添加して次の６ａ
［の水溶液を調製した。

溶液囚ヒト赤血球ＳＯＤタン／豐り蓋５−．マンニトー
ル５（至）ｙｋｌ（Ｂ）　　　　　　　　　　Ｉ　　　
　　　　　　　　　マルトースｌＯωｔΔＪ（６）牛血
液由来ＳＯＤタンパク猛５〜．　　マンニトール　５Ｑ
ｎｆ＜ｒｒｌ（Ｑ　　　　　　　　　＃　　　　　　　
　　　　　マルトース　ｌＯｏ、７９４１明ａｉｌＡ：
の浄書 この３種の混合溶液１ｍｌずつをバイアルに分注し、実
施例１と同様に凍結乾燥を行い外観を調べた。その後常
温（２５°Ｃ）温度下にて４週間保存し分子量分布及び
活性保持率の測定を行った、酵素活性はニトロブルーテ
トラゾリウム法（Ｂｅａｕｃｈａｍｐ、　Ｃ，ｔ　Ｆｒ
１ｄｒｉｃｂ＋　Ｉ　：　　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ。

土工　２７６〜２８７　（１９７１）　）にて測定した
。

結果を表３に示す。

分子量分布のＨＰＬＣ分析においていづれも高分子化は
見られず、常温保存であれば優れた保存安定性を有して
おり、活性保持率ではどれも１００％近い値を示した。

〔発明の効果〕

以上の結果から明らかなように、本発明の凍結乾ｇＩ！
、！Ｂ剤は、優れた賦形効果および長期安定性を有し、
医薬開発上、低めて有用である。

【図面の簡単な説明】 図１は凍結前の分子量分布を示すＨＰＬＣのチャートを
表わし、図２，３は、それぞれ、実施例１のＢ、Ｃにつ
いて、保存後の分子量分布を示すＨＰＬＣのチャートを
表わす。 待針出願人　　味の累株式会社 代理人弁理士　　　石　　１）　康　　晶笛１図 第２図 １０　（ｍｌ）Ｅ、Ｖ。 （＝２七質） 手続補正書 （方式） １、事件の表示 昭和６３年特許ｊｊ１２７６０９５号 、発明の名称 化学條飾ＳＯＤ凍結乾燥製剤 ］、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住所　　　東京都中央区京橋−丁目５＠８号４、補正命
令の日付　　　平成１年２月１３日（発送日：平成１年
３月７日） ５、補正により増加する請求項の数　　　なし６、補正
の対象　　明細書の７頁と９頁７、補正の内容　　浄　
書　（別紙のとおり）竺じン

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １）マンニトール及びマルトースの少なくとも１種を含
   有することを特徴とする化学修飾ＳＯＤ凍結乾燥製剤。