JPH02121908A - にきび用化粧料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、プロピオニバクテリウム・アクネス（以下Ｐ
、アクネスと略記する）が歯体外に産生ずるリパーゼを
免疫した鶏の卵より調製された卵黄抗体を含汀すること
を特徴とする新規なにきび用化粧料に関する。

（従来の技術及び発明が解決しようとする！１！題にき
びは、皮膚の体裁を醜くし、かつしばしば厄介な症状を
伴い、皮脂腺に冨む皮膚の成る領域特に顔、頚、背に発
生する。にきびの発生原因は主として、■皮脂の過剰な
分泌、■毛包脂Ｉｌ！ｉＩ系排出管の閉塞、■毛包脂腺
管内のプロピオニバクテリウム属の細菌（主としてＰ、
アクネス）の存在などである。これらの発生因子によっ
て、特徴的なにきびの面心、丘疹、■ｊｆＡ等の症状が
現れる。

現在、主流を占めているにきびの予防法、処置法或いは
治療法は、■過剰な皮脂の分泌を抑制すること、■毛包
の閉塞を除去すること、■細菌の増殖を抑制し、更には
殺菌処理を施すこと、■炎症作用を抑制すること等が挙
げられる。

抗体を応用した組成物としては、抗体及びこれを有効成
分とするスプレー剤（特開昭６２１７５４２６）、ｌ−
リないしウシ抗体を用いた咄乳動物の受動免疫化方法及
びそのための組成物（特開昭６Ｏ−２４８６２８）があ
るが、単に細菌単独をニワトリ等の鳥類やウシ等の哺乳
類に免疫しても、得られる抗体の細菌に対する制菌効果
等の直接的な効果は期待出来ず、Ｐ、アクネス等により
生ずるニキビの炎症には必ずしも効果的ではないのが現
状である。

本発明は、皮膚刺激性が無く、にきびの治療に有効なる
作用を有する全く新しいにきび用化粧料を堤供すること
を目的としている。

（課題を解決するための手段） 本発明は、皮膚の常在菌であるプロピオニバクテリウム
・アクネスが菌体外に産生するリパーゼを免疫した鶏が
産生ずる卵より調製された卵黄抗体を含有することを特
徴とするにきび用化粧料である。

本発明に係る卵黄抗体は、Ｐ、アクネスが菌体外に産生
ずるリパーゼを免疫した鶏が産生ずる卵より容易に調製
される。

ここで、本発明に使用するＰ、アクネスは、通常の姥気
性菌の培養に使用されるプレイン・ハート・インフュー
ジョン培地（Ｂｌ−１１培地）などの液体培地を用い、
嫌気的に３７℃で３〜１０日間培養することで培養を行
い、遠心分離することにより容易に得られる。

Ｐ、アクネスが菌体外に産生ずるリパーゼは、Ｐ、アク
ネスの培養濾液より、硫酸アンモニウム沈澱、アルコー
ル沈澱、限外濾過等の操作により濃縮、回収される。こ
のリパーゼ成分は更に、セファデックスＣ−１００等に
よるカラムクロマトグラフィーを行い、リパーゼ活性を
示す分画を集めることで精製が可能である。得られたリ
パーゼは、望めて蒸留水に対して透析を行い、凍結乾燥
により保存が可能である。また、そのまま凍結保存する
ことも可能である。

免疫操作に用いる鶏としては、特に制限はないが、抗体
の量産性という点からは、白色レグホンなどの卵用種を
用いるとよい。

また、免疫方法としては、皮下注射、腹腔内注射、筋肉
注射などによる通常の方法や、点鼻、点眼などの方法に
よって行うことができる。

更に、抗原の投与量は、所望の抗体値が得られ、かつ鶏
に対して悪影響を与えない■を適宜選択して用いればよ
い。また、必要に応じて完全フロインドアジュバント、
不完全フロインドアジュバントなどのアジュバントと併
用してもよい。

免疫後に、約２週間の間隔で抗体価をエンザイムイムノ
アノセイ、ラジオイムノアッセイ等の方法により測定し
、推移を追跡する。通常、初回免疫から数週間で投与抗
原に対して特異的に反応する抗体が卵（卵黄）中に得ら
れるが、通常約３ケ月間で抗体としての効果を発揮する
のに充分な高い抗体価をもつ抗体が得られる。なお、免
疫後、抗体価の減少が認められる場合、適当な間隔で適
宜追加免疫することにより抗体価を高めることができる
。

本発明に係る卵黄抗体は、この、免疫した鶏が産生ずる
卵の卵黄より、クロロホルムを添加し、振とう、撹拌、
遠心分離を行うことにより脂質を除去した後の上？ｌｌ
の水溶液より得られ、蒸留水に対して透析後、濾過滅菌
、凍結乾燥等の操作により保存が可能である。得られた
卵黄抗体は白色から淡黄色を呈し、主として免疫グロブ
リン（ｒ　−リベチン）からなるタンパク質成分である
が、その他β−１α−リベチン、オボアルブミンなどの
タンパク質成分も含有している。

本発明に係る卵黄抗体は、未精製の状態でも使用するこ
とができるが、卵黄中に含まれる免疫グロブリンを抽出
・分離することによって更に高い抗体価が得られる。抽
出・分離方法としては、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリ
ウム等の塩類、またはデキスＩ−ラン硫酸やポリエチレ
ングリコール等の高分子化合物を用いた沈澱法や、ＤＥ
Ａ［：セルロース等を用いるイオン交換クロマトグラフ
ィーやセファロース類、セファデックス類等のゲル濾過
剤を用いるゲル濾過クロマトグラフィー等によっても更
に精製が可能である。その他、通常用いられている免疫
グロブリンを抽出・分離できる各種の方法等が利用でき
る。

本分画は、水溶性であり、最高で１０重Ｍ％迄）８解可
能である。その他アルコールを含む水）８？＆にも溶解
が可能である。

本発明に係る卵黄抗体のＰ、アクネスに対する作用メカ
ニズムは次の如くに考えられる。Ｐ、アクネスが菌体外
に産生ずるリパーゼをニワトリに免疫して得られる卵黄
抗体は、Ｐ、アクネスが産生ずるリパーゼの活性を特異
的に阻害する。従って、リパーゼの反応により生ずる遊
離脂肪酸の発生を抑制し、菌の増殖、皮膚内での炎症反
応、角質化等の抑制を行なうことにより、優れたにきび
治療効果を発揮するものと推察される。

本発明に係る卵黄抗体の配合量はにきび用化粧料（組成
物）の総里を基準として大略０．　ＯＯ０１〜０．５重
量％（以下ｗＬ％と略記する）の範囲である。ここで、
卵黄抗体の配合量は、０．０００１Ｗ【％未満では効果
が充分に達成されず、０゜５Ｗ【％を超えてもその増加
分に見合った効果の向上は望めない。

更に、本発明のニキビ用化粧料は、通常使用される角質
）８解作用を有する成分として、レヅルシン、・イオウ
、サリチル酸、尿素、イソプロピルメチルフェノール等
、殺菌作用を有する成分として、グルコン酸り【コルヘ
キシジン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウ
ム、塩化ヘンザトニウム、その他の成分として、グリチ
ルリチン、グリチルレチン酸、アラントイン、酸化亜鉛
、硫酸亜鉛、乳酸アルミニウム、乳酸エチル、エストラ
ジオール、カンフル、ビオチン等を同時に配合すること
も可能であり、その場合、より一層効果の増強が期待で
きる。また、その他の添加剤である抗酸化剤、香料、色
素、各種ビタミン類等を本発明の目的を達成する範囲で
適宜調製し配合することが可能である。

本発明のにきび用化粧料は、ローション類、乳？＆’Ｂ
、クリーム類、ゲル状物、ステインク状物等の剤型に通
常の方法により調製することが可能である。

（実施例） 以下、実施例、比較例の記載に基づいて本発明を詳説す
る。実施例に記載したヒト皮膚貼付試験、にきびのｙｆ
３療効果試験は下記の通りである。

ｆｉｌ　　ヒト皮膚貼付試験 被験者２５名の前腕層側部皮膚に、試料０．０５ｇを直
径１．９　ｃ　ｍの円形のろ紙のついた貼付試験用絆創
膏を用いて２４時間の閉塞貼付を行った。

次いで、下記第１表の判定基準に従って、絆創賢除去１
時間後、２４時間後の判定を実施した。判定結果は、反
応の強い方の評価を採用し、被験者２５名のうち評価か
く士）以上と判定された人の数で示した。

第 表 （２）　　にきび治療効果試験 顔面かにきび症状を有する被験者の左部に対照品（基剤
のみの組成物）を、右部には実施例或いは比較例の試験
品を各々１日に朝夕２回づつ１ケ月間連ｖｔ塗布した。

次いで、にきび疾患部の治療効果を下記第２表の判定基
準に従って、半開比較法により判定した。判定結果は、
評価点の平均値で示した。

第 表 ［卵黄抗体の！Ｊ！’！Ｊ） 実施例、比較例に係るＰ、アクネス及びＰ、アクネスが
菌体外に産律するリパーゼの調製、鶏に対する免疫、卵
黄抗体の調製の例を示す。

１、Ｐ、アクネスの菌体の調製 Ｇ・パブＵらの方法（ジャーナル・オブインへスティゲ
イティブ・デルマトロジー、６３巻、２３１−２３８頁
、１９７４年）に従って、Ｂ　Ｈｌ　？＆体培地（デイ
フコ社製、５１）を用いて、Ｐ。

アクネスを嫌気的に３７℃で５日間培養し、遠心分離に
より菌体を培養上清と分離した（菌体重重１　：　８．
５　ｇ　）。

２、Ｐ、アクネスが菌体外に産生ずるリパーゼの調製 次に、Ｃ・パブ口らの方法によりＰ、アクネスが菌体外
に産生するリパーゼの調製を行った。前記したｌ）、７
クネスの培養上清５０２を一４℃に冷却し、−１Ｏ℃に
冷却したエタノールを、ＲＰ濃度で７０％になるように
、混合溶液を一４℃に保らながら添加撹拌した。この溶
液は４℃で一夜放置した。生成した沈澱吻を遠心分離に
より集めた。

この分画は、更にセファデックスＧ−１００カラムクロ
マトグラフイーにより、精製を行い、２　Ｂ　Ｏｎｍの
吸光度を基に３分両した。このうち第１分画にリパーゼ
活性が認められた０次いで、このリパーゼ活性を示す第
１分画を集めて濃縮し、更に蒸留水に対する透析、凍結
乾燥を行いリパーゼを得た（収量５１２ｍｇ） ３−１．リパーゼの鶏に対する免疫 」１記の方法で得られたＰ、アクネスが菌体外に産生ず
るリパーゼを５　ｒｎ　ｇ　／　ｍ　Ｉ！の濃度で生理
食塩水に溶解した。次に完全フロインドアジュバントと
１：１に混和し、完全なエマルジョンを調製した。これ
らのエマルジョンを約１．５ケ月〜２ケ月令の雌の鶏の
左右の胸筋にＱ、　５　ｍ　ｊ！づつを筋肉１％　’ｌ
・１した（１群１０羽）。１ケ月後に、同量の試料を１
１■び筋肉注射した。

３−２．Ｐ、アクネス全菌体の鶏に対する免疫対照とし
て、予め７０℃、３時間で熱処理した１）、アク矛ス全
菌体を２　Ｘ　１０’　コ／　ｍ　１を上記免疫方法と
同様にして、別の実験群の鶏１０羽に免疫した。１ケ月
後に、同量の試料を再び筋肉注射した。

４．１九体価の測定 免疫操作した鶏が、免疫開始前１週間、２り月日よりＩ
Ｆ間、３ケ月目より１週間の期間に産仕した卯を、それ
ぞれ免疫前、２ケ月目、３ケ月目の卯として抗体値の１
ｌｔｌｌ定に用いた。抗体分画の調製は以下の様にして
行った。卯の卵黄を採取し、その同量の生理食塩水を加
え、室温で５分間振とうし、更に元の卵黄の２倍世のク
ロロホルムを加え、３０分間の振とう、撹拌を行った。

得られたエマルジョンを室温で３０分間放置し、３００
０ｒ　ｐ　Ｉｎで２０分間遠心分離し、上清液を採取し
、濾過滅菌して抗体分画を得た。抗体価の推移は、常法
に従ってエンデイムイムノアッセイのうちのＥＬＩＳＡ
により追跡を行い、免疫前、２ケ月目、３ケ月目の抗体
価を第３表に示した。その結果、菌体外に産生ずるリパ
ーゼの方が、抗体価の上昇性が高く、３ケ月後ではＰ、
アクネス全菌体の約第 表 ５、卵黄抗体の調製 次に、免疫操作間り（１後３ケ月目より１ケ月間の！Ｉ
ＪＩ間に鶏が産生した卵の卵黄を採取し、「４．抗体価
の測定Ｊの項で記述した通りに（ん体分画を１トた。

更に、この抗体分画を、硫酸アンモニウムの４０％飽和
濃度により沈澱として回収し、生理食塩水に対して透析
した後、再び硫酸アンモニラＪ、の３５％飽和濃度によ
り沈澱として回収し、蒸留水に対して４８時間通透析た
後、凍結乾燥して精製された卵黄抗体を得た。得られた
乾燥抗体は、硫酸アンモニウムによ冶沈隊操作を行Ｉう
前の抗体分画の量になるように生理食塩水により再溶解
し、これを原液としてＥＬ　Ｉ　ＳＡにより抗体価を測
定した。その結果を第４表に示す。

第　　４　　表 実施例１〜７、比較例１〜４ 〔にきび用ローション〕 にきび用ローション基剤に前記（卵黄抗体の調製）の項
で得られたＰ、アクネスのリパーゼに対する卵黄抗体（
実施例、以Ｆ抗リパーゼ抗体と略記する）、またはＰ、
アクネスの全菌体に対する卵黄抗体（比較例、以下抗全
菌抗体と略記する）をそれぞれ第５表に記載の如く配合
した各試料を調製し、試験に使用した。

ｉｌｌ　　　ｌ［ｌ成　　　　　　　　　第　　５表 （２）　　調製法 第５表に示すエタノール、可溶化剤、プロピレングリコ
ールを、必要に応じて加熱して精製水にｌ８解した後、
５０℃まで冷却した。次に、卵黄抗体を添加し、組成総
量が１００ｗｔ％となるように調製された残■の精製水
を加えて均一に混合し、各にきび用ローションを調製し
た。

（３）特性 実施例１〜７、比較例１〜４のにきび治療効果試験の結
果を第６表に示す。

第６表に示す如く、実施例１〜７の抗リパーゼ抗体を配
合したにきび川口−シジンは、明らかに高いにきび治療
効果が認められた。また、ヒト皮膚貼付試験における皮
膚刺激性は認められなかった。一方、比較例１〜４の抗
全閑抗体を配合したにきび用ローションは、にきび治療
効果が低く、且つヒ［・皮膚貼付試験における皮膚刺激
性も高かった。

実施例８〜１４、比較例５〜８ 〔にきび用スキンクリーム〕 にきび用スキンクリーム基剤に本発明に係る卵黄抗体を
第７表に記載の如く配合した各試料を調製し、試験に使
用した。

（１１組成 第 表 （２）　　調製法 第７表のＢ及びＣ成分を、各々８０℃に加熱溶解したも
のを混合した後、５０℃まで冷却した。

次に、卵黄抗体を添加し、撹拌しつつ冷却してβ０°Ｃ
まで撹拌を続けた各にきび用スキンクリームを調製した
。

（３）　　特性 実施例８〜１４、比較例５〜８のにきび治療効果試験の
結果を第８表に示す。

第８表に示す如く、実施例８〜１４の抗リパーゼ抗体を
配合したにきび用スキンクリームは、明らかに高いにき
び治療効果が認められた。また、ヒ）・皮膚貼付試験に
おける皮膚刺激性は認められなかった。一方、比較例５
〜８の抗全菌抗体を配合したにきび用スキンクリームは
、にきび治療効果が低（、且つヒト皮膚貼付試験におけ
る皮膚刺激性も高かった。

（発明の効果） 本発明のにきび用化粧料は、皮膚刺激性が無く、にきび
の予防、治療にＩｆ効なる作用を有し、且つ、長期間保
存しても安定であって、その商品価値は極めて高い。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 皮膚の常在菌であるプロピオニバクテリウム・アクネス
   が菌体外に産生するリパーゼを免疫した鶏が産生する卵
   より調製された卵黄抗体を含有することを特徴とするに
   きび用化粧料。